NTC 4566 Determinación de almidón Método espectrofotométrico.pptx

NTC 4566Determinación de almidón Método espectrofotométrico Andrés David Vela Introducción Los almidones son polisacáridos con  una gran molécula, compuesta de amilosa (20-28%) y amilopectina (72-80%). La amilosa está formada por cadenas sin ramificar de glucosa,  consta de una cadena principal de glucosa con cadenas laterales en intervalos. Tienen función aglutinante y de relleno en las formulaciones cárnicas. Las funciones de los almidones  son:        Incrementa la capacidad de ligazón de agua y previene la pérdida de humedad Aglutinante y de relleno Ayuda a la estabilidad de la emulsión Mejora la textura y la sensación de  mordida. Gelatiniza a temperaturas bajas. Ayuda a dar jugosidad a los productos bajos en grasa. El almidón modificado gelatinizará a temperaturas más bajas CAMPO DE APLICACIÓN  La presente norma se aplica solamente a productos que no contienen sustancias agregadas diferentes del almidón. .OBJETO  Esta norma especifica dos métodos de referencia para la determinación del contenido de almidón en productos cárnicos y verificar los parámetros mínimos especificados en la NTC 1325 según la formulación del producto y el tipo del mismo. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉT RICO Este método consiste en la extracción previa de los azúcares y grasas presentes en la muestra.10 dihydro 9 ketoantraceno) en medio sulfúrico produce un derivado del furano que tiene su máximo de absorción en 620 nm. desarrollo de color con el reactivo antrona y determinación espectrofotométrica del contenido total de almidón presente en la muestra. La reacción de la Antrona (9. La Antrona forma un compuesto verde en medio ácido fuerte (Acido sulfúrico o acido perclórico) con ciertos carbohidratos y sacáridos. en especial con azúcares y almidones. con posterior separación del almidón. . . para análisis • Papel de filtro • Almidón soluble • Agua destilada • Solución de Antrona.dihidro .9 - oxoantraceno (C14H10O) (antrona).10 . (Preferiblemente utilizar glucosa grado reactivo para inyectables.EQUIPOS Y MATERIALES • Tubo de ensayo • Tubos de Centrifuga de 50 ml a 100 ml • Matraces aforados de 100 ml y 200 ml • Pipetas aforadas • Balanza analítica • Centrífuga 2 500 rpm • Espectrofotómetro o Fotocolorímetro. Disuelva 0. Solución patrón de glucosa Disolver 100 mg de glucosa anhidra en 100 ml de agua destilada.9 . • Baño de agua hirviendo • Baño con hielo REACTIVOS • Solución de éter etílico éter de petróleo (1:3) • Alcohol etílico al 80 % ( V/V) • Solución de ácido perclórico (HClO4) al 52 % • 9.5 g de antrona (9.dihidro . El reactivo sirve por 3 d a 4 d conservándolo a 0 °C. desecada a 105 °C).oxoantraceno) en 250 ml de ácido sulfúrico concentrado de 96 %.10 . Solución de antrona.  Añada 10 ml de alcohol etílico al 80 % calentado previamente  a 80 °C. Descarte la solución alcohólica y repita la extracción con alcohol etílico calentado a80 °C. . Decantar y descartar la solución éter etílico -éter de petróleo. Añada 25 ml de la solución éter etílico .Extracción grasas y azucares Pese 2 g de muestra previamente molida y homogeneice según la NTC 5554 en un tubo de centrífuga de 50 ml a 100 ml con tapa hermética. tape y agite vigorosamente.éter de petróleo. Centrifugue a 2 500 rpm durante 5 min. agite y centrifugue a 2 500 rpm durante 5 min. Elimine el alcohol. Deje en reposo por 15 min. Agite. Añada 20 ml de agua y centrifugue por 5 min. mezcle bien. Añada 6. . Transfiera la solución sobrenadante a un matraz aforado de 100 ml. Lleve a volumen y filtre a través de papel de filtro.Extracción de Almidones Añada 5 ml de agua destilada al residuo obtenido en la extracción de azúcares. Añada 5 ml de agua al residuo. mezcle y agite por 5 min. lave el contenido total del tubo de centrífuga y transferiera al matraz aforado de100 ml que contiene el primer extracto. agite bien.5 ml de solución de ácido perclórico y deje en reposo por 30 min. adicione 6.5 ml de la solución de ácido perclórico 52 %. . Retire el tubo de ensayo del baño agua hirviendo y enfríe rápidamente a 25 °C. ya que el color es estable sólo este período. Tome una alícuota de 5 ml en un tubo de ensayo y enfríe en baño de agua con hielo.5 min a 100 °C. Mezcle bien y caliente por 7. pasados los cuales comienza su disminución. Añada 10 ml de la solución de antrona. Lea en la curva patrón la concentración de dextrosa equivalente a la absorbancia medida . teniendo cuidado con el desprendimiento de calor. Determine la absorbancia a 630 nm dentro de los primeros 30 min.Determinación de Almidón Diluya 5 ml del filtrado en un matraz aforado de 200 ml y lleve a volumen con agua destilada. formando un espectro atravesado por numerosas líneas oscuras y claras. separándolo en bandas de longitudes de onda específicas. semejante a un código de barras del objeto.espectrofotómetro Un espectrofotómetro es un instrumento que descompone un haz de luz (haz de radiación electromagnético). con el propósito de identificar. calificar y . Componentes Básicos     Fuente de luz Monocromador Portamuestra Detector y Sistema de Lectura . Distribución de la luz en el espectrofotómetro . Este se encarga de obtener la luz monocromática. Es la que se encarga de iluminar la muestra. distribución de energía espectral continua. . colimadores y elementos de dispersión. reduciendo el tiempo de medida.Componentes. Fotodetectores. 2. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad. 1. Fuente de luz. Este se encarga de percibir la señal de forma simultanea cubriendo el espectro visible. direccionabilidad. esta constituido por rendijas de entrada y de salida. 3. Monocromador. lentes.COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS MATERIALES DE LOS COMPONENTES OPTICOS En la Figura se muestran que tipo de material se emplea en función de la λ (región espectral) para cubetas . . prismas y selectores de λ. ventanas. .COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS FUENTES DE RADIACIÓN Y DETECTORES En la Figura se resumen los diferentes sistemas de detección de la señal así como las fuentes usadas en función de la λ (región espectral). que emiten un número limitado de líneas o bandas de radiación.FUENTES DE RADIACIÓN  Su misión es la generación de un haz de radiación con suficiente potencia de salida y estabilidad para que se detecte y se mida con facilidad.. Fluorescencia molecular Lámpara de vapor metálico UV-Visible y Raman Absorción molecular . Fluorescencia Lámpara LASER UV-Visible-IR molecular y Raman . cada una de las cuales abarca un limitado Δλ. FUENTES USADAS EN ESPECTROSCOPÍA FUENTE Δλ (nm) TIPO DE ESPECTROSCOPIA Lámpara de Xenón 250-600 Fluorescencia molecular y Raman Lámpara de 160-380 Absorción molecular (UV) Hidrogeno/Deuterio Lámpara de Wolframio 350-2200 Absorción molecular (Visible/IR cercano) CONTINUAS Lámpara de Absorción molecular (UV/Visible/IR 240-2500 Wolframio/Halógeno cercano) Lámpara de Nicrom 750-20000 Absorción molecular (IR) Lámpara de Nernst 400-20000 Absorción molecular (IR) Fuente Globar 1200-40000 Absorción molecular (IR) Lámpara de Cátodo hueco UV-Visible Absorción y fluorescencia atómica Lámpara de descarga sin UV-Visible Absorción y fluorescencia atómica electrodos DE LINEAS Absorción atómica.COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCÓPICOS 1. que emiten radiación que varia su intensidad en un amplio Δλ y DISCONTINUAS O DE LÍNEAS.  Pueden ser CONTINUAS . . limpio y libre de humedad  .  La cubeta se sujeta por los lados opacos. hasta ¾ partes de la cubeta  No se deben derramar líquidos. encontrarse turbias o con precipitados. el espectrofotómetro. no debe ser excesivo para evitar que se desborde. se puede dañar parte del mecanismo  Se debe mantener.  El volumen de la muestra en la cubeta.CUIDADOS Las muestras no deben tener burbujas. en caso de que sucediera. máximo. ácidos o álcalis. se debe limpiar con un paño limpio o papel absorbente suave. para evitar rayarla. sobre todo solventes.  La cantidad a adicionar es. dentro del contenedor de la cubeta. . Estabilidad del color Perdida por evaporación durante el calentamiento.Fuentes de error Las posibles fuentes de error que pueden interferir en este método están: • • • • • • • Inestabilidad del reactivo Variación del tiempo de calentamiento Temperatura del baño Variación de la concentración del acido en el reactivo Variación de la forma de adicionar el reactivo. Determine la absorbancia correspondiente a cada una de estas soluciones a 630 nm. 3 ml.Con las lecturas de absorbancia obtenidas para cada una de las soluciones elabore una curvapatrón de valores de absorbancia contra miligramos de dextrosa.PREPARACIÓN DE LA CURV A PATRÓN   Diluya a volumen 1 ml. y 4 ml de la solución patrón de glucosa en una seriede matraces aforados de 200 ml. . 2 ml. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS Determine la concentración de almidón en la muestra a partir de la curva patrón mediante la siguiente expresión:   En donde1. Los resultados se refieren a 100 g y se expresan como porcentaje de almidón.06 = es el Factor de conversión de Dextrosa en Almidón. utilizando la siguiente expresión:   en donde m = es el peso de la muestra. expresado en gramos . Gracias ¡¡¡ .