INTEGRANTES: Pedro Gonzales LeónCarlos Romero Aquino Geraldo Vidal Huerta Yahir Benavente CURSO: Microbiología TEMA: Métodos de siembra de microorganismos para análisis de alimentos. PROFESORA: Blga. Ms C. Alicia Decheco Egúsquiza GRUPO: 4- VIERNES AÑO: 2015 1. OBJETIVOS Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los medios de cultivo Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación de medios de cultivo en la práctica microbiológica. Conocer las diferencias métodos de siembra con el fin de obtener colonias bacterianas bien aisladas. 2. MARCO TEORICO A. Inoculación de un tubo con caldo: B. Inclinar el tubo e inocular en el sitio indicado. C. Volver el tubo a la posición vertical la inoculación de un pico de agar se realiza mediante un alambre recto. D. Atravesar con el alambre el agar en profundidad, hasta 2 o´3 mm del fondo del tubo. E. Retirar el alambre y estriar la superficie del agar con un movimiento. En la diferencia química de los microorganismos, las pruebas del desarrollan preferiblemente en tubos. Los tubos con tapa rosca son los más utilizados. En las siembras en tubos deberán seguir normas rigurosas que garanticen el éxito de aislamiento, tales como: Sostener, con la mano izquierda y en posición inclinada, el tubo que se va a cultivar, con el fin de evitar que los gérmenes contaminantes no caigan en la boca del tubo, sino sobre las paredes externas del mismo. •Quitar la tapa del tubo lo más cerca posible a la llama, y sostener el tapón en la mano derecha entre el anular y el dedo del corazón. En la posible, las tapas en ningún momento deben sobre las mesas u otras superficies por el peligro de contaminación. Pomo . 2.Probetas .Papel film . SIEMBRA POR PICADURA: se utiliza asa recta en punta. MATERIALES En laboratorio. los materiales que utilizamos fueron: . deslizando suavemente el asa.Incubadora .Cuchillo y tenedor .Empanada de carne 4.Tubos de ensayo . generalmente no inclinado. sin tocar el fondo. 3. PROCEDIMIENTO . esta estará totalmente estéril y la cantidad para sembrar sea de 2 ó3 gotas ó 1 ml.Mechero . y cuando se utiliza la pipeta. 4. SIEMBRA POR ESTRIAS: Se realeza en tubo con agar inclinado en medio sólido. al utilizar siembra en medios como agar triple azúcar (TSI) y agar citrato Simmons (CS). Existen cuatro tipos de siempre en tubo: 1. sobre la superficie del bisel. El asa se introduce hasta el tercio inferior del fondo del tubo. SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO: la siembra en esto medios se realiza mediante la utilización del asa o pipeta.Asa de siembra . SIEMBRA MIXTA: se realiza fundamentalmente en la diferenciación bioquímica se la bacterias.Botella .Gradilla . y se siembra agotando superficie desde el fondo hasta la parte superior. 3.Jarra eléctrica .Pabilo . se toma la colonia con un ligero toque y se cultiva por picadura perpendicularmente sobre el medio solido o semisólido. Cuando se utiliza el asa la cantidad que hay que tomar puede ser el material contenido en una o dos asadas. Sembrado: . utilizando la jarra eléctrica. Preparar la muestra: Utilizar el cuchillo para extraer 10 gr. del relleno de la empanada y mezclarla con 20-25 ml de agua estéril en el pomo previamente esterilizado. Esterilizar agua en la botella. . separándola del líquido. Reservar. Usar el tenedor para formar una especie de papilla con el relleno y el agua. tenedor. arrimar esta mezcla a un lado del pomo.Cultivos de microorganismos en caldo: . Dejar enfriar para luego utilizar el agua en la muestra. pomo. Esterilizar los materiales: cuchillo. Esterilizar el asa de siembra al rojo vivo. Mesófilos (35ºC) 4. Introducirla en el caldo . Termodúrico (Tibio) Entibiar el tubo 5 minutos. Flujograma 1. Ordenar y enumerar los 5 tubos de ensayo en la gradilla. Mesófilos (Medio ambiente) 3. Rotular los tubos 2. Flamear asa 4. Tomar un inoculo de cepa 5. Encender el mechero 3.abajo y de forma circular con la finalidad de diluir la muestra en el caldo.1. 5. Psicrófilos (Refrigeración) 2. Realizar dicha operación 7 veces en cada tubo de ensayo y reservarlos en donde deben ser almacenados según la lista presentada anteriormente. utilizando el mechero. Con el asa de siembra sacar una poco de la muestra del pomo y sumergirla en el primer tubo de ensayo y agitar de arriba. Termófilos (Caliente) Calentar el tubo por 5 minutos. los termodúricos y termófilos en la incubadora. mesófilos en el medio ambiente y el otro a 35 ºC. Incubar Para sembrar termodúrico el tubo debe estar tibio y para sembrar el termófilo tiene que estar caliente. Flamear la boca del tubo 7.Presenta .Heterogéneo estricto) grumosa . etiquetaremos los tubos con la información correspondiente y los reservaremos según la lista. los psicrófilos en el frío. 6.Turbidez . por lo que se debe calentar el tubo de ensayo por 5 minutos antes de realizar la siembra y se debe sembrar cerca del mechero para mantener la temperatura adecuada. RESULTADOS Lectura de Cultivos Zona superficial Zona intermedia Zona Basal Psicrófilo .Aerobio Facultativo .Moderado anillo (Micro Abundante (Anaerobio aerofilo) . Flamear el asa 8. 5. Al finalizar la siembra. Poca Turbidez . Presenta . Presenta . Moderado ºC) anillo (Micro . Presenta . Aerobio - velo anaerobio (Aerobio facultativo estricto) Mesófilo(35 . Heterogéneo (Anaerobio aerofilo) granular estricto) . Moderado velo Turbidez (Anaerobio (Aerobio . Heterogéneo (Anaerobio aerofilo) granular estricto) .A) anillo (Micro . Aerobio - velo anaerobio (Aerobio facultativo estricto) Termófilo . Poca Turbidez . Moderado (M. Aerobio - anaerobio facultativo . Poca Turbidez . Presenta .Mesófilo . Aerobio - anaerobio facultativo Termodúrico . Moderado anillo (Micro . Heterogéneo estricto) estricto) granular . Heterogéneo (Anaerobio aerofilo) granular estricto) . Presenta . Presenta . Moderada . 6.. CONCLUSIONES . . De todas estas muestras la más contaminada fue el triple de pollo. En la muestra de la empanada de carne predomino la flora microbiana psicrófilo (Tubo de ensayo número 1). empanada de carne y pan con jamón. Los alimentos analizados por los grupos en la clase de laboratorio fueron: Triple de pollo. Daniel Ricardo zapata. solo se destaparán en el momento del sembrado. al igual que los tubos de ensayo con los caldos. BIBLIOGRAFIA El libro: Manual práctico de microbiología general Autor: María José botero Ospina. Así se eliminarán los microorganismos y podremos reutilizar los tubos de ensayo. 8. . PH. No retirar los materiales como el cuchillo. . esto. RECOMENDACIONES .D. El agua estéril debe estar fría para poder ser utilizada con la muestra. como siempre. 7. si no los usaran automáticamente. Predomino el microorganismo psicrófilo y esto se debe a la mala manipulación y almacenamiento del producto terminado en nuestro caso la empanada de carne. Se debe esterilizar los tubos por 25 minutos en la jarra eléctrica antes de lavarlos. .Sc . PH. Utilizar el pabilo y amarrar la boca de la botella para facilitar el esterilizado del agua en la jarra eléctrica. será el tipo de medio de cultivo. en las proximidades del mechero. El sembrado en tubos de ensayo es una técnica sencilla que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas en un medio de cultivo estéril. Jairo castaño zapata. . . flameando la boca de los tubos antes y después de introducir el asa de siembra. ya que cada bacteria requiere cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus colonias. . ya que si está caliente eliminará los microorganismos. Se debe mantener tapado el pomo que contiene la muestra. . tenedor y pomo del agua caliente. en condiciones estériles. que será analizado posteriormente. Se debe trabajar. Aprendimos los pasos del método de siembra de microorganismos. M. .D . Se observó que de acuerdo al tipo de bacteria que se requiera sembrar. . http://www. 9.usc. Siembra masiva. mientras que en otras resulta indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno. CUESTIONARIO 1. Siembra volumétrica. 2. ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva.Ed. https://es.M. J. Siembra por estrías.es/export/sites/default/gl/centros/bioloxia/descargas/Memoria_Txcn icas_Bxsicas. Madrid. Siembra por estrías Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña. los métodos de siembra más empleados son los siguientes: 1. 3. Siembra por punción. antes y después de realizar la siembra. Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón. M. con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la superficie del instrumento. deben ser calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo. España. ¿Explique los tipos y aplicación de los métodos de siembra? R= MÉTODOS DE SIEMBRA El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de- Microorganismos. Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones.scribd. 2009.T. Biología de los Microorganismos. Brock. Madigan.(Slam) . Pearson. lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico. 4. Martinko.pdf. 12a. Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo. hasta el fondo de la cuña. por la parte externa del tubo. Aplicación de los métodos de siembra Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo. b. Coger el asa por el cabo. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe. retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo) c. A partir de este momento. con el objetivo de eliminar por incineración. lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación. proceda del siguiente modo: a. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa. en forma similar. Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa. proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto. 1. la siembra puede realizarse de diferentes maneras. d. tome el tubo por l porción inferior. 2. En algunas ocasiones.Instrumentos de siembra a emplear. pasándola una o dos veces por la llama del mechero. como explicaremos más adelante. los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona. Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado. a cuando tomamos el lápiz para escribir. 3. hasta que se ponga al rojo vivo. debido a la desigualdad de calor. 4. en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo: . se utilizan ambos instrumentos en la misma siembra. provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera. 5. Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. Esta acción calórica. Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero. Seguidamente. Fig. Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino. hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie. b) Deslizando el instrumento con el inóculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag. . proceda de la siguiente manera: a. c. tome la placa de Petry. 119: Siembra microbiológica en medios de cultivos distribuidos en tubos de ensayo: 1) y 2) Retirar el tapón del tubo. Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo. c) Roturando el medio Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petry. en contra de las manecillas del reloj. Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero. 120: Siembra en medios sólidos en cuñas (tubos de ensayo): a) Trazando una línea perpendicular desde el fondo hacia arriba. Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag. trazando una línea longitudinal. Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa. 6) Taponar el tubo. b. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo. haciendo un pequeño corte longitudinal. Fig. imprimiéndole un movimiento de zigzag. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa. Deslizando el asa. 3) Flamear la boca del tubo. de manera que la tapa quede hacia arriba. 4) Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra. 5) Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo. procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento. Cierre la placa y gírela varios cm. desde el fondo hacia arriba. por toda la superficie de la cuña.Fig. desde la pared. La particularidad que tiene este método. en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo. Fig. el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido. de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo. el primer segmento se hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con asa estéril. Esterilice el asa de platino a la llama del mechero. Si la siembra se va a producir en una cuña de agar. Fig. es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo. e. en lugar de hacer un primer segmento en zig zig con el hisopo. 1. en este caso. 122: Método de siembra por estrías en medios de cultivo sólidos distribuidos En placas de Petra f. generalmente. g. se procede en forma similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo. . en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia. b) Completar la siembra con un asa de platino estéril. Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior. d. 2. Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas. que posibilite el desarrollo aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. 123: Siembra por diseminación cruzada: a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z" en la superficie del medio. para lograr una diseminación por agotamiento. Repita esta operación una o dos veces más. imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la "Z" Siembra por punción Como es obvio. Cuando la muestra es tomada con hisopo. se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a continuación con el asa estéril se procede a deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z". Otra variante es la diseminación cruzada. son similares que cuando se utiliza el asa. Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur. Organizar el material para su fácil manejo e identificación. Siembra masiva Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación. 3. ¿Qué consideraciones se deben tomar al realizar los métodos de siembra utilizados en el laboratorio? R= Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Fig. Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos específicos. 125: Siembra masiva con espátula de Drigalski 2. ¿Cómo deben sembrarse microorganismos anaerobios? R= Medios de cultivo para microorganismos anaeróbicos . sin embargo. Manipular adecuadamente los cultivos puros. la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado. en medio de cultivo sólidos o líquidos. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiendo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo líquido. Fig. 124: Siembra por punción Siembra volumétrica Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado. procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar. Identificar y describir correctamente las características culturales y microscópicas de algunas bacterias. Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscópico y microscópico de bacterias. no puede determinarse el volumen. Para medios solidos los requerimientos pueden cubrirse agregando extracto de levadura. MEDIOS DE CULTIVO PARA ACTINOMYCES El término Actinomyces incluye el sufijo myces. Sin embargo. anaeróbicos estrictos. y antibióticos como colistin. refiriéndose a hongos y estructuras fúngicas.Algunas de las características de las cepas de los Actinomyces semejan tanto a bacterias como a hongos y con frecuencia se les ha considerado como transicionales entre los dos grupos de organismos. Son aquellas que para crecer en la superficie de un medio de cultivo necesitan una atmósfera sin oxígeno. sangre. piel. agar y resazurina que se colorea de rosa en presencia de oxígeno. Los medios de cultivo para anaeróbicos tienen una alta proporción de peptonas e hidratos de carbono ya que su metabolismo es más exigente que el de bacterias facultativas y requieren además factores de crecimiento con la hemina y vitamina k. NaCl. superoxidodismutasa y catalasa para metabolizar el O2. sangre al 5% (ésta favorece el crecimiento de microorganismos patógenos para el hombre). boca. glucosa. Tioglicolato: Medio semisólido compuesto de Cistina (aminoácido azufrado que actúa con función reductora) tioglicolato. microaerofilos o anaerobios facultativos. peptonas. Se utiliza medios selectivos. Este medio sirve para conocer si los microorganismos son aeróbicos estrictos. extracto de levadura. suero o liquido acético para medios líquidos. Identificación de crecimiento Para conseguir una recuperación óptima de bacterias anaeróbicas es fundamental elegir correctamente los medios de cultivo. Están diseminadas ampliamente en la naturaleza. vías aéreas superiores y tracto genitourinario femenino e intestino. la mayoría de las características más fundamentales . no selectivos y de enriquecimiento. Flora normal de mucosas. ácido nalidíxico y baitricina. Características Generales No crecen en presencia de O2 y mueren por O2 o por sus radicales tóxicos Carecen del sistema del citocromo oxidasa. ya que este elemento es tóxico para ellas. Requieren un potencial redox bajo. Los medios empleados con mayor frecuencia son: Agar Sangre: Está compuesto de extracto de carne. Menciona porque los actinomyces a pesar de ser bacterias reciben una denominación fúngica-. Repitiendo este proceso . Es recomendado para cultivar especies de actinomyces de crecimiento lento agar sangre. convexas y no hemolíticas después de 4 a 6 días de incubación. odontolyticus y A. Tioglicolato. cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. La motilidad de los actinomicetos se debe a la presencia de simples flagelos semejantes a los de la bacteria. A. IDENTIFICACIÓN Se desarrollan en medios de cultivo enriquecidos tales como: infusión de cerebro y corazón. Los actinomyces forman filamentos ramificados ediámetro de estos filamentos es semejante las células de los bacilos y no son tan anchas como las de los hongos. secas.Su papel presuntivo en la lesión se debe a que la formación de gránulos de azufre parecen proteger a las bacterias de la fagocitosis a cargo de los neutrófilos. viscosus . conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa. se observan colonias características: grises.de los Actinomyces indican son bacterias: Son anaeróbicas o microaerofílicas en comparación con los hongos patógenos que son aerobios. Los medios de cultivo deben ser incubados a 37ºC en condiciones de aerobiosis. lisas. A continuación. el tioglicolato de sodio y los medios de extracto de carne y levadura. forman colonias pequeñas. forman colonias de color rojo. Agar de infusión de cerebro y corazón. 4. naeslundii. agar Sangre. parece proteger a las bacterias de la fagocitosis a cargo de los neutrófilos. se flamea el asa. en la superficie de medio sin sembrar aún. se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica. quebradizas. ¿Cómo deben prepararse las muestras para poder aplicar la siembra de cultivos microbianos? R= Método de siembra por estría en placa Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. CLASIFICACIÓN DE ACTIMONYCESS Se considera que todas las especies patógenas están asociadas a exantemas A. Sin embargo un medio más selectivo consiste en gelatina. adherentes. permiten la colonización de algunas bacterias que asocian su patogenicidad con el actinomiceto y además dificultan la penetración de los antibióticos. a veces pigmentadas en rojo como en el caso de Actinomyces odontolyticus. irregulares. Para ello. con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri. brillantes. metronidazol y cadmio (GMC). Los principales medios de cultivo selectivos para actinomyces son tioglicolato (caldo). Agar de infusión de cerebro y corazón. varias veces se logra separar células individuales. En el segundo método (extensión en placa). no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. serán. se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (de medio estéril o solución salina. La suspensión se absorbe en el agar. igualmente estéril. Por tanto. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Quizás. conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos. las placas se incuban en un lugar adecuado. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula. las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Para obtener un cultivo axénico mediante este método: . normalmente de diez en diez. cultivos axénicos. A continuación. Por tanto. para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico. Para realizar diluciones de diez en diez. pero a veces de cien en cien. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. A continuación. Las colonias que se desarrollen la segunda vez. una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 10 veces para obtener una suspensión con un centenar de células por mililitro. dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. se realizan diluciones seriadas (en varias etapas). En el método de vertido en placa. se puede proceder de dos maneras diferentes. Por ejemplo. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. Métodos de vertido en placa y extensión en placa En estos métodos. casi con toda seguridad. no podemos asegurarlo. extendiéndolas con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. dejando las células microbianas sobre la superficie. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos. permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Como en el método de siembra por estría. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes. las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría. ¿Explique la importancia de la identificación de los microorganismos? R= Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. por ejemplo: • En el área clínica donde es de capital importancia conocer cuál es el agente causal de la infección que presenta un paciente. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez. . mezclar y verter el contenido en una placa Petri. se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie (más grandes). Estas técnicas se utilizan en diferentes áreas. repetir el proceso entero. Para estar seguro de que el cultivo es puro. (b) introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra. y (d) volver a esterilizar el asa. cosmética y de alimentos donde las normas de control de calidad exigen la ausencia de ciertos microorganismos. (a) Hacer diluciones seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una muestra con sólo unos pocos cientos de bacterias. 5. • En la industria farmacéutica. (e) Después de la incubación. • En investigación básica donde se aísla un determinado microorganismo que debe identificarse para comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo. para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una segunda placa. tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estrías en una región nueva de la placa. se desarrollan colonias aisladas. (c) Después de la incubación. (b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión. de manera de poder tratarlo con agentes terapéuticos. (c) sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en una placa Petri. hasta conseguir que los grupos de células se diluyan y se separen células aisladas. Método de aislamiento por siembra por estría en placa: Para obtener un cultivo axénico (a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero. Métodos basados en pruebas bioquímicas 4. No todos los microorganismos se identifican por las mismas técnicas. y como consecuencia de ello. si el profesional conoce el fundamento y los métodos de identificación microbiana puede explicarle al paciente la razón por la cual los resultados de la identificación del microorganismo y su antibiograma puede retrasarse algunos días. se produzca su deterioro. También en el caso de la industria alimentaria. los podemos clasificar en: 1. un farmacéutico. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA Los métodos más utilizados para la identificación microbiana. Si se desempeña en el área de producción de medicamentos y cosméticos. pruebas bioquímicas y serológicas. Métodos basados en tinción diferencial 3. Métodos basados en criterios morfológicos 2. Antes de proceder a discutir los métodos que se han enumerado. y al cual el médico le tomó una muestra para ser enviada al laboratorio para identificar el agente causal. debe conocer las normas que rigen la calidad microbiológica del producto a ser elaborado. Por estas razones. los microorganismos objetables y el fundamento de los métodos oficiales para descartar la presencia de éstos. La mayor parte de los métodos se realizan en un laboratorio y se busca utilizar el menor número de procedimientos y ensayos posibles. la fabricación de estos debe realizarse en áreas controladas libres de microorganismos. tinción diferencial. sino a la combinación de más de uno. por ejemplo puede estar asesorando a un paciente que tiene una infección bacteriana. es muy importante que el farmacéutico conozca el fundamento de los métodos existentes para la identificación microbiana. es importante conocer los métodos en los cuales se basa la identificación microbiana. los alimentos son sometidos a una serie de controles microbiológicos para asegurar la ausencia de microorganismos que pueden causar enfermedades y/o descartar la presencia de toxinas capaces de causar intoxicaciones alimentarias. o lo que es más grave que el producto contaminado le cause una infección a un paciente. Métodos basados en pruebas serológicas 6.Durante su ejercicio profesional. Ejemplo: identificación de bacterias con base a criterios morfológicos. En el caso del ejercicio comunitario. Métodos basados en detección molecular IDENTIFICACIÓN MICROBIANA En la mayoría de los casos la identificación no se realiza con base a un solo método. Métodos basados en tipificación con fagos 5. es importante hacer énfasis que para cada uno de ellos se . En el caso que el profesional se desempeñe en la industria de medicamentos y/o cosméticos. para evitar la contaminación del producto. la muestra a ser analizada. pero para otros no se requiere realizar dicho aislamiento. Con fines de control de calidad de medicamentos. . sangre. puede ser un producto en proceso o terminado. lágrimas. Para aplicar algunos métodos se requiere aislar en forma pura el microorganismo de la muestra. o donde se multiplica. Algunos ejemplos de muestras que se utilizan en microbiología clínica tenemos: heces. fluido vaginal. líquido cefalorraquídeo. hisopado faríngeo.requiere disponer de una muestra. También pueden utilizarse tejidos. etc. la muestra debe proceder del sitio donde el microorganismo está causando el daño. cosméticos y alimentos. Cuando se requiere identificar un agente que está causando una determinada patología. orina. semen.
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