Tema 6 Polinizacion y Fertilizacion in Vitro

Métodos para generar y analizar diversidad: Polinización y fertilización in vitro Ejm: Nicotiana tabacum • 1 flor: 5 anteras: 30 000 microesporas • 8%: 7200 plántulas • Doble fecundación • Interacciones (señales entre polen y tejido del pistilo) • Polen debe adherirse. . hidratarse y germinar (tubo polínico). Polen: célula generativa (origina 2 células espermáticas •1 formará embrión (2n) • el otro el endospermo (3n) . Saco embrionario.megaespora . . Fusión . • Problemas de fertilizaciónfertilización in vitro • Barreras pos fertilización o pos-cigóticas – rescate de embriones .superadas por la polinización in vitro.Dificultades • Limitaciones fisiológicas o genéticas • Barreras de prefertilización o precigóticas. .• Fertilización: unión de gametas • Fin: lograr el proceso completo de desarrollo del embrión – semillas completa. fusión y activación de señales intracelulares. • Conocimiento de proceso de reconocimiento gamético .plantas fértiles. Tubo se deshace. • Aborto de ovario. .Polinización in vitro • Barreras pre-fertilización • Incapacidad de germinación de polen propio o extraño (incompatibilidad): 1.Tubo no alcanza el ovulo (lento o largo estilo). 2. (exina alélica con receptor). . Produce bloqueo. • Gametofítica: señales que desencadenan la muerte del polen.Incompatibilidad • Esporofítica: genotipo de la planta de donde proviene el polen. degradación de ARN del polen. de óvulos. estilo . P. estigmática. placental. P. P.• Técnicas in vitro: para desarrollo completo por distintos métodos • Polinización o fertilización in vitro: P. poner polen en estigma . estigmática: cultivar pistilo.• P. placental: contacto del óvulos con polen. estilo: grano de polen sobre un estilo compatible y luego se pone en planta deseada .P. por corte en el ovario. óvulos aislados: se cultivan solos en medio P. P. . • Conocer: periodo florar. Polen mentor: mezcla con polen inviable (sustancias proteicas). recolección de polen.• Fin: fertilización de la gameta femenina (medios con sacarosa y ácido bórico). . tiempo de polinización. estigma receptivo. Formación de embrión y endospermo individuales Se obtiene una planta completa y fértil . e inducir la fusión.Fertilización in vitro • • • • In vivo: doble fecundación In vitro: aislarse gametas. pH) c) Gametas femeninas por microdisección.Aislamiento y selección a)Conocer morfología floral b)Aislar gametas masculinas (choque osmótico. maceración enzimática .• In vitro: la fusión del núcleo espermático puede ser los polares o secundarios 1. Fertilización in vitro: • Microinyección de C.2. aisladas • Colocadas en pares • Medio con CaCl2 y manitol • 48 horas se dividen las células . espermáticas en C. .Electrofusión: células en contacto en cámara. Fusión de gametas: • Granos de polen por shock de pH (osmótico) • Ovocélulas: por enzimas y microdisección manual.3. . polinización – Estigma receptivo – Momento para polinización – Polen maduro . dehiscencia.Éxito del proceso • Polen fisiológicamente desarrollado • Conocer estadios de desarrollo de gametas. – Antesis. Rescate de embriones • Aislar embriones cultivarlos en medios. para concluir desarrollo • Mas maduros mayor sobrevivencia . difícil manipulación • Cruzamientos inter-específicos.Cultivo de óvulos y embriones • Ovulo pequeño. hidratado. • Plantas resistentes a estreses ambientales. • Rescate de óvulos fecundados. .Aplicaciones • Superar barreras auto-compatibilidad y precigóticas. • Producción de plantas hapolides. • Cultivo de embriones: plantas con abortos (inconpatibilidad de endospermo) y falta desarrollo de endospermo. • Intercambio de material . • Callo embriogénicos a partir de nucelas • Cigotos transgénicos • Estudios de estadios embriogénicos .