PRINCIPALES TÉCNICAS RÁPIDASDE LABORATORIO EN LA CLÍNICA VETERINARIA MVZ. EPCV. Mario Erasmo Zamora Martínez 1 2. se debe tomar en cuenta que algunas de las técnicas son pruebas primarias donde la especificidad es baja y por lo tanto se requerirán de pruebas secundarias. Esta prueba es buena por ser excluyente en su totalidad. no siempre. Por ejemplo si la semiología de un paciente sugiere dermatofitosis y las cuatro pruebas primarias son negativas (lámpara de Wood. 1. Yo excluyo demodicosis y debo saber que la lámpara de Wood y prueba de KOH son poco sensibles para hallar los agentes micóticos. El resultado de las pruebas bien realizadas ofrece al clínico un abordaje casi de inmediato a la posible causa de la enfermedad que cursa el paciente. tricografía y evaluación de pelo con KOH). Una última frase casi obligada para quien hace éste tipo de técnicas rápidas es NO INVENTAR HALLAZGOS QUE NO OBSERVO CON CLARIDAD. 4. raspado cutáneo. ¿LAS PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO SIEMPRE ME LLEVAN AL DIAGNÓSTICO FINAL? La respuesta es. Un ejemplo es cuando se sospecha de demodicosis. pues se cobra el estudio a realizar. ¿Sé usar el microscopio? ¿Tendré la paciencia para invertir algunos minutos a cada muestra? ¿Mis observaciones son fieles a lo que observo? ¿Cualquier personal de la clínica puede hacer el estudio o dependen de mí? ¿Capacitaré a las personas en las técnicas básicas? ¿Tendré calidad y control de los materiales conforme los uso y daré mantenimiento al microscopio siempre que sea necesario? Si está dispuesto (a) a llevar a cabo lo anterior. 6. Se puede sospechar pero no confirmar. pues se requiere de preparación básica en el uso del mismo y sobretodo paciencia. Entonces debo hacer un cultivo micológico para 2 . cinta adhesiva.PRINCIPALES TÉCNICAS RÁPIDAS DE LABORATORIO EN LA CLÍNICA VETERINARIA La realización de las técnicas de laboratorio dentro de la clínica veterinaria es una práctica utilizada por los médicos clínicos por ser métodos muy simples y que requieren material sencillo o no muy costoso. Hoy en día el médico veterinario tiene la obligación de respaldar cada resultado por escrito a los propietarios para que todo sea hecho con responsabilidad y dejar antecedente en el expediente de la prueba que se realizó. 3. Siempre es aconsejable emitir un resultado impreso de lo observado. 5. usted es un candidato (a) para emitir resultados en la clínica rápida y con ello una responsabilidad por cada hallazgo que usted observe. Este último concepto resulta de gran relevancia puesto que sin ello de nada sirven las técnicas rápidas de laboratorio. Sin embargo. tiempo suficiente para observar la totalidad de la muestra y atlas de imágenes como referencia para identificar mejor los hallazgos. Si el resultado es negativo excluye la enfermedad a excepción del caso del Shar pei. Así que debemos de preguntarnos antes de instaurar éstas técnicas en nuestra clínica veterinaria lo siguiente. La realización de la técnica de laboratorio pese a ser un método simple no siempre resulta fácil la técnica de observación al microscopio. Como se verá más adelante hay pruebas con alta sensibilidad y especificidad. A continuación se describen algunas de la técnicas que se aprenderán en este curso. En el caso de los estudios coprológicos suelen ser sencillos y útiles cuando se observan trofozoitos de Giardia duodenalis u ooquistes de Cystoisospora e incluso fragmentos de parásitos (proglotidos de Dipylidium caninum). Aclarando que también existe el pioderma primario. En el caso de realizar raspados en pacientes no convencionales como conejos con lesiones en oídos o erizos con alteraciones en el pelaje y sospechoso de ectoparásitos suele ser ideal realizar raspados. prueba con lámpara de Wood. raspados cutáneos.confirmar mi diagnóstico diferencial en base a las lesiones antes investigadas. cinta de acetato. 3 . prueba con hidróxido de potasio y citología (hisopados. improntas y aspirados). pues el diagnóstico es inmediato en caso de ser positivos a la presencia de los agentes causales. pero no es un diagnóstico definitivo pues debemos conocer la causa que provocó el desorden pudiendo ser un hipotiroidismo o incluso demodicosis. Otro ejemplo para clarificar el punto es el uso de la cinta adhesiva o de acetato. En un perro con lesiones se encuentran neutrófilos lo que significa que existe inflamación de tejido epitelial. el cultivo micológico es una pruebas confirmatoria y más específica para el diagnóstico final. entre ellos: coprología directa y por técnica de Flotación. En este caso sólo se halló el problema secundario a la inflamación de la piel. En este caso. después se observa al microscopio y así identificar con precisión al parásito. ooquistes y quistes de los diferentes parásitos. color. Lo anterior orienta a cierto tipo de parasitosis. Esto se logra gracias a que un gran número de parásitos eliminan quistes. NOTA: En caso de encontrar parásitos adultos. se pueden depositar en formol al 10% para su conservación y su posterior identificación. Un punto importante es revisar la TOTALIDAD DE LA LAMINILLA puesto que puede suceder que hasta el final de la preparación se halle un huevo de Toxocara canis o un ooquiste de Cystoisospora y con ello cambia el diagnóstico por completo. ooquistes. Casi cualquier estudiante es capaz de realizarlo siempre y cuando sea ordenado y metódico para observar la preparación. Sin embargo. así como la ciencia sigue avanzando junto con las técnicas de diagnóstico clínico e investigación.TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS La parasitología. ABORDAJE PARA LA DETECCIÓN DE ENDOPARÁSITOS Examen coprológico macroscópico: Esta consiste en analizar la muestra obtenida. presencia de sangre y moco. A continuación se muestra como se debe visualizar la laminilla de la preparación: 4 . larvas o fragmentos de éstos en las heces. También se debe aprovechar esto último para observar la consistencia. fácil de realizar y que toman poco tiempo. sencillas. La función primordial es buscar parásitos adultos (nematodos) o fragmentos de éstos (proglotidos) entre lo más común. En caso de encontrar fragmentos de parásitos cestodos (proglotidos) es necesario colocarlos en un portaobjetos y realizar una compresión con un palillo de madera para poder liberar las cápsulas ovígeras. Por ejemplo: diarrea con moco y sangre se sospecha de giardiosis o diarrea con sangre en coccidias. Las técnicas coproparasitoscópicas son económicas. El médico veterinario en la clínica tiene la facultad de realizar estas técnicas básicas que son útiles para el abordaje de un evento clínico. Hoy en día se utilizan técnicas avanzadas como biología molecular para el diagnóstico de parásitos. Éstos siguen siendo una herramienta utilizada en la clínica diaria y en los laboratorios clínicos veterinarios. En otras ocasiones puede hallarse el mismo protozoario en la fase de trofozoíto. ya sea recolectada con un asa coprológica o recolección del suelo. los estudios coprológicos que permiten la detección y la identificación de huevos. huevos. Se toma un pequeña cantidad de heces (ordinariamente es suficiente con la que se adhiere al termómetro). 4. quistes de los parásitos. Se pidió técnica de flotación y además como protocolo utilizamos el frotis directo. 6. por lo que puede ser impreciso y poco confiable el resultado de la técnica.. pequeños mamíferos y reptiles. no es muestra representativa. Se emulsifica la muestra. gatos. PROCEDIMIENTO DEL FROTIS DIRECTO 1. Verter el contenido en otro recipiente con la ayuda de un colador con el fin de quitar partículas grandes. 3. 5. En el coprológico directo se halló la presencia de trofozoítos de Giardia spp. 2. no dude en realizar un coprológico directo junto con la técnica de flotación.Frotis directo: El frotis directo es sencillo de realizar (ver procedimiento). 5 . La desventaja es la pequeña cantidad de heces que se utiliza. ooquistes. Cualquier solución lo suficientemente densa como para hacer flotar a los huevos como el sulfato zinc. Verter la sustancia colada en un tubo serológico 5. Se utiliza para detectar trofozoítos. Hay que cerciorarse que la capa sea lo bastante delgada para poder ser observada al microscopio. Colocar en un vaso una cantidad de heces del tamaño de una avellana (2 gramos). La diferencia en la gravedad específica de soluciones hace que se elevan las estructuras parasitarias. Pese a lo anterior no debe ser una técnica despreciada y la consideraríamos una prueba primaria para el descarte de parasitosis. 4. La mayor parte de las partículas fecales caen hacia el fondo ya que la densidad es mayor que la de la solución. Se recomienda realizar en muestras fecales de perros. Si en el área del laboratorio de la clínica u hospital llega una muestra abundante en bolsa o en un frasco. 2. Quitar la capa superficial del líquido del tubo mediante un asa de aluminio. Un ejemplo claro de lo anterior es cuando una muestra de una serpiente pitón llegó al hospital. Se coloca una gota de solución salina fisiológica sobre un portaobjetos. soluciones sobresaturadas de cloruro de sodio son muy utilizadas. 3. Agregar solución sobresaturada y homogenizar perfectamente las heces. Se utiliza el objetivo de 100 aumentos (10x) y para cerciorarse se utiliza el objetivo de 400 aumentos (40x). 6. Se recolecta la muestra directa del recto del animal con ayuda de un lubricante y asa coprológica. aves. quiste y ooquistes de protozoarios y huevos de helmintos. PROCEDIMIENTO PARA LA TÉCNICA DE FLOTACIÓN 1. mientras que en la flotación resultó negativo. Técnica de flotación: En esta técnica se dispersa una suspensión de material fecal en una solución de mayor densidad que los huevos. Esto puede ser con ayuda con un palillo de madera. Se coloca un cubreobjetos y se examina totalmente el frotis. Centrifugar a 1500 rpm por 5 minutos. Aquí se pone de manifiesto la importancia de realizar ambas técnicas y un correcto diagnóstico al paciente. 2012. Otra opción es añadir más solución saturada hasta el borde y colocar un cubreobjetos sin derramar solución. 6. a.7. 7. 10.1959 2. Ibarra FV. Ibarra FV. Esperar de 10 minutos y después colocar el cubreobjetos con ayuda de unas pinzas pequeñas sobre un portaobjetos. Figueroa JC. Tercera edición. 4. Sacar la rosca y añadir sulfato de zinc hasta la mitad. Laboratory Procedures for Veterinary Technicians. 8. III Artrópodos 1era edición. Hendrix C. 3. Revisar la totalidad de la preparación. Mosby. Alcalá YC. Estos kits contienen un vial con un filtro. Bibliografía 1. a.M. Laboratorio clínico en Medicina Veterinaria. Parasitología Veterinaria Vol 1. Introducir las heces y girar varias veces para disolver la materia fecal. Protozoarios 1era edición. 4. 5.2002. 8. PROCEDIMIENTO CON EL FECALYZER® 1. Observar al microscopio con objetivo de 100 aumentos (10x) y 400 aumentos (40x) con el diafragma ligeramente cerrado para observar mejor las estructuras parasitarias. Como opción recomiendo el uso de lugol de parasitología para ser más evidente los quistes de Giardia que por su tamaño es difícil de observar. Coffin DL. 3. Revisar la totalidad de la preparación. Parasitología Veterinaria Vol. 9. Quintero MTM. Añadir más sulfato de zinc hasta el borde sin que se derrame. Técnica de flotación con Fecalyzer®: Existen kits comerciales que se utilizan con el mismo principio como técnica estándar de flotación. Depositar varias gotas al centro de un portaobjetos. Tomar con la rosca del fecalyzer® una porción de muestra fecal. Vera YM. 2.2009 6 . Colocar el cubreobjetos Observar al microscopio con objetivo de 100 aumentos (10x) y 400 aumentos (40x) con el diafragma ligeramente cerrado para observar mejor las estructuras.Fourth edition. Colocar un cubreobjetos sobre el fecalyzer® comprobando que el líquido alcance el borde. resulta por lo tanto un reto en el diagnóstico. bioquímica sanguínea. Se aplica una pequeña gota sobre la hoja de bisturí. También refieren que debido a que la mayoría de los problemas dermatológicos presentan los mismos signos clínicos. 4. Utilizar con criterio los métodos complementarios de diagnóstico. un portaobjetos. los métodos complementarios de diagnóstico solo complementan los hallazgos clínicos. Los materiales necesarios para hacer un raspado son una hoja de bisturí. 5. hemograma. Realizar reseña y una buena anamnesis 2. La utilización no racional y azarosa de cualquier método complementario redundará en información confusa o fácil de malinterpretar. Como se mencionó más adelante. glicerina y un cubreobjetos. Notoedrex y Sarcoptes.2 Se consideran cinco pasos importantes para el diagnóstico. De hecho refieren que los pacientes que mayormente llegan a la consulta diaria son los que padecen trastornos cutáneos. urianálisis. Identificar lesiones primarias. Es necesario generar un pliegue cutáneo para exprimir los folículos pilosos (pellizcar) y así favorecer la salida de ectoparásitos como Demodex. 1 El abordaje diagnóstico consiste en realizar las técnicas básicas en la primera consulta con el fin de reducir la lista de diagnósticos diferenciales.1 NOTA: El siguiente escrito es somero y orientativo. Determinar un patrón de distribución. Después de raspar varias veces.1 Sin embargo siempre hay que tener en cuenta que las técnicas siempre son complementarias. secundarias y mixtas. la piel debe volverse rosa cuando los capilares se vuelvan visible y exudan sangre. Demodex. tal como lo dice el siguiente enunciado: En la dermatología. se puede tener pronto el resultado y la terapia o seleccionar pruebas adicionales como cultivo micológico. 1. Después se toma entre los dedos índice y pulgar de la mano y se procese a raspar suave y firmemente una y otra vez en la dirección del pelo. 3. El material va quedando adherido a la hoja de afeitar. Esto asegura que se recoge material de una parte lo suficientemente profunda de la piel 7 . Raspado cutáneo: El objetivo es diagnosticar enfermedades provocadas por ectoparásitos como Cheyletiella.PRUEBAS DIAGNÓSTICAS PARA PIEL Actualmente varios médicos veterinarios se han subespecializado en la dermatología y con ello aportado varias técnicas básicas de diagnóstico necesarias cuando se nos presentan pacientes con problemas de piel. como también ocurre en la mayoría de las áreas de la medicina de pequeños animales. Para mayor referencia es preferible dirigirse a textos especializados en dermatología. Hacer una lista de diagnósticos diferenciales. Dermatología de pequeños animales. casi siempre es diagnóstico de la enfermedad). Principal localización del ácaro Sarcoptes scabiei.como para recoger ácaros Demodex.V. Aunque su sensibilidad es baja (la observación de raspados negativos no excluye la enfermedad. Clínica de pequeños animales 3era edición. COMENTARIO Los raspados cutáneos no excluyen la enfermedad y se observan en cerca de 50% (baja sensibilidad). codos y tarsos y que presenten pápulas de ser posible. Dermatología de pequeños animales. Baja. 8 . Las lesiones inician como pápulas eritematosas. la observación de raspados positivos. Los ácaros prefieren los sitios de epidermis delgada. Morgan R. Las heces. Soluciones Saunders en la práctica veterinaria. Se observa a microscopio de 100 aumentos (10x) y 400 aumentos (40x). (Así se evita falsos negativos). Atlas en color y guía terapéutica. detritus y huevos y la acción irritativa dentro de las galerías ocasionan prurito intenso. Después se deposita en el portaobjetos extendiéndola y se aplica un cubreobjetos. Fernando Fogel y Pablo Manzuc. Es una técnica altamente específica (es decir. Los raspados son hasta un 50% a 75% son negativos. Esta sarna es altamente contagiosa entre los perros y se transmite al ser humano. Sólo el 20%) Los ácaros Sarcoptes sólo se encuentran en los exámenes de raspados cutáneos alrededor del 50%. Es necesario realizar entre 5 y 6 raspados para elevar la sensibilidad de la prueba. Dibujo 1.2 ESPECIFICACIONES POR AGENTE ETIOLÓGICO Sarna sarcóptica: Los lugares de elección son los bordes de los pabellones auriculares. AUTOR Dermatología canina para la práctica clínica diaria. Sarna demodésica: Los lugares de elección para realizar raspados son ventral al cuello. Fernando Fogel y Pablo Manzuc. Es recomendable para Notoedres cati raspar áreas de la cabeza. Principal localización del ácaro Demodex canis. Las cintas de acetato se observan directamente al microscopio sin teñir. Ácaro Otodectes y Psoroptes: Es común observarlos con el otoscopio en el perro y el conejo respectivamente. Es un acaro grande. seguida de engrosamiento de la piel. la cara y en miembros anteriores y posteriores. Cheiletielosis: Se pueden hacer raspados convencionales o improntas con cinta de acetato. pero en Shar-pei. Fernando Fogel y Pablo Manzuc. Los raspados convencionales se realizan sobre el lomo y dorsal del cuello. en los que los raspados pueden ser negativos aun en animales demodécticos. Es suficiente raspar de 2 a 3 veces a cada paciente. Sarna notoédrica: Es una enfermedad parasitaria causada de los gatos y caracteriza por presentar prurito. Los raspados que contienen pocos ácaros deben ser juzgados junto a la signología clínica. En la infestación temprana se observa una pérdida ligera de pelo en la cara y extremidades anteriores. 9 . Dermatología canina para la práctica clínica diaria. La prueba es altamente sensible (un raspado negativo excluye la enfermedad). cara y orejas que presenten costras y escamas. Es recomendable que el área muestreada presente comedones. AUTOR Dermatología canina para la práctica clínica diaria. Se realiza un raspado superficial. COMENTARIO *Es una prueba sensible. Se coloca el material en un portaobjetos con glicerina y se coloca un cubreobjetos. *Es muy poco probable observar Demodex en paciente no demodécticos. Para su recolecta es suficiente con raspado superficial e incluso el uso de un hisopo. La sensibilidad es del 90% y la especificidad del 100%. Dibujo 2. Más de 5 levaduras por campo es un sobrecrecimiento. El número oscila a una levadura por campo. Existe otra variante donde se desprende la cinta y se tiñe para después colocarlo en el portaobjetos con el material hacía abajo. Aunque no son tan fiables y cuantitativos como un cultivo. macrófagos. Después se observa para visualizar células. detritus celulares y agentes contaminantes. El portaobjetos así preparado se sumerge en los colorantes y luego se observa al microscopio óptico. Sarcoptes. Es recomendable usarlo con el diafragma ligeramente cerrado para mejorar la visualización. levaduras. La cinta adhesiva tiene la facilidad de poder llegar a sitios de difícil acceso como el espacio interdigital. 10 . piojos y Cheyletiella. Es útil para determinar las características superficiales de la epidermis. 3. Se aplica una pequeña gota de glicerina sobre el bisturí. ¿QUÉ SE PUEDE OBSERVAR? Bacterias: Existe microbiota bacteriana. Se recomienda quitar el filo a la navaja de bisturí con su propio empaque para evitar lesionar al paciente. El material quedará adherido a la superficie gomosa. incluso fagocitando bacterias. CITOLOGÍA DÉRMICA CINTA ADHESIVA: Es una de las técnicas que se utiliza con más frecuencia. Se deposita el material sobre un portaobjetos con o sin una gota de glicerina y se aplica un cubreobjetos. A 1000 aumentos.PROCEDIMIENTO PARA EL RASPADO CUTÁNEO 1. 4. sin embargo su número es escaso. 6. En exceso se interpreta como una infección de tejido epitelial (dermatitis bacteriana). Ectoparásitos: Se llegan a observar Demodex y huevos. (SIEMPRE REALIZAR VARIOS RASPADOS DE DIFERENTES SITIOS Y COLOCARLOS EN EL MISMO PORTAOBJETOS). este último es de mi preferencia debido a que actúa como cubreobjetos y se puede añadir aceite de inmersión y preservar la preparación. Luego se colocará sobre un portaobjetos con el material hacia arriba y se fija por los extremos. Se toma una cinta de acetato (cinta adhesiva transparente) y se aplica sobre la superficie a muestrear. Se observa en el microscopio en objetivos de 100 aumentos (10x) y 400 aumentos (40x) toda la laminilla. 2. ectoparásitos. Levaduras: Es un habitante normal. 5. Y entre 1 a 5 levaduras deben juzgarse junto con la semiología clínica. Se toma entre los dedos índice y pulgar y se procede a raspar una y otra vez hasta lograr un poco de sangrado. Células inflamatorias: Se hallan neutrófilos normales o degenerados. bacterias. Se genera un pliegue cutáneo para exprimir los folículos pilosos y favorecer la salida de ácaros (Demodex). 8. Restos de queratina: Se observan como espículas basófilas fuertes. Queratinocitos: Son células aplanadas y anucleadas. principalmente del género Alternaria. 3. 4. Se coloca por un extremo del portaobjetos. Partículas de polvo: Se observan como pequeñas estructuras de color refringente. PROCEDIMIENTO PARA LA CINTA DE ACETATO 1. Esporas ambientales: Se observan de color verde. a. 6.Macroconidios de hongos ambientales: Es usual ver estas estructuras. Entre el paso del alcohol y la solución eosinofílica (rojo) se debe quitar el exceso en una toallita y después pasar al siguiente colorante. ectoparásitos. 9. Cuando se sospecha de ácaros se usa aceite mineral para disolver el material recogido por la escobilla ótica. CITOLOGÍA ÓTICA Es una técnica útil para hallar bacterias. las erosiones. Y su presencia en exceso informa acerca del estado de limpieza del manto. Al final se enjuaga con solución destilada o directa al chorro y se procede a quitar el exceso con una toallita. Éste último objetivo es necesario para identificar levaduras y bacterias. la presencia de macroconidios es indicativa de micosis superficial. 400 aumentos (40x) y 1000 aumentos (100x). 2. FROTIS POR IMPRESIÓN DIRECTA: Se recoge exudado húmedo de las pústulas. Realizar tres improntas e identificar el oído muestreado. Se tiñe con hemocolorante rápido durante un minuto en cada solución. las úlceras o el drenaje de las lesiones. Nota: Algunos recomiendan evitar introducirla en el alcohol fijador y solo teñir con la solución eosinofílica y basofílica. En ningún caso. Se aplica sobre la superficie a muestrear presionando con fuerza. Los posibles hallazgos son las mismas que para una citología de cinta adhesiva. el extremo final del portaobjetos debe calentarse para ayudar que se derrita la cera y que el colorante pueda penetrar 11 . 5. Se coloca el acetato sobre un portaobjetos. Se identifica la zona en donde se hizo la impresión. Se toma una o varias cintas adhesiva no mayor al tamaño del portaobjetos. Si el material es muy ceroso. El portaobjetos se presiona contra la lesión cutánea y después se procede a la tinción con hemocolorante rápido. Para la identificación de bacterias y levaduras y se hace rodar el hisopo sobre un portaobjetos. levaduras. Se observa con microscopio con el objetivo de 100 aumentos (10x). 7. 2. lavados traqueobronquiales. masas en abdomen no identificadas entre otras muchas más. Para la identificación de microorganismos es necesario utilizar el objetivo de 1000 aumentos. En 12 . (100 x). linfadenopatías. FMVZ-UNAM México . Se clasifica generalmente en seis grupos. examinación de enfermedades metastásicas. 2003. INTERPRETACIÓN Orejas sanas: Promedio menor o igual a 2 levaduras Orejas sospechosas: Promedio de 2 y 8 levaduras Orejas con infección: Mayor o igual a 8 levaduras Con objetivo de 1000 aumentos Tesis: Determinación de la presencia y número De Malassezia pachydermatis en el canal auditivo externo de perros clínicamente sanos de la ciudad de México. 3. tejido normal o hiperplásico. *En el laboratorio en muestras con mucho sebo es recomendable con un encendedor aplicar un poco de calor para disminuir la grasa en la laminilla. Es recomendable frotar las paredes para obtener material representativo. La citología clínica casi siempre la realiza un patólogo clínico o anatomopatólogo ya que laminilla requiere de un tiempo determinado para hacer la lectura por más sencilla que parezca el caso.en la muestra. próstata con aspirados o lavados. sedimento urinario.D. pronóstico y manejo del evento clínico. (recordar que el conducto auditivo es en forma de L) por lo que se introduce hacía a un lado y luego se dirige hacia abajo. Un punto a favor para los que se quieren dedicar a la citología clínica es la “facilidad” de diagnóstico de ciertos procesos como abscesos. 4. CUADRO 1. De manera general la citología clasifica las lesiones para asistir con el diagnóstico. Como parte del curso se incluyó éste tema enfatizando lo inflamatorio y no inflamatorio y enviando siempre una o varias laminillas a un laboratorio de referencia mientras se gana experiencia en la citología clínica. Después se coloca el material sobre un portaobjetos (rotando el hisopo sobre el portaobjetos) De preferencia hacer tres líneas. Teñir la muestra con hemocolorante rápido. Las principales indicaciones para utilizar la citología clínica son en efusiones. algunos tipos de neoplasias como el tumor venéreo transmisible. neoplasia y muestra no diagnóstica (ver cuadro 1). infiltrado celular o inflamación. Nadia Josefina Pereira Lozada. CITOLOGÍA DE ASPIRADOS La citología es una técnica fácil. masa quística. citología conjuntival. masas subcutáneas.F. Además de la responsabilidad en la emisión de resultados. respuesta por daño tisular. PROCEDIMIENTO PARA LA CITOLOGÍA ÓTICA 1. microorganismos y elementos característicos de una lesión específica. organomegalia difusa. a saber. vaginal. 5. Se introduce el hisopo seco en el conducto auditivo. económica y mínimamente invasiva que evalúa muestras recolectadas por diferentes técnicas para observar células. cutáneas y lesiones ulcerativas. Y las anteriores pueden estar presentándose al mismo tiempo o estar coasociadas. Si persiste el sangrado. c. a. Algunas neoplasias están muy vascularizadas. Se sujeta y se delimita la zona a puncionar.D. Si existe sangrado. La jeringa acoplada se retira de la lesión pero cuando se interrumpe la presión negativa.Meyer. Canine and feline citology. repetir en otra zona (por ejemplo en los bordes laterales) d. Es recomendable realizar muestras de varias zonas de la masa mediante distintos intentos de recogida por separado.Saunders 2010. no a la mitad del aspirado porque se provocaría lesión. e.J. Meyer. R. 4. A color atlas and interpretation guide. 13 .E. b. intentar el aspirado solo con la aguja y si persiste. CUADRO 2. Si existe sangrado. jalando el embolo varias veces (pasando aproximadamente a través de dos tercios del diámetro de la masa. CATEGORÍAS GENERALES DE LA INTERPRETACIÓN DE CITOLOGÍA Tejido normal o hiperplásico Masa quística Infiltrado celular o inflamación Respuesta al tejido lesionado Neoplasia Muestra no diagnóstica Raskin. suspender el aspirado. Se introduce la jeringa de 5 o 10 mL y se aspira en el centro de la masa.estos casos junto con la respuesta esperada en el tratamiento es factible realizar éste tipo de técnica en la clínica. Se realiza rasurado o antisepsia del lugar a puncionar. El abanico se realiza sacando la aguja lo más posible y reintroduciéndola. 3. se extrae y se deposita en un tubo con EDTA y se realizan laminillas con un frotis terminal. realizar varias veces en abanico y depositar la muestra en el portaobjetos. 2. Se intenta de nuevo el aspirado si es que la masa persiste. La aguja puede ser redirigida hacía varias áreas diferentes en su interior (abanico) para obtener material suficiente. (Realizar varias preparaciones). PROCEDIMIENTO DE CITOLOGÍA DE ASPIRADOS 1. En caso de obtener líquido. pueden proporcionar información valiosa acerca del estado del ciclo ovárico. CITOLOGÍA VAGINAL El estudio de la citología vaginal es muy utilizada por médicos dedicados a la reproducción para conocer el estado hormonal de los pacientes. 14 . Es común el error de ir acumulándolas y luego se pierde la secuencia para la identificación. generalmente en combinación con análisis hormonales. Es necesario revisar una o dos laminillas para observar material (celularidad) para evitar dar muestras con material insuficiente y aprovechar que el paciente se encuentra todavía en la clínica. Identificar cada laminilla. 8. 7. parasitarios y levaduriformes. También es útil para abordar problemas inflamatorios. 6. observación de microorganismos bacterianos. La jeringa se separa de la aguja y el émbolo se retira hasta el final del cilindro. Eso se evita muchas molestias para el paciente y el propietario. La citología vaginal.5. Después la aguja se conecta de nuevo y su contenido se expulsa a un portaobjetos empujando rápidamente el émbolo hasta el final del cilindro. Disminuye el estradiol y se eleva la progesterona. Etapa Proestro (9 días) (Rango de 3-17 días) Células epiteliales Temprano Parabasales. Universidad Nacional Autónoma de México. Ingiriendo bacteria dentro de los neutrófilos puede ser vistos Ausente o en bajo número Puede haber gran cantidad de detritus. <5% de parabasales o intermedias. Canine and Feline Cytology. intermedias y pocas superficiales Tardío Superficiales (>80%) y células intermedias. 15 . Alta o baja concentración de progesterona. ausentes. Meyer DJ. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia.Eritrocitos Proestro Estro Diestro Anestro +++ ---- Neutrófilos Escasos Escasos Moderados Escasos Cuadro 3 Basales Escasas + ++ ++ Intermedias --+++ ++ Escamosas con núcleo Escasas ++ Escasas -- Escamosas sin núcleo + +++ --- Diplomado de citología del departamento de Patología.RE. número. de Superficiales progesterona. Estro (9 días) (rango de 3-21 días) >80% superficiales y escamosas anucleadas. A color atlas and interpretation guide. Predominan las Ausentes o Ausente Limpio o Baja parabasales e en bajo granular concentración intermedias. No es posible distinguir entre proestro tardío de estro en citología vaginal. Saunders 2001. Usualmente presentes Ausente Presente o ausente Presente Limpio Presente con frecuencia (pocos o muchos) Puede estar presente pero usualmente ninguno Presente. Diestro Abrupto (2 meses) disminución de superficiales e incremento de 15 al 20% de intermedias. Presentes Usualmente presentes Fondo Granular o sucio Limpio Poco o ausentes Estatus hormonal Eleva el estradiol y baja progesterona Pueden ser abundantes Presentes o ausentes.5 meses) Neutrófilos Presentes Eritrocitos Bacterias Abundantes o ausentes. Tabla del libro : Raskin. Anestro (4. por lo que la lámpara de Wood sólo es útil en aproximadamente el 50% de los casos de infección por M. no todas las cepas de Microsporum elaboran este producto celular. La técnica de hidróxido de potasio al 10 o 20% consiste en depositar dos gotas de KOH y luego calentarla (con una lámpara cercana) y esperar veinte minutos para que actúe el aclarador del pelo.2 Observación directa de agentes micóticos. 4. Las infecciones raras por M. Desgraciadamente. Aunque es una prueba muy específica si se realiza correctamente. A veces es necesario introducir hacia arriba de la vagina y luego redirigir hacia caudal. Esto para obtener material representativo. 2. Las artrosporas se hallan casi siempre rodeando al pelo deformado y si se mueve el micrométrico. gypseum. Prueba de Hidróxido de potasio (KOH): Es una técnica primaria y previa al cultivo. Teñir la muestra con hemocolorante rápido. Se expone durante 10 a 15 minutos. El resultado también puede ser falso positivo en los casos en lo que hubo aplicación de soluciones tópicas y debido a la fluorescencia de las escamas. Es una prueba primaria utilizada en la clínica para observar ciertos dermatofitos. La técnica consiste en observar las artrosporas o artroconidias de los dermatofitos que se hallan rodeando las vainas de los pelos infectados (pelos esporados). M. audounii. distortum y Trichophyton schoenlenii también pueden emitir fluorescencia. principalmente Microsporum canis.PROCEDIMIENTO DE LA CITOLOGÍA VAGINAL 1. para evitar la rotura de células. Se recogen pelo de la periferia de la lesión con ayuda de pinzas. MICOLOGÍA Lampara de Wood: Una lámpara de Wood es una fuente especial de luz ultravioleta (UV) con una longitud de onda de 340 a 450 mm. 3. A continuación se transfiere las células a una laminilla. no es una técnica sensible para el diagnóstico de dermatofitos si la realiza un clínico inexperto. Esta combinación única hace que los metabolitos del triptófano que producen algunas cepas de M. Todas las infecciones por dermatofitos deben confirmarse mediante cultivos de hongos. De preferencia hacer tres líneas. La lámpara debe ser encendida 10-15 minutos antes de ser utilizada para que alcance la longitud adecuada. El examen debe realizarse en una habitación oscura. Esta técnica no puede aplicarse para identificar las especies de Trichophyton ni M. se raspa suavemente la pared vaginal. Consiste en exponer a una luz UV las áreas afectadas para poner en evidencia la fluorescencia amarillento/verdosa emitida por el hongo. 16 . Se introduce el hisopo seco (algunos recomiendan aplicación de solución salina fisiológica) en la vagina en dirección caudal. se ven refringentes. Una vez que se encuentra craneal al orificio uretral. Los pelos positivos son los que se envían para cultivo micológico. canis produzcan este color característico. De la zona a muestrear se limpia con alcohol el pelo y la piel. canis. haciendo rodar suavemente el bastoncillo y ejerciendo una presión mínima. Se suele observar el desarrollo de múltiples hongos ambientales (Alternaria sp. característica propia de los dermatofitos). enfermedad endocrina).3 La punta del pelo: Se examina para conocer si el paciente tiene prurito o si la causa de la caída del pelo no es traumática (p. Cultivo micológico en medio de prueba para dermatofitos (DTM): Es una técnica muy sensible y especificas. En la mayoría de las razas la mayor parte del pelo está en una fase telógena. Los cultivos confirman las micosis superficiales y los negativos lo descartan. LA RAÍZ Y EL EJE DEL PELO) Es una técnica útil para la evaluación de las fases de crecimiento del pelo.2 TRICOGRAMA (EVALÚA LA PUNTA. Se observa con microscopio de 100 aumentos (10x) y 400 aumentos (40x).ej. Se utiliza aceite mineral para fijar y se examina en objetivo de 10 aumentos (10X) y 40 aumentos (40X). telogen o catagen en un intento de determinar si los folículos presentan un ciclo normal. Con la ayuda de pinzas. el extremo se verá deshilachado. En las razas 17 . 2. buscar infecciones de pelo por agentes micóticos (artroconidias). Es necesario revisar el cultivo cada 2 a 3 días durante 14 días como mínimo. 3 Se recomienda que una vez tomado el pelo. aunque de forma diferida (consumo tardío de proteínas. El DTM tiene un indicador de rojo de fenol (lo cual indica consumo inicial de proteínas. Aspergillus. y debe contener pelos y escamas. 3 Raíz del pelo: Útil para determinar la fase del pelo. 3. Anagen. pero deberían identificarse algunos pelos anágenos. La muestra debe ser tomada de los límites de una lesión sospechosa. Se coloca el hidróxido de potasio al 10 o 20% en un portaobjetos y se deja reposar de 20 a 30 minutos. (el calor es opcional). Penicillium sp) que pueden virar el color del DTM. 4. se obtiene pelo de la periferia de las lesiones nuevas. El pelo se ve hinchado e irregular. Es necesario visualizar siempre estos estudios para evitar confusiones con estructuras propias del pelo. si se rompe.Si hay ectotrix la corteza del pelo aparece hinchada y dañada y. defecto de la pigmentación entre otros más. mantenerlo en la posición adecuada para que todos los folículos este del mismo lado y sea fácil su observación.3 PROCEDIMIENTO 1.3 Se toma una pequeña muestra de pelo para examinarla. agentes parasitarios (ácaros). Manzuc P. 4. Elsevier Saunders. A veces se utiliza el KOH para disolver el exceso de queratina. Forsythe P. Dermatología de pequeños animales. En la pediculosis y cheiletielosis pueden apreciarse los huevos del ectoparásito adheridos al eje del pelo.Meinkoth JH. Cirugía y Zootecnia en perros y gatos. Luis Ramón Nolasco Espinosa. Raskin RE. Tyler RD. Cowell RL. Atlas en color y guía terapéutica. Segunda edición. Universidad Nacional de México. Módulo de dermatología. Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat 3era ed. Soluciones Saunders en la práctica veterinaria.2008 6. con relativamente poco pelo en fase telógena. Medleau F. Fogel F.Hnilica KA. Patel A. Meyer DJ. 2007. Saunders. 5. Diplomado a distancia en Medicina.con períodos de crecimiento largos (caniches). Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. casi la totalidad del pelo puede estar en una fase anágena.3 Eje del pelo: En los pacientes con dermatofitosis a veces pueden observarse dermatofitos en ectotrix. Mosby. Dermatología canina para la práctica clínica diaria.2001 18 . Denicola DB.3 Si hay ectotrix la corteza del pelo aparece hinchada y dañada y. 3. Buenos Aires: Inter-Médica 2009. si se rompe.3 Bibliografía 1.2011 2. Atlas of canine and Feline Cytology. el extremo se verá deshilachado (como una escoba). Dermatología en pequeños animales. 1era edición.
Report "Principales Tecnicas Rapidas de Laboratorio en La Clinica Veterinaria"