AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS DE INTERÉSINDUSTRIAL.” Saccharomyces cerevisiae INTEGRANTES DEL GRUPO 6IM1, SECCIÓN II, EQUIPO 6 1. GONZALEZ GARCES URIEL 2. OLVERA FLORES IVAN DE JESUS 3. OSORIO QUIROZ NOEMI KARINA 4. PEREZ DOMINGUEZ CITLALI YAMILE PROFESORES: SANTOYO TEPOLE FORTUNATA. ANGELES MORALES ERIKA BEATRIZ. RODRIGUEZ OLVERA ALMA MARIA. II. • Obtener aislados de consorcios microbianos degradadores de fenol. • Aislar levaduras de fuentes naturales que puedan servir como biomasa o proteína celular. I. y evaluar la presión de selección mas adecuada para los cultivos. y evaluar la presión de selección mas adecuada para los cultivos. Técnica Morfología Morfología de Fotografía colonial microscópica siembra . • Obtener aislados de consorcios microbianos degradadores de fenol. RESULTADOS Tabla 1: Levaduras obtenidas de la selección primaria de distintas fuentes. • Identificar los factores que pueden afectar la selección primaria de microorganismos de potencial interés industrial. así como microorganismos que soporten altas concentraciones de sal. • Identificar los factores que pueden afectar la selección primaria de microorganismos de potencial interés industrial.OBJETIVOS: Objetivo General: • Emplear procedimientos que permitan el aislamiento de microorganismos de posible interés Industrial. OBTETIVOS • Obtener aislados microbianos productores de enzimas de interés industrial tal como proteasas y amilasas. así como microorganismos que soporten altas concentraciones de sal. • Aislar levaduras de fuentes naturales que puedan servir como biomasa o proteína celular. • Purificar y conservar los microorganismos con actividad enzimática. • Purificar y conservar los microorganismos con actividad enzimática. Objetivos específicos: • Obtener aislados microbianos productores de enzimas de interés industrial tal como proteasas y amilasas. Ovales Estría formas alargadas. Piña medio entre 3-4 ausencia de SDA a mm. elevada SDA a ausencia de convexa. Fuente de Aislamiento colonias de consistencia pastosa. Estría bolo. pH 5 a esporas. en las de forma superficie Mango medio alargada. forma cruzada predominan esférica. . color esporas. bordes en tamaño afilados. cruzada esféricas. pH 5 a beige. borde 28°C agrupación continuo. bordes continuos. en cadenas Tamaño de 2-3 mm. Forma de color beige. agrupación 28°C aspecto aisladas húmeda. Colonias de consistencia pastosa. 5 superficie producidas en a 28°C. presencia de Limón medio Foster con Colonia circular. Estría Levaduras cruzada Colonias bigemantes. pequeño. Estría Colonias hay algunas cruzada grandes. hilianas de pared ornamentadas . tamaño muy en opacas. Fuente de Técnica de Morfología Morfología Fotografía Aislamiento siembra colonial microscópica Picadura en Aterciopelado. ausencia de Plátano medio opacas. en aisladas. s/ son esféricas SDA a producción ausencia de pH 5 a de esporas. 28°C pigmento agrupación en cadenas Estría Colonias Son de cruzada pequeñas. esporas. mas en esféricas pequeñas y Fresa medio opacas. de formas esféricas. esféricas. SDA a algunas agrupación pH 5 a alargadas en cadenas 28°C Cilíndricas.colo cadena. conidias carbonato pH 7. esporas 28°C Tabla 2: Hongos productores de ácidos orgánicos obtenidas de la selección primaria de distintas fuen tes. SDA a color ausencia de pH 5 a crema. Cebolla medio ovoides. filamentosa. esporas. con forma para evaluar de gota. Tabla 4: Microorganismos amilolíticos obtenidos de la selección primaria de distintas fuentes Fuente de Técnica de Morfología Morfología Fotografía Aislamiento siembra colonial microscópica Papa Medio líquido Colonias de 3. deformadas. blancas aislados translucidas. Visible a 40x. en mínimo 4 mm de con bordes el último cultivo no enriquecido diámetro. hubo crecimiento en t con almidón bordes forman cadenas Sembrado en irregulares cortas. con redondeados. redondeados. blanca. Fuente de Técnica de Morfología Morfología Fotografía Aislamiento siembra colonial microscópica Suelo de taller Técnica de Butirosa. placa en medio Castañeda- almidón por estría cruzada Se incubaron a 37°C ubo. regulares. medio SDA estría cruzada. cortos G(-) con única fuente de bordes bordes hidrocarburos C. Bacilos G(+). No se pudieron aislar. mecánico A enriquecimiento redonda. opaca. levadura con contaminado como fenol como convexa. a cambiaron su 37°C morfología. . sembrado por estría cruzada Suelo de taller Técnica de Colonias de mecánico B enriquecimiento aspecto liso. Siembra en Las levaduras Medio sólido sembradas en agar con fenol. circular formas con única fuente de irregulares hidrocarburos C. son Medio SDA para alargadas de un levaduras a 28°C lado. agrupadas. morfología real.Tabla 3: Microorganismos degradadores de fenol obtenidos de la selección primaria de distintas fuentes. muy Bacilos muy contaminado como fenol como pequeñas. pH Temperatura. y medio presencia de transferencia almidón en sucesiva. y de almidón almidón al transferencia en medio 2%. sucesiva.O. de Levaduras Productores Amiloliticos Halófilos Halófilos Degradadores interés de ácidos amiloliticos proteolíticos de fenol industrial orgánicos Presión Temperatura Una Medio líquido adicionado Medio mínimo de de 28°C. pH del a sucesiva adicionado adicionado n medio y presencia con sales y con fenol. se mínimo Temperatur alternó en a de medios incubación. transferencia con sales y almidón al 2%.O. M. color agrupados en 2% y posterior blanco-crema aislamiento por translúcido y cadenas co estría cruzada en bordes regulares medio solido con almidón rtas Tabla 6.Tabla 4: Halófilos productores de amilasas obtenidos de la selección primaria de distintas fuentes. alargados Texcoco en medio liquido entre 1-2mm de definidos G(+) con almidón al diámetro. de Levaduras Productore Amilolitico Halófilos Halófilos Degradadore documento? interés s de ácidos s amilolitico proteolític s de fenol D: industri orgánicos s os al Presión Temperatur Una Medio Medio de a de 28°C. Formas de presión de selección de microorganismos de interés industrial. se medio alternó en mínimo medios sólidos Commented [CYPD1]: Quien bloqueo la edición del M. Fuente de Técnica de Morfología Morfología Fotografía Aislamiento siembra colonial microscópica Mezcla salitre Método de Colonias de Bacilos + suelo lago enriquecimiento aspecto liso. sólidos[CYPD 1] . Temperatur transferenci líquido mínimo selecció pH a. con fenol. adicionado selección pH del sucesiva y Temperatura de incubación. Seguramente debido al grado de descomposición de las fuentes de aislamiento y a la posterior liberación de carbohidratos sencillos o monoméricos fácilmente asimilables por las levaduras. Saccharomyces cerevisiae Candida Kefyr. mientras que en el lado derecho se observa Saccharomyces cerevisiae. y que sirvan a la vez como fuentes de energía. y Saccharomyces cerevisiae. azúcares y lípidos. fue debido a las características similares de algunas de las fuentes de aislamiento. Fig 2. Diversas bibliografías citan que los hongos requieren sustancias orgánicas preformadas para la biosíntesis de proteínas. mientras que otros mostraron ser falsos positivos en el medio Foster. La elevada cantidad de levadura obtenida. Las levaduras son utilizadas en la industria cerveza.II .DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN. son similares a Kluyveromyces marxianus. proteínas y suplementos alimenticios en base de levadura. sino a la coloración de la colonia. se debió a que algunos inóculos en placa presentaron un crecimiento invasivo que impedía el aislamiento y la visualización del cambio de coloración de indicador verde de bromocresol. la mayoría provenientes de frutos y vegetales . para poder utilizarlo en lo ya mencionado. Levaduras productoras de biomasa y proteína. . seria recomendable que la cepa aislada presente una elevada razón de crecimiento y reproducción. Esta baja cantidad de aislados. En esta ocasión al interesarnos por la industria de la producción de biomasa. fue que el cambio de coloración que presenta la placa no era propiamente debido a la producción de ácidos orgánicos. sin embargo por las características morfológicas y microscópicas de la mayoria de nuestras levaduras aisladas. Esto fue comprobado con el medio Foster con CaCO3. Las levaduras que más representan la producción de biomasa son Kluyveromyces marxianus. Hubo varias razones por las cuales se entregó solo un aislado de hongo productor de ácido orgánico. Ácidos Orgánicos. En lado izquierdo se presenta la morfologia microscópica de Kluyveromyces marxianus. por otro lado es importante saber si esta es patógeno. Otra causa. panadera y de los suplementos alimenticios. La célula fúngica solamente puede incorporar. posteriormente se analizó la morfología colonial de ambas muestras. teniendo que emplear vías alternas en la degradación del fenol como son la vía del gentisato y protocatecol. saborizante Microorganismos degradadoras de fenol. Al resembrar en un medio con glucosa como fuente de carbono presentaron un mayor crecimiento comparado con las resiembras anteriores. barnices. estos se incubaron por 7 días en agitación a 28°C. industria farmacéutica Ácido fumárico fabricación del poliéster y del aspartato Ácido málico bebidas. . industria farmacéutica Ácido ascórbico (vitamina C) alimentos y medicamentos Ácido tartárico bebidas. debido a que presentan enzimas constitutivas para el metabolismo de glucosa y otros carbohidratos. al continuar las posteriores resiembras el tamaño y forma de las levaduras cambió. ya que eran mas reducidas y ovaladas. pues con fenol deben realizar modificaciones a su metabolismo para llevar a cabo la degradación de dicho compuesto. al deber adaptar su metabolismo para crecer y desarrollarse en menor tiempo. Esta actividad además conlleva la interacción con otros microorganismos que se desarrollan en el mismo ambiente y que aprovechan y compiten por los nutrientes que se van liberando en ese medio. mediante transporte a través de su membrana plasmática. antioxidante. (Alicia. 2000) Tabla 7: Algunas aplicaciones de ácidos producidos de manera industrial por fermentación microbiana. se llevo a cabo un enriquecimiento de los microorganismos en frascos serológicos en medio mínimo mineral con fenol. industria farmacéutica y productos de limpieza Ácido glucónico alimentos (regulador de la acidez). industria textil y papel Ácido láctico alimentos (acidulante). para la muestra 1 se observaron levaduras alargadas en forma de bolillo. Se aislaron 2 microorganismos con actividad degradadora de fenol. lacas. Ácido orgánico Usos principales Ácido cítrico alimentos (acidulante y saborizante). estos cambios en su morfología eran debido al estrés al que eran sometidas. mediante enzimas extracelulares que son liberadas por el hongo a través de sus paredes. monosacáridos y ácidos grasos. procedentes de suelos de talleres mecánicos. con lo cual se corroboro el desarrollo de microorganismos. aminoácidos. Para esta actividad es imprescindible la presencia de una película de agua que permita la difusión de los elementos nutritivos que se producen merced a la actividad enzimática. logrando identificar levaduras en ambos casos. en tanto que las moléculas más complejas deben ser degradadas previamente a monómeros en el entorno. plásticos biodegradables. productos de limpieza (removedor de depósitos calcáreos y óxidos). cuando los microorganismos estuvieron en un medio líquido de enriquecimiento y como única fuente carbono era el almidón. Microorganismos halofílicos amilolíticos En la bibliografía se tiene reportado como productores de amilasas a bacterias del género Bacillus. se ha observado que las bacterias con forma de bacilos cortos forman filamentos alargados cuando la salinidad aumenta. entre éstas: B. pues se reporta que estos son bacilos rectos o ligeramente curvados. Estos microorganismos utilizan estrategias para permitirles adaptarse a estos ambientes de estrés osmótico como el Salt-In strategy. o simplemente no se escogió de la manera correcta la colonia para resembrar y a pesar de que las muestra eran potencialmente buenas. se observo crecimiento. ya que de esta forma se limita mucho encontrar microorganismos fenólicos. amyloliquefaciens (Prakash y Jaiswal. y un mejor monitoreo del crecimiento y degradación de este. glucoamilasas (aminoglucosidasas. Al revisar en la literatura en base a las características morfológicas el bacilo mencionado anteriormente pudiese ser Pseudomonas sp. al presentarse estos últimos en mayor cantidad para las resiembras posteriores se tomo como criterio la incubación a 37°C para favorecer el crecimiento de los bacilos. como es posible en el ambiente de donde se aisló esta muestra (suelo de salitre y lago de Texcoco) por otro lado se reportan cocos en este grupo de microorganismos los cuales utilizan una estrategia de soluto compatible. se procedió a sembrar por estría cruzada en un medio sólido.En la muestra 2 la actividad degradadora fue llevada a cabo por varios microorganismos. La degradación enzimática del almidón a glucosa involucra dos procesos: licuefacción (por α y β- amilasas) y sacarificación (por glucoamilasas y enzimas desramificadoras).. varias de estas pueden cumplir con la aislada ya que se parece mucho a la morfología colonial y microscópica. α-glucosidasas y enzimas desramificadoras (Vihinen y Mantsala. no pudimos aislar ninguna bacteria que produjera las enzimas mencionadas. 2006). licheniformis y B. A la fecha se encuentran reportadas siete clases de enzimas amilolíticas de origen microbiano (Pretorius et al. ciclodextrinasas. Microorganismos amilolíticos. Sin embargo al volver a resembrar por que no estaba aislado. algunas de ellas se reportan como halofílicas. en el cual mantienen altas concentraciones intracelulares de sal por esta razón cambia mucho su morfología y fisiología. stearothermophilus. B. 1989). α-amilosas. en la clase siguiente de continuar en el medio. Gram negativos y aeróbicos estrictos.ɣ-amilasas). subtilis. B. pueden crecer en concentraciones salinas. β-amilasas. esto con el fin de ejercer presión de selección al M. y lo que buscamos es un consorcio con una alta actividad. levaduras y bacilos. conllevo a un error por que este era tan pequeño que al momento de resembrar se perdió o pudo confundirse con una colonia de a lado.O para que este pudiese producir las enzimas necesarias y degradar el almidón . dando como resultado el crecimiento de bacterias con morfología microscópica similar a Bacillus. 2010). falto una mejor técnica de aislamiento. a diferencia de las bacterias que lo acumulan intracelularmente estas mantienen bajas concentraciones de sales en su citoplasma. se escogió un M.O de la población microbiana en el cual se observaba un halo de hidrólisis. Como estos microorganismos se encuentran en consorcios microbianos no es recomendable utilizar un cultivo progresivo. por el hecho del cambio en la densidad óptica en el medio. . (Filloux. A pesar del reporte en la bibliografía.1991). en el cual podemos encontrar especies de los géneros. Mucor entre otros. Streptococcus.Fig. Microrganismos halófilicos proteolíticos Los microorganismos proteolíticos constituyen un grupo muy heterogéneo. Fig. 3: Una placa de agar-almidón con una prueba de yodo negativa. Penicillium. Pseudomonas. Bacillus. lo que quiere decir que no hubo produccio de amilasas. Micrococcus. Proteus. 4: Una placa de agar-almidón donde se observa las colonias que son capaces de producir amilasas. Lamentablemente aunque nuestras fuentes . Clostridium. Aspergillus. tales como Temperatura de incubación incorrecta. porque bacilos producen las amilasas? ¿Qué factores pueden afectar la selección? ¿Hubo cultivo progresivo en todos los tipos de microrganismos? CONCLUSIONES • Se detectó en suelos provenientes de talleres mecánicos. cuales se pueden utilizar como proteína celular? ¿Con cuántos posibles cultivos comenzamos y con cuantos terminamos que tenían actividad? Las muestras fueron de suficientes fuentes potenciales? ¿De acuerdo a su morfología. . la presencia de levaduras y bacilos Gram negativos capaces de utilizar a los hidrocarburos como fuente de carbono. se sabe que estos microorganismos son los mas aptos para soportar altas concentraciones de salinidad. por eso es importante evaluar que tipo de presión de selección es la adecuada en cada caso particular.eran potenciales para el aislamiento de estos microorganismos no se ejerció la presión de selección adecuada para su aislamiento. así como también se cometieron errores experimentales durante el desarrollo que no permitieron identificar a dichos microorganismos. Sin embargo las colonias potenciales que observamos durante el desarrollo de la práctica presentaron morfología de cocos en su mayoría. • En algunas ocasiones el cultivo progresivo puede limitar el aislamiento de ciertos microorgansimos como en el caso de los degradadores de fenol. factores como la presión de selección y una incubación inadecuada no permitieron el aislamiento de algunos microorganismos. son capaces de competir exitosamente por el agua y resistir los efectos desnaturalizantes de las sales. • A pesar de comenzar con muchos cultivos con potencial actividad. ¿Morfología parecida a lo reportado en la bibliografía? ¿Para qué se pueden usar. • Los organismos halófilos son una clase interesante de organismos extremofílicos que se han adaptado a condiciones hipersalinas. estos microorganismos forman parte de las poblaciones normales de estos suelos. .• La morfología de los microorganismos tiene una estrecha relación con la actividad enzimática que ejerce cada uno.
Report "PRACTICA 1 - Aislamiento y Seleccion de Microorganismos de Interes Industrial"