Práctica #4 de Microbiología GeneralMétodos de Cultivo de Microorganismos Introducción: Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la temperatura, aireación la luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio. Objetivos: Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Organizar el material para su fácil manejo e identificación. Manipular adecuadamente los cultivos puros. Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos específicos. Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscópico y microscópico de bacterias. Marco Teórico: Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro o axénico, cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios. Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula. Los cultivos axénicos son muy raros en la naturaleza. En los medios naturales -por ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo humanoexisten cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven muchas y diferentes especies de forma conjunta. Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el laboratorio. A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones especiales, ya que los microorganismos están por todas partes, en la naturaleza, en el laboratorio yen los instrumentos y recipientes usados en los experimentos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir, una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o liquido, esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo microorganismo del resto y se podrá multiplicar en condiciones favorables. Un clon está constituido por una población de células así como de los diferentes medios de cultivo tiene aplicaciones específicas. la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero. Estos incluyen el área de trabajo. de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden continuar. Un cultivo líquido puede ser transferido mediante un asa microbiológica. cable de Kolleo portasa con alambre de platino dispuesto en forma de: aguja. Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama técnica aséptica. el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como: La contaminación y pérdida del cultivo en estudio La salida y dispersión de microorganismos del cultivo. Una colonia es un clon lo suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un medio sólido. lo que es innecesario. Con relación a la concentración del inóculo. será más que suficiente para efectuar una transferencia exitosa. asas de inoculación. el lavado de las manos.descendientes de un solo microorganismo. La desventaja que presentan. lo que ocasionaría la contaminación de utensilios. las poblaciones se encuentran suspendidas y e fácil homogenizarlas. Para impedir la contaminación de los cultivos. productos y del personal. Una colonia de bacterias del tamaño de la cabeza de un alfiler contiene varios millones de microorganismos. se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta Pasteur. hisopos. es obvio que con una cantidad pequeñísima (casi invisible) que se adhiera al asa. por otra parte. Los medios semisólidos e preparan en tubos. pipeta Pasteur. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz. asa. espátula y/o gancho. se homogeniza y se deja solidificar. pipeta (para uso microbiológico son terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con filtro de algodón). En esta transferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a: no introducir microorganismos indeseables (contaminantes) y concentración o carga microbiana de la muestra (inóculo) a sembrar. la esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar la transferencia del microorganismo en una zona estéril. un error frecuente del principiante consiste en tomar muestras grandes. un hisopo. Los medios sólidos e preparan en tubos . Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes requerimientos de oxígeno. de este modo en la transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente. Este último aspecto es particularmente importante cuando se trabaja con cultivos de microorganismos patógenos. Una de las ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios. el inóculo se deposita dentro del caldo o medio líquido. es necesario tener plena conciencia de la ubicuidad de los microorganismos. lo que determina que el aíre y todas las superficies estén densamente pobladas por microorganismos. La utilización de estos dispositivos. pipetas o pipetas Pasteur que deberán esterilizarse previamente. lo que permite estandarizar la concentración del inóculo. en este último caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado líquido y a una temperatura de aproximadamente 42ºC se agrega el inóculo. Por ejemplo: los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodón o tapones especiales. se deben tener una serie de cuidados que eliminen los riesgos de contaminación. e que en ellos e difícil detectar contaminación a simple vista. Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas: hisopo. En la transferencia de microorganismos se emplean agujas. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a través de todo el líquido. debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo. pipeta o pipeta Pasteur. en este tipo de cultivos. elevación y color de las colonias. se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza. a estos agregados se les denominan colonias. se desarrollan en un rango muy amplio de temperatura. En cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH. formación de esporas. La siembra se realiza con el asa. pH y condiciones gaseosas. La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con aíre seco. no todos los microorganismo crecen en presencia de oxígeno atmosférico. El desarrollo de estos diferentes grupos e favorece mediante la agitación de los cultivos o mediante la exclusión de oxígeno para lo que se emplean sustancias reductoras o equipos especiales. el crecimiento de cualquier cultivo experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por más de nueve días. Con relación a las necesidades gaseosas. los microorganismos al multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a simple vista. comensales o mutualistas. pero sólo lo utilizan cuando éste existe en concentraciones reducidas.o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades. otros requieren temperaturas más elevadas (30 a 45ºC) y algunos hasta 80ºC. en la superficie o en el interior de plantas y animales incluyendo al hombre. lo que determina la deshidratación de los medios de cultivo. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para caracterizarlas incluyen: tamaño. en estos medios. Existe una cuarta categoría que comprende bacterias que requieren oxígeno. Por lo tanto. movilidad. morfología celular. Pueden vivir en forma libre o en simbiosis con otros organismos. Con este mismo propósito durante la incubación se deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismo en estudio. presencia de inclusiones de reserva y características culturales en medios líquidos y sólidos en los que presentan patrones de desarrollo en cuanto a la forma. algunos requieren de pH alcalino o ácido. los que sólo crecen en presencia de aíre se llaman aerobios obligados. . reacción a la tinción de Gram. forma de agrupación. habitan en el agua. ya sea como parásitos. hay bacterias móviles e inmóviles fotosintéticas y quimiotróficas. inoculando la superficie del agar con mucha suavidad. los que sólo crecen en ausencia de oxígeno se denominan anaerobios obligados o estrictos. después de esterilizarlos. un tercer grupo se adapta a las dos condiciones y se le conoce como facultativos. ya que aún cuando la mayoría de los microorganismos crecen mejor en pH neutro. Fisiológicamente este grupo presenta características muy variables. En general las incubadoras microbiológicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de temperatura requeridas por los microorganismos. el suelo. Las bacterias son organismos procarióticos. en tanto que para lo microorganismos que presentan su crecimiento óptimo a temperaturas entre 20 y 25ºC se pueden incubar en la gaveta o cajón del laboratorio. El crecimiento óptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que la mayoría de las veces están relacionadas con la de su hábitat natural. las que presentan características que varían con el tipo de microorganismo cultivado y el medio de cultivo empleado. tamaño. Algunos microorganismos crecen por debajo de 15ºC. autótrofas y heterótrofas. por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecerá el crecimiento del microorganismo de interés y la obtención del cultivo. a temperatura ambiente. estos se inclinan o vierten en cajas de Petri. a estos se les llama microaerofílicos. Para alcanzar y mantener estas temperaturas se puede usar una incubadora microbiológica o un baño de agua a temperatura constante. Para estar seguro de que el cultivo es puro. mediante un balanceo sucesivo y rápido de la muñeca. inocula la muestra en un extremo de la placa y con el asa en posición ligeramente horizontal realiza las estrías (muy juntas). se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente. Se lleva la placa a incubar. Regresa la caja a su tapadera. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula. A continuación. Este proceso se repite sucesivamente. no podemos asegurarlo. previamente esterilizada. 4. flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estría. para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico. 3. Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado número de bacterias. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. siempre en posición invertida. se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica. se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías. Procedimiento: 1. Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa. casi con toda seguridad. 5. tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estrías en una región nueva de la placa. ahora. repetir el proceso entero. Esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero Introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra Sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en una placa Petri. toma una placa con agar estéril (donde se vaya a sembrar) y con cuidado de no romper el agar. cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. y Volver a esterilizar el asa. lo que permite obtener colonias separadas en 3 y 4. Se flamea el asa. Para ello. a la temperatura adecuada. las placas se incuban en un lugar adecuado. Con un asa de siembra. conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. 2. Quizás. serán. Por tanto. para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una segunda placa. cultivos axénicos. en la superficie de medio sin sembrar aún. se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de la superficie de la placa con medio. hasta conseguir que los grupos de células se diluyan y se separen células aisladas. dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez. . en forma de estrías muy juntas. Estriado en cuadrantes: La mayor parte del inóculo e descarga en los cuadrantes 1y 2.Técnicas de Siembra: Método: Siembra por Estrías en Placa Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Técnicas de Estriado: 1. Después de la incubación. Cercas del mechero espera que se enfríe el asa y toma una colonia de la placa. permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). A continuación. Las colonias que se desarrollen la segunda vez. se flamea el asa. Estriado simple o continuo: Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri que contiene el medio de cultivo sembrado. oscilando el asa de siembra sobre la superficie de una porción pequeña del agar. pero sin hacer presión para no dañar el medio. 2. se desarrollan colonias aisladas. una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107 veces para obtener una suspensión con un centenar de células por mililitro. Rotular los tubos con las diluciones. pero a veces de cien en cien. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. Como en el método de siembra por estría. 8.1ml de cada dilución. Estos movimientos se realizan con el fin de dispersar la mezcla. mezclar bien con movimientos suaves. igualmente estéril. Por ejemplo. Verter aproximadamente 15ml de agar nutritivo licuado y enfriado a 45-50°C a cada una de las placas Petri rotuladas igual que los tubos. Para realizar diluciones de diez en diez. no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. se realizan diluciones seriadas (en varias etapas). Incubar en posición invertida a 37°C por 24horas. las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Repetir el mismo número de veces. Inmediatamente colocar 0. La siembra se efectúa utilizando el asa o aguja bacteriológica que permita una desiminación de los gérmenes en el medio de cultivo. describiendo círculos en el sentido de las agujas del reloj. Método: Transplante o Resiembra Para el mantenimiento. . A continuación. las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. normalmente de diez en diez. 3. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Por tanto. dejando las células microbianas sobre la superficie. En el método de vertido en placa. en el sentido contrario. La suspensión se absorbe en el agar. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes. por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. 11. Tomar 3 tubos conteniendo 9ml de SSP. se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina. que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Mover las placas de atrás hacia adelante seis veces. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría. 5.Métodos: Vertido en Placa y Extensión en Placa En estos métodos. Homogenizar las muestras a estudiar. 7. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos. Extraer 1ml de esta mezcla y llevar al segundo tubo. Las diluciones son: Tubo 1: 1/10. 9. 4. las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar. se puede proceder de dos maneras diferentes. Tubo 2: 1/100. en tres placas Petri diferentes. Usando técnicas de asepsia transfiera 1ml de la suspensión microbiana al primer tubo. 2. Dejar enfriar en posición horizontal. estudio y preservación de los cultivos puros se necesita realizar resiembras de los cultivos a los medios frescos. Tubo 3: 1/1000. Procedimiento: 1. 6. Posteriormente mezclar. 10. En el segundo método (extensión en placa). Mover las placas suavemente seis veces. Repetir esta operación hasta completar 3 tubos. extendiéndolas con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. enrollado. 7. Consistencia: Dura. hilante. Tubos con agar nutritivo recto. Crecimiento limitado a la línea de inoculación. Consistencia de Crecimiento: Butiroso. Con la mano izquierda tomar un tubo con la fuente de inóculo. lobulado. rugosa. 5. convexa. moderada. 6. irregular. elevada. En todos los cultivos realizados. blanda. 2. Margen: Entero. Crecimiento superficial. filamentosa. Elevación: Plana. Procedimiento: 1. 4. picar la colonia y volver a flamear el tubo para proceder a colocar su respectivo tapón de algodón. 5. Cantidad: Escasa. 3. liso o presentando irregularidades. 4. Opaca: No permite el pasaje de la luz. 3. ondulado. Margen o borde de crecimiento: uniforme. crenado. se puede distinguir: Características morfológicas de las colonias: 1. Superficie: Lisa. circular. Forma: Puntiforme. Iridiscente: Con reflejos metálicos cuando se expone a la luz. viscoso. 2. ondulado. Color específico. etc. 5. . mucosa. Cepas en medios líquidos y sólidos: Bacillus sphaericus. 4. 3. Con el aguja o el asa de Kolle. rojo. Translúcida: Sólo permite el paso de escasa cantidad a la luz. Características de crecimiento en estrías sobre agar inclinado: 1. Suspensión en medio líquido. Estrías en agar inclinado. Crecimiento con propagación fuera de esta línea. fusiforme. Pseudomonas sp. 3. azul. Características ópticas de las colonias y pigmentación: 1. amarillo. Crecimiento en cultivo por picadura: 1.Materiales: 1. 4. 3. rizoide. Tubos con agar nutritivo en pico de flauta (inclinado). pulvinada. Tubos con caldo nutritivo. 2. Con la mano izquierda tomar el tubo con el medio a sembrar y destaparlo con el dedo meñique de la mano derecha. Destapar el tubo con el dedo meñique de la mano derecha y sostener el tapón entre los dedos. fibroso. Pigmentación: Coloración del cultivo verde. Butirosa: Con aspecto semejante a la grasa. Flamear la boca del tubo y el aguja o asa de Kolle. Asa y aguja de Kolle. 3. Flamear el tubo y hacer la siembra del inóculo por: Picadura en agar recto (aguja). 2. filamentoso. 5. 2. Pigmentación: Ninguna. abundante. radiada. Colocar en la estufa para su incubación a 37°C por 24horas. en profundidad o ambas a la vez. 2. Bacillus subtilis. 4. llamados anaerobios . Para disminuir los cambios de pH en los medios definidos se suelen utilizar tampones. Pero. abundante. a menudo el crecimiento microbiano lo modifica. la temperatura del cuerpo humano. pero esto no es suficiente. sin llegar hasta un punto en el cual se dañan las proteínas. a frutas aromáticas o imperceptible. o matraces. o estufas. Condiciones Ambientales Idóneas para Microorganismos en Laboratorio el Cultivo de Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un microorganismo necesita para crecer. y que suele ser la de su medio natural. Así pues. Temperatura Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual presenta su crecimiento óptimo. según el caso. pH El pH óptimo depende de la especie bacteriana. En los medios complejos no suele ser esencial. Los medios líquidos. Otros microorganismos. o bien. las bacterias se suelen cultivar a la temperatura más alta a la cual crecen bien. Los cultivos se mantienen a temperatura constante en incubadores o en baños de agua. pero cada una de ellas crece en un intervalo de pH relativamente estrecho. tubos de ensayo. se encuentra en el intestino humano y de otros mamíferos. pero si se desea que actúen como tampones se precisarán cantidades mayores. distribuidos en tubos o matraces. Estos baños resultan cómodos para incubar los cultivos que tienen que manipularse con frecuencia. Oxígeno La concentración de oxígeno del medio es un determinante crítico para el crecimiento bacteriano. 2. Algunos microorganismos. con respecto al oxigeno. a los cuales se denomina aerobios estrictos. en la misma mesa de trabajo. moderada. Este microorganismo crece óptimamente a 37ºC. crecimiento limitado a la superficie. porque algún producto de su metabolismo es un ácido o una base. Escherichia coli la bacteria que más frecuentemente se utiliza en investigación. los microorganismos crecen más rápidamente cuando se aumenta la temperatura. son cámaras con aire adecuados para el crecimiento tanto de cultivos sólidos como líquidos.5 a7. Tanto la temperatura como el pH deben estar dentro del intervalo apropiado. será aportado o eliminado. Esto sucede porque algunos microorganismos usan selectivamente algún componente ácido o básico del medio. porque sus materiales naturales actúan como tampones débiles.5 y 6. preparados en cualquier recipiente. Los incubadores. Sin embargo. en general. 3. Casi todas las bacterias crecen mejor a valores de pH próximos a la neutralidad.5. ambos controlados termostáticamente. incluyendo placas Petri. también es preciso aportar las condiciones ambientales adecuadas. para favorecer un crecimiento rápido. Cantidad: Escasa. no pueden vivir sin oxígeno porque lo necesitan para obtener energía. desarrollo que se acumula como sedimento (granuloso o viscoso).Crecimiento en caldo nutritivo: 1. En el laboratorio. Distribución en caldo: Uniformemente distribuido. también pueden ser incubados en baños de agua caliente. los hongos crecen mejor entre 4.0. Ambos se añaden normalmente como nutrientes (fuente de fósforo y calcio). en el intervalo de 6.Aunque el pH de un medio sea el adecuado cuando se inicia el cultivo. Olor: Pútrido. Los tampones más eficaces para valores neutros de pH son los fosfatos y el carbonato cálcico. pueden crecer tanto en presencia de oxígeno como en su ausencia. Muchos laboratorios poseen una colección de cepas que se han aislado en el mismo o que han obtenido de las denominadas colecciones de cultivos tipo. no pueden vivir en presencia de oxígeno. en los cuales se haya eliminado totalmente el oxígeno y se haya remplazado por un gas inerte como nitrógeno o argón. o que crecen más rápidamente en su presencia. especialmente cuando el dióxido de carbono les favorece. que mezclan el aire con el cultivo. mientras se fuerza a que pasen a través de ellos enormes cantidades de aire. que son plataformas en las cuales se pueden colocar los matraces convenientemente sujetos. A veces. como los que se utilizan para producir antibióticos. es un desafió para la ingeniería. Los organismos microaerófilos requieren ambientes con bajas tensiones de oxígeno. Muchos microorganismos anaerobios se pueden cultivar en tubos de ensayo expuestos al oxígeno.estrictos. Los anaerobios facultativos utilizan el oxígeno si disponen de él. sí el medio contiene un compuesto químico que reaccione con el mismo. Esto se puede llevar a cabo haciendo resiembras en un medio fresco. el hidrógeno reacciona con el oxígeno en presencia de un catalizador. donde los técnicos trabajan con máscaras de oxígeno. se utiliza una corriente de nitrógeno para sacar el aire de la vasija. pueden cultivarse en jarras de cristal herméticamente cerradas. A los cultivos que se mantienen en el laboratorio para su estudio y como referencia se les denomina cultivos de colección. Los microorganismos anaerobios estrictos. Suministrar oxígeno a las bacterias que lo necesitan para crecer. mensualmente o con otra periodicidad. como las bacterias del ácido láctico. dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar. Es frecuente el uso de cámaras libres de oxígeno. Los organismos aerobios que crecen en la superficie de las placas de agar. También ha sido utilizada para microacrófilos. que reacciona con el oxigeno manteniendo la parte inferior del tubo libre de oxígeno. También se puede llevar a cabo una eliminación química del oxigeno. las altas tensiones. el cual es beneficioso para ciertos microorganismos) es encender una vela dentro de un recipiente y cerrarlo herméticamente. Esto se lleva a cabo haciendo pasar una corriente de aire a través del cultivo o agitándolo vigorosamente de forma continua. La exclusión del oxígeno del ambiente de los anaerobios también plantea problemas técnicos. se comercializan paquetes con unas mezclas (le reactivos que producen hidrógeno cuando se les añade agua. para ser sometidos a un movimiento de rotación o a una agitación de vaivén. obtienen suficiente cantidad de oxígeno de la atmósfera. porque no existe demasiado oxígeno disuelto en el agua y los microorganismos aerobios lo consumen rápidamente. como los anaerobios facultativos o los anaerobios aerotolerantes. Algunos laboratorios tienen habitaciones libres de oxígeno. Por tanto. si estas se incuban dentro de unos contenedores. Un método muy sencillo para disminuir la concentración de oxigeno (y al mismo tiempo producir anhídrido carbónico. En casi todos los laboratorios de microbiología existen agitadores. Conservación de los cultivos axénicos Una vez que se obtiene un cultivo axénico. se tendrá que suministrar. Para ello. para ellos es un agente tóxico. Esta técnica se utilizaba para cultivar anaerobios aerotolerantes. El suministro de oxígeno a los cultivos de cientos de litros. la reacción consume el oxígeno produciendo agua. como el tioglicalato. Pero un cultivo puro también puede mantenerse viable durante años sin hacerlo crecer periódicamente. Cuando se abren estos contenedores para añadir medio o tomar muestras. pero también pueden crecer sin él. representa una dificultad técnica. la vela consumirá oxígeno hasta que se extinga. Los anaerobios aerotolerantes no utilizan el oxígeno. Los anaerobios también pueden cultivarse en placas Petri. pero tampoco les afecta negativamente. restringir o eliminar el oxígeno. que mueren incluso con una breve exposición al aire. en las cuales se trabaja usando unos guantes conectados a las mismas. Otros tipos de organismos. se requieren técnicas más elaboradas. Estos cultivos se remueven vigorosamente mediante grandes propulsores. Cuando los microorganismos crecen en medios líquidos es más difícil. Todos los cultivos líquidos con más de uno o dos centímetros de profundidad deben oxigenarse. como las que existen en el aíre son tóxicas para ellos. hay que mantenerlo en el laboratorio para poder trabajar con él o intercambiarlo con otros científicos. aunque el interior de toda colonia es completamente anaerobio. que son organizaciones que mantienen un número . Posteriormente se procede al sellado de los viales. El método consiste en lo siguiente: el cultivo líquido se vierte en un pequeño vial o ampolla de vidrio y se añade leche descremada para proteger las células durante el proceso. se mezcla con sustancias protectoras. Para almacenar un cultivo empleando bajas temperaturas. como la leche descremada. pero casi todas consisten en una desecación (eliminación del agua) o en un almacenamiento a baja temperatura. Imágenes: . mientras aún se mantiene el vacío.enorme de cultivos microbianos como un servicio a los microbiólogos. Existen muchas técnicas de mantenimiento de los cultivos puros. el glicerol. o el dimetilsulfóxido (DMSO). Los cultivos liofilizados se almacenan a temperatura ambiente. en nitrógeno líquido o en un ultracongelador.50oC. capaz de alcanzar tan bajas temperaturas. Los tubos de ensayo se sellan y se almacenan por debajo de los . La mezcla se congela en hielo seco y se expone al vació para su sublimación (eliminación del agua congelada). Durante el proceso de sublimación las células permanecen congeladas. Los cultivos generalmente se desecan por liofilización (congelación y desecación). . en la que se puede observar que cada una de ellas varía de a cuerdo a sus características específicas de crecimiento en los diferentes medios. . 2. Se realizaron 3 técnicas para sembrado de cultivo: en medio líquido (con caldo nutritivo). en medio semi-sólido (medio SIM) y en placa (con estriado simple y en cuadrantes). Una vez incubadas las bacterias se observaron sus características macroscópicas o culturales y sus características microscópicas.Resultados: Discusión de Resultados: 1. Los resultados de estas observaciones realizadas se pueden ver en la tabla anterior. con 6 diferentes bacterias para después dejar incubar las bacterias. es/info/mfar/pdfs/GuiaMicro2.ucm. Pp. Editorial Panamericana.es/personal_pdi/ciencias/jolope/GUIONPRACTICAS0506.Conclusiones: Por medio de esta práctica se logró utilizar las técnicas aprendidas durante el transcurso del curso. Microbiología y Parasitología Humana: Bases etiológicas de las enfermedades infecciosas.257-429 2.wikipedia.pdf . por lo que de esta manera se le puede llegar a identificar con su correcta siembra y observación para análisis posteriores o simplemente para la identificación de una bacteria en algún medio u organismo.uam. Bibliografía: 1. Se logró aprender a realizar algunos de los métodos que existen para cultivar bacterias y de esta manera observar sus características tanto macroscópicas como microscópicas e interpretación de las mismas.org/wiki/ 4. 2ºed. http://www. http://www. con lo que se observó que para cada bacteria existen características diferentes que son las que las identifican y diferencian de otras bacterias. R.doc 3. http://es. México 2001. Romero Cabello.
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