Norma Tecnica Vigilancia de Laboratorio

NORMA TÉCNICAI lustración 1 M INISTERIO DE SALUD INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA VIGILANCIA DE LABORATORIO INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DEPARTAMENTO LABORATORIOS DE SALUD AUTORES DEPARTAMENTO LABORATORIOS DE SALUD SUBDEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA SECCIÓN MICOBACTERIAS SECCIÓN ESPIROQUETAS SECCIÓN BACTERIOLOGÍA SECCIÒN DE VIROLOGÍA SUBDPTO. COORDINACION DE LABORATORIO SECCION PARASITOLOGIA INDICE Página Introducción Vigilancia de Laboratorio de Campylobacter spp Vigilancia de Laboratorio de Chlamydia psittaci Vigilancia de laboratorio de Coxiella burnetti Vigilancia de Laboratorio de Escherichia coli Productor de Toxina Shiga STEC Escherichia coli Verotoxigénico O157 y otros Vigilancia de Laboratorio de Echrlichia spp. Vigilancia de Labortorio de Legionella pneumophilia Vigilancia de Laboratorio de Leptospira spp. Vigilancia de Laboratorio de Listeria monocytogenes Vigilancia de Laboratorio de Salmonella spp. Vigilancia de Laboratorio de Shigella spp. Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus agalactiae Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pneumoniae Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pyogenes Vigilancia de Laboratorio de Treponema pallidum Vigilancia de Laboratorio de Tripanosoma cruzi Vigilancia de Laboratorio de Vibrio cholerae Vigilancia de Laboratorio de Vibrio parahaemolyticus Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Hepatitis C Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Hepatitis B Vigilancia de Laboratorio de Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) Vigilancia de Laboratorio de Yersinia spp. Vigilancia de Resistencia antimicrobiana a Enterococcus spp. Vigilancia de Resistencia antimicrobiana de Haemophilus influenzae serotipo b Vigilancia de Resistencia antimicrobiana del Mycobacterium tuberculosis Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Neisseria gonorrhoeae Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Neisseria meningitidis Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Salmonella spp. 12 16 19 22 26 29 32 35 38 41 44 48 54 57 60 64 68 79 76 79 82 84 87 90 3 4 7 9 Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Streptococcus pneumoniae Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Staphyloccocus aureus 92 94 96 .Vigilancia de Resistencia antimicrobiana Shigella spp. siendo los resultados de laboratorio usados solamente para confirmar el diagnóstico ya hecho por los médicos tratantes u otros profesionales de la salud. históricamente. el estudio de los problemas de salud o los eventos que ocurren a las personas. es decir.Int r od uc c ió n La Epidemiología es básicamente. el Instituto de Salud Pública de Chile tiene la obligación de organizar. decreto ley Nº 158. y para ello. La última actualización del listado oficial de las enfermedades sujetas a vigilancia nacional. para ser usadas en el control y prevención de las enfermedades. para a su vez. Este último define el rol de los laboratorios públicos y privados en la vigilancia epidemiológica de las enfermedades transmisibles. las que deben ser utilizadas por los laboratorios del país.cl).2004) en el cual existe un componente de laboratorio en el proceso de su reporte. en su rol a nivel local. se aprueba el 22 de octubre del 2004. todo lo cual se plasma en el Decreto Nº 712 del año 2000 y modificado el año 2002 como decreto Nº 139. obteniendo tasas que son comparables en el tiempo. es importante no olvidar que ademas existen otros agentes bajo notificación (Vigilancia Universal. Para cumplir con este objetivo se han diseñado las “Fichas de Notificación de Laboratorio” contenidas en esta Norma Técnica. una notificación basada en hallazgos clínicos. según corresponda (www. notificar definitivamente al Ministerio de Salud. Sin embargo desde 1999. y establece la obligatoriedad de notificar la detección en el laboratorio de los agentes etiológicos allí definidos. para lo cual se encuentran disponibles formularios correspondientes para el envío de cepas o datos. se ha usado en nuestro país fundamentalmente la vigilancia de morbilidad. Julio García Moreno Jefe Departamento Laboratorios de Salud 3 . en que se inicia la revisión del Reglamento sobre Notificación de Enfermedades de Declaración Obligatoria. en el Decreto Nº 158. en la vigilancia epidemiológica de las enfermedades transmisibles. que había sido aprobado en 1983. tomadas a nivel de población. En esta importante tarea. incluyendo los agentes etiológicos que deben notificar los laboratorios públicos y privados. confirmar y analizar la información procedente de los laboratorios públicos y privados del país. evaluar. se incluyen además del Sistema de Vigilancia de Morbilidad.ispch. el Sistema de Vigilancia Ambiental y el Sistema de Vigilancia de Laboratorio. Las fichas de esta norma técnica corresponden a todas las enfermedades bajo Vigilancia de Laboratorio. Cualquier agente aislado de este grupo de enfermedades debe obligatoriamente ser enviado al Laboratorio Nacional de Referencia Instituto de Salud Pública de chile. Esta ciencia tiene como sustento la notificación del fenómeno estudiado. Dr. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Campylobacter son bacilos gram-negativos con formas curvas sigmoídeos o espirales. no forman esporas y generalmente son microaerófilos.jejuni . TIPO DE MUESTRAS REQUERIDAS -Deposición PERIODO OPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante sospecha de la enfermedad y previo al tratamiento antibiótico CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA Si el periodo de transporte es mayor a 2 horas la muestra debe ser colocada con tórula en medio de transporte como Cary-Blair. coli ENFERMEDAD HUMANA PRODUCIDA POR ESTE AGENTE La infección debido a C.Vigilancia de Laboratorio de Campylobacter spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Campylobacter spp son considerados como una de la bacterias que más comúnmente causa enteritis en el mundo.) así como también complicaciones tardías de la enfermedad : síndrome de Guillain Barré y artritis reactiva. además pueden producir infecciones extraintestinales (bacteriemia. Familia : Campylobacteraceae Genero : Campylobacter Especies a vigilar : C. son móviles por un flagelo único o bipolar. nefritis etc. En Chile no se conoce la importancia que tiene este agente a nivel nacional. hepatitis. jejuni y C. C. TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Tinción Cristal violeta / Bicarbonato de sodio (VB) Cultivo 4 . produce un amplio espectro de la enfermedad desde pacientes asintomáticos hasta gastroenteritis severa. Stuart o Amies. pueden presentarse con formas esféricas o cocoides especialmente en cultivos viejos. coli . por lo cual se hace necesario el estudio con el objeto de conocer su prevalencia y establecer su control como agente asociado a Enfermeda Trasmitida por Alimento (ETA). Aquellos laboratorios que aíslen Campylobacter deben mandar la cepa aislada en medio de transporte Cary Blair dentro de 48 horas a temperatura ambiente. ENVÍO A LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que realicen diagnóstico presuntivo a través de la tinción VB deben enviar al Instituto de Salud Pública las láminas que resulten positivas. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Debe manipularse de acuerdo al nivel 2 de la Clasificación Internacional de Riesgo (Ref. 2004). acompañados del formulario correspondiente.Laboratory Biosafety Manual 4° Ed.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de calidad. 5 . mediante formularios provistos por esta institución. Vigilancia de Laboratorio Campylobacter spp. Laboratorio Local Muestra Medio de Transporte Cary Blair Negativa TINCION Violeta Bicarbonato Positiva Negativo CULTIVO Positivo Informe al paciente Enviar lámina ISP Informe presuntivo al paciente Informe al paciente Envío Cepa ISP Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL Informe al MINSAL Informe Laboratorio Local 6 . Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente. La vigilancia se hace necesaria con el fin de conocer la prevalencia de en Chile. debido a que representa un problema de salud pública en otros países. informando la técnica utilizada. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Las chlamydias son bacterias intracelulares obligadas. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP. frecuentemente ocupacional. no crecen en medios de cultivo sintéticos. psittaci ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Psitacosis . neumonía atípica en muchos casos severa. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura entre 4-8°C TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Inmunofluorescencia indirecta ELISA PCR CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Chlamydia psittaci debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. que puede causar brotes en los lugares de trabajo y en ocasiones menos frecuentes intrafamiliares. para lo cual debe utilizar el “Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología”.Vigilancia de Laboratorio de Chlamydia psittaci JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La psitacosis es una infección respiratoria. (Ref. Familia Genero Especie a vigilar : : : Chlamydiaceae Chlamydia C. solamente en cultivos celulares. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. 7 . TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras: la primera en la fase aguda (primera semana) y la segunda tres a seis semanas después. Vigilancia de Laboratorio Chlam psittaci ydia Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalm ente al ISP. inform ando la técnica utilizada Informe al paciente Inform al M e INSAL Laboratorios que NO realizan la Técnica M uestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Inform al Laboratorio Local e Inform al Laboratorio Local e Inform al M e INSAL 8 . Fiebre crónica: Es la forma más seria y produce principalmente endocarditis. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar refrigerado entre 4° y 8° C. infección de prótesis vasculares. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS . causar cuadros febriles agudos o crónicos. Se debe realizar el diagnóstico diferencial con otras fiebres de origen desconocido. El período de incubación es de 10-16 días. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras: la primera en la fase aguda y la segunda tres a seis semanas después. . burnetti produce una rickettsiosis febril aguda. También puede complicar un embarazo. Familia Género Especie a vigilar : Rickettsiaceae : Coxiella : C. siendo este último el de elección. ELISA o Inmunofluorescencia indirecta. osteomielitis. hepatitis y fiebre prolongada. Este microorganismo tiene dos fases antigénicas: la fase I aparece en la naturaleza y la fase II es detectable después de múltiples traspasos de laboratorio en huevos o cultivos celulares. Ambas fases son extraordinariamente estables en el ambiente y resistentes a muchos desinfectantes.Vigilancia de laboratorio de Coxiella burnetti JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA C. burnetti ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Fiebre Q. La infección puede ser asintomática en el 50% de los casos. expectoración escasa. dolor torácico y signos físicos mínimos. 9 .Serológicas: Titulación de anticuerpos contra C. En algunos casos se presenta neumonitis con tos. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Coxiella burnetti es un cocobacilo pleomórfico con una pared celular gram-negativa y que solo crece intracelularmente. que se puede presentar en forma repentina existiendo una enorme variabilidad en su gravedad y duración. Este cuadro se pueden complicar con meningitis aséptica y/o encefalitis. burnetti en muestras de suero pareado por métodos como: Fijación del complemento. Fiebre aguda: Puede ser de tres tipos. autolimitada. o asociada con neumonía y/o hepatitis.Detección directa : por Inmunofluorescencia desde tejidos o por PCR. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Las muestras de tejido y sangre deben manipularse de acuerdo al Nivel 3 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. 2004), dado que Coxiella burnetti es altamente infecciosa. Las cepas de Coxiella burnetti constituyen un riesgo moderado para la persona y bajo para la comunidad. Debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de la Clasificación Internacional de Riesgo. ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente, para lo cual debe utilizar el “Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología” . 10 Vigilancia Laboratorio Coxiella burnetti Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalmente al ISP, informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que NO realizan la Técnica Muestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 11 Vigila ncia de Laborat orio de Escherichia coli Pr oduct or de T oxina Shiga ST EC Escherichia col i Verotox igé nico O157 y otros. JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Escherichia coli verotoxigénico, denominado actualmente Escherichia coli productor de Toxina Shiga (STEC), es considerado un agente emergente que puede causar enfermedad diarreica o brotes epidémicos con complicaciones severas. STEC es agente de vigilancia como patógeno emergente grave, debido a la alta letalidad producida por el cuadro clínico Síndrome Hemolítico Urémico (SHU). DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Escherichia coli es un bacilo gramnegativo, que crece bien en medios de cultivo tradicionales. Familia : Enterobacteriaceae Género : Escherichia Especie a vigilar : E. coli, Categoría Enterohemorrágico (ECEH), denominado E. coli Productor de Toxina Shiga (STEC). Las cepas de E. coli causantes de diarrea o enfermedades entéricas han sido clasificados en 6 categorías: E. coli enteropatógeno (ECEP), E. coli enterohemorrágico (ECEH ó STEC), E. coli enterotoxigénico (ECET), E. coli enteroinvasivo (ECEI), E. coli enteroagregativo (ECEAgg) y E. coli adherencia difusa (ECAD). El prototipo de STEC es el serotipo O157:H7, forma parte de la flora intestinal de animales bovinos, ovinos, porcinos, aves, etc. La infección puede ser por ingesta de alimentos contaminados, principalmente cárneos, lácteos o de persona a persona. ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE La infección por STEC es una zoonosis que puede causar casos esporádicos o brotes de diarrea, Colitis Hemorrágica (CH), Síndrome Hemolítico Urémico (SHU), Púrpura Trombocitopénica Trombótica (PTT). Se estima que alrededor del 10 % de la población pediátrica infectada por STEC desarrolla SHU, cuya mortalidad es de 3 a 5 % en niños menores de 5 años y un alto porcentaje en mayores de 60 años. El cuadro clínico de SHU producido por STEC, se caracteriza inicialmente por diarrea sanguinolenta, de 3 a 4 días de duración, acompañada de dolores abdominales, tenesmo y pujo. Se han descrito alrededor de 50 serogrupos capaces de producir SHU. En nuestro país algunos de los serogrupos identificados de cepas de pacientes con este cuadro clínico son: O157, O26, O55, O6, O111. TIPO DE MUESTRA REQUERIDA Deposición 12 La patogenicidad de STEC está dada por la toxina Shiga. Toxina Shiga Stx1 y Stx2. poner la deposición en medio de transporte Cary-Blair. ya que la mayoría de los pacientes excretan el agente por períodos menores a siete días. coli a muestras provenientes de pacientes con cuadro clínico SHU o CH. O6. Determinación de factores de virulencia por PCR: . O55. O111 u otros asociados en Chile. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio debe estar adscrito a un sistema de control de calidad como el Programa de Evaluación Externo de Calidad (PEEC) del Instituto de Salud Pública u otro similar. lo antes posible (3 – 4 días). Pruebas biológicas para detección de citotoxina (cultivo celular línea Vero). Laboratory Biosafety Manual 4° Ed.Factor adherencia eae.PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante la sospecha clínica de SHU o presencia de CH. obtener la muestra de deposición para estudio de STEC. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Escherichia coli debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. 2004) 13 . Si el tiempo entre la recolección de la muestra y la siembra es mayor. TÉCNICAS UTILIZADAS POR EL LABORATORIO NIVEL LOCAL Realizar coprocultivo para estudio de E. Enterohemolisina E-Hly Pruebas Serológicas: Somática O y Flagelar H. (Ref. Continuar con serología para los serogrupos de mayor frecuencia: O157. Biotipificación de cepas O157:H7. coli aislada de SHU o CH independiente del resultado serológico. O26. Enviar al Laboratorio de Referencia toda cepa de E. a temperatura ambiente. El paciente no debe estar con tratamiento antimicrobiano. LABORATORIO DE REFERENCIA Confirmación Bioquímica de especie. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra de deposición debe colocarse en un frasco limpio y ser cultivada dentro de las 2 horas de recolección. Transportar a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de bioseguridad para material biológico. Se deben estudiar todas las cepas de E. coli provenientes de enfermedad tóxico alimentaria. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmar. SHU y CH. coli Diarreogénico. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. Con el solo hecho de enviar una cepa. Enviar las cepas en tubos de agar corriente u otro medio no inhibidor debidamente sellado y rotulado. Todas las cepas deben venir con el formulario para “Formulario para envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada.ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar 3 cepas al Laboratorio de Referencia de E. ésta se considera automáticamente notificada. donde se realizará su confirmación. 14 . CH. ETA Cultivo Escherichia coli 3 colonias Negativo Envío al ISP Confirmación Positivo Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL Informe Laboratorio Local SHU CH ETA : Síndrome hemolítico urémico : Colitis hemorrágica : Enfermedad transmitida por alimento 15 .Vigilancia de Laboratorio Escherichia coli productora de toxina Shiga STEC Muestra Deposición Cuadro : SHU. Familia Género Especies a vigilar : Rickettsiaceae : Ehrlichia : Ehrlichia spp. La vigilancia de este agente permitirá diseminación en Chile. enfermedad de Lyme. anorexia. sennetsu. que infectan y se propagan mas eficientemente dentro de las vacuolas citoplasmáticas especialmente en fagocitos mononucleares y granulocíticos. fagocitofila. y es cuando afecta a los mononucleares. tularemia y otros cuadros febriles. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras. Esta enfermedad se ha presentado en la parte occidental de Japón. Son bacterias gramnegativas. En este cuadro de fiebre es común la linfoadenopatía generalizada. conocer su importancia y controlar su ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Ehrlichiosis. en este caso hay hay predilección por los granulocitos. mialgias y vómitos. 16 . náuseas. enfermedad bacteriana febril aguda. El diagnóstico diferencial incluye fiebre de las Montañas Rocosas. la primera en la fase aguda y la segunda tres a seis semanas después. la cual transmite esta bacteria a los perros y eventualmente a los humanos por picaduras. el agente causal es E. Los síntomas suelen ser inespecíficos. Por análisis estructural dos distintas formas morfológicas se pueden identificar: “core denso” y “forma reticulada”. con síntomas inespecíficos como fiebre. chaffeensis. las manifestaciones varían desde cuadros muy leves hasta la enfermedad grave que puede ser mortal. cefalea. Ehrlichiosis Sennetsu o fiebre Sennetsu. intracelulares obligadas. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Ehrlichia spp. Se puede presentar de tres formas: Ehrlichiosis Humana Monocitotrópica (EMH).Vigilancia de Laboratorio de Ehrlichia spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La ehrlichiosis es una enfermedad recientemente reconocida en el hombre. Se han notificado casos en Estados Unidos en estados del medio oeste y noroeste. el agente causal es E. Ehrlichiosis Humana Granulocitotrópica (EGH). el agente causal es E. Se han notificado casos en estados meridionales de Estados Unidos. El reservorio parece ser la garrapata Rhipicephalus sanguineus. 17 . el cual es un método rápido y específico que permite identificar el agente etiológico. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Serología: Titulación de anticuerpos contra Ehrlichia en muestras de suero pareadas por el método de Inmunofluorescencia indirecta los que pueden ser provistos comercialmente o a través de laboratorios de salud pública. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP.CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar refrigeradas entre 4 y 8 °C. Moleculares: Reacción en cadena de polimerasa (PCR). informando la técnica utilizada. (Ref. para lo cual debe utilizar el “Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología” . CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Ehrlichia spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente. Vigilancia Laboratorio Ehrlichia spp Negativa Laboratorio Local que realiza la técnica Positiva Notificar semanalmente al ISP informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que no realiza la técnica Muestra Negativa Laboratorio de Referencia Instituto de Salud Pública Positiva Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 18 . Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura entre 4-8°C TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Inmunofluorescencia indirecta Inmunofluorescencia directa Técnicas de biología molecular CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Legionella pneumophila debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. fiebre. tos seca. (Ref. pneumophila ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Legionella spp produce dos tipos de manifestaciones clínico-epidemiológicas identificadas y diferentes: “enfermedad de los legionarios” (neumonía) y “fiebre de Pontiac”( cuadro febril inespecífico).Vigilancia de Laboratorio de Legionella pneumophila JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La infección con Legionella pneumophila produce neumonía bacteriana aguda. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Dos muestras. mialgia. que se puede presentar en brotes o episodios aislados. requiere de cisteína y otros nutrientes para su aislamiento desde muestras clínicas. la primera en la fase aguda (primera semana) y la segunda tres a seis semanas después. malestar general. dolor abdominal y diarrea. Ambas se caracterizan por anorexia. que en ausencia de tratamiento tiene una alta mortalidad. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo gramnegativo. 2004) 19 . por lo cual es motivo de vigilancia. cefalalgia. En Chile no se conoce su prevalencia a nivel nacional. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Suero. fastidioso. Familia Genero Especie a vigilar : Legionellaceae : Legionella : L. 20 . informando la técnica utilizada. Aquellos laboratorios que no cuenten con la técnica deberán enviar las muestras al Laboratorio de Referencia donde se realizará el estudio del agente. para lo cual debe utilizar el “Formulario para envío de muestras clínicas de la Sección Bacteriología”.ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que diagnostiquen este agente estarán obligados a notificarlos semanalmente al ISP. Vigilancia de Laboratorio Legionella pneumophila Negativo Laboratorio Local que realiza la Técnica Positivo Notificar semanalmente al ISP. informando la técnica utilizada Informe al paciente Informe al MINSAL Laboratorio que NO realizan la Técnica Muestra Negativo Laboratorio de Referencia ISP Positivo Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 21 . Género : Leptospira. se cultiva fácilmente en medios artificiales. A diferencia de otras espiroquetas patógenas. La multiplicación óptima es a pH 7.4. pH. de gran movilidad debido a un axostilo. aunque han habido varios brotes diagnosticados. estarán obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública. procedencia (ver ficha adjunta). tipo de muestra. afectando a animales domésticos. 22 . lo cual permite una mejor planificación de prevención y control De acuerdo al actual Reglamento de Notificación de Enfermedades Transmisibles de Declaración Obligatoria los laboratorios clínicos o bancos de sangre. Serogrupos existen alrededor de 23. con una o ambas extremidades curvas. En Chile la magnitud de esta enfermedad es desconocida. Familia : Leptospiraceae. La enfermedad puede variar desde un proceso inaparente a uno grave que puede terminar con la muerte del paciente. (Patógena) y L. silvestres y hombres. dado que corresponde a una zoonosis de amplia distribución geográfica. de forma helicoidal. Especie: L. por lo que esta vigilancia activa permitirá tener un real conocimiento de ella. Interrogans.biflexa (Saprófita) Serovariedades existen más de 200.27 Leptospirosis AGENTE ETIOLÓGICO Leptospira spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO La vigilancia de este agente es importante. El periodo de sobrevida de las leptospiras patógenas en agua varía según temperatura. Experimentalmente se ha constatado la persistencia de leptospiras viables en agua hasta por 180 días. salinidad y grado de polución. en formularios en que debe quedar registrada la siguiente información: Identificación del paciente. públicos y privados.Vi g il anci a de Lab orat ori o de Le ptosp ira s p p CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE-10) A. Morfología: Microorganismo aeróbico obligatorio. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Clasificación: Orden: Spirochaetales. en forma de gancho.2-7. que dura desde 1 semana a varios meses. La gravedad de la patología depende. en parte. síndrome de disfunción respiratoria del adulto o arritmias por miocarditis. de la variedad serológica infectante. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA La muestra se debe conservar y transportar refrigerada a temperatura de 4-8 ° C. pero es importante una serología basal. de las influencias exteriores 23 . alcanzando a un 20% en los pacientes con ictericia y falla renal que no hayan sido tratados adecuadamente. La muerte se debe a falla hepatorrenal. En la segunda semana. La enfermedad se caracteriza por dos fases: La bacterémica (leptospirémica). En ningún caso se aceptarán tubos o frascos tapados con algodón. Suero en cantidad de 1 a 2 cc. que dura 7-10 días y que se presenta como cuadro febril tipo influenza y la leptospirúrica.ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Leptospirosis La mayor parte de las personas infectadas cursan con un cuadro clínico benigno y moderado. Durante este período no hay anticuerpos circulantes detectables por las pruebas serológicas de rutina. El primero corresponde a la forma clásica o enfermedad de Weil que es la forma menos frecuente y más severa y que se relaciona con la variedad icterohemorragiae. Se distinguen dos tipos clínicos: el ictérico y el anictérico. La tasa de letalidad es baja. la enfermedad subclínica o inaparente es más frecuente en zonas endémicas. incluso con diálisis renal. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Durante la primera semana de la enfermedad (fase leptospirémica) la espiroqueta se pesquisa en sangre y LCR por medio del cultivo y también por examen directo. Recipiente primario: Tubo plástico con tapa rosca o tapón de goma. Recipiente secundario: Recipiente metálico o plástico que debe contener material absorbente en cantidad suficiente para absorber todo el líquido o contenido biológico de la muestra en caso de fuga desde el recipiente primario. Las manifestaciones clínicas son variables y con diferentes grados de severidad. que en un alto porcentaje tiene meningitis aséptica. Envoltura externa: Protege al recipiente secundario durante el transporte. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDOS Las muestras apropiadas para un diagnóstico rápido son: Sangre en cantidad de 5 cc. pero aumenta con la edad. para posterior pareamiento serológico para una correcta interpretación de los resultados. del 8º-10º día post-infección (fase leptospirúrica) ya se pueden detectar los anticuerpos específicos. hemorragia. donde se realizará la confirmación. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL Puede realizar la técnica Elisa IgM o algún test rápido LABORATORIO DE REFERENCIA Técnica Elisa IgM Confirmación por la técnica de Microaglutinación MAT (estudio de serovar infectante) CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Leptospira spp debe manipularse de acuerdo al nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación internacional de Riesgo. sin enviar la muestra. Laboratory Biosafety Manual 4º ED. Todas las muestras deben enviarse con el formulario “Envío de muestras: sospecha de Leptospirosis” a la Sección Espiroquetas con toda la información solicitada. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que obtengan exámenes con resultados positivos para leptospirosis están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar muestra de suero al Laboratorio de Referencia de Espiroquetas. En aquéllos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la muestra a confirmación. Si la confirmación se realiza en un laboratorio local.Identificación: En la parte externa del recipiente secundario debe adherirse el formulario u orden de examen indicando claramente la identificación del paciente y de la muestra. (Ref. debe necesariamente notificarse con el/los exámenes realizado/s considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 24 . igualmente debe notificarse al Instituto de Salud Pública completando toda la información del formulario. Algoritmo Diagnóstico Leptospira spp Laboratorio Local * MUESTRA Suero de Paciente con Cuadro Clínico Compatible con Leptospirosis Positivo Estudio en Laboratorio Local Negativo Notificación examen Positivo. Adjunto muestra para estudio de serovar Se informa ** Laboratorio de Referencia Nacional de Leptospiras ISP Nota * : Si no hay capacidad diagnóstica en Laboratorio local. se envía al ISP Nota ** : Si el cuadro clínico es altamente sospechoso el examen debe ser repetido 2 semanas después 25 . Vigilancia de Laboratorio de Listeria monocytogenes JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Es importante la vigilancia de este agente, dada su capacidad de producir brotes asociados a alimentos y por el aumento de aislamientos a partir de cuadros invasivos como sepsis de embarazadas y en recién nacidos, meningitis en neonatos y también en adultos con algún grado de inmunosupresión DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Es un cocobacilo pequeño grampositivo, B-hemolítico, catalasa positivo, crece bien en agar con sangre de cordero al 5% en atmósfera de 3-5% de CO2. Género Especie a vigilar : Listeria : L.monocytogenes (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Principalmente cuadros invasivos en menores, embarazadas y adultos inmunodeprimidos. De éstos, los más frecuentes son meningitis y septicemias. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Líquido cefaloraquídeo, sangre y otros líquidos o muestras provenientes de cavidades estériles. PERÍODO OPTIMO DE TOMA DE MUESTRA La muestras deben ser tomadas según las indicaciones específicas descritas para cada una de ellas, lo antes posible, en forma aséptica, en períodos de alza febril y previo tratamiento antimicrobiano. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Las muestras deben enviadas al Laboratorio de acuerdo a los procedimientos definidos en el Manual de Toma de Muestras. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Laboratorio Local Cultivo e identificación bioquímica Laboratorio de Referencia -Confirmación bioquímica -Serotipificación 26 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio local debe estar adscrito a algún sea este el PEEC u otro similar. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Programa de Control de Calidad, ya Listeria monocytogenes debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. 2004) ENVIO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente en enfermedad invasora están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia, en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. El envío de estas cepas, se hará en tubos de agar sangre con cultivo fresco o en medio de transporte (Amies) debidamente sellado, rotulado y a temperatura ambiente. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación, debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 27 V igila nc ia La bora torio d e L is teria m on oc y togenes La bo ratorio Lo cal M ue stra cua dro inv as iv o Lieste ria m ono cytoge nes Env ío al Institu to de S alud P ub lica de C hile Co nfirm aci ón y Se rotipificac ión Inform e al M IN S AL Inform e al La bo ratorio Lo cal 28 fuentes de infección e implementar medidas de control.Vigilancia de Laboratorio de Salmonella spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO La salmonelosis es una de las principales causas de enfermedades transmitidas por alimentos. durante la etapa aguda (generalmente entre 5 a 7 días) y previo al tratamiento antimicrobiano.Paratyphi A y B ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE La salmonelosis es una enfermedad que comúnmente se manifiesta por enterocolitis aguda de comienzo repentino. houtenae. nauseas y vómitos. La caracterización y tipificación definitiva de los aislamientos es de utilidad en el estudio epidemiológico para identificar tendencias. PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Lo antes posible una vez que se sospeche de la infección. otras. arizonae. S. Las que causan fiebres entéricas son: S.Typhi. meningitis. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDAS Las muestras clínicas apropiadas para el diagnóstico son: Principalmente deposiciones y dependiendo del sitio de infección: sangre. orina. La especie enterica esta compuesta de 6 subespecies: enterica. piodermia o pielonefritis. diarizonae. La detección y control de los brotes es complicada por el hecho de que existen más de 2000 serotipos diferentes de Salmonella. dolor abdominal. colecistitis. oxidasa negativa. Familia Género Especies a vigilar : Enterobacteriaceae : Salmonella : Salmonella spp. heridas. que incluye cefalalgia. La infección puede comenzar como una enterocolitis aguda y transformarse en una fiebre intestinal con septicemia o infección focal. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo Gram negativo. detectar brotes. indica. diarrea. 29 . tanto las especies que causan infecciones gastrointestinales como las que producen fiebres entéricas son objeto de vigilancia. Salmonella Typhimurium). A veces el agente infeccioso se localiza en cualquier tejido del cuerpo produciendo abscesos y causando artritis séptica. crece bien en medios corrientes a 35ºC a las 18 -24 horas de incubación en ambiente aerobio. La mayoría de los serotipos que afectan al hombre se encuentran en la subespecie enterica (Ejemplo: Salmonella Enteritidis. salamae. La deshidratación especialmente en lactantes y ancianos puede ser grave. neumonía. endocarditis. pericarditis. Cary Blair).Fagotipificación .CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Deposiciones: muestra fresca debe procesarse idealmente durante los primeros 30 minutos después de obtenida. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. privilegiando aquellas de enfermedad invasora). Para otro tipo de muestras remitirse al manual de procedimientos. 30 . en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. Los aislamientos deben mantenerse en agar nutritivo o agar TSI. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. . identificación bioquímica y serotipificación dependiendo de la complejidad del laboratorio. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. el que se conserva a 4ºC hasta procesar la muestra lo antes posible para lograr una mayor recuperación del patógeno. de lo contrario usar medio de transporte (Ej.Aislamiento del agente. electroforesis de campo pulsado para subtipificación en caso de brotes.Técnicas moleculares: Reacción de polimerasa en cadena (PCR). CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Salmonella spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. .Confirmación bioquímica.Tipificación serológica: Determinación de antígenos somáticos y flagelares. una por cada paciente. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. LABORATORIO DE REFERENCIA . Todas las cepas deben enviarse utilizando el “Formulario para envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Enterobacterias (cepas obtenidas de aislamientos de cualquier sitio anatómico y de cualquier patología. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. (Ref. estos mismos medios pueden usarse para su envío al Laboratorio de Referencia. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL . Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Salmonella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Salmonella spp. Envío Resultado Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por paciente al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 31 . náuseas y a veces toxemia. infección bacteriana aguda que afecta el intestino grueso y la porción distal del intestino delgado y se caracteriza por diarrea acompañada de fiebre. el que se convserva a 4ºC hasta procesar la muestra lo antes posible para lograr una mayor recuperación del patógeno. debido a su baja dosis infectante se transmite fácilmente. La vigilancia de laboratorio permite determinar la prevalencia de las distintas especies y es de utilidad en el estudio de brotes. En los casos típicos las deposiciones contienen sangre y mucus (disentería). por lo tanto es muy importante la refrigeración de las muestras. cólicos y tenesmo. sin embargo muchos casos tienen como cuadro inicial el de diarrea acuosa. Familia Género Especies a vigilar : Enterobacteriaceae : Shigella : S. sonnei ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Causante de shigelosis. durante la etapa aguda (generalmente entre 5 a 7 días) y previo al tratamiento antimicrobiano. vómito. es un importante agente de diarreas principalmente en niños.Vigilancia de Laboratorio de Shigella spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Shigella spp. Cary Blair). La bacteriemia es rara. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDAS Principalmente deposiciones vaginal en niñas u otra) u otras dependiendo del sitio de infección (secreción PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Lo antes posible una vez que se sospeche de la infección. Es una enfermedad grave cuando hay disentería y su complicación más importante es la deshidratación. Se debe tener presente que Shigella es sensible a temperaturas elevadas. boydii S. oxidasa negativa. flexneri S. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Deposiciones: muestra fresca debe procesarse idealmente durante los primeros 30 minutos después de obtenida. de lo contrario usar medio de transporte (Ej. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo Gram negativo. 32 . dysenteriae S. crece bien en medios corrientes a 35ºC a las 18 -24 horas de incubación en ambiente aerobio. Se envia al Laboratorio de Susceptibilidad de ISP para la vigilancia de la resistencia. (una por cada paciente) en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. Para aquellos laboratorios que aíslen más de 10 cepas de Shigella semanales deben enviar una de cada cinco. electroforesis de campo pulsado para estudio de brotes. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas de la Sección Bacteriología” con toda la información solicitada . CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. La notificación debe hacerse del total de cepas identificadas en el periodo considerando los mismos antecedentes solicitados en el formulario de envío de cepas.flexneri . excepto en casos de brotes.Biotipificación de S . . Las cepas deben mantenerse en agar nutritivo o agar TSI. .Aislamiento del agente.Técnicas moleculares: Reacción de polimerasa en cadena (PCR). 33 .TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL: . identificación bioquímica y serotipificación dependiendo de la complejidad del laboratorio. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed.Confirmación bioquímica . la encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. estos mismos medios pueden usarse para su envío al Laboratorio de Referencia.Tipificación serológica: Determinación de serotipo. LABORATORIO DE REFERENCIA: . 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Enterobacterias. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Shigella spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Shigella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Shigella spp. Envío Resultado de Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por Paciente. o 1/5 de las cepas si el laboratorio clínico recibe más de 10 muestras por semana al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 34 . pneumonia. Amies. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. meningitis. diabetes. dispuestas en cadenas. 2004) 35 . amnionitis y esterilidad . CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus agalactiae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo.Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus agalactiae JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA El Streptococcuss agalactiae es el principal agente etiológico de infección invasora en el recién nacido : sepsis y meningitis. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRAS La muestra debe ser procesada de inmediato. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Cocaceas gram-positivas. En pacientes inmunocomprometidos o con enfermedades crónicas: endocarditis e infecciones de tejidos blandos. cirrosis. cáncer. transporte. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Cultivo Serología de lo contrario utilizar medio de CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante sospecha clínica y antes del tratamiento antimicrobiano. beta hemolíticas. líquido articular. Familia Genero Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : Streptococcus agalactiae (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE En el recién nacido: sepsis. tórula seca en sílica. En mujeres embarazadas: infección urinaria. por lo cual es motivo de vigilancia de laboratorio. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS LCR. SIDA. sangre. (Ref. líquido pleural. Stuart. facultativas. 36 . El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. Estas deben venir en tubo de agar sangre con cultivo fresco (18-24 horas) o en medio de transporte. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. a temperatura ambiente.ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. públicos y privados en que identifiquen este agente desde sepsis y meningitis. estarán obligados a enviar la cepa al Instituto de Salud Pública mediante formularios provistos por esta institución. Vigilancia de Laboratorio Streptococcus agalactiae Laboratorio Local Muestras Líquidos estériles Identificación Presuntiva Streptococcus agalactiae Envío de cepa al Laboratorio de Referencia para su confirmación Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL 37 . TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Cultivo e identificación Susceptibilidad a antimicrobiana Serotipificación por técnica de Quellung CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. pneumoniae a nivel nacional en cuadros invasivos como meningitis. Se vigila solamente la enfermedad invasora. bacteremia. meningitis bacteriana. Es importante conocer la prevalencia de S.Vigilancia de Laboratorio de Streptococcus pneumoniae JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La neumonía neumocócica es causa importante de muerte en lactantes y ancianos. pneumoniae (cuadros invasivos) en una ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Neumonía típica. 38 . crece bien en agar sangre a 35°C atmósfera de CO2 al 5%. otitis. conjuntivitis. alfa hemolítico. etc. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Diplococo grampositivo. etc. Familia Género Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : S. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Secreciones del tracto respiratorio inferior LCR Sangre Secreción ótica u otras cavidades estériles PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Al momento de sospechar la enfermedad y antes del tratamiento antimicrobiano CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Enviar las muestras inmediatamente al laboratorio a temperatura ambiente. septicemia. El envío de estas cepas. 39 . debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. en donde se realizará su confirmación y estudio serológico y estudios de susceptibilidad. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. (Ref. 2004) ENVÍO A LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente en enfermedad invasora están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia. se hará en tubos de agar sangre con cultivo fresco o en medio de transporte (Amies) debidamente sellado. rotulado y a temperatura ambiente. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación.CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus pneumoniae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Streptococcus pneumoniae Laboratorio Local Muestra Cuadros Invasivos Diagnóstico Streptococcus pneumoniae Envío datos de Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío Cepa al Laboratorio de Referencia ISP. para su Confirmación Informes periódicos al MINSAL Informe laboratorio Local Informe MINSAL 40 . DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Cocaceas gram-positivas. Familia Genero Especie a vigilar : Streptococcaceae : Streptococcus : Streptococcus pyogenes (aislados de cuadros invasivos) ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Infecciones piógenas complicadas por insuficiencia renal. colonias beta hemolíticas. hace necesaria una vigilancia de laboratorio a nivel nacional. 2004) de lo contrario utilizar medio de 41 . líquido pleural. tórula seca en sílica. TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Cultivo Serología CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad.VIGILANCIA DE LABORATORIO DE Streptococcus pyogenes JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA El incremento en estos últimos años de infecciones piógenas severas causadas por este agente y dada la alta mortalidad asociada. dispuestas en cadenas. sangre. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. punción de absceso. necrosis de tejidos blandos. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Ante sospecha clínica y antes del tratamiento antimicrobiano. transporte: Stuart. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra debe ser procesada de inmediato. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS LCR. líquido articular. coagulación intravascular diseminada (CID). CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Streptococcus pyogenes debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. facultativas. Amies. síndrome de distress respiratorio en el adulto. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación.ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente en enfermedad invasora están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia. 42 . El envío de estas cepas. rotulado y a temperatura ambiente. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. en donde se realizará su confirmación y estudio serológico. se hará en tubos de agar sangre con cultivo fresco o en medio de transporte (Amies) debidamente sellado. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Vigilancia de Laboratorio Streptococcus pyogenes Laboratorio Local Muestra Enfermedades invasora Identificación Streptococcus pyogenes Envío de cepas al Laboratorio de Referencia ISP. para su Confirmación Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 43 . a más de 12 millones de personas en el mundo. Esta es una enfermedad que se transmite por contacto o relación sexual con una pareja infectada.4 m de diámetro y 5-20. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Orden : Familia : Género: Spirochaetales Treponemataceae Treponema Morfología: Son células espiraladas de 0. mortinatos y recién nacidos infectados. cualquier órgano puede ser afectado. latente. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDOS -Exudado de lesiones -Suero -LCR 44 . Sífilis Tardía: Etapa de baja contagiosidad y de gran relevancia clínica. anualmente. Debe diagnosticarse precozmente para evitar complicaciones tardías y para prevenir su propagación. móviles. el treponema invade todos los órganos y fluídos. sintomática. S¡filis congénita precoz. ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE ESTE AGENTE Produce la sífilis. tienen movimiento de rotación y de traslación. En el curso de la enfermedad se distinguen las siguientes etapas: Sífilis Precoz: Etapa localizada.V ig i la n ci a L a b ora t o r io d e T r e p o n e m a p a l l id u m CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE 10) A50-A52 Sífilis especificación.m de largo. sin otra AGENTE ETIOLÓGICO Treponema pallidum JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO Es una enfermedad que afecta.1-1. También puede transmitirse por transfusión sanguínea o vertical de madre a hijo por vía transplacentaria. En este último caso se producen abortos. congénita. como los de atención prenatal en el país. La importancia epidemiológica radica en que se trata de una enfermedad grave pero prevenible y además es un indicador de salud que evalúa los éxitos y fracasos tanto de los programas de lucha contra las enfermedades de transmisión sexual. de multiplicación de los treponemas en el lugar del sitio de entrada al organismo. Sífilis Secundaria: Etapa generalizada. Se observan en microscopio de campo oscuro. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Las muestras de sangre y de LCR deben guardarse entre 4 . Si el análisis se va a realizar con posterioridad la sangre se centrifuga y se guarda el suero a -20ºC. al igual que el LCR. quien debe correlacionarlos con otros exámenes. Los resultados de exámenes son una ayuda para el médico. -Lesiones con costra (sífilis secundaria) -Parches mucosos -Lesiones cérvico-uterinas Muestra de Sangre: Los anticuerpos aparecen de 1 a 4 semanas después de la aparición del chancro. lesión húmeda. todos los resultados reactivos deben confirmarse con un examen treponémico para descartar resultados falsos positivos. pero generalmente es una complicación de sífilis tardía y puede ocurrir después de 2 años de iniciada la enfermedad. 45 . Se recomienda refrigerar las muestras al realizar el traslado. El transporte de las muestras se hace en un recipiente rígido e irrompible y dentro de una bolsa de plástico. Se debe interpretar de acuerdo a la etapa de la enfermedad sospechada. Los documentos adjuntos a la muestra se colocan en una bolsa de plástico separada. aparece entre 10 y 90 días después del contagio (sífilis primaria). los datos clínicos y anamnesis del paciente con factores de riesgo para llegar a un diagnóstico de sífilis. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL RPR en tarjeta (Rapid Plasma Reagin) USR en lámina (Unheated Serum Reagin) VDRL en lámina (Venérela Disease Research Laboratory) MHA-TP (Microhemagglutination Assay for Antibodies to Treponema Pallidum) Elisa IgG/IgM para sífilis Tests treponémicos rápidos de inmunocromatografía LABORATORIO DE REFERENCIA MHA-TP (Microhemagglutination Assay for Antibodies to Treponema Pallidum) FTA-ABS (Fluorescent Treponemal Antibody-Absorption Test) INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Cuando se usan para tamizaje en una población de bajo riesgo.8ºC si se van a procesar dentro de las 72 hrs.PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Exudado de lesiones: -El chancro. Muestras de LCR: Se puede desarrollar neurosífilis durante la etapa secundaria. al Instituto de Salud Pública en el “Formulario de envío de muestras Serología de Sífilis” o “Exámenes para sífilis congénita”. una reacción de prozona (inhibición de la reactividad debido al exceso de anticuerpos) y en algunos casos a sífilis tardía. de los casos confirmados. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD debe manipularse de acuerdo al nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación internacional de Riesgo. 2004) Treponema pallidum ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que obtengan exámenes serológicos no treponémicos reactivos para sífilis deben enviar las muestras para confirmarlas por exámenes treponémicos a un laboratorio local y hacer la notificación semanal. Un examen no treponémico no reactivo.Un examen no treponémico reactivo puede indicar una infección presente. junto con el formulario con toda la información solicitada. Estas reacciones pueden deberse a errores de laboratorio o a la presencia de anticuerpos no relacionados con Sífilis. se deben enviar al Instituto de Salud Pública. debe necesariamente notificarse las muestras con exámenes no treponémicos reactivos. En el caso de no haber laboratorio local que realice técnicas treponémicas de confirmación. una infección tratada adecuadamente o sífilis en período de incubación. (Ref. sin evidencia clínica de sífilis puede indicar ausencia de infección. pasada o una reacción falsa positiva. Laboratory Biosafety Manual 4º ED. Si por algún motivo no pudiera enviarse la muestra. con toda la información solicitada. En sífilis secundaria todos los exámenes son reactivos CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado 46 . Vigilancia de Laboratorio Treponema pallidum Laboratorio Local Prueba no Treponemica Reactiva Laboratorio Local Confirmación con prueba Treponemica Laboratorio sin Pruebas Confirmatorias Reactivo No Reactivo Informe a Lab. Referencia Informe de pruebas no Treponemicas al Laboratorio de Referencia Informe MINSAL Informe MINSAL . Ambos linajes son patógenos para el hombre. el Ministerio de Salud de Chile estableció oficialmente un programa dirigido a alcanzar esta meta. que constituye uno de los problemas principales de salud pública en diversos países del continente americano y sobre todo de Latinoamérica. incluido Chile. El año 1991. este último se divide en 5 grupos. de éste nace una membrana ondulante que en su borde libre lleva un flagelo. 48 . no se divide.V i g i la n c i a d e L a b or a t o r io T r y p a n o s o ma c r u z i CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES CIE-10 B57 (Enfermedad de Chagas) AGENTE ETIOLÓGICO Trypanosoma cruzi JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA DE LABORATORIO Agente causal de la enfermedad de Chagas. Morfología: En sus distintos hospederos y en medios de cultivo Trypanosoma cruzi presenta tres tipos morfológicos diferentes Tripomastigoto: Fusiforme de aproximadamente 16 a 20 m de largo. Lo anterior fortalece la importancia de vigilar este agente parasitario. los Ministros de Salud de seis países del Cono Sur. A raíz de este compromiso. citoplasma granuloso con un núcleo central. Se encuentra circulando en la sangre de los mamíferos y en extremo posterior del vector (tripomastigoto metacíclico). se comprometieron a realizar acciones para lograr interrumpir la transmisión vectorial y transfusional de la enfermedad de Chagas. muestran claras evidencias de la existencia de dos subgrupos genéticos designados como: Linaje 1 predominantemente de ciclo doméstico y Linaje 2 de ciclo selvático. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Clasificación: Reino Sub Reino Phylum Sub Phylum Clase Orden Sub Orden Familia Género Sub género Especie : : : : : : : : : : : Protista Protozoa Sarcomastigophora Mastigophora Zoomastigophorea Kinetoplastida Trypanosomatina Trypanosomatidae Trypanosoma Schizotrypanum cruzi Variedades: Análisis de isoenzimas y biología molecular. Presenta un kinetoplasto subterminal. Congelada a –20 °C. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Debe considerarse el periodo de la enfermedad del paciente. Posee un flagelo corto no emergente. el cual no se distingue con microscopía de luz. 49 . se mencionarán aquellas de uso más frecuente.2% como anticoagulante. Gota gruesa: Sangre sin anticoagulante 3 a 4 gotas por preparación. También. deberán realizarse los exámenes directos lo antes posible y para la serología se deberá esperar a lo menos 15 días. Examen microscópico de sangre fresca: 2 ml de sangre total con anticoagulante. Tomada por punción venosa o digital. Se excluye el uso de heparina y EDTA. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDOS Dependerá de la técnica de laboratorio a realizar: Diagnóstico Directo: Existen varias técnicas para el diagnóstico directo de este parásito. se puede recolectar sangre total con guanidina 4M (1:4) y sangre en papel filtro. Es la forma de multiplicación en el intestino del vector y la forma predominante en los medios de cultivo.Epimastigoto: Fusiforme de unos 20 m. En aquellos pacientes con sospecha de estar en periodo agudo. Tiene una corta membrana ondulante y un flagelo libre. Diagnóstico Serológico: Suero o plasma Cantidad: mínimo 2 ml. Transporte: En tubo plástico con tapa hermética bioseguridad y para mantener la temperatura. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Suero o Plasma: Conservada a 4 °C por un máximo de 5 días. Xenodiagnóstico: El paciente debe someterse a la picadura de triatominos libres de la parasitosis por aproximadamente 20 min. con la medidas necesarias de Sangre total para Métodos directos: Conservada a 4 °C por un máximo de 3 días. en el que distinguen en núcleo y el kinetoplasto. con el kinetoplasto ubicado delante del núcleo. ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Enfermedad de Chagas o Tripanosomiasis Americana. Esta es la forma de multiplicación intracelular en el mamífero. la cantidad mínima requerida es de 2 ml. Método MicroStrout: Mediante punción digital recolectando la muestra en 6 capilares heparinizados. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR): Sangre total con Citrato de Sodio 3. Amastigoto: Elemento redondeado de 2 a 4 m aproximados. Para recién nacidos ambas muestras deben recolectarse simultáneamente. Nota: No se recomienda el uso de sangre de cordón por la probable interferencia con los métodos diagnósticos. Transporte: En tubo plástico con tapa hermética bioseguridad y para mantener la temperatura. 50 . Se busca la presencia de tripomastigos móviles de Trypanosoma cruzi. tanto públicos como privados. la misma muestra deberá ser enviada al ISP o a los centros autorizados por éste para realizar los exámenes confirmatorios. con la medidas necesarias de ALGORITMO DIAGNÓSTICO El diagnóstico de laboratorio de la infección por T. El diagnóstico de laboratorio de la infección por Trypanosoma cruzi sólo podrá ser informado al paciente después de realizada la confirmación. la muestra deberá ser informada con resultado final negativo. En caso de obtenerse un resultado positivo en dos o más de las tres determinaciones. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Diagnóstico parasitológico directo: Se describen las técnicas más empleadas para este propósito: Observación microscópica al fresco: Consiste en la observación de sangre del paciente. utilizando el mismo ensayo o técnica. 1 a 2 gotas entre portaobjeto y cubreobjeto. Tamizaje: Toda primera muestra que en el tamizaje tenga un resultado positivo para anticuerpos contra Trypanosoma cruzi deberá ser sometida nuevamente a una determinación en duplicado. El examen confirmatorio en el ISP u otro centro autorizado será gratuito. Algoritmo Métodos Indirectos:En el caso del diagnóstico indirecto los bancos de sangre o laboratorios clínicos deberán seguir el siguiente algoritmo: Se entenderá por examen de tamizaje a la determinación de anticuerpos anti Trypanosoma cruzi realizada mediante técnicas de ELISA o aglutinación en los Bancos de Sangre y laboratorios clínicos del país. En caso de duda en el diagnóstico directo. cruzi. Se entenderá como exámenes de confirmación aquellos realizados por el Laboratorio de Referencia de Parasitología del ISP o bien en centros autorizados por éste. referidas en el punto anterior. puede realizarse por: Métodos Directos en los cuales se comprueba la presencia del parásito en la muestra. En caso de obtenerse un resultado negativo en dos de las repeticiones señaladas. Métodos Indirectos que detectan la presencia de anticuerpos específicos contra el parásito en la muestra. El procedimiento de toma de muestra y envío de la sangre a los centros confirmatorios se realizará de acuerdo a las normas técnicas y administrativas elaboradas por el Laboratorio Nacional de Referencia de Parasitología del ISP. la muestra deberá ser enviada al Laboratorio de Referencia de Parasitología del ISP o a centros autorizados por éste. Algoritmo Métodos Directos :En los exámenes en los cuales se compruebe la presencia del parásito podrán ser informados sin necesidad de la confirmación de este resultado por otro método. Se deben observar 6 preparaciones por muestra. cruzi. se fijan a pocillos de placas de vidrio. cruzi. los que son centrifugados para separar sus componentes. cruzi en el tubo digestivo de triatominos. Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) : Técnica de biología molecular que utiliza partidores específicos para amplificar el DNA del parásito en muestras clínicas de pacientes. obtenidos de cultivo. lo que se interpreta como una reacción positiva. latente y crónica de la enfermedad. 60 y 90 días. Informe de resultados Negativo: No se observan tripomastigotos de Trypanosoma cruzi Positivo: Presencia de tripomastigotos de Trypanosoma cruzi Xenodiagnóstico :Basado en la multiplicación activa del T. Informe de resultados Negativo Positivo Se emite un informe a los 30. Se busca la presencia de tripomastigos móviles de T. Se deben tomar a lo menos 6 capilares por paciente. Enzima Inmuno Ensayo (ELISA): Placas de poliestireno son sensibilizadas con antígeno soluble de T. Se examina al microscopio la fracción leucoplaquetaria completa del capilar. los que se unirán a anticuerpos específicos contra el parásito si están presentes en la muestra. Es útil para fase aguda. Informe de resultados: Negativo: No se observan tripomastigotos de Trypanosoma cruzi Positivo: Presencia de tripomastigotos de Trypanosoma cruzi Método de concentración MicroStrout :Sangre total tomada directamente del paciente (punción digital) en capilares heparinizados. formándose la unión antígeno-anticuerpo. Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) : Parásitos completos. cruzi los que al entrar en contacto con anticuerpos contra el parásito provocan la aglutinación. Se agrega un conjugado formado por un anti anticuerpo unido a una enzima y se podrá evidenciar una reacción positiva si al adicionar el sustrato específico se desarrolla una reacción de color. sirve para el diagnóstico tanto en la etapa aguda y crónica de la infección con una sensibilidad de 100 % y 50 % respectivamente. luego se agrega un conjugado marcado con sustancias fluorescentes. Informe de resultados Negativo Positivo Diagnóstico Parasitológico Indirecto :Se describen las técnicas más empleadas para este propósito: Aglutinación Indirecta : Partículas o glóbulos rojos son sensibilizadas con antígeno soluble de T. Se utilizan ejemplares de estados ninfales libres del parásito. 51 . que indicaría la presencia de anticuerpos en la muestra del paciente. El suero del paciente en estudio se coloca en contacto con los antígenos. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Diagnóstico Directo Los resultados positivos :De cualquiera de las técnicas descritas como métodos parasitológicos directos deberán considerarse como diagnóstico de laboratorio de esta parasitosis. se detalla en los puntos anteriores de esta ficha.Al observar las placas en un microscopio de epifluorescencia los parásitos se verán fluorescentes en aquellos casos de muestras con anticuerpos específicos contra Trypanosoma cruzi. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Para las técnicas de diagnóstico indirecto. diseño de cartas-control. Diagnóstico Indirecto :La interpretación de los resultados para los métodos indirectos. 52 . CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD El procedimiento de toma de muestra y envío de la sangre o papel filtro a los centros confirmatorios se realizará de acuerdo a las Normas Técnico-Administrativas para Laboratorios Clínicos Minsal. ya que estos métodos tienen cifras variables de sensibilidad. Dicho programa debe incorporar el uso de controles (+) y (-) propios y/o comerciales. Los resultados negativos :Obtenidos con los métodos directos no descartan la presencia del parásito. registro de novedades relacionadas con las técnicas. Estas muestras podrán se enviadas para su confirmación al Laboratorio de Referencia de Parasitologia del ISP o a los centros autorizados por éste compañadas por el formulario diseñado para ello. LABORATORIO DE REFERENCIA Los Laboratorios clínicos y bancos de sangre públicos o privados deben enviar a confirmar las muestras que resulten positivas o indeterminadas al tamizaje. el laboratorio clínico debe estar adscrito al Programa de Evaluación Externa de la Calidad del ISP en el Subprograma Serología de la Enfermedad de Chagas. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Se debe tener implementado un Programa de Control de Calidad Interno en el laboratorio que incluya todas las técnicas para esta parasitosis. 1998. Diagnóstico Trypanosoma cruzi ( Diagnóstico Indirecto) Muestra Inicial Laboratorio Local Negativo Resultado Positivo Muestra Negativa Negativa-Negativa Repetir en Duplicado Muestra Negativa Negativa-Positiva Positiva-Positiva Confirmar Instituto de Salud Publica Laboratorio de Referencia Informe Laboratorio Local Informe MINSAL 53 . TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Nivel local: Cultivo e identificación bioquímica presuntiva de acuerdo a normativa vigente: ORD. confirmación bioquímica. fermentador de glucosa y sacarosa. C1 01166 Laboratorio Referencia: Cultivo. Familia Genero Especie a vigilar : Vibrionaceae : Vibrio : V.Vigilancia de Laboratorio de Vibrio cholerae J U S T I F IC A C IÓ N D E L A V I G I L A N C I A Vibrio cholerae es un agente de vigilancia universal e inmediata. cholerae. levemente curvo. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDAS Deposición PERÍOD O ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS La muestra se debe tomar inmediatamente al comienzo de los síntomas y previo al tratamiento con antibiótico. Si el traslado de la muestra es mayor de 30 minutos se debe utilizar un medio de transporte como Cary Blair. El cólera gravis se caracteriza por una diarrea masiva con pérdida de gran volumen de agua lo que causa un gran desbalance hedreolectrolítico Si no se restituye el volumen hidrosalino rápidamente puede causar la muerte del paciente. E N F E R M E D A D HU M A N A Q U E P R O D U C E Cólera. DESCRIPCI ÓN DEL AGENTE Es un bacilo gramnegativo aerobio facultativo. Tradicionalmente el serotipo O1 ha sido el causante de las grandes epidemias y pandemias. serología. Sin embargo el año 1993 en Bangladesh se aisló el serotipo O139 de pacientes con cólera. 54 . enfermedad gastrointestinal que puede expandirse rápidamente como epidemia y/o pandemia a través de la ingestión de agua y/o alimentos contaminados. Es el agente etiológico del cólera. es oxidasa positiva. caracterización molecular y susceptibilidad antimicrobiana. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra se puede tomar en un frasco limpio. Tiene la potencialidad de desarrollo de resistencia a los antibióticos. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. No enviar en medios que contengan carbohidratos (ej. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas en forma inmediata al Laboratorio de Referencia de Vibrios donde se realizará su confirmación. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. se hará en tubos de agar Mueller Hinton o agar Soya Tripticasa. debidamente sellado. 55 . CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Vibrio cholerae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. porque los subproductos ácidos del metabolismo. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas de la Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. TSI o LIA). rápidamente disminuyen su viabilidad. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio debe estar adscrito a un programa externo de calidad ya sea el del Instituto de Salud Pública (PEEC) u otro. rotulado y a temperatura ambiente. susceptibilidad y estudio serológico. El envío de estas cepas. para su Confirmación y Serotipificación Inform e Laboratorio Local Inform e M INSAL 56 . Envío inmediato al Laboratorio Referencia ISP.Vigilancia de Laboratorio Vibrio cholerae Laboratorio Local M uestra Deposición Diagnóstico presuntivo Vibrio spp. con características de disentería. caracterización molecular y susceptibilidad antimicrobiana. el que se debe mantener a temperatura ambiente pues los vibrios son sensibles al frío TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Nivel local: Cultivo e identificación bioquímica presuntiva de acuerdo a normativa vigente: ORD. fermentador de glucosa pero no de sacarosa. Si el traslado de la muestra es mayor de 30 minutos se debe utilizar un medio de transporte como Cary Blair por un período máximo de una semana. Requiere de una concentración de Na Cl de 1% en el medio para desarrollarse. levemente curvo. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Deposición PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS La muestra se debe tomar inmediatamente al comienzo de los síntomas y previo al tratamiento con antibiótico. DESCRIPCI ÓN DEL AGENTE Es un bacilo gramnegativo aerobio facultativo. serología.Vigilancia de Laboratorio de Vibrio parahaemolyticus J U S T I F IC A C IÓ N D E L A V I G I L A N C I A Vibrio parahaemolyticus es el agente causal de brotes de gastroenteritis aguda relacionado con la ingestión de pescados. para identificar las zonas afectadas y aportar información para las medidas de control. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS La muestra se puede tomar en un frasco limpio. mariscos y crustáceos crudos o mal cocidos. calambres y dolor abdominal con pérdida de gran volumen de líquido en algunas ocasiones. confirmación bioquímica. es importante la vigilancia de Laboratorio de este agente.parahaemolyticus ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Gastroenteritis que puede estar acompañada de vómitos. Por esto motivo. contaminados con este agente. C1 01166 Laboratorio Referencia: Cultivo. es oxidasa positiva. 57 . Familia Genero Especie a vigilar : Vibrionaceae : Vibrio : V. Este cuadro diarreico es autolimitado. náuseas. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio debe estar adscrito a un programa externo de calidad ya sea el del Instituto de Salud Pública (PEEC) u otro. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. se hará en tubos de agar Mueller Hinton o agar Soya Tripticasa. porque los subproductos ácidos del metabolismo rápidamente disminuyen su viabilidad. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. debidamente sellado. rotulado y a temperatura ambiente. (Ref. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas en forma inmediata al Laboratorio de Referencia de Vibrios donde se realizará su confirmación. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas de la Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. TSI o LIA). El envío de estas cepas. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Vibrio parahaemolyticus debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. No enviar en medios que contengan carbohidratos (ej. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. 58 . En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. E n v ío a l L a b o ra to rio R e fe re n ci a I S P . p a ra s u C o n fi rm a c ió n In fo rm e L a b o ra to ri o L o c a l Inform e M IN S AL 59 .V ig ila n c ia d e L a b o ra to rio V ib rio pa rahae m o ly tic us L a b o ra to rio Loc a l M u e s tra D e p o s ic ió n D ia g n ó s tic o p re s u n tivo V ib rio s pp . la muestra debe tomarse en cualquier momento en que se sospeche la infección. El 20 al 30 % de ellos terminará en una cirrosis y/o carcinoma hepatocelular. de aproximadamente diámetro.1 Hepatitis aguda tipo C AGENTE ETIOLÓGICO Virus hepatitis C JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA DE LABORATORIO El virus de la Hepatitis C tiene distribución mundial. 30 nm de descrito más una proteína replicasa y 60 . El suero debe ser extraído en condiciones de asepsia. helicasa. terminando en una cirrosis hepática o en un hepatocarcinoma maligno. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDOS Suero o plasma (1 ml aproximadamente). polimerasa).V ig i la n c ia L a b ora t o r i o V ir u s de l a He p a t it i s C CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE 10) B17. Pertenece al género Flaviviridae. a través de transfusiones sanguíneas o por contacto con material cortopunzante. En el caso de enviar más de una muestra simultáneamente al laboratorio. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras de sangre deben recolectarse en envases sin anticoagulantes. y se han de 6 genotipos diferentes. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE El virus de la Hepatitis C es un virus RNA pequeño. ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Hepatitis levemente sintomática o asintomática. y en alrededor del 80% de los casos va a la cronicidad. como crioglobulinemia. plásticos y con tapa rosca. y se transmite preferentemente por vía parenteral. En algunos casos. en frascos limpios y estériles. MINSAL). Su vigilancia de laboratorio se basa principalmente en el diagnóstico serológico de la infección. La sangre debe mantenerse a 4-8º C. Produce infección persistente en el 80% de los casos y generalmente conduce a una hepatitis crónica. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Dado el carácter asintomático y crónico de esta enfermedad. Posee 2 glicoproteínas de envoltura (gp33 y gp70). para obtener suero. pérdidas y contaminación del operador. (Circular 4F/ 53 del 19 de Diciembre de 1995. con una envoltura lipídica. del core (p22) y cuatro proteínas no estructurales (proteasa. vasculitis y glomerulonefritis. deberá tomarse la precaución de colocar cada una protegida por separado en un recipiente metálico o de material aislante. La enfermedad es frecuentemente asintomática. se asocia a enfermedades autoinmunes. esto evitará rupturas. A partir de 1996 se realiza tamizaje obligatorio en Bancos de Sangre del país. será considerada como indeterminada y se le solicitará una nueva muestra al paciente.TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Técnicas ELISAs específicas para la detección de anticuerpos IgG. A cada banda se le asigna visualmente un valor de acuerdo a la intensidad de las bandas controles. Entre ellas la más utilizada es: RIBA (ensayo en tira inmunoabsorbente). la reactividad anti-VHC se determina comparando la intensidad de cada banda de antígeno con la intensidad de las bandas de los controles internos de IgG humana de cada tira. que se unen a los anticuerpos presentes en el suero. En el caso de las técnica suplementaria RIBA. Sin embargo. Técnicas de aglutinación corresponden a partículas sensibilizadas con antígenos recombinantes o sintéticos. Se basa en la detección de anticuerpos que reaccionan con antígenos virales recombinantes y sintéticos. Para utilizar los controles en los ensayos individuales. se recomienda realizarlos por lo menos cada vez que se realiza la técnica. deberá ser confirmada con alguna técnica suplementaria. Si la muestra vuelve a tener valores de absorbancia superior o igual a la línea de corte. La visualización de la reactividad anti-VHC se logra utilizando conjugados enzimáticos de anti IgG humana. Una muestra será considerada positiva si al menos dos bandas o más tienen una reactividad igual o superior a la banda control más débil (1). las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte (CUT OFF) se consideran negativas o no reactivas para anticuerpos anti-VHC. las que utilizan antígenos recombinantes o sintéticos adheridos a una fase sólida. si una única banda tiene una reactividad igual o superior a la banda control más débil. Se deben incorporar controles Positivos (alícuotas congeladas de muestras confirmadas por el ISP) cuando se utilice un nuevo estuche de reactivos. Las muestras con valores de absorbancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y debieran repetirse. se recomienda confirmarlas con técnicas suplementarias. en conjunción con un sustrato colorimétrico. desarrollándose a través de reacción enzimática o de fluorescencia. Los ensayos deben realizarse según las condiciones señaladas por el fabricante. Dado los numerosos resultados falsos positivos que tienen actualmente las técnicas de tamizaje para anticuerpos VHC. que están adheridos a una membrana de nitrocelulosa. que aglutinan en presencia de anticuerpos de VHC en muestras de suero o plasma. 61 . CONTROL DE CALIDAD INTERNO Para realizar el tamizaje se deben utilizar ensayos evaluados y recomendados por el ISP que cumplan los siguientes requisitos técnicos: 100 % de sensibilidad y 90% especificidad. Se considera negativa cuando no se alcanza una reactividad igual o mayor a la banda control más débil. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS En las técnicas ELISAs. y aplicando todas las medidas de precaución universales.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Participar del Programa Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) del ISP. 62 . CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Las muestras deben manipularse con nivel de riesgo II. el que se encuentra disponible en la pagina web del Instituto de Salud Pública . sistema de eliminación de desechos biopeligrosos. con los antecedentes completos. (utilizar guantes desechables. etc. utilizar solución de hipoclorito de sodio al 0. mascarillas. ENVIO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar la información correspondiente en forma inmediata al Laboratorio de Referencia de Hepatitis donde se hará su registro correspondiente. para anticuerpos VHC.5 % para desinfectar cualquier salpicadura.). Toda la información requerida deberá enviarse en el “Formulario de Notificación de Hepatitis para envío muestras / vigilancia de laboratorios”. 0 Negativo Informe Positivo Informe Negativo No Concluyente 2 Muestra Información al ISP iMac Informe de casos positivos Confirmados Reactivos en tamizaje en ausencia de confirmación Informe MINSAL 63 .Diagnostico Virus Hepatitis C Laboratorio Local Muestra Doblemente reactiva Positivo Tamizaje 1 Negativo Negativo PCR Positivo Positivo Tamizaje 2 Negativo Positivo RIBA 3. Vigilancia de Laboratorio Virus de la Hepatitis B CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE 10) B16 Hepatitis aguda tipo B AGENTE ETIOLÓGICO Virus de la Hepatitis B JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA DE LABORATORIO El virus de la Hepatitis B es uno de los agentes causales de la Hepatitis aguda. en la etapa de convalescencia. Aproximadamente un 10 % quedan como portadores crónicos. la cual es transmitida por contacto sexual. deberá tomarse la precaución de colocar cada una protegida por separado en un recipiente metálico o de material aislante. y en algunos casos producir una hepatitis crónica. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDOS -Sangre -Suero -Plasma Las muestras pueden recolectarse ya al comienzo de la sintomatología aguda. Esto evitará rupturas. ojalá en frascos limpios y estériles. 64 . un 20% mueren por Cirrosis hepática y un 4% desarrollarán un hepatocarcinoma primario del hígado. transmisión vertical madre-hijo o por accidentes con material cortopunzante. por vía transfusional. Este debe ser extraído en condiciones de asepsia. pérdidas y contaminación del operador. la cual puede terminar en un hepatocarcinoma maligno. plásticos y con tapa rosca. en cuyo interior está el material genético. para obtener suero. La infección con virus de la Hepatitis B es capaz de dejar portadores crónicos de por vida. el antígeno e y la DNA polimerasa. lo que debe vigilarse es el estado de portador crónico a la Hepatitis B. Tiene en su superficie el antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (HBsAg). ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Hepatitis aguda. el cual es altamente inmunogénico y útil para el diagnóstico del estado portador. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras de sangre deben recolectarse en envases sin anticoagulantes. es decir. puede tomarse una muestra de suero posterior a la mencionada en el Artículo 18. capaces de transmitir silenciosamente la enfermedad. En el caso de enviar más de una muestra simultáneamente al laboratorio. de curso habitualmente benigno.5. Debido a ello.) DESCRIPCIÓN DEL AGENTE El virus de la Hepatitis B pertenece a la familia Hepadnaviridae. PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Para determinar el estado de portador. Es un virus DNA de doble cadena asimétrica y abierta. De ellos. Su nucleocápside está constituida por el antígeno core. aquellos que sean reactivos al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg. las que son corridas en una prueba ELISA en paralelo. semejante al tamizaje. se recomienda confirmarlas con técnicas suplementarias. Estas últimas se basan en la neutralización del HBsAg. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Participar del Programa Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) del ISP. las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte (CUT OFF) se considera que no contiene HBsAg. utilizan un anticuerpo anti-HBsAg en fase sólida. de acuerdo al límite de sensibilidad de la técnica. el cual reacciona frente a un conjugado marcado con una enzima. desarrolla una reacción colorimétrica. un resultado no reactivo indica que la muestra analizada no contiene HBsAg. Existen técnicas más rápidas para la detección de este antígeno. y en donde se mide posteriormente la absorbancia de la muestra no neutralizada y la neutralizada. deberá ser confirmada con alguna técnica confirmatoria. presente en la muestra del paciente.TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Técnicas ELISAs específicas para la detección de antígeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg). Los ensayos deben realizarse según las condiciones señaladas por el fabricante. a través de su anticuerpo específico. 65 . que se une al antígeno presente en el suero del paciente. la que en contacto con un sustrato apropiado. Un resultado positivo confirmado indica que la muestra analizada contiene HBsAg. se recomienda realizarlos por lo menos una vez el día de su ejecución. y su lectura es generalmente visual. Se deben incorporar controles Positivos (alícuotas congeladas de muestras confirmadas por el ISP) cuando abra un nuevo estuche o set de reactivos. la que puede ser leída visual o instrumentalmente. Las muestras con valores de absorbancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y deberán repetirse. Si vuelve a tener valores de absorbancia superior o igual a la línea de corte. La sensibilidad mínima exigida para una técnica ELISA es que detecte al menos 1 ng/ml de HBsAg. En el caso de las técnicas confirmatorias. Para utilizar los controles en los ensayos individuales. Dado que existen resultados falsos positivos que tienen estas técnicas de tamizaje. para antígeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg). INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS En las técnicas por ELISAs. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Para realizar el tamizaje se deben utilizar ensayos evaluados y recomendados por el ISP que cumplan los requisitos técnicos de: 90 % de especificidad y 100% de sensibilidad. o que lo contiene por debajo del límite de detección del ensayo confirmatorio. pero son menos sensibles que los ELISAs. ENVIO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar la información correspondiente en forma inmediata al Laboratorio de Referencia de Hepatitis donde se hará su registro correspondiente. sistema de eliminación de desechos biopeligrosos. con tapa rosca e identificada con el nombre del paciente. En el caso de los Bancos de Sangre. con los antecedentes completos.CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Las muestras deben manejarse con todas las medidas de precaución universal (utilizar guantes desechables. el que se encuentra disponible en la pagina web del Instituto de Salud Pública de Chile. etc. utilizar solución de hipoclorito de sodio al 0.5 % para desinfectar cualquier salpicadura. Estas muestras de suero o plasma deberán ser enviadas en un tubo plástico estéril. mascarillas. Toda la información requerida deberá enviarse en el “Formulario de Notificación de Hepatitis para envio muestras / vigilancia de laboratorios”. donde se realizará su confirmación. Su envío deberá hacerse con material refrigerante para garantizar su conservación. ellos deberán acompañar este formulario con la muestra correspondiente.). 66 . públicos y privados. Diagnóstico de Antígeno de Superficie de Hepatitis B Confirmación de HBsAg/ISP Laboratorio Local Negativa Muestra Doble Reactivo Positiva Envío Laboratorio de Referencia ISP Confirmación en el Laboratorio Local Positiva Tamizaje 1 Negativa Positiva Confirmada Confirmado Negativa Positiva Tamizaje 2 Positivo Técnica Confirmatoria Negativa Negativa Informe ISP Confirmación Laboratorio Informe ISP Negatividad Informe Laboratorio Local Informe MINSAL Informe Laboratorio Local 67 . sanguínea (transfusional. 68 . Dentro del VIH-1 se distinguen nueve genotipos distintos. TIPOS DE MUESTRA REQUERIDOS Pruebas serológicas: Suero o plasma (mínimo 3 ml. ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE El Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) es el agente etiológico del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). vertical de madre a hijo (durante el embarazo. denominados de la A a la J.5 M. En nuestro país el 99% de los casos confirmados a la fecha corresponden a VIH-1 y de los casos subtipificados la mayoría corresponden a subtipo B.Vigilancia Laboratorio Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE 10) B20-B24 Enfermedad por Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) AGENTE ETIOLÓGICO VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH) JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA DE LABORATORIO La epidemia del VIH/SIDA tiene distribución mundial. Esta infección es de tamizaje obligatorio en Bancos de Sangre desde 1987. Su vigilancia de laboratorio se basa principalmente en el diagnóstico serológico de la infección. por órganos o tejidos infectados y por cortes o pinchazos con sangre contaminada). Su estructura está formada por una envoltura de glicoproteínas: la gp 120 y la gp 41.) Detección de Ácidos Nucleicos por Reacción de Polimerasa en cadena (PCR): 5 ml de sangre total con 0.12. establecer terapias y precauciones para mejorar la calidad de vida y retardar la progresión de la enfermedad. El SIDA corresponde a la etapa final de la infección por VIH que resulta de una selectiva y progresiva destrucción del sistema inmune del paciente. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE El VIH es un virus RNA clasificado en la familia Retroviridae. al momento del parto) y durante la lactancia. proteasa y transcriptasa reversa. siendo el VIH-1 el de mayor potencial patogénico y de mayor diseminación en el mundo. Por ser una infección cuyos portadores pueden ser asintomáticos por varios años es fundamental detectarla con la mayor precocidad y así tomar medidas que permitan prevenir la transmisión a otras personas. bajo ésta se encuentra la cápside constituida por la proteína p17 y en el interior está el core con una estructura proteica la p24 que contiene al nucleoide constituido por dos cadenas de ARN monocatenario íntimamente relacionados con las proteinas p9 y p7 y las enzimas integrasa.5 ml de anticoagulante Etilen Diamino Tetra Acético (EDTA) 0. La transmisión del VIH puede ocurrir a través de vía sexual. En nuestro país ha aumentando en forma progresiva. cual está actualizado en la circular N°4F/53/19.1995 del Ministerio de Salud. proyectándose como una de las principales causas de muerte en los próximos años. existen dos tipos de VIH: VIH1 y VIH-2. ) -Detección de antigenemia viral 69 . para obtener suero. Western blot (WB): Ensayo comercial que utiliza tiras de nitrocelulosa donde se han traspasado las proteínas virales provenientes de lisados celulares infectados. de acuerdo a protocolos internacionales. de tomada la muestra. antígenos recombinantes o sintéticos adheridos a una fase sólida. que aglutinan en presencia de anticuerpos.PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA La muestra puede tomarse en cualquier momento en que se sospeche la infección. Los métodos mencionados si bien son muy sensibles. específicos y reproducibles. OTRAS PRUEBAS ALTERNATIVAS -Reacción en cadena de polimerasa (P. Se utilizan líneas celulares H9 (control) y H9HTLVIII-B (infectadas). CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras de sangre deben recolectarse en envase sin anticoagulante. En caso de antecedentes de exposición reciente debe considerarse el periodo de ventana de la infección para repetir el examen. Técnicas de aglutinación con partículas sensibilizadas con antígenos recombinantes o sintéticos. no están libres de reacciones reactivas falsas por lo que toda muestra reactiva debe ser confirmada por métodos suplementarios más específicos en el Laboratorio de Referencia del ISP. tanto para la elaboración como la ejecución de la técnica.R. las que previamente han sido separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida.IgG) y de antígeno p24. La presencia de anticuerpos específicos contra las proteínas de VIH se evidencia luego del revelado con diferentes sustratos. Este debe ser extraído en condiciones de asepsia. que se unen a los anticuerpos presentes en el suero. plásticos y con tapa rosca. desarrollándose a través de reacción enzimática o de fluorescencia.C. LIA: Inmunoensayo comercial en línea con proteínas recombinantes y péptidos sintéticos de VIH-1 y VIH-2 impregnadas en tiras de nitrocelulosa. En las muestras de sangre para PCR: Mantener a temperatura ambiente y entregar al laboratorio dentro de las 12 hrs. en frascos limpios y preferentemente estériles. Los ensayos se diferencian por su capacidad de detección de las distintas clases de inmunoglobulinas (IgM . Ensayos suplementarios Por su alta especificidad es posible detectar las muestras reactivas falsas de aquellas muestras verdaderamente reactivas provenientes de individuos infectados: Inmunofluorescencia Indirecta (IFI): En la prueba de Inmunofluorescencia se utilizan frotis elaborados en el ISP. Dada la confidencialidad del examen de VIH la identificación del paciente debe registrarse con la clave establecida. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Técnicas Básicas Técnicas ELISAs que utilizan lisados virales. ): Es una técnica altamente sensible y específica que consiste en la amplificación de regiones genéticas específicas del provirus integrado en el genoma de las células sanguíneas periféricas infectadas. 70 . Si la muestra vuelve a tener valores de absorbancia superior o igual a la línea de corte. no se detecta reactividad contra ninguna proteína viral mediante métodos suplementarios. etc). la que debe ser analizada nuevamente en el Laboratorio (No debe enviarse esta muestra al ISP). sospecha seroconversión. Se realiza sólo en aquellos casos de pacientes que han tenido contacto reciente con personas VIH (+) confirmadas. realizando en este momento la consejería.Reacción en cadena de polimerasa (P. Las muestras negativas no poseen anticuerpos específicos contra el VIH. o bien. mediante métodos suplementarios. *Detección de Antígeno p24: se realiza en casos de reactividad de ELISA que detecta p24 o en casos donde existe evidencia clínica o epidemiológica de infección y no se detecta presencia de anticuerpos (Accidente laboral.C. se procederá a informar al paciente de su condición de portador del VIH. debe tomarse una segunda muestra de Confirmación de Identidad. una muestra es considerada negativa cuando resulta no reactiva por los dos ensayos de ELISA preestablecidos. Sólo en caso que este resultado sea nuevamente reactivo. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: En las técnicas ELISAs. En el estudio de PCR se considera positiva una muestra cuando presenta una amplificación de los genes pol y env utilizando el ADN extraído de los linfocitos del paciente. En el ISP se utiliza una reacción de PCR doble o anidado de alta sensibilidad y especificidad. deberá ser confirmada con alguna técnica suplementaria. Un resultado negativo no descarta la infección y se debe realizar estudio de anticuerpos. La reactividad de este ELISA debe ser neutralizada sobre un 50% para ser considerada positiva. en aquellos casos de pacientes que han tenido contacto reciente con personas VIH (+) confirmadas y en algunos casos con resultado de anticuerpos anti-VIH indeterminado. en individuos con sintomatología sospechosa de primoinfección y no confirmados por la presencia de anticuerpos anti-VIH. De acuerdo al algoritmo del Laboratorio de Referencia de VIH. Detección de antigenemia viral: Este método consiste en detectar el antígeno p24 libre mediante un ELISA en fase sólida. las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte (CUT OFF) se consideran negativas o no reactivas para anticuerpos anti-VIH. Los resultados reactivos deben ser confirmados por prueba de Neutralización y evaluados en conjunto con el estudio de anticuerpos. este ensayo se usa en pacientes pediátricos menores de 18 meses.R. Una muestra es clasificada positiva cuando resulta reactiva por ambos ELISAs y reactiva por inmunofluorescencia indirecta (Células infectadas con reactividad igual o mayor a +1) o se detecta un patrón de reactividad mínimo. En la detección de antígeno la absorbancia de la muestra debe disminuir sobre un 50% respecto a la absorbancia de la muestra no neutralizada. Además. Su mayor utilidad es en casos de infección perinatal (hijo de madre VIH+). con las proteínas virales derivadas de los genes gag y env. hijo de madre VIH (+). En caso de que el paciente sea confirmado positivo por el ISP. Las muestras con valores de absorbancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y deberán repetirse. la muestra debe enviarse a confirmación al ISP.CONTROL DE CALIDAD INTERNO Para realizar el tamizaje se deben utilizar ensayos evaluados y recomendados por el ISP. según Resolución exenta N° 371 del 02 de febrero del 2001 del Ministerio de Salud. que cumplan los siguientes requisitos técnicos: 100 % de sensibilidad para donantes en Bancos de Sangre o 99% de sensibilidad para laboratorio clínicos y una especificidad mayor o igual al 95 % en ambos casos. establece que en caso de obtenerse un resultado positivo en dos exámenes utilizando el mismo test de tamizaje. Se deben incorporar controles positivos (alicuotas congeladas de muestras confirmadas por el ISP) cuando utilice un nuevo estuche o set de reactivos. y se procederá a informar al paciente. Los ensayos deben realizarse en las condiciones señaladas por el fabricante. La Normativa vigente. 71 . utilizando los controles según recomendación y en los ensayos individuales. por intermedio del personal debidamente entrenado en consejería VIH. para realizar la confirmación de identidad con el mismo test de tamizaje originalmente efectuado. del Ministerio de Salud. Si el ISP ratifica el resultado positivo. Para el envío de muestras se deberan utilizar los formularios de notificación de VIH o formulario de notificación de SIDA pediatrico según corresponda. los controles deben realizarse por lo menos una vez en el día de la ejecución. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Participar del Programa Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) del ISP. ENVÍO A LABORATORIO DE REFERENCIA Todo Banco de Sangre y laboratorio clínico público o privado del país que obtenga un resultado reactivo para el tamizaje de VIH debe enviar la muestra para ser confirmado por técnicas suplementarias en el ISP. se practicará la notificación obligatoria prevista en el artículo 4° del decreto supremo N° 466 de 1987. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Las muestras deben manejarse con las medidas de precaución universal en ambiente de bioseguridad nivel 2. Sólo si este nuevo examen resultara positivo. el establecimiento requeriente procederá a tomar una segunda muestra de sangre al paciente. ver texto 72 .DIAGNOS TICO INFECCIÓN POR VIH Labo rato rio C línico Prueba de screening o tamizaje R ecom en da das po r el ISP (A ná lisis de sesibilida d y es pecificidad ) (Enzimoinmunoe nsayos (ELISA). IgG e IgM y A g p24 Po sitivo/P ositivo Positivo/Negativo (*) N e gati vo/Negativo ETAPA 2 INM UNO FLUOR ESCENC IA IFI IFI Positivo Indeterm ina do Negativo Pos itivo Indeterm inado N egativo ETAPA 3 I NM U N O B LO T LIATEK VIH Positivo Indeterm inad o Negativo (*) (*) E TAPA 4 EM ISION DE RES ULTA DO Positivo Positivo Indeterm inad o Negativo Negativo N egativo ETAPA 5 S EGUND A MU ESTRA CONF IRM ACION DE IDEN T I DAD (So lo Lab oratorio Externo) MU ESTRA PARA PCR (E nvíar al ISP) (*)= Ag p24 . Enz im oinm unoensayos en punto de línea Negativa R ea c tiv a INFORME AL PACIENTE R epite Tamizaje R eactiva ISP Pruebas Suplem entarias o Co nfirm ación ETAPA 1 SCREENI NG ELISA ABBOT T Y ELISA Biomerieux VI H 1 y 2.Ensayos de Aglutinación. que se manifiesta en forma típica por diarrea febril aguda. Y.Aislamiento del agente. Cary Blair). pseudotuberculosis ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Yersiniosis. oxidasa negativa. detectar brotes. y las causadas por Y.30ºC que a 35ºC. de lo contrario usar medio de transporte (Ej. Las cepas de Yersinia se pueden enviar al Laboratorio de Referencia en agar nutritivo o agar TSI a temperatura ambiente. Familia Género Especies a vigilar : Enterobacteriaceae : Yersinia : Y.Vigilancia de Laboratorio de Yersinia spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA LABORATORIO Su caracterización es de utilidad en el estudio epidemiológico para identificar tendencias. fuentes de infección e implementar medidas de control de las ETAs. Las infecciones por Yersinia enterocolitica se manifiestan con frecuencia en forma de un síndrome de gastroenteritis. enterocolitis. linfadenitis entérica aguda que se asemeja a apendicitis. enfermedad entérica bacteriana aguda. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Deposiciones: muestra fresca debe procesarse idealmente durante los primeros 30 minutos después de obtenida. por lo tanto incubaciones a esta última temperatura el desarrollo es más lento. pseudotuberculosis. enterocolitica. LABORATORIO DE REFERENCIA . por dolor abdominal. metabólicamente más activo a 25 . DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Bacilo Gram negativo.Biotipificación y Serotipificación de Yersinia enterocolitica 73 . TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Deposiciones PERIODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Lo antes posible una vez que se sospeche de la infección. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS LABORATORIO LOCAL . artritis post infecciosa e infección sistémica. el que se conserva a 4ºC hasta procesar la muestra lo antes posible para lograr una mayor recuperación del patógeno. identificación bioquímica. durante la etapa aguda (generalmente entre 5 a 7 días) y previo al tratamiento antimicrobiano .Confirmación bioquímica . que en algunos casos se complica por eritema nodoso. fecha aislamiento de la muestra. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. Todas las cepas deben ser acompañadas del “Formulario para envío de cepas de la Sección Bacteriología” con toda la información solicitada (nombre del paciente. edad. para realizar su confirmación.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. 74 . procedencia del paciente. uno por cada paciente. caso de brote o aislado. Las cepas deben enviarse en agar nutritivo o agar TSI a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. origen de la cepa. etc. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Yersinia spp debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo.). 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos semanalmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Enterobacterias. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. (Ref. Vigilancia de Laboratorio Yersinia spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Envió una cepa por paciente Laboratorio Referencia de Enterobacterias ISP Confirmación Bioquímica Biotipificación Estudio Serológico (Yersinia enterocolitica) NO Confirmación SI Informe al Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL 75 . de acuerdo a la Circular Ministerial 4C/28. : Enterococcus. DESCRIPCI ÓN DEL AGENTE Cocáceas gram-positivas facultativas. Stgo 09 Mayo 2000. infecciones urinarias asociadas a catéteres urinarios permanentes e infecciones en pacientes post-operatorios entre otras.y para líquidos estériles. llevó a implementar un Sistema Nacional de Vigilancia de los Enterococcus de hisopados rectales en pacientes que permanezcan en la UCI por cinco días o más. La detección de resistencia a la Vancomicina requiere de incubación a 35°C por 24 horas. Familia Genero Especies a vigilar : Streptococcaceae. procesarlas de inmediato. como agente causal de infecciones intrahospitalarias. no importando su origen. dispuestas en cadena. el Reglamento 712 establece la necesidad de vigilancia nacional de cualquier cepa sospechosa de ser EVR. pares o aisladas con hemólisis alfa. Enterococcus faecium.Vigilancia de la resistencia antimicrobiana a Enterococcus spp J U S T I F IC A C IÓ N D E L A V I G I L A N C I A La aparición de Enterococcus Vancomicina Resistente (EVR). tales como: tórula en seco o con sílica-gel para hisopados rectales. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA Si las muestras son extraídas y enviadas al laboratorio dentro de una hora. TÉCNICAS DE LABORATORIO Cultivo e identificación bioquímica Susceptibilidad antimicrobiana 76 . ENFERMEDADES HUMANAS QUE PRODUCE ESTE AGENTE Bacteremias asociadas a catéteres venosos centrales. medios de transporte Amies. Además de esto.Stuart. : Enterococcus faecalis. TIPO DE MUESTRAS REQUERIDAS -Secreciones de heridas -Sangre -LCR -Orina -Líquido articular PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRA Ante sospecha clínica y previo a la administración de antimicrobianos. de lo contrario utilizar medio de transporte. estarán obligados a enviar las cepas con resistencia o intermedia a Vancomicina al Instituto de Salud Pública mediante el formulario de envío de cepas de la sección Bacteriología. debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo.C O N T R O L D E C A L I D A D IN T E R N O Los medios de cultivo. (Ref. Las cepas de Enterococcus deben ser enviadas en tubos de agar corriente u otro medio no inhibidor debidamente sellado y rotulado. 77 . reactivos y técnicas deben ser controlados con las cepas de referencia y con la periodicidad definida para cada caso.faecalis 29212 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El Laboratorio debe estar adscrito a un programa externo de la calidad (PEEC) u otra entidad. El control de calidad de las técnicas de susceptibilidad se realiza con la cepa ATCC S.aureus 25923 y la ATCC E. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. 2004) ENVÍO DE CEPAS AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados en que identifiquen este agente. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Enterococcus spp. para su Confirmación Informe Laboratorio Local Informe Minsal 78 .Vigilancia de la resistencia antimicrobiana Enterococcus spp Laboratorio Local Hisopado Rectal Otras muestras Cepas de Enterococcus Vancomicina Intermedia o Resistente Envío de Cepas al Laboratorio de Referencia ISP. lactamasa.influenzae serotipo b ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Cuadros invasivos. la cual se realiza mediante la vigilancia de estas enfermedades. Agente causal de meningitis.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Haemophilus influenzae serotipo b JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA Las enfermedades invasoras producidas por Haemophilus influenzae se presentan como infecciones severas bacterémicas y otras de menor gravedad que se limitan al tracto respiratorio superior. septicemias. neumonías.Requiere de medios enriquecidos (agar chocolate suplementado). DESCRIPCION DEL AGENTE Cocobacilo gramnegativo. especialmente de cuadros invasivos. no refrigerar. de un 5-10% de CO2 y una temperatura de 35-37º C. catalasa positiva . CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura ambiente. otras. sangre y otros líquidos o muestras provenientes de cavidades estériles. Familia Género Especie a vigilar : Pasteurellaceae : Haemophilus : H. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS A nivel Local: -Cultivo e identificación bioquímica -Biotipificación -Determinación de B. TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Líquido cefalorraquídeo. -Susceptibilidad antimicrobiana Laboratorio de Referencia -Confirmación bioquímica -Serotipificación -Biotipificación -Determinación de B. La introducción de la vacuna anti Hib al Programa Ampliado de Inmunizaciones debe estar acompañada de una evaluación de impacto. -Determinación de Cloranfenicolacetiltransferasa (CAT). para su desarrollo. oxidasa positiva. Además de confirmar la presencia de este agente. principalmente en niños menores.lactámicos y Cloramfenicol). -Susceptibilidad por difusión en agar HTM. es importante realizar estudios de susceptibilidad para poder determinar la magnitud y la extensión de la resistencia de Haemophilus influenzae serotipo b a los antimicrobianos de uso más frecuente (principalmente B. ante la sospecha de la enfermedad y previo a cualquier tratamiento con antimicrobianos.lactamasa. PERIODO OPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Inmediatamente. -Susceptibilidad por método de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) 79 . CONTROL DE CALIDAD INTERNO Las técnicas de susceptibilidad deben ser controladas con la cepas Haemophilus influenzae ATCC 49247 y H. La cepa debe enviarse junto al “Formulario para envío de cepas de la Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. 80 . serotipificación y vigilancia de la resistencia antimicrobiana. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los Laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente deberán notificar y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública . a temperatura ambiente (no refrigerar). Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. Los cultivos de Haemophilus deben ser frescos (18-24 horas) serán enviados en un tubo con agar chocolate tendido. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO El laboratorio local debe estar adscrito a algún Programa de Evaluación de Calidad. Influenzae ATCC 49766. sea este el PEEC u otro similar. (Ref. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Haemophilus influenzae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. quien realizará la confirmación. para su Confirmación Inform es periódicamente al MINSAL Informe laboratorio Local Inform e MINSA L 81 .Vigilancia de Resistencia para Haemophilus influenzae Laboratorio Local Mues tra E nfermedad Invasora D iagnóstico H aemo philus influenzae Envío datos de S usceptibilidad al Laboratorio de R eferencia Envío Cepa al Laboratorio de Referencia ISP. El medio de Dubos utilizado en esta técnica mejora la representatividad de los resultados. Utilizar la magnitud y tendencia de estos indicadores esenciales. tuberculosis circulantes en el país. Estas muestras son las únicas epidemiológicamente importantes. dado que son la única forma de presentación transmisible en la comunidad. CULTIVO: Siembra de la muestra en el medio de cultivo Lowenstein-Jensen. previo ESTUDIO DE SENSIBILIDAD: A partir de un cultivo positivo se realiza el método de las proporciones de Canetti. para evaluar y adecuar los tratamientos primarios y secundarios de tuberculosis actualmente en uso. Esta técnica se basa en la comparación porcentual del desarrollo bacteriano entre el medio de cultivo con antibiótico para cada y un medio de control. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS BACILOSCOPIA: MÉTODO DE ZIEHL-NIELSEN: Observación microscópica de la muestra teñida con colorantes específicos. tinción basada en la alcohol-ácido-resistencia que presentan las Micobacterias. Rist y Grosset. Implementar VIH/SIDA. Una inmediata y a lo menos una de ellas matinal. método químico enzimático indirecto de reacción colorimétrica. 82 . La lectura se efectúa a los 7 días. La lectura se efectúa a los 28 días. Expectoración: estudio seriado de 2 muestras obtenidas después de un esfuerzo de tos. tratamiento con el método de Petroff.V ig i l a n c i a d e l a Re s i st e n c i a A nt imi c r o b ia n a d e l M y c o ba c t er i u m t u b e r c ul o s i s CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES (CIE-10) A15-A19 Tuberculosis pulmonar. La lectura debe efectuarse a los 30 y 60 días. TÉCNICA DE WAYNE: Se utiliza para el estudio de sensibilidad a Pirazinamida. Estas cifras son consideradas como el mejor indicador global de gestión de un Plan Nacional de Tuberculosis. una vigilancia selectiva-preventiva en pacientes con coinfección TBC- ENFERMEDAD QUE PRODUCE Tuberculosis TIPOS DE MUESTRAS De origen pulmonar proveniente de pacientes sintomáticos respiratorios por más de 15 días. o realizar los cambios necesarios de tratamiento vigentes en el país. confirmada bacteriológica e histológicamente AGENTE ETIOLÓGICO Mycobacterium tuberculosis JUSTIFICACIÓN Conocer las tasas de resistencia 1ª y 2ª en las cepas de M. 83 . Las cepas deben enviarse con identificación clara y en el formulario diseñado para tal efecto. etc. tuberculosis.). durante este tiempo deben conservarse las cepas a 4ºC. especialmente en cepas poliresistentes. se le realizan pruebas enzimáticas. BIOSEGURIDAD Las cepas deben manipularse con las medidas de precaución universales en ambiente de bioseguridad nivel 3. estudios de caracterización fisiológicos y/o genéticos según necesidad para llegar a la identificación del M. bioquímicas. El embalaje debe indicar destino y remitente en forma clara y señalar que contiene material frágil. Al exterior de la caja debe adherirse un sobre que contenga los formularios de las cepas con los respectivos antecedentes del paciente. Los resultados se obtienen a los 4 días CONTROL DE CALIDAD Control Interno Se realiza control al medio de cultivo con droga utilizando la cepa H37rv y una cepa salvaje (autóctona Mapuche). Control Externo Evaluado por el Laboratorio de Enfermedades Tropicales Príncipe Leopoldo de Bélgica. plástico. plumavit. Transporte: El transporte de las cepas debe hacerse protegiendo cada tubo (papel. en una caja resistente. ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Envío: La derivación de las cepas al Laboratorio de Referencia debe hacerse lo más próximo al momento del hallazgo de positividad de los cultivos (máximo 10 días).ESTUDIO DE IDENTIFICACIÓN: A partir de un subcultivo de la muestra derivada. gonorrhoeae. no crece en agar sangre. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Diplococo gramnegativo.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Neisseria gonorrhoeae JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La gonorrea es una enfermedad de transmisión sexual que debe ser vigilada por el impacto en salud pública. 4. principalmente por: 1. hemocultivo.Cultivo e identificación bioquimica . La vigilancia de la resistencia de N.gonorrhoeae ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Gonorrea TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS Secreción uretral. crece bien en agar Thayer Martin y agar chocolate suplementado. 84 . La infección gonocócica materna se asocia a nacimiento de niños de bajo peso y oftalmia gonocócica del recién nacido. Familia Genero Especie a vigilar : Neisseriaceae : Neisseria : N. fastidioso en su desarrollo. líquido articular PERIODO OPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Al momento de sospechar la enfermedad y antes del tratamiento antimicrobiano CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Si la siembra de la muestra es antes de 15 minutos de tomada la muestra.Susceptibilidad por difusión . oxidasa positiva. Su alta capacidad de transmisión. TÉCNICAS DE LABORATORIO . se ha hecho cada vez más necesaria debido a la aparición de cepas resistentes a los antibióticos. Actualmente la droga de elección del Ministerio de Salud es ciprofloxacino. secreción conjuntival. En caso contrario conservar y transportar en ambiente CO2 (tarro con vela) u otro método similar.5°C. El no tratarla puede tener como consecuencia la infertilidad 3. lo cual podría llevar a un fracaso de tratamiento. Al estar asociada a VIH aumenta la transmisibilidad de ambas patologías 2. secreción cervical.Concentración inhibitoria mínima La técnica utilizada para el estudio de susceptibilidad es la descrita en los manuales CLSI (NCCLS) al igual que el procedimiento de control de calidad. conservar y transportar a temperatura ambiente. requiere CO2 y una temperatura de 35-36. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad. en donde se realizará su confirmación y vigilancia de la resistencia antimicrobiana. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. 85 . para asegurar la viabilidad del microorganismo. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. (Ref. El cultivo debe ser fresco (18-24 horas). CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Neisseria gonorrhoeae debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos mensualmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Neisseria. Las cepas se deben enviar en tubos de agar chocolate tendido o en medio de transporte (Amies). La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. Vigilancia de Resistencia para Neisseria gonorhoreae Laboratorio Local Muestra Diagnostico presuntivo Neisseria gonorhoeae Envío al Laboratorio Referencia ISP Confirmación Estudio Susceptibilidad Informe Laboratorio Local Informe MINSAL 86 . TIPOS DE MUESTRAS REQUERIDAS LCR. meningococcemia. crece en agar sangre y agar chocolate suplementado. debe ser realizada tan pronto sea posible. PERIODO OPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Al momento de sospechar la enfermedad y antes del tratamiento antimicrobiano CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Conservar y transportar a temperatura ambiente.5°C.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Neisseria meningitidis JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La enfermedad meningocócica forma parte de un programa internacional de vigilancia y control de la Organización Mundial de la Salud (OMS). En Chile se encontró resistencia intermedia desde el año 1993 (3%).meningitidis ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Meningitis. La susceptibilidad a rifampicina. oxidasa positiva. hemocultivo. La vigilancia de la resistencia para N. requiere CO2 y una temperatura de 35-36. La penicilina. Familia Genero Especie a vigilar : Neisseriaceae : Neisseria : N. DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Diplococo gramnegativo. líquido articular. se ha determinado un 52% de las cepas con resistencia intermedia y por este motivo debe mantenerse esta vigilancia. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Cultivo e identificación bioquimica Seroagrupación Susceptibilidad por difusión a rifampicina Serotipificación con anticuerpos monoclonales Concentración inhibitoria mínima (CIM) 87 . para dar respuesta a posibles brotes. Actualmente. es realizada por el Laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública. es una de las drogas que ha presentado resistencia aislada en algunos países y resistencia intermedia en porcentajes de 5-70 % dependiendo del país.meningitidis. ya que este antimicrobiano se utiliza en el tratamiento de los contactos. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. caracterización serológica y vigilancia de la resistencia antimicrobiana. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. 2004) ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente están obligados a notificarlos inmediatamente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de Neisseria. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico.CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD Neisseria meningitidis debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. (Ref. Las cepas se deben enviar en tubos de agar chocolate tendido o en medio de transporte (Amies). debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado. en donde se realizará su confirmación. 88 . para asegurar la viabilidad del microorganismo. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. El cultivo debe ser fresco (18-24 horas). V ig ila n c ia a la R e s is t e n c ia N e is s e r ia m e n in g it id is L a b o ra to r io L o c a l M u e s tr a D ia g n o s t ic o N e is s e ria m e n in g i ti d is E n v ío in m e d ia t o a l L a b o r a to ri o R e fe re n c i a I S P C o n f i rm a c ió n C a ra c te riz a c ió n E s t u d io S u s c e p t ib il id a d I n f o r m e L a b o ra t o r io L o c a l In f o rm e M I N S A L 89 . número de sensidiscos aplicados por placa. coli 25922. E.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Salmonella spp JUSTIFICAC IÓN DE LA VIGILANCIA La resistencia de Salmonella spp. el medio de cultivo. dilución (CIM) por dilución en agar. pH. excepto a Salmonella Typhi. la estandarización y la lectura. ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios participantes en el WHONET deberán enviar mensualmente al ISP. los antimicrobianos. La vigilancia de resistencia a este agente permitirá detectar la aparición de nuevas resistencias y es necesaria para el control local y nacional.Inhibidor Beta lactamasa). o en caldo (métodos automatizados). TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Métodos para estudio de susceptibilidad: difusión en agar. no tíficas a los antimicrobianos es muy variada. El control de calidad con las cepas ATCC permite evaluar el método. humedad del agar y esterilidad. E. 90 . los resultados de la vigilancia de resistencia mediante el programa correspondiente. CONTROL DE CALIDAD Control de Calidad Interno: -Cepas ATCC: E. presentándose cepas y/o serotipos muy sensibles y otros con distintos grados de resistencia. Pseudomonas aeruginosa 27853. de resistencia y desarrollo de drogas. E Test. para la coordinación y colaboración internacional en los temas relacionados con el uso de antimicrobianos. -Es necesario además controlar altura del agar. El estudio de vigilancia debe ser realizado en todos los establecimientos que efectúen aislamiento de Salmonella de cualquier grupo serológico. la cual se realizará en el Instituto de Salud Pública. faecalis 29212. Klebsiella pneumoniae 700603 (para Beta Lactamasa Espectro Extendido). Control de Calidad Externo: El laboratorio debe estar adscrito al programa de evaluación externo de calidad del ISP u otra entidad. coli 35218 (en antimicrobianos Beta lactámicos. Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Salmonella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Salmonella spp. Envío Resultado Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por paciente al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 91 . E. E. ha presentado un incremento importante de la resistencia a los antimicrobianos en uso. faecalis 29212.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Shigella spp JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA En los últimos años Shigella spp. número de sensidiscos aplicados por placa. La vigilancia es necesaria para el control local y nacional. o en caldo (métodos automatizados). -Es necesario además controlar altura del agar. coli 25922. E Test. Control de Calidad Externo: El laboratorio debe estar adscrito al programa de evaluación externo de calidad del ISP u otra entidad ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios participantes en el WHONET deberán enviar mensualmente al ISP. pH.Inhibidor Beta lactamasa). CONTROL DE CALIDAD Control de Calidad Interno: -Cepas ATCC: E. El estudio de vigilancia debe ser realizado en todos los establecimientos que efectúen aislamiento de Shigella. de resistencia y desarrollo de drogas. coli 35218 (en antimicrobianos Beta lactámicos. Para aquellos laboratorios que aíslen más de 10 cepas de Shigella semanales deben enviar una de cada cinco. La vigilancia de resistencia a este agente permitirá conocer los patrones de resistencia que se distribuyen en el país además de detectar la aparición de nuevas resistencias. los resultados de la vigilancia de resistencia mediante el programa correspondiente. Klebsiella pneumoniae 700603 (para Beta Lactamasa Espectro Extendido). 92 . para la coordinación y colaboración internacional en los temas relacionados con el uso de antimicrobianos. la estandarización y la lectura. los antimicrobianos. El control de calidad con las cepas ATCC permite evaluar el método. el medio de cultivo. Pseudomonas aeruginosa 27853. humedad del agar y esterilidad. dilución (CIM) por dilución en agar. TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS Métodos para estudio de susceptibilidad: difusión en agar. Envío Resultado de Susceptibilidad al Laboratorio de Referencia Envío una cepa por Paciente. o 1/5 de las cepas si el laboratorio clínico recibe más de 10 muestras por semana al Laboratorio de Referencia Informes periódicos al MINSAL Confirmación Bioquímica y Estudio Serológico NO Confirmación SI Informe Laboratorio Local Informe al Laboratorio Local Informe al MINSAL 93 .Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Shigella spp Laboratorio Local Diagnóstico Presuntivo Shigella spp. El hecho de enviar una cepa se considera automáticamente notificada. peumoniae (enfermedad invasora ) en el laboratorio clínico. pneumoniae. La técnica utilizada es la descrita en los manuales NCCLS al igual que el procedimiento de control de calidad. El cultivo debe ser fresco (18-24 horas). están obligados a notificarlos mensualmente al Instituto de Salud Pública y enviar las cepas al Laboratorio de Referencia de S. . Por lo tanto es importante realizar vigilancia de resistencia antimicrobiana a todas las cepas de S. estudio serológico y vigilancia de la resistencia antimicrobiana. Todas las cepas deben enviarse con el “Formulario para Envío de cepas Sección Bacteriología” con toda la información solicitada. según instrucciones del fabricante. . debe necesariamente notificarse considerando para ello los mismos antecedentes solicitados en el formulario antes mencionado.pneumoniae. hace que la rápida emergencia de cepas de neumococos con susceptibilidad disminuida a la penicilina y a otro tipo de antibióticos represente un serio problema de salud pública.Concentración inhibitoria mínima por microdilución en placa a penicilina y cefotaxima en las cepas con un halo de inhibición a la oxacilina < 20 mm. La encomienda se despacha a temperatura ambiente y cumpliendo con las exigencias de transporte de material biológico. TECNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS . según manuales CLSI (NCCLS). 94 . Las cepas se deben enviar en tubos de agar sangre tendido o en medio de transporte (Amies). especialmente en niños menores de dos años de edad o con alguna inmunodeficiencia. para asegurar la viabilidad del microorganismo.Concentración inhibitoria mínima por E-test. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO Los laboratorios locales deben estar adscritos a un programa de evaluación externa de la calidad ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos públicos y privados que identifiquen este agente desde cuadros invasivos.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Streptococcus pneumoniae JUSTIFICAC IÓN DE LA VIGILANCIA La ausencia de una vacuna con una efectividad completa que proteja contra las infecciones causadas por S. en donde se realizará su confirmación.Técnica por difusión a oxacilina. En aquellos casos en que por algún motivo no pudiera enviarse la cepa a confirmación. Vigilancia de Laboratorio y Resistencia Streptococcus pneumoniae Laboratorio Local Muestra Cuadros Invasivos Diagnóstico Streptococcus pneumoniae Envío datos de Susceptibilidad Envío Cepa al Laboratorio de Referencia ISP. para su Confirmación Informe laboratorio Local Informe MINSAL 95 . y Staphylococcus aureus vancomicina intermedia (SAVI). crea un mayor riesgo de morbilidad y mortalidad a las infecciones causadas por este agente DESCRIPCIÓN DEL AGENTE Cocácea grampositiva dispuesta en racimo. muchas de las cepas son beta-hemolíticas en agar sangre. se desarrollan en atmósfera normal y la detección de la resistencia es temperatura dependiente ( 35°C). Amies. (Ref. Laboratory Biosafety Manual 4° Ed. aureus 25923 y la 29213 CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD S. Tórula seca en sílica gel TÉCNICAS DE LABORATORIO Cultivo e identificación bioquímica Susceptibilidad antimicrobiana CONTROL DE CALIDAD INTERNO Los medios de cultivo. Familia Genero Especie a vigilar : Micrococcaceae : Staphyloccocus : Staphyloccocus aureus ENFERMEDAD HUMANA QUE PRODUCE Enfermedades piogénicas TIPO DE MUESTRA REQUERIDAS Muestras tomadas de acuerdo al sitio de infección PERÍODO ÓPTIMO PARA LA TOMA DE MUESTRAS Ante sospecha clínica y antes del tratamiento antimicrobiano. tanto nosocomial como adquirido en la comunidad. reactivos y técnicas deben ser controlados con las cepas de referencia y con la periodicidad definida para cada caso. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Si el período de transporte es mayor a dos horas: Utilizar medio de transporte como Stuart.Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de Staphyloccocus aureus JUSTIFICACIÓN DE LA VIGILANCIA La creciente exposición del paciente a los antimicrobianos y la aparición de Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR). 2004) 96 . El control de calidad de las técnicas de susceptibilidad se realiza con la cepa ATCC S. aureus debe manipularse de acuerdo al Nivel 2 de Bioseguridad correspondiente a la Clasificación Internacional de Riesgo. 18 del 16 de Julio del 2002 (Prevención de la emergencia y diseminación de S. y el periodo de tiempo que se solicitará esta informacion. enviando la información al Instituto de Salud Pública mediante formularios provistos por esta institución. públicos y privados en que se identifique este agente. 97 . será informado oportunamente.ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Los laboratorios clínicos. estarán obligados a notificar los resultados de la susceptibilidad antimicrobiana. La frecuencia de envio. En el caso de las cepas Staphylococcus aureus vancomicina intermedia o resistente deberán ser enviadas al Laboratorio de Referencia de acuerdo a la circular 17 A . aureus resistentes a vancomicina en hospitales) . para su Confirmación Informe periódicos al MINSAL Informe al Laboratorio Local Informe MINSAL VRSA : S. aureus vancomicina intermedia 98 . aureus vanvomicina resistentes VISA : S.Vigilancia de la Resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus Laboratorio Local Muestra Staphylococcus aureus Notificar resultados de susceptibilidad antimicrobiana al Laboratorio Referencia ISP Enviar cepas VISA y VRSA al Laboratorio Referencia ISP.