GUÍA No 9: ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS I. EL PROBLEMA El carácter único de cada α aminoácido se debe a la estructura del grupo R.En los polipéptidos los grupos R de los aminoácidos a menudo se denominan cadenas laterales y pueden variar desde un átomo de hidrógeno, hasta estructuras complejas como el grupo guanidina, el propósito de esta práctica es identificar algunos aminoácidos que presentan grupos característicos en las cadenas laterales utilizando ensayos cualitativos y específicos para cada función. II. FUNDAMENTO TEÓRICO Los aminoácidos tienen un papel primordial en la formación de los seres vivos, puesto que constituyen los bloques fundamentales con que se forman las proteínas.. Entre las principales reacciones de identificación de los aminoácidos se encuentran las siguientes: A. Reacción con la ninhidrina El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas. (caracteriza a todos los aminoácidos) Fundamento: Todas las aminas primarias (y por lo tanto también los alfa-aminoácidos) reaccionan con la ninhidrina en presencia de calor dando dióxido de carbono, amoniaco y un aldehído que contiene un El amoniaco reacciona con otra molécula de ninhidrina formando un compuesto azul violáceo denominado púrpura de Ruhemmans. B. Reacción de Millón El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales de Mercurio a pH ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina y las proteínas que la contienen. (caracterización del aminoácido tirosina) Fundamento: Los compuestos mercúricos en medio fuertemente nítrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo fenólico del aminoácido tirosina, formando complejos de color rojizo. Los compuestos mercúricos en medio fuertemente nítrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo fenólico del aminoácido tirosina, formando complejos de color rojizo. El precipitado se torno blanco lechoso y se separo la parte blanca que dando bajo del tubo y arriba de el reactivo de Millon. C. Reacción Xantoprotéica Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptófano. (caracterización de aminoácidos aromáticos) Fundamento: Se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido picrámico o trinitrofenol) Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. En el caso de esta reacción nuestro tubo arrojo un precipitado blanco con grumos. D. Reacción de Sakaguchi El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos. (caracterización del aminoácido arginina) Fundamento: El grupo guanidino del aminoácido arginina se condensa con el alfa-naftol del reactivo, y luego forma un complejo coloreado con el hipoclorito de sodio. E. Reacción de Ehrlich La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de Sodio por formación de sales de 1 1 Gradilla para tubo de ensayo 1 Pinza metálica para tubo de ensayo 1 Placa refractaria 1 Aro con nuez Material general Soportes Para prevenir la contaminación de los reactivos: las soluciones que no estén en frasco gotero deben tener una pipeta exclusiva y el monitor debe estar pendiente. 1 Vasos de precipitados de 600 ml. 20 ml de Acetato de plomo 10%.5%. dejar enfriar y completar a 60 ml con agua 5 ml de Reactivo de sakaguchi: cuidadosamente disolver 2 g. puesto que forma complejos de coloración violeta o amarillo violeta. Para cada aminoácido señale la cadena lateral o el grupo R e identifique las funciones presentes. calentar suavemente. De ácido nítrico concentrado. 10 ml de Hidróxido de amonio 10% 20 ml de Ácido clorhídrico 2%. 2 Pipetas graduadas de 5 ml. 20 ml de Hidróxido de sodio 10 %. 10 ml de Ácido sulfanílico 0. albúmina. 10 ml de Nitrito de sodio 0. III. Reacción de Hopkins Cole El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-aminoácidos libres o haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con el ácido glioxílico a pH ácido. El agregado de una pequeña cantidad de ácido sulfúrico concentrado puro.1% en agua acidulada de los siguientes aminoácidos Cisteína ó metionina. 50 ml de Alfa-naftol 0. Defina proteínas Estudie que aminoácidos están presentes en las siguientes proteínas1: Colágeno. aumenta la sensibilidad de la reacción G. apolares. nombres y abreviaturas para los veinte aminoácidos que son usados en la biosíntesis de proteínas. Cisteina y Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino. de nilhidrina en 10 ml. Fenil-alanina. si el curso es de 8 grupos se requieren máximo 80 ml de ninhidrina. que las pipetas no sean intercambiadas durante al práctica.5% (fresco). formando compuestos coloreados.disolver 1 g de mercurio en 1 ml. TEMAS DE CONSULTA El preinforme debe contener los siguientes aspectos: Investigar la clasificación de los aminoácidos desde los siguientes puntos de vista: Esenciales y no esenciales para el hombre. MATERIALES Y REACTIVOS Las soluciones están propuestas para cada grupo de trabajo en el laboratorio. Reactivos por cada grupo de trabajo: 10 ml de Ácido sulfúrico concentrado 12 ml de Ácido nítrico concentrado 10 ml de Ácido acético concentrado Se requiere la preparación de los siguientes reactivos: 10 ml de Reactivo de ninhidrina : disolver 100 mg. por ejemplo 10 ml de ninhidrina para un grupo.5% en HCl. Reacción con acetato de Plomo alcalino Los Aminoácidos azufrados como Metionina. De bromo en 100 ml.15%. F. Prolina. ácidos y básicos en forma molecular. polares con carga y sin carga. de etanol a 95% y completar a 100 ml con agua destilada 10 ml de Reactivo de millon:. (caracterización del aminoácido triptófano) Fundamento: El grupo indol del aminoácido triptófano se condensa con el ácido glioxílico del reactivo. Glutamina ó asparragina. permitiendo así identificar al triptófano. 2 . 2 Vasos de precipitados de 250 ml. 2 Pipetas graduadas de 2 ml.Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptidos y proteínas. Tirosina. 20 ml de Sulfato de cobre 0. 15 ml de Soluciones al 0. 1 Embudo ordinario 1 Erlenmeyer de 125 ml. De NaOH al 5% 10 ml de Reactivo de Hopkins cole: ácido acético impurificado con trazas de ácido glioxílico Soluciones 30 ml de Hidróxido de sodio 40%. Materiales 15 Tubos de ensayo 2 Pipetas graduadas de 1 ml. Lisina ú ornitina. IV. Estudiar las estructuras. Caliente en baño de agua a ebullición. E. de la solución correspondiente.5 mL. de NaOH 40%. Mathews Van Holde . problema. albúmina de huevo y harina de trigo. caliente en baño de agua a ebullición por 10 min. Caliente en baño de agua a ebullición por 5 min. del reactivo de Hopkins Cole.5 mL. 2 mL. Reacción de Sakaguchi Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco. De Nitrito de sodio. Reacción de Ehlrich En 5 tubos de ensayo rotulados como: blanco. A cada uno de ellos agregue 2 mL. Observe y anote los resultados. Ensayo con ninhidrina Rotule cinco tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco. G. la aparición de una coloración amarilla es una prueba positiva para aminoácidos aromáticos. Histidina. y luego adicione 1 mL. A cada uno de los tubos de ensayo agregue 1 mL. enfríe en baño de hielo por 10 min. La formación de un precipitado gris oscuro o negro es prueba positiva para aminoácidos azufrados. de las soluciones correspondientes. deje enfriar 10 min.. PROCEDIMIENTO A. Reacción de Hopkins Cole Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco. de harina de trigo en 100 ml. de ácido sulfúrico concentrado. la aparición de un color rosado o rojo es prueba positiva para el grupo guanidinio. sin mezclar 1 mL. BIBLIOGRAFÍA BOHINSKI. F. De la solución correspondiente al rótulo. Triptófano. Adicione a cada tubo 1 mL. Pearson. de la solución correspondiente y 2 mL. Reacción con acetato de Plomo alcalino Rotule 6 tubos de ensayo como: blanco. Química orgánica. VIII. de α-naftoly 3 gotas de Reactivo de Sakaguchi.5% y 1 mL. problema. metionina. Agregue a cada uno 5 mL. México 3 . fenil-alanina. de reactivo de Ninhidrina. Albúmina de huevo: separar la clara de un huevo y diluir en relación 1: 10 con agua destilada Harina de trigo: dispersar 10 g. de la solución correspondiente y 2 mL. Alanina. México. de NH4OH 10%. albúmina de huevo. mezcle bien y deje en reposo durante 15 min. Mezcle y adicione a cada tubo 0. de la solución correspondiente y 1 mL. Adicione a cada uno 2 mL. C. 2004 Bioquímica.Arginina. observe los colores desarrollados y anote los resultados. proteína de trigo. de acetato de Plomo al 10%. 3 Ed Pearson. triptófano. B. Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL de ácido sulfanilico 0. En cada uno agregue 2 mL. cisterna. albúmina de huevo y proteína de trigo. de NaOH 40%. triptófano. Ensayo de Millon Rotule 6 tubos de ensayo identificados cada uno como: blanco.5 mL. albúmina de huevo. albúmina de huevo y proteína de trigo. problema. problema. de ácido nítrico concentrado. de agua caliente y filtrar a través de gasa doble V. problema. y proteína de trigo. alanina. Deje enfriar y agregue a cada tubo de ensayo 1. tirosina. arginina. Interamericana. la formación de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para el triptófano. 2002. 5ed. de NaOH 10% y 0. el cambio de color a anaranjado confirma la prueba. de reactivo de Millon. más y luego agregue 5 mL. luego a cada tubo agregue 1 mL. problema. 1991 Bioquímica. Observe los colores desarrollados y anote los resultados. Mezcle bien el contenido y adicione a cada tubo por las paredes lenta y cuidadosamente. España Fesenden and fesenden. Caliente en baño de agua en ebullición por 10 min. D. Agregue a cada tubo 2 mL. albúmina de huevo y proteína de trigo. de las respectivas sustancias que indica el rótulo usando agua destilada para el tubo marcado como blanco. Ensayo Xantoprotéico Rotule 6 tubos de ensayo de la misma manera que para el ensayo de Millon. De la proteína. Se habla ya de proteína. ESTRUCTURA PRIMARIA La estructura primaria es la secuencia de aa. se denomina oligopéptido. Las que contienen tirosina dan las reacciones Xantoproteica y de Millon.. La mayoría de ellas contienen además azufre.“PROTEÍNAS” FUNDAMENTO Las proteínas son compuestas de carbono. y las que contienen cistina dan la reacción de la cistina (azufre). Esta es debida al grupo NH . Hay ciertas reacciones coloreadas que dan las proteínas y dependen de los aminoácidos presentes en la molécula proteica. LOS AMINOÁCIDOS Los aminoácidos se caracterizan por poseer un Grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2). Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídico. Que forma la molécula no es mayor de 10. Cada una de estas estructuras informa de la disposición de la anterior en el espacio.CO. Todas dan la reacción de BIURET. y algunos fósforos. se encuentran. peptonas. hidrógeno. la estructura secundaria. oxigeno hidrogeno y nitrógeno. péptidos y aminoácidos son derivados de las proteínas formados en síntesis e hidrólisis. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían por tanto la monómera unidad. La unión de un bajo número de aminoácidos da lugar a un péptido. Nos indica qué aas. Según éste se distinguen 20 tipos de aminoácidos. La función de una proteína depende de su secuencia y de la forma que ésta adopte. si la n: de aa. las que contienen triptofano dan la reacción de este nombre. ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS La organización de una proteína viene definida por cuatro niveles estructurales denominados: estructura primaria. Existen dos tipos de estructura secundaria: la a(alfa)-hélice la conformación beta 4 . todas son muy complejas molecularmente y tienen alto peso molecular. OBJETIVO Ver la presencia de proteínas y su importancia dentro de los organismos vivos y su mecanismo de acción a nivel molecular. estructura secundaria. Las pro teosas. oxígeno y nitrógeno. hierro. GENERALIDADES Las proteínas Son biomoléculas formadas básicamente por carbono. magnesio y cobre entre otros elementos. fósforo. Componen la cadena polipeptídica y el orden en que dichos aas. Los aas. a medida que van siendo enlazados durante la síntesis de proteínas y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces. adquieren una disposición espacial estable. estructura terciaria y estructura cuaternaria. si es superior a 10 se llama polipéptido y si la n: es superior a 50 aa. Sus moléculas son de proporciones coloidales. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de proteínas. La molécula proteica esta compuesta de una combinación de aminoácidos por condensación. Las otras dos valencias del carbono se saturan con un átomo de H y con un grupo variable denominado radical R. ESTRUCTURA SECUNDARIA La estructura secundaria es la disposición de la secuencia de aminoácidos en el espacio. Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre sí misma la estructura primaria. hormonales. 5 . ESTRUCTURA CUATERNARIA Esta estructura informa de la unión. Esta conformación globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los radicales R de los aminoácidos. denominada disposición en lámina plegada. los puentes de hidrógeno los puentes eléctricos las interacciones hidrófobas. No forman una hélice sino una cadena en forma de zigzag. enzimáticas. es la estructura primaria la que determina cuál será la secundaria y por tanto la terciaria. Cada una de estas cadenas polipeptídicas recibe el nombre de protómero. En esta disposición los aas. para formar un complejo proteico. mediante enlaces débiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptídicas con estructura terciaria. ESTRUCTURA TERCIARIA La estructura terciaria informa sobre la disposición de la estructura secundaria de un polipéptido al plegarse sobre sí misma originando una conformación globular. etc. Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibroína. Esta conformación globular facilita la solubilidad en agua y así realizar funciones de transporte. Se debe a la formación de enlaces de hidrógeno entre el -C=O de un aminoácido y el -NH. En definitiva.del cuarto aminoácido que le sigue.. Aparecen varios tipos de enlaces: el puente disulfuro entre los radicales de aminoácidos que tiene azufre. Liasas. baja y muy baja densidad.Además. Transferasas. plumas. mioglobina. que transportan lípidos en la sangre. lactoalbúmina (leche) Hormonas: Insulina. Elastinas: En tendones y vasos sanguíneos Fibroínas: En hilos de seda. pero las proteínas no contienen Biuret.El número de protómeros varía desde dos como en la hexoquinasa. por lo que una proteína soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita. cada individuo posee proteínas específicas suyas que se ponen de manifiesto en los procesos de rechazo de órganos transplantados. Las proteínas por sus uniones peptídicas reaccionan con los 6 . Ligasas. por lo que un cambio en la estructura de la proteína puede significar una pérdida de la función. Todas las proteínas desnaturalizadas tienen la misma conformación. Consiste en la pérdida de la estructura terciaria. sustancia obtenida calentando la urea de ahí el nombre de esta reacción. REACCIÓN DE BIURET Añadir 10 gotas de solución de hidróxido de sodio y luego UNAS gotas de solución débil 3 gotas de sulfato de cobre. que se denomina "grupo prostético HOLOPROTEÍNAS Globulares Fibrosas Prolaminas: Zeína (maíza). cuatro como en la hemoglobina. Desnaturalización. insectos) HETEROPROTEÍNAS Glucoproteinas Lipoproteínas Nucleoproteínas Cromoproteínas Ribonucleasa Mucoproteínas Anticuerpos Hormona luteinizante De alta. cuernos.etc. cada una lleva a cabo una determinada función y lo realiza porque posee una determinada estructura primaria y una conformación espacial propia. hemocianina. que transportan electrones METODO En las siguientes reacciones puede usarse albúmina desecada preparar una solución de ovo albúmina agitando una pequeña cantidad de polvo con agua. se produce un color violeta (una reacción similar SE obtiene con el Biuret. Se obtiene un color rosado. o muchos como la cápsida del virus de la poliomielitis. La especificidad se refiere a su función. uñas. no todas las proteinas son iguales en todos los organismos. PROPIEDADES DE PROTEINAS Especificidad. tirotropina Enzimas: Hidrolasas. ovoalbúmina (huevo). Albúminas: Seroalbúmina (sangre). (arañas. cartilaginosos Queratinas: En formaciones epidérmicas: pelos. muy abierta y con una interacción máxima con el disolvente. que consta de 60 unidades proteícas. por romperse los puentes que forman dicha estructura. llamada reacción del Biuret. que transportan oxígeno Citocromos..gliadina (trigo). orizanina (arroz). Colágenos: en tejidos conjuntivos. Oxidasas. prolactina. CLASIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Se clasifican en: HOLOPROTEÍNAS Formadas solamente por aminoácidos HETEROPROTEÍNAS Formadas por una fracción proteínica y por un grupo no proteínico. (caracterización de tripéptidos en adelante) Fundamento: Los péptidos y proteínas producen una reacción coloreada muy usada para la valoración de los mismos. hordeína (cebada) Gluteninas: Glutenina (trigo).. Nucleosomas de la cromatina Ribosomas Hemoglobina. Ejecutar la prueba de Biuret con una solución acuosa de peptona. hormona del crecimiento. REACCIÓN DE ARGININA Añadir 2 gotas de de hidróxido de sodio seguido de unas gotas de alfa-naftol alcohólico y luego unas 3 gotas de hipoclorito de sodio. REACCIÓN XANTOPROTEICA Añadir 2 gotas de ácido nítrico a 2ml de albúmina. observar cuidadosamente). observar cuidadosamente). Luego echar cuidadosamente con un embudo de separación (el color del anillo formado es muy leve. del que depende la reacción).naftol alcohólico y agitar. Se vuelve amarillo enfriar bajo el grifo y añadir exceso de 6-10 gotas de hidróxido de amonio de o. REACCIÓN DEL TRIPTOFANO Añadir en exceso de ácido acético glacial que ha sido expuesto a luz (y por tanto contiene ácido glioxilico. Añadir suficiente solución de hidróxido de sodio para disolver este y luego hervir. Se forma un anillo morado en la superficie de separación (el color del anillo es muy leve. Se obtiene un precipitado blanco. pero no los aminoácidos. REACCIÓN DE MOLISCH Añadir unas gotas de alfa. MATERIAL REACTIVOS Tubos de ensayo Sol. de fórmula: Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre mas ovo albúmina precipito a una coloración violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva. ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (CONH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Acético glacial Beta . Luego mediante un tubo de ensaye añadir cuidadosamente sulfúrico concentrado. A los 2 ml de peptona se le agregaron 2 gotas del reactivo de Biuret Precipitando a una coloración amarilla la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas. Calentar. se forma una sustancia compleja denominada Biuret. REACCIÓN DE CISTINA Añadir 2 gotas de solución de acetato de plomo.iones cúpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. D) REACCIÓN DEL TRIPTOFANO 7 .naftol alcohólico Hipoclorito de sodio Acetato de plomo Ac. OBSERVACIONES REACCIÓN DE BIURET La producen los péptidos y las proteínas. Se necesitan 2 ó más uniones peptídicas para que se forme el complejo coloreado. Hervir. sulfúrico cinc. La solución se torna pardo obscura (debido a la formación de sulfuro de plomo). Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado. Esta es una reacción debida a la presencia de un grupo hidrocarbonato en la molécula proteica. Se obtiene un precipitado blanco. Hidróxido de amonio de 0. Se vuelve rojo. Nítrico conc. Se obtiene un precipitado. Se forma un color rojo. De ovo albúmina Baño Maria Hidróxido de sodio Sulfato de cobre 1% Ac. REACCIÓN DE MILLON Añadir 2 gotas de de reactivo de MILLON (es una mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en ácido nítrico).88 % se vuelve naranja.88% Reactivo de Millón Ac. aumenta la sensibilidad de la reacción.Barnes (1994): BIOLOGIA. debido al gran tamaño de sus moléculas. BIBLIOGRAFÍA -Murray. E) REACCIÓN DE ARGININA El grupo guanidino del aminoácido arginina se condensa con el alfa-naftol del reactivo. -De Robertis-Hib (1998): FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR.El grupo indol del aminoácido triptófano se condensa con el ácido glioxílico del reactivo. El agregado de una pequeña cantidad de ácido sulfúrico concentrado puro. y luego forma un complejo coloreado con el hipoclorito de sodio. Buenos Aires. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 700C o al ser tratadas con soluciones salinas. como son la cistina. 3) Identificación de compuestos bioquímicos – pruebas cualitativas PDF 8 . Editorial El Manual Moderno. la cisteina y la metionina. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados. El ateneo. G) REACCIÓN DE MOLISCH Todos los Glúcidos por acción del ácido sulfúrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfúricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural).2 CH3-COONa + SPb (precipitado) Al contacto con el acetato de plomo se forma una precipitación lechosa al agregar hidróxido de sodio la precipitación formada desaparece. forman con el agua soluciones coloidales. La reacción consiste en someter la muestra a una hidrólisis alcalina con hidróxido de sodio. CONCLUSIONES Las proteínas. Al contacto con la albúmina se obtuvo un precipitado blanco sin juntarse las sustancias al contacto con el agua caliente empieza a tornarse una coloración amarillo huevo en forma de una bolita amarilla dejamos en baño Maria hasta lograr el precipitado rojizo reacción positiva. Estos compuestos furfúricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solución alcohólica de alfa-naftol). formando compuestos coloreados. -Curtís. F) REACCIÓN DE LA CISTINA Esta reacción dará positiva con aquellos aminoácidos que presenten azufre en su estructura. México.R-OH + SNa2 + H2O De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo SNa2 + (CH3-COO)2 Pb . Et al (1997): BIOQUIMICA DE HARPER. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires -Castro et al (1996): Actualizaciones en Biología. R-SH + 2 NaOH . Reacción positiva. R. La reacción nos precipito a un rojo ladrillo. Eudeba. ácidos. Buenos Aires. que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria. Al contacto del baño Maria la coloración cambia a pardo. reacción positiva. etc. alcohol. En este caso el precipitado fue la formación de un anillo color morado en la superficie de separación.