Universidad de el salvadorFacultad de ciencias agronómicas Departamento de medicina veterinaria Parasitología animal Laboratorio 4. METODO DE KNOTT MODIFICADO Laboratorio 5. MÉTODO DE DENNIS. Catedrático MVZ. Luis romero Homogenizar la sangre con el formol al 2%. (Kaminsky.Tubos de ensayo de 15 ml .Porta y Cubreobjetos . Depositar la sangre en un tubo de centrifuga y centrifugar la muestra a 1. DESCRIPCIÓN DE LA PRUEBA UTILIZADA.Azul de metileno 1:1000 . ya que en horas de calor.Tubos de centrifuga .Centrifuga . Recolectar la sangre únicamente en horas de la mañana 5:00-6. Para diferenciar entre especies es necesario colorear la preparación.Muestra de sangre canino PROCEDIMIENTO.500 rpm durante 5-10 minutos. Observar al microscopio con 40 X. 2003) Los materiales para el método son: . facilitando la observación de las microfilarias inmóviles. . Obtener 1cc de sangre de la vena safena o radial de un canino que debe ser mayor de un año de edad. PROPÓSITO Demostrar microfilarias en sangre circulante. Método de Knott modificado. Decantar el líquido sobrenadante. Preparar 9cc de formol al 2% en un tubo de ensayo en donde se recolectará la sangre. Al sedimento se le agrega 1-2 gotas de azul de metileno (1:1000) homogenizar y colocar 2 gotas en un portaobjetos. por el aumento de la temperatura ambiental. la microfilaria no circula en el torrente sanguíneo. La formalina al 2% hemolisa los glóbulos rojos.00 am o últimas de la tarde 5:00-7:00 pm. sobre todo cuando la densidad de las mismas es muy baja.Formol al 2% .Microscopio . el hallazgo de 300 a 600 h/g de heces en ovinos y entre 100 y 200 en vacunos. mediante técnicas de sedimentación. Se coloca 1 cc de sangre en 9 cc de formol al 2%. Los métodos de sedimentación se basan en la mayor densidad de los huevos que el detritus que se hallan en las heces. (Villanueva. La detección de huevos de F. que requiere la aplicación de un fasciolicida. sin embargo. sangre canino Imagen 3. hepática en las heces de los animales sospechosos es útil para diagnosticar la fasciolosis crónica. desde simples extensiones hasta laboriosas técnicas cuantitativas. Homogenizar sangre con Imagen formol4. Imagen 1. PROPÓSITO. Método de Dennis. Se han descrito numerosos técnicas. en la primera fase de la infección hepática los análisis coprológicos son negativos. Muestra de Imagen 2. Mientras que. 2010) Materiales del método: . Centrifugar durante 5-10 minutos. muchas veces sólo caracterizada por una reducida productividad. indican enfermedad clínica. lo que permite concentrarlos en el sedimento tras repetidos lavados. El propósito de estas últimas es concentrar los huevos a partir de una muestra de heces. VENTAJA Y DESVENTAJA DE LA PRUEBA . agitar. agitar y dejar reposar por 5 minutos. trabajo: Preparar una solución de detergente en polvo al 10% (solución madre). Tamizar a través de un colador depositando el filtrado en una probeta y agregar solución jabonosa de trabajo hasta la marca de 50 ml. Repetir este procedimiento 3 veces más. Depositar el sedimento en cajas petri.Mortero y pistilo . Sedimento con lugol. Tercer lavado con solución jabonosa. Dejar reposar por 15 minutos. Colocar en un mortero aproximadamente 2 gramos de heces.Baker 250 ml . mezclando 10 gramos de detergente en 90 ml de agua.Papel toalla . PROCEDIMIENTO. Dejar reposar por 15 minutos.Estereoscopio . Decantar el sobrenadante de la probeta dejando únicamente el sedimento. dejar el sedimento en aproximadamente 5ml de solución jabonosa de trabajo.Caja petri . agregar unas gotas de lugol. Añadir 15ml de solución jabonosa de trabajo y Imagen 6. . Detergente en polvo.Probeta de 100 ml .Guantes de latex . En el último lavado. trabajo hasta la marca de 50 ml.Gabacha Preparación de solución jabonosa de Imagen 5. homogeneizar con el pistilo. Agregar nuevamente solución jabonosa de Imagen 7. Observar en estereoscopio. Segundo lavado con solución jabonosa. Preparar solución jabonosa de trabajo mezclando 5 ml de solución madre en 995 ml de agua.Lugol . 1998) modo que para detectar su presencia Métodos permiten cuantificación fácil. (Torrel. (Alvarez & Boyacá. MÉTODO DE DENNIS Método de cuantificación de Huevos de La técnica de Dennis no es lo fasciola.a) El análisis coproscópico de la técnica de concentración y cuantificación de Dennis modificado se basa en el hallazgo de huevos en heces. 1998) De los hemoparasitos solo identifica micro filarías. (Colin. 1998) La cuantificación de microfilarias no Requiere poca cantidad de muestra. tiene correlación con la cantidad de parásitos adultos que se encuentren en el paciente. (Colin. de examinación morfológica. diagnóstico de Fasciola hepática. (Colin. debe recogerse la sangre en horas (Colin. 1998) . 2010) suficientemente sensible para el Método sencillo y económico. (Colin. que se debe evaluar su uso rutinario. (UM. 2012) método de confirmación. esto significa que las microfilarias 2010) estarán presentes en la sangre Es una técnica sensitiva permitiendo periférica sólo a ciertas horas del día. tiene el inconveniente de diagnosticar la presencia del parasito en el hospedero después de 8 a 12 semanas de infección tiempo que tarda la Fasciola Hepática para convertirse en adulta y eliminar los huevos. VENTAJAS DESVENTAJAS MÉTODO DE KNOTT Un método rápido y sencillo empleada para Filarias presentan una “periodicidad” la concentración de microfilarias. 1998) frescas de la mañana o en horas Puede ser muchas más útil como un nocturnas. s. 1998) Lo más temprano que se puede descubrir microfilarias y antigenemia de parásitos del corazón es 6 o 7 meses después de infección. por lo Requiere de poco materiales. (Navone. (Villanueva. y se pude observar en una de las muestras Microfilarias. DESCRIPCIÓN DE LOS HALLAZGOS Método de Knott. Sedimento visualizado con estereoscopio. Imagen 9. RESULTADOS: En la muestra de heces de equino analizada. Observación de hacer la tinción y observar al microfilaria con objetivo 40 x. . Luego de centrifugar. no se encontraron hallazgos de huevos de Fasciola Hepática. microscopio. son observadas con el objetivo 40x. RESULTADOS: Se observaron varias muestras de sangre de canino en el laboratorio. Imagen 10. Por las características del método es recomendable repetir prueba. Método de Dennis. Imagen 8. Philadelphia.unmsm. Lima. Tegucigalpa. Consultado sept 25. Ed RG Kaminsky. (En línea). Manual de prácticas de parasitología animal. Técnicas de parasitología: Nematodos. Consultado sept 25. PER. 2012. (en línea). Murga Gutiérrez S N. 2 ed. Comparación de la técnica de Dennis. 2003. Cátedra de parasitología animal. 1998.vet.pe/bvrevistas/veterinaria/v08_n1/pdf/a11. Disponible en: http://sisbib. Buenos aires. 1998.com/main/index. PER. (En línea). Consultado sept 26. 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