Propiedades químicas de las proteínasAntecedentes Las proteínas son las macromoléculas más abundantes en las células. Son la forma en la que la información genética se expresa. A pesar de que las proteínas son diferentes en las diferentes especies, todas están constituidas por los mismos 20 aminoácidos sólo que en diferente orden. Las proteínas varían entre ellas porque tienen una secuencia de aminoácidos diferente. (Lenhinger ) La estructura primaria de las proteínas es la que se debe a los encales covalentes de la molécula. Esta definición comprende la secuencia de aminoácidos y puentes disulfuro. Todas las propiedades de las proteínas están determinadas por la estructura primaria. Las cadenas peptídicas forman arreglos unidos por puentes de hidrógenos. Los átomos de oxígeno carbonílicos forman puentes de hidrógeno con los hidrógenos de la amida. Puede presentarse un arreglo ordenado de puentes de hidrógeno; la hélice alfa y la hoja plegada. Algunas partes de la proteína pueden estar plegadas y otras pueden estar en hélice o incluso pueden estar al azar. La estructura terciaria es una conformación tridimensional. La estructura cuaternaria es la asociación de dos o más cadenas completas.(Wade 1993) Hay muchas clases de proteínas de acuerdo a la función que cumplen. Muchas proteínas cumplen con una función catalítica a estas se les conoce como enzimas. También hay proteínas en el plasma que se unen y transportan diferentes sustancias, por ejemplo la hemoglobina que se une al oxígeno y lo transporta en el torrente sanguíneo. Existen otras proteínas que el organismo usa para almacenamiento de nutrientes. Hay otras proteínas que tienen la capacidad de contraerse, cambiarse de forma y moverse. Algunas proteínas intervienen en la defensa de los organismos como las inmunoglobulinas. Algunas proteínas ayudan a regular la actividad fisiológica y celular. (Lenhinger) Las proteínas se pueden clasificar por su forma. Las proteínas globulares son cadenas polipeptídicas dobladas en forma compacta. Éstas son solubles en agua y se difunden fácil. Las proteínas fibrosas son insolubles, largas con cadenas polipeptídicas que se extienden y no se doblan. Hay una clase de proteínas filamentosas que participan en los eventos contráctiles. (Lenhinger) Muchas proteínas contienen solamente aminoácidos y no contienen otros grupos químicos. Estas son las proteínas simples. Sin embargo, hay otros tipos de proteínas que contienen otro componente químico además de los aminoácidos. A estas proteínas se les conoce como conjugadas. La parte que no es aminoácido se llama el grupo prostético. Las reacciones coloreadas en las proteínas se dan debido a la variedad de aminoácidos que reaccionan con varios productos. Muchas de estas reacciones son importantes para la detección y la estimación cuantitativa de proteínas y de sus aminoácidos constituyentes. Reacción de Biuret Los péptidos y proteínas producen una reacción coloreada muy usada para la valoración de los mismos, llamada reacción del Biuret. Las proteínas por sus uniones peptídicas reaccionan con los iones cúpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ó más uniones peptídicas para que se forme el complejo coloreado. Esta prueba sirve para la identificación de tripéptidos en adelante. (Wharton 1972) Un color violeta resulta cuando los iones cúpricos en medio alcalino se complejan con los electrones no saturados de los átomos de nitrógeno y oxígeno de los enlaces de todas las proteínas. La cantidad de color producido es proporcional a la concentración de proteínas y es medida espectrofotométricamente a 550 nm. (Wharton 1972) La intensidad del color es proporcional a la concentración de proteínas. Los compuestos que contienen – CH2NH2. Las proteínas dan color morado o violeta mientras que las proteosas o peptonas dan un color rosado y los péptidos dan un color rosado claro. Este método es generalmente aplicable porque el número de enlaces peptídicos por unidad de peso para todas las proteínas es casi el mismo. 1967) H -CO-NH-C-CO-NHR De los aminoácidos. (Wharton 1972) Las sustancias que dan el color violeta tienen dos grupos –CONH2 unidos directamente o por un carbono o nitrógeno. (Stawnton. (Stawnton. Los buffers tris así como otras sustancias encontradas en extractos de tejidos crudos interfieren con esta prueba. Los dipéptidos dan pruebas negativas. el método es un poco insensible siendo el límite menor de 0. Sin embargo.En soluciones alcalinas Cu+2 se complejan con las uniones de péptidos de proteínas resultando en la formación de un color morado. Las estructuras peptídicas se encuentran en proteínas y sus derivados contienen enlaces peptídicos también dan positivo para la prueba de Buiret. 1967) .25mg de proteínas. -C(NH)NH2 Y –CSNH2 en lugar de los grupos –CONHH2. Este efecto puede disminuirse con la adición de base. La presencia de sulfato de magnesio y muchas sales de amonio interfieren con la prueba. La gelatina da un color casi azul. la histidina da positivo. que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol) (Clark 1964) La adición de ácido nítrico concentrado a soluciones que contienen proteína generalmente causa la formación de un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo. Para determinar la cantidad y naturaleza específica de los carbohidratos se requieren otras pruebas.Prueba de Molisch La prueba de Molisch es una prueba cualitativa para la presencia de carbohidratos en una muestra de composición desconocida. (Clark 1964) Todos los glúcidos por acción del ácido sulfúrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfúricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. La mayoría de proteínas dan positivo en esta reacción. Esta reacción se debe a la nitración de anillos fenílicos en la tirosina. (Clark 1964) Reacción Xantoproteica Esta prueba sirve para caracterizar los aminoácidos bencénico. El color se empieza a convertir en anaranjado cuando la solución se vuelve básica. Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la muestra. Las proteínas insolubles cambian a amarillo y anaranjado en la superficie. (Stawnton 1965) . Las manchas amarillas en la piel se causan por el ácido nítrico son el resultado de una reacción xantoprotéica. fenilalanina y triptófano para dar sustitutos nitrogenados que se colorean anaranjado con la adición de base por la formación de sales. Estos compuestos furfúricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solución alcohólica de alfa-naftol). fenilalanina y triptofano. En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos tirosina. En torno a los grupos cargados. quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija. donde interaccionan con el agua mediante puentes de hidrógeno. la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa. Así. en función del pH del medio. El agua es el disolvente biológico por excelencia. En disolución acuosa. mientras que en la superficie aparecen diversos grupos con carga eléctrica. la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitará la agregación intermolecular y provocará la precipitación. terciaria y cuaternaria). de tal manera que la proteína presenta una capa de solvatación formada por el agua de hidratación. que es el agua retenida por las cargas eléctricas de la superficie de las proteínas. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización. (Wade 1993) Estado nativo Estado desnaturalizado . Los AA polares sin carga también se disponen en la superficie.Precipitación por desnaturalización selectiva. Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria. Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. los dipolos del agua se orientan conforme a la carga eléctrica de cada grupo. los residuos hidrofóbicos de las proteínas se acumulan en el interior de la estructura. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificación de proteínas. fuerzas de Van de Waals y los entrecruzamientos covalentes (uniones disulfuro). la desnaturalización es reversible. no son independientes entre sí. 2) pH y 3) solventes orgánicos. desde el secundario al cuaternario dependen de un conjunto de interacciones químicas.Una proteína desnaturalizada cuenta únicamente con su estructura primaria. la desnaturalización conduce a la pérdida total de la solubilidad. (Wade 1993) Todos los niveles estructurales de una proteína globular. La conformación final refleja un equilibrio de estas fuerzas: interacciones hidrofóbicas. en muchos casos. La desnaturalización por temperatura depende fuertemente del pH y viceversa. Por este motivo. la pérdida de la estructura en una parte de la proteína desestabiliza el resto. Los productos de desnaturalización en solución se agregan físicamente y según las condiciones de pH y fuerza iónica. En algunos casos. (Wade 1993) Tres métodos se suelen usar: 1) temperatura. pH y fuerza iónica deben estar claramente definidos. y hacen que el proceso sea irreversible. Si bien el fundamento de cada uno de ellos es distinto. ya que no todas la proteínas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. (Billi 2002) pH: Los pHs extremos causan desnaturalización porque áreas de la molécula proteica adquieren cargas. precipitan. que afecta las interacciones débiles como enlaces de hidrógeno. El proceso mediante el cual la proteína desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalización. enlaces de hidrógeno. (Billi 2002) . otras áreas pierden cargas que estaban involucradas en mantener la estructura. El cambio es abrupto. con lo que la proteína precipita. estructura primaria la que contiene la información necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuración. causando repulsión. interacciones iónicas. La formación de agregados fuertemente hidrofóbicos impide su renaturalización. (Billi 2002) Temperatura: Muchas proteínas se desnaturalizan por calor. En el fraccionamiento por solventes orgánicos. El cobre se reduce a Cu2O dando como resultado el color violeta que se observa cuando la prueba es positiva. El principal efecto es la reducción del poder de solvatación del agua que puede ser explicado en términos de una reducción de la constante dieléctrica del agua. Este proceso se ve favorecido a temperaturas mayores a 0°C. Este método tiene grandes desventajas: no todas las proteínas tienen precipitados parecidos y la precipitación ácida de materiales no proteicos interfiere. En condiciones controladas de temperatura. La estructura ordenada del agua alrededor de los aminoácidos hidrofóbicos es desplazada por el solvente. La reacción entre el reactivo de Biuret y las proteínas consiste en que los iones de cobre se complejan con los electrones si aparear del nitrógeno de dos enlaces peptídicos adyacentes.Solventes orgánicos: Los solventes orgánicos miscibles con el agua como el etanol o acetona producen una variedad de efectos que. (Clark 1964) Justificaciones Al agregarle el reactivo de Biuret a las soluciones proteicas y del aminoácido. combinados. Al agregarle ácido nítrico a las soluciones proteicas y del aminoácido. se nitrogenan los anillos fenílicos de los aminoácidos. la densidad óptica resultantes a 600m ofrece un método rápido y semicuantitativo para la determinación de proteína. tirosina. se debe esperar entre 15 y 30minutos para observar los cambios de color porque hay que dar tiempo para que reaccionen. . El hidróxido de sodio convierte el medio lo suficientemente básico de manera que ayuda a la precipitación y permite el cambio de color a anaranjado pueda darse. La principales causas de agregación de las moléculas proteicas son las fuerzas electrostáticas y dipolares. permiten la precipitación de proteínas. fenilalanina y triptófano y se forma un precipitado blanco que al calentar la solución cambia de color a amarillo. (Billi 2002) Cuando las proteínas se mezclan con bajas concentraciones de ácido tricloroacético o ferrocianida de potasio en ácido acético. concentración y tiempo de exposición a agentes precipitantes. se obtienen resultados de turbidez. (Billi 2002) La desnaturalización por solventes se debe a que las moléculas del solventes interfieren con las interacciones hidrofóbicas en el interior de las proteínas. The MacMIllan Co.La reacción de Molisch sirve para identificar la presencia de grupos reductores. TEXTBOOK OF BIOCHEMISTRY. por lo que son buenos agentes reductores. Debido a que el ácido sulfúrico está concentrado y las proteínas y el aminoácido están en solución acuosa. sustituyéndolo con grupos hidroxilo y dando como resultado proteínas desaminadas. 4ed. Sin embargo. El ácido tricloroacético es un ácido orgánico débil que además está en baja concentración por lo que al cambiar en poco el pH la precipitación por desnaturalización de las proteínas puede darse. Con esto se destruye la estructura de la proteína permitiendo que ésta precipite. El ácido clorhídrico es un ácido fuerte y al disminuir el pH de la solución se forman grupos protonados y por lo tanto con cargas que ocasionan repulsión entre varias partes de la proteína de manera que ésta pierde su estructura.H Freeman and Company. W. EXPERIMENTS AND METHODS IN BIOCHEMISTRY. Canada 349p. Además agregarlo lentamente puede facilitar la formación de dos capas. J EXPERIMENTAL BIOCHEMISTRY. P. Bibliografía Clark. D.p Wharton. Estados Unidos (1964) 228p. Edward. se actualizó por última vez en el 30 de Marzo del 2000 .p Stawnton. et. CollerMacMIllan.p.al. es necesario agregarlo lentamente por las paredes del tubo debido a que la reacción es muy exotérmica. que pueden reaccionar con el alfa naftol. Catania. Teresa Damiani. en el caso de la adición de ácido nítrico los grupos amino libres de las proteínas reaccionan con el ácido nítrico liberando nitrógeno. Estados Unidos (1967) 1595p. Al estar en un pH bajo por el H2SO4 los grupos amino y carboxílico libres de los aminoácidos y de las proteínas están protonados. http://www.com/laboratorio_de_quimica_2000/index.175/Temas. Se hizo la prueba de Biuret para determinar más de dos enlaces peptídicos. la caseína. Se hizo la prueba de Molish que determina la presencia de carbohidratos reductores y de esa manera identificar glucoproteínas si es que alguna lo era. la glicina. Una de éstas se realizó con un ácido orgánico débil. que dieron los mismos resultados. además de un aminoácido. el ácido tricloroacético. S. para comparar.92.htm Billi. Observaciones y Resultados .19.htm PostLab Propiedades químicas de las proteínas Resumen En esta práctica se realizaron tres reacciones de coloración con cuatro diferentes proteínas la peptona. la gelatina y albúmina. Resumen sobre precipitación de proteínas por desnaturalización Modificada el 7/02/2002 157. Además se realizaron tres reacciones de precipitación. También se realizó la prueba Xantoprotéica que determina la presencia de aminoácidos aromáticos.geocities. Las otras dos reacciones de precipitación con ácidos fuertes se realizaron una con ácido nítrico y la otra con ácido clorhídrico. El color rojo de los tubos de las proteínas para la prueba de Biuret indicó pruebas positivas. Tabla 1 Resultados de Pruebas de color Proteína 1 2 3 4 5 Albúmina Caseína Gelatina Peptona Glicina Biuret + + + - Molish ++ + +++ - Xantoprotéica + + + + - Tabla 2 Resultados de las pruebas de precipitación Proteína 1 2 3 4 5 Albúmina Caseína Gelatina Peptona Glicina Precipitación por ácidos débiles + - Precipitación por ácidos fuertes HNO3 + + - Precipitación por ácidos fuertes HCl + + - . Para la prueba de Molish. En la prueba Xantoprotéica el color anaranjado en los tubos de las proteínas indicaba la presencia de anillos bencénicos en aminoácidos. el anillo violeta en la interfase indicaba una prueba positiva. El color entre los diferentes tubos variaba de intensidad. El color y la intensidad del mismo varió entre las proteínas que dieron positivo. La glicina. no se midieron las cantidades exactas agregadas de cada reactivo y puede ser que para la peptona se haya agregado menos reactivo de Biuret que a las otras y por esto habían menos iones de cobre disponibles para reaccionar con ésta. Esto puede deberse a que como no eran pruebas cuantitativas. sino cualitativas. Sin embargo. De esta manera. El cobre del reactivo de Biuret interacciona con los electrones libres de los átomos de nitrógeno de los aminoácidos dando un compuesto de color característico. el ácido nítrico ataca al anillo bencénico dando la nitración del mismo y provocando la precipitación de la proteína. como es un aminoácido libre. En la reacción xantoprotéica. Entre los aminoácidos hay algunos que en su estructura tienen anillos aromáticos: la tirosina. no tiene enlaces peptídicos y por lo tanto no puede reaccionar con el reactivo de Biuret. el grupo nitro cambia a carboxilato dando un color anaranjado. todas reaccionaron positivamente dando un color rojo. De las proteínas usadas. Todas las proteínas dieron positivo para esta reacción.En la Tabla 1 y en la Tabla 2 el signo – indica una prueba negativa. por ser el aminoácido más sencillo y carecer de un anillo bencénico dio negativo para esta reacción. mayor intensidad de color en la Tabla 1) y el signo indica que sí hubo cambio en el color pero muy poco perceptible. la peptona aunque sí cambio de color no fue tan drástico como en las otras. el signo + significa una prueba positiva (a mayor signos +. La glicina. lo cual indica que en las secuencias de aminoácidos de los péptidos que las constituyen hay aminoácidos aromáticos. Discusión de Resultados La prueba de Biuret sirve para identificar cadenas polipeptídicas de más de tres residuos de aminoácidos. fenilalanina y triptófano. la glicina dio una prueba negativa. Todas las proteínas están formadas por cadenas de diferentes aminoácidos. . Al agregarle una base fuerte. Muchas proteínas solubles en agua pierden esa solubilidad en pH fuera de su rango de actividad biológica y precipitan. Otra opción es que de acuerdo a la intensidad del color hay más grupos de carbohidratos en unas proteínas que en otras. El cambio de pH de una solución de la glicina lo único que cambia es la carga neta. que ya había precipitado en el ácido tricloroacético. Conclusiones . Aunque se observó cambios en la intensidad de color y grosor del anillo como se aprecia en la Tabla 1 puede que se debiera a que en unos se agregó más del reactivo que en los otros. Fuera de los límites de pH. En esta práctica se usó para determinar si habían glucoproteínas. que es un ácido débil. no reaccionó. La glicina. las proteínas pierden sus estructuras tridimensionales desnaturalizándose. las proteínas que precipitaron fueron la albúmina. es decir las formas iónicas de sus grupos funcionales y esto no lo hace más o menos soluble en el agua. Se puede decir que las otras dos proteínas. En ácido tricloroacético. Las proteínas tienen un pH óptimo en el cual pueden realizar su funciones biológicas. la peptona y la gelatina son más estables a pH ácidos o talvez el pH en el que realizan sus funciones biológicas es ácido. Para las pruebas de precipitación con el ácido nítrico y con el ácido clorhídrico. Esto indica que la albúmina tiene una sensibilidad mayor a los pH ácidos. todas las proteínas reaccionaron. sólo la albúmina precipitó. como en las reacciones anteriores.La reacción de Molish sirve para determinar grupos de carbohidratos reductores. Sin embargo. y la caseína. La glicina no reaccionó porque no es un carbohidrato. Lípidos Los lípidos son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por carbono e hidrógeno y generalmente también oxígeno. Los lípidos dejan una mancha translúcida sobre la superficie del papel. las ceras y el colesterol. Es un grupo de sustancias muy heterogéneas entre las que se encuentran las grasas. el efecto que causaron en las proteínas fue el mismo. etc. los aceites.Son solubles en disolventes orgánicos. Además en la reacción xantoprotéica dio negativo porque carece de grupos aromáticos. benceno. . pero en porcentajes mucho más bajos. Los resultados de las reacciones de precipitación con los ácidos clorhídrico y nítrico fueron los mismos porque como ambos son ácidos fuertes y al estar en las mismas concentraciones se disocian de igual forma. nitrógeno y azufre. La intensidad del color de una reacción colorida y la cantidad de precipitado varió de una proteína a otra no sólo por la cantidad de grupos disponibles para la reacción en la proteína sino también por la cantidad de reactivos agregados. como éter. Además pueden contener también fósforo. La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo.Son insolubles en agua 2. la cual no se va con la acción del calor. pero no son adecuados para la identificación de aminoácidos. que sólo tienen en común estas dos características: 1. El hecho de que todas las proteínas hayan dado positivo para la reacción de Biuret indica que todas están conformadas por más de tres residuos de aminoácidos. cloroformo. También a los lípidos se los puede colorear con el reactivo Sudan III. Las reacciones realizadas en esta práctica pueden servir para determinar la presencia de ciertos grupos en una proteína. Clasificación de los lípidos Los lípidos se clasifican en dos grupos. son una mezcla de sustancias que se extraen de los frutos y las semillas de algunas plantas como el olivo. con lo que para acumular una determinada cantidad de calorías sólo es necesario la mitad de grasa de lo que sería necesario de glucógeno o proteínas. las sustancias que resulten podrán ser sólidas a temperatura ambiente. forman superficies protectoras en las hojas y en los frutos de los vegetales superiores.Simples 1. Grasas: Cada molécula de grasa esta formada por cadenas de ácidos grasos unidas al alcohol llamado glicerol o glicerina. Cada gramo de grasa produce más del doble de energía que los demás nutrientes.Lípidos saponificables A. . o liquidas. Otros. por eso.Céridos B. Muchos animales las almacenan en forma de grasas en el tejido adiposo. cuando el organismo la necesite. son poco solubles en el alcohol y se disuelven fácilmente en eter y otros disolventes orgánicos. diglicéridos y triglicéridos) 2. el girasol y el maíz. y también como componentes de la estructura de las membranas y actúan como detergentes biológicos.Fosfolípidos 2.Glucolípidos 2. se los denomina triglicérido. como las grasas animales. La mayor parte de los lípidos que consumimos son triglicéridos.Esteroides Los Lípidos que consideramos en este práctico son las grasas y los aceites. los esteroides y terpenos dan lugar a una enorme variedad de biomoleculas activas.Acilglicéridos (monoglicéridos.Terpenos B. Son de origen animal y a temperatura ambiente son sólidas. Las plantas lo almacenan en las semillas y lo van a utilizar como fuente de energía para el futuro embrión. Aceites: Son de origen vegetal y a temperatura ambiente se encuentran en estado liquido Los aceites forman parte de la dieta. Las grasas y los aceites son más ligeros que el agua e insolubles en ella. Las moléculas que constituyen a las grasas y los aceites se forman a partir de la unión de tres ácidos grasos con una molécula del alcohol glicerol o glicerina. como las ceras. (fosfolipidos). en la cutícula de insectos y en las formaciones epidérmicas de aves y mamíferos.Lípidos insaponificables A. Funcionalidad Biológica de los Lípidos Los lípidos desempeñan un papel fundamental como reserva energética en las células y organismos. Por ultimo. Según el tipo de ácidos grasos que forman a estas moléculas.Complejos 1. 1. que luego podrán ser utilizadas en la producción de energía. como los aceites vegetales. atendiendo a que posean en su composición ácidos grasos (Lípidos saponificables) o no lo posean (lípidos insaponificables). Una vez que se comenzó a realizar se anotaban los resultados. Este trabajo practico se divide en cuatro partes: * Solubilidad. y aceites esenciales que dan su olor característico a muchos frutos. Resultados Aceite con Acetona: Es Soluble Aceite con Agua: No es Soluble. * Tinción con Sudan III * Manchas en el papel * Emulsión (simular la acción de la Bilis) 1ra Parte Objetivo: Comprobar la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes solventes orgánicos. estrógenos) esteroles. De estos un 10% debe ser de grasas saturadas y un 5% de grasas insaturadas. Materiales: Método Aceite Alcohol Bencina Cloroformo Agua Dentro de seis tubos de ensayo. . caucho y algunas vitaminas. pero esta vez con manteca derretida. los segundos. toxinas y venenos. Luego se realizo el mismo procedimiento del aceite.como hormonas (testosterona. Hay ciertos lípidos que se consideran esenciales como el ácidos linoleico o el linolénico que si no están presentes en pequeñas cantidades producen enfermedades y deficiencias hormonales. Luego a cada uno de los tubos se les coloca diferentes disolventes orgánicos para que se pueda determinar la solubilidad de los aceites con los respectivos disolventes. A medida que se realizaba esto se anotaban los resultados. se coloco una pequeña porción de aceite. Aceite con Cloroformo: Es soluble Aceite con Alcohol: Muy poco Soluble. Necesidades Diarias de Lípidos: Se recomienda de un 20-30% de lípidos. los primeros. Alcohol y Benceno. y se hace un análisis espectro fotométrico. Cloroformo. en cambio. Bencina. Según las guías químicas es una reacción cualitativa. Acetona. Aceite con Benceno: Es Soluble. la leche. el Sudan III solo colorea a los Lípidos. a uno de ellos se le agrega unas gotas de tinta roja y al otro Sudan III. estos son todos disolventes orgánicos. Esto mismo se hizo con el azúcar. Aceite con Tetacloruro de Carbono: Es soluble. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con unálcali. 2da Parte Objetivo: Reconocer Lípidos con la Coloración de Sudan III Materiales Método Azúcar Clara de Huevo Leche Aceite Se colocaron dos tubos de ensayo con aceite. Esta reacción se debe a la presenciade un grupo fenilo en la molécula proteica. Por ende determina la presencia o no de proteínas. especialmente en presencia de tirosina. Los complejos de la molécula proteica que son de importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano. Esto se realizo para comprobar si es verdad que el Sudan III puede reconocer a los Lípidos. son en algunos casos más solubles o menos solubles en el Tetacloruro de Carbono. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que . Conclusiones La manteca y el aceite. la manteca y la clara de huevo. se torna color amarillo oscuro. A medida que se realizaba se anotaban los resultados en una tabla. mas no cuantitativa. Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Resultados Reacción xantoproteica La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. empleando ácido nítrico concentrado. Para cuantificar se usa otra reacción. como la de Biuret. y los lípidos son solubles en los mismos pero son insolubles en el agua. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos. ya que la tinta roja colorea a todo tipo de sustancias. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a sudesnaturalización por los agentes indicados. ácidos. y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. etc.Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. cambia a violeta en presencia de proteínas. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4). El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción. Coagulacion de Proteinas Las proteínas . forman con el aguasoluciones coloidales. junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo. Para ver la coagulación de las proteínas se puede utilizar clara de . por el color anaranjado de la reaccion final. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret. un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioletavisible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+). Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas con soluciones salinas. de color azul. pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalin (formación de ácido picrámico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reacción para identificar albúmina en orina. alcohol. debido al gran tamaño de sus moléculas. péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas. que al actuar sobre la proteina la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria .se realiza en el laboratorio. para conseguir más volumen puede prepararse para toda la clase una dilución de clara de huevo en agua. especialmente en presencia de tirosina. de forma que quede una mezcla aún espesa. . Reacciones coloreadas Reaccion Xantoproteica: Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero. La prueba da resultado positivo en aquellas proteinas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos. Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo. cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado.huevo. 1. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. 2. de solución problema (clara de huevo ). de HNO3 concentrado. 2. de albúmina de huevo.CO. 3. se forma una sustancia compleja denominada biuret. pero no los aminoácidos. Tecnica 1. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado. Enfriar en agua fría 5. Reaccion de Biuret La producen los péptidos y las proteínas.NH -)que se destruye al liberarse los aminoácidos. ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (. da una coloración violeta característica. Calentar al baño maría a 100: C. de fórmula: que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluída. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc.. 4. Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. . Añadir 1 cc.Tecnicas 1. 4. 4. Añadir 2 cc.2. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo. lo que nos sirve para identificar proteinas que tienen en su composición aminoácidos con azufre. Reaccion de los aminoacidos azufrados Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. de solución de hidróxido sódico al 20%. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. 3. de albúmina de huevo (clara de huevo). Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali. de solución de hidróxido sódico al 20%. Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. Añadir 2cc. del azufre de los aminoácidos. . Tecnica 1. Calentar el tubo hasta ebullición. 3. 2. A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. forma el sulfuro de plomo. utilizándose el azufre de los aminoácidos. Debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica. el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo. 5. 8 .790/048J5/486:0 .08 .30.:.484:-08030.24/07.0846:/.8.:..03. .797/0..32.86:0708:90354/7E38078O/.2:.7.01:9:7402-7O3 O .0908 O 7..85./0:3 /0J5/48 008948:3 /0-0807/07. 0897O0348 08907408 943...803090/4..O3/00307J.87.4480 /8:0./0.88:89.74.8.80305.8.85..8402.!./.438/07.2J10748 !47:924 48089074/0890750348/.08 89097.44 .50 2:8O3 82:.8.97.//0.:3.F7/4 $030954/0E.:0397.08./.803.87.-..07.947.803 .031E.4203/.20.5.03..O3/0./48340.03.303089.3 .907J89.030348 485720748..:3.9.424.848:3/..8034817:948/0 48.2-0390 .8:3/07..8.7.46:0834 089E357080390803506:0N.3/4047.//0-4240.8.009.2-F3.0390847E3.43:3.F7/48 .43899:03.../48 7..8486:01472. $43/04703.8 ..3.:.74/0:.8.0908801472..:.2-03908003.8.84:-/.39.4241:0390/00307J.902507.:.../4.2./08/01.88..84.8.84354.08..424.848.3 .848 .073.38248 9.03/04817:948.//07..8 4880:3/48 0.0908 1472.:.44034F3..9.090 .847.501:3/.848.03.43.2.81472.7../048J5/48 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