INSTITUTO POLITECNICONACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS “SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN.” ALUMNA: HERNÉNDEZ ESCAMILLA ROSALINDA GRUPO: 4IV1 SECCIÓN 3 PROFESOR: VICTOR MANUEL L. MACÍAS MARTÍNEZ mientras que la otra es un líquido el cual se mueve a través de la superficie fija o sobre ella. o un líquido que ha sido colocado en una capa delgada sobre un material de soporte inerte. Una de las fases es un lecho fijo de gran área superficial. Se puede llevar a cabo a través de diferentes modalidades: cromatografía en columna. establece las proporciones relativas en que se fijan y migran. La fase estacionaria puede ser un sólido poroso o finamente dividido. entre otras aplicaciones. en capa fina. Llevar a cabo la separación de dos colorantes mediante sus propiedades físicas y químicas por cromatografía por adsorción. o mezcla de disolventes. determina la separación entre los mismos. a través del adsorbente. . fase móvil.INTRODUCCIÓN La cromatografía comprende un grupo de métodos para separar mezclas moleculares que dependen de las afinidades diferenciales de los solutos entre dos fases no miscibles. esta interacción triple entre soluto. Para que el proceso ocurra es necesaria la presencia de un disolvente. Los componentes de la mezcla deben tener dimensiones moleculares. lo que requiere que estén en solución. quedando reversiblemente ligado a la misma. que interaccionan con el adsorbente y los compuestos de la mezcla. etc. Según el tipo de cromatografía empleada la fase móvil puede ser un líquido puro o una mezcla se soluciones o también puede ser un gas. en papel. *Bibliografía 1 La cromatografía de adsorción es una de las técnicas más empleadas para la separación de mezclas en sus componentes puros. purificación de un compuesto y comparación de compuestos que se creen idénticos. Se basa en el diferente grado de adsorción de cada compuesto orgánico sobre la superficie del adsorbente por fuerzas electrostáticas. los diferentes solutos y. por tanto. Es necesario que las partículas de la fase estacionaria sean lo más pequeñas y homogéneas posible para proveer una gran superficie de modo que la adsorción y desorción de los solutos ocurran con frecuencia. La fase fija se denomina fase estacionaria y la otra. disolvente y adsorbente. *Bibliografía 2 OBJETIVOS. 039 0.254 2.866 0.023 0.263 0.004 0.038 0.069 0.023 0.003 0 Gráfico 1.Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno.053 0.001 0...004 0 0 0 0 0 0 0 0.004 0 0 0 0.102 0.023 0.069 1.005 0 0 0. Volumen de elución.078 0.2 0.086 0.043 0.035 0.111 0.001 0.001 0 0.083 0.DATOS EXPERIMENTALES Tabla 1.003 0 0.009 0.584 0.073 1.027 0 0 2.066 0.004 0. (ml) A493 A668 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 66 69 72 75 78 81 84 0 0.004 0.Perfil de elución a diferentes longitudes de onda. .009 0.139 0.137 1. 5 Absorbancia 1 0.5 0 Volumen de elución A493 A668 Estructuras de los colorantes Azul de metileno (cloruro de metiltionina) + Na O O O O Na + O Fluoresceína . 2.5 2 1.Perfil de elución. se puede observar en el gráfico “perfil de eluciones” que cada uno obtuvo su máximo en la longitud de onda esperada. las cuales fueron analizadas en el espectrofotómetro. Se puede observar en la estructura del azul de metileno que éste contiene varios elementos con pares de electrones de no enlace. en el caso del azul de metileno es a 493 y la fluoresceína a 668. cada colorante tiene su máximo de absorbancia a diferente longitud de onda. así aumentando su solubilidad con el agua. pero son en su totalidad aniones. para conocer si la separación fue exitosa. porque ésta goza de un pH ácido. pretendiendo así obtener un perfil de eluciones. es decir se obtuvo una buena separación de los colorantes previamente mencionados. lo cual no se puede decir lo mismo con la fluoresceína. provocando así que el regulador y la fluoresceína compitan por las interacciones con la alúmina. Después se adicionó regulador de fosfatos de pH 12 el cual es una solución más básica que la misma fluoresceína.DISCUSIÓN El azul de metileno eluyó primero. esto se debe gracias a que la fase móvil que se adicionó fue agua. lo que le permite interactuar en este momento preferencialmente con la fluoresceína. . De esta forma se le permite a la fluoresceína eluir. esto se puede observar en el gráfico 1 ya que se obtuvieron en cada longitud de onda una absorbancia máxima que de ninguna manera se intersectan. lo que provoca que forme uniones electrostáticas con el agua. ésta misma tiene una gran afinidad por el azul de metileno. a diferentes longitudes de onda (493. El perfil de elución fue el esperado. La fluoresceína a diferencia del azul de metileno también tiene varios grupos con pares de electrones de no enlace.668). Con las alícuotas recolectadas desde el inicio. los cuales interaccionan con la alúmina. al tener más afinidad por la fase móvil que por la fase estacionaria. empleando fórmulas. SOPORTE: Medio en el realizará la separación. FASE MÓVIL: es la fase que se mueve en una dirección definida. Defina el término de adsorción y. FASE ESTACIONARIA: es la sustancia que está fija en una posición durante la cromatografía. Interacción electrostática entre el azul de metileno y el agua. Puede ser un líquido. Especifique y defina los elementos del sistema cromatográfico para esta separación. esquematice que fuerzas intermoleculares participan en el proceso de separación de los solutos. 2. un gas o un fluido supercrítico. La adsorción es la retención.PREGUNTAS EXTRA 1. . cual se ANALITO O MUESTRA PROBLEMA: es la substancia que se va a separar durante la cromatografía. adhesión o concentración en la superficie de un sólido de sustancias disueltas o dispersas en un fluido mediante interacciones electrostáticas o enlaces covalentes. Cambiando el pH a básico de la alúmina para que de esa forma el azul de metileno interaccione con la alúmina e invirtiendo el orden al adicionar las fases móviles. mata caza. Es necesario tener en cuenta que se quería obtener ambos colorantes y no solo uno. Menciona tres compuestos que sean buenos adsorbentes. Para emplear ésta técnica como separación deben conocerse las propiedades físicas y químicas de los analitos a separar. La cromatografía fue utilizada como una técnica de separación.. 2. A explicación no pedida… culpabilidad manifiesta. Carbón activado. por lo cual fue necesario agregar una segunda fase móvil. Completa la frase El que porfía. Considerando las propiedades de la solubilidad de los colorantes.Enlaces iónicos entre la alúmina y la fluoresceína + Na O ALÚMIN A ÁCIDA O O O Na + O 3. Gel Sílice y Carbonato de Calcio CONCLUSIONES 1. 5. 4. 4. indique que modificaciones haría para invertir el orden de la elución. Para llevar a cabo una cromatografía se debe tener en cuenta cuáles son sus componentes y cuál es la función de cada uno de estos. BIBLIOGRAFÍA . 3.. Molina Buendía.1. Página 686. 2. Año 2000. Genaro Alfonso. “Prácticas de química orgánica”. P. “Farmacia 20º Ed”. Año 1991. Página 22 . Editorial Médica Panamericana. Remington. Editorial Universidad de Murcia.
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