Pruebas Rápidas De LaboratorioEn Farmacología Y Toxicología. Ana María Restrepo Muñoz Rafael I. Uribe Acevedo Residentes 1er año Toxicología Clínica Departamento de Farmacología y Toxicología Facultad de Medicina, U. de Derechos de autor, 2013. Solo para uso educativo, no para uso comercial. Prohibida su distribución sin autorización de la Universidad de Antioquia. Laboratorio de farmacología y toxicología • Dirigido hacia la identificación o cuantificación de un xenobiótico. • Las técnicas primarias utilizadas son: Pruebas rápidas Pruebas espectroquímicas Inmunoensayos Técnicas cromatograficas Pruebas Rápidas De Laboratorio En Toxicología Y Farmacología • Son los test mas simples. • Consisten en una reacción rápida de un xenobiótico con un reactivo químico para producir un producto generalmente de color. • > frecuente en muestra de orina y o aspirado gástrico. Pruebas Rápidas De Laboratorio En Toxicología Y Farmacología • < sensibles y especificidad. • Frecuentemente presentan falsos positivos. • Ocasionalmente falsos negativos. • Rápidas y económicas Pruebas Rápidas Organofosforados • En tubo de ensayo servir 1ml de contenido gástrico y agregar 1 perla de NaOH. • Positivo : Aparición de color amarillo. • Detecta la presencia del radical paranitrofenol y se puede acelerar en baño de maria. • No en orina por que su color interfiere. Pruebas Rápidas Organofosforados • 1 ml de contenido gástrico o muestra no biológica liquida. • Se le agrega 1 ml de agua. • Solo los organofosforados darán como resultado una emulsión de color blanco. Pruebas Rápidas Alcoholes • Los alcoholes son hidrocarburos que contienen un grupo OH. • El etanol ( C2H5OH )es un liquido transparente altamente volátil, de olor característico y soluble en muchos solventes orgánico. • Es el elemento activo de las bebidas alcohólicas. Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) • Reacción del Dicromato de Potasio • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) Procedimiento: Agregar 0,5 ml de dicromato de K a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min. Resultados: Color observado frente al Dicromato de potasio: verde Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) Reacción de Oxido reducción alcoholes y aldehidos Tomar 1 ml de orina + 1 ml de mezcla sulfocromica. Color verde = Compuesto volátil reductor Sensibilidad : 50 ppm No diferencia entre etanol, metanol, acetonas y aldehídos. Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) Si es Positiva pasa de naranja a Verde Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) Muestras: Orina, contenido estomacal y residuos de la escena. Reactivos: Dicromato de potasio (25 g/l) en ácido sulfúrico (500 ml/l). Pruebas Rápidas Alcoholes (Etanol) Aplicar 50 μl se sol. de dicromato de K a una tira de papel filtro e insertar en el tubo de vidrio que contiene 1 ml de muestra, cerrarlo y colocarlo en un baño de agua hirviendo durante 2 minutos. Si cambia de naranja a verde indica la presencia de los agentes volátiles reductores como etanol, acetaldehído, metanol y paraldehído. Sensibilidad: 0,5 g/l. Pruebas Rápidas Alcoholes (Metanol) Muestra: 1ml de Sangre total en un tubo de ensayo con fluoruro de Na. Agregar 2 ml de Acido tricloroacetico ( TCA) al 5% para precipitar las proteínas. Filtrar y tomar 1 ml del filtrado. Agregar 2 gotas de KMnO4, mezclar y esperar 2 minutos. Agregar la cantidad que tome con la punta de la espatula de bisulfito de sodio NaHSO3 y mezclar Pruebas Rápidas Alcoholes (Metanol) Agregar la cantidad que tome con la punta de la espatula de acido cromotropico y mezclar Agregar lentamente y por las paredes del tubo, 20 gotas de H2SO4 puro Si es positivo parece un anillo violeta en la interfase Sensibilidad 10 mg/ 100 ml de sangre “El EDTA o heparina pueden dar falsos positivo” Pruebas Rápida Cianuro • Es una anión monovalente, volátil y se caracteriza por su olor a almendras amargas. • La intoxicación es producto de la ingestión de KCN o NaCN, o de la inhalación de vapores de HCN. Pruebas Rápida Cianuro Formación de un complejo azul de ferriferrocianuro (azul de Prusia) con los iones ferrosos. Muestras: Contenido estomacal, residuos de la escena Reactivos: • Solución acuosa de hidróxido de sodio (100 g/l). • Solución acuosa de sulfato ferroso (100 g/l) recientemente preparada. • Solución acuosa de ácido clorhídrico (100 ml/l ) Pruebas Rápida Cianuro • Procedimiento: Diluir 1 ml de la muestra en 2 ml de hidróxido de Na. Agregar 2 ml de sol. de sulfato ferroso + ácido clorhídrico hasta disolver el precipitado de hidróxido ferroso. Positiva: Color Azul, sensibilidad 10 mg/L. Pruebas Rápida Salicilatos • Grupo de sustancias derivadas del acido salicílico, con propiedades analgésicas, antipiréticas y antiinflamatorias. • C7H6O3 Pruebas Rápida Salicilatos Folín-Ciocalteu: -100 gr de tungstato de Na + 25 gr de molibdato en 800 ml de H2O. -Agregar 50ml de Ac. fosfórico y 100ml de Ac. Clorhidrico, dejar en reflujo 10 h. -Dejar enfriar y agregar 150 Gr de sulfato de litio + 50ml de H2O y 4-6 gotas de bromo y dejar estabilizar 2h. -Baño de maría 15´ , dejar enfriar, filtrar y enrasar con 1 L de H2O - Mantener a 4ºC y dura 4 meses. Pruebas Rápida Salicilatos Muestras: Orina, contenido estomacal, resto de la escena. Agregar la sol. de tricloruro férrico al 5% o el reactvo de Folín–Ciocalteu a una alícuota de la muestra. Positiva: - Azul-violaceo con el Cloruro férrico. - Azul con el Folín-Ciocalteu Pruebas Rápida Salicilatos • Muestra : Orina. En un tubo de ensayo servir 1 ml de orina Agregar 1 ml del reactivo de trinder y mezclar Positivo: Aparición de color violeta. Las fenotiazinas tambien producen color violeta pero desaparece inmediatamente El color debido a los salicilatos desaparece al adicionarle H2SO4 al 50% Prueba Rápida Paracetamol • Es un metabolito de la fenacetina, con propiedades analgésicas. • Físicamente es un polvo cristalino de color blanco, inodoro , de sabor amargo. Prueba Rápida Paracetamol Reactivos: Cloruro férrico, Folin-Ciocalteu, Liebermann, Nessler Liebermann: -1 gr de nitrito de Na + 10 ml de Ac. Sulfúrico – se debe realizar en frio y bajo campana. Nessler: -50 gr de cloruro de Hg + 35 gr de ioduro de K en 200 ml de H2O ( En frio ) -50gr de Hidroxido de Na en 50ml de H20 ( En frio ) Prueba Rápida Paracetamol Muestras: Orina, contenido estomacal, residuos de la escena. Agregar la solución del reactvo a la muestra o a una solución etanólica de la muestra. Positivo si : Cloruro férrico: azul Folin-Ciocalteu: azul Liebermann: violeta Nessler: marrón (fugaz) Prueba Rapida Acido Borico • Polvo blanco inodoro o escamas flexibles nacaradas o translucidas. • Se encuentra como Ac. Borico ( H3BO3 ) o el bórax (tetraborato disodico). • Utilizado como: Insecticida, fungicida, preservante de madera, agentes limpiadores y removedores. Prueba Rapida Acido Borico • Pesar 50 gramos de la muestra y agregar 5 gotas de H2SO4 + 5 gotas de metanol y encender una llama. • Positiva: Coloración verde en la llama PRUEBAS RÁPIDAS. 1. Reactivos. 2. Fenotiazinas. 3. Antidepresivos tricíclicos. 4. Betabloqueadores. 5. Cocaína. 6. Opio y derivados. 7. Anfetaminas. 8. Marihuana. 9. Paraquat y diaquat. REACTIVOS • FPN: A 5 ml de solución acuosa de cloruro férrico (50 g/l) agregar 45 ml de solución de ácido perclórico (200 g/kg ó 20% p/p) y 50 ml de solución de ácido. • Forrest: Mezclar 25 ml de solución acuosa de dicromato de potasio (2 g/l), 25 ml de solución de ácido sulfúrico (300 ml/l), 25 ml de solución de ácido perclórico (200 g/kg) y 25 ml de solución de ácido nítrico (500 ml/L). • Nessler: Disolver 50 g de cloruro mercúrico y 35 g de ioduro de potasio en 200 ml de agua, realizar en frío. Disolver 50 g de hidróxido de sodio en 50 ml de agua, realizar en frío. REACTIVOS • Reactivo de hipobromito de sodio: Disolver 0,5 ml de bromo elemental cuidadosamente y enfriando en 5 ml de solución de hidróxido de sodio (400 g/l). • Tiocianato de cobalto • Disolver 6 g de nitrato de cobalto y 18 g de tiocianato de potasio en 100 ml de agua. REACTIVOS • Liebermann • 1 g de nitrito de sodio y 10 ml de ácido sulfúrico • Mandelin • Disolver 0,5 g de vanadato de amonio en 100 ml ácido sulfúrico concentrado (d = 1,86). • Marquis • Mezclar 1 ml de solución de formaldehído con 9 ml de ácido sulfúrico concentrado. REACTIVOS • Ninhidrina • Adicionar 0,5 g de ninhidrina a 10 ml de ácido clorhídrico y diluir a 100 ml con acetona. • Simón • Solución acuosa de carbonato sódico al 20%. • Solución etanólica de acetaldehído al 50%. • Solución acuosa de nitroprusiato de sodio al 1%. • Duquenois • Disolver 2 g de vainillina y 0,3 ml de acetaldehído en 100 ml de etanol. Guardar en frasco oscuro. FENOTIAZINAS • En un tubo de ensayo servir 1 ml de orina. • Agregar lentamente 1 ml de reactivo FPN ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena. • Reactivos FPN; Mandelín; Marquis; Forrest; Ácido sulfúrico; Lieberman • Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min. ANTIDEPRESIVOS TRICÍCLICOS Desipramina El reactivo de Forrest Imipramina BETABLOQUEADORESS • ATENOLOL • Muestras: orina, contenido estomacal, resto de la escena. • Reactivos: Liebermann y Nessler • Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante • 3 min. • Resultados: Color observado frente al reactivo de Liebermann: negro • Nessler: amarillomarrón (ligero) ALCALOIDES • Son sustancias tóxicas extraídas de las plantas, químicamente pueden definirse como sustancias vegetales con nitrógeno básico. • PRUEBA DE TANRED • A la sustancia a estudiar, añada 3 gotas de agua si la sustancia es en polvo. • Agitar y añadir 2 gotas de reactivo tanred. • Un precipitado amarillo lechoso, indica prueba positiva para alcaloides COCAÍNA • Metil benzoilecgonina • La cocaína es un alcaloide obtenido de Erythroxylon coca y otras especies de Erythroxylon, o por la síntesis de ecgonina. • Los metabolitos principales son la benzolilecgonina, ecgonina y metil ester ecgonina. COCAÍNA • Prueba de Scott – Tiocinata de Cobalto • Se adicionan 5 gotas de Tiocianato de Cobalto a la sustancia sospechosa . Si se torna AZUL TURQUESA, indica resultado parcialmente positivo. • A la sustancia AZUL se le adiciona una gota de acido clorhídrico concentrado (HCL), en presencia de cocaína el color azul cambia a ROSADO. COCAÍNA A esta solución ROSA se le adicionan 5 gotas de Cloroformo, el color AZUL debe reaparecer nuevamente en la capa líquida inferior para indicar la presencia de cocaína. • El término opio se utiliza para denominar el extracto obtenido de la planta papaver somniferum • Opiaceo sustancias derivadas del opio. (morfina, codeína) • Opioides sustancias que actúan en los receptores opioides. Se dividen en sintéticos y semisintéticos. OPIOIDES • Naturales: Morfina, codeína. • Semisintéticos: heroína, hidromorfona, dihidrocodeína, naloxona. • Sintéticos: meperidina, metadona, fentanilo, tramadol, remifentanilo. OPIO Y DERIVADOS • PRUEBA DE MARQUIS • En una placa para prueba a la gota se adiciona una mínima cantidad de la sustancia sospechosa. • Se vierten 2 gotas de reactivo de marquís. • La aparición de un color violeta oscuro indica resultado preliminar positivo para opio y sus derivados. • Si aparece virando amarillo- naranja – marrón, es positivo para anfetaminas, SI es negro son anfetaminas con anillo sustituído.(MDMA y análogos) MORFINA, CODEÍNA Y HEROÍNA • Se vierte pequeña cantidad de la sustancia en una placa para prueba de gota. • Se añade 1 gota de reactivo ácido nítrico. • Positiva para morfina= un color naranja que vira rapidamente a rojo y luego lentamente amarillo. • Positiva para codeína: un color naranja que vira lentamente a amarillo. • Positiva para heroína: un color amarillo que vira lentamente a verde claro CODEÍNA, METADONA, MORFINA • Muestras: orina, contenido estomacal, restos de la escena. • Reactivos • Liebermann • Mandelin • Marquis • Procedimiento: Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min. • Resultados: Colores observados frente a los reactivos de Liebermann: negro Mandelin: verde Marquis: violeta ANFETAMINAS • La anfetamina es un líquido incoloro, de olor débil y sabor acre, se volatiliza lentamente a temperatura ambiente. Poco soluble en agua destilada, soluble en alcohol y éter, fácilmente soluble en ácidos minerales diluidos. ANFETAMINAS • Reacción de Liebermann • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos. • Resultado: La aparición de un color rojo- naranja indica presencia de anfetaminas ANFETAMINAS • Reacción de Marquis • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos. • Procedimiento: colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) en una placa y agregar el reactivo de Marquís gota a gota y no más de tres gotas. • Resultados: La aparición de un color anaranjado que cambia al pardo indica la presencia de • anfetamina como de metanfetamina. • Sensibilidad: 1 mg. ANFETAMINAS • Reacción con ninhidrina • Muestras: orina, contenido estomacal y residuos de la escena, polvos • Agregar 0,5 ml de reactivo a la muestra, calentar en baño maría durante 3 min. • Resultados: La aparición de un color rosado- anaranjado luego de calentar indica la presencia de anfetaminas. ANFETAMINAS • Reactivo de Simón. • Colocar una pequeña cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o dos gotas si se trata de un líquido) sobre una placa de toque y agregar reactivo. • Resultados: Produce un color azul la metanfetamina y otras aminas secundarias. La anfetamina y otras aminas primarias producen un color rosado que cambia lentamente a rojo cereza. MARIHUANA • La marihuana es extraída de la planta cannabis sativa. • La principal sustancia psicoactiva del cannabis es el tetrahidrocannabinol (THC), además, la planta contiene en total cerca de 60 cannabinoides (entre éstos: cannabinol, cannabigerol, cannabicromeno, cannabiciclol), que se presenta en muchas variedades, siendo la mas activa la Δ9- THC MARIHUANA • También se puede mezclar en la comida o beber como té. • La marihuana común contiene en promedio 5 % de THC • La sin-semilla (botones y flores de la planta hembra) contiene en promedio 12 % de THC(- 1 % al 27%) • El hachís ( resina gomosa de las flores de las plantas hembras) 10 % de THC MARIHUANA • Prueba de Duquenois Levine: • 2ml de Vainillina (0,4g en 20 ml de etanol al 95%) • 0,5 ml de acetoaldehído • 2 ml de ácido clorhídrico concentrado, si es positiva forma un color verde azul o violeta. • se agita y se agrega 2 ml de cloroformo • Resultado: el color violeta se extrae y pasa a la fase orgánica. • Cabe mencionar que el cannabidiol no da esta reacción. PARAQUAT Y DIQUAT • Prueba de ditionito • Disolver 100 mg de ditionito de sodio en 10ml de NaOH (hidroxido de sodio ) En un tubo de ensayo adicionar 5ml de orina. Agregar 1 ml de la solución de ditionito, y teniendo un tubo de control negativo, observar: AZUL: Paraquat Verde: diquat