PRACTICA N°1¨COLORANTES Y COLORACIONES¨ V. Resultados COLORACIÓN GRAM El frotis bacteriano se fija con calor y una vez fijada se tiñe con cristal violeta de hucker, nuevamente se tiño con una solución de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la adhesión del cristal violeta a la pared celular. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste SAFRANINA o FUCSINA DE GRAM colorante secundario, que imparte una coloración de contraste o contracolor (color rojo o rosado) , razón por la cual estas bacteria se observan de color rojo al microscopio. COLORACION DE CAPSULAS (METODO MANEVAL) Se observo bacilos de klebsiella. La cápsula se observa como un halo incoloro alrededor de los microorganismos, gracias al contraste proporcionado por la coloración negra tanto del espacio intercelular como de las células microbianas COLORACION DE ESPORAS Con la tinción de Gram las esporas se observan como cuerpos refringentes SIN TEÑIR, mientras que con el método de Schaeffer y Fulton las esporas se observan de color VERDE y las formas vegetativas se ven ROJAS. VI.DISCUSIÓN. Las cápsulas bacterianas no pueden observarse en frotis teñidos con las técnicas usuales porque son incapaces de retener el colorante y porque los procesos de fijación al calor y lavado las disuelven. Por lo tanto El mejor método para observarlas es el de las tinciones negativas.(LEONOR,2006) Las cápsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y además sirven de reservorio de alimento almacenado. Las cápsulas de ciertas bacterias productoras de enfermedades aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. Si la bacteria pierde Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se presentan morfológicamente como cocos o bacilos. pero en menor proporción que las Gram negativas. la membrana externa que poseen las bacterias Gram negativas es soluble enco mpuestos orgánicos como a la mezcla de alcohol y acetona.2011) CONCLUSIONES. es muy difícil de remover. el complejo de cristal violeta y lugol se perdió. debido a que en el suelo predominan las bacterias Gram negativas. tomando este color característico que se le denomina a las bacterias que lo presentan “Gram positivas”. debido a que las bacterias Gram negativas en su pared celular no lo tienen. lo que no sucede con las Gram negativas. por medio de la tinción con verde de malaquita. particularmente las endoparas. Estas bacterias presentan este color ya moléculas de cristal violeta. y una de las más importantes. l o cual también explica la presencia de estas bacterias en el suelo. sin embargo al ejecutar tinción de Gram en estas para identificar su grupo taxonómico. debido a que se le agrego el colorante de contraste llamado Fuscina para colocarlas en manifiesto(KENIA. se pudo observar la estructura interna de la célula bacteriana. eran de una muestra de suelo. Sin embargo en el suelo también se encuentran bacterias Gram positivas. lugol y ácidoteicoico que se forma en la pared celular de las Gram positivas. el cual requirió del calor para la penetración. porque el cristal violeta y el lugol no reaccionan con el ácido teicocio. (Jawetz. La técnica de tinción tiene como finalidad crear un contraste entre la célula y el medio que la rodea. las Gram positivas se tiñen de color violeta mientras que las Gram negativas se tiñen de color rosado. Por otra parte. totalmente su cápsula. tanto por su aplicación clínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de la infección y por su practicidad. puede perder su virulencia y por lo tanto su capacidad de producir enfermedad. lo cual explica la presencia de estas bacterias. . quedaron teñidas. De igual forma .2002) Esta bacteria se observa de color violeta ya que en el proceso de tinción donde se le agrego los diferentes colorantes como cristal violeta y fucsina básica. Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una estructura muy pequeña. aun cuando se les retiró el exceso de colorante con agua destilada y alcohol de 95°. es la tinción de Gram. Es importante decir que las colonias a las que se les realizó tinción de Gram. por lo tanto al momento de agregar el decolorante alcohol 95°. Es por eso que esta técnica se vuelve fundamental en el estudio de la microbiología.las bacterias Gram negativas tomaron su color rosado. cuerpo bacteriano color rojo AUMENTO: 100X . REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Cedeño. Disponible:http://labmicrofarmaciaulat. http://aprendeenlinea. COLORACIÓN DE CAPSULAS: MUESTRA: klebsiella COLORACIÓN: Rojo de Congo DESCRIPCIÓN: capsula sin color.html.co/lms/moodle/pluginfile.com/p/tincion-de-gram_20. Citado: López Tévez.pdf._PRACTICA_TINCIONES_ESPECIALES_EN_MICROBIOLOGIA.blogspot.udea. [En línea]. [En línea]. Disponible:http://www.edu. Comportamiento de las bacterias en la tinción de gram.VIII. Leonor (2006). Citado:19/10/2013.pdf ANEXOS COLORACION DE ESPORAS: MUESTRA: Bacillus subtilis COLORACION: Coloracion de wirts AUMENTO: 40x DESCRIPCION: Esporas con bacilos esporulados.edu.php/231237/mod_resource/co ntent/0/2.fuentes de error en la tinción degram.biologia.ar/micr ogeneral/tp6. Kenia (2011). 2: coloración Gram (-) .COLORACION GRAM: Fig.1: coloración Gram (+) Fig. tambien para detectar cartílago.-¿Qué precaución es fundamental antes de colocar aceite de cedro sobre una lámina coloreada? el aceite de cedro es propio de la observación con el objeto de inmersión de 100x. la mitad de bacilos y todos los organismos espiraladas se tiñen de rojo y se dice que son gran negativas.-¿Cuál es la posición del condensador en una observación de una muestra coloreada en inmersión? En una muestra coloreada de inmersion se debe subir totalmente el condensador para ver claramente el circulo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habra que agregar el aceite.la safranina se usa como liquido de contraste en protocolos de tinción. mientras que aproximadamente un tercio de los cocus. 3.-¿Cuál es la posición correcta del condensador en una observación en fresco y a mediano aumento? El condensador puede utilizarse a diferentes distancias respecto a la fuente luminosa.safrina).. de contraste que se utiliza en la tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram (+) y tiñe de rojo a las bacterias Gram (-). El colorante tiñe las células(azul de metileno.en el caso de las preparaciones en fresco el condensador se debe bajar.¿ Podría reemplazarse la safranina o ziehl con el azul de metileno como colorante de contraste en la coloración de Gram? En coloración simple utilizar un solo colorante. CUESTIONARIO 1. Los microorganismos gran positivos se tiñen de azul. es un colorante biológico.coloreando al nucleo celular de rojo. . La safranina( rojo básico). se debe utilizar para la observación de muestras fijadas no para otras muestras. en histología y en citología. 2. 4.mucinay granulos de mastocitos.se basan en el hecho que las células tienen una composición química diferente frente a un colorante. 5.-¿Cuál es el comportamiento más usual de los cocos y cuál es el de los bacilos en la coloración Gram? Las bacterias pueden diferenciarse con la coloración gran en dos grupos. donde se producirá hasta el punto de formar colonias . El crecimiento de los microorganismos se manifiesta de formas diferentes dependiendo de la técnica utilizada para su siembra y del tipo de medio en el que se realizó dicha siembra. El desarrollo de colonias formadas a partir de los métodos realizados por estrías y por extensión en placa difieren en forma. Después de un largo periodo de tiempo se pudo observar las diferentes características de las diferentes bacterias como su forma y tamaño. Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias para crecer. superficie y estructura interna. elevación. En esta práctica realizamos la siembra de un microorganismo de agua estancada sobre un agar nutritivo donde dimos uso de la técnica de siembra por estrias o sea pasando el inoculo en zigzag sobre la superficie del medio inclinado cuya finalidad será conseguir que un germen quede aislado de otro en la superficie del medio. DISCUSIÓN El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. ni todos los microorganismos pueden crecer en todos los medios de cultivo.2013) Conclusión En este experimento se pudo realizar la siembra de dilución. Las colonias se formaron durante un tiempo de incubación de 24 a 48 horas. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar. No todos los medios de cultivo son iguales. SIEMBRA Y AISLAMIENTO RESULTADOS. lo cual es notablemente influenciado por las concentraciones de carga microbiana del medio en el cual dichas colonias se desarrollaron así como por el mismo medio de cultivo . borde.(Nelson. de esta forma es posible obtener características morfológicas distintas cuando se realizan siembras de una misma muestra en diferentes medios de cultivo o viceversa(Michael. en la cual dio como resultado la formación de colonias sobre las placas de agar nutritivo. PRACTICA N°2 PRACTICA DE MEDIOS DE CULTIVO. La composición de estos medios puede ser definida (medio sintético) o no definida (medio complejo). porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.2002) La siembra en cajas Petri nos permite cultivar microorganismos gracias a que contiene los nutrientes necesarios para su desarrollo. es/practicas-de- microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo http://labmicrofarmaciaulat.html https://es.google.pe/p/aislamiento-de-2-microorganismos-y.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-microorganismos ANEXOS Fig1: calentando el agar nutritivo Fig.blogspot.slideshare.2: calentando el caldo nutritivo . https://sites.com/a/goumh.umh.Referencias bibliográficas. . no es posible conseguir un cultivo puro. Además que constituye una de las características para el crecimiento de bacterias. pero siempre en ausencia del Mac Conkey. ya que el medio es útil tanto para e aislamiento y cultivo de microorganismos aeróbicos y anaeróbicos nutricionales exigentes a partir de una gran variabilidad de muestras como para la observación de reacciones en hemólisis. Permiten diferenciar de esta bacteria y facilitar su identificación. tamaño. además su aspecto de coloración.-¿Qué le indicaría la presencia de un bacilo y un coco en la coloración de una suspensión hecha a partir de una colonia? Las bacterias que son cocos y bacilos adoptan formas intermedias en los cocos y bacilos que se denominan cocobacilos..¿Considera usted necesario tomar alguna precaución en caso de tener que adicionar sangre al medio? Claro que si.3: siembra y aislamiento de agua estancada CUESTIONARIO 1. 4. Si hay presencia de cocos y bacilos se observó sus crecimientos. Se debe tener cuidado en la composición de los caldos nutritivos por que el uso incorrecto de ellos puede hacer que se cometa errores en la manipulación de microorganismos. 3. 2. Fig. sin embargo.-¿Es posibles aislar gérmenes en estado de pureza en medios líquidos a partir de muestras con flora variada? Si podemos cultivar medios líquidos para aislar gérmenes en estado de pureza.-¿Qué importancia tiene el aspecto de una colonia? Es importante debido a que nos ayuda a conocer de manera cualitativa el cultivo bacteriano. Este género es prototipo de la familia bacillaceae. Entre las pruebas que utilizamos en esta práctica fueron: Degradación de carbohidratos .Degradación del Agar.Degradación del Agar.Producción de H2S Microorganismo Coloración Negruzca Proteus Vulgaris Sí Escherichia Coli No . Degradación de proteínas .Degradación del Caldo Glucosado Microorganismo Acidez-Amarillo/Basidad -Rosa Degradación a CO2 Entero Bacter Amarillo Sí Bacillus Subtilis Amarillo No Pseudomonas sp Rosa No B. los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio. A.RESULTADO Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios.Gelatina Microorganismo Licuación o degradación de Gelatina Pseudomonas sp Sí Escherichia Coli No Tabla 3. Degradación de proteínas Tabla 1.Almidón Microorganismo Coloración Violeta con Lugol Bacillus Subtilis No Staphylococcus Sí Tabla 2. Degradación de carbohidratos Tabla 1. Degradación de las grasas. PRACTICA N°3 ACCIÓN DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS SUSTRATOS V. Coli. Coli. dio positivo ya que es un microorganismo anaerobio y tiene la posibilidad de producción de hidrógeno sulfurado descomponiendo sustancias proteicas o descomponiendo sulfato y esto se pone de manifiesto con el ennegrecimiento del medio al producirse los sulfuros metálicos correspondientes ya que el sulfato utilizado contenía cisteína que contiene aminoácidos sulfurados por lo cual la enzima del microorganismo (E. Hidrolisis de la Urea Microorganismo Coloración Bugambilia Proteus Vulgaris Sí Escherichia Coli No Tabla 4.Acción sobre las Grasas Microorganismo Anillo Rosáceo Pseudomonas Sí Escherichia Coli No DISCUSION. E. Degradación de las grasas Tabla 1-. Tabla 2.( Carpente.Producción de Indol Microorganismo Anillo Rosáceo Escherichia Coli Sí Proteus Vulgaris No Tabla 3. E.2010) Los microorganismos usados en el laboratorio fueron.Caldo Nitrato Microorganismo Reducción (coloración roja del medio) Escherichia Coli Sí Pseudomonas sp No C. y Proteus Vulgaris La bacteria correspondiente al coli típico forma indol desaminación y descarboxilación de un compuesto bencénico pirrolico detectando la presencia de indol al reaccionarlo con la reacción de Kova que es un aldelhido unido a alcohol amilico que extrae el indol formándose en la parte superior un anillo rojizo intenso causado por dicho alcohol que se . Los microorganismos utilizados en el laboratorio fueron Proteus Vulgaris. Coli) dependía del átomo de azufre de este aminoácido reduciéndolo ha hidrógeno para formar ácido sulfhídrico correspondiendo a los resultados que emite Philip Carpenter en su libro de microbiología. com/document/185344271/Accion-De-Los-Microorganismos-Sobre- Diversos-Sustratos https://es.net/Arturovm9510/accin-de-los-microorganismos-sobre-diversos- sustratos .2010) los nitratos sirven como fuente de nitrógeno para muchos microorganismos pero para ello debe ser degradado. Los microorganismos usados fueron pseudomonas. Las enterobactericiae y muchos otros bacilos gran negativos y hongos reducen los nitratos a nitritos ya que en la prueba realizada en el laboratorio con los microorganismos sembrados en el medio nitrolado se le agregó alfa naftalina.slideshare. pero los microorganismos utilizan los nitratos para su reducción a nitrito eliminando una molécula de oxígeno.shtml#ixzz4 xZlOSwuS https://es.( Carpenter. procediéndose a valorar el amoniaco con el reactivo de Nessler apareciendo un color ladrillo y concluimos que ambos resultados concuerdan con la bibliografía. correspondiendo a los resultados del libro de Philip Carpenter.scribd. ácido sulfanílico y el resultado fue positivo indicado por un rojo intenso. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. su finalidad es estudiar de forma detenida las acciones enzimaticas de los germenes sobre algunos sutratos donde existen diferentes medios y el cual se debera aplicar de acuerdo al microorganismo a estudiar.2010) CONCLUSIONES. Coli.com/trabajos15/microorganismos/microorganismos. (Ohili. e. http://www. deposita en la superficie del medio.monografias. Almidón del Agar. ANEXOS DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS DEGRADACION DE GRASAS Degradación del Degradación Degradación del Caldo Acción sobre las Grasas Agar. Glucosado Gelatina DEGRADACION DE PROTEINAS Producción de Indol Producción de H2S Hidrolisis de la Urea Caldo Nitrato . -¿ A qué productos se debe la variación de pH en un medio con hidratos de carbono? Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las sustancias producidas por el propio microorganismo. 3. 4.. Este incremento del pH desplaza el equilibrio del amoniaco y amonio favoreciendo la volatizacion del NH3 a la atmosfera.¿Que entiendes por hidrolisis de la urea? Que su actividad es muy importante en los residuos de cosechas y en la parte superficial de los suelos. económico y ambiental. 2. el estudio de los microorganismos y el conocimiento sobre ellos ha sido aplicado en el ámbito médico. El mundo nos rodea con objetos inertes que consiste en sustratos y soporte que permiten el asentamiento de todo lo que nos rodea.-¿ Que produce finales de la degradación de la urea y otras sustancias nitrogenadas fácilmente detectables en el laboratorio? Degradación de proteínas y aminoácidos y los productos finales son el amonio y amoniaco. También que la hidrolisis genera un incremento significativo del pH alrededor del granulo de urea ya que consume protones.-¿ Qué importancia tiene el estudio de las propiedades bioquímicas de microorganismos? Los microorganismos han sido de utilidad para el hombre aun desde antes del conocimiento de su existencia. además brinda algunos nutrientes que son aprovechados por los seres vivos que lo habitan. CUESTIONARIO 1. industrial. . para orientar las decisiones terapéuticas individuales.(ROSALES. se llevan las placas a incubar a una cierta temperatura podríamos decir (temperatura corporal) durante un tiempo respectivo tras este periodo se recogen las placas y sin abrir se observa el crecimiento bacteriano.ar/SeminarioAntibioticos. Gracias a este seguimiento epidemiológico.scribd.(ROSALES. En efecto.htm https://es.blogspot. una región o un país.fcen. la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico. PRACTICA N°4 EL ANTIBIOGRAMA V. un centro de atención médica. es como puede adaptarse la antibioterapia empírica.RESULTADO.pe/p/elaboracion-de-un-antibiograma.qb.com/doc/31999516/practica1-antibiograma . El antibiograma sirve. como el establecimiento de programas de prevención en los hospitales.html http://www. en primer lugar.2010) VII. http://labmicrofarmaciaulat.microinmuno. El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos.2010) El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las resistencias bacterianas. a escala de un servicio. Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el diámetro de los halos de inhibición que se han formado alrededor de los discos de antibiótico a los que la bacteria “problema” es sensible.uba.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.CONCLUSION se dio a conocer el mecanismo en la determinación de sensibilidad ïn vitro¨de las bacterias frente a los antibióticos VIII. revisarse regularmente los espectros clínicos de los antibióticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias.DISCUSION. VI. a excepción de estafilococos resistentes a oxacilina o enterococos resistentes a vancomicina. no debe considerarse aquellas colonias diminutas que aparecen en el halo de inhibición y que han sido visualizadas mediante luz transmitida o con ayuda de una lupa..¿Qué factor tomaría en cuenta para elegir un antibiótico. poblaciones heterogéneas o cultivos mixtos y conviene volver a identificarlas y realizar otra vez el ensayo de sensibilidad antimicrobiana. Cuando aparecen colonias dentro del halo. Situación inmunológica e hipersensibilidad. contaminaciones. Como la regla general. Factores Farmacológicos:Tipo de antimicrobiano y parámetros de absorción. Factores del paciente : Tipo de infección. esto se debe a mutaciones espontaneas que hacen a algunas bacterias resistentes. distribución y eliminación.-¿Qué opinaría usted si dentro de un nítido halo de inhibición desarrollan varias colonias? Si aparece alguna colonia dentro de los halos. Factores de riesgo y estado general de salud. 2. puede tratarse de mutantes resistentes. además del resultado del antibiograma? Factores microbiológicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos de resistencia descritos previamente en su especie. ANEXOS Fig.1: Observación de halo de inhibición CUESTIONARIO 1. . Experiencia anterior: Referente a los patrones de resistencia antibiótica mas habituales para cada especie.-¿Qué opinaría si los discos antibióticos pertenecientes a un lote producen efecto frente a un germen y discos del mismo antibiótico de otro lote no produce efecto alguno? Se diría que es resistente se refiere a aquellos microorganismos que no se inhiben por las concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos del correspondiente antimicrobiano. en función del tipo de infección y de la especie considerada. . o a aquellos microorganismos en los que existen mecanismos de resistencias específicos para el agente estudiado en los que no ha sabido una adecuada respuesta clínica cuando se ha usado como tratamiento el correspondiente antimicrobiano y con respecto al otro lote que es un término sensible indica que la infección ocasionada por la cepa para la que se ha determinado la CMI o su correspondiente halo de inhibición puede tratarse de forma adecuada empleando las dosis habituales de antimicrobiano. 3.