Guía práctica para la evaluación del semen 29GUÍA PRÁCTICA Guía práctica para la evaluación del semen Ariagno, Julia1; Mormandi, Edaurdo2 1 Laboratorio de Fertilidad Masculina, Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires (UBA). Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. 2 Laboratorio de Endocrinología, Grupo de Reproducción Humana, División Endocrinología, Hospital Carlos G. Durand. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. Contacto: Eduardo Mormandi. E-mail:
[email protected] Resumen El espermograma es un examen de laboratorio esencial en la evaluación de la infertilidad para el estudio de las enfermedades genitales masculinas y de otras patologías, como las provocadas por la exposición a productos químicos, factores ambientales y medicamentos, entre otras causas. El análisis del semen o espermograma incluye la evaluación de los espermatozoides, el plasma seminal y la presencia de otras células como leucocitos y células de la línea germinal .También, aporta información importante en cuanto al proceso de espermatogénesis, la función de los espermatozoides y de las glándulas anexas. Se evalúan las características generales del semen tanto macroscópicas: color y aspecto, viscosidad, licuefacción y volumen, como así también parámetros microscópicos, tales como número de espermatozoides, movilidad, morfología y vitalidad. Se debe realizar un control de calidad riguroso que garantice reproducir de los resultados y minimice los errores inter e intra-observador. Esta guía da los lineamientos esenciales para la realización de una correcta evaluación del semen humano, de acuerdo con las normativas de la Organización Mundial de la Salud. Palabras claves: espermática, unfertilidad, morfologías, recomendaciones. Abstract Semen analysis is an essential laboratory test in the evaluation of infertility for the study of male genital diseases and other diseases such as those caused by exposure to chemicals, environmental factors and drugs. Semen analysis includes assessing sperm, seminal plasma and the presence of other cells such as leukocytes and germ line cells. This analysis provides important information on the process of spermatogenesis, sperm function and function of annex glands. This analysis includes both a macroscopic examination (color, appearance, viscosity, liquefaction and volume of semen) and ISSN 1515-6761 Ed. Impresa a microscopic examination (sperm count, motility, morphology and vitality). A rigorous quality control ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM Código Bibliográfico: RByPC should also be made to ensure the reproducibility of the results and minimize inter- and intra-observer Fecha de Recepción: errors. This guide provides the essential guidelines to conduct a proper assessment of human semen 24/02/2015 Fecha de Aceptación: according to the regulations of the World Health Organization. 19/04/2016 Key words: spermatic, infertility, morphology, recommendations Introducción Materiales y Método Análisis del semen Etapa pre-analítica Uno de los principales factores relacionados con la fertilidad Preparación del paciente y toma de muestra: es la producción espermática, que se valora mediante el es- De acuerdo con las recomendaciones del Manual de Labora- permograma. El mismo consiste en la evaluación macroscó- torio para el estudio del semen de la OMS – 20102, la mues- pica y microscópica del semen. tra para el espermograma se debe tomar según las siguien- Lamentablemente la gran variabilidad intraindividual de tes normativas: los parámetros del semen, limita la utilidad de este estudio 1- El paciente debe recoger la muestra luego de 2 días y dado que, muestras recogidas por un mismo individuo, bajo no más de 5 de abstinencia sexual previa al examen las mismas condiciones y con el mismo período de absti- (no mantendrá relaciones sexuales ni se masturbará). nencia, pueden mostrar variaciones en todos los paráme- 2- Lo ideal es que la muestra se recoja en la intimidad de tros1, por lo que se sugiere realizar por lo menos dos esper- una dependencia próxima al laboratorio para que sea mogramas antes de arribar a un diagnóstico definitivo2, 3. procesada rápidamente. De lo contrario, deberá ser ByPC 2016;80(3):29-36. frente a una muestra muy viscosa. A. pudiendo presentar otros colores debido a situaciones homogéneo y luego hacer un gran filamento cuando la reco- patológicas: leucocitospermia (amarillento). prefe- rentemente después de 30 minutos de obtenido. La OMS recomienda informar los parámetros del semen en 4- Cuando por circunstancias especiales no sea posible el total del eyaculado por lo que la medida precisa del volu- obtener el semen mediante masturbación. ción de utilidad clínica si no fue determinado rápidamente. hemospermia gemos con pipeta Pasteur. El mismo. El valor de de referencia es ≥ 1. so sobre la motilidad de los espermatozoides. mientras que las glándulas bulbouretrales de Cowper. de las diferentes secreciones de las glándulas accesorias. y eyacularse dentro de un recipiente pequeño. Las muestras de semen se deben analizar dentro de la pri. lumen bajo y bajo número de espermatozoides. aumentada. la caída debe ser gota a gota. puede existir contaminación vaginal (células. obstrucción del conducto eyaculador o frente a muestras tra. de no ser C. a gota. problemas físi. de ser glándulas uretrales de Litre y el epidídimo aportan una pe- posible. imposibilidad de repetir el estudio. o expresado de otra forma seminales tampoco están presentes. • El más sencillo y recomendable consiste en recoger la cos. utilizar un condón de plástico inerte específico para Los métodos recomendados para la medición del volumen este fin (colector seminal). Viscosidad en aquellos casos tales como: dificultades psicológi. obtenido será igual al volumen de semen en ml. pero E. bacterias) y el pH ácido vaginal ejerce un efecto adver. El resulta. condición en la que las vesículas do puede ser normal o anormal. ByPC 2016. Aspecto F. los conductos deferentes.5 m. Etapa analítica En cualquiera de los dos métodos se considera anormal cuando se forma un filamento de más de 2 cm. Para su estimación se pueden utilizar dos métodos: cas. El pH del semen aumenta normalmente con el tiempo por la culación para nuevamente licuarse entre 5 y 40 minutos pérdida de CO2 que se produce luego de la eyaculación. y otras circunstancias que así lo ameriten. drio en la muestra y observar el filamento que forma al retirarla. la OMS sugiere que todas las muestras sean evaluadas a los Si el pH es inferior a 7. limpio. El aspecto de la muestra puede ser líquido.30 Guía práctica para la evaluación del semen trasladada al laboratorio antes de transcurrida una completa o incompleta después de este tiempo. El semen coagula casi inmediatamente después de su eya. Color No hay que confundir una muestra viscosa con una mues- El color normal del semen licuado es gris claro (blanqueci. muestra con pipeta Pasteur de plástico y dejar caer gota cesará la muestra y se informará al médico lo ocurrido. tra no licuada. mientras que Evaluación macroscópica: en una muestra normal. shock por frío. 5- Las muestras incompletas no se deben analizar. El resultado es normal o gas o vitaminas. deberá estar tibio para reducir el riesgo de queña fracción. se pro. B. Licuefacción posible se medirá dentro de la hora de la eyaculación. Volumen durante el traslado al laboratorio.80(3):29-36. por después. dado que contiene la mayor concentración de espermatozoides. lumen de eyaculado. El pH debe medirse cuando Normalmente el semen tiene aspecto opalescente u opaco. coágulos gelatinosos de diversos tamaños en los que azoospérmicas tratarse de ausencia bilateral congénita de los espermatozoides se encontrarán inmóviles. no). y se relaciona directamente con el vo. El coitus interruptus no es son: aceptable para hacer la recolección del semen porque Por pesada: se debe recoger el semen en un frasco pre pe- puede perderse la primera porción del eyaculado que sado y luego se lo vuelve a pesar con el semen. por la acción del antígeno próstata-específico. la densidad del semen es aproximadamente 1g/ml. lo que los valores altos de pH proporcionan poca informa- pero dado que su traslado puede demorarse hasta 1 hora. hora de la recolección y se la protegerá de las tempe- raturas extremas (no menor de 20°C ni mayor de 37°C) D. puede haber En caso de no licuar a los 60 min se observarán en la mues. la secreción ácida prostática. . el peso Además. por lo que frente a grandes volúmenes principalmente la secreción de vesícula seminal alcalina y podrá presentar un aspecto menos opaco o viceversa. pH El aspecto del semen da idea de la cantidad de células que El pH del semen refleja el equilibrio entre los valores de pH tiene en suspensión. • También puede hacerse introduciendo una varilla de vi- mera hora después de su recolección. se podrá men es esencial. el semen está licuado en un tiempo estandarizado. en este caso nos encontramos (rojizo/amarronado) o colores varios por la ingesta de dro.0 en una muestra de semen con un vo- 60 minutos post obtención. las de vidrio o plástico y de boca ancha. Las glándulas accesorias que más contribuyen al volumen 3- La muestra deberá obtenerse mediante masturbación del eyaculado son las vesículas seminales y la próstata. 5. con el fin de asemejar las condicio. la concentración y la morfología de visualizar fibras de moco. permatozoides agrupados y otros elementos (Trichomonas vaginalis. • Extender una gota de semen de manera uniforme sobre el papel de pH. que indica la tabla 1 para cada valor de promedio. • % de espermatozoides con movilidad no progresiva (NP) men tales como CELL-VU® slide con las que se puede evaluar • % de espermatozoides inmóviles (IM) tanto la movilidad como la concentración espermática sin Los valores de referencia son: diluir la muestra. se deben ByPC 2016. • Móviles progresivos (PR): ≥ 32% do. o sea en 2 alícuotas diferentes de la muestra.80(3):29-36. células de la progenie mática y de los diferentes elementos presentes estimando espermática.). filamentos de la muestra respecto de los valores de referencia estable. se deben descartar los 2 porcen- cubreobjetos de 22x22mm se deben dispensar 10 µl. todas las determinaciones que se in- tan la visualización) y se dispensa con pipeta automática forman en forma porcentual se deben realizar por duplicado un volumen tal de obtener una cámara entre porta y cubre. rio. donde se realizará la clasificación de la movilidad esper- permatozoides. • % de espermatozoides con movilidad progresiva (PR) Existen en el mercado cámaras para la evaluación del se. de moco. Evaluación microscópica del semen: Se debe efectuar una primera observación a bajo aumento El análisis microscópico del semen permite la evaluación de (100x: lente objetivo de 10x y ocular de 10x) con el fin de la movilidad.0 con buena discriminación entre valores de 7. rán diferentes planos microscópicos. a la vez diferencia entre ambos datos es menor o igual al valor límite que se distribuirán en monocapa. vitalidad y morfología) ser tan vigorosa que genere burbujas. además el número de espermatozoides por campo para la Al igual que con todos los analitos analizados en el laborato. Estas cámaras se cargan con aproximadamente 4 µl de se. porque éstas dificul. objetos de alrededor de 20 µm de profundidad. Análisis microscópico inicial: Luego de la evaluación macroscópica se homogeniza bien Aceptación o rechazo de los duplicados (tabla válida para la muestra con pipeta Pasteur (la homogenización no debe movilidad.2 Evaluación en fresco del semen: Como ya se mencionó el semen debe estudiarse dentro de un periodo de tiempo determinado y con condiciones de temperatura precisas.0 a Figura 1: Cámara Cell-vu 10. sean evaluadas de misma forma. si la rantiza el movimiento libre de los espermatozoides. determinación de la concentración espermática. La estimación de la cantidad de espermatozoides presen- men. cristales (fosfato de espermina). la metodología a emplear en esta evaluación debe estar Todos los parámetros microscópicos se deben procesar por estandarizada para asegurar así que todas las muestras duplicado. como los leucocitos. coágulos. de emplear debido a errores al contar. Se aceptaran los duplicados y se informara el promedio. Este procedimiento se realiza para minimizar las posibles diferencias debidas a la heterogeneidad propia del semen. cubreobjetos de 24x24mm dispensar 12µ y con cubreobje. leucocitos. tes para decidir la dilución a realizar para el recuento esper- (Figura 1) mático puede observarse en la tabla 2. En el extendido fresco antes descripto se estima el número de espermatozoides presentes por campo (400x). es- cidos por la OMS. Como ya se mencionó. Una vez aceptados los promedios se informará: tos de 18x18mm dispensar 7µl. hematíes. . la vitalidad. El valor de referencia es ≥ 7. levaduras. Para lograr dicha cámara. Guía práctica para la evaluación del semen 31 Se debe medir con papel de pH de rango reducido de 6.0 a 8. y se informa el promedio. etc. con tajes y rehacer con nuevas alícuotas. como ocurre al utilizar Si la diferencia entre porcentajes es mayor a la admitida. bacterias y cristales. Cada portaobjetos-cámara cuenta con dos • Móviles totales (PR+NP): ≥ 40% posiciones (cámaras). células inflamatorias. En el análisis microscópico inicial se debe valorar la presen- nes fisiológicas y para poder evaluar posibles desviaciones cia de células no espermatozoides. a la vez que se investiga la presencia pados y luego se debe pasar a una magnificación de 400x de células y/o elementos acompañantes diferentes de es. un mayor volumen. espermatozoides agru- los espermatozoides. la cual ga. • Esperar a que el color de la zona impregnada se encuen- tre uniforme (30seg). cada uno con una profundidad de 20 µm. El procedimiento consiste en: • Mezclar bien la muestra de semen. facilitando la evaluación por duplica. por lo que no se observa. por lo que los 17 – 23 8 espermatozoides muertos estarán coloreados y los vivos se verán sin colorante sean móviles o inmóviles.11 6 El estudio de vitalidad se realizar empleando colorantes su- pra vitales denominados así. La técnica CASA tie. ya que disminuyen las El método estándar para evaluar la motilidad espermática colisiones.L. . tipo de cámara. de tal for- 66 – 76 9 ma que un espermatozoide vivo será aquel cuyo núcleo no esté teñido de rojo.Hardware: ordenador (PC). microscopio óp. Barcelona. con- .92 6 núcleo se tiña de rojo. permiten al operador cam- to de gran variación inter-laboratorios. es necesario que cada equipo Tabla 1: Diferencias aceptables entre dos porcentajes estandarice un protocolo. concentración. con diferentes mediciones de movilidad espermática y permite conservar características técnicas que dan lugar a resultados muy la video-documentación de las muestras analizadas. ter Assisted Semen Analysis) ha permitido una más objetiva No existe una estandarización y optimización de los equi- y sofisticada evaluación de la movilidad. España). el uso de sistemas CASA pre- aproximadamente de 4nl (diámetro aproximado del campo senta algunos inconvenientes: microscópico: 500µm)2. dispares entre centros. Mi- matozoides en el semen. ha sido y sigue siendo la clasificación subjetiva de los esper. Sin embargo. debido a que el software puede contabilizar el aproximada de la concentración espermática de la muestra. Esta sobrestimación se produce en menor medida CASA (Computer Assisted Semen Análisis) cuanto más diluida este la muestra.. centración de la muestra como así también cuestiones vin- tico de contraste de fase positivo o negativo según el requeri. genes digitales. Promedio (%) Diferencia aceptable Salvando los inconvenientes. es obje.Software: programa informático compuesto por distintos ca inicial se realiza en una cámara cuya altura es 20µm y a módulos: movilidad. ne la ventaja de aumentar la precisión y reproducción de las Cada laboratorio utiliza un equipo diferente.80(3):29-36. Algunos equipos como el SCA® (Sperm Class Analyzer.32 Guía práctica para la evaluación del semen evaluar varios campos y promediar las observaciones. por lo cual al contar la cantidad de Se puede tender a una sobreestimación de la concentración espermatozoides presentes por campo se tendrá una idea espermática. mismo espermatozoide dos veces por las colisiones esper- máticas. Este método sin embargo. A los resultados les afectan diferentes factores como la ponentes: temperatura de la muestra. Por ello. Como se describió previamente la observación microscópi. miento de cada sistema y platina termostatizada a 37 °C. porque penetran en las célu- 12 – 16 7 las cuya membrana plasmática está dañada. 0 1 1 2 Test de vitalidad 2 3 La OMS indica que el test de vitalidad debe realizarse de for- ma rutinaria a todas las muestras y considera que es parti- 3-4 4 cularmente importante cuando la movilidad progresiva de la 5-7 5 muestra es menor de 40%. . 99 2 Esosina (se determina en fresco luego de 30 seg. culadas al suministro eléctrico que condicionan la tensión que llega al equipo. sabiendo que los resultados se- según el promedio entre ambos para intervalos de rán únicamente aplicables a muestras evaluadas con el confianza del 95% equipo en cuestión. pos y de los procedimientos utilizados en los análisis. de mez- 100 1 clar el colorante con la muestra y no se puede conservar el ByPC 2016. Los sistemas CASA están integrados por los siguientes com. 24 – 34 9 Se basa en que los colorantes no pueden atravesar una 35 – 65 10 membrana plasmática estructuralmente intacta. el CASA es el mejor sistema para un análisis preciso y rápido de una muestra de semen4. croptic S. cámara de video. lo que determina que el volumen de cada campo sea datos e informes. base de 400x. La introducción del biar las condiciones de medida y otorgar validez a las imá- análisis de semen asistido por computadora (CASA= Compu. volumen. 8 . por lo que un espermatozoide muerto será aquel cuyo 89 . morfología. 93 – 95 5 Técnicas sugeridas 96 – 97 4 Eosina-nigrosina (permite la conservación de los extendi- 98 3 dos secos para su evaluación diferida o para emplear como CCI de la determinación). y en el caso de que la membrana esté 77 – 83 8 estructuralmente dañada será atravesada por los coloran- 84 – 88 7 tes. p. se promedian los conteos. o que las células no se mezclaron Los términos “número total de espermatozoides” y “con. ya que este parámetro pro- para la evaluación de la motilidad.Se calcula el número total de espermatozoides por eya- culado. La determinación del número de espermatozoides com. Cuando la diferencia entre los recuentos es ma- centración de espermatozoides se refiere al número de es. Cell Vu. Se informa el porcentaje de Espermatozoides vivos. bien. errores de pipeteado. 7. Ésta es por lo general la muestra que se empleará permatozoides por eyaculado. (tabla ción de espermatozoides por el volumen de eyaculado.Mezclar bien el semen sin formar burbujas y cargar. centil. los testículos para producir espermatozoides y la permea. porta y cubreobjetos. El límite inferior de referencia para la concentración de es- prende los siguientes pasos: permatozoides es: 1.Luego se mezcla el semen y se preparan las diluciones producir espermatozoides y de la permeabilidad de las vías con el fijador (5g de bicarbonato de sodio (NaHCO3) + 1ml espermáticas. Por campo de 400x Dilución (semen + diluyente) 25 10 5 < 15 1:5 (1 + 4) 20 8 4 15 – 40 1:10 (1 + 9) 10 4 2 40 – 200 1:20 (1 + 19) 5 2 1 > 200 1:50 (1+49) 2 0. por lo que requerirán diferentes factores 5.Se deben contar al menos 100 espermatozoides por du. tozoides en el semen está influida por el volumen de las se. el número total de esper. Recuento espermático La diferencia esperada entre los dos recuentos indepen- Cuando el tracto masculino no tiene obstrucciones y el dientes debería ser cero. de no ser ternativas debe ser establecida comparando los resultados Tabla 2: Factores de dilución y conversión para recuento en cámara de Neubauer Factores de conversión según el número de cuadrados contados Ez. yor que la aceptable. por lo que se obtuvo una distribución no aleatoria en centración de espermatozoides” no son sinónimos. ser utilizadas. así. Diferencias mayores sugieren errores de conteo.s. un volumen exacto de semen licuado entre del 95%: 12 a 16 × 106). • 39 × 106 espermatozoides por eyaculado (quinto per- meda. indicada en la tabla 3 para la suma de recuentos obtenida. ni calcular la media de los dos los se refiere al número total de espermatozoides en todo el valores más cercanos). El número total de espermatozoides media de los tres valores.4 ByPC 2016.80(3):29-36. 100 ml). IC del 95%: 33 a 46 × 106). IC ya se explicó. El valor de referencia es ≥ 58% de espermatozoides vivos. como • 15 x 106 espermatozoides por ml (quinto percentil. Esto se obtiene multiplicando la concentra- de formol al 35% (v/v) + H2O destilada c. los recuentos son aceptados y la concentración se calcula creciones de las vesículas seminales y la próstata y no es (tabla 2). La concentración de esperma. .Se carga la cámara cuenta células (hemocitómetro) y se matozoides es: deja que los espermatozoides se asienten en la cámara hú. porciona una medida de la capacidad de los testículos para 2. tro de los siguientes 10 a 15 minutos (después de lo cual la La OMS recomienda el uso de cámaras hemocitómetro de evaporación tiene graves efectos). Por lo tanto (N1- matozoides en el eyaculado se correlaciona con el volumen N2) / debe ser <1. pero tendrán diferentes volúmenes. (No se del número de espermatozoides emitidos y del volumen de debe contar una tercera dilución de la muestra y calcular la fluido que los diluye. cámaras desechables por ejemplo plicado. La evaluación de las muestras se debe realizar den.96 con un límite de confianza testicular y por lo tanto es una medida de la capacidad de del 95%. la cámara.Se comparan los recuentos replicados para ver si son para el cálculo. se preparan nuevas diluciones. La con. Makler. cargando dos cámaras.Se calcula la concentración de espermatozoides por ml. como de células. se deben desechar los dos valores. El límite inferior de referencia para el número total de esper- 3. 6. patrones de rejilla. una medida específica de la función testicular. La validez de estas cámaras de recuento al- aceptables y si es así. Se cuentan únicamente es. 2).8 0. para determinar la dilución adecuada Se recomienda calcular e informar el número total de es- a realizar. cuadrada de la suma de los dos recuentos. 100 µm de profundidad. sin embargo otras cámaras pueden 4. con un error estándar igual a la raíz tiempo de abstinencia es corto. eyaculado y se obtiene multiplicando la concentración de Esto se aplica tanto a los recuentos de espermatozoides espermatozoides por el volumen de semen. y permatozoides por unidad volumen de semen y es función preparar y evaluar dos diluciones frescas de semen. Guía práctica para la evaluación del semen 33 preparado). profundidad y permatozoides enteros (con cabeza y cola). Si la diferencia entre los recuentos es menor que o igual a la bilidad de las vías del tracto. Para reducir estos errores atribuibles al méto. resultados. tentes y reales. por lo que la sugerencia es se- El procedimiento para evaluar la morfología espermática es guir un entrenamiento continuo.328 35 563 . Actualmente la implementación de estos métodos. posee Tabla 3: Diferencias aceptables entre duplicados de contajes correspondientes a la suma entre los mismos Diferencia Diferencia Diferencia Suma Suma Suma aceptable aceptable aceptable 35-40 12 144 – 156 24 329 – 346 36 41-47 13 157 – 169 25 347 – 366 37 48-54 14 170 – 182 26 367 – 385 38 55-62 15 183 – 196 27 386 – 406 39 63-70 16 197 – 211 28 407 – 426 40 71-79 17 212 – 226 29 427 – 448 41 80-89 18 227 – 242 30 449 – 470 42 90-98 19 243 – 258 31 471 – 492 43 99-109 20 259 – 274 32 493 – 515 44 110-120 21 275 – 292 33 516 – 538 45 121-131 22 293 – 309 34 539 – 562 46 132-143 23 310 . no han dado resultados favorables. res seleccionados naturalmente en el moco cervical. mejorar el valor predictivo del parámetro. tozoide según su movilidad y morfología al mismo tiempo. tán limitadas por el sistema de medida y por la destreza del El desarrollo de métodos objetivos para la evaluación de la observador. Es importante seguir las instrucciones ya que un volumen El método microscópico subjetivo tiene grandes variaciones de muestra mayor produciría una extensión con los esper- entre laboratorios e incluso intra y entre técnicos de un mis. de la movilidad. para evitar de ese modo cambios en la es- La clasificación de normalidad de la OMS se basa en consi. utilizar criterios universales e introducir controles observación en fresco y en simultáneo con la determinación de calidad internos y externos. 4- Secar la muestra al aire Morfología espermática 5- Fijar El estudio clásico de morfología espermática se caracteriza 6- Colorear (Técnicas de coloración recomendadas: Papa- por la utilización de espermatozoides fijados y coloreados. inter-operador y entre-laboratorios5. morfología espermática constituye la mayor promesa para do de valoración visual.6. matozoides menos dispersos dificultando la visualización mo laboratorio. tructura del espermatozoide provocados por la metodología derar un espermatozoide normal al integrante de una sub. . debido a que la veracidad y la precisión es. ción Externa. mersión con objetivo 100x. 7- Evaluación de la morfología espermática por duplicado ticas cinéticas de los espermatozoides clasificados como (% de formas normales) con microscopio óptico con in- normales o anormales. Si bien los manuales de estandari.34 Guía práctica para la evaluación del semen obtenidos con los de la cámara de Neubauer mejorada y a Si la muestra tiene baja concentración se debe: través de un Control de Calidad Externo periódico evaluar 1- Centrifugar a 600g durante 10 mínutos. 3- Extender la gota suavemente con otro portaobjetos. nicolaou o Diff-Quick) lo que tiene como limitación no poder definir las caracterís. mantener un adecuado coeficiente de varia- 2- Depositar de 5-10μl de muestra bien homogenizada en ción intra. y mediante el control de el siguiente: calidad interno del laboratorio y los Programas de Evalua- 1- Se debe realizar por duplicado.. la experiencia del observador es forma el promedio de los porcentajes. zación definen cuali y cuantitativamente los parámetros de 8- Si los porcentajes son promediables (ver tabla 1) se in- una célula espermática. Células no espermatozoides: El eyaculado además de poseer espermatozoides.587 47 Manual OMS 2010. siendo el ideal la mientos. 3- Se hace la extensión de la manera antes descripta. se deben estandarizar los procedi.80(3):29-36. sumado a la calidad de preparación de los El valor de referencia es ≥ 4% (formas normales) extendidos espermáticos y la tinción de los mismos. y posibilitar así la clasificación de cada esperma- población de espermatozoides potencialmente fertilizado. empleada. otras dos evaluaciones. el extremo del portaobjetos. el desempeño para asegurar la fiabilidad y exactitud de los 2- Posteriormente re suspender el pellet. ByPC 2016. de todas las partes del espermatozoide. sino se realizan extremadamente importante para dar resultados consis. siendo en muchos casos causa de astenozoos- za el recuento espermático en cámara pero empleando una permia. 3.pdf Factor inmunológico: 2. ne a nivel seminal. en como se estima la concentración espermática. pueda controlarse ya sea por la existen. glóbulos rojos (GR) o partículas -25 ml de etanol 96% de látex cubiertas con anticuerpos incompletos. generalmente relacionadas a fenómenos que clínica7. pacientes con varicocele. tencia de anticuerpos anti espermáticos puede hallarse en nesis. Solución de trabajo Es importante remarcar que este test también puede ser . líquido folicular. 5 minutos a temperatura ambiente. Su con. Adherir a estandarizaciones internacionales. . la incidencia del factor inmunológico en infertilidad de su concentración. en la que de manera sencilla impreciso y dificultoso de realizar que el recuento en cáma pueden detectarse anticuerpos (Ac) anti-espermáticos del tipo IgG sobre la superficie espermática. en casos de infertilidad idiopática. en el H2O2 al 3% (dura preparada 30 días) caso de haber Ac anti-espermáticos presentes o solo de GR Solución C: de no haber Ac. plasma seminal y moco cervical pre-incu- bando el fluido a investigar con semen sin anticuerpos anti- Técnica espermáticos. la técnica conocida como Mar Test (Mixed ca. dilución apropiada (en general menor) según la estimación Si bien. matozoides. cado por estos programas para morfología y movilidad Pese a lo anteriormente descripto.Contar en el retículo de rojos los 25 cuadraditos. La técnica directa Técnica de peroxidasa para leucocitos polimorfonucleares utiliza semen fresco del paciente. El Manual n x 4 x 10. sin embargo en la experiencia este método resultó más Antiglobulin Reaction Test). la exis- rinario. res sistemáticos8. determinar el CV intra e interoperador del mente antigénicas en el plasma seminal y la célula esper. y/o también con ayuda de la determinación de la enzima Estos anticuerpos pueden producir fenómenos de autoaglu- peroxidasa presente en los neutrófilos en fresco. tor inmune como responsable de alteraciones seminales. en aquellos con antecedentes de El manual de la OMS propone que las concentraciones de los infección del tracto reproductivo masculino y previo a técni- distintos tipos celulares pueden ser indirectamente cuanti. nidad seminal. involucren la ruptura de la barrera hematotesticular. que debe tener una con- en semen centración mínima de espermatozoides y un % de formas Solución A: móviles mínimo del 10%. que serán mixtos (GR-Ez). re-evaluación. Adherir a Programas de Evaluación Externa de la Calidad cia de la barrera hematotesticular. -En tubo de Khan: 40 μl de solución de trabajo + 20 μl de PBS El valor de referencia es: < 50 % de espermatozoides unidos (C) a temperatura ambiente + 20 μl de semen entero. progresiva rápida. cas de fertilización asistida. laboratorio e implementar el uso de cartas de control de mática. como así también. formaran aglutinados. Dejar a glóbulos rojos o partículas. 1. tinación. determinando la tasa entre espermatozoides y cé. Se cuentan como positivos los espermato- Buffer PBS (pH: 7) zoides móviles unidos a GR. Estas células llamadas en general “células redondas” el screening básico seminal propuesto en la evaluación ini- pueden ser identificadas en el frotis teñido de la muestra cial del varón infértil.int/publica- tions/2010/9789241547789_eng. es importante descartar al fac- ficados. todo esto ampliamente descripto en la literatura. Esto incluye células epiteliales del tracto genitou.Cargar la cámara de Neubauer Recomendaciones: . en determinadas cir. realizada en fresco del mismo modo no supera el 10 %. como así también de inmovilización de los esper- centración se determina de la misma forma en que se reali. -25 ml de agua destilada que mezclados con los Ez sin lavar y con el agregado de anti -0. Sugerimos Se conoce desde mucho tiempo atrás. Implementar Controles de Calidad Internos.000 = peroxidasa (+) / ml de semen OMS (2010) 5ª edición puede descargarse en forma 10000= factor de la cámara para llevar a ml gratuita de internet: http://whqlibdoc.4 ml de(A) + 50 μl de H2O2 (B).who. evidenciaron la necesidad de estan- ByPC 2016. leucocitos y células inmaduras de la espermatogé. por nacionales y/o internacionales para evaluar el desem- la presencia de sustancias inmunosupresoras tanto en la peño de los analitos9. . las “Medias Mensuales” de los parámetros del semen El organismo afortunadamente dispone de mecanismos (descripto en el Manual de la OMS) para determinar erro- que contribuyen a que la aparición del fenómeno autoinmu. de uso.0625 g de bencidina inmunoglobulina humana (anti-IgG cadena gamma) en ex- Solución B: ceso. lulas redondas que se encuentren en el frotis teñido y luego Se sugiere como screening para la evaluación de autoinmu- correlacionando esta tasa con la concentración espermáti. El elevado Error de Medida publi- gameta masculina como en el plasma seminal. la antigenicidad del tener un set de extendidos y realizar periódicamente su semen como fluido y la presencia de sustancias potencial. Guía práctica para la evaluación del semen 35 otros elementos y células que pueden tener importancia cunstancias. prepararla en el momento realizado en forma indirecta (método indirecto) en suero.80(3):29-36. isotipo IgG. Mendeluk GR. Chenlo P. 2008. 2009. Blanco. Toro-Montoya Al. Ariagno JI. Curi SM. Repetto HE. 2004. Ariagno JI. 5. Estudio del semen humano: im- plementación de un método objetivo. Laboratorio de fertilidad mas- culina: Criterios de evaluación de la morfología espermá- tica. ByPC 2016. 8. Latinoam. Curi. Acta Bioquím. vol. 2002.. World Health Organiza- tion. FABA INFORMA 420. y así constituirse en un recurso para el control interno (filmaciones. 7. Grinspon. Arch Androl. Blanco A.. Ariagno J... Curi S. 15: 145-169. 2009 6. Pugliese. El material apor- tado por los Controles Externos pueden ser reevaluados periódicamente. Shedding of immature germ cells. Mendeluk. Repetto HE.ar/fabainforma/420/FBA02. A. N. Curi SM. M. Archives of Andrology Vol48 (2): 155-159. Blanco AM. Control de calidad en el Laboratorio Andrológico. Palaoro LA. Pugliese N. http:// www. 50(6):417-25. Control de calidad externo en el estudio del semen.org. Chenlo PH.faba. 2. P. no informar “movilidad progresiva rápida” por el método subjetivo. Pugliese MN. Mendeluk GR. Re- petto H. Asian J Androl. Our experience in sperm morphology assessment. G. Pugliese MN. Sardi LM.. Repetto HE. Individual variation in semen parame- ters of healthy young volunteers. Chenlo PH. Por este motivo la OMS recomienda. Referencias bibliográficas 1. Ariagno JI.ar/fabainforma/442/FBA02. 2011. Curi S M. Sardi M. Oshio S. H. PEEC- Laboratorio del Semen. Clín.A. a partir de su último manual. Ariagno. 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