UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDESFacultad de medicina humana ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM - SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Alumnas: Almonacid Cajamalqui, Sharmelly Contreras López, Yuliana 3° AÑO DE MEDICINA (V CICLO) ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM - SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 1 A DIOS Y A NUESTROS PADRES POR SU ESFUERZO DEDICADO Y AHINCO EN APOYARTNOS PARA QUE PODAMOS LOGRAR NUESTROS ANHELOS Y PODAMOS SER MEJORES PERSONAS CADA DÍA ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM - SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 2 SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 3 .ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . DESCRIBIR • Describir las técnicas y fundamentos implicados en los métodos baciloscópicos que detectan la presencia de micobacterias en las muestras DIFERENCIR • microscópicamente entre los bacilos ácido-alcohol resistentes y otros microorganismos REPORTAR • adecuadamente el hallazgo de bacilos acido-alcohol resistentes (BAAR) en las extensiones preparadas a partir de muestras patológicas PREVENIR • las medidas de precaución bajo las cuales se deben efectuar el cultivo de las micobacterias patógenas y su identificación ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM .SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 4 . Desde el punto de vista de los requerimientos atmosféricos algunos son aerobios y otros microaerófilos. pero una vez teñidos son resistentes a la decoloración con una mezcla de alcohol ácido. inmóviles. En cuanto a la velocidad de crecimiento algunas especies son de crecimiento rápido y otros lentos. Se destaca en su estructura una gran riqueza en lípidos (20-60%). oportunistas y saprofitas.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 5 . El contenido de bases de guanina más citosina en la molécula de ADN es de 62 a 70 moles %. entre ellas patógenos primarios. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . no esporulados.El género Mycobacterium está integrado por bacilos largos de 3 a 5µm de longitud o curvos en forma de maza. que poseen una resistencia mayor a la tinción por los colorantes comunes. con abundantes gránulos citoplasmáticos. El género comprende 50 especies. así como Mycobacterias que crecen lentamente y necesitan medios más ricos. •Como todas las células procariotas. tuberculosis lo hace a 37ºC con rango entre 30 y 42ºC.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 6 . •Desde el punto de vista de los requerimientos atmosféricos M. constituyendo el grupo de las "Mycobacterias atípicas". dependiendo de su uso. estructura y composición •La morfología característica suele ser bacilar. actualmente M. hasta M. Entre 3 a 5 semanas se observa el desarrollo de colonias para las Mycobacterias de crecimiento lento (por Ej. escotocromógeno y no cromógeno) y características coloniales Morfología. Los medios sólidos pueden ser en base de agar o en base de huevos (Lowenstein-Jensen). Fisiología y metabolismo •El metabolismo de las Mycobacterias es muy variable. según sea superior o inferior a una semana). Clasificación y nomenclatura •En 1950. excepto M. pero es a partir de 1950 que se les ha asignado un rol en determinadas patologías. tuberculosis). la membrana celular y un espacio periplásmico que lo separa de una gruesa y compleja pared celular.Las Mycobacterias son agentes de enfermedades infecciosas que han acompañado al hombre a lo largo de su historia. temperatura óptima de crecimiento es variable. M. las Mycobacterias poseen un citoplasma. siendo este último el más usado. leprae que aún no ha podido ser cultivada en medios sin células. avium complex y enfermedad pulmonar y diseminada en pacientes con SIDA. ligeramente curvada. •Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos. producción de pigmento en presencia o ausencia de luz (fotocromógeno. El hallazgo de estas últimas estuvo vinculado por años a colonización transitoria o contaminación de la muestra clínica.: M. Timpe y Runyon propusieron una clasificación útil de Mycobacterium en cuatro grupos que se basaba en la velocidad de crecimiento (rápido o lento. Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae son los agentes etiológicos más frecuentes de las dos enfermedades más conocidas de este género. encontrándose las Mycobacterias de crecimiento rápido que crecen en menos de tres días en medios simples. siendo la observable en frotis provenientes de cultivo más regular que la que se observa en frotis de materiales patológicos. son aerobios estrictos. por ejemplo. Bovis que microaerófilo. la es La un ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . fueron identificadas otras Mycobacterias. El crecimiento es favorecido con una atmósfera de 5-10% de CO2. tuberculosis. tuberculosis y mayoría de las micobacterias. Poco tiempo después que Roberto Koch en 1882 descubriera M. kansasii. Diferencias en la estructura de ellos. M. a temperatura de 37°C y en un rango de pH de 7 a 7. muy lentamente.Resistencia a los agentes físicos y químicos •Las Mycobacterias son altamente resistentes a la desecación y permanecen viables en el esputo desecado de 6 a 8 meses cuando están protegidas de la luz solar directa. M. Estas últimas se describen según características de velocidad de crecimiento y pigmentación con y sin exposición a la luz. derivada de una cepa de M. M. Clasificación y Tipos antigénicos: Con excepción de M. asumiendo que los antígenos más importantes están expresados. tuberculosis: M. Complejo M. avium intracellulare. Crecen en medios especiales. por lo que se requieren 4 a 6 semanas para obtener crecimiento bacteriano. Esta pared rígida está compuesta por ácidos micólicos.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 7 . El ácido alcohol resistencia está dado por la constitución química de la pared bacteriana. las micobacterias son clasificadas en 2 amplias categorías: Micobacterias no tuberculosas: especies habitualmente saprofitas pero potencialmente patógenas para el hombre. ceras complejas y glicolípidos. M.A. tuberculosis. y debería desencadenar el mismo tipo de respuesta inmune que M. en honor a sus creadores). más resistentes a los agentes desinfectantes que otras formas vegetativas. M.M. se multiplica en promedio cada 20 a 22 horas. pero son destruidos por procedimientos de pasteurización.) que puede contribuir al daño del hospedero. M. pueden estar relacionados con la capacidad de estimular la producción de citoquinas en cultivos de células mononucleares. a través de puentes de fosfodiésteres y a los arabino galactanos por uniones de glicolípidos. bovis (Bacilo de Calmette y Guerin. microtii. leprae. bovis. tuberculosis. Son. tuberculosis. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . M.2. Otro constituyente único es el lipo-arabino-manano (L. Otro componente importante son los dimicolatos de trehalosa (llamados cord factor) y los sulfolípídos. Esta cepa entra en los macrófagos y se replica brevemente antes de ser destruida. marinum. Los ácidos micólicos contienen largas cadenas laterales que se unen a la molécula de ácido murámico del peptidoglicano. africanum. Inmunoprofilaxis BCG es una vacuna con microorganismos vivos atenuados en forma irreversible. en general. los cuales juegan un rol en la virulencia. fortuitum y otras. M. M. su exacta composición. como en otras bacterias. fundamentalmente de naturaleza lipídica en vez de proteínas y lipopolisacáridos. algunas con función enzimática (necesarias para la construcción y reconstrucción de los polímeros de la pared durante el proceso de división celular y crecimiento). tiene como característico la presencia de moléculas de lipopolisacáridos.Características de M. compuesta por el peptidoglicano cuya estructura es similar a la de otras bacterias. dos capas electrón-densas separadas por una capa transparente. pero tienen aspectos distintos. compuesta por polisacárido. la pared celular. de tamaño y estructura única para las Mycobacterias (70-90 átomos de Carbono).SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 8 . cuyos extremos distales están esterificados con ácidos grasos de alto peso molecular. se debe destacar que. • capa media. • La envoltura bacteriana provee protección y soporte a las bacterias y también poseen mecanismos que permiten el intercambio de sustancias entre la bacteria y el medio ambiente. La primera le otorga a la célula protección osmótica y transporte de iones y moléculas. aunque ambos poseen péptidoglicano. es decir. • La envoltura consiste en dos partes principales: la membrana plasmática y. más ancha que la anterior y electrón-transparente. En especial. tuberculosis y otras Mycobacterias son biológicamente similares a las bacterias Gram+ (aunque frente a la tinción de Gram las Mycobacterias son débilmente Gram+ o no se tiñen). el arabinogalactano. moderadamente electróndensa. los ácidos micólicos. en las Mycobacterias. otros recientemente descubiertos con función de porina. • Además de los componentes anteriores existen proteínas asociadas a la pared. lipomonanos y fosfatidil-inositol-manósidos. aunque se le atribuye una estructura glucolípida. • capa externa de grosor variable. Tuberculosis Naturaleza de la envoltura de M. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . alrededor de ella. las moléculas unidas o asociadas a este polímero son. de la cual no puede conocerse con las técnicas actuales. • La pared celular está constituida por tres capas. Hay una marcada similitud tanto química como estructural entre las envolturas de la mayoría de las bacterias. lipoarabinomananos (LAM). Con tinciones convencionales su apariencia es: • capa interna. en tanto que la segunda le brinda soporte mecánico y protección. Pared celular Tuberculosis Membrana citoplasmática • La membrana plasmática de las Mycobacterias aparece en cortes ultrafinos como una membrana biológica trilaminar clásica. Sin embargo. electrónopaca. la multiplicación bacteriana no puede ser impedida y. • Por otra parte. Destrucción tisular • Muchos patógenos bacterianos causan daño en los tejidos del huésped por desencadenar una respuesta inflamatoria local o sistémica. intestino. es su habilidad para prevenir la acidificación del fagosoma. tuberculosis en los macrófagos. tuberculosis entra en el macrófago. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . tuberculosis que contribuye a su virulencia es su habilidad para crecer dentro de monocitos y macrófagos. • muramil dipéptido. Habitualmente la ingestión de una bacteria por fagocitosis es seguida de la acidificación del fagosoma. la que bombea protones hacia el interior de esta estructura. compuestos de la pared no identificados y productos tóxicos liberados por los lisosomas que estimulan la producción de factor de necrosis tumoral alfa (NFT). orofaringe. Esta hipótesis es una posible explicación del daño pulmonar causado por M.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 9 . • Aún no está aclarado exactamente como M. reduciendo el pH en él. Sin embargo. además. Dicha acidificación no sólo inhibe el desarrollo bacteriano sino que. pero los implicados en la actualidad son: • ácidos micólicos de la pared celular (factor cuerda). es un paso importante en la fusión lisosomafagosoma. provenientes de un sujeto enfermo con tuberculosis pulmonar abierta.Factores de virulencia • Un aspecto característico de M. son lo suficientemente pequeños para no quedar atrapados en el aparato mucociliar bronquial y así alcanzar el espacio terminal aéreo donde comienza la multiplicación. eventualmente. Se sabe poco acerca de los antígenos más importantes responsables de esta respuesta. Existen dos posibilidades no totalmente aclaradas: • mediante el proceso habitual de fagocitosis mediado por la opsonización por C3b o C3b. se sabe actualmente que un factor de virulencia que podría contribuir a la supervivencia de M. destruye los macrófagos. El foco inicial es casi siempre de localización subpleural generalmente ubicado en la zona media de los pulmones donde el mayor flujo aéreo favorece el establecimiento de los bacilos inhalados. Patogenicidad Los núcleos goticulares conteniendo muy pocos bacilos. Son tóxicos cuando son inyectados a animales y pueden desencadenar una respuesta inflamatoria.: piel. y en la activación de los factores bactericidas liberados durante la fusión. Excepcionalmente se encuentra el foco inicial en otras áreas (por Ej. los cuales pueden tener un bajo grado de actividad antimicobacteriana como para eliminar pequeñas cantidades de bacilos. En el pulmón las bacterias son ingeridas por los macrófagos alveolares. dispersos en el aire. estimula el sistema inmune y dispara la producción de citoquinas. diferenciándose los últimos en macrófagos que ingieren las bacterias liberadas de las células degeneradas y lentamente se desarrolla una o más áreas de neumonitis. genitales). Hacia el foco son atraídos desde el torrente sanguíneo linfocitos y monocitos. • la bacteria estimula su propia fagocitosis a través de invasinas. tuberculosis y hay gran interés en detectar qué antígenos son los responsables del desencadenamiento de esta respuesta destructiva del hospedero. mediada por ATPasas de la membrana fagosomal. niños inmunodeprimidos/VIH y niños seroconversores de Mantoux . etc Falsos negativos . en ciertas ocasiones (anergia) y hasta en el 50% de la tuberculosis miliar y meníngea. método de administración (no intradérmica). supraclaviculares o retroperitoneales).Induración > 10 mm.En relación con la técnica de la prueba: tuberculina empleada. hematoma local. sarampión. donde crecen extracelularmente.Otras: transfusión de sangre de donantes reactores positivos previa.Vacunaciones con virus vivos en 1-2 meses previos: sarampión. fiebre tifoidea. sensibilidad a los componentes de la tuberculina. En estas condiciones es fácil que. que muestra la existencia de respuesta inmunitaria celular o hipersensibilidad retardada (se positiviza entre la semana 2 y 12 tras la infección). varicela. víricas (VIH. Positiva en niños en contacto con TBC activa. epífisis de huesos largos. riñones. pero el sitio más importante serán las áreas apicales pulmonares. tosferina. provocando licuefacción de los tejidos. a veces más. y debe realizarse a las 48-72 horas de la inyección. La AAP y los CDC desaconsejan el empleo sistemático del Mantoux en niños sin factores de riesgo Técnica La lectura registra en milímetros (mm) la induración mediante palpación. aparezcan mutantes resistentes a los agentes antituberculosos.Infección no tuberculosa (micobacterias atípicas y vacunación BCG previa) . parotiditis y varicela . espacio subaracnoideo. adoptados en el extranjero y cribado de niños sanos (la AAP considera Mantoux positivo ≥ 15 mm en niños sanos ≥ 4 años) La vacuna BCG puede determinar cierta reactividad durante 3-5 años.Infecciones sistémicas recientes: bacterianas (TBC reciente -fase anérgica-.Los macrófagos infectados son llevados por vía linfática a ganglios linfáticos regionales (hiliares. la prueba puede ser inicialmente negativa Falsos positivos . desnutrición protéica grave. pero puede ocurrir en cualquier parte del cuerpo. Preferentemente se ubicarán en: ganglios linfáticos. pero no siempre enfermedad. grave o diseminada. Positiva en cualquier otro caso. sarcoidosis . infección del punto de inyección.Enfermedades graves. Puede haber falsos positivos y negativos Interpretación de la prueba de tuberculina . lepra). Los bacilos tuberculosos que continúan multiplicándose lesionan los órganos donde están localizados. En caso de vacuna BCG reciente (< 3 años) se considera Mantoux positivo a una induración > 15 mm. brucelosis. No obstante. dado el gran número de bacilos. gripe). incluidos niños inmigrantes.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 10 . hecho condicionado por el tipo de flujo sanguíneo. Su positividad indica infección. leucemias. Insuficiencia renal crónica.Edades extremas (menores de 3 meses) . linfomas. personas inmunocomprometidas. llegando a ser millones. Un 5% aproximadamente de los infectados desarrolla la enfermedad durante el primer año y otro 5% lo hará más tarde como resultado de reactivaciones de los bacilos persistentes dentro de viejos focos de infección. mediastinales y. Prueba de la tuberculina El diagnóstico inmunológico se basa en la prueba de tuberculina o Mantoux. parotiditis. En situaciones de riesgo de desarrollar TBC debe obviarse el antecedente de la BCG El niño enfermo presenta en más del 90% de los casos un Mantoux positivo. medida en eje transversal al eje mayor del antebrazo.Induración > 5 mm. fúngicas . a veces.Corticoterapia y tratamientos inmunosupresores . niños con sospecha clínica o radiológica de TBC. Estas reactivaciones tardías se producen habitualmente en las zonas altas del pulmón. pero en el huésped no inmune no son retenidos allí y se puede diseminar por vía hemática a diferentes tejidos. lectura inadecuada (importante medir induración y no eritema) ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . ¿Cuáles son los medios que pueden usarse para el cultivo de Mycobacterium. con aparición de unos 14. temas que se describirán en este capítulo. siendo una importante fuente de morbi-mortalidad. citrato Magnésico. La formula contiene KH2PO4 anhídrido. especialmente prevalente en España.Grupo II (Escotocromógenos) c.. EXPLICA LA REACCION A LAS PRUEBAS DE TUBERCULINA La prueba de Tuberculina o PPD continua siendo el estándar de oro en el diagnóstico de la infección tuberculosa. agua destilada.. harina de papas.Grupo I (Fotocromógenos) b. Las Colonias son de color ante. según sea superior o inferior a una semana). escotocromógeno y no cromógeno) y características coloniales. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . calculándose una incidencia del 33% a nivel mundial. producción de pigmento en presencia o ausencia de luz (fotocromógeno. este test inmunoreactor introducido por Charles Mantoux precisa de personal especialmente entrenado para su administración y lectura. MgSO4 7H2O. En medios sólidos. el germen requiere no menos de 15 días para presentar desarrollo visible. Bacilos Atípicos según Runyon: a.Grupo IV (de crecimiento rápido). Asparagina. Timpe y Runyon propusieron una clasificación útil de Mycobacterium en cuatro grupos que se basaba en la velocidad de crecimiento (rápido o lento.000 casos nuevos al año. Es un medio sólido. acuosa al 2%). y asociada a otros procesos patológicos emergentes en las últimas décadas y a las deficientes condiciones de vida de algunos sectores de nuestra sociedad.. verde de malaquita (sol.Grupo III (No cromógenos) d. huevo frescos. ¿En qué consiste la clasificación Runyon para micobacterias? En 1950. Otros sintéticos como el de SULA.. Se presenta una clasificación modificada de la original de Runyon que incluye los miembros del género Mycobacterium de importancia humana actualmente.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 11 . Existen también medios líquidos como el medio de DUBOIS que contiene Tween 80. secas y rugosas. De sencilla aplicación intradérmica. mostrando también diversas consideraciones sobre su utilidad e indicación en diferentes situaciones inmunológicas. y cuáles son las características de estos medios? El mas comúnmente usado es el medio de Loweenstein Jensen que contiene todos los elementos necesarios para el crecimiento del BK e inhibidores para posibles contaminantes. Glicerina. no del eritema circundante. Realizaremos el procedimiento de igual manera en la zona contralateral.Prueba de Mantoux Administración: •Con el brazo del niño ligeramente flexionado y apoyado en una superficie plana. •Se identificará la zona de la punción con la rotulación de una circunferencia de más de tres centímetros de diámetro. (imagen 5: lectura correcta e incorrecta) Se realizará medición de la induración. deteniéndose en el lugar donde se inicia ésta. donde realizaremos la técnica. exploraremos e identificaremos una zona del antebrazo (preferentemente el no dominante) a nivel de la unión entre el tercio medio y el superior. como medida universal profiláctica. Para ello emplearemos un bolígrafo con punta de bola tradicional que traccionaremos a través de la piel circundante hacia la induración. facilitando así la medición de los puntos finales trazados y obteniendo el diámetro de la zona indurada con la regla flexible ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . directamente o por técnica Sokal que ha demostrado en algunos estudios ser más eficiente en los resultados. libre de escoriaciones y alejada de los vasos. Lectura: se debe realizar en las 48-96h posteriores a la inoculación de la prueba de tuberculina. sobretodo en personal poco experimentado. Se utilizaran guantes desechables no estériles. delimitando un espacio que corresponde al endurecido. que se determina como el diámetro de induración transversal al eje mayor del antebrazo. Procederemos a la limpieza de la zona con el antiséptico elegido. dejándolo secar completamente antes de la inyección para evitar que la penetración en la dermis afecte al resultado. y su base la constituye la ausencia o presencia de induración y su tamaño.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 12 . para la administración de este test. seroconversores de la prueba de tuberculina en los dos últimos años. Cualquier otro caso (incluidos los niños inmigrantes y el cribado de niños ≥ 10 mm ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . Estos estándares están ligados a la prevalencia de la enfermedad en cada medio. drogadictos. hace menos uniformes los resultados obtenidos en los diferentes países y poco comparables. Niños con conversión de Mantoux previamente negativo. institucionalizados. Niños con riesgo aumentado de tuberculosis diseminada. vagabundos. la considera positiva en todos los niños: Induración ≥ 5 mm Casos Positivos Contactos íntimos con casos índice o sospechosos.Registro: se debe anotar el diámetro en milímetros (no como positivo o negativo). ≥ 10 mm ≥ 15 mm En cambio en el Informe de la Sociedad Española de Infectología Pediátrica sobre la interpretación de la prueba de Mantoux. Inmunodeprimidos o Infectados por el VIH. Niños sospechosos de enfermedad tuberculosa clínica o radiológica Niños en situaciones de inmunosupresión o infección por VIH. linfoma. hecho que junto a la infradeclaración de la enfermedad. Niños sospechosos de enfermedad tuberculosa clínica o radiológica. Menores de 4 años Malnutrición.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 13 . el tiempo exacto transcurrido desde la realización de la prueba diagnóstica. Resultados: Cada sociedad elige unos puntos de corte de positividad de la prueba de Mantoux. Niños mayores de 4 años sin contacto ni factores asociados de riesgo. y posibles factores que hayan podido influir en el resultado o lectura del test intradérmico. cuidadores de instituciones. diabetes o IRC. Así la American Academy of Pediatrics considera la intradermoreacción de Mantoux positiva: Induración ≥ 5 mm Casos Positivos Contacto íntimo con casos ciertos o sospechosos. Expuestos a adultos de riesgo: infectados por el VIH. Enfermedad de Hodgkin. Por examen directo. lavado gástrico. secreción de fístulas. LCR. huesos. La solución de PPD debe conservarse protegida de la luz y a una temperatura entre 2 y 8ºC. La forma correcta de obtención de muestras y su procesamiento forma todo un capitulo especial.a..Por Inoculación.El M.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 14 . aunque no está contraindicada la administración simultánea de la vacuna y la prueba de la tuberculina.Por cultivo. orina. ¿Qué pruebas de susceptibilidad pueden usarse para el diagnóstico de Mycobacterium? DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO DE M. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA.1ml) en la jeringa deberá administrarse en el periodo máximo de 15-30 minutos para evitar la absorción de la proteína por parte de las paredes de la jeringa. debiendo indicar la fecha de apertura. lesiones de piel. heces. No deberá diluirse la solución y una vez cargada la cantidad necesaria (0.. Puede ir acompañado de linfangitis e induración de los ganglios linfáticos regionales. No administrar el test tuberculínico hasta seis semanas después de la administración de vacunas de virus vivos (DTP). aunque en recientes estudios se ha comprobado su efectividad y asepsia en ampollas abiertas semanas antes de su empleo. b. etc. TUBERCULOSIS. liquido ascitico. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM .sanos). Se recomienda que los viales de tuberculina usados no deben ser guardados más de dos días. Tuberculosis se puede aislar de diversos productos patológicos: esputo. Nunca congelar. c. Comprobar la fecha de caducidad del vial.. un microscopio. de fuccina fenicada. Colorantes: La coloración indicada es la de Ziehl Neelsen Usando lápiz para vidrio dividir la lamina en tres tercios. colorantes y laminas.EXAMEN DIRECTO. (de gran importancia desde un punto de vista epidemiológico). Hacer el frotis lo más homogéneo posible en los restantes dos tercios. • Lavar con agua de caño. este gran valor.No se encuentran Bacilos en 200 campos: BK negativo Menos de 1. saturada de acido pícrico ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . en 50 campos: BK positivo2 Más de 10 Bacilos por campo. barato.Se debe colocar la lente de inmersión en la mitad del primer tercio y leer siguiendo el sentido de las flechas hacia la derecha como indica el grabado. al alcance de cualquier centro de salud del país. significa que sea leído 1000 campos caso de negatividad leer otros 1000 campos siguiendo el sentido inverso de la flecha MODO DE INFORMAR.Tratándose de esputo. • Lavar con agua de caño • Colorear con azul de metileno. Reactivos: Sol. Se necesita solamente un microscopista bien entrenado. de Azul de metileno o sol. por 20 campos: BK positivo 3 TECNICAS DE COLORACION. • Cubrir con el colorante (fuccina fenecida). TECNICA DE LECTURA. • Lavar con agua de caño. Es un procedimiento sencillo. detectar aquellos pacientes baciliferos. Sol. Sol. • Los gérmenes que retienen el color rojo a pesar de la decoloración son los llamados alcohol acido resistentes y destacando en un fondo de color Azul. METODOLOGIA. secar y observar con lente de inmersión usando aceite de inmersión.• Preparar el frotis y fijar a la llama. a un Bacilo por campo en 100 campos: BK positivo 1 De 1 a 10 bacilos por campo. • Calentar a la llama hasta la producción de tres humos. • Decolorar con alcohol acido. de alcohol acido.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 15 . El primer tercio sirve para la rotulación. Cuando se ha hecho esta operación. pues nos permite además de hacer el diagnostico. 12 H2O . En general estos procesos de recontaminación tienen pro objeto eliminar los gérmenes comunes y poder recuperar el BK. como el esputo. Se utiliza para el diagnóstico en masa de centros de referencia..BaCl2 2H2O …………..CaCl2 6H2O …………. En los métodos usados en la actualidad. mientras mas energético es el método.. Otro método recomendado es el de CORPER Y STORNER en la que se emplea Trifosfato de Sodio.Diagnostico directo por fluorescencia: Se usa como colorante la Aureamina. También se utiliza para el aislamiento del germen y poder realizar posteriormente pruebas de sensibilidad virulencia y tipificación de Micobacterias. Se usa en aquellos esputos negativos al examen directo común. hay mayor poder de recuperación del BK pero mayor riesgo de contaminar el medio de cultivo. LCR o las que proceden de cavidades cerradas es decir.. necesitan previamente de un proceso de DESCONTAMINACIÖN.Se utiliza en aquellos casos en que pese a la negatividad del examen directo se sospecha de cuadro de TBC. por eso se deben inocular por lo menos 2 tubos con medio L. Se necesita microscopio de fluorescencia.… 3 grs . METODO DE SCHMIEDEL: Se usan dos soluciones: Solución “A “ . ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM .Agua destilada………. METODOS DE DESCONTAMINACON.Na2HPO4. mientras menos energético es el método.OTROS TIPOS DE EXAMEN DIRECTO 1. 2 grs . 2.NaOH ………………… 5 grs . 3 grs . hay menos peligro de contaminar el medio de cultivo y menos poder de recuperación del Bacilo Tuberculoso.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 16 . CULTIVOS. 1000 ml Solución “B “ : . Del sedimento se hace frotis y coloración. que no están contaminadas... Otras en cambio. el riesgo de contaminación hasta un 4% se considera aceptable.Método en el que se usa NaOH y HCl.Examen directo previa homogenización: usando NaOH al 4 % y luego centrifugando el homogenizado. Hay especimenes que se pueden sembrar directamente: Ejem....Agua destilada………… 1000 ml.J. y al revés.. usando Rojo de Fenol como indicador. se añade 8 ml de Sol. verde de malaquita (sol. INOCULACIONES.Prueba de la Cutirreacción a la Tuberculina (Sensibilidad Retardada). En la oscuridad a temperatura ambiente. el sedimento se usa para la siembra utilizando pipeta de Pasteur.Se realiza incorporando las drogas a los medios de cultivo. acuosa al 2%). Dos principalmente: El método de las concentraciones Absolutas y el Método de las Proporciones.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 17 . Existen también medios líquidos como el medio de DUBOIS que contiene Tween 80. Otros sintéticos como el de SULA. agua destilada. Glicerina.S utiliza el cobayo. PRUEBAS DE VIRULENCIA. Otros tipos de pruebas de inmunidad humoral. Asparagina. Se incuba en forma vertical los tubos oculados. PRUEBAS INMUNOLOGICAS. el germen requiere no menos de 15 días para presentar desarrollo visible. citrato Magnésico.El mas comúnmente usado es el medio de Loweenstein Jensen que contiene todos los elementos necesarios para el crecimiento del BK e inhibidores para posibles contaminantes.Se utiliza las pruebas de “Crecimiento en Cuerda “(factor Cord). solo se realizan en laboratorios muy especializados. la del Rojo Neutro. La formula contiene KH2PO4 anhídrido. huevo frescos. La prueba de la Niacina. etc. tiene el mismo valor que el cultivo. METODOS DE SENSIBILIDAD A LAS DROGAS ANTITUBERCULOSAS. Se inocula para ciertos especimenes clínicos como LCR para evitar el riesgo de su contaminación. En medios sólidos.24 Hrs. Las Colonias son de color ante. “A” y 2 gotas de Sol “B”. MgSO4 7H2O.Procedimiento: A 2 ml de esputo en un tubo estéril con tapón de goma. Agitar fuertemente y dejar reposar 18. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . Es un medio sólido. MEDIOS DE CULTIVO. harina de papas. secas y rugosas. También se están ensayando métodos engorrosos y costosos. Pruebas usadas para diferenciar Mycobacterias TIPICAS (no se toman en cuenta el microtii) Tuberculosis CORDON + Bovis + Avium + Grupo I +/Amarillo o Rojo (a la luz) +++ Brick – dust “polvo de ladrillo - ATIPICAS Grupo II Anaranjado De ( luz oscura +++ Grupo III - Grupo IV Blanco naranja Rojo + PIGMENTO Ante + Blanco + Blanco + Blanco + CATALASA ROJO NEUTRO Rojo NIACINA + Rojo Rojo - Brick –dust - Amarillo - Amarillo - PATOGENECIDAD PARA EL COBAYO PATOGENECIDAD PARA EL CONEJO +++ +++ - - - - - +/- +++ + - - - - PATOGENECIDAD PARA AVES - - +++ - - - Crece en menos de una semana y bien a 25° C TEMPERATURA DE DESARROLLO No crece a 45°C debajo de 25°C Igual al anterior Crece a 45°C no a 25°C En 1.2 semanas crece bien a 25°C Crece lentamente a 25°C Semejante al humano ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM .SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 18 . Intolerancia a drogas. .SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 19 .Resistencia inicial a las drogas administradas.Suspensión prematura del tratamiento.EXPLICA LA REACCION A LAS PRUEBAS DE TUBERCULINA ¿Por qué la bacteriología de la Tuberculosis es la columna vertebral del programa de control? M.Irregularidad en la ingestión de Medicamentos .No seguir régimen recomendado . . ¿Qué es la proporción crítica en la prueba de sensibilidad a fármacos antituberculososo por el método de las proporciones? Prescripción de esquemas de tratamiento Inadecuados . tuberculosis es una bacteria que requiere técnicas especiales de tinción y medios de cultivo distintos a los empleados habitualmente en bacteriología. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 20 .ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 21 .• con otros genros ya estudiados • el medio de cultivo ideal para el aislamiento de neisseria COMPARAR REALIZAR DIFERENCIAR • Las caracteristicas singulares del genero neisseria ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . flavescens Los diplococos Gram negativos del genero Neisseria se asemejan a granos de café y algunos producen capsula. en hombres se presenta una descarga purulenta abundante. Algunas de las características que permiten diferenciar entre los géneros de la familia Neisseriaceae En el género Neisseria. mientras que N. por lo que la infeccion se presenta al haber contacto intimo y prolongado de mucosas y secreciones.Características del género Neisseria El género Neisseria incluye bacterias con morfología de diplococos Gram-negativos con una reacción positiva a las pruebas de oxidasa y catalasa. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . lactamica · N. Algunas especies son capaces de degradar unos pocos carbohidratos. el cual tiene la mayor importancia clínica dentro de la familia Neisseriaceae. y Kingella conforman la familia Neisseriaceae. de manera tal que puede crecer únicamente en medios enriquecidos como agar chocolate. cinerea · N. Posterior a este periodo. Conjuntamente con los géneros Moraxella (incluyendo Branhamella catarrhalis. Es el agente etiológico de la gonorrea. Las especies de Neisseria se caracterizan por ser de metabolismo aerobio y el crecimiento de las especies patógenas se ve favorecido mediante incubación en una atmosfera altamente húmeda y enriquecida a 5-8% de CO2. meningitidis. mientras que las especies saprofitas. Su temperatura de crecimiento es óptima entre los 35-37oC y tienen requerimientos nutricionales complejos. pero no puede crecer en agar sangre. sicca · N. subflava · N.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 22 . una enfermedad de transmisión sexual Es una bacteria altamente sensible a la desecacion y cambios de temperatura. elongata · N. producen pigmentos carotenoides. mucosa · N. gonorrhoeae Es nutricionalmente mucho mas exigente que N. meningitidis · N. polysaccharea · N. se incluyen las siguientes especies: · N. El periodo de incubación de la infección varía de 2 a 7 días. meningitidis puede crecer tanto en agar sangre como en agar chocolate. gonorrhoeae · N. actualmente Moraxella catarrhalis). Las especies patógenas primarias para el ser humano son N. mientras que otras son completamente incapaces de hacerlo. disuria y si no se da tratamiento pueden presentarse complicaciones como epididimitis y prostatitis. especialmente. que contienen cuatro antibioticos que ayudan a suprimir el crecimiento de bacterias contaminantes: vancomicina (MTM. X. Algunas colonias son mucoides por la capsula dando una coloracion que va de blanco a gris. ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM . la cual puede evolucionar a coagulacion intravascular diseminada.5 μg/ml. Para el aislamiento de N meningitidis a partir de muestras clinicas como sangre y liquido cefalorraquídeo se puede utilizar agar sangre y agar chocolate. ML. Z. B. ademas de un cuadro de meningitis aguda. 4 μg/ml) colistina (7. C.5 mm de diametro aproximadamente. H. Puede presentar una capsula de polisacaridos extracelulares. Coloniza la mucosa respiratoria. meningitidis son de 1. Branhamella (Moraxella) catarrhalis Es considerada como parte de la flora normal. 1.5 μg/ml) lactato de trimetoprim (5 μg/ml) un agente antifungico (MTM. aunque posteriormente la bacteria puede adaptarse al medio durante los subcultivos. generan una coloracion blanca-grisacea y son levantadas y brillantes. Luego del periodo de incubacion bajo las condiciones adecuadas. de superficie y borde lisos. gonorrhoeae a las 24 horas de incubacion son pequenas. Las muestras clínicas de origen genital deben ser inoculadas en medios enriquecidos pero selectivos. Esta es una bacteria no fastidiosa que crece tanto en agar chocolate como en agar sangre. ML.SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 23 . la cual se ha clasificado en trece diferente serotipos: A. puede alcanzar sangre y generar una meningococcemia. 29E. Y.5 a 1. de 0. anisomicina. dando una morfologia colonial similar a las de Neisseria. 20 μg/ml). 13. W125. choque endotoxico y necrosis en glandulas suprarrenales. con aspecto humedo y brillante. El crecimiento en agar sangre de un aislamiento primario de N meningitidis es variable. aunque se ha relacionado como agente causante de infecciones pulmonares y de oido medio.0 mm de diametro. dolor abdominal y alteraciones menstruales. nistatina. 3 μg/ml. Las colonias de N.En mas del 50% de las mujeres se puede presentar una infeccion asintomatica o con solo un aumento de las secreciones vaginales. meningitidis Es agente etiologico de bacteremia y meningitis epidemica. K y L. D. La infeccion invasiva por N meningitidis puede provocar rapidamente la muerte del paciente. las colonias de N. como el agar Thayer-Martin modificado (MTM) o el agar Martin-Lewis (ML). disuria. redondas. En las infecciones sintomaticas hay un aumento de secrecion vaginal. pero que puede ser facilmente diferenciada de las especies de Neisseria mediante la prueba de ADNasa. N. SIEMBRA DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA AISLAMIENTO DE NEISSERIA Página 24 .ESTUDIO DEL GENERO MYCOBACTERIUM .