1.Secuencia palindrómica Estructura de un ADN palíndromo A: palíndromos, B: Loop, C: Stem. Una secuencia palindrómica es una secuencia de nucleótidos de unácido nucleico ( ADN o ARN ) que es igual a leerlo en la dirección 5 '→ 3' o una cadena (también) en la dirección 5 '→ 3' en la hebra complementaria, que puede formar la una doble hélice. El significado de palíndromo en el contexto de la genética es algo diferente de la definición que se da en las secuencias de palabras y frases.Una palabra o frase capicúa es simplemente leer empezando por el final es el mismo (por ejemplo, "radar" o "la torre de la derrota"), pero en los ácidos nucleicos debe revertir secuencia complementaria primero, es decir, para revertir su complemento . Como la doble hélice consiste en dos cadenas de nucleótidos apareados para funcionar en la dirección opuesta (5 '→ 3' y de otro modo), y los nucleótidos siempre aparearse de la misma manera ( adenina (A) con timina (T) en el ADN, o A con uracilo (U) en el ARN, citosina (C) con guanina (G)), se dice que una secuencia de una sola cadena de nucleótidos a ser un palíndromo si es igual a su complemento inverso . Por ejemplo, la secuencia de ADN ACCTAGGT es palindrómica porque su base complementaria de nucleótidos hasta el nucleótido haríaTGGATCCA , y invertimos última secuencia, es decir, Lemola comenzando al final, sería ACCTAGGT , que es idéntica a la secuencia original. En las secuencias de ARN bases palindrómicas permiten que se produzca la unión complementarios antiparalelas regiones de la molécula, que forman una estructura secundaria en el ARN de doble hélice, que puede ser importante en la determinación de la [1] forma en que un ARNm se procesa por la célula. secuencias palíndromo de ARN están separados por un número de nucleótidos que no pertenecen a la palíndromo. Una secuencia palindrómica de nucleótidos puede formar una estructura de tallo-bucle (o tenedor tallo-bucle ). Las razones palindrómicos de ADN se encuentran en la mayoría de los genomas . Las razones son palindrómicos causados por el orden de sus nucleótidos. Fueron estudiados especialmente en los cromosomas bacterianoselementos en los llamados Mosaico dispersa bacteriana (o BIME bacteriana interpersed Mosaico Elementos ) que ellos se dispersan. Recientemente, un proyecto de secuenciación del genoma de investigación encontró que muchas de las bases del cromosoma Y se disponen formando palíndromos, [2][3] lo que podría permitir una "recombinación" del cromosoma Y con ella misma (la conversión de genes). Palíndromos en proteínas [4][5] ] Palindrómico también aparecen con frecuencia en las secuencias de aminoácidos de las proteínas, pero su función no se les [6] conoce bien. Dos ejemplos son palíndromos con la sistemina péptido y p53 supresor de tumor humano. Recientemente, sugerido que la existencia frecuente de palíndromos en péptidos podría estar relacionado con las regiones de baja complejidad frecuentes observados en las proteínas , ya que existe una asociación entre los dos. Su frecuencia podría ser también relacionado con la [6] [7] tendencia a formar hélices alfa de esas secuencias, o la frecuencia de la formación de complejo de proteína / proteína. 1. 2. Saltar↑ CE Creutz. Longitudes y número máximo de palíndromos en los ARN mensajeros. Biopolímeros. Volumen 17, Número 7, páginas 1815 a 1819, julio de 1978. DOI:. 10.1002/bip.1978.360170715 [1] Saltar↑ Rozen S, Skaletsky H, Marszalek JD, Minx PJ, Cordum SA, Waterston RH, Wilson RK, DC Page. Abundante conversión génica entre los brazos de palíndromos en humanos y simios Cromosoma. Naturaleza. 2003 Jun 19, 423 (6942) :873-6. PMID 12815433 . [2] Saltar↑ palíndromos del cromosoma Y [3] 3. los detalles del tejido generalmente se pierden de forma permanente. Para conseguir el efecto deseado. sin embargo." Riv.1023 / A: 1. Ir a:6. por otra parte. el cristal violeta tiñe únicamente a las bacterias Gram positivas en la tinción de Gram. 7. lípidos. es casi imposible. "asambleas de proteínas con estructura palindrómica motivo. DOI : 10. 5. Tanto la tinción como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propósitos. 287-91. Métodos de tinción in vitro Preparación Las etapas preparatorias involucradas en una tinción van a depender del tipo de análisis planeado. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios. et al (2008). Papel del péptido palíndromos. "Evolución intrínseca de las proteínas. 83 (2-3):. Rychlewski J. Se utiliza a menudo una combinación de varios colorantes para revelar más detalles y características de las que se obtendrían con la utilización de uno solo. el colorante usualmente se utiliza en soluciones muy diluidas que van entre 1:5. 2953-6 DOI : 10. Una tinción in vitro involucra el coloreo de células o estructuras que han sido removidas de su contexto biológico. Combinados con protocolos específicos de fijación y de preparación de muestras." celulares. M Kargaran. . J.1007/s00018-008-8265-1 .023. Una contratinción es una tinción que consigue que las células o estructuras sean más visibles. Los colorantes regresivos son perdonados en esta sobretinción.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. S Dolecka. la tinción supravital puede revelar además donde aparece un determinado producto químico o donde se lleva a cabo una determinada reacción química dentro de las células o tejidos.000. Algunos colorantes trabajan mejor cuando dan una sobretinción y a continuación son lavados para revelar la estructura celular (tinción regresiva).4. PMID 12760415 . cuando no se consigue que sean totalmente visibles con la tinción principal. Es de notar que muchas tinciones pueden ser utilizadas tanto en células vivas como en células fijadas. Hoffmann M. 109-13 DOI : 10. . Biol. la cantidad de tiempo de tinción. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo). Saltar↑ Giel-Pietraszuk M. Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. . Saltar↑ Pinotsis N. etc.924 . y por supuesto el propio tejido. 405-10 PMID 2128128 . El propósito más común es revelar detalles de la citoestructura que de otra manera no resultarían evidentes. Tinciones y reconocimientos histoquímicos El proceso de tinción de corte o tejidos completos es más un arte que una ciencia. Chem Protein 22 (2):. PMID 18791850 . M Wilmanns (octubre de 2008). son bastante imperdonables. Otros colorantes tiñen los tejidos tan lentamente que se puede observar la progresión en la tinción y pararlo en el momento más apropiado ( tinción progresiva). Por ejemplo. la tinción "diferencial" por componentes adicionales. 65 (19):. proteínas. 2. 6. los científicos y profesionales de la salud pueden utilizar estas técnicas estandarizadas como una herramienta diagnóstica repetible y consistente. . Las tinciones progresivas. BMC Bioinformatics 9 : 274. Tinción in vivo e in vitro Una tinción in vivo (tinción supravital) es el proceso de teñir tejidos vivos. Katanforoush A. esto implica agregar un colorante específico (esto significa que se una de manera selectiva ya sea a ADN. Saltar↑ Ohno S (1990). A pesar de esto las tinciones son eventualmente tóxicas para los organismos. carbohidratos. frecuente mente una sal metálica añadida (mordiente).111. para permitir también la identificación de bacterias Gram negativas.000 a 1:50. se puede estudiar su ubicación y morfología mientras están desempeñando su función. PMC 2474621 .1 ↑ Sheari A. La tinción es un resultado de la sinergia entre la adición de tinción. PMID 18547401 .0 6.1186/1471-2105-9274 . "Historia de dos colas simétricas: características estructurales y funcionales de las proteínas en Palindromes" . Una vez se han sobreteñido. Al provocar que determinadas células o estructuras adquieran los colores de contraste. Se utiliza una contratinción desafranina (que colorea todas las células). En bioquímica. algunas más que otras. "palíndromos en proteínas" . y la pérdida de detalles celulares.454. Mol. bajo estas premisas se puede considerar que algunos o todos de los siguientes pasos podrían requerirse. A menudo estas tinciones son llamadas tinciones vitales o supravitales. Se introducen en el organismo mientras las células aún se encuentran vivas. la temperatura durante la tinción (para colorantes "reactivos"). poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas) o incluso para resaltarorganelas dentro de células individuales. J Barciszewski (febrero de 2003). la cantidad de decolorante (si es necesario). Life Sci. . por ejemplo los tejidos que se tiñen con colorantes de naturaleza ácida (por ejemplo la eosina) suelen ser denominados como acidofílicos. Esto significa que los colorantes ofrecidos por el fabricante han sido evaluados por un organismo independiente. Entre los fijadores químicos más comunes se encuentran el formaldehído. Por ejemplo. proceso conocido como inclusión. La mayoría de los colorantes utilizados en microscopía se encuentran disponibles como colorantes certificados. Estas rodajas son luego adheridas al portaobjetos por medio de una substancia que funciona como pegamento. Afinidad de diferentes tejidos por diferentes colorantes Cuando un tejido u estructura subcelular presenta una afinidad por un determinado colorante se suele designar por los sufijos -filoo -fílico. Tinción directa Hablamos de tinción directa cuando el colorante interacciona directamente con el sustrato. Tinción indirecta 3 Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente. Montaje frecuentemente implica adherir los cortes histológicos a un portaobjetos de vidrio para su observación al microscopio o análisis. Tinción negativa Un método sencillo de tinción para bacterias. sin otro tratamiento previo. ya que cuanto más delgado es un corte histológico. A veces se puede utilizar una fijación por calor para matar. También puede ser utilizado para designar propiedades tintoriales más generalizadas. Adicionalmente. esto es. el verdadero proceso de tinción puede implicar la inmersión de la muestra (antes o después de la fijación y el montaje) en la solución colorante. la tinción negativa es una técnica suave que no destruye a los microorganismos. gelatina o clara de huevo. Para piezas de tejido de mayor tamaño. Un mordiente habitual es el ácido tánico. Estos estándares son publicados detalladamente en la 1 revistaBiotechnic & Histochemistry. o entre proteínas y otras sustancias presentes en la muestra. se utiliza un micrótomo que corta la muestra en rodajas sumamente delgadas. los tejidos cromófobos no toman colorante con facilidad. seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observación. incrementando su resistencia mecánica. concentración de sustancia colorante y desempeño en las técnicas de tinción empleadas. esta etapa puede consistir en varios pasos. los tejidos que se tiñen con azure suelen ser nombrados como azurófilos o azurofílicos. Muchos tintes. los microorganismos pueden ser observados fácilmente por medio de microscopía en campo claro 5 como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro que las rodea. Tinción adecuada En su forma más simple. y/o el ácido pícrico. La fijación es una modificación de las propiedades fisicoquímicas de las proteínas que forman una célula o tejido y que tiene por finalidad preservar las formas de las células o tejidos tanto como sea posible. . metanol. permitiendo por lo tanto un recultivo posterior para el estudio de patógenos. requieren del uso de un mordiente. Por el contrario. Este tipo de tratamiento tiene como finalidad disolver la membrana celular para permitir que las grandes moléculas de colorante puedan acceder a las estructuras del interior de las células. Esto puede ser conseguido simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. La mayor parte de las veces se utiliza un fijador químico. ya sea una resina transparente. El montaje tiene por finalidad aumentar la resistencia mecánica de una muestra que de otra manera sería extremadamente frágil. más definición se obtiene en las imágenes microscópicas. Luego de esto. y anfifílicos cuando aceptan ambos colorantes. En muestras de células sueltas. La 2 utilización de colorantes certificados elimina una fuente de resultados inesperados. para incrementar su resistencia y estabilidad. es la tinción negativa. Fijación: de por si. la muestra puede ser aplicada directamente sobre el portaobjetos. etanol. Muchos colorantes presentan una composición diferente entre diferentes fabricantes. que además es un claro caso de cromofobia y que por lo tanto funciona aún cuando los métodos de tinción positiva fallan. Pequeños bloques de tejido pueden ser embebidos en parafina o algún polímero. la tinción mordentada permanece. se puede cultivar a las células directamente sobre le portaobjetos. Cuando la solución de colorante en exceso se elimina durante el aclarado. basofílicos cuando se tiñen con colorantes de naturaleza básica (tales como por ejemplo el azul de metileno o la 4 hematoxilina). Permeabilización este paso implica el tratamiento de las células con un surfactante suave. la Biological Stain Commission. un compuesto químico que reacciona con el colorante para formar un precipitado coloreado insoluble. para que soporte el proceso de teñido conservando lo más posible su estructura original. y que este organismo ha determinado que el producto ofrecido cumple o excede ciertos estándares de pureza. Los fijadores químicos en general causan la formación de enlaces cruzados entre proteínas. sin embargo. adherir y alterar un espécimen de modo que acepte la tinción. como las que se presentan en un extendido de sangre o de fluidos biológicos. En algunos casos. y para hacer más fácil cortarlos en rodajas extremadamente delgadas. Los do complejos colorante/mordiente más comunos son las tinciones nucleares Hematoxilina y Gallocianina. Además. Clasificación química de los colorantes. . crómico. violeta de metilo. mientras que los cortes encastrados en plástico mantienen la matriz durante los pasos de tinción. Ivanov se refiere a colorantes que reaccionan covalentemente como colorantes reactivos ya que contienen un grupo que reacciona con grupos funcionales en los componentes celulares. Hay cientos de métodos de tinción. hidrofóbicas) o covalentes. los enlaces covalentes de las moléculas de colorante resultan en un complejo excesivamente estable que puede ser bastante específico. Los colorantes catiónicos ("colorantes básicos") son atraídos a los componentes celulares que son ácidos de forma natural (cargados negativamente. dependiendo de los cmponentes celulares a los que se une el TBO. resultado en una tinción débil. que realza las propiedades de tinción de un colorante. Ejemplos son la Safranina O. Como contraste. Azul A. pero puede producir una tinción de fondo mayor. sin embargo. algunas de estas moléculas de agua pueden ser intercambiadas por los grupos ligando de la molécula colorante formando un quelato entre el colorante y el metal. El pH de la solución del colorante puede determinar la extensión de la tinción mientras que la reactividad de una molécula colorante con el tejido es dependiente a mendudo del cambio. Los colorantes reactivos más prometedores son los colorantes diclorotriazina en el grupo Promoción M de colorantes comerciales. la interacción iónica de la molécula colorante al componente del tejido puede ser inherentemente inespecífica. Por tanto. acidófilos). Los mordientes son generalmente metales como el manganeso. Otros colorantes metacromáticos son Tionina. B. El agente quelante puede determinar la selectividad del colorante. y han sidu usados para facilitar la tinción principalmente de ácidos nucleicos. sólo unos pocos son usados generalmente en microtécnicas vegetales. o en la célula). Los átomos metálicos (ligandos) pueden formar un complejo multiátomo con moléculas de agua in situ. todos los métodos siguen ciertos procedimientos generalizados dependiendo si los cortes a teñir fueron encastrados en parafina o plástico. y depende del estado iónico de la molécula diana (componente celular) y el ambiente en el cual la diana resida. acetocarmín. C. No confundir con colorante "policromático". Fe o Cr . y por tanto más de un color. Colorantes aniónicos ("colorantes ácidos") son atraídos por componentes celulares que son básicos (cargados positivamente. La Hematoxilina Férrica tiñe rápidamente. basofílicos). y algunos colorantes de Acridina. Los colorantes y las microtécnicas en tinción pueden ser agrupadas en clases de acuerdo a su especificidad y estructura química. Este cambio de color en fluorescencia se denomina metacromasia y el colorante se llama colorante metacromático. Los tejidos encastrados en parafina deben ser desparafinadso usando HistoClear o xileno. Los colorantes reactivos son usados extensivamente en la industria textil pero no frecuentemente en biología. Violeta de Cresilo. añadido antes o después de la tinción. Entre las innumerables tinciones químicas disponibles para investigación hitológica. las diferencias en el pH y la concentración en sales dentro del tejido pueden dar como resultado en tinciones diferenciales. los metales quelantes se han denominado mordientes. Ciertos colorantes muestran un cambio en los picos de absorción (color) después de de unirse a polianiones (bien en solución. La Hematoxilina-cromica es específicapara ácidos nucleicos. Por ejemplo tejidos teñidos con Azul de Toluidina O puenden variar de azul oscuro/ púrpura hata azul muy claro a rosa. el cual es un colorante compuesto o una mezcla de colorantes que consisten en más de un colorante. y 3+ 3+/2+ 3+ el metal quelante usado puede ser Al . particularmente asociaciones iónicas. Otros colorantes ácidos son el Naranja G y el Azul de Anilina. pero tiñe más bien poco. Ejemplos son el TBO. Tradicionalmente. que preferentemente tiñe componentes tales como la celulosa y el citoplasma. Colorantes químicos Las moléculas de colorante deben reaccionar con componentes celulares bien por uniones no covalentes (inónicos. Las tinciones no covalentes.Erhlich usó el término "matriz ortocromática" para referirse al color de la solución de colorante y "matriz metacromática" al color del complejo colorante-tejido. al que se refieren algunas veces como "lago". un mordiente también debe ser un compuesto tal como el ácdio acético o el pícrico que es añadido para lavar la solución para realzar el brillo de una tinción como la eosina o el eritrosin (ácido acético) o colorantes violeta (ácido pícrico). y Hematoxilina siendo las más destacables. y Azul de Toluidina O. alumínico. De los muchos pasos de tinción diseñados por los investigadores.Safranina. cueden ser inestables y el colorante puede perderse del tejido. Verde Rapido. Las clases que se enumeran aquí pertenecen específicamente a microtécnicas e histoquímica. puentes de hidrógeno. Mordientes El término mordiente se refiere a cualquier compuesto. Un ejemplo es el Verde Rápido FCF. las microtécnicas vegetales han tendido a limitar su uso a sólo unas pocas. Cristal Violeta. Violeta de Metilo y Azul Celestina. Sin embargo. Durante la tinción. Además imparte un fuerte color rojo a loseritrocitos. Por el mismo motivo. Bismarck brown[editar] Bismarck brown. y en muchos otros protocolos de tinción. Azul brillante de Coomassie[editar] Coomassie blue (también conocido como azul brillante) es un colorante que tiñe en forma no específica a todas las proteínas con un fuerte color azul. (también conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas ácidas. tiñe las paredes celulares de color púrpura. el bromuro de etidio es utilizado como un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las bandas de ADN en una corrida enelectroforesis en gel. Si el componente del cromóforo de la molécula es fluorescente se conoce entonces como fluoróforo. Eosina[editar] La eosina se utiliza más frecuentemente como contracoloración de la hematoxilina. De hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos como eosina. y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o áreas específicas. Azul de metileno[editar] Azul de metileno se utiliza para teñir células animales. es decir azul Nilo. y algunas estructuras extracelulares. También puede ser utilizado para teñir células vivas. Marrón Bismarck.Interacciones covalentes. al ser combinado con un mordiente adecuado. 3 . tiñe a los núcleos de color azul. Esta tinción combinada BE/NA le otorga a las células vivas un color verde fluorescente mientras que las células apoptóticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.colorantes reactivos Una molécula de colorante reactivo está formada generalmente por dos componentes: el revelador de color (cromóforo) y el componente reactivo (auxocromo) generalmente reaccionando con un grupo hidroxil. membrana celular. puede ser utilizado para identificar células que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis. Además no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisión corriente. ya que tales células poseen unas membranas mucho más permeables. Este colorante puede ser utilizado en combinación con naranja de acridina (NA) en el conteo de células viables. amino o tiol del sustrato. DAPI[editar] El DAPI es un colorante nuclear (tiñe el núcleo) fosforescente.Colorantes histológicos más comunes Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las células o tejidos. Es también utilizado para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en citología y como colorante vital en el recuento de reticulocitos. mientras que las sales de alumbre-carmín son colorantes que se adhieren al núcleo. Puede ser utilizado en células vivas o fijadas. El cristal violeta es un componente importante en la coloración de Gram. Las tinciones vitales (que pueden ser utilizadas con organismos vivos) se encuentran destacadas. La técnica de 6 tinción con DAPI es especialmente adecuada para el recuento celular. para hacer más visibles sus núcleos. A menos que se indique lo contrario la mayoría de estos colorantes se utilizan con células y tejidos fijados. Carmín[editar] El carmín es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teñir glicógeno. Azul Nilo[editar] El Nile blue (o Nile blue A). impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmático. Se utiliza frecuentemente para teñir las corridas de proteínas en las electroforesis en gel. Cristal violeta[editar] El cristal violeta. Las tinciones con carmín requieren del uso de un mordiente. El DAPI se une a las regiones de alta repetición A=T en los cromosomas. Bromuro de etidio[editar] El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. Se puede utilizar con células vivas. El más frecuentemente utilizado es la eosina Y (también conocida como eosina amarillenta) ya que posee una tonalidad amarillenta muy . La eosina puede ser utilizada también en algunas variantes de la coloración de Gram. que usualmente es aluminio o alumbre. Algunos de los colorantes biológicos más comunes se listan más abajo. A pesar de que no es capaz de teñir células vivas ya que no atraviesa las membranas intactas. se excita con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. también conocida como eosina azulada o rojo imperial. tal como la hidroxiquinona o formalina. aunque esta característica disminuye su habilidad para penetrar la membrana plasmática. Hay dos tipos principales de colorantes Hoechst. El almidón es una sustancia muy común en la mayor parte de las células vegetales. Hoechst tiene color amarillo cuando se encuentra disuelto en agua. Algunas células argentafines. Rodamina[editar] La rodamina es una tinción fluorescente específica para proteínas utilizada comunmente en microscopía fluorescente. Estas células reducen la plata a su forma metálica luego de ser expuestas a una tinción que contiene un agente reductor. utilizando una reacción entre el nitrato de plata y el dicromato de potasio. catiónico y selectivo para ácidos nucleicos útil para demostraciones sobre el ciclo celular. haciendo mas visible el núcleo. Este tipo de coloración es especialmente importante para demostrar proteínas (por ejemplo el colágeno tipo III) y ADN. representando la formación del complejo de inclusión yodo/almidón. la cual posee una suave tonalidad azul. Cuando se une al ADN presenta un espectro muy similar al de la fluoresceína. El otro compuesto conocido como eosina es la eosina B. Se utiliza para facilitar la visualización de ambas sustancias tanto dentro como fuera de las células. Ambos compuestos son funcionalmente similares. la hematoxilina tiñe a los nucleos celulares de color azul violeta a negro. músculo liso o mitocondrias. y se acumula en los glóbulos lipídicos en el interior . aunque poseen pequeñas diferencias en su estructura. Cuando se mezcla almidón con una solución de yodo. una de las mas comunes utilizadas en histología. se desarrolla un color intensamente azul. la fucsina es la responsable de dar el color rojo a las fibras de colágeno. El Hoechst 33258 contiene un hidroxilo terminal. luego de la fijación con formalina. En la tinción de Van Gieson (picrofucsina). También se utiliza la tinción argéntica en la electroforesis en gel en gradiente de temperatura. Mayormente se utiliza en combinación con eosina en la coloración H&E (Hematoxilina y Eosina). El yodo tambíen es componente de la coloración de Gram utilizada en microbiología.suave. Utilizado con un mordiente. En la coloración de gram el yoduro se utiliza como mordiente. reducen las soluciones de plata a plata metálica. Al igual que la fluoresceína. El Hoechst 33342 contiene un grupo etilo sustituyendo al grupo hidroxilo terminal (un grupo etileter). y por lo tanto es mas soluble en solventes acuosos. El Rojo Nilo es una coloración lipofílica. Naranja de acridina[editar] El naranja de acridina es un colorante fluorescente. para precipitar cromato de plata en algunas células (método de Golgi). Este tratamiento produce una mezcla de Rojo y Azul Nilo. Fucsina ácida[editar] La fucsina ácida puede ser utilizada para colorear colágeno. Otras células son argirofílicas. La solución de Lugol o Lugol yoduro (IKI) es una solución de color marrón que se torna negra en presencia de almidones y puede ser utilizada para colorear células. Es capaz de atravezar la membrana celular e interactúa con el ADN y el ARN por intercalación o interacciones electrostáticas. y el la utilización de uno u otro es más una cuestión de preferencia y tradición. se puede utilizar también como una tinción inespecífica para dar un trasfondo fluorescente (contraste) a tinciones convencionales en la superficie de muestras 7 sólidas de tejidos (coloración de contraste fluorescente) ) Plata[editar] Una tinción argéntica es el uso de plata para colorear preparados histológicos. Hematoxilina[editar] La Hematoxilina es un colorante nuclear. También es una coloración tradicional para colorear mitocondrias (método de Altmann). y emite luz azul cuando recibe luz ultravioleta. Se utiliza con frecuencia en microscopía de fluorescencia para colorear el ADN. Los dos colorantes son intercambiables. Hoechst 33258 y Hoechst 33342. Hoechst[editar] Hoechst es un compuesto derivado bis-benzimidazol que se une al surco menor del ADN. lo que lo hace mas hidrofóbico. Rojo Nilo[editar] El Rojo Nilo (también conocido como oxazona del azul nilo) se produce hirviendo el Azul Nilo con ácido sulfúrico. aumentando la capacidad del colorante para entrar en las células a través de los poros presentes en la membrana o pared celular. Forma parte de la coloración tricrómica de Mallory donde se utiliza para colorear núcleo y citoplasma. Con frecuencia se utiliza como contracoloración en otras técnicas de tinción. y con mejor penetración en la membrana plasmática. Rojo neutro[editar] El rojo neutro (toluylene red) colorea de rojo a la substancia de Nissl. de modo que una solución diluida de yodo puede colorear el almidón presente en las células. Lugol[editar] El yodo se utiliza en química analítica como indicador para el almidón. Este método fue descubierto por el fisiólogo italiano Camillo Golgi. Es un agente oxidante fuerte. Hay varios colorantes de la familia sudan. sirve para realizar la decoloración. que absorbe los electrones. Ácido fosfotúngstico[editar] El ácido fosfotúngstico es un colorante negativo común utilizado para resaltar virus. lo que permite colorear materiales que se resisten a la coloración con osmio. y actúan de mordiente. Fluoresce fuertemente cuando se encuentra particionado en lípidos. También se utiliza para determinar los niveles de grasa en materia fecal para diagnosticar esteatorrea. También se puede utilizar directamente para colorear endosporas. dejando un color marrón o negro característico. Se disuelve con facilidad en las grasas y se reduce aosmio metálico al interactuar con material orgánico. Tetróxido de osmio[editar] El tetróxido de osmio se utiliza en microscopía óptica para colorear lípidos. Por lo general se utilizan sustancias electrondensas. los cuales están presente para solubilizar el yodo. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio). El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Por ejemplo el polietileno.de las células. dejando un depósito de osmio no volátil en un estado de oxidación bajo. polisacáridos. como la safranina o la fucsina. TINCIÓN DE GRAM Explicación[editar] El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. También puede ser utilizada para darle una coloración amarilla al colágeno. para teñir la cromatina de las células y facilitar así su visualización. ya que en la misma es soluble el complejo I 2/cristal violeta. El Rojo Nilo puede ser utilizado con células vivas. y otros tejidos y materiales biológicos. Tetróxido de rutenio[editar] El tetróxido de rutenio es igualmente volátil e incluso mas agresivo que el tetróxido de osmio. por ejemplo: Sudan III. dejando un residuo negro fácilmente visible. En microscopía electrónica[editar] Al igual que en la microscopía óptica. Verde malaquita[editar] El verde malaquita (conocido tambíen como diamond green B o victoria green B) puede ser utilizado como contracoloración azulverdosa en combinación con la safranina un ejemplo es la coloración de Gimenez para bacterias. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas. Safranina[editar] La safranina (o safranina O) es un colorante nuclear. También se utiliza para la tinción de varios polímeros para el estudio de los mismos por TEM. ya que en él el osmio tiene un estado de oxidación +8. o metales pesados. Se disuelve en grasas y se reduce por la presencia de materiales orgánicos a osmio metálico. pero practicamente no presenta fluorescencia en soluciones acuosas. Oil Red O. Oxida agresivamente muchos materiales. . y Sudan Black B. es quizás la coloración mas común para resaltar morfologías en la microscopía electrónica. haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. se puede hacer uso de sustancias que aumentan el contraste en la microscopía de transmisión electrónica. coloreándolos de rojo. Colorea los núcleos celulares de rojo. y se utiliza principalmente como contracoloración. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega. mientras que los Gram negativos sí lo hacen. por lo común. Sudan[editar] La coloración de Sudan se utiliza para destacar sustancias "sudanofílicas". 4. mientras que las Gram positivas permanecen violetas. Habitualmente es un colorante de color rojo.. El OsO4 es muy volátil y extremadamente tóxico. Sudan IV. lípidos. Tetróxido de osmio[editar] El tetróxido de osmio se utiliza en microscopía óptica para teñir lípidos. nervios. Los organismos Gram positivos no se decoloran. Verde de metilo[editar] El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro. Debido a que es un metal pesado. La facultad de las células para tomar la coloración Gram no es propia de toda sustancia viviente. Aumenta la permeabilidad. Así vemos que las células de plantas y animales superiores no conservan la primera coloración. El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número de grupos metilo en la molécula. Productos que se utilizan Reacción y coloración de las bacterias GRAM + GRAM Células color violeta 1) Cristal violeta Células color violeta 2) Lugol solución Se forma el complejo CV-I. la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo. 2R. por ejemplo. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo. La letra R indica matices rojos. Disminuye la continúan teñidas de color violeta. Los que fijan el violeta. aún después de tratarlos con un decolorante. y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda. fucsina fenicada diluida. Los nombres violeta de metilo 3R. como safranina.. Algunos microorganismos retienen el colorante violeta. y el color no se modifica al añadir éste. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. color violeta. El complejo CV-I se separa de las células que continúan teñidas de de la célula. y la letra B. de los tres grupos. safranina). Sigue a tal tratamiento una coloración de contraste. Basándonos pues. se refieren al número de grupos metilo contenidos. los mohos se tiñen con cierta irregularidad. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración Gram. que se deja actuar durante un lapso determinado. 3B. se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó. 4) Safranina Células no decoloradas. sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. pironin B o hasta inclusive verde de malaquita. Las células Se forma el complejo CV-I. quedan teñidas Células decoloradas. B. no es crucial para la técnica. el tono más oscuro es la hexametil-p-rosanilina (violeta cristal). podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. por consiguiente. puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio. El complejo CV-I no sale porosidad. los gránulos de micelios propenden retener el colorante. violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina. después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste no arrastre más colorante. las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas. pardo Bismarck. La reacción de Gram no es infalible ni constante. . y toman el segundo. se tiñen de color de color violeta. que se deja durante el mismo tiempo que la anterior. R. y se considera como el mejor colorante primario para teñir por el método de Gram.La safranina puede o no utilizarse. En realidad. y quizá por otras causas. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de yodo. etc. Se deshidratan las paredes celulares. Las células iodada 3) Alcohol continúan teñidas de color violeta. de gramnegativos. la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares. rosado. tonos azules. se califican de grampositivos. Al término del protocolo. Los representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. en la reacción Gram. y el tinte más ligero. Se contraen los poros. 2B. En este método de tinción. Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. otros pierden con facilidad el primer tinte.