TP ChampignonsPlan de la séance • Champignons inférieurs: –Thalle unicellulaire : Levure : Saccharomyces cerevisiae –Thalle Pluricellulaire • Siphomycètes : – Absidia Glauca – Rhizopus sp. Moisissure du pain • Septomycètes : – Alternaria alternata • Champignons supérieurs (à carpophore): – Champigon de Paris (Agaricus biosporus) Macromycètes et micromycètes Le thalle des champignons = Mycélium • Les champignons microscopiques se divisent en deux groupes : – Les champignons unicellulaires ou « levures » – Les champignons filamenteux ou « moisissures » . La levure de bière. mise en culture • On peut s'en procurer chez tous les boulangers sous forme de petits blocs où les cellules sont agglomérées et en vie ralentie. • Il est possible d'observer les cellules de levure au microscope. . Saccharomyces cerevisiae Observation. Pour observer au microscope. coloration. Prélever alors une goutte. Il suffit pour cela de délayer une miette du paquet dans un verre d'eau et de mélanger soigneusement en mettant assez d'eau pour que le milieu présente à peine un léger trouble. . . • Avec un compte goutte. Bien agiter et prélever sur le champ 1 goutte de cette suspension de levures (dans laquelle il y a tout de même la bagatelle de quelques millions de cellules). Ouvrir la boîte contenant le milieu et toucher la surface du milieu avec l'extrémité du compte-gouttes en une dizaine d'endroits différents. Mettre la goutte dans 1 litre d'eau. Refermer le couvercle.Mise en culture • Mélanger 1 g de levure de boulanger avec 100 mL d'eau tiède et 1 g de sucre. Bien agiter. prélever un échantillon. Abandonner la boîte à température ambiante. ENSEMENCEMENT . Chaque colonie est issue d'un petit nombre de cellules et présente une forme arrondie. . une taille et une couleur caractéristiques de l'espèce Saccharomyces cerevisiae.Mise en culture des cellules de la Levure Champignons contaminants Les quelques levures déposées sur un milieu vont se multiplier et engendrer des colonies qui deviennent visibles à l'œil nu en quelques jours. caractéristique des cellules végétales.Observation des cellules de levure au Microscope On place quelques gouttes d'eau et une miette de levure. de 6 à 8 microns. ce sont donc des champignons (Ascomycètes). On mélange pour obtenir une solution légèrement laiteuse. Une goutte de cette solution est ensuite placée entre lame et lamelle pour être observée au fort grossissement On distingue des cellules immobiles. pourvues d'un noyau. Le cytoplasme est entouré d'une membrane épaisse. plus ou moins sphériques. Ils sont formés d'une seule cellule : il s'agit de levures. . Il n'y a pas de chlorophylle. Des cellules de levure au Microscope . Observation de cellules en bourgeonnement Les levures grandissent et se multiplient par bourgeonnement : lorsqu'une cellule a atteint sa taille maximale. elle forme un ou plusieurs bourgeons qui grandissent à leur tour puis se détachent de la cellule mère. . Il s'agit d'une forme de reproduction asexuée. l'apparition de moisissures.Les moisissures Rhizopus nigricans La moisissure ou mucorale du pain • Lorsqu'on abandonne une tranche de pain humide. Tranche de pain humide abandonnée tranche de pain après quelques jours . nous observons. après quelques jours. Ils n'ont pas d'organisation particulière et ne sont pas cloisonnés : ce sont des moisissures. C'est un saprophyte.La moisissure ou mucorale du pain Progressivement. Il s'agit de la mucorale du pain ou Rhizopus nigricans. ce qui explique son développement rapide sur le pain. le pain se recouvre d'un feutrage de filaments : c'est du mycélium (filaments constituant les champignons). . Cette moisissure utilise facilement les sucres et l'amidon. Problème : Comment expliquer la colonisation de la tranche de pain par la moisissure ? • Observons de plus près cette moisissure : •Une première observation à la loupe montre la présence de petites boules noires. . ce sont des "sporocystes". •Le reste de notre mystérieux colonisateur est constitué de filaments : "le mycélium". .Observation au Microscope de la moisissure L'observation au microscope montre que le sporocyste contient un nombre considérable de petites boules : ce sont des "spores". (Une spore n'est pas une graine). on peut voir ces sporanges gonfler légèrement. à sec. Dans ce sporocyste se trouvent les spores. fusionnent et forment des zygospores qui produisent du mycélium et d'autres sporanges. ces spores germent et redonnent des filaments de mycélium.PRÉPARATION DE LA LAME ET OBSERVATION (sans coloration) • Une petite touffe de ce mycélium est placée entre lame et lamelle. se déchirer et libérer les spores (c'est la dissémination). C'est ce qui explique l'envahissement rapide du récipient par cette mucorale . ce qui prouve l'importance du facteur humidité. • Remarque : plus tard. On observe aisément les sporanges (constitués de la "tige" ou sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste). Certains se rencontrent. • Si on rajoute une goutte d'eau glycérinée ou salée. Observation au Microscope optique Une petite touffe de ce mycélium est placée entre lame et lamelle. . Dans ce sporocyste se trouvent les spores. On observe aisément les sporanges (constitués de la "tige" ou sporangiophore et d'une "boule" ou sporocyste). Conclusions • Spores endogènes = Endospores • C’est un saprophyte • Mycélium sans cloisons : C’est un Siphomycète . Les conidies sont allergènes et peuvent causer de graves maladies respiratoires allergiques (asthme. sinusites chroniques. .Alternaria alternata A. rhinites). Elle provoque également des mycoses cutanées aussi bien de la peau que du cuir chevelu. alternata est une espèce toxique et pathogène. dothidea et trois colonies d’Alternaria alternata isolé à partir de lésions sur des feuilles de pistache .Boite de Petri contenant deux colonies de B. droits ou flexueux. ces conidies pluricellulaires sont brunes à jaune-brun. en chaînes simples ou ramifiées .Culture d’Alternaria alternata sur milieu Malt-Agar • Espèce à croissance relativement rapide. lisses. Ils mesurent en moyenne 50 x 5 μm. • Les conidiophores sont 1 à 3 septés. Les colonies veloutées avec une périphérie blanche sont brun-gris à noires. en forme de massue avec un rostre apical. • Les conidies bourgeonnent à travers un ou plusieurs pores de la paroi du conidiophore. La croissance aérienne de ce champignon est presque entièrement constituée de chaînes de spores. . noirs et ont une croissance sympodiale. de forme murale (dictyospores). • Les conidies. • Les conidiophores bruns sont formés de plusieurs cellules. isolées ou groupées prennent naissance à partir du conidiophore.Alternaria alternata • Sur le mycélium végétatif se forment des conidiophores isolés ou groupés. simples ou ramifiés. à paroi lisse et brune. plus ou moins sinueux. • Les conidies dictyospores (porospores) sont produites. pouvant atteindre 50 µm. rectilignes. . leur cicatrice estompée. -Conidiophore : c'est un filament plus ou moins spécialisé. à l'extrémité duquel se forment les conidies. . placé en position distale. -Conidies : (du grec Konos = cône) appareil de dissémination des spores. simple ou ramifié. Mucoraceae). Zygomycetes. Mucorales. Formation Asexuelle de spores : Sporange contient nombreuses spores uninuclées (gauche) et une large columelle (droite) • .Absidia glauca (Zygomycota. Absidia glauca • Présence de sporocystophores isolés ou ramifiés. • Les sporocystospores sont globuleuses. fixés à un mycélium aérien pouvant atteindre 1 mm de long. de 2. bien développée. • Apophyse c’est la Partie dilaté du sporocystophore situé sous le sporocyste chez les Zygomycètes . • Sporocystophores groupés par 2. • Sporocystes piriformes. lisses.5 . fixés au milieu des stolons. brun jaune à noir.5 µm de diamètre. a une forme d'entonnoir. • Les rhizoïdes sont difficiles à mettre en évidence. grisâtres avec une apophyse marquée ( taille 30 . 3 ou 4. • Une cloison subterminale est notée dans le sporocystophore. Leur paroi est striée. • La columelle est hémisphérique.60 µm ). • L'apophyse. • Les zygotes sont sphériques. de couleur rose puis devenant brunes en vieillissant • Anneau : bien marqué. de couleur de fond blanchâtre à brun clair. globuleux devenant hémisphérique. s'épaississant vers la base. de couleur blanche. de couleur blanche . relevé chez les sujets juvéniles • Pied : trapu et ferme. plutôt court. ensuite convexe puis s'aplatissant. spores et mycélium Le champignon de Paris (agaricacées) Agaricus bisporus • Chapeau : de 5 à 10 cm.Basides. recouvert d'écailles ou de fibrilles roussâtres • Lames : fines et serrées. . quand les lamelles sont brunes. Après 1 à 2 jours. pour qu'il arrive à maturité. .Sporée On se procure un champignon de Paris et on place l'extrémité de son pied dans l'eau. on récupère des spores. à bonne température. ainsi que tout le champignon. sur le pourtour de la lamelle. où sont fixées de petites boules : les spores. on coupe un petit morceau du bord d'une lamelle du champignon et on le place entre lame et lamelle (si nécessaire. On distingue. sont constitués de fins filaments étroitement assemblés : le mycélium. portant des expansions : les stérigmates. . on peut écraser doucement la préparation). des prolongements "ventrus" : les basides.Avec des ciseaux fins ou une aiguille lancéolée. Le centre de la lamelle.