NORMA TÉCNICA COLOMBIANANTC 5230 2003-12-19 MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Y ALIMENTO PARA ANIMALES. MÉTODO HORIZONTAL DE TÉCNICAS DE MUESTREO DE SUPERFICIES USANDO CAJAS DE CONTACTO Y MÉTODO DE ESCOBILLÓN E: MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFS. HORIZONTAL METHODS FOR SAMPLING TECHNIQUES FROM SURFACES USING CONTACT PLATES AND SWAB METHODS. CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción idéntica (IDT) por traducción de la ISO ISO/DIS18593:2002. Microbiology of Food And Animal Feeding Stufss. Horizontal Method For Sampling Techniques From Surfaces Using Contact Plates And Swab Methods. microbiología de alimentos; análisis microbiológico; superficies. DESCRIPTORES: I.C.S.: 07.100.30 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. Tel. 6078888 Fax 2221435 Prohibida su reproducción Editada 2004-01-30 ICONTEC. FÁBRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS EL REY FRIGORÍFICO GUADALUPE FRIGORÍFICO SUIZO S. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S. INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO INSTITUTO NACIONAL DE SALUD IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. BIOTRENDS LABORATORIOS CARULLA –VIVERO. es el organismo nacional de normalización.S. ALPINA ASINAL AVESCO BIOCONTROL BIOQUILAB LTDA.A. . INGENIO PICHICHI INSTITUTO NACIONAL DE SALUD IVONNE BERNIER LABORATORIO. GASEOSAS COLOMBIANAS S. INGENIO PROVIDENCIA S.A.U.A.PENZIPAN DE COLOMBIA LTDA. ICONTEC es una entidad de carácter privado.PRÓLOGO El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.A.A. según el Decreto 2269 de 1993.A. CREPES & WAFLES GASEOSAS COLOMBIANAS S. NULAB LTDA.A. CONGELAGRO CONSULTOR INDEPENDIENTE EMPRESA DE ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ -E. MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A.A. La NTC 5230 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2003-12-19. COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA.S.A. sin ánimo de lucro. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS LTDA. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES LEMA ALPINA S. ASINAL LTDA. este último caracterizado por la participación del público en general. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. CENICAÑA COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública. LABORATORIO BIOCONTROL LESNIAK E. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS SECRETARÍA DE SALUD DE BOGOTÁ TRES M COLOMBIA S. ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA AVESCO BAVARIA S.A. BIOCONTROL BIOQUILAB LTDA. LEVAPAN S.A. cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. NULAB LTDA. A.A. LLOREDA GRASAS S.A. MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL NESTLÉ DE COLOMBIA S. regionales y nacionales. en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ACEITES Y GRASAS VEGETALES S. COLOMBIA S. CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA. LEONA S.A. ALGARRA AQUALAB ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA BAVARIA S. CREPES Y WAFLES GASEOSAS COLOMBIANAS S. QUIOS LTDA. ICONTEC BARRANQUILLA ICONTEC MEDELLÍN ICONTEC CALI ICONTEC CERTIFICACIÓN PRODUCTO BLANCA USECHE CONSULTOR INDEPENDIENTE INGENIO PICHICHI S. BIOQUILAB LTDA.U LEVAPÁN S. UNIVERSIDAD JAVERIANA Además de las anteriores.A.QUIOS LTDA.A.A. RICA RONDO.A. REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS LTDA. INDUSTRIA NACIONAL DE ALIMENTOS S. LESNIAK E.A. PASSIFLORA COLOMBIANA S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS UNIDAD ADMINISTRATIVA DE SALUD PÚBLICA UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL UNIVERSIDAD JAVERIANA VIKINGOS ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales.A. BIANÁLISIS BIOMERIUX. PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y JUGOS DE FRUTA QUALA S. DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN . CASA LUKER CENICAÑA CERVECERÍA LEONA COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S. TRES M. MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S. INGENIO RIOPAILA INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO ICA INVIMA INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA MÉDICA LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS LARKIN LTDA.A.A.A. OBJETO Esta norma específica un método horizontal para la enumeración de microorganismos viables en superficies con contacto de placas. Los métodos alternativos prescritos en este estándar son métodos útiles para la estimación de la carga microbiana de las superficies. Microbiología de Alimentos y de Alimentos para Animales. NTC 4092. 1. Este método horizontal describe ambos. MÉTODO HORIZONTAL DE TÈCNICAS DE MUESTREO DE SUPERFICIES USANDO CAJAS DE CONTACTO Y METODO DE ESCOBILLÒN 0. 1 . mientras que el método de escobillón (húmedo y seco) puede ser usado para cualquier tipo de superficies. 2. REFERENCIAS NORMATIVAS Los siguientes documentos referenciados son indispensables para la aplicación de esta norma.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Y ALIMENTO PARA ANIMALES. Reglas Generales para el Análisis Microbiológico. General Guidance for the Enumeration of Coliforms. Para referencias no fechadas. el método de contacto de superficies usando contacto con caja o el método de láminas de inmersión o de escobillón húmedo o seco o enjuague. INTRODUCCIÒN Esta norma especifica un método horizontal para la determinación del número de microorganismos viables en las superficies de utensilios. (ISO 7218:1996). Para una muestra de superficies extensas (> 100 cm2 paños o esponjas) pueden ser utilizadas paños o esponjas. láminas de inmersión y escobillones (trapo o esponja). basados en el número de UFC (Unidad Formadora de Colonias) x cm2 presentado en un test de superficies. ISO 4832:1991. Colony Count Technique. El método de contacto de cajas es solo aplicable a superficies planas. Microbiology. se aplica únicamente la edición citada. Para referencias fechadas. Los resultados son muchas veces presentados como puntajes de calificación de higiene. superficies de trabajo y otros equipos en contacto con alimentos para conocer el nivel de contaminación durante la producción o la efectividad de los protocolos de limpieza y desinfección. se aplica l última edición del documento referenciado (incluida cualquier corrección) . Varios medios de crecimiento están disponibles acorde al microorganismo buscado. Part 1: Technique Using BairdParker Agar Medium ISO 6888-2:1999. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. cuadro estéril de esponja plana. uno o ambos lados (7 cm2 x 10 cm2 ) cubiertas con una capa de un medio de crecimiento sólido. es de material estéril entretejido. Preparation of Test Samples. 3. escobillón contenido en un tubo o envuelto. Initial Suspension and Decimal Dilutions for Microbiological Examination.3 escobillón barra delgada (estéril) con algodón o material sintético (alginato). Microbiology.2 láminas de inmersión láminas sintéticas. las cajas varían en diámetro acorde al producto. General Guidance for Enumeration of Yeasts and Moulds. Horizontal Method for the Enumeration of Coagulase-Positive Staphylococci (Staphylococcus Aureus and other Species). Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. MPN Technique and Colony-Count Technique. Colony Count Technique at 30 °C ISO 6887-1:1999. General Rules for Microbiological Examinations ISO 7954:1987. General Guidance for the Enumeration of Micro-Organisms. 3. 2 .NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 ISO 4833:1991. TÉRMINOS Y DEFINICIONES 3. usado para toma de muestras de superficies largas (> 100 cm2). libre de sustancias antimicrobianas. ISO 7218:1996. Microbiology. ISO 6888-1:1999.1 cajas de contacto cajas plásticas servidas con un volumen de agar controlado especialmente elaborados para muestras de superficies.4 tela o paño húmedo. Part 2: Technique Using Rabbit Plasma Fibrinogen Agar Medium ISO 7402. Colony Count Technique at 25 °C 3. Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Microbiology of Food And Animal Feeding Stuffs. Horizontal Method for the Enumeration of Coagulase-Positive Staphylococci (Sr species). 3.5 esponja húmeda. usado para toma de muestras de superficies largas (> 100 cm2). libre se sustancias antimicrobianas. también empacado individualmente en bolsa plástica estéril. General Guidance for the Enumeration of Enterobacteriaceae without Resuscitation. Microbiology. empacado individualmente en bolsas plásticas estériles. 3. 3 Usando el método del escobillón para examinar un área específica marcada de superficie (por ejemplo usando una plantilla) y después de frotar para tomar la muestra.7 Líquidos de dilución. ISO 4832 y si es requerido. O cualquier otro medio de cultivo conocido para enumeración o enriquecimiento de (grupos) microorganismos. es calculado del número de colonias (confirmadas). 5. puede hacerse la limpieza y desinfección para prevenir el aumento de la contaminación cómo resultado del procedimiento de muestreo. NOTA Estos métodos no son cuantitativamente confiables o reproducibles y sus resultados solo pueden ser usados en n análisis de tendencias. usando los procedimientos descritos en los métodos para la enumeración de (grupos) microorganismos a ser investigados. Agar Oxitetraciclina Huevo Glucosa (OGY). ISO 4833 y si es requerido. ISO 7402 y si es requerido. 4. Las barras de los escobillones se rompen dentro de un tubo o botella que contiene un fluido en dilución estéril o líquido neutralizante y luego se mezcla manualmente. véase la norma ISO 6887-1 Líquidos neutralizantes.2 Una caja de contacto (o lámina de inmersión) con el medio agar apropiado. 4.3 5. 4.4 El tiempo y temperatura de incubación depende del tipo de microorganismo a ser detectado. se pueden realizar las pruebas de confirmación apropiadas.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 4. podrían solo ser usados en un análisis de tendencia. (100 ml x 100 cm2).5 Para medios selectivos.6 5.1 5. se utiliza la suspensión inicial y si es necesario.6 Luego de tomar la muestra de la superficie. 5. PRINCIPIO NTC 5230 4. el dispositivo de muestreo es almacenado en un líquido de volumen de dilución conocida. Debido a que estos métodos no son cuantitativamente dignos de confianza o de resultados reproducibles. ISO 6888-1 y 6888-2. diluciones decimales (1ml. para determinar el número de microorganismos. Agar Baird Parker. En el laboratorio.1 Para obtener un estimativo de contaminación microbiana de una superficie usando cajas de contacto o método de escobillón se requiere seguir los siguientes pasos: 4. 5 ml y 10 ml de diluyente). es presionado contra la superficie a analizar. El número de Unidades Formadoras de Colonia (UFC) de un microorganismo específico por cm2 o por objeto. ISO 7954 y si es requerido. véase el numeral 7. Agar Rojo Violeta Bilis Dextrosa.4 5. Después de la incubación una estimación de contaminación de la superficie puede ser obtenida por el conteo del número de colonias desarrolladas.5 MEDIOS DE CULTIVO Y LÍQUIDOS DE DILUCIÓN Agar Plate Count. 3 . 5. Agar Rojo Bilis Violeta. 4.2 5. Si la superficie es enjuagada con un paño o esponja estéril. Los aparatos usuales del laboratorio de microbiología y. 6. 6. o aparatos similares. capaz de mantener las muestras entre 1 °C y 4 °C durante el transporte al laboratorio. 6. elaboradas en plástico de 90 mm a 100 mm.1 ml.9 Contenedores. como botellas.01 pH a 25 °C ± 1 °C.2 Aparatos para esterilización en seco (horno) o esterilización húmeda (autoclave) Véase la norma ISO 7218.1 a 5. graduadas en divisiones de 0. Cajas de contacto. 7. una capacidad de operar entre 44 °C a 47 °C y otro capaz de hervir agua. con material resistente a corrosión (por ejemplo un marco en acero inoxidable de 20 cm2 a 100 cm2). 6.11 6.1 a 5. posibilitando la medición a ser hecha. frascos. individualmente envueltas y estériles.14 Plantilla. cubiertas con medio ya descrito (véanse los numerales 5.5). 37 °C ± 1°C).8 Pipetas graduadas. capaz de ser leído a la unidad cerca de 0. Véase la norma ISO 7218. 7. con amplia capacidad de abertura y una capacidad nominal de 1 ml. de plástico y con medio ya descrito (véanse los numerales 5.1 unidad pH. 6. 30 °C ± 1 °C. 6.6 Stomacher® o Pulsifier®. 6.10 6. para mezclar líquidos en tubos de cultivo.12 6.4 Baños de agua. tubos.7 Mezclador vortex®. paños o esponjas.15 Nevera o caja con aislamiento. en particular.1 APARATOS Y CRISTALERIA NTC 5230 Para los requerimientos generales. Aparatos disponibles son una alternativa aceptable a cristalería reutilizable si este tiene especificaciones similares.5 Ph -metro. capaces de operar en la temperatura de incubación para los (grupos de) microorganismos a ser investigados (25 °C ± 1 °C.1 MUESTREO GENERAL Es importante que le laboratorio reciba una muestra representativa de la superficie a analizar y que esta muestra no haya sido cambiada por residuos de desinfectantes o durante el transporte o almacenamiento. 4 . disponible para esterilización y almacenamiento de medios de cultivo. usando bolsas plásticas estériles para preparar las suspensiones iniciales por movimiento peristáltico ( Stomacher®) o vibración (Pulsifier®).5). 6. 6. 6. Escobillones. o pipetas automáticas de 100 µl o 1 000 µl.13 Cajas de Petri. Láminas de inmersión. la cual es precisa a ± 0.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 6. 6.3 Incubadoras. los siguientes: 6. las cuales son fáciles de limpiar y pueden esterilizarse. el Tween 80 (30 g/l) y la Lecitina (3 g/l) son usados para neutralizar residuos de desinfectantes absorbidos (componentes de amonio cuaternario. Devolver al paquete plástico y cerrar de manera que quede sin agujeros. La fórmula para neutralizantes universal es: Tween 80 (Polisorbato 80) Lecitina Tiosulfato de sodio L-histidina Saponina 30 g/l 3 g/l 5 g/l 1 g/l 30 g/l Preparar en líquido de dilución (peptona 1g/l. pueden añadirse neutralizantes apropiados al líquido de dilución y al medio usado en las cajas de contacto. Cerrar la caja de contacto o láminas inmediatamente después de la inoculación y poner en el contenedor de transporte. esperar 15 min antes de investigar la superficie con escobillón o cajas de contacto. anfotericidas). NaCl 8. Un neutralizante apropiado para toda situación puede no ser descrito. 5 . la catalasa o peroxidasa pueden ser usados como neutralizantes. (para cajas RODAC® de un diámetro de 55 mm tienen un aplicador comercialmente disponible). La literatura dice que resultados óptimos de las cajas de contacto son obtenidos con un tiempo de contacto de 10 s y una presión de 500 g. distribuir en tubos o botellas y esterilizar 15 min a 121 °C. Presionar la punta del escobillón contra la pared del tubo para remover el exceso de agua. acorde a las especificaciones del desinfectante). Poner el escobillón en el tubo con el líquido de dilución y romper o cortar el límite indicado del palo asépticamente.5 g/l). para avaluar el desempeño del programa de limpieza y desinfección (o de otro modo. abrir el paquete plástico que contiene la esponja o paño. Generalmente. para prevenir cualquier efecto inhibitorio del desinfectante en el crecimiento del microorganismo. Remover el paño o esponja con pinzas estériles o guantes estériles y enjuagar como se describió antes.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 Los desinfectantes son generalmente formulados para una desinfección en un tiempo de contacto de 5 min a 15 min. Una unidad de estas enzimas cataliza la descomposición de 1 µmol de peróxido de hidrogeno por un minuto a 25 ° C y a un pH de 7. 7. El tiosulfato de sodio (5 g/l) es un buen neutralizante de productos con base halógena. En caso de paños o esponjas. En todos los casos donde se esperan residuos de desinfectantes. Ubicar la punta del escobillón en la superficie para ser investigada y una línea del área estimada de 20 cm2 a 100 cm2. 7.3 MÉTODO DE ESCOBILLÓN Remover un escobillón de la envoltura y humedecer la punta por inmersión en el tubo que contiene el líquido de dilución. presionar la superficie del agar de la caja de contacto o de la lámina firmemente y sin cualquier movimiento lateral contra la superficie analizada. En el caso del peróxido usado en desinfectantes. mientras que se rota el escobillón entre el pulgar y el dedo índice en dos direcciones en sentido derecho uno al otro.2 MÉTODO DE CAJA DE CONTACTO Después de remover de los contenedores de transporte. una cantidad de líquido de dilución o líquido neutralizante. [2] Una vez tomada la muestra. Si se presume de números elevados de microorganismos . Use la esponja para recoger la muestra y transferir al paño o esponja en una bolsa plástica estéril. Tratar cualquiera de las otras diluciones de la misma manera.2 MÉTODO DE ESCOBILLÓN (INCLUYENDO ESPONJA O PAÑO) Mezclar el contenido del tubo que tiene los escobillones en el mezclador vortex® por 30 s. Frotis con siembra directa: Utilizar aplicadores o hisopos de algodón estériles para realizar el frotis o toma de muestra en la superficie. 8. Esto representa la suspensión inicial. dependiendo del tamaño del área a investigar (100 ml x 100 cm2). preparar otras diluciones decimales en diluyente agua peptonada para obtener un número de colonias contables. 9. Invertir las cajas e incubarlas a una temperatura y tiempo adecuado para cada medio. ajustando la velocidad para que la pared del tubo quede humedecida arriba a una altura de 2 cm a 3 cm debajo de la tapa. según el tipo de microorganismo o analito objetivo de la búsqueda. cerrar la bolsa de manera que no queden agujeros.1 PROCEDIMIENTO MÉTODO DE CAJA DE CONTACTO Incubar las placas o láminas de acuerdo al tipo de microorganismo a ser detectado. apretar la esponja o paño a través de la bolsa sobre la mano. Se debe igualmente transportar en una caja o nevera de icopor a una temperatura entre 1 °C a 4 °C. Después de esto. 9. El transporte de cajas de contacto y/o láminas preferiblemente con 4 h en una vía donde no ocurra contaminación. 9. sembrar con el hisopo o aplicador en la superficie del agar. tratar al contenido de la bolsa en un Stomacher por 1 min o pulsifier por 30 s.1 ml de inoculo para técnicas de difusión.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 Otra alternativa es abrir el paquete que contiene la esponja o paño. TRANSPORTE La siembra de las muestras obtenidas por el método de escobillón debe realizarse preferiblemente dentro de las 4 h siguientes a la toma de muestra. usando un 1 ml de inoculo para servir las cajas y 0. Para el transporte de los aplicadores es importante tener en cuenta el numeral 8. esto representa la suspensión inicial. De acuerdo a la enumeración de métodos utilizados (véanse las normas ISO apropiadas). 6 . inocular por duplicado en las cajas con medio la dilución inicial. Examinar en el laboratorio tan pronto como sea posible y no después de 24 h. Añadir a la bolsa plástica que contienen los paños o esponjas. 1 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS MÉTODO DE CAJA DE CONTACTO Dividir el número de (blanco) colonias por el área de la superficie de la placa. seguir las instrucciones después de pre. 9. Cuando el goteo es aplicado.2 Método de escobillón (esponja o paño) Contar las colonias de cada caja y confirmar si es necesario.2 MÉTODO DE ESCOBILLÓN (ESPONJA O PAÑO) 10.3. 9.3. 10. Reportar el recuento como UFC x cm2 de superficie.3. es conveniente tocar la punta de la pipeta en la superficie del agar en orden de transferencia de una cantidad completa de la dilución al medio de cultivo. el área investigada podría ser preferiblemente de no menos de 1 000 cm2. 9.3 Método de goteo en placa Contar el número de colonias (blanco) a las diluciones producidas de 5 colonias a 50 colonias. como se describe en la norma ISO estándar. acorde a el microorganismo(s). 7 . (Véase el numeral 5). 9.4 En el caso de procedimientos de enriquecimiento. paño o esponja a un medio de enriquecimiento y mezclar bien. si es necesario.3. Comenzando con la dilución más alta.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 Otro método utilizado puede ser el método de Goteo (DIN 10113-2). usando las mismas diluciones pero en diferente placa de agar) cada pre-secado de la placa de agar puede ser usado por goteo de no más de 6 diluciones diferentes. Si el método de escobillón es usado para demostrar la presencia de microorganismos específicos (Lysteria monocytogenes o Salmonella spp). usar pipetas estériles para transferir alicuotas de 0. esponjas o paños) y de las otras diluciones a sectores apropiados del medio de cultivo marcado en el centro de la placa de agar ( por duplicado.05 ml de la suspensión inicial (escobillones.enriquecimiento acorde al microorganismo(s). Transferir el escobillón.1 Calcular el número de UFC x ml de suspensión inicial. Guardar las placas de agar horizontalmente (tapa arriba) bajo una superficie húmeda.1 Método de placa de contacto Contar el número de (específico) colonias en las placas de contacto o láminas directamente después del periodo de incubación especificado y confirmar este. 10. acorde al microorganismo(s). 10.3 SELECCIÓN Y CONTEO DE COLONIAS 9.2. factor de dilución correspondiente a la primera dilución. = = = = volumen de inoculo aplicado en cada gota ( en este caso 50 µl). usar la fórmula: N x F A en donde F A es el volumen del líquido de dilución ( o líquido neutralizante) en el tubo o bolsa.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 10. es la superficie investigada (cm ) es el reciproco de la dilución usada.4 Si el área analizada no es definida.2.2. usar la fórmula N x F x D para calcular el número de UFC / escobillón.1 x n2 )d ∑C en donde ∑C V n1 n2 = es la suma de colonias contadas en todas las gotas retenidas de dos diluciones sucesivas de 1 de la menor que contenga cinco colonias.2 Calcular el número de UFC por cm2 de superficie investigada con la fórmula: N x F x D A en donde N F A D es el número de UFC en 1 ml de líquido de dilución (líquido de inactivación) es la suma (ml) de líquido de dilución (liquido de inactivación) en el tubo o bolsa. calcular el número de N de UFC/ml del líquido de suspensión usando la fórmula. número de gotas retenidas en la segunda dilución.2. número de gotas retenidas en la primera dilución. d Para obtener el conteo/cm2 de superficie. 2 10. es el área de muestreo / cm 2 10. 8 . N = V (n1 + 0.3 Para el método de goteo. reportar el organismo blanco tanto detectado como no detectado en el área muestreada. Estos pueden variar dependiendo de las superficies examinadas es recomendable que estos sean designados y agregados entre las partes interesadas. cuchillo. Expresión de resultados para el método de Frotis con siembra directa Se reporta como ausencia / presencia del microorganismo patógeno objeto de la búsqueda por elemento evaluado (ejemplo cuchara. Si el objeto de la búsqueda lo requiere posteriormente realizar la identificación correspondiente. etc) o área de la superficie evaluada.coliformes totales.2.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 Cuando los métodos semicuantitativos son usados. 10. el resultado obtenido en UFC/cm2 de superficie puede ser llamado también número higiénico. 9 . mohos y levaduras. Cuando se presume de recuentos inferiores a 10 UFC para los casos de aislamiento de microorganismos mesófilos .5 En el caso de procedimientos de enriquecimiento. se debe reportar las unidades encontradas por elemento o área de la superficie evaluada. Pág.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5230 BIBLIOGRAFÍA [1] EN 1276. edición 91. Step 1. [2] 10 . Manual operativo de análisis microbiológicos para alimentos.Sc. Cortes Luna Gilma Janeth M. Laboratorio de Control de Calidad de Alimentos. Test Methods and Requirements Phase 2. Industrial. Chemical Desinfectans and Antiseptics. 124 y 125. Quantitatice Suspensión Tests for the Evaluation of Bactericidal Activity of Chemical Desinfectants and Antiseptics Used in the Food. Domestic and Institutional Areas. Horizontal Method for Sampling Techniques From Surfaces Using Contact Plates And Swab Methods. Gèneve: ISO. (ISO/DIS 18593). 2002 8 p. 11 .NORMA TÉCNICA COLOMBIANA DOCUMENTO DE REFERENCIA NTC 5230 INTERNATIONA ORGANIZATION FOR STANDARIZATION. Microbiology of food and Animal Feeding Stuffs.