UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ - UFPI CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – CCS DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E FARMACOLOGIA DISCIPLINA: BIOQUÍMICA PARA FARMÁCIAPROFESSORA: MARIA DAS GRAÇAS CASTELO BRANCO SOARES RELATÓRIO DA PRÁTICA DE BIOQUÍMICA REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DOS GLICÍDIOS COMPONENTES: FELIPE CARDOSO 09S14272 PLÍNIO REIS 09S14400 MARCOS VENÍCIO 09S142370 AMADEUS NETO 09S14213 MATEUS A. C. DE CARVALHO 09S14388 TERESINA, MARÇO DE 2010 Os resultados obtidos denotam as diversas propriedades químicas dos açúcares. .RESUMO Nos experimentos desenvolvidos. tais como. reação como iodo e levando em consideração os carboidratos redutores. reagente de Molish. foram postas em evidência a partir de reações de caracterização desses compostos. Utilizou.se reagentes para identificação de glicídios. foi utilizado o reativo de Benedict para identificá-los A reação de Seliwanoff foi aplicada para diferenciação entre aldoses e cetoses e finalmente realizou-se a hidrólise de dissacarídeos e polissacarídeos com ácido sulfúrico à quente. as características dos carboidratos. reação de Seliwanoff. . Os monossacarídios. mas eles diferem entre si no tipo de ligação glicosídica e consequentimente têm propriedades e funções biológicas diferentes” (LEHNINGER. enquanto outros. formados por duas unidades de monossacarídios. como a celulose. e hidrólise do amido). têm cadeias lineares. Alguns. hidrólise da sacarose. “Os polissacarídios são polímeros que contém mais de unidades de monossacarídios e podem ter cadeias contendo centenas ou milhares de unidades monossacarídicas. os glicídios estão divididos em três classes principais. Eles são as biomoléculas mais abundantes na face da Terra. a D-glicose. ou resíduos. Ela é composta por dois monossacarídios. e comparar os dados adquiridos no experimento com os da literatura. Os mais abundantes são os dissacarídios. reação de Benedict. “Os oligossacarídios são compostos por cadeias curtas de unidades monossacarídicas. ou açúcares simples. oligossacarídios e polissacarídios. consistem de uma única unidade de poliidroxialdeído ou poliidroxicetona. D-glicose e D-frutose” (LEHNINGER. de acordo com o seu tamanho: monossacarídios. reação de iodo. A sacarose ou açúcar de cana é o representante típico desta classe. como o glicogênio. têm cadeias ramificadas. O monossacarídio mais abundante na natureza é o açúcar com seis átomos de carbono na molécula. também chamada de dextrose. unidos entre si por ligações características. chamadas ligações glicosídicas. O presente trabalho tem por objetivo demonstrar as reações de caracterização de glicídios (tais como teste de Molisch. 2006). Glicogênio e celulose consistem de unidades repetitivas de D-glicose. 2006).INTRODUÇÃO Os carboidratos são poliidroxialdeídos ou poliidroxicetonas ou substâncias que liberam estes compostos por hidrólise. Segundo LEHNINGER (2006). mas posteriormente fez-se o uso do reagente de Lugol. Neste experimento usou-se dois tubos de ensaio. 5 gotas de água destilada. B. Colocou-se em cada tubo 2 gotas de reagente de Molish. No segundo experimento para a verificação de carboidratos foi feita a reação com iodo utilizando os mesmos compostos e medidas da primeira etapa. B. C e D. C e D cada um contendo respectivamente 1 ml de água destilada. 1 ml de frutose 1 % e 1 ml de solução de amido. Neste experimento foram observados quais açúcares são redutores a partir da mudança de coloração da solução. em cada vidraria foi adicionado 1 ml do reativo de Benedict aquecendo posteriormente em banho-maria por 3 minutos. 5 gotas de solução de frutose 1%. em seguida foi adicionado respectivamente em cada tubo de ensaio. Na segunda etapa foi empregado o reagente de Benedict para identificar açúcares redutores. Na terceira etapa fez-se uso do reagente de Seliwanoff para a diferenciação entre aldoses e cetoses. cada uma contendo 3 ml deste reativo. Neste procedimento foram utilizadas as mesmas vidrarias das práticas anteriores. misturando duas gotas do reagente em cada tubo de ensaio e observou-se a reação. A e . No teste de Molish foram utilizados quatro tubos de ensaio (A. 1 ml de solução de sacarose 1%.agitou-se bem e adicionou-se cuidadosamente 1 ml de ácido sulfúrico concentrado sem agitação. nomeadas A. 1ml de solução de amido 1%. Na quarta etapa da prática foi realizada a hidrólise de dissacarídeos e polissacarídeos.METODOLOGIA Na primeira etapa da prática realizou-se a identificação de glicídeos. 1ml de solução de glicose 1%. e em seguida aqueceu-se ligeiramente em banho-maria o tubo D até mudar a coloração. Preparou-se quatro tubos de ensaio nomeados A. C e D) contendo respectivamente 1 ml de água destilada. Inicialmente foi hidrolisada a sacarose. As misturas foram colocadas em banho-maria e observadas a cada 3 minutos durante 10 minutos. posteriormente o tubo foi resfriado em água corrente observando o retorno da coloração inicial. B. 1 ml de solução de glicose 1%. em 30 minutos foi retirado o tubo G onde adicionou-se 3 ml do reativo de Benedict e retornou-o ao banhomaria por mais 3 minutos. submetendo as vidrarias ao banhomaria por 3 minutos e em seguida adicionou-se a cada tubo 3 ml do reativo de Benedict e foi recolocado no banho-maria.e 25 minutos os tubos contendo os compostos. nomeadas de A a G. os tubos restantes foram colocados em banho-maria. contendo cada um 2 ml de sacarose 1%.10.20. No tubo A foi adicionado uma gota do reativo de Lugol.B. adicionou-se a 7 tubos de ensaio. após 3 minutos foram retirados e colhidos os resultados. a contar do B. 3ml da mistura acima.15. colocou-se respectivamente nos tubos 3 gotas de acido sulfúrico concentrado e 3 gotas de água destilada. amilodextrina eritrodextrina.Neste último experimento foi identificada a presença de amido. Os tubos de ensaio foram retiradas do banho-maria. acrodextrina e glicose na hidrólise do amido . respectivamente em 5. Na hidrólise de amido utilizou-se um erlenmeyer contendo 30 ml de solução de amido a 1 % e 6 ml de acido clorídrico. DISCUSSÃO Identificação de Glicídios A reação de Molish é utilizada para pesquisa de carboidratos em geral. enquanto a amilopectina dá origem a uma coloração vermelho-violácea. em água corrente. A reação de Iodo é utilizada para a pesquisa do amido. de coloração violeta. No tubo A não houve reação. respectivamente. Nos tubos A. que forma um complexo colorido com o iodo. respectivamente não se observou formação de coloração diferente da amarela. característica do Lugol (mono e dissacarídeos não produzem coloração com iodo). pois continha apenas água destilada. ocorrendo a formação de um anel. O tubo B contendo Glicose garantiu menor coloração devido à formação de uma quantidade menor de compostos que reagem com o α-naftol. devido a presença de carboidratos diferentes nesses tubos. na interface dos líquidos contidos nos tubos B. observou-se que o amido recuperou a propriedade de interagir com o iodo formando novamente um complexo de cor roxo. produto de uma interação entre a coloração indicativa da presença de amilose e de amilopectina. fato ocorrido devido à desnaturação reversível do amido tornando a interação do iodo com o polissacarídio é nula. Após o resfriamento da solução. glicose e sacarose. . respectivamente. especificamente o amido. B e C que continham água destilada. No tubo D que continha Amido se constatou formação de um complexo de cor roxo. O mecanismo da reação baseia-se na formação de furfural e hidroximetil-furfural pela ação de um ácido forte sobre uma pentose e hexose. Com o aquecimento do tubo D o líquido contido no tudo se tornou incolor. Os compostos furfúricos reagem com o α-naftol formando um produto de condensação colorido. C e D em ordem de intensidade crescente. O reagente de Lugol no qual contêm Iodo fora utilizado na reação de identificação de glicídios. a sacarose possuiu coloração mediana e o amido coloração mais intensa devida o motivo contrário a glicose. Foi pipetado o reagente de Molish em quatro tubos. a amilose dá origem a uma coloração negro-azulada. C e D devido à presença de Glicídios redutores sendo. No tubo A contendo água destilada não ocorre reação. que é uma cetose. Nos tubos B. Diferenciação entre aldoses e cetoses O reagente de Seliwanoff contém resorcinol diluído na presença de HCl. que é um dissacarídeo composto por glicose e frutose. No tubo C contendo Glicose. que sobre ação desidratante do acido clorídrico são transformadas em derivados de furfural. e pode ser preparado através do carbonato de sódio. mas é muito estável: uma solução aquosa de sacarose se mantém estável durante vários anos. obtemos coloração vermelha característica da reação. tendo os átomos de carbono C1 da glicose e C2 da frutose participando na ligação glicosídica. Hidrólise de Di e Polissacarídeos Hidrólise da sacarose A sacarose é composta por uma molécula de α-D-glicose e uma de β-D-frutose. No tubo B contendo frutose. que é uma aldose. basicamente. A ligação glicosídica pode ser hidrolisada. a sacarose não pode formar polímeros. Esses glicídios reduzem o Cu++ em meio alcalino. citrato de sódio e sulfato cúprico. . No tubo D contendo sacarose. pois ambos os grupos químicos de natureza redutora dos monômeros que a constitui participam na ligação glicosídica. A sacarose é um açúcar não redutor. de uma solução de sulfato cúprico em meio alcalino (com muitos íons OH-). a quente. O seu nome sistemático é α-D-glucopiranosil-(1→2)-β-D-fructofuranose (abreviado Glc(α1→2β)Fru). se obtêm coloração laranja que fica mais intenso com o passar do aquecimento da reação. que se condensam com o resorcinol formando com as aldoses coloração laranja mais lentamente e as cetoses mais rapidamente.Identificação de Glicídios Redutores Na identificação de Glicídios que possuem grupamento glicosídico livre (hidroxila anomérica livre) é utilizado amplamente o reativo de Benedict [Cu (OH)2] que consiste. respectivamente glicose. Essa reação é utilizada para diferenciar aldoses de cetoses. na reação forma 5-hidroximetil-furfural e água com coloração transparente. à quente. No tubo A contendo água destilada não ocorre reação ficando transparente. frutose e amido. por isso apresenta uma coloração Azul característica do próprio reativo. ocorre formação de coloração laranja que fica visualmente constante com o passar do aquecimento da reação. Assim. O reagente de Lugol é usado posteriormente para classificar os tipos de dextrinas extraídas da reação. á quente de onde foram extraídas dextrinas (amilo. amilose e amilopectina.3.4 da amilopectina. eritro e acrodextrinas). polímeros de glicose formados através de síntese por desidratação (a cada ligação de duas glicoses. através das reações coloridas especificas que ocorrem na presença de iodo. Na reação de hidrólise do amido foi inicialmente reagido o amido com o ácido clorídrico. produzindo também glicose e frutose.4. mas com coloração vermelho tijolo mais intenso devido à menor quebra da sacarose. no caso. maltose e glicose como produto final. No tubo B foi reagida água destilada com a sacarose. Hidrólise do amido O amido é uma mistura de dois polissacarídeos.3. . há a "liberação" de uma molécula de água). como representado a seguir: amido amilodextrina eritrodextrina acrodextrina + lugol + lugol + lugol + lugol cor azul cor roxa cor vermelha incolor A partir das reações com Lugol com aquecimento constante à 100oC com observações em períodos de tempos regulados foram identificados os seguintes resultados: Com a colocação do reativo de Benedict devido a presença de maltose que é redutor ocorre a reação formando a coloração vermelho tijolo.6-tetra-O-metil-D-frutose) produzindo glicose e frutose que conferiu coloração vermelho tijolo ao composto.4.6-tetra-O-metil-D-glicose e 1.No tubo A foi reagido sacarose com ácido sulfúrico concentrado ocorrendo a hidrolise ácida (A hidrólise ácida da sacarose octometilada fornece 2. A sacarose por não ser açúcar redutor não reage com o reativo de Benedict em nenhum dos tubos. As dextrinas são obtidas a partir do rompimento ácido das ligações α-1. . CONTEÚDO DOS TUBOS DE ENSAIO COR APÓS REAÇÃO COM O IODO A.RESULTADOS TABELA 1.1 ML SOLUÇÃO DE SACAROSE AMARELO (nenhuma reação observada) 1% DE.1 ML SOLUÇÃO DE AMIDO 1% AMBIENTE AQUECIMENTO RESFRIAMENTO ROXO AMARELOESVERDEADO ROXO .0: REGISTRO DOS SINAIS OBSERVADOS NA INTERFACE DAS SOLUÇÕES APÓS A REAÇÃO COM REAGENTE DE MOLISH CONTEÚDO DOS TUBOS DE COR COM O REAGENTE DE MOLISH ENSAIO (FORMAÇÃO DO ANEL) A.1 ML SOLUÇÃO DE GLICOSE 1% AMARELO (nenhuma reação observada) C.1 ML SOLUÇÃO DE VIOLETA SACAROSE 1% D.1 ML SOLUÇÃO DE AMIDO VIOLETA 1% TABELA 2.0: REGISTRO DOS SINAIS OBSERVADOS NAS SOLUÇÕES APÓS A REAÇÃO COM IODO.1 ML SOLUÇÃO DE VIOLETA GLICOSE 1% C.1 ML ÁGUA DESTILADA LARANJA CLARO (cor do reagente) B.1 ML ÁGUA DESTLADA AMARELO (nenhuma reação observada) B. . 1 ML SOLUÇÃO DE 3’ FRUTOSE 1% D.1 ML ÁGUA DESTILADA 3’ B.TABELA 3. CONTEÚDO DOS TUBOS DE TEMPO DE COR OBSERVADA AZUL VERMELHO TIJOLO VERMELHO TIJOLO VERMELHO TIJOLO(menos intensa) ENSAIO AQUECIMENTO A.0: REGISTRO DA OCORRÊNCIA DE REAÇÕES DE IDENTIFICAÇÃO DE GLICÍDIOS REDUTORES.1 ML SOLUÇÃO DE AMIDO 3’ 1% .1 ML SOLUÇÃO DE 3’ GLICOSE 1% C. 3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE SOLUÇÃO + 5 GOTAS + 5 GOTAS + 5 GOTAS VERMELHO VERMELHO INTENSO VERMELHO VERMELHO INTENSO VERMELHO VERMELHO INTENSO .3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE SOLUÇÃO DE GLICOSE 1% D.3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE FRUTOSE 1% C.TABELA 4.0: REGISTRO DE OCORRÊNCIA DE REÇÕES DE DIFERENCIAÇÃO ENTRE ALDOSES E CETOSES CONTEÚDO DOS TUBOS 6 MINUTOS INCOLOR 9 MINUTOS INCOLOR COR COM REAGENTE DE SELIWANOFF 3 MINUTOS ENSAIO A.3 ML DE INCOLOR SELIWAN OFF + 5 GOTAS DE ÁGUA DESTILAD A B. 0: REGISTRO DA OCORRÊNCIA DE HIDRÓLISE DA SACAROSE CONTEÚDOS TUBOS DE ENSAIO 1% + 3 GOTAS DE ÁCIDO SULFÚRICO COCENTRADO B.AMARELO AMARELO BEM CLARO IDENTIFICADO AMIDO AMILODEXTRINA AMILODEXTRINA ERITRODEXTRINA ERITRODEXTRINA ERITRODEXTRINA E ACRODEXTRINA ACRODEXTRINA E REAÇÃO (MIN) 0 5 10 15 20 25 .DE SACAROS E 1% TABELA 5.2 ML DE SACAROSE VERMELHO TIJOLO TABELA 6.2 ML DE SACAROSE AZUL 1% + 3 GOTAS DE ÁGUA DESTILADA DOS COR DA SOLUÇÃO APÓS 3 MINUTOS EM BANHOMARIA + 3 ML DO REATIVO DE BENEDICT A.AVERMELHADO VERMELHO VERMELHO .0: REGISTRO DE OCORRÊNCIA DE HIDRÓLISE DO AMIDO TUBO A B C D E F TEMPO DE COR COM O REATIVO PRODUTO DE LUGOL AZUL ROXO ROXO . ERITRODEXTRINA COR COM O REATIVO DE BENEDICT G 30 VERMELHO TIJOLO FONTE: Laboratório de Bioquímica da UFPI.2. Alunos de Farmácia. . Teresina. 2010. identificação evidenciada a partir da interação dos produtos de hidrólise destes açúcares com o reagente de Benedict gerando cores características. o iodo foi utilizado para identificar amido. porém na identificação dos produtos da hidrólise da sacarose e do amido. Dentre estes reativos que reagem com carboidratados específicos. . puderam ser identificadas algumas características químicas dos carboidratos através de testes inespecíficos como o de Molish e por meio de reagentes que interagem com glicídios específicos. Já para a caracterização de glicídios redutores e diferenciação entre aldoses e cetoses fora usados. respectivamente. O reagente de Benedict foi novamente empregado. reativo de Benedict e reagente de Seliwanoff.CONCLUSÃO Diante dos aspectos aferidos nos experimentos. 236. São Paulo: Sarvier.wikipedia.wikibooks.org/wiki/Reagente_de_Benedict Acessado em 28/03/2010 às 8:40 http://pt. Princípios de bioquímica.p. 2006.. COX.REFERÊNCIAS NELSON. Michael M. http://pt.org/wiki/Bioquimica/Oligossacarideos Acessado em 28/03/2010 às 8:56 . David L. 4ª ed.