INSTITUTO CIENTÍFICO MOTOLINIA A. C.BACHILLERATO Práctica de Laboratorio #2 “Extracción de ADN humano” (Ácido desoxirribonucleico) Introducción: … todos los seres vivos, sean microorganismos, hongos, plantas o animales, contienen ADN; la cual es una molécula enorme, que se encuentra guardada dentro de las células y protegida por proteínas muy específicas. La molécula de ADN puede estar formada por miles de bases nitrogenadas, cada molécula de ADN es diferente de otra por la secuencia, el orden en que están colocados sus nucleótidos. Así, el ADN de una rana, un pato y un ser humano está formado por nucleótidos similares, pero acomodados en secuencias diferentes… Objetivo: extraer y obtener el material genético (ADN) a partir de una muestra del epitelio interno de la boca separándolo de las estructuras que lo envuelven Materiales: Equipo. - Vaso de precipitados de 500 ml - 2 Vasos de precipitados de 250 ml - 2 Tubo de ensayo - Gradilla - Varilla de vidrio - 2 cucharas de plástico - Porta objetos- cubre objetos - Microscopio compuesto Reactivos y material biológico. - 500 ml Agua mineral - 500 ml Detergente líquido para trastes - Alcohol etílico al 70- 95% muy frío - Cloruro de sodio (sal de mesa) - Hielos suficientes Metodología: - Prepara los tubos de ensayo con alcohol etílico y ponlos a enfriar lo máximo que sea posible, mantenlos dentro del vaso de precipitados de 500 ml en baño con hielo, mientras se realizan los siguientes pasos. - Coloca en el vaso de 250 ml unos 30 ml de agua mineral y añade media cucharada de sal común, así como 5 gotas de detergente líquido - Poner un poco de agua en el otro vaso de 250 ml y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos un minuto para arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la acción de las enzimas contenidas en ella). - Expulsa el agua con tejido en el vaso de precipitados sobre la solución anterior. Deja actuar 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver estos componentes evitando la formación de espuma. - A continuación, añade la solución suavemente a cada uno de los tubos de ensayo que contiene el alcohol frio, dejándola resbalar por la pared del tubo de manera inclinada. INSTITUTO CIENTÍFICO MOTOLINIA A. C. BACHILLERATO - La solución es más densa y turbia que el alcohol, depositándose en el fondo del tubo; deja reposar durante 2 o 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un sobrenadante por encima de la fase acuosa, en la que se encuentra el ADN en disolución, provocando que éste se precipite. Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol- agua formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. Tras unos minutos de reposo el ADN tiende a subir hacia la superficie del alcohol, entonces se podrá recoger utilizando la varilla de vidrio o una pipeta Pasteur. Coloca el ADN sobre el porta objetos, cúbrelo y obsérvalo en el microscopio. Resultados: - Elabora esquemas o dibujos a manera de serie, en tu libreta de TSB, de cada uno de los pasos que seguiste en la práctica de laboratorio - Elabora un dibujo de la estructura del ADN donde se visualicen el fosfato, la desoxirribosa, el enlace fosfodiester, el puente de hidrogeno y las bases nitrogenadas (A, C, T, G) Contesta: 1. ¿Cuál es la función del ADN en la célula? 2. ¿Qué estructura de la célula protege el ADN? 3. ¿Qué función tiene el detergente para la extracción del ADN? Recuerda que los detergentes actúan sobre los lípidos 4. ¿A qué sustancia es más afín el ADN, al agua o al alcohol? 5. Completa las siguientes secuencias, colocando la complementaria para cada una AGGCGTATTACGACGTACGATTTAAGCGAGCAGT TACTAGTACGTAATACGTACACGTACGGCATTACT