UNIVERSIDAD DE CÓRDOBAFacultad Ciencias De La Salud Programa Bacteriología Universidad de Córdoba, comprometida con el desarrollo regional NIT 891080031-3 CURSO: HEMATOLOGÍA II Código: 504153 Horas semanales: 5 Componente: Teórico Práctico Ubicación: VI semestre Requisitos: 504144 Docente: Yesica Gándara Herrera GUÍA N° 3 PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES: PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD (PC), RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI) Y AUTOCONTROL (AC) INTRODUCCIÓN Las pruebas pretransfusionales son los procedimientos realizados por los servicios de transfusión o los bancos de sangre, previos a la transfusión, con el fin de asegurar la selección adecuada de la unidad de sangre o los componentes a transfundirse. Tienen como propósito evitar que los componentes seleccionados para la terapéutica causen daño en el receptor y cuya sobrevida postransfusional este dentro de los límites aceptables. Si esas pruebas se realizan correctamente, son útiles para confirmar la compatibilidad ABO entre el componente y el receptor y tienen la posibilidad detectar la mayor parte de los anticuerpos irregulares o inesperados, clínicamente significativos. Las pruebas pretransfusionales incluyen: Verificación de la hemoclasificación (determinación del ABO/Rh) del donante y receptor. Prueba cruzadas de compatibilidad. Rastreo para anticuerpos irregulares en el receptor. Autocontrol. NECESIDAD Adquirir los conocimientos necesarios para certificar y validar la transfusión de componentes sanguíneos, mediante la correcta realización de las pruebas pretransfusionales. Universidad de Córdoba 1964 – 2012. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www.unicordoba.edu.co Correlaciona resultados positivos en el rastreo de anticuerpos irregulares con la clínica del paciente. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. Torniquete Algodón Alcohol Agujas vacutainer Camisa para agujas vacutainer Serofuge Puntas amarillas Puntas azules Universidad de Córdoba 1964 – 2012. rastreo de anticuerpos irregulares y autocontrol a muestras de sangre total.co . comprometida con el desarrollo regional NIT 891080031-3 OBJETO DE ESTUDIO Compatibilidad sanguínea Donante/Receptor.edu. MATERIALES DE LABORATORIO Papel kraft Tubos EDTA. Realización e interpretación del reporte de resultados obtenidos. OBJETIVOS Instructivos Reconocer la importancia de las pruebas de compatibilidad para garantizar al máximo la seguridad transfusional. Identifica las limitaciones de las pruebas pretransfusionales en medicina transfusional. Interpretar y correlacionar los resultados de las pruebas de compatibilidad. Correlaciona resultados positivos de autocontroles con la clínica del paciente. Solución del cuestionario post-laboratorio al finalizar la práctica. Realización de pruebas cruzadas. Certifica la transfusión de componentes sanguíneos acorde a la interpretación de los resultados compatibles de las pruebas pretransfusionales. con el fin de resolver oportunamente la necesidad de transfusión sanguínea. COMPETENCIAS A ADQUIRIR POR PARTE DE LOS ESTUDIANTES Interpreta la presencia de aglutinación/hemólisis en las diferentes fases de las pruebas cruzadas. METODOLOGÍA Socialización de la guía y el prelaboratorio.unicordoba.UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA Facultad Ciencias De La Salud Programa Bacteriología Universidad de Córdoba. Proponer soluciones ante resultados incompatibles de las pruebas pretransfusionales. Detección de anticuerpos calientes. Detección de anticuerpos fríos completos. Hemoclasificación sistema ABO/RH) 2. anti-B. 6. Por razones de practicidad y oportunidad este rechequeo de grupo sanguineo en las unidades de sangre podrá ser efectuado mediante la determinación en lámina de la prueba directa. entre otros). Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD Fundamento La prueba cruzada debe demostrar que el suero del receptor y las células del donante son compatibles y por lo tanto están libres de anticuerpos hemolizantes.unicordoba. c) Fase de Coombs: empleo de antiglobulina humana o suero de coombs poliespecífico.co . Pipetas automáticas Tubos de vidrio UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA Facultad Ciencias De La Salud Programa Bacteriología Universidad de Córdoba. anti-D Baño de maría. Detección de anticuerpos calientes dependientes de antiglobulina. Universidad de Córdoba 1964 – 2012. albumina.85%) Lamina de vidrio hemoclasificadora Palillos PROCEDIMIENTO 1. (Guía No. aglutinantes o que recubran el eritrocito. razón por la cual en las pruebas pretransfusionales es suficiente realizar un rechequeo o verificación del grupo ABO/Rh del donante. Hemoclasificación sistema ABO/RH) La determinación del grupo ABO/Rh de los receptores deberá ser realizada mediante la prueba directa y la prueba inversa(Guía No. 6. previamente han sido hemoclasificadas ABO/Rh mediante la prueba globular y sérica. b) Fase potenciadora: 37°C usando potenciadores de las reacciones antígenoanticuerpo (LISS. Debe usarse en el procedimiento 3 fases: a) Fase salina: temperatura ambiente. Solución salina fisiológica (0. comprometida con el desarrollo regional NIT 891080031-3 Tapones para tubos de ensayo Pipetas pasteur Suero de Coombs LISS potenciador Hemoclasificadores: anti-A.edu. mediante la determinación ya sea globular o sérica. DETERMINACIÓN ABO/Rh Las unidades de sangre certificadas destinadas para la realización de pruebas pretransfusionales. Leer y registrar resultados. Lavar las células del receptor y del piloto de la unidad de sangre a transfundir. Al tubo M agregar: 50uL de suspensión 5% de células del donante y 100 uL de suero del receptor.edu. Técnica Obtener muestra de suero y células del receptor y donante. Marcar 3 tubos así: M (mayor). En caso de observarse aglutinación en las pruebas cruzadas. m (menor) y Auto (autocontrol). Lavar cuatro veces con solución salina a 0. Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de suero del receptor. centrifugar. Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos.Universidad de Córdoba. glóbulos rojos y granulocitos. Para plasma. Si hay aglutinación deberá volver a realizar clasificación ABO/Rh de donante y receptor. son tamizadas para anticuerpos irregulares. ya que todas las unidades captadas en los bancos de sangre. leer y registrar la presencia o ausencia de aglutinación o hemolisis. decantar sobrenadante en el último lavado. que detecta anticuerpos del donante contra antígenos del receptor. Se realiza pruebas cruzadas para la transfusión de sangre total.unicordoba. Esta última no se realiza de rutina. se debe reclasificar nuevamente donante y receptor. Agregar una gota de suero de coombs. que detecta anticuerpos regional del receptor contra antígenos presentes en el glóbulo rojo del donante y la prueba NIT 891080031-3 menor (m).co .85%. Agregar una gota de potenciador (LISS) Incubar 15 minutos a 37°C. centrifugar 30 segundos. plaquetas y crioprecipitados no se realiza prueba cruzada pero si deben ser ABO/Rh idénticos o compatibles. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA comprometida Facultad Ciencias De La Salud con el desarrollo Programa Bacteriología Las pruebas cruzadas incluyen la prueba mayor (M). leer y registrar resultados. No debe aglutinar y se procede al siguiente paso. Al tubo m agregar: 50 uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de plasma del donante. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. Suspender al 5%. si no hay variación. la aglutinación puede deberse a otro tipo de incompatibilidad y el receptor deberá ser estudiado en un banco de Universidad de Córdoba 1964 – 2012. Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control de coombs. incubación a temperatura ambiente y a 37°C. Este procedimiento permite obviar la prueba de compatibilidad menor en las pruebas cruzadas. Muestras colectadas con anticoagulantes NO sirven para realizar pruebas de compatibilidad.unicordoba. DETECCIÓN. Las muestras usadas del receptor. NIT 891080031-3 Observaciones. Solo sangre sin anticoagulante debe usarse para las pruebas cruzadas. Estas células son grupo O Rh D positivo y para garantizar la mayor detección de anticuerpos. y fase de coombs. puede producirse en individuos expuestos a estos antígenos como madres multíparas y pacientes politransfundidos. 3. se obtendrán muestras frescas cada día para las pruebas de compatibilidad. Las pruebas de compatibilidad deben ser realizadas con muestras de sangre tomadas como máximo 72 horas antes de la transfusión y deberán ser procesadas lo antes posible. la prueba incluye diversas condiciones de reacción como centrifugación inmediata. Si el paciente se está transfundiendo durante varios días. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA comprometida Facultad Ciencias De La Salud con el desarrollo Programa Bacteriología regional sangre competente para realizar las pruebas especializadas y encontrar unidades de sangre compatibles para el receptor. Técnica Universidad de Córdoba 1964 – 2012. TAMIZAJE O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI) En el banco de sangre se realiza de rutina la detección de anticuerpos irregulares o inesperados a todas las unidades de sangre. deben guardarse perfectamente identificados por el término de una semana. así como los pilotos de las unidades. porque la mayoría de los anticoagulantes actúan fijando el calcio y este es necesario para la actuación de las proteínas del sistema de complemento. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. El rastreo de anticuerpos irregulares permite detectar anticuerpos diferentes a los del grupo ABO y aunque su frecuencia es baja. Se efectúa colocando a reaccionar suero con “células detectoras de anticuerpos” o “eritrocitos reactivos” conseguidas comercialmente.Universidad de Córdoba.co . porque pueden enmascarar una reacción de hemólisis que un anticuerpo presente en el receptor pueda producir. con el fin de poder constatar en cualquier momento un posible error. Cabe anotar que las reacciones a temperatura ambiente no revisten importancia ya que este tipo de anticuerpos carecen de significancia clínica. Las muestras hemolizadas no deberán ser usadas. las cuales traen adjunto la información de su perfil antigénico y el procedimiento técnico.edu. leer y registrar resultados.unicordoba. con el fin de conseguir unidades que carezcan del correspondiente antígeno. Leer y registrar resultados. centrifugar. leer y registrar la presencia o ausencia de aglutinación o hemolisis. Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos. anti Kell. Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de suero del receptor. Agregar una gota de suero de coombs. Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control de coombs. decantar sobrenadante en el último lavado. Al tubo I agregar: 50uL de células detectoras de anticuerpos I y 100 uL de NIT 891080031-3 suero del receptor. lo cual dificulta nuevas transfusiones debido a que no es fácil encontrar sangre compatibles para ellos.85%. En caso de presentarse un autocontrol positivo. se puede pensar en la presencia de autoanticuerpos o alguna anormalidad sérica. las cuales deberán ser correlacionadas con la historia clínica del paciente. Al tubo II agregar: 50uL de células detectoras de anticuerpos II y 100 uL de suero del receptor. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA comprometida Facultad Ciencias De La Salud con el desarrollo Programa Bacteriología regional Marcar 3 tubos así: I. por lo tanto se recomienda identificar el anticuerpo detectado.Universidad de Córdoba.co .edu. Interpretación De Resultados de RAI La presencia de aglutinación ya sea en el tubo I y/o II y autocontrol negativo. Lavar cuatro veces con solución salina a 0. CUADRO 1. II y Auto (autocontrol). centrifugar 30 segundos. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. Algunos pacientes multitransfundidos desarrollan anticuerpos tipo IgG como anti D. Agregar una gota de potenciador (LISS) Incubar 15 minutos a 37°C. Resumen técnica pruebas cruzadas Mayor/Menor y Rastreo de Anticuerpos Irregulares (RAI) SUERO RECEPTOR GR 5% RECEPTOR PLASMA DONANTE GR 5% BOLSA DE SANGRE M (uL) 100 m (uL) 50 100 I (uL) 100 II (uL) 100 Auto (uL) 100 50 50 Universidad de Córdoba 1964 – 2012. indica la detección de un anticuerpo irregular en la muestra de suero estudiada. anti Duffy. Identifique posibles causas de error que originen resultados falsos compatibles y/o incompatibles en las pruebas cruzadas.co . Shirlyn. Manual de Normas técnicas. Alba Luz Luque de Bowen. VIVES. y AGUILAR. Manual de técnicas de laboratorio en hematología 3ª ED. México: Editorial El Manual Moderno. Universidad de Córdoba 1964 – 2012. una vez el RAI resulta positivo? BIBLIOGRAFÍA McKENZIE. Hematología clínica. comprometida UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA Facultad Ciencias De La Salud Programa Bacteriología 50 con el desarrollo regional 50 NIT 891080031-3 PRE LABORATORIO Antes de presentarse a la práctica el estudiante deberá leer detenidamente la guía de laboratorio y preparar el siguiente prelaboratorio: 1.CELULAS I CELULAS II Universidad de Córdoba. ¿Cuáles son las limitaciones de la prueba cruzada? 2. J.edu.L. J. Manual de Bancos de sangre. 1 ed. 4.L. ¿Cómo se realiza e interpreta la identificación de anticuerpos irregulares. 2 ed. Carrera 6ª 76 – 103 Montería – Córdoba 7861018 www. 2000. 2006. 1982. ¿Por qué no es necesario realizar prueba cruzada menor cuando las unidades de sangre han sido tamizadas para rastreo de anticuerpos irregulares? 3. administrativas y de procedimientos en bancos de Sangre – Resolución 0901 de 1996. Rodriguez quito editores. Barcelona. Manual técnico AABB (American Association of Blood Bank) para Bancos de sangre.unicordoba.