UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARIAFacultad de Ciencias e Ingenierías Biológicas y Químicas Programa Profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia Curso: Microbiología veterinaria 1 AREQUIPA – PERÚ 2008 PRACTICA 1 RECONOCIMIENTO DE MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO 1. INTRODUCCION • Esta práctica nos va a permitir tomar contacto con los materiales de laboratorio y familiarizarnos con los equipos, material y muchos elementos físicos del o de los ambientes asignados. 2. OBJETIVOS Tomar contacto con el ambiente y diversos elementos e indicaciones que nos permitirán desarrollar un trabajo adecuado. 3. ACTIVIDADES • • Reconocer y graficar cada uno de los equipos y materiales de uso frecuente en el laboratorio. Tomar conocimiento y observar el funcionamiento y el uso del equipo y material existente. 4. MATERIALES Y TECNICAS • Equipos: o Microscopio binocular de luz incorporada o Autoclave o Horno o Estufa de incubación microbiana o o o o o • Refrigeradores Congeladoras Equipo de destilación Centrífugas Equipo de anaerobiosis. Materiales: o Placas petri o o o o o Tubos de ensayo Frascos Balones Asas Agujas de platino o Mecheros de gas propano Apreciación: la práctica fue muy importante debido a que nos ayudo a poder aprender sobre diferentes artefactos que más adelante en las siguientes prácticas nos ayudara a desarrollarnos correctamente. • FINALIDAD: poder trabajar con la mayor esterilidad posible para evitar algún desbalance en el resultado. 6. CUESTIONARIO a. RESULTADOS: Se obtuvo un nuevo conocimiento sobre el manejo de los diferentes instrumentos que usamos en la práctica. lo que en algunos casos como en los aparatos de centrifugar o del horno requirió de mayor importancia debido a ser mas difícil de manejar. USOS Y MANIPULACION DE LOS EQUIPOS DE ESTERILIZACION POR CALOR SECO Y CALOR HUMEDO. 5.o Trípodes y malla de asbesto o Láminas y laminillas porta cubreobjetos. ESTABLESCA LAS FINALIDADES. . b. ESTABLESCA LA IMPORTANCIA DE REALIZAR UNA CARPETA DE TODAS Y CADA UNA DE LAS PRÁCTICAS REALIZADAS EN EL CURSO. PRACTICA 2 LIMPIEZA. ESTABLESCA LA IMPORTANCIA DE LA OBSERVANCIA DE LAS NORMAS Y CONCEJOS TECNICOS PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO. como también nos ayuda a recordar diferentes procedimientos que realizamos en anteriores prácticas para no poder dudar y realizarlas con mayor seguridad. nos ayudan a realizar un óptimo trabajo en el laboratorio como también nos ayuda a tener precaución en el momento de utilizar los diferentes materiales que se encuentran en este. • Es muy importante este proceso. ACONDICIONAMIENTO Y ESTERILIZACION DE MATERIAL Y EQUIPO . d. • Esto nos ayuda a obtener una información básica acerca del curso. ESTABLESCA EN QUE RADICA LA IMPORTANCIA DE LA ESTUFA DE INCUBACION. así podremos evitar que alguna bacteria se adhiera a este ya que por medio de estos procesos acabaremos con esta.• USOS y MANIPULACION: los usamos para esterilizar el material. c. el que brindara nutrientes pero la temperatura y humedad óptimos se los dará en la estufa de incubación. • Las normas y concejos técnicos. ayuda el desarrollo bacteriano cuando tenemos una muestra y la sembramos en un medio. ACTIVIDADES: • • • Realizar personalmente o en grupos la limpieza del material indicado. 4.1. 2. material y equipo a ser utilizado. OBJETIVOS: Tomar conocimiento de la importancia. METERIALES Y TECNICAS: • Equipos: o o Autoclave Horno de esterilización • Materiales o o o o Placas petri Tubos de ensayo Pipetas Matraces . EQUIPO. esto nos va a ayudar a la obtención y desarrollo adecuado de los microorganismos en el laboratorio. IMPORTACIA: La importancia de esta práctica es la higiene y limpieza de cada ambiente. procedimiento y 3. Realizar el o los procedimientos de acondicionamiento de dicho material limpiado. particularidades de cada uno de estos procesos. Realizar la esterilización de dicho material en los equipos que corresponda. • • • • Coloca los materiales detergente y agua. en un depósito con Limpiar el material con una escobilla apropiada Enjuagar con agua dos veces Enjuagar con agua destilada • Secar el material en un horno a baja temperatura y por poco tiempo. B. mechero. tijera. el material sucio necesita ser esterilizado antes en autoclave. Marcar con lápiz. • Técnicas: A. Procedimiento de limpieza: • Se limpia el material sucio o nuevo.o o o Frascos Papel graff Pabilo. Procedimiento de acondicionamiento: • • Acondicionar las placas petri con papel graff. lápiz. franela. . Enjuagamos con agua destilada para poder quitar todas la partículas de del agua de caño. RESULTADOS: 1º.C. 5º. Procedimiento de esterilización: • Para tubos de ensayo. Luego se los puso a esterilizar durante una hora a una temperatura de 180 grados centígrados. en caso de las placas petri se la envolvió en papel graff y luego se las amarro para que el papel o se saliera. en caso de los matraces se necesito algodón. doblándolo y haciendo un rollito que pueda cubrir la entrada de este. medios de cultivo. Luego con el papel graff se envolvió la parte superior donde se encontraba el algodón y finalmente con el pabilo se procedió a amarrarlo. 6º. 3º. utilizar el autoclave. Primero lavamos el material sucio y limpio con agua de caño y detergente. 6. agua. 2º. 4º. DISCUSION: a) ESTABLEZCA PORQUE SE DEBE ACONDICIONAR EL MATERIAL DE LABORATORIO. pasaron 15 minutos y se las retiro del horno y se procedió a su acondicionamiento. Se procedió a identificarlos colocándoles una etiqueta para poder diferenciarlos de los otros grupos. . Para poder evitar la re contaminación del material esterilizado. b) ESTABLEZCA PORQUE SE REQUIERE TRABAJAR SIEMPRE CON MATERIAL ESTÉRIL Y CONDICIONES ESTÉRILES EN EL LABORATORIO. Se las puso en el horno para que puedan secarse. . 5. en caso de los tubo de ensayo se hizo el procedimiento del algodón y luego se los envolvió en papel graff y se procedió a amarrarlos. Porque ayuda a retirar todas las partículas de sal que presenta el agua de caño. Porque cuando el técnico comete un error. Porque la esterilización elimina todos los microorganismos que existen en el material y que pueden provocar una variación en los resultados de las muestras. . . esto le permite al veterinario reconocerlo y saber cómo solucionarlo.. PRACTICA 3 PREPARACION. c) ESTABLEZCA PORQUE ES NECESARIO UTILIZAR AGUA DESTILADA O DESMINERALIZADA EN LA LIMPIEZA DE MATERIAL DE LABORATORIO. ACONDICIONAMIENTO Y ESTERILIZACIÓN QUE GENERALMENTE LO HACEN LOS TÉCNICOS DE LABORATORIO. ESTERILIZACION Y DISTRIBUCION DE MEDIOS DE CULTIVO . d) ESTABLEZCA PORQUE ES NECESARIO QUE UN ESTUDIANTE DE VETERINARIA DEBA CONOCER LOS PROCESOS RUTINARIOS DE LIMPIEZA. OBJETIVOS: Conocer la finalidad e importancia de los medios de cultivo.1. ACTIVIDADES: Conocer el proceso de preparación de los medios de cultivo. pabilo. MATERIALES O TECNICAS: • Equipo: o o o o • Balanza de platillo o de triple barra y analítica Autoclave horno de esterilización estufa de incubación. mechero. . los diversos procesos de esterilización de los medios de cultivo. IMPORTANCIA: Los medios de cultivo son sustancias que contienen elementos nutritivos que sirven para favorecer el desarrollo artificial en el laboratorio de los microorganismos. tijeras. EQUIPO. Materiales: o o o o o o o Medios de cultivo Matraces Beakers Probetas Placas de petri Tubos de ensayos. Papel. 3. así como las formas de distribución y chequeo de los medios de cultivo en el laboratorio. 2. así como la esterilidad y distribución de los mismos. 4. estos se deben de usar en forma estéril para que solamente se puedan desarrollar los microorganismos para los cuales están destinados. lápiz. • • b. Verificar y ajustar el pH Acondicionamiento de los depósitos que contiene los medios preparados para su respectiva esterilización.• Procedimientos: a. . Proceso de preparación de medios: • • Realizar el cálculo de las cantidades de medio y agua destilada para la preparación. 15 libras de presión y durante 15 a 30 minutos. c. Mesclar el medio y el agua destilada en un frasco o beakery disolverlo calentando al mechero hasta que disuelva completamente. Proceso de esterilización de medios: • Esterilización en autoclave a 121C. • Si se trata de medios de cultivo sólidos se deja que éstos solidifiquen al medio ambiente por un corto tiempo. Proceso de plaqueo y entubado: • Después se dejan enfriar hasta unos 38C y luego se procede a plaquear. Primero se procedió a pesar la cantidad que se necesitaba para hacer la muestra. 5. se desarrollan en el medio de cultivo y gracias a este podemos seguir paso a paso la forma que tienen estos de desarrollarse. en la cual se ponía los datos que venían en el frasco y el de la cantidad que queríamos realizar 2º. para ello utilizamos una fórmula de regla de tres simple. Luego se procedió a esterilizarlos en auto clave. o Ayuda al estudio de diversos problemas en el desarrollo de microorganismos. Después de haber hecho eso se los puso a disolver en agua destilada en el mechero para su completa disolución y chequear el pH para ello utilizamos papel tornasol y como unas muestras se pasaban se tuvo que regular utilizando ácido clorhídrico si la solución era muy alcalina e hidróxido de sodio normal si la solución era muy ácida 3º. 4º. Proceso de chequeo de esterilización: • Se colocan a la incubadora por 18ª 24 horas a 37C para verificar su completa esterilidad. después de 15 minutos se espero que se enfríen un poco. 6. .d. CUESTIONARIO a) ESTABLESCA LA IMPORTANCIA DE LA PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. RESULTADOS: 1º. Luego se plaqueo esperando a que se coagule para poder ponerlos en la incubadora por un día. f) ESTABLESCA PORQUE ES IMPORTANTE CONTAR CON TODO EL MATERIAL A LA MANO ANTES DE EMPEZAR A PREPARAR LOS MEDIO DE CULTIVO.b) ESTABLESCA LA IMPORTANCIA DE UNA COMPLETA DISOLUCION DE LOS MEDIOS ANTES DE VERIFICAR Y AJUSTAR SU PH. o Para que cuando se siembre el microorganismo se desarrolle en un medio optimo. o Es importante ya que ayuda a tener un medio óptimo para el microorganismo. . e) ESTABLESCA PORQUE SE HACE NECESARIO UN PROCESO DE CHEQUEO DE ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO. o Para verificar si son óptimos para el medio que se procederá a sembrar. c) ESTABLESCA QUE SE DEBE HACER CON LOS MEDIOS PREPARADOS ANTES DE LA ESTERILIZACION EN AUTOCLAVE. ajustamos su Ph para poder sembrarlos en un medio estable para que no tengan problema en el momento de desarrollarse. d) ESTABLESCA PORQUE SE DEBEN ENFRIAR LOS MEDIOS DE CULTIVO ANTES DE SER PLAQUEADOS O ENTUBADOS. preparándolos junto con agua destilada formando como una sopa que luego en la autoclave se formara como una gelatina. o Porque para preparar un medio de cultivo se tiene un tiempo promedio y también se tiene que hacer de una forma rápida. o Debemos calentarlos. EQUIPO. Agar Mac Conkey. MATERUALES O TECNICAS: • Equipo: o • Estufa de incubación Materiales: . IMPORTANCIA: Es importante para la identificación de microorganismos que se hallan en una determinada muestra clínica. 4. Agar nutritivo y Caldo Nutritivo. 2. 3. dispondremos de los medios realizados en prácticas anteriores como Agar Sangre. conservarlos en refrigeración después de 18 a 24 horas incubación. OBJETIVOS: Conocer la importancia y los procedimientos para la inoculación de muestras en los medios de cultivo en el laboratorio. ACTIVIDADES: Realizar la técnica de inoculación por agotamiento en los medios de cultivo con las muestras indicadas.PRACTICA 4 INOCULACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. debidamente esterilizados y chequeados. PRACTICA 5 OBSERVACION MACROSCOPICA DE LOS CULTIVOS DESARROLLADOS EN EL LABORATORIO 1. IMPORTANCIA: Algunos microorganismos presentan patrones de desarrollo característicos. Primero se procedió al calentamiento de las muestras de cultivo a una temperatura de medio ambiente 2º. RESULTADO: 1º. OBJETIVOS: . Pero dado que muchos tipos de bacterias diferentes tienen características de desarrollo similar.o o o o • Medios de cultivo Asas de platino Muestras clínicas Cinta adhesiva. lápices y mechero de gas propano. 5. Procedimiento: Métodos de incubación por agotamiento. se debe poner mucho énfasis en el estudio de las características culturales macroscópicas de las bacterias 2. Se procedió al acondicionamiento de las muestras para llevarlas a la estufa de incubación. para luego a su debido refrigera miento. Estas características son de gran ayuda en la identificación de estos microorganismos. Se procedió a la inoculación de estos usando las asas de aluminio. cubriéndolo con muestra por partes y con mucho cuidado utilizando la técnica de agotamiento 3º. designar y describir los diferentes patrones de desarrollo mostrados por las bacterias desarrolladas en los diferentes medios de cultivo inoculados. . 3. ACTIVIDADES: • • • • • Observación de las características morfológicas macroscópicas de las colonias desarrolladas en los medios sólidos.Reconocer. Verificar la obtención o no de colonias separadas con la técnica de inoculación por agotamiento. Observación de las características de desarrollo de bacterias en los medios de cultivo líquido. 4. MATERIALES Y TECNICAS: • Equipo o uso de lupas de aumento. Observación de de las características macroscópicas de las colonias en los medios de Agar MacConkay. Observación de las características macroscópicas de las colonias en los medios de Agar Sangre. • Materiales o cultivos desarrollados en placa y en tubo 5. RESULTADOS: o Cuando obtenemos el medio desarrollado procedemos a observarlos en las lupas de aumento. EQUIPO. ACTIVIDADES: • PREPARACION DEL FROTIS: o Tomar una lámina portaobjetos limpia y desengrasarla. 2. tomar una pequeña cantidad de la colonia o cultivo bacteriano y disolverlo en la gota de agua destilada en forma circular de tal manera que se obtenga una película blanquecina uniforme. o Con el asa estéril. el uso y la preparación de una coloración simple que nos permita hacer a las bacterias más visibles cuando se observan con el microscopio de luz incorporada. o Dejar luego que el frotis seque al aire libre. o Con un asa de platino colocar una gota de agua destilada en el centro de la lámina. OBJETIVOS: Demostrar la importancia.PRACTICA 6 PREPARACION DE UNA COLORACION SIMPLE 1. Luego fijar el frotis pasándolo ligeramente por la llama del mechero. . transferir una asada del cultivo líquido al centro de la lámina. dejando luego secar al aire libre o con papel secante. . • APLICACIÓN DEL TINTE COLORANTE RESPECTIVO: o Los diferentes tintes tienen diferentes tiempos de aplicación sobre el frotis. se elimina el colorante con agua de caño. o Después de colorear la lámina por el tiempo indicado.o Si se usan cultivos líquidos para este propósito. fijarlo al calor como el caso anterior. disolver en forma similar a lo anterior y dejar que seque. RESULTADOS: PRACTICA 7 COLORACION GRAM .o Examinar las bacterias presentes en el frotis mediante el uso de objetivo y aceite de inmersión de microscopio binocular 3. Materiales: • • • • • Placas con medios de cultivo desarrollados. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS: Equipo: • Microscopio binocular de luz incorporada de 10 a 15x y objetivo y aceite de inmersión. . Láminas porta y cubreobjetos limpias y desengrasadas. Agua destilada. la cual permite diferenciar o dividir a las bacterias en dos grandes grupos. bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas. sino sobre todo con la lectura o interpretación de la misma y los fundamentos en los que este se basa. 2. IMPORTANCIA: La coloración Gram constituye una coloración compuesta o diferencial. Bacterias de colorantes y reactivos específicos. ACTIVIDADES: • • Conocer los pasos de cada una de las etapas diversas de la preparación de una coloración de Gram. 4. La utilización de esta técnica es rutinaria en el laboratorio.1. OBJETIVOS: Dar a conocer la importancia y la utilidad de esta técnica en los procesos de identificación bacteriana. Asas de platino. Los alumnos no solo deben familiarizarse con el proceso de la técnica. 3. Conocer el fundamento e interpretar la lectura de una coloración de Gram y como esta ayuda a la identificación de las bacterias en el laboratorio. EQUIPO. pero de gran importancia de los procesos de identificación bacteriana. Procedimientos: • Preparación del frotis: Tomar una lámina portaobjetos limpia y desengrasada. mechero o con papel.• • Mechero de gas propano. Colocar con el asa una gota de agua destilada en el centro. . Secar al aire libre.5 minutos. Agregar el lugol (mordiente) por 2. Aceite de inmersión. • Coloración del frotis: Agregar cristal violeta al frotis (colorante) por 2. Eliminar colorante y lavar con agua de caño la lámina. Agregar un fragmento de colonia y disolverlo en el agua.5 minutos. Eliminar lugol y lavar con alcohol acetona (decolorante) por 5 – 10 segundos. • Lectura e identificación microscópica: Las bacterias que aparecen de un aparecen de un color morado o violeta son denominadas Gram positivas. RESULTADOS: . Sacar al aire libre. Observar con objetivo y aceite de inmersión. 5. • Eliminar safranina y lavar con agua de caño. mechero o lámina. con papel secante la Observación microscópica: Colocar una gota de aceite de inmersión sobre la lámina coloreada. Las bacterias que aparecen de un color rosado son denominadas Gram negativas. Agregar safranina (contra colorante) por 15 – 30 segundos. 2. OBJETIVOS: Dar a conocer la importancia y utilidad de esta técnica en la identificación de las bacterias ácido resistentes positivas. .PRACTICA 8 LAS MICROBACTERIAS Y LA COLORACION DE ACIDO RESISTENTE 1. especies del género Nocardia entre otros. la cual divide a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias ácido resistentes positivas y bacterias ácido resistente negativas. Esta es una técnica de uso frecuente en el laboratorio sobre todo para la identificación de las especies de Mycobacterium. IMPORTANCIA: La coloración de ácido resistente constituyen una coloración compuesta o diferencial. de forma que inunde toda la lámina. Procedimientos: • Tomar una lámina portaobjetos limpia y desengrasadas. . • • • Preparar el frotis según indicación del profesor. EQUIPO. Agua destilada y gas propano. Lectura de la observación microscópica e interpretación. Observación microscópica del frotis coloreado. ACTIVIDADES: • • • • Preparación del frotis (pasos). Materiales: • • • • • • • Placas con medios de cultivo puros diversas. Colocar un trozo de papel de filtro sobre el frotis.3. Asas de platino. Aceite de inmersión. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO: Equipo: • Microscopio binocular de luz incorporada. Agregar fucsina fenicada (colorante) sobre el frotis. Láminas excavadas. Bacteria de colorantes y reactivos específicos. Proceso de coloración del frotis preparado. 4. Láminas portaobjetos y cubreobjetos limpias y desengrasadas. • • • • Lavar con agua de caño. 5. Secar al aire libre. Observar al microscopio con objetivo y aceite de inmersión. Las bacterias que aparecen de color rojo son llamadas ácidos resistentes positivos y las de color azul ácido resistente. Agregar azul de metileno (contra colorante) por 1 minuto. RESULTADOS: . mechero o papel secante el frotis. Agregar alcohol ácido (decolorante) por 1 minuto.• • • • Hacer calentar el frotis por debajo de la lámina con un isopo de algodón empapado en alcohol por 5 minutos. Eliminar el colorante y enjuagar con agua de caño. Luego usando otra lámina portaobjetos hacer una extensión sobre la superficie de la lámina y dejar secar al aire libre. PROCEDIMIENTO o Preparación de una amina para observación de capsula bacteriana.PRACTICA 9 COLORACION BACTERIANA DE CAPSULA 1. 2. o o o o o . Cubrir el frotis de la lamina con cristal viooleta por el lapso de un minuto. Tomar una lamina porta objetos limpia y colocar al centro una gota de tinta china. IMPORTACIA • Demostrar que ciertas bacterias se hallan rodeadas de una capa gelatinosa bien pronunciada denominada capsula. Calentar suavemente el portaobjetos que contiene la extensión para fijar los microorganismos al mismo. Tomar un cultivo de bacterias positivamente capsuladas y a partir del tomar una asada y mezclarla con la tinta china. Dejar que el frotis saque al aire libre. Utilizar la técnica de wirtz para la coloración de esporas: . Preparar dos frotices. colorearlo de la forma ya conocida. RESULTADOS PRACTICA 10 COLORACION BACTERIANA DE ESPORAS 1.o Descartar el colorante y lavar suavemente para eliminar el exceso de colorante. ACTIVIDADES: • • • • Realizar el procedimiento de la técnica de coloración de esporas. OBJETIVOS • Demostrar visualmente al microscopio la presencia endosporas bacterianas en determinadas bacterias. Examinar al microscopio con aceite de inmersión. de 2. uno para coloración de gran y otro para coloración de esporas respectivamente. o o 3. El frotis para gran. OBJETIVOS • Observar directamente la movilidad de las células bacterianas en un medio ambiente líquido a través del microscopio de luz incorporada con un portaobjetos especial. mojarlo en alcohol y calentar suavemente la lamina por la parte baja de la misma. hacer un isopo de algodón. . o A continuación. Eliminar el colorante y lavar con agua de caño hasta que no salga más colorante por 30 segundos. Ejecute este calentamiento por 2 a 3 minutos. Contra colorear el frotis colocando safranina por 30 segundos. Luego. agregar más colorante si fuera necesario. no deje que la evaporación seque la lamina.o Colocar la porta objetos que contiene el frotis sobre un puente en el laboratorio. Dejar que enfrie el porta objetos. Eliminar y lavar con agua de caño. Observar al microscopio con aceite de inmersión. inundar el frotis con una solución de verde de malaquita. Dejar secar el frotis a aire libre. o o o o o o PRACTICA 11 DETERMINACION DE LA MOVILIDAD BACTERIANA 1. manipulación y fines de los equipos descritos en la práctica. RESULTADOS • Indicar su apreciación con la relación a la facilidad o dificultad referente al conocimiento. Conocer y practicar cada uno de los procedimientos para la ejecución de los propósitos antes mencionados. . Luego examinar al microscopio para determinar si las bacterias son o no móviles. Hay dos procedimientos ligeramente diferentes para observar la movilidad bacteriana sobre un portaobjetos. El primero de ellos consiste en colocar una gota del cultivo problema en el centro de una lámina limpia y luego cubrirla con una lamina cubreobjetos. 2.• • Observar indirectamente la movilidad bacteriana a través del desarrollo en un medio de cultivo especial. Agregar aceite de inmersión en los extremos del cubreobjetos para evitar la evaporación de la gota. • 3. ACTIVIDADES • • • Observación directa de la movilidad bacteriana. plaqueado y entubado tal como se procede en el caso de medios de cultivo bacteriano. tanto de hongos como de levaduras. Observar las características morfológicas y culturales tipo macroscópico. • • • • 2. luego incubar ambas placas en estufa de incubación a temperatura 23 ºC por 48 horas. diferentes técnicas y procedimientos de coloración para hongos y levaduras respectivamente. Observar las características morfológicas y culturales de tipo macroscópico. OBJETIVOS • familiarizar a los estudiantes con la preparación. Hacer que los estudiantes visualicen la estructura y morfología de hongos y levaduras. Tomar una placa que contenga agar saboreau dextrosa e inocularla con una muestra que contenga levaduras. tanto de hongos como de levaduras. Observar las características microscópicas tanto de hongos como de levaduras de la siguiente manera: o Observar las característica microscópicas tanto de hongos como de levaduras de la siguiente manera: • • • • . ACTIVIDADES • • • • • Realizar la preparación de medios de cultivo pertinentes. Inoculación de los medios. hongos y levaduras. Realizar el pesado. Que los estudiantes establezcan las diferencias morfológicas y estructurales entre bacterias. familiarizar a los estudiantes con los diferentes tipos de inoculación.PRACTICA 13 CULTIVO Y OBSERVACION DE HONGOS Y LEVADURAS 1. Tomar otra placa del mismo medio e inocularla o dejarla abierta al aire libre por 15 a 30 minutos para propiciar el desarrollo de hongos. esterilización. los tipos de medio de cultivo y la importancia de estos en el aislamiento e identificación de hongos y levaduras. o o o 3. Visualizar las diversas partes de una hifa y la estructura fructificante. después de 3 minutos cubrir la suspensión con una laminilla cubreobjetos y examinarla al microscopio en la forma que se indico anteriormente. así como de las observaciones macroscópicas y microscópicas de las colonias de los hongos y levaduras respectivamente. RESULTADOS • Realizar las anotaciones pertinentes de cada procedimiento. En el caso de hongos. tomar con la punta una aguja hipodérmica o un estilete una fracción de la colonia del hongo y colocarla sobre la gota de azul de metileno. luego agregar una azada del cultivo y mezclarlo con la gota. LEVADURAS: HONGOS: . La técnica consiste en usar una coloración vital como el azul lactofenol de algodón sobre un portaobjetos. Luego. Colocar una laminilla cubreobjetos y luego observar al microscopio usando primero el objetivo de menor aumento.o Para el caso de levaduras preparar una gota pendiente con el cultivo de la levadura y observar al microscopio con aceite y objetivo de inmersión en forma similar a las bacterias. colocar una gota de azul de metileno lactofenol de algodón sobre una lamina portaobjetos.