Culiacán, Sinaloa, Septiembre de 2009Manual de Prácticas de Microbiología Directorio Dr. Víctor Antonio Corrales Burgueño Rector Dr. José Alfredo Leal Orduño Secretario General Dr. Juan Ignacio Velázquez Dimas Director de Servicios Escolares Dr. José de Jesús Zazueta Morales Director M en C María Luisa Torres Duarte Sub Directora Académica QFB José Luis Meza Arana Sub Director Administrativo QFB María del Refugio Gallardo Rodríguez Jefa de Carrera de QFB Dr. Misael Odín Vega García Jefe de Carrera de IBQ Dra. Ana María López Beltrán Jefe de Carrera de IQ IQ Juan Bernardo Castañeda Sánchez Coordinadora del Departamento de Servicio Social IQ Ladislao Romero Bojórquez Coordinador del Departamento de Control Escolar IQ Ignacio Calderón Ayala Coordinador del Departamento de Planeación Educativa y Tutorías M en C María del Carmen de la Cruz Otero M en C Magdalena de Jesús Uribe Beltrán Coordinación de la Elaboración de Manuales TI Oscar Francisco Martínez Contreras Asistente Técnico FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 1 Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 2 .12 2.....5 2... 69 3....................... 1..10 2............... 15 Micr-04 Preparación y uso de medios de cultivo para bacterias ...........................73 4.........................................14 Micr-01 Bioseguridad en el laboratorio de Microbiología ................. PRÁCTICAS 2........4 Actividades previas Preparación de medios de cultivo Preparación de soluciones y reactivos Figuras FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 3 ........................1 2.............................................................................................................................................9 2.. 11 Micr-03 Forma y agrupamiento de células bacterianas..............6 2........ BIBLIOGRAFÍA ......................... INTRODUCCIÓN ..................................4 2................................................... 51 Micr-11 Identificación de protozoos de vida libre ..........7 2..............2 2....Manual de Prácticas de Microbiología CONTENIDO Pág.......... 21 Micr-05 Morfología colonial bacteriana...........................................................................11 2.......... 65 Micr-14 Uso de agentes físicos y químicos en el control de Microorganismos......... 47 Micr-10 Morfología colonial de hongos................. 55 Micr-12 Identificación microscópica de protozoos intestinales ................................................... 27 Micr-06 Introducción a pruebas bioquímicas para bacterias ..................75 4......... 33 Micr-07 Identificación microscópica de algas...1 4....................... 5 Micr-02 Presencia de microorganismos en la naturaleza ........8 2.......................................................................4 2..................3 2.....................................2 4...............3 4......................13 2.................... 43 Micr-09 Preparación de Medios de cultivo para hongos .......... ANEXOS ........................................................................ 39 Micr-08 Morfología microscópica de hongos ......... 59 Micr-13 Identificación microscópica de protozoos extraintestinales .. Deberán entrenarse y desarrollarán las habilidades técnicas fundamentales para trabajar con microorganismos de los diferentes grupos que conforman el mundo microbiano. Al principio. Esto seguramente tendrá un efecto positivo en su formación académica ya que mediante la observación y experimentación complementarán y reforzarán los conocimientos adquiridos en el aula. Virología y Parasitología. las prácticas están orientadas hacia la comprensión por parte del alumno. del riesgo inherente al trabajo de laboratorio así como a los cuidados que pueden ayudarles a minimizar ese riesgo.Manual de Prácticas de Microbiología INTRODUCCIÓN El presente Manual de Microbiología tiene el objetivo primordial de contribuir a que los alumnos adquieran habilidades que los capaciten en los aspectos básicos para el trabajo en el laboratorio. es importante que los alumnos estén conscientes de la importancia del buen aprovechamiento del trabajo de laboratorio y pongan todo su empeño en la obtención y búsqueda de conocimientos a través de la realización de las prácticas de Microbiología. También comprobarán la distribución cosmopolita de los microorganismos mediante el análisis microscópico y microbiológico de muestras que son parte de nuestro entorno. Por lo tanto. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 4 . Esta materia provee los conocimientos necesarios para una mejor comprensión y aprovechamiento de las materias subsecuentes del área de Microbiología como son Bacteriología. Micología. 1. Es importante mencionar que la sangre en hemocultivo. La mayoría de las infecciones adquiridas en un laboratorio de microbiología pueden ser atribuídas a errores al realizar procedimientos rutinarios como por ejemplo: 1. 2. 2. pudiendo quedar afectados a largo plazo. Los microorganismos presentes en sangre y líquidos corporales como los virus de la hepatitis y de la inmunodeficiencia humana. se requiere FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 5 . por lo que es prioritario que se establezcan y adopten normas apropiadas básicas para el trabajo y entre el personal de laboratorio.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micr-01. Hay que tener siempre presente que los errores humanos y las prácticas inadecuadas comprometen la seguridad en el laboratorio. calor húmedo y calor seco sobre la viabilidad de los microorganismos.1 Concientizar a los alumnos de los riesgos de trabajo en un laboratorio de Microbiología. las muestras de suero en pruebas para anticuerpos. Los profesionales y estudiantes que manejan agentes infecciosos pueden infectarse y enfermar de manera mas o menos grave. Nunca deberá pipetearse con la boca.2 Establecer las medidas generales de precaución y normas básicas para la prevención de infecciones en el laboratorio. 3. constituyen un grave peligro si se tiene contacto directo con dichos líquidos.3 Valorar el efecto de la esterilización con productos químicos. Bioseguridad en el laboratorio de Microbiología 1. la homogenización y la manipulación de placas. además de establecer las medidas de emergencia para actuar en caso de accidente. Procedimientos que involucren el riesgo de ingestión.0 Objetivos 1. antígenos o agentes antimicrobianos conservan su infectividad y riesgo potencial. Procedimientos en los que se corre el riesgo de inoculación. 1. Éstos deben realizarse con cubreboca y dentro de una campana de flujo laminar en condiciones de esterilidad. sino usando una perilla o pipeta automática. Los pinchazos con material contaminado pueden evitarse teniendo un gran cuidado al aplicar una sustancia o extraer una muestra.0 Introducción El personal que trabaja en un laboratorio está sujeto a diversos riesgos ocupacionales. El material punzocortante debe desecharse en contenedores rígidos especiales para residuos biológico-infecciosos. se designen responsables de la supervisión de las diferentes secciones. Procedimientos ó técnicas que involucran el riesgo de inhalación de bacterias debido a la formación de aerosoles como la centrifugación. El uso de bata y calzado cerrado no brinda protección suficiente. 4. No comer. 3. benzal o cloro las mesas. animales y cuando abandone el laboratorio. los materiales y las centrífugas que hayan estado en contacto con el material contaminado. etc. Se prepara a partir de soluciones que se expenden en el comercio como blanqueadores de ropa. Colocar el material contaminado en un contenedor dispuesto para este propósito. libre de desechos orgánicos. benzal o cloro) al iniciar y finalizar cada sesión de trabajo. Lavarse las manos después de manipular agentes infecciosos. Desinfectar con fenol. 2. La solución de hipoclorito debe permanecer limpia. almacenar alimentos. aplicarse cosméticos. esponja o gasa humedecida con un desinfectante (fenol. fumar o aplicarse cosméticos en el área del laboratorio. material contaminado. Debe cambiarse diariamente y mantenerse tapada. 5. Para desinfectar material de laboratorio se agrega hipoclorito de sodio en un recipiente donde se depositan portaobjetos. cubreobjetos. de preferencia dentro de una campana de flujo laminar. fumar. Medidas generales de precaución 1. pipetas Pasteur. 7. Posteriormente este material se lava. beber. Evitar accidentes avisando inmediatamente cuando algo se descomponga. 2. Utilizar guantes en aquéllos procedimientos que impliquen contacto directo con material infeccioso. Todo residuo contaminado líquido o sólido deberá someterse a esterilización o incineración antes de ser desechado. se prepara a partir de solución concentrada. Efectuar cuidadosamente todos los procedimientos para reducir al mínimo la formación de aerosoles. Mantener el laboratorio limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo. 9. Verificar diariamente la temperatura de estufas y autoclaves. La superficie de trabajo individual debe descontaminarse con un papel absorbente. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 6 . Usar siempre bata. se diluye a una concentración final de 10% o bien. 4. 5. Hipoclorito de sodio. beber. pipetas graduadas y se dejan hasta el día siguiente. Es el agente químico más comúnmente empleado. Colocar por separado pipetas. se rompa o se contamine. Usar guantes para meter a esterilizar el material sucio. 7. Seguir estrictamente las reglas establecidas de control de calidad en el trabajo que se realiza. 8. portaobjetos y cubreobjetos contaminados. 3. en el área de trabajo del laboratorio. 6. 6. manos y piernas si hay riesgo de salpicaduras. No pipetear con la boca. así como el estado en general de los aparatos eléctricos que se utilizan en el laboratorio. 9.Manual de Prácticas de Microbiología indumentaria adicional para proteger rostro. 8. Normas básicas para prevenir infecciones en el laboratorio 1. Agentes desinfectantes útiles en el laboratorio Agentes químicos. Nunca comer. Debe haber una guía disponible para acciones de emergencia. muy difíciles de remover que pueden alterar los resultados en las siguientes ocasiones en que se utilice dicho material. se coloca dentro de recipientes adecuados de acero inoxidable (portapipetas o portacajas). Incubar ambos tubos (el estéril y el que no se esterilizó) a 37°C durante 24 horas . Preparar el caldo soya tripticasa y vaciarlo en tubos.Caja con cultivo bacteriano . 6. Registrar el desarrollo de los cultivos y registrar los resultados. Esterilizar un asa en la flama y estriar la tercera caja.Benzal 4.Asas microbiológicas . 3.Hisopos . 7. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 7 . 5. pero de preferencia. Calor húmedo.Tres cajas petri con medio enriquecido (Anexo MicrM-01) . sembrar en la otra caja de PDA e incubar las dos cajas a temperatura ambiente durante 24 horas. Frotar con un hisopo estéril el área desinfectada y estriar en una caja de medio enriquecido previamente rotulada. El horno es el equipo recomendado para esto. Las condiciones más comúnmente empleadas son 121°C.Dos tubos de caldo soya tripticasa (Anexo MicrM-02) .0 Material y equipo . Frotar con un hisopo estéril la zona sin desinfectar y estriar en otra caja petri.0 Técnica 1. Posteriormente esterilizar el tubo que contiene el cultivo del hongo y después de esterilizado. 4. El material puede estar envuelto en papel. 2. 3. 10. 8. Continuar con el cultivo fúngico sembrando el hongo en una caja de PDA.Dos cajas de medio PDA (Anexo MicrM-03) . Cada equipo deberá esterilizar sólo un tubo.Mecheros Bunsen . durante un mínimo de 30 minutos.Manual de Prácticas de Microbiología Agentes físicos. 9. con 15 lbs/pulg2 de presión durante 15 minutos. Incubar las cajas a 37°C durante 24 horas. Debe vigilarse que los tubos y pipetas graduadas que contengan puntas y tapones de algodón no se quemen por efecto del calor ya que se producen alquitranes y otras sustancias bactericidas. Calor seco. Escoger un área de la mesa y dividirla en dos partes iguales.Tubo con cultivo de hongos . siempre acompañados de una tira de papel testigo y con una etiqueta con la fecha y tipo de material. Lavar con agua y jabón una de las partes y luego desinfectar con benzal. Se necesita vapor a presión generado en autoclave u olla express a alta temperatura. Para esterilizar material de vidrio se utiliza calor seco a 180°C. Manual de Prácticas de Microbiología 5.0 Anexos 8.1 MicrM-01. 8.0 Bibliografía Números 3 y 5 de la sección de bibliografía de este Manual 8.2 MicrM-02.0 Conclusiones y comentarios 7.0 Resultados Area desinfectada Área sin desinfectar Asa flameada Desarrollo en medio estéril Desarrollo en medio sin esterilizar Cultivo de hongo Cultivo de hongo esterilizado 6. 8.3 MicrM-03 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 8 . 0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Area desinfectada Área sin desinfectar Asa flameada Desarrollo en medio estéril Desarrollo en medio sin esterilizar Cultivo de hongo Cultivo de hongo esterilizado 9 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS .Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Bioseguridad en el laboratorio de Microbiología Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. Manual de Prácticas de Microbiología 6.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 10 . 0 Técnica 1. sobre nuestra piel.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micr-02.). Prácticamente los encontramos en todas partes: en el agua que bebemos. fruta.Frasco gotero con suspensión de tierra de jardín .3 cubreobjetos . .Mechero Bunsen . etc. en el suelo.0 Objetivo 1.0 Material y equipo . 7.1 Demostrar la presencia de diversos tipos de microorganismos en la naturaleza.Cerillos ó encendedor . Sus hábitats naturales son extremadamente diversos. 8. y en general sobre cualquier material que les proporcione nutrientes y condiciones de humedad y temperatura favorables para su desarrollo y multiplicación. Colocar un cubreobjetos sobre la preparación. crecen mejor en esos ambientes. Observar al microscopio utilizando primero el objetivo de 10X y posteriormente el de 40X. 1. Dibujar lo observado. Tomar con el asa bacteriológica en condiciones asépticas (esterilizar el asa calentándola al rojo vivo sobre la flama del mechero antes y después de hacer la preparación) tomar una porción del desarrollo fúngico del alimento y suspenderla en la gota de agua.3 portaobjetos . los organismos superiores no pueden vivir. 6.Hisopos . 5.Asa bacteriológica . Colocar en el centro de un portaobjetos limpio una gota de agua destilada. 2. Presencia de microorganismos en la naturaleza. pan. incluso dentro de otros microorganismos. debido a las extremas condiciones físicas o químicas. Poner en el centro de un portaobjetos limpio. una gota del agua estancada. en los alimentos que ingerimos. Sin embargo. 3.Microscopio 4. en el aire que respiramos. existen microorganismos que incluso.0 Introducción Los microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. tortilla.Frasco gotero con agua estancada .Alimento contaminado por hongos (verdura. Colocar sobre la gota de agua un cubreobjetos. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 11 .Frasco gotero con agua destilada . cuidando que no se formen burbujas de aire.Papel absorbente . Repetir lo anterior para la suspensión de tierra. Hay muchos hábitats donde. 3. algunos pueden vivir en el interior de plantas y animales. 2. 5.0 Resultados AGUA ESTANCADA: 10X SUSPENSIÓN DE TIERRA: 40X 10X 40X ALIMENTO CONTAMINADO POR HONGOS: 10Xl 6. 8. Registrar las observaciones y comparar con figuras del anexo 4.0 Conclusiones y comentarios 7. 40X FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 12 . 10.4.Manual de Prácticas de Microbiología 9. Observar al microscopio primero con el objetivo de 10X y posteriormente con el de 40X.0 Bibliografía Número 10 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Anexos No aplica. 0 Resultados Dibujar las observaciones Equipo: Fecha: Carrera: AGUA ESTANCADA: 10X SUSPENSIÓN DE TIERRA: 40X 10X 40X ALIMENTO CONTAMINADO POR HONGOS: 10X 40X FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 13 .Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Distribución de los microorganismos en la naturaleza. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 14 .Manual de Prácticas de Microbiología 6. Aunque la subdivisión de bacterias según su forma y agrupamiento permite una separación burda de grandes grupos bacterianos. A la vez. como: aspectos fisiológicos y metabólicos de las bacterias. 1. considerando que todas las bacterias conocidas y descritas solo presentan dos formas básicas: cocos (ejemplo peptococcus niger) y bacilos (ejemplo Bacillus antharacis). pyogenes) y los estreptobacilos (Bacillus antharacis). 1.0 Introducción Las formas que asumen las bacterias tienen estrecha relación con las características propias de su pared celular. agrupamiento y tinción para iniciar un proceso de identificación de bacterias. 2. Dentro del gran número de especies bacterianas que existen. no hay que perder de vista que estos datos iniciales son insuficientes para definir una especie bacteriana.0 Objetivos 1. o bien agrupándose a semejanza de letras chinas (Corynebacterium diphteriae). además del apoyo de las características antigénicas y moleculares para identificar un espécimen bacteriano. los bacilos curvos como Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni y los bacilos delgados fusiformes como Fusobacterium nucleatum. No obstante que se recurre rutinariamente a la observación de forma. esporas (Clostridium tetani [tinción de Schaeffer y Fulton]). en racimos como los estafilococos (Staphylococcus aureus). por lo que se requiere sistemáticamente de información adicional. Forma y agrupamiento de células bacterianas. como demostrar por métodos de tinciones selectivas ciertas estructuras.2 Identificar la importancia de algunos métodos de coloración para definir características o propiedades bacterianas. tales como: cápsula (Haemophilus influenzae [tinción de Gin-tinta china y Anthony]). sin embargo ambas formas presentan modificaciones como los cocobacilos Brucella melitensis. esta formas pueden agruparse en dos unidades como los diplococos (Neisseria meningitidis). FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 15 . gránulos metacromáticos (Corynebacterium diphteriae [tinción de Albert]) y flagelos (Proteus mirabilis [tinción de Leisfon]).3 Realizar la tinción de Gram. 1. resalta la pobreza morfológica de éstas.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micr-03. en cuatro denominadas tétradas (Aerococcus viridans) u ocho denominadas sarcinas (Sarcina spp.1 Observar el tipo de agrupamiento en ciertos grupos bacterianos de importancia médica. los bacilos en espiral o helicoidiales como Treponema pallidum y Leptospira interrogans.) en cadenas cortas o largas como los estreptococos (Streptococcus pneumoniae y S. se recurre algunas veces a otros parámetros morfológicos que confieren más información sobre la célula bacteriana. mezclar y extender la suspensión en un área de 2 cm como máximo.Portaobjetos de 26 x 76 mm. 7 Cubrir con safranina (colorante de contraste). 4. 2 Esterilizar el asa.Marcador indeleble .4). 8 Colocar el frote sobre el puente de tinción. 7 Identificar cada preparación con un marcador indeleble. 4 Resuspender el material del asa en una gota de agua destilada.Microscopio .Aceite de inmersión .Frasco gotero con agua destilada .Puentes para tinción . durante un minuto. 3 Cubrir con lugol. ligeramente. 5 Secar la preparación al aire libre. 2 Lavar con agua corriente. 9 Secar al aire.Manual de Prácticas de Microbiología 3.Reactivos para la tinción de Gram (MicrR-03. Interpretación: Las bacterias que retienen el colorante inicial y se tiñen de color violeta son Gram positivas y las que se decoloran y adquieren la coloración roja del colorante de contraste son Gram negativas. durante un minuto. 4 Lavar con agua corriente. flameándola y enfriarla.Papel limpia lentes . ligeramente. Tinción 1 Cubrir los frotes con cristal violeta. 1 Trabajar en un área de aproximadamente 10 cm de distancia de la flama del mechero (zona considerada estéril). .Mecheros de Bunsen .0 Técnica Preparaciones de frotes para tinción.Preparaciones fijas de bacterias con diferentes formas y agrupamientos. colocada previamente en un portaobjeto.4. durante treinta segundos. 3 Tomar una pequeña porción de una colonia aislada. ligeramente. 6 Fijar la preparación por cuatro o cinco pases sobre la flama del mechero evitando el calentamiento excesivo. (Anexo 4. 10 Observar al microscopio con objetivo de 100x y comparar con figuras 1 a 8 en anexo 4.4) . 8 Lavar con agua corriente. 6 Lavar con agua corriente.0 Material y equipo Cultivos de: Escherichia coli Streptococcus spp Staphylococcus spp Bacillus spp .Asas bacteriológicas .1 a MicrR-03. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 16 . 5 Decolorar con la mezcla alcohol-acetona (hasta que no salga colorante). 2 MicrR-03.1 MicrR-03.Manual de Prácticas de Microbiología 5. Bacteria Escherichia coli Sstapphylococcus spp Streptococcus spp Bacillus subtilis Forma Agrupamiento Afinidad al Gram 6.5 Figuras 1 a 8.0 Bibliografía Números 3 y 9 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Conclusiones y comentarios 7.0 Anexos 8.3.4 MicrR-03. 8.2. 8. 8.0 Resultados Complete el cuadro con la morfología micrsoscópica observada para cada mocroorganismo. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 17 .4 8.1 8.3 MicrR-03. Manual de Prácticas de Microbiología HOJA PARA ANOTACIONES FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 18 . 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 19 . Bacteria Escherichia coli Sstapphylococcus spp Streptococcus spp Bacillus subtilis Forma Agrupamiento Afinidad al Gram 6.0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Complete el cuadro con la morfología micrsoscópica observada para cada mocroorganismo. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Forma y agrupamiento de células bacterianas. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 20 . Señalar los distintos tipos de medio de cultivo 2. Los medios de cultivo se pueden clasificar según su consistencia o su función. Los tubos del agar inclinado igual que el agar en caja de Petri.Caracterización .Mantenimiento Las bacterias se cultivan en diferentes medios para facilitar la identificación y estudiar su crecimiento y metabolismo. Realizar la transferencia aséptica de bacterias desde un tipo de medio de cultivo a otro. caldos. En cuanto a fuentes de Nitrógeno: aminoácidos y péptidos. Como fuente de carbono podemos utilizar sustancias como alcoholes. etc. pero los tubos son más fáciles de almacenar y transportar que las cajas petri. agar inclinado y agar semisólido.Selectivos e inhibitorios . proveen una superficie de crecimiento. Preparación y uso de medios de cultivo para bacterias. Los caldos de cultivos proveen concentraciones muy elevadas de bacterias en pequeños espacios y son fácilmente transportables. Por su consistencia: . Los minerales se requieren en cantidades muy pequeñas y se encuentran como contaminantes en otras sustancias. agar profundo (tubo). minerales y vitaminas.Diferenciales . hidrolizados de proteína de origen animal o vegetal como la soya. glucósidos.Aislamiento . La inoculación en el medio deben de hacerse sin introducción de otras bacterias ó contaminantes.0 Objetivo 1.0 Introducción Los medios de cultivo tienen cuatro componentes esenciales: fuentes de carbono.Enriquecimiento . nitrógeno. disacáridos. Diferenciar entre caldo de cultivo.Sólidos Por su función: .Semisólidos .Líquidos (caldo nutritivo) . glicoles.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micr-04. malta o levadura. 3. Los tubos de agar inclinado contienen medio de cultivo que solidificó en posición inclinada. trisacáridos. 2. 1. por ejemplo. pentosas. agar semisólido. En el caso de las vitaminas que requieren las bacterias para su desarrollo pertenecen al grupo B y se le agregan al medio de cultivo como mezcla en forma de extracto de levadura o en forma individual. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 21 . hexosas. ácidos e hidroxiácidos. agar en caja. Con la aguja de inoculación picar una colonia de S.Asa de inoculación . 3.3) . lactis e inocular un tubo de agar nutritivo semisólido introduciendo la aguja hasta la mitad del medio y retirarla siguiendo el mismo trayecto de la punción.0 Material y equipo .7 % de agar en vez del usual 1.Encendedor . Esterilizar el asa en la flama del mechero hasta el rojo vivo y dejarla enfriar. Flamear la boca del tubo y taparlo.Aguja de inoculación . 3. destapar el caldo nutritivo cerca de la flama del mechero e inocularlo. Nota. agitando el asa dentro del medio. dando una apariencia de árbol de navidad invertido. 4. Flamear la boca del tubo y taparlo. vulgaris * * * 6. epidermidis y estriar la superficie de un tubo de agar inclinado teniendo cuidado de no rasgar el agar. Tomar otra asada de S. 5.Marcador indeleble 4.2 ) .5 – 0. aeruginosa * * * P. 2. El agar semisólido vertical que contiene 0.3 tubos con agar nutritivo inclinado (Anexo MicrM-04. Trabajar con sólo un cultivo bacteriano a la vez. Flamear el asa.Manual de Prácticas de Microbiología En el caso del agar profundo se deja solidificar el agar en posición vertical. Una bacteria móvil crecerá alejándose del punto de inoculación. Rotular todos los tubos e incubar a 37°C durante 24 horas.0 Técnica 1. Flamear la boca del tubo y taparlo.Caldo de Staphylococcus epidermidis . epidermidis. puede utilizarse para determinar la movilidad. epidermidis * * * P. 7.Incubadora . agar inclinado y agar semisólido. y generalmente se usa para el crecimiento de bacterias que necesitan menos oxígeno que el que está presente en la superficie del medio. Medio de cultivo Caldo nutritivo Agar inclinado Agar semisólido S.Gradilla .Tubo inclinado con Proteus vulgaris . aeruginosa y Proteus vulgaris en otro caldo nutritivo. Registrar el desarrollo en cada medio de cultivo. Inocular de igual manera P.Mecheros Bunsen .Caldo de Pseudomonas aeruginosa . Tomar una asada de S.5 %.1) . FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 22 . Flamear el asa.3 tubos con caldo nutritivo (Anexo MicrM-04. Flamear el asa. para prevenir cualquier equivocación o contaminación cruzada.3 tubos con agar nutritivo semisólido ( Anexo MicrM-04. 0 Conclusiones y comentarios 7.0 Anexos 8. aeruginosa P. epidermidis P.2 8.3 8.1 MicrM-04.Manual de Prácticas de Microbiología 5. Medio de cultivo Caldo nutritivo Agar inclinado Agar semisólido S.0 Bibliografía Números 8 y 9 de la sección de bibliografía de este Manual 8.0 Resultado Registre el desarrollo de cada cultivo.4 Figuras 9 a 12 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 23 .3 MicrM-04.2 MicrM-04. vulgaris 6.1 8. Manual de Prácticas de Microbiología HOJA PARA ANOTACIONES FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 24 . 0 Resultados Registre el desarrollo de cada cultivo.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Preparación y uso de medios de cultivo para bacterias. Medio de cultivo Caldo nutritivo Agar inclinado Agar semisólido S. epidermidis Equipo: Fecha: Carrera: P.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 25 . Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. vulgaris 6. aeruginosa P. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 26 . negro. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 27 . Las colonias puntiformes constituidas por bacterias de desarrollo lento. producción de pigmentos y de hemólisis mediante examen visual. monticular. convexa. amarillo. En algunos casos se utiliza una lupa o microscopio de disección para la mejor identificación de colonias minúsculas o inmaduras. Tamaño: Diámetro de la colonia en mm. forma.0 Material y equipo Placas con cultivos de: Streptococcus β-hemolítico Pseudomonas fluorescens Proteus spp Lupa 4. Margen (borde de la colonia): entero. 5. constituyen a menudo cultivos mixtos y puede haber una gran variedad de colonias de diversos tipos.0 Objetivo 1. Diferenciar colonias de bacterias aisladas teniendo en cuenta la morfología colonial de los cultivos: tamaño. Elevación: Colonia plana. de modo que la luz sea reflejada desde diversos ángulos. y así observar mejor sus características morfológicas en el agar. etc. Color de la colonia: blanco. umbilicada. Morfología colonial bacteriana.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-05. 2. pueden pasar inadvertidas entre las de mayor tamaño principalmente si hay una tendencia a la dispersión del desarrollo por toda la superficie de la placa.0 Introducción La caracterización macroscópica de las colonias se lleva a cabo mediante el examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar. rizado. fila-mentosa. 4. 1. Forma: puntiformes. filamentoso. Se debe estudiar con cuidado la placa debido a que las bacterias aisladas inicialmente a partir de muestras. aserrado. ondulado. irregular. color.0 Técnica En cultivos bacterianos de 24 horas y con la ayuda de una lupa analizar las siguientes características: 1. umbeliforme. naranja. lobulado. 3. Durante el examen de las placas se debe de inclinar en distintas direcciones con iluminación brillante directa. 3. circular. elevada. fusiforme. rizoide. ante. 2. debido a la lisis de los eritrocitos. Olor.beta: Zona de aclaración completa de la sangre alrededor de la colonia. no hay lisis de los eritrocitos. translúcida.alfa: aclaramiento parcial de la sangre alrededor de las colonias. membranosa. Superficie (luz reflejada): brillante. Streptomyces spp. Proteus spp.Pigmentos no difusibles. . Clostridium spp. etc.gamma: No hay cambio en el medio que rodea a la colonia.Pigmentos fluorocrómicos (fluoresceína). puede haber doble zona de hemólisis: se observa halo de lisis completa inmediatamente alrededor de las colonias. con la segunda zona de hemólisis parcial ubicada en la periferia. mate. transparente. confinados a las colonias. Densidad (luz transmitida): opaca. etc.Pigmentos hidrosolubles que colorean el medio.Manual de Prácticas de Microbiología 6. 9. . nauseabundo FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 28 . Producción de pigmentos en el medio de agar: . 11. Consistencia de la colonia: butirosa. 8. Hemólisis en agar sangre (Se pueden distinguir tres tipo de hemólisis). 7. .Piocianinas. . viscosa. Olor Zumo de uvas Chocolate quemado Sótano enmohecido Fétido. En algunos casos las bacterias producen olores característicos como los que se anotan a continuación: Bacteria Pseudomonas spp. . con coloración verde del medio. . 10. Además. quebradiza. Bacteria Pseudomonas spp Olor Morfología colonial Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: Pcción.0 Resultados Comparar las observaciones con anexo 4.0 Anexos 8.Manual de Prácticas de Microbiología 5.0 Bibliografía Números 3 y 9 de la sección de bibliografía de este Manual 8. figuras 13 a 16 y anotar los resultados en la siguiente tabla. de Tipo de pigmentos hemólisis Proteus spp Streptococcus β-hemolítico 6.1 Figuras 13 a 16 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 29 .4.0 Conclusiones y comentarios 7. Manual de Prácticas de Microbiología HOJA PARA ANOTACIONES FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 30 . 0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Registre sus observaciones en la tabla Bacteria Olor Morfología colonial Pseudomonas spp Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: Pcción. de pigmentos Tipo de hemólisis Proteus spp Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: Streptococcus β-hemolítico Tamaño (mm): Forma: Elevación: Margen: Color: Consistencia: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 31 . Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Morfología colonial bacteriana. 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 32 .Manual de Prácticas de Microbiología 6. Los sustratos de esas enzimas se incorporan al medio de cultivo junto con un indicador capaz de detectar la utilización del sustrato o la presencia de productos metabólicos específicos.Cinco tubos de medio MIO (Anexo MicrM-06.Cinco tubos de rojo de fenol con sacarosa ( Anexo MicrM-06.Cultivo de Pseudomonas spp. 1.2) . En la fermentación el ácido pirúvico resultante de la glicólisis finalmente deriva en una variedad de ácidos orgánicos como ácido acético. los hidratos de carbono que son capaces de utilizar y los tipos y cantidades de ácidos mixtos que producen. .Cultivo de Klebsiella pneumoniae en TSA (Anexo MicrM-01.Cinco tubos de agar citrato de Simmon’s (Anexo MicrM-06.0 Objetivos 1.Aguja de inoculación (asa recta) .Hisopos estériles FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 33 .2) . Introducción a pruebas bioquímicas para bacterias.4) .0 Material y equipo . La presencia de esta enzima indica que la bacteria es capaz de llevar a cabo un metabolismo oxidativo donde se transfieren los hidrógenos del ácido pirúvico al ciclo de Krebs y el aceptor electrónico final es el oxígeno molecular y se forma agua. 2.Discos para oxidasa . Otra característica metabólica importante que se usa para diferenciar bacterias es la actividad de citocromooxidasa. fórmico y otros. 3.3) . propiónico.1) . podemos diferenciar bacterias basándonos en sus reacciones de fermentación. La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción en donde un sustrato orgánico sirve como aceptor electrónico de los electrones. succínico.2) . Así por ejemplo.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micr-06.2) .Cultivo de Citrobacter freundii en TSA (Anexo MicrM-01.0 Introducción El proceso de identificación de bacterias está basado principalmente en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes enzimas. es decir.Cultivo de Escherichia coli en TSA ( Anexo MicrM-01. Como consecuencia.1 Llevar a cabo pruebas bioquímicas sencillas para detectar el tipo de metabolismo bacteriano. en lugar del oxígeno molecular.Cinco tubos de agar hierro y lisina (LIA) ( Anexo MicrM-06. Estas enzimas dirigen el metabolismo de las bacterias por distintas vías que pueden detectarse con medios especiales de cultivo en el laboratorio. todo organismo que muestre actividad de citocromooxidasa se excluye de la familia Enterobacteriaceae. 5. De cada cultivo bacteriano tomar suficiente cantidad con el hisopo estéril y frotarla sobre un disco para oxidasa. Registrar los resultados al término de la incubación y comparar con figuras 17 a 21 en anexo 4. 3. Incubar todos los tubos a 37º C durante 24 horas. Enfriar.0 Técnica 1. 6. 7. 8. Frotar contra el vidrio y enderezar el tubo para que el inóculo quede sumergido en el medio. b) En el LIA hacer una punción casi hasta la base del tubo y al retirar el asa estriar la superficie inclinada. Picar una colonia aislada de E. coli .0 Resultados Bacteria Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Citrobacter freundii Pseudomonas spp Fermentación de sacarosa Prueba de oxidasa Descarboxilación Lisina / ornitina FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 34 . Sembrar como se describe a continuación: a) En el medio citrato de Simmon’s hacer una estría sobre el medio inclinado. Flamear el asa hasta el rojo vivo.Manual de Prácticas de Microbiología 4. 5. c) en el medio MIO inocular por punción hasta el fondo del tubo. Realizar el procedimiento para Pseudomonas spp. 2. Trabajar siempre junto al mechero. 4. Esperar 10 segundos y observar si aparece coloración. Flamear el tubo de medio fresco y destapar.4. cerca del caldo. Realizar el procedimiento para Citrobacter freundii en todos los medios.4. 9. Registrar los resultados para cada bacteria y comparar con figura en anexo 4. en todos los medios. Repetir el procedimiento para Klebsiella pneumoniae en todos los medios. d) En el medio rojo de fenol con sacarosa inclinar el tubo y poner la punta del asa con el inóculo en el vidrio. 6 Figuras 17 a 21.2 MicrM-06.2 8. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 35 . 8.3 8.4 MicrM-06.2 8.0 Anexos 8.5 MicrM-06.4 8.3 MicrM-06.1 MicrM-01.Manual de Prácticas de Microbiología 6.1 8.0 Bibliografía Número 9 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Conclusiones y comentarios 7. Manual de Prácticas de Microbiología HOJA PARA ANOTACIONES FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 36 . Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Introducción a pruebas bioquímicas para bacterias.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 37 .0 Resultados Bacteria Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Citrobacter freundii Pseudomonas spp Fermentación de sacarosa Equipo: Fecha: Carrera: Prueba de oxidasa Descarboxilación Lisina / ornitina 6. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 38 . La mayoría son organismos acuáticos y microscópicos. móviles o inmóviles. Algunas otras son pluricelulares muy grandes y de morfología compleja. mientras que las algas rojas tapizantes son propias del medio marino. Están muy extendidas en la naturaleza encontrándose en casi todos los ambientes donde hay luz solar. Muchas especies de algas existen como células aisladas que pueden ser esféricas. La flora del mar o fitoplancton está constituída por diminutas algas en suspensión y constituye el inicio de la mayoría de las cadenas alimentarias acuáticas ya que son fuente importante de alimento para otros organismos incluyendo las ballenas. Otras especies de algas forman colonias pluricelulares de células idénticas al quedar unidas después de la división. Las algas azuladas y verde azuladas tapizantes se encuentran tanto en agua dulce como en agua salada y están representadas por algas cianofitas como Anabaena. Volvox y Scenedesmus. Chlorella. Identificación microscópica de Algas.Agua de acuario . 2. incluso en las regiones polares y en las cumbres de las montañas coloreando el paisaje con los pigmentos de sus células.Cubreobjetos de 22 x22 mm . Estas algas son las responsables del agua verde.Agua “verde” . Oedogonium. 1.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-07.0 Introducción Las algas son organismos aerobios fotosintéticos. En agua dulce podemos encontrar algas unicelulares representadas por clorofitas como Chlamydomona.0 Material y equipo . Vaucheria y Spirogyra que recubren los objetos y plantas con filamentos de color verde. mientras que otras colonias se componen de diferentes clases de células con funciones especializadas.Portaobjetos de 26 x 76 mm . 3. aunque existen algas cuyo tamaño alcanza varios metros de longitud. Oscilatoria y Ribularia.Pipeta Pasteur con bulbo . Contienen clorofila y otros pigmentos como carotenoides y ficobilinas.1 Observar la morfología de algas en muestras ambientales.Microscopio óptico FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 39 . Hay también algas verdes filamentosas como Cladophora.0 Objetivo 1. Las diatomeas abundan tanto en agua dulce y salada. ovaladas o en forma de porra. cubrir con un cubreobjetos y observar con el objetivo de 10X y 40S.0 Resultados Agua “verde” Agua de acuario 6. Registrar sus observaciones y comparar con figuras 22 a 26 en anexo 4.0 Técnica 1. Con la pipeta Pasteur colocar una gota de cada muestra en un portaobjeto. 8.Manual de Prácticas de Microbiología 4.4.0 Conclusiones y comentarios 7.0 Anexos 8. 2.1 Figuras 22 a 26 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 40 .0 Bibliografía Números 6 y 10 de la sección de bibliografía de este Manual. 5. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 41 .0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Agua “verde” Agua de acuario 6.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Identificación microscópica de Algas. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 42 . La forma. Son unicelulares 4.0 Introducción Las características más importantes que se utilizan para la identificación de hongos son la morfología de sus esporas sexuales y asexuales así como de sus cuerpos fructíferos (o estructuras portadoras de cuerpos fructíferos) y hasta cierto grado. Basidiosporas. 5. Esporangiconidios. Se forman dentro de una estructura femenina denominada oogonio. orden o el género al que pertenece un determinado hongo. color. Los cuerpos fructíferos asexuales se denominan acérvulo y picnidio. Esporas unicelulares que nacen de una estructura con forma de porra o basidio. así como la forma. 3. Son esporas grandes.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-08. Se forman cuando los extremos de dos hifas sexualmente compatibles se fusionan entre sí. tamaño y manera en que se disponen las esporas sobre los esporóforos o cuerpos fructíferos. Son menos abundantes que las esporas asexuales. Blastoconidios. 2. las características de su micelio. Ascosporas.0 Objetivos 1. Son las yemas que se forman sobre las células de levaduras. Zigosporas. 3. la clase. Existen muchas clases de esporas asexuales: 1. Se forman a partir de células de las hifas vegetativas. los sexuales se conocen como peritecio y apotecio. Son esporas unicelulares de paredes gruesas. Morfología microscópica de hongos. Tanto las esporas asexuales como las sexuales pueden estar rodeadas de una estructura protectora denominada cuerpo fructífero. si se tiene experiencia en taxonomía de hongos. Los hongos también forman esporas sexuales mediante la fusión de dos núcleos. Artroconidios. Estos órganos se examinan directamente al microscopio compuesto. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 43 .1 Hacer preparaciones para observar la estructura microscópica del micelio. Oosporas. Dentro de las esporas sexuales se encuentran: 1. color y tamaño de éstos últimos son características que sugieren. Se forman al desprenderse las células de la hifa. Conidios. 1. Se producen dentro de un saco denominado asca 2. conidios y cuerpos fructíferos de algunos hongos contaminantes de alimentos. 4. 2. Existen conidios pequeños unicelulares. Los conidios grandes pluricelulares se denominan macroconidios. Se forman dentro de sacos o esporangios que están en el extremo de hifas denominadas esporangióforo. Clamidoconidios. Manual de Prácticas de Microbiología 3. En otro portaobjetos repetir el procedimiento con azul de lactofenol . 8.1 MicR-08 8.0 Material y equipo. 2.Naranja con hongos . Cubrir con un cubreobjeto.Pan con hongos . . 4. Comprar las observaciones con figuras 27 a 35 en anexo 4.2 Figuras 27 a 35.Tortillas con hongos . Con el asa micológica tomar un poco de micelio de la tortilla y depositarlo sobre la gota de solución salina.85% (Anexo MicR-08) . Igualmente hacer dos preparaciones con el hongo del pan y la naranja.Cubreobjetos de 22 x 22 mm . Observar las preparaciones al microscopio con objetivos de 10X y 40X.Microscopio .Solución salina al 0.0 Anexos 8. 3. 5.Mechero de Bunsen 4.Asas micológica . FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 44 .Azul de lactofenol .0 Técnica 1. 6 y 10 de la sección de bibliografía de este Manual.Portaobjetos de 26x 76 mm .0 Resultados Dibuje sus observaciones Hongo en tortilla 6.0 Bibliografía Números 1.0 Conclusiones y comentarios Hongo en pan Hongo en naranja 7. Tomar un portaobjetos y depositar una gota de solución salina.4. 5. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 45 .Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Morfología microscópica de hongos.0 Resultados Dibuje sus observaciones Equipo: Fecha: Carrera: Hongo en tortilla 40X Hongo en pan 40X Hongo en naranja 40X 6. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 46 . . Algunas especies pueden utilizar compuestos de nitrógeno como las sales de amonio. 2. Cuando la papa esté cocida se agrega el agua de cocimiento a la mezcla del paso número 2..Extracto de carne .200g Dextrosa.........Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-09.. Se pone a cocer la papa en 500 ml de agua destilada... 3...0 Técnica 1.......18g Agua purificada.Dextrosa . 4.. 5.... Preparación de medios de cultivo para hongos. Los hongos filamentosos y las levaduras pueden crecer en un sustrato o medio con concentraciones de azúcares que inhiben a la mayoría de las bacterias.... FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 47 .. son heterótrofos...Probeta ..Agua destilada . Se disuelve la dextrosa y el agar en un poco de agua.. razón por la que los medios de cultivo para hongos usualmente contienen peptona..Balanza analítica .10g Agar.. Pesar Papa ..1 Preparar un medio de cultivo para hongos a base de papa. Todos los hongos pueden utilizar el nitrógeno orgánico.....1 papa . Se afora con agua destilada a 1000 mL. filtrando con gasa..... Los hongos son capaces de utilizar una gran variedad de materiales para su nutrición.... que es un producto a base de proteína hidrolizada........Matraces ..Gasa ... 1. Esterilizar la mezcla durante 15 minutos a 15 lb/plg2...Bactopetona ... Al contrario de lo que sucede con algunas bacterias no pueden utilizar compuestos de carbono inorgánicos como el dióxido de carbono.Vaso de precipitado .Embudo 4....0 Material y equipo ..100ml 2. El carbono debe proceder de una fuente orgánica como la glucosa..Olla de presión ....0 Objetivo 1.. 3.Alcohol ....... sin embargo..0 Introducción Los hongos pueden soportar un ambiente desfavorable mejor que la mayoría de los microorganismos.... 8.0 Anexos FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 48 .0 Resultados Medio Medio PDA 6.Manual de Prácticas de Microbiología 5.0 Bibliografía Número 1 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Conclusiones y comentarios Color Solidificación ( buena o mala) 7. Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Medios de cultivo para hongos. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Medio PDA Color Solidificación (buena o mala) 6.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 49 Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 50 Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-10. Morfología colonial de hongos. 1.0 Objetivo 1.1 Observación de la morfología colonial de algunos hongos 2.0 Introducción Los hongos son pequeños organismos productores de esporas, generalmente microscópicos, eucarióticos, ramificados y a menudo filamentosos que carecen de clorofila. La mayoría de las 100 000 especies de hongos conocidas son estrictamente saprofitas y viven sobre la materia orgánica muerta descomponiéndola. Alrededor de 50 especies de hongos producen enfermedades en el hombre y casi el mismo número ocasiona enfermedades en los animales. Los hongos crecen en dos formas básicas: levaduras y mohos. El crecimiento del hongo en forma de moho produce colonias filamentosas multicelulares, que constan de túbulos cilíndricos ramificados llamados hifas; cada hifa puede tener un grosor uniforme o bien, terminar en porciones más delgadas o más anchas. Además, las hifas pueden ser septadas (con divisiones o tabiques) o cenocíticas (contínuas, sin ninguna división). El micelio puede clasificarse como reproductor (aéreo) o como nutritivo. El primero es aquél cuyas hifas se elevan por encima del sustrato donde crece, dando lugar a la formación de esporas. El segundo es el que penetra en el medio o sustrato y su función es de nutrición (vegetativo). El conjunto de micelio y diferentes estructuras de reproducción constituye la colonia del hongo, la cual presenta un crecimiento radial. 3.0 Material y equipo - Placas con cultivos de hongos - Microscopio estereoscópico - Lupa - Asas micológicas 4.0 Técnica 1. Observar a simple vista las colonias de hongos por el frente y reverso de la caja 2. Colocar al caja en el microscopio estereoscópico y observar las colonias de hongos 3. Registrar las observaciones y comparar con figura 36 en anexo 4.4. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 51 0 Resultados Origen del hongo Color Frente Reverso Aspecto Presencia de Otras micelio Observaciones 6. 7 y 10 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Anexos FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 52 .0 Bibliografía Números 1. 8.Manual de Prácticas de Microbiología 5.0 Conclusiones y comentarios 7. Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Morfología colonial de hongos. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Origen del hongo Color Frente Reverso Aspecto Presencia de Otras micelio Observaciones 6.0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 53 Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 54 Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-11. Protozoos de vida libre. 1.0 Objetivo 1.1 Identificar protozoos presentes en agua de río y otros especimenes ambientales. 2.0 Introducción Los organismos eucariotes se han clasificado dentro de cuatro reinos: Animalia, Fungi, Plantae y Protista. Los tres primeros son grupos monofiléticos, bien definidos; en cambio, el Reino Protista contiene un extraordinario número de organismos más relacionados con miembros de otros reinos que con otros protistas. Los protozoos son un eslabón muy importante en la cadena alimentaria en ambientes acuáticos. El zooplancton está constituido por protozoos que se alimentan del fitoplancton. Los protozoos a su vez, son alimento de otros organismos marinos mayores. En tierras húmedas pueden vivir como saprófitos y alimentarse de bacterias. Existen reportes de enfermedades causadas por algunos protozoos de vida libre con distribución mundial, principalmente en EUA, Australia, Nueva Zelanda y Checoeslovaquia; en menor proporción en India, Africa, Perú y México. Como ejemplo, Naegleria que es un protozoo termofílico, se encuentra idealmente entre 30 45 °C, mientras que Acanthamoeba entre 25 - 35 °C, por lo que se localizan en climas tropicales y subtropicales, en presencia de materia órganica, durante todo el año. Estos protozoos proliferan en zonas geográficas templadas durante el verano. Se han detectado en redes públicas de agua, albercas, estanques, lagos, ríos, aguas termales, lodos, suelos desnudos y encharcados, canales artificiales, aguas de desecho industrial, redes de agua potable, agua embotellada, unidades dentales, de diálisis, fisioterapia, y aire acondicionado, así como en materia fecal de diversos animales. 3.0 Material y equipo - Cultivo de paja - Agua de río - Portaobjetos de 26 x 36 mm - Cubreobjetos de 22 x 22 mm - Pipetas Pasteur - Bulbos de caucho - Microscopio FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 55 4.0 Bibliografía Números 4 y 6 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Técnica 1.Manual de Prácticas de Microbiología 4.0 Anexos 8. 6.0 Conclusiones y comentarios 7. Depositarla sobre un portaobjeto. 8. Registrar observaciones y comparar con figuras 37 a 38 en anexo 4. 5.0 Resultados Cultivo de Paja Agua de Río 10x 40x 6. Con una pipeta Pasteur tomar agua de río.1 Figuras 37 a 38 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 56 . Repetir el procedimiento con cultivo de paja.4. 5. Colocarle un cubreobjeto. 3. 2. Observar al microscopio con el objetivo de 10x y 40x. Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Aislamiento e identificación de Enterobacterias y Pseudomonas. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Resultados Dibuje sus observaciones Fecha: Carrera: Equipo: Cultivo de paja Agua de río 10X 6.0 Conclusiones y comentarios 40X ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 57 . Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 58 . Aplicadores de madera FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 59 .1 Observar protozoos intestinales pertenecientes a las principales clases para identificar sus principales características morfológicas. Los protozoarios muestran una considerable variedad de formas y tamaños. El estadío de desarrollo de un protozoo parásito que se transmite de un huésped a otro es el quiste resistente.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-12. 2. La mayoría de las estructuras celulares se encuentran en el endoplasma. el ectoplasma.Entamoeba histolytica . Algunos protozoos pueden formar quistes.Preparaciones de: . que se distingue del citoplasma más interno o endoplasma.Entamoeba coli . el agotamiento de los alimentos o la acidez gástrica cuando están dentro del huésped. Sin embargo. 3. muchos protozoos poseen múltiples núcleos durante la mayor parte de su ciclo biológico. Muchos poseen una capa externa de citoplasma.Chilomastix mesnilii .2) .0 Objetivo 1. Una célula típica de un protozoo está rodeada por una membrana citoplasmática.Solución salina .0 Introducción Los protozoos son protistas eucarióticos que existen como células aisladas y que pueden distinguirse de otros protistas eucarióticos por su capacidad de desplazarse durante algún estadío de su ciclo biológico y por su falta de pared celular. De esta manera las formas vegetativas o trofozoitos se protegen de la desecación. Algunos son alargados o esféricos.Cubreobjetos de 22 x 22 mm . otros son ovalados y otros presentan diferentes aspectos morfológicos en los diferentes estadíos de su ciclo biológico. Cada célula de protozoo tiene al menos un núcleo. Identificación microscópica de protozoos intestinales.Portaobjetos de 26 x 76 mm .Giardia spp .0 Material y equipo . 1. Algunos protozoos son parásitos del hombre y le causan enfermedades graves.Lugol parasitológico (Anexo MicrR-03.Materia fecal . Con un aplicador de madera tomar una pequeña muestra de heces. Repetir el procedimiento Lugol. no un frote.0 Técnica 1. figuras 39 a 43. 3. 5.4. 7. Registrar sus observaciones y compararlas con anexo 4.4. 9. Observar cada una de las preparaciones disponibles con objetivos de 10X y 40X. Colocar en un portaobjetos una gota de solución salina isotónica. 5. 6.0 Resultados Observación de preparaciones Observación de materia fecal Solución salina Lugol FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 60 . 4. Mezclarla con la solución salina isotónica procurando hacer una suspensión. Quitar de la suspensión fibras y otros elementos sólidos.Manual de Prácticas de Microbiología 4. Cubrir con un cubreobjetos y observar con objetivos de 10X y 40X. 8. Registrar sus observaciones y comparar con figuras de anexo 4. 2. 1 MicrR-03.0 Anexos 8.0 Bibliografía Número 10 de la sección de bibliografía de este Manual. 8.2 Figuras 39 a 43.Manual de Prácticas de Microbiología 6.2 8. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 61 .0 Conclusiones y comentarios 7. Manual de Prácticas de Microbiología HOJA PARA ANOTACIONES FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 62 . Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Identificación microscópica de protozoos intestinales.0 Resultados Observación de preparaciones Equipo: Fecha: Carrera: Observación de materia fecal Solución salina Lugol FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 63 . Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 64 .Manual de Prácticas de Microbiología 6. Plasmodium spp . 3.Microscopio óptico . 2. mientras que la leishmaniasis abarca lesiones de la piel u órganos viscerales dependiendo de la especie.1 Observar las características morfológicas de algunos protozoos extraintestinales de interés médico. existe otro grupo. 1. En el grupo de los esporozoos se encuentran parásitos con ciclos de vida complicados. los hemoflagelados que son formas de la sangre o los tejidos. Comparar con figuras 44 y 45 en anexo 4. Estos protozoos son transmitidos a las personas por insectos chupadores de sangre causando infecciones graves.0 Introducción Dentro de los protozoos flagelados. en un huésped diferente. La toxoplasmosis y la malaria son las principales enfermedades humanas causadas por esporozoos. Los esporozoos más importantes son los causantes de la malaria y pertenecen al género Plasmodium. Identificación microscópica de protozoos extraintestinales. ya que algunos estadíos pueden existir en un huésped y otros.0 Técnica 1. Observar detenidamente al microscopio con los objetivos de 40X y 100X cada una de las laminillas disponibles y registrar sus observaciones.0 Material y equipo . además de los intestinales.Tripanosoma cruzi .Leishmania spp .4. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 65 . La tripanosomiasis comprende la enfermedad africana del sueño.0 Objetivo 1.Papel limpialentes .Preparaciones de: .Aceite de inmersión 4.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-13. 2. En este padecimiento los esporozoitos infectan el hígado y los glóbulos rojos. Los géneros de estos organismos son Trypanosoma y Leishmania. 0 Anexos 8. 8. Trypanosoma cruzi Plasmodium spp.1 Figuras 44 a 45 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 66 .0 Bibliografía Número 10 de la sección de bibliografía de este Manual.0 Resultados Leishmania spp.0 Conclusiones y comentarios 7. 6.Manual de Prácticas de Microbiología 5. 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 67 .Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Identificación microscópica de protozoos extraintestinales.0 Resultados Equipo: Fecha: Carrera: Leishmania spp. Trypanosoma cruzi Plasmodium spp. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5. 6. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 68 . radiación ionizante y filtración.Hisopos estériles . 7. la segunda por 10 segundos y la tercera por 60 segundos. El control mediante agentes químicos se refiere al uso de desinfectantes. 5. Repetir los pasos 1-3 con las cuatro cajas restantes.Campana o lámpara con luz ultravioleta . 1.5 cajas de Agar soya tripticaseína (Anexo MicrM-01.1 Llevar a cabo un método físico para control de microorganismos. Utilizar la quinta caja como control no irradiado e incubarla con las otras cajas.0 Técnica 1. 8. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 69 . radiación UV. c.0 Material y equipo Sesión 1 . desecación. 3. Remover el exceso de líquido presionando el hisopo contra la pared del tubo. Tomar una caja de TSA y estriar la superficie del agar hasta cubrirla totalmente. Introducir un hisopo estéril en el cultivo. Remover la tapa de cada una de las 3 cajas y colocar un círculo de cartoncillo con un círculo interior recortado de modo que por ahí pase la luz UV. presión osmótica.0 Objetivo 1. antisépticos.2) . 2. Exponer la primera caja durante 3 segundos. Tapar de nuevo las cajas e incubar a temperatura ambiente durante 24 horas. Uso de agentes físicos en el control de microorganismos. b. antibióticos y otras sustancias químicas.0 Introducción El control de microorganismos es esencial en la prevención de enfermedades así como para retardar la descomposición y deterioro de productos alimenticios. 6. Los agentes físicos incluyen métodos de control como el uso de altas o bajas temperaturas.Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas Micro-14. 3.Marcador 4. 4. dejar la tapa puesta y colocar el cartoncillo sobre ella.Tijeras . 2. Exponer tres de las cajas a luz UV como se indica: a.Cartoncillo . Exponerla a luz UV durante 60 segundos e incubarla a temperatura ambiente durante 24 horas. coli . Los microorganismos se controlan mediante agentes físicos y químicos. En la cuarta caja.Cultivo en caldo de E. Control no irradiado Exposición UV 3 segundos Exposición UV 10 segundos Exposición UV 60 segundos Exposición UV 60 segundos con tapa 6.0 Conclusiones y comentarios 7.0 Anexos 8.0 Bibliografía Número 8 de la sección de bibliografía de este Manual.2 FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 70 . 8.1 MicrM-01.Manual de Prácticas de Microbiología 5.0 Resultados Dibuje los resultados en las cinco cajas del experimento con luz UV. Manual de Prácticas de Microbiología Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Ciencias Químico Biológicas REPORTE DE LA PRÁCTICA Nombre de la práctica: Uso de agentes físicos y químicos en el control de microorganismos. Nombre del alumno: Grupo: Grado: 5.0 Resultados Dibuje los resultados en las cinco cajas del experimento con luz UV. Fecha: Carrera: Equipo: Control no irradiado Exposición UV 3 segundos Exposición UV 10 segundos Exposición UV 60 segundos Exposición UV 60 segundos con tapa FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 71 . 0 Conclusiones y comentarios ¿Alcanzaron los objetivos? Comentarios: Sí No Nombre del Instructor: Firma Sello FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 72 .Manual de Prácticas de Microbiología 6. .S. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 73 . G. Schuster. El manual moderno. Trad.. Ilian 4.1994. E. UNAM.S.. Microbiology Laboratory Manual.. Atlas de parasitología on line. Giono. Escobar. ed.M. Ed. Ed.A.W. Clinical Microbiology Reviews. Elementos de microbiología. Kaiser. 8. Melnick and Adelberg. 15: 342-354. México 3a. Dowell.C.G. Pelczar M. Vol. Freggiaro L. Koneman. Panamericana. M. Facultad de Medicina. 1998. México. Botánica I. A. 1997. 15. E. Diagnóstico de laboratorio de infecciones gastrointestinales. Frederick L.W. Texto y atlas color. 3. 9. D. V. Instituto Geográfico de Agostini. México Mc Graw-Hill. Catonsville Campus. Diagnóstico microbiológico.Manual de Prácticas de Microbiología BIBLIOGRAFÍA 1. 2. Meerot y B.. Stephen. 1991. México. The Community College of Baltimore County. 2001. Fitopatología. J.S. 7. 6. del ingles por N. Valdés. Ciencias de la naturaleza. J. Chan. 2002. Herbert and C. W. 4. E. Fascículo II Bacteriología. México. México 17 ed. Cultivation of Pathogenic and Opportunistic FreeLiving Amebas. Trad.L. E. R. España. Planeta. 10.1998. Washington. Limusa. Vol. Roel. Microbiología médica.N.E. Janda. Foro bioquímico. Agrios. 1996. Jawetz. C. Manuales departamentales. 2001. American Society for Microbiology. G. 5. Ed. Naget Arsof. Manual de Prácticas de Microbiología FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 74 . en términos bioquímicos? Explique. Micro-05 1.Manual de Prácticas de Microbiología ANEXOS 4. A qué se debe la amplia distribución de los microorganismos en la naturaleza? 2. ¿Qué importancia tiene la correcta preparación de un medio de cultivo? 3. Mencione que debe hacer al inspeccionar una placa para que no pasen inadvertidas las colonias de bacterias de desarrollo lento. 3. 2. Mencione qué indumentaria sería la adecuada para trabajar con muestras obtenidas de pacientes con ántrax en un laboratorio de microbiología. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 75 . 2. Mencione las importancias de la implementación de medidas de bioseguridad en un laboratorio de microbiología 2. ¿Qué propiedades de un microorganismo determinan su carácter útil o perjudicial? Micro-03 4. 5.1 Actividades previas a las prácticas: Micro-01 1. Mencione las características nutritivas que debe contener un medio de cultivo 2. Mencione cuándo utilizaría un caldo. ¿Cómo se transfierien los microorganismos de un lugar a otro? 3. Mencione tres bacterias fermentativas 4. Explique en qué consiste el proceso de descarboxilación de ornitina y lisina y qué enzimas intervienen. Describa la utilidad diagnóstica de la reacción a la tinción Gram de las bacterias. ¿Cuáles son las implicaciones de que una bacteria realice metabolismo oxidativo? 3. Explique la causa por la que las células Gram positivas retienen el colorante y las Gram negativas lo pierden durante el proceso de decoloración 6. Mencione tres acciones incorrectas que podrían conducir a un accidente grae en el laboratorio cuando se trabaja con sangre contaminada por VIH Micro-02 1. Micro-04 1. Micro-06 1. Enuncie el fundamento de la tinción de Gram. Explique la utilidad y/o importancia del estudio de la morfología colonial bacteriana en el diagnostico clínico. un agar inclinado y un agar semisólido. Si una bacteria es capaz de fermentar azúcares ¿qué tipo de metabolismo realiza? y ¿qué significa esto. ¿Cómo se clasifican las algas?. Esquematiza cada grupo 2.Manual de Prácticas de Microbiología Micro-07 1. ¿Mencione las diferencias que existen entre el quiste de Giardia lamblia y el de Entamoeba coli? 3. Explique por qué la luz UV es útil solamente en el control de contaminantes superficiales y mencione varias aplicaciones prácticas. Describa específicamente cómo la luz UV mata a los microorganismos 3. ¿En qué ambientes se encuentran este tipo de microorganismos? 3. Investigar la clasificación de los protozoarios. ¿Qué diferencias existen en la morfología microscópica de los hongos filamentosos (mohos) y los levaduriformes (levaduras)? 2. ¿Cuál es la importancia de este grupo de microorganismos? 3. ¿En qué grupos o “subphyla” se encuentran los protozoarios que causan enfermedades extraintestinales en el hombre? 2. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 76 . Mencione las características más importantes del ciclo de vida de estos protozoarios Micro-14 1. Micro-11 1. ¿Qué tipos de locomoción presentan los protozoarios? Esquematiza cada grupo 2. ¿Cómo se transmiten estas enfermedades? 3. Explique cómo la longitud de onda y el tiempo de exposición influyen en el efecto bactericida de luz ultravioleta. 2. ¿Qué medios de cultivo se utilizan para el cultivo y aislamiento de algas? Micro-08 1. Micro-10 1. ¿Por qué se utiliza papa. ¿Qué condiciones se necesitan para el crecimiento saprofito de un microorganismo? Micro-12 1. ¿En qué tipo de muestras podemos ver los trofozoitos? 4. ¿Cuál es la utilidad de la solución salina y el lugol en la observación de amibas? Micro-13 1. qué sustancias o nutrientes cree que aporta el medio? Explique. Mencione las diferencias entre la morfología colonial bacteriana y la morfología colonial de hongos. ¿Qué tipo de medio es el medio PDA? 3. 2. Mencione tres medios de uso general en el laboratorio 2. ¿Cuáles son las condiciones óptimas para el crecimiento de hongos y levaduras? Micro-09 1. Mencione cinco factores que pueden afectar la acción antimicrobiana de desinfectantes y antisépticos 8.1 Medio enriquecido MicrM-01.Calentar agitando frecuentemente durante 1 minuto hasta disolver .Suspender 40 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada . .5 MicrM-04.Suspender 24. Explique por qué los resultados para una prueba in vitro para evaluar agentes químicos no necesariamente funcionará “ in vivo” 4.Disolver 10 g en un litro de agua destilada . 5. desinfectante y antiséptico 6.Dejar solidificar en posición inclinada MicrM-04.Disolver 39 g en un litro de agua destilada .Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos .2 Preparación de medios de cultivo MicrM-01.3 Medio PDA .5 cm.Distribuir en tubos de 13 x 100 . Mencione por qué los agentes químicos no son efectivos para esterilizar 7.3 Agar nutritivo semisólido .Enfriar y vaciar en placas petri MicrM-01.Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos .2 Medio soya tripticaseína (TSA) .pH final: 3.2 g del medio deshidratado en 1 litro de agua destilada .1 Caldo nutritivo . FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 77 .Esterilizar en autoclave entre 118 y 121 °C durante 15 minutos .Dejar enfriar los tubos en posición inclinada de manera que el medio de cultivo en el fondo del tubo alcance una profundidad de 1 a 1.Distribuir en volúmenes de 3 mL en tubos de 13 x 100 mm. . Investigue de qué manera la radiación ionizante mata a los microorganismos y mencione algunas aplicaciones prácticas.Disolver 20 g en un litro de agua destilada . Defina los siguientes términos desinfección.Distribuir en tubos de 13 x 100 .Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos MicrM-04.Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121 °C .Calentar agitando frecuentemente hasta ebullición y completa disolución.2 Agar nutritivo inclinado .Disolver 8 g en un litro de agua destilada .Distribuir en tubos de 13 x 100 .Manual de Prácticas de Microbiología 4. .Dejar solidificar en posición vertical MicrM-06. Describa los modos de acción de desinfectantes y antiséptico 9.1 Agar citrato de Simmon’s . ........ Adicionar agua destilada hasta completar el volumen de 300 mL MicrR-03..................Manual de Prácticas de Microbiología MicrM-06. Adicionar los cristales de yodo a la solución de yoduro de potasio y agitar hasta que el yodo se disuelva.....80 mL Disolver el cristal violeta en el alcohol etílico al 95% y filtrar en papel filtro.....2 g Alcohol etílico al 95%.........Calentar hasta ebullición ..Dejar solidificar en posición vertical.Suspender 33 g del medio deshidratado en 1 litro de agua destilada ............ . No sobrecalentar 4...4 Rojo de fenol con sacarosa .Esterilizar a 121°C durante 12 minutos .5 mL en tubos de 13 x 100 mm...2 g Yodo (cristales)..Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos........2 Agar hierro y lisina .....Envasar volúmenes de 2..........Esterilizar de 116-118 ºC durante 15 minutos..8 g Agua destilada.0. en tubos con tapón de rosca de 13 x 100 ... MicrM-06........0 g Agua destilada....Distribuir volúmenes de 2 .20 mL Oxalato de amonio... Mezclar estas soluciones en partes iguales 24 horas antes de su uso MicrR-03...5 +/.Dejar solidificar en posición inclinada y cerrar con cuidado las tapas para evitar pérdida de agua por evaporación pH final: 6...3 Alcohol acetona Alcohol etílico al 95% Acetona Mezclar el alcohol etílico al 95% y acetona en partes iguales FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 78 . Disolver el oxalato de amonio en el agua destilada....1 Cristal violeta Cristal violeta.....3 Preparación de soluciones y reactivos MicrR-03.0 g de agar) ..2........Distribuir el medio en volúmenes de 3 mL..............0.300 mL Disolver el yoduro de potasio (KI) en el agua destilada.. ....1... agregar 0......Suspender y disolver completamente 20 g del polvo en un litro de agua destilada (en caso de que el medio sea para cultivo de anaerobios.....3 Medio MIO .2 Solución de lugol Yoduro de potasio..........5 mL en tubos de ensaye de 13x 100 .Calentar cuidadosamente agitando con frecuencia hasta hervir por 1 minuto .5 a1.........Disolver 31 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada ....2 MicrM-06....... .. Esta solución constituye la solución stock. En el momento de usarla se diluyen 10 mL de esa solución en 100 mL de agua destilada....5 g Alcohol etílico al 95%....... MicrR-08 Solución salina al 0.85 g Disolver el cloruro de sodio en 100 mL de agua destilada....................85% Cloruro de sodio.......................1000 mL Disolver la safranina en el alcohol etílico al 95%.......0...2............. FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 79 ..4 Safranina Safranina.Manual de Prácticas de Microbiología MicrR-03......... 6. 8 Reacción Gram negativa FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 80 . 2 Bacilos Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Anexo Imágenes Fig. 3. Estreptobacilos Fig. Estafilococos Fig. 4 Estreptococos Fig. 1 Cocos Fig. 7 Reacción Gram positiva Fig. Etreptococos Fig. 5. 13 Morfología colonial bacteriana FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 81 . 11 Medios de cultivo semisólidos Fig. 12 Medios de cultivo en placa Fig. 10 Medios de cultivo inclinados Fig. 9 Medios de cultivo líquidos Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 15 Hemólisis alfa Fig. 17 Citrato de Simmon’s Fig. 19 Medio MIO Fig. 20 Rojo de fenol con sacarosa Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 14 Hemólisis Beta Fig. 16 Hemólisis Gamma Fig. 21 Prueba de oxidasa FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 82 . 18 Agar hierro y lisina Fig. 22 Euglenófitos y crisófitos pertenecientes a distintos órdenes FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 83 .Manual de Prácticas de Microbiología Fig. Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 23 Pirrófitos pertenecientes a órdenes y clases distintas FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 84 . FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 85 . Fig. 24 Diseños aerodinámicos de Diatomeas.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 26 Phacus longicauda euglenófito de agua dulce. Fig. 25 Porphyrium spp. alga roja de agua dulce. 28 Cuerpos fructíferos de Penicillium spp Fig. 29 Esporangios. esporangióforos y esporangiosporas FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 86 .Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 27 Cuerpos fructífero de Aspergillus spp Fig. 32 Micrografía electrónica de barrido de esporas de Penicillium spp. 34 Unión de hifas para formar Zigosporas Fig. 33 Micrografía electrónica de barrido de Aspergillus spp. 35 Micrografía electrónica de barrido de un esporangio de Rhizopus spp FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 87 . 31 Esporas de Fusarium spp Fig. Fig. 30 Esporas de Alternaria spp Fig. Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. Fig. Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 38 Paramecium FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 88 . 36 Morfología colonial de hongos ( cultivos de Penicillium spp). 37 Euplotes spp. 42 Quiste de Entamoeba coli FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 89 . 40 Trofozoitos de Entamoeba histolytica Fig. 41 Quiste de Entamoeba histolytica Fig. 39 Trofozoito de Giardia duodenalis Fig.Manual de Prácticas de Microbiología Fig. Manual de Prácticas de Microbiología Fig. 45 Trypanosoma cruzi FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS / UAS 90 . 44 Plasmodium spp en frote sanguíneo Fig. 43 Chilomastix mesnili Fig.