Manual de Laboratorio de BacteriologíaPROLOGO En México y en los países denominados del 3er. Mundo, la mortalidad por enfermedades infecciosas alcanzan cifras alarmantes, comparables a las que presentaban los países desarrollados a fines del siglo XIX y principios de este. Los agentes etiológicos son bacterias, virus, parásitos y hongos, y aunque todos ellos muy importantes, son sin embargo las bacterias las causantes del mayor número de plagas que han diezmado a la humanidad, tanto en pandemias, epidemias como en enfermedades establecidas en forma endémica. La especificidad de los diagnósticos clínico y radiológico es difícil y es el bacteriólogo el que generalmente lo determina con precisión. Lo anterior habla de por sí, de la necesidad de contar con el profesional especializado en manejar eficiente y eficazmente este diagnóstico, es decir el Químico Farmacéutico Biólogo. La Facultad de Q.F.B. prepara a estos profesionales cuyo título es Licenciado en Químico Farmacéutico Biólogo, los cuales cursan la materia denominada Bacteriología. El curriculum de ésta tiene un programa amplio sobre el tema, que considera prácticamente todas las bacterias de interés médico. Identificar este extenso y variado número de microorganismos, resulta complicado y difícil sin contar con las técnicas: metódicas, específicas y accesibles. Este conjunto de características deben estar al alcance de los estudiantes. El Manual se ha diseñado, siguiendo el orden sistemático del programa de la experiencia educativa del laboratorio de bacteriología. Es de esperar que este material llenara la demanda de los jóvenes en formación y aún, que será de gran utilidad a los egresados, y a todos aquellos que se dedican al diagnóstico bacterio1ógico. 1 Manual de Laboratorio de Bacteriología REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA 1. No se permitirá la entrada al laboratorio al alumno que llegue 15 minutos después de la hora de entrada. 2. No se permitirá la entrada al laboratorio a ningún alumno si no trae puesta y abrochada debidamente la bata. 3. Todos los objetos personales deberán ser guardados en sus gavetas de las mesas de trabajo. 4. El alumno deberá estar provisto del material personal asignado o de lo contrario no podrá permanecer en el laboratorio. 5. Queda ESTRICTAMENTE PROHIBIDO comer, beber, fumar y en general, llevarse cosas a la boca dentro del laboratorio. 6. Debe evitarse entablar conversaciones, así como comunicarse a voces con los vecinos de otras mesas. 7. Todo el material no contaminado tal como: algodón, papeles, cerillos, etc., deben ser depositados en los botes de basura destinados para este uso. No se debe tirar basura al suelo ni guardarla en los cajones, ni tirarla en los vertederos. 8. Debe limpiarse con solución de fenol o benzal, la mesa de trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR la práctica. 9. En caso de romper o derramar material contaminado debe verterse fenol o benzal sobre él y déjelo cuando menos10 minutos antes de limpiar. AVISE AL PROFESOR. 10. El material que se rompa o extravíe debe ser pagado en la siguiente práctica en el cubiculo de preparadores. 11. Incubar el material el tiempo que se indique, en caso contrario, éste será desechado. 12. No almacenar material en el refrigerador. 13. Al finalizar cada práctica, guardar el material empleado debidamente separado: material sucio para esterilizar, quitarle las etiquetas; material sucio para lavar, colocarlo en otro sitio; reactivos debidamente ordenados y cerrados. 14. Los bancos deben dejarse en su sitio. 15. Los informes de las prácticas deberán ser revisados por el profesor y ayudarán a mejorar o a bajar la calificación al final del curso. 16. Colocar los microscopios limpios (sobretodo la lente de inmersión en su lugar correspondiente). Informar al Profesor si observa alguna descompostura o desajuste. 2 Manual de Laboratorio de Bacteriología MATERIAL Y EQUIPO NECESARIO PARA EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA INCUBADORA REFRIGERADOR BAÑOS MARIA ELECTRICO HORNO DE SECADO AUTOCLAVE MICROSCOPIO COMPUESTO MICROSCOPIO DE INMUNOFLUORESCENCIA CONTADOR DE COLONIAS BALANZA ANALITICA BALANZA GRANATARIA PARRILLA DE CALENTAMIENTO AGUA GAS ASA DE PLATINO GUANTES DE ASBESTO MECHERO MATRACES E.M. 1000, 500, 250 TUBOS DE ENSAYO DE 13X100 CON TAPON DE ROSCA TUBOS DE ENSAYO DE 15X150 CON TAPON DE ROSCA PIPETAS DE 10, 5, 1 ml CAJAS PETRI DESECHABLES UNA Y DOS Y TRES DIVISIONES PORTA OBJETOS CUBREOBJETOS GRADILLA JERINGA DE 10 ml LIGADURA ALCOHOL DESINFECTANTE BENZAL 3 ....................................................................................................... 9 Cultivo de expectoración..........................................................33 ........................................................................................ 6 CULTIVO DE EXUDADO OTICO.........................................18 Práctica No...................................... 2 Tinciones de Gram....19 Práctica No........................................34 Unidad V Infecciones de las vias respiratorias inferiores................29 ...................................................24 Unidad IV Infecciones del ojo.......................... Ziehl-Neelsen.... ..............7 Objetivos Particulares......21 Practica No.................15 UNIDAD III....35 Práctica No.........................14 Práctica No....................................................................6 OBJETIVOS.....................................................Manual de Laboratorio de Bacteriología INDICE INDICE....................................27 PRACTICA No............................................................................................11 TINCIÓN DE ZHIEL NEELSEN...7 Unidad I Aspectos administrativos y legislativos relacionados con el laboratorio clínico ................... 11 UROCULTIVO.......................................................................................................................................4 INTRODUCCION................................51 Determinación de Helicobacter pylori (Método de ELISA)............................................................42 ........................8 Unidad II anatomia y fisiología de las bacterias.................................................................................................................44 Unidad VII ENFERMEDADES DE TRANSMISIÓN SEXUAL..........................................53 4 .................................................33 .................51 Práctica No............... 10 Mycoplasma pneumoniae... INFECCIONES DE LAS VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES..........................................43 Unidad V1...............9 Práctica No.......................28 Práctica No..44 PRACTICA No..48 Unidad VIII INFECCIONES DEL TRACTO GASTROINTESTINAL........................................................................................................................................................................................ 8 Determinación de Chlamydia trachomatis............................................................................................................................. INFECCIONES DE LAS VÍAS URINARIAS..........................46 “CULTIVO DE EXUDADO CERVICO-VAGINAL EXUDADO URETRAL”.................................................36 PRACTICA No................................................................................................................................................................................. 7 “CULTIVO DE EXUDADO CONJUNTIVAL”................................................ 4 CULTIVO DE EXUDADO FARÍNGEO........................................................................................................................ 5 Detección directa de antígenos microbianos..................................................................................................................................................................................................................................... 3 Clasificación y Preparación de medios de cultivos........................... 14 Coprocultivo..............38 .......................................................................................... ......................... 17 HEMOCULTIVO.................................65 Sistema de Evaluación...................................66 BIBLIOGRAFIA ..................................56 Unidad X sistema hematopoyetico............ Para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos..91 5 .......................................................................................................... 18 Reacciones febriles.....................................................................56 Práctica No..................................................................70 NORMA Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997.60 PRÁCTICA NO..............67 APENDICE A: MEDIOS DE CULTIVOS..................64 Unidad XI Control de Calidad en el Laboratorio de bacteriologia ............................. 16 Cultivo de líquido cefalorraquídeo...................................................................................................................Manual de Laboratorio de Bacteriología Unidad IX INFECCIONES DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL..................................................................................................................................................................61 Práctica No....... se puede decir sin exagerar. de ofrecer un texto de consulta. de ahí la importancia de seguir incorporando el estudio del laboratorio de Bacteriología como una materia formal en el plan de estudios de la carrera de Químico Farmacéutico Biólogo. puesto que no es la idea. La cantidad de información que se publica diariamente. se está incrementando en forma vertiginosa.Manual de Laboratorio de Bacteriología INTRODUCCION El presente Manual constituye una guía para que el alumno conozca los elementos temáticos en que se sustenta el curso de Laboratorio de Bacteriología. con el propósito de que el alumno tenga una visión general del panorama que ofrece cada uno de los temas. 6 . Ahora no existe especialidad o actividad médica en la que la participación de bacteriología no esté presente. La Bacteriología es una de las disciplinas que más ha apoyado el área diagnóstico en los últimos tiempos. sin tener la pretensión. aprecie la profundidad y los alcances del conocimiento que ira adquiriendo a lo largo del periodo escolar. En este Manual se ha añadido una breve introducción a cada tema. Este Manual incluye un apéndice el cual esta constituido por técnicas representativas de algunos medios de cultivo. autocrítica. asegurando la calidad de los resultados obtenidos mediante la operación de un programa de control de calidad. además de que desarrolle las actitudes que le permitan el trabajo responsable en equipo y la adecuada atención al paciente. compromiso y responsabilidad social.Manual de Laboratorio de Bacteriología OBJETIVOS Objetivo general Que el alumno adquiera los conocimientos y desarrolle las habilidades necesarias para su incorporación al trabajo en el área de bacteriología de un laboratorio clínico. realice e interprete adecuadamente las pruebas básicas del laboratorio de bacteriología Aplique adecuadamente los programas de control de calidad en el laboratorio clínico Maneje la legislación básica relacionada con el laboratorio clínico Aplique los aspectos administrativos básicos del laboratorio clínico Desarrolle aprendizaje autónomo. 7 . trabajo en equipo. Objetivos Particulares Que el alumno: • • • • • Seleccione. trabajo de indagación. así como actitudes profesionales de apertura. PRÁCTICA NO. transporte. Para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos. desarrollando actitudes de compromiso con la preservación de la salud y del medio ambiente. 2. envasado. Hacer una presentación. 1 Medidas de seguridad y manejo de residuos biológico-infecciosos 1. Hacer un análisis de las medidas de seguridad en el laboratorio asi como de la normatividad vigente. Revizar e investigar la normatividad NOM-087-ECOL-1995. 3. recolección. de acuerdo a la normatividad vigente.Manual de Laboratorio de Bacteriología Unidad I Aspectos administrativos y legislativos relacionados con el laboratorio clínico OBJETIVO: Que el alumno ponga en práctica las principales medidas de seguridad que se requieren en un laboratorio de bacteriología así como el manejo adecuado de los residuos biológicos infecciosos. 8 . NORMA Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997. la cual se encuentra en el apéndice 3. Que establece los requisitos para la separación. tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológico-infecciosos. almacenamiento. Las cubiertas que rodean la célula bacteriana se han identificado por medio de técnicas de tinción en microscopía óptica y electrónica. En contraste en las Gram negativas la fina (y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extracción por el solvente del complejo. Las principales cubiertas son: cápsulas y limos. y técnicas de aislamiento y caracterización bioquímica de los componentes celulares.Manual de Laboratorio de Bacteriología Unidad II anatomia y fisiología de las bacterias OBJETIVO: Que el alumno adquiera habilidad en la realización de los principales métodos de tinción y preparación de medios de cultivo que se utilizan para identificar la morfología y fisiología de las bacterias. Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared celular de peptidoglicanos que les confieren su forma característica y les provee de protección mecánica. los mesosomas (invaginación de la membrana plasmática). Tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas captan la misma cantidad de cristal violeta (CV) e iodo (I). 9 . Unos pocos organismos son Gram-variables. la pared celular de las bacterias Gram-positivas. la membrana plasmática. la pared celular de las bacterias Gramnegativas. La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la Tinción de Gram (1884). La propiedad de teñirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram negativas) por esta coloración es un criterio de clasificación importante correlacionable con otras propiedades bacterianas. El complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de la célula Gram positiva por la deshidratación y la reducción del tamaño de los poros de la pared resultante del proceso de lavado con solvente. y que la pared celular de las bacterias Gram positivas es la que impide la extracción del colorante. Corroborando esta suposición se observa que cuando Bacillus subtilis emerge de su espora su pared celular esta "inmadura" y se comporta como Gram negativa. El mismo. son una característica general de todas las eubacterias. Las arqueobacterias no poseen mureína. Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.Manual de Laboratorio de Bacteriología Avala lo antedicho el hecho que. 10 . Esto indica que el colorante es fijado a nivel del protoplasto. y las enzimas que intervienen en su síntesis. el peptidoglicano mureína. La pared bacteriana: Estructura Química El esqueleto de la pared celular bacteriana está constituido por un heteropolímero. si después de su tinción se tratan con lisozima bacterias Gram positivas. se ve que los protoplastos siguen teñidos. pero pierden el colorante si se los trata con alcohol. TINCIÓN DE GRAM Gram. 2 Tinciones de Gram. En consecuencia aplicando éste método de coloración diferencial los gérmenes que contienen esos elementos químicos quedan coloreados violeta y se denominan Gram positivos. Ziehl-Neelsen. aquellos que los contienen en pequeña cantidad se decoloran y para observarlos es necesario teñirlos nuevamente. 11 . alcohol acetona). para este fin se utilizan colorantes como la fucsina y la safranina y se denominan Gram negativos. en su membrana dispuestos estructuralmente en forma muy diferente a la de otros (Gram negativos) y forman con los colorantes derivados de la rosanilina (violeta de genciana. descubrió en 1884. un compuesto que resiste la acción de decolorantes (alcohol absoluto. bacteriológo dinamarqués. cristal violeta) más el yodo. peptidoglicano.Manual de Laboratorio de Bacteriología PRÁCTICA NO. que algunos gérmenes (Gram positivos) contienen ciertos elementos químicos en gran cantidad. 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología MATERIAL: Porta objetos Asa de platino Cultivo de Staphylococcus aureus y epidermides. 9. o una pequeña alicuota del cultivo liquido. 7. Enjuagar al chorro de agua. 6. Enjuagar al chorro de agua. Coli Equipo de tinción de Gram TECNICA: 1. Y fijarlo por calor. 2. Decolorar con alcohol-cetona durante 5 segundos. Se realiza una extensión en un portaobjetos limpio y desengrasado. Agregar la solución de YodoLugo. 12 . Enjuagar al chorro de agua. Colocar en una varilla de tinción. 5. y agregar Cristal Violeta y dejar actuar por 1 a 2 minutos. Dejar secar el frotis. Se toma una asada de la colonia. Y dejar actuar por 1 a 2 minutos. 3. E. o colocar el frotis en un papel absorbente. Observar al microscopio en objetivo de 100x. 10. Agregar safranina y dejar por 15 a 20 segundos.Manual de Laboratorio de Bacteriología 8. Dejar secar al aire libre. 12. Agregar una gota de aceite de inmersión. 13 . 11. resisten el tratamiento orgánico y se verán teñidas de rosa.Manual de Laboratorio de Bacteriología TINCIÓN DE ZHIEL NEELSEN La tinción de Ziehl-Neelsen demuestra la capacidad que tienen algunas bacterias teñidas de resistir a la decoloración por ácidos y alcoholes. Teñir con azul de metileno 1 min. o bien en plancha electrica). la preparación no debe quedar seca en ningún momento. 9. Colorante de contraste: azul de metileno. 3. Las bacterias ácido-alcohol resistentes. 10. Cubrir completamente con carbolfucsina la preparación. Esta propiedad de algunas micobacterias y actinomicetos se correlaciona con el alto contenido en lípidos de su envoltura celular.) 6. 1. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. Además. 3. Anotar las diferencias existentes entre los dos grupos bacterianos. 2. sin que hierva la muestra durante 5 min. Lavar con agua para detener la decoloración. estos grupos poseen unos lípidos característicos llamados ácidos micólicos que aumentan este carácter hidrófobo. 8. Lavar con agua el exceso de colorante. Decolorar con la solución ácido-alcohol hasta que la muestra adopte un color rosa claro (unos 30 seg. Nota: añadir más carbolfucsina conforme ésta se evapora. tras la unión de la fucsina. que confiere un ambiente muy hidrófobo. Mezcla de fucsina-fenol: capaz de teñir las células en caliente. Prepara un frotis con la muestra. 4. 5. Decolorante orgánico: mezcla de ácido y alcohol. El fenol facilita la penetración de la fucsina en la envoltura celular. Examinar al microscopio. MATERIAL: Porta objetos Asa de platino Muestra de Espectoración Equipo de tinción de Ziehl-Neelsen La tinción Ziehl-Neelsen requiere tres colorantes: 1. Secar la preparación. También puede utilizarse una parrilla electrica. El resto de las bacterias se decolorarán y se contrastarán con el azul de metileno. 2. 7. 14 . Calentar la preparación cuidadosamente en un mechero Bunsen (puede ser a baño maría. o calentar en vapores de baño maría. Manual de Laboratorio de Bacteriología PRÁCTICA NO. 3 Clasificación y Preparación de medios de cultivos OBJETIVO: Identificar los medios de cultivo empleados en los laboratorios de microbiología y Clasificarlos de acuerdo a su contenido y función en medios de enriquecimiento, selectivos y diferenciales. GENERALIDADES: Actualmente casi todos los gérmenes patógenos, con pocas excepciones, pueden cultivarse en medios artificiales fuera de su hábitat natural siempre y cuando estos proporcionen al microorganismo los requerimientos nutricionales. La calidad de los medios nutritivos puede aumentarse con otras sustancias promotoras del crecimiento como sangre, extractos, etc., empleadas en bacterias heterótrofas comúnmente en laboratorio. Dependiendo especifícamele del microorganismo que se pretende aislar. Existen muchos medios de cultivo elaborados para propósitos especiales que facilitan la identificación, aislamiento y cuantificación de ciertos tipos de bacterias. Para conocer estas necesidades, el bacteriólogo cuenta con numerosos medios de cultivo, a los cuales de acuerdo con su función o aplicación, se les puede clasificar de la manera siguiente: MEDIOS ENRIQUECIDOS: La adición de componentes como sangre, suero o extractos de tejidos animales y plantas al caldo nutritivo o agar, les proporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio pueda soportar el crecimiento de los heterótrofos exigentes. Ejemplos de éste tipo de medios son: Caldo Todd Hewirt, caldo de tetrationato de sodio, agua peptonada, caldo selenito de sodio, etc. MEDIOS SELECTIVOS.- La adición del agar nutritivo de ciertas sustancias químicas específicas, no permitirá el desarrollo de un grupo de bacterias sin inhibir al mismo tiempo el crecimiento de otros grupos. Por ejemplo, el cristal violeta en concentraciones 15 Manual de Laboratorio de Bacteriología específicas previene el crecimiento de bacterias Gram positivas sin afectar el desarrollo de bacterias Gram negativas. De manera similar, un medio en el cual la única fuente de carbono sea la maltosa, permite seleccionar las bacterias que pueden asimilarlas. En principio, se puede seleccionar las bacterias que sólo se desarrollan en presencia de compuestos orgánicos poco comunes, agregando dichos compuestos al medio de cultivo y omitiendo todos los demás compuestos del carbono. Algunos ejemplos son: Agar sangre, para aislar y diferenciar los organismos Gram positivos; agar Nickerson, selectivo para el cultivo de Cándida albicans; agar MacConkey, selectivo para salmonella, shigella y bacterias coniformes; agar VoguelJohnson, selectivo para identificar microorganismos como estafilococos manitolpositivos; etc. MEDIOS DIFERENCIALES.- La adición de ciertos reactivos o sustancias químicas a los medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano o de cambios, después de la siembra e incubación del medio, lo cual permite al observador diferenciar distintos tipos de bacterias. por ejemplo. si se siembra una mezcla de bacteria en un medio agar-sangre, algunas de las bacterias pueden hemolizar (destruir) los glóbulos rojos mientras que otras no lo hacen. Cuando crece una zona clara al rededor de la colonia bacteriana es !imitativo de que ocurre la hemólisis. Así es posible distinguir entre bacterias hemoliticas y no hemoliticas que proliferan en el mismo medio. De hecho, el medio agar-sangre sirve simultáneamente como medio de enriquecimiento y diferencial. Entre este tipo de medios tenemos: Agar hierro y triple azúcar, para diferenciar Escherichia, klebsiella, enterobacter, salmonella y varios de acuerdo con la capacidad del organismo de atacar un hidrato de carbono con producción o no de gases y SH2; agar citrato de simons, ayuda a la diferenciación entre bacterias entericas Gram negativas de acuerdo con su capacidad de emplear citrato como única fuente de carbono, como escherichia. klebsiella, serratia, citrobacter y otros; agar urea de christensen, para diferenciar microorganismos de acuerdo con su capacidad de hidrolizar la urea formando dos moléculas de amoníaco por acción de la ureasa, bacilos entéricos. 16 Manual de Laboratorio de Bacteriología También existen medios de cultivo que son ligeramente selectivos como EMB. XLD. Y otros más que son medios de transporte, como por ejemplo el medio de transporte de Stuart. Los materiales en su forma natural, no presentan ningún problema para tomarlos como medio de cultivo, ya que simplemente se depositan dentro de envases previamente esterilizados. Los medios que se preparan del tipo agar o caldo nutritivo, se hacen mezclando productos deshidratados que contienen todos los ingredientes. En el comercio podemos encontrar prácticamente todos los medios de cultivo en su forma deshidratada. En la preparación de medios de cultivo se deben seguir los siguientes pasos: -Cada ingrediente o el medio deshidratado completo, se debe disolver un volumen adecuado de agua destilada. - Se determinará el pH del medio y se ajustará de ser necesario. Lo anterior se realiza por medio de indicadores o potenciómetros. - El medio se pondrá en recipientes adecuados, como tubos, matraces, botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, plásticos o cubiertas de metal. - Los medios generalmente se esterilizan en autoclave. Los medios de cultivo utilizados con más frecuencia en el Laboratorio de Bacteriología, inc1uyendo sus ingredientes y forma de preparación se muestran en el Apéndice. Preparar los medios que su maestro le indique. 17 si el GABHS está presente. La faringitis y la amigdalitis son infecciones de la garganta que causan inflamación. Si es negativo. Haemophilus influenzae del tipo B. INFECCIONES DE LAS VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES Existen muchas infecciones de las vías respiratorias altas que requieren el cuidado clínico de un médico o de otro profesional del cuidado para la salud. parte de la muestra de la garganta se utilizará para realizar un cultivo de faringe. a los dos o tres días. Si el resultado es positivo. Neisseria gonorrhoeae. Se pueden realizar los llamados "quick test" que detectan rápidamente los estreptococos. 18 . se denomina faringitis. Micoplasma. Si afecta principalmente a las amígdalas. se denomina amigdalitis. En la mayoría de los casos. Si afecta principalmente a la garganta. Algunas de ellas son las siguientes: Las bacterias. es importante saber si la infección de garganta es debida al GABHS. Sin embargo. Su médico decidirá el plan del tratamiento dependiendo de los resultados. El cultivo identificará. Estreptococos beta-hemolíticos del grupo A (su sigla en inglés es GABHS).Manual de Laboratorio de Bacteriología UNIDAD III. se pueden empezar a tomar inmediatamente antibióticos contra el GABHS. Existen muchas causas de las infecciones de la garganta. resulta difícil distinguir entre una infección vírica y una infección por estreptococos sólo con el examen físico. ya que en este caso es necesario un tratamiento con antibióticos para evitar las complicaciones que puede producir dicha bacteria. Neisseria meningitidis o Corynebacterium diphteriae. o inmunodifusión. y G. o bien. la difteria la tosferina y la candidiasis. 4 CULTIVO DE EXUDADO FARÍNGEO OBJETIVO: El alumno analizará la flora normal y patógena de las vías respiratorias altas a partir de una muestra de exudado faríngeo. En ésta práctica destaca la importancia que tiene el estudio de Streptococcus pyogenes en encuestas epidemiologicas para prevenir la fiebre reumática y la glomerulonefritis. Streptococus pneumoniae. Cándida aIbicans. Entre los patógenos se encuentran: Estreptococos β-hemolíticos del grupo A y ocasionalmente de los grupos B. y otras especies de Mycobacterium. Mycoplasma pneumoniae. por aglutinación en placa o factor de opacidad. Fusobacterium Fusiforme. 19 . FUNDAMENTO: El análisis del exudado faríngeo se basa en la diferenciación entre las bacterias patógenas y flora normal de las vías respiratorias del individuo. fiebre reumática y glomerulonefritis hemorrágica aguda y en la detección de portadores de Estreptococos β-hemoliticos. entre ellas están lasa estreptocócicas. Staphylococcus aureus. Pseudomonas aeruginosa Histoplasma capsulatum y Coccidioides inmitis. en cuyo caso se debe tipificar tanto el grupo como los tipos M y T ya sea por precipitación en capilar. Neisseria meningitidis. así como para establecer el foco de infecciones de enfermedades como: fiebre escarlatina.Manual de Laboratorio de Bacteriología PRÁCTICA NO. así como en el análisis microscópico de las colonias. Bordetella pertussis. Mycobacterium tuberculosis. Borrelia Vicentii. rara vez. Corynebacterium diphtheriae. GENERALIDADES: El estudio de exudado faríngeo y nasofaríngeo es importante para el diagnóstico de ciertas infecciones. Klebsiella pneumoniae. apoyándose en medios de cultivo selectivos y de enriquecimiento. C. Haemophylus influenzae capsulado. Después de la incubación. 2. 1 Caldo Todd Hewitt. agar Voguel Johnson. lavar una vez con solución salina estéril...Resembrar a partir del caldo de Todd Hewitt en cajas de agar sangre. 6. 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología MATERIAL: Cajas Petri con Agar sangre. Puente de coloración. se debe hacer sensibilidad a los antibióticos. 2. escogiendo preferentemente las zonas inflamadas o membranosas.por medio de un abatelengua exponer los órganos orofaríngeos y con hisopo estéril raspar ligeramente las amígdalas y faringe. incubar a 37°C durante 2 horas. se puede utilizar la inmunofluorescencia como sigue: a) Se descarga el hisopo con el exudado en 1 ml de caldo Todd Hewitt. con movimientos semi circulares de derecha a izquierda.Exudado faringeo.. agar EMB.Exudado nasofaríngeo.Si se interesa identificar Estreptococos β-hemolíticos del grupo A en forma rápida. 5. Separar el sobrenadante mezclar perfectamente el paquete celular con la solución salina residual durante 2 o 3 mino 20 .. tocar la pared posterior de la nasofaringe haciendo girar el hisopo. Cajas Petri con medio EMB Discos de Bacitracina. Si se aísla un microorganismo patógeno.Con un hisopo de alambre largo a través de las fosas nasales.Teñir el frotis con Gram. el otro debe introducirse en d caldo de Todd Hewitt para resiembra. 3. PROCEDIMIENTO: 1.. Cajas petri con Agar Chocolate. Equipo para tinción de Gram. Frasco con benzal. TECNICA: OBTENCION DE LA MUESTRA: 1.Realizar pruebas bioquímicas para identificar las colonias. b) Centrifugar a 2000 rpm durante 5 min.. La muestra se toma con dos hisopos: uno sirve para hacer el frotis.. Hisopos estériles de alambre frágil o madera. Cajas Petri con Voguel Jonhson..Incubar las cajas a 37°C durante 24 hrs. agar Chocolate.. leer morfología colonial y microscópica e identificar con pruebas bioquímicas o serología.. Centrifugar nuevamente. 1 Matraz con solución salina estéril. .R. fijar con alcohol etílico de 96°C dejar evaporar. Cadenas de cocos de color verde amarillento en la periferia celular y en el centro sin color indica una prueba positiva. Edición Mosby Co. dejar secar a temperatura ambiente.En caso de aislar otros microorganismos seguir instrucciones de acuerdo con la morfología microscópica que presente. . g) Observar en un microscopio para fluorescencia y conservar los frotis en refrigeración. e) Dejar reaccionar por 30 min. W. 48.En menores de dos años. investigue la presencia de Haemophilus influenzae. DIAGNOSTIC MICROBIOLGY. 5 Detección directa de antígenos microbianos. 8. BIBLIOGRA. Scott.p 54-64 PRÁCTICA NO. 7. t) Lavar dos veces sin solución salina en vasos Koplin en agitación durante 10 min. (Antiestreptolisina O) 21 .G.. E. p. a temperatura ambiente en cámara húmeda. d) Cubrir el frotis con suero antiestreptococo grupo A fluorescente. y E.U.Manual de Laboratorio de Bacteriología e) Se hace 1 o 2 frotes con cubre objetos nuevos.A.FIA Bailey. 1974. (1970). O. (1072). Methods 34. La aglutinación es visible en una concentracion de ASO en suero igual o superior a 200 UI/mL REACTIVOS Método semicuantitativo: Siguiendo la metódica cualitativa. Hesa. MUESTRA Utilizar suero. No utilizar sueros hemolizados. Johnson. P. se procederá con diluciones del suero muestra con solución salina (NaCI 9 g/L) Diluciones Suero muestra 1/2 1/4 1/8 . Test de aglutinación en porta. Med. 5. 1 00 /lL 100 /lL -1 00 /lL 100 /lL -100 /lL : Sol. 75.->100/lL Dosificar en porta 50 /lL 50 /lL 50 /lL Concentración si es la última dilución que da aglutinación: 200 x nQ dilución 200x2 200x4 200x8 .(1980). J.M.E.. and Barillec.. 22 .Comprobar la funcionalidad del reactivo mediante los controles positivo y negativo (ver procedimiento a continuación).salina - . Bibliografía Normausell. Badin. L.. UVmL 400 800 1600 .. 4. Clin. E..Lab. Los sueros. Tec!Jpol. J.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 RPM) Y ín vítro. FUNDAMENTO El método se fundamenta en una reacción de aglutinación de una suspensión de partículas de látex poliestireno sensibilizadas con estreptolisina O estabilizada. observar la aparición o ausencia de aglutinación exactamente al cabo de 2 minutos. D. S.N.. Sólo para uso en diagnóstico 7.. Assimeh. A. Guardar a 2-8°C.. Adams.(1978).Manual de Laboratorio de Bacteriología ANTIESTREPTOLISINA. J. Immunochemistry 9.J.-Añadir. mantienen su actividad durante 2 días.-Mezclar las dos gotas mediante agitación y extenderlas por todo el círculo. El exceso del tiempo de reacción podría dar lugar a falsos resultados. 48. conservados a 2-8°C. 3. Amer. aliado de la anterior.lmmunnol. una gota de R1 ASO-látex 5..-Dosificar 50 l!L (1 gota) de suero muestra a analizar en un círculo del porta. No utilizar sueros altamente lipémicos pues podrían dar una aglutinación no específica. SIN DILUIR. Concentración superior a 200 Ul/mL Suero humano. Los goteado res dispensan una gota de volumen aproximado de 50 l!L que es el idóneo para una buena sensibilidad. Contiene azida sódica 0. V ALORESNORMALES Adultos < 200 UI/mL TECNICA Método cualitativo 1. Β-hemolíticos.1 %. Concentración inferior a 200 Ul/mL Suero humano. con agitación suave. Contiene azida sódica 0.1 %. no deben congelarse. deben ser manipulados con la misma precaución que un suero muestra. antes de ser utilizado. Aunque no se ha detectado la presencia de antígeno HBs. * Los controles son sueros humanos. ni anticuerpos anti-HIV.: -La presencia de aglutinación indica un nivel de ASO igual o superior a 200 UI/mL en la muestra.-Homogeneizar el reactivo 1 ASO-látex. En estas condiciones los componentes mantendrán su funcionalidad hasta la fecha de expiración señalada en la etiqueta INTERPRETACION. debe homogeneizarse. Control positivo *. con una suave agitación. PREPARACIONYESTABIUDAD El reactivo 1 es una suspensión de partículas de látex. Los valores superiores a 200 UI/mL se encuentran en pacientes con recientes enfermedades debidas a Streptococcus del grupo A. 2. Control negativo *. Contiene azida sódica 0. 23 .-Atemperar el re activo y los controles a temperatura ambiente.Manual de Laboratorio de Bacteriología Reactlvo 1 Tapón blanco Reactlvo 2 Tapón rojo Reactivo 3 Tapón azul Látex ASO en suspensión.1 %. -La ausencia de aglutinación indica un nivel de ASO inferior a 200 UI/mL en la muestra. Los reactivos se deben conservar a 2-8°C. Coliformes y otros bacilos entéricos. especies de Proteus. Sthaphyloccus Aureus. 6 CULTIVO DE EXUDADO OTICO OBJETIVO: Realizar el estudio microbiológico de la secreción ótica. Por eso se requiere un tratamiento antimicrobiano agresivo con limpieza quirúrgica. Hongos saprófitos. GENERALIDADES La otitis media frecuentemente es causada por Pseudornonas o especies de Proteus.Streptococcus pneurnoniae. No patógenos u oportunistas: Estafilococos y micrococos coagulasa-negativos. Haemophilus int1uenzae. Especies de Bacillus. Los medios de cultivo selectivo empleados son: agar sangre. Bacteroides. estreptococos α y Β-hemolíticos. Mycobacterium tuberculosis y otras microbacterias. sobre todo una técnica especial y condiciones de esterilidad. Candidaa albicans y otros hongos. aeruginosa. Czapeck-Dox (para hongos).Manual de Laboratorio de Bacteriología Practica No. Se recomienda que sea tomado por el otorrinolaringólogo con . Patógenos o Patógenos potenciales: Pseudomonas aeruginosa. fusobacterium y cocos anaeróbicos. EMB. Micoplasma pneumoniae. Vogel-Johnson. incluyendo la identificación de hongos posiblemente presentes. Las otitis agudas o subagudas externas son causadas casi siempre por cocos patógenos. Esta infección localizada puede tratarse con antibióticos tópicos y agentes desecantes. existe una forma más virulenta de la enfermedad (otitis externa maligna). El material séptico de oído. Los siguientes microorganismos se encuentran con mayor frecuencia en cultivo ótico. que se asocia a invasión de los tejidos subyacentes potencialmente mortal. suele ser consecuencia de P. 24 obtenido en perforación del tímpano. Difteroides. Especies de Actinomyces. La otitis externa. la natación representa un riesgo significativo (oído del nadador). Aspergillus fumigatus. Microorganismos patógenos que rara vez aparecen en esos cultivos: Corynebacterium diphtheriae. Placa de Czapeck-Dox. es frecuente observar el desarrollo de bacterias no patógenas y hongos saprofitos debe eliminarse el exceso de antiséptico antes de la toma propiamente dicha. Diagrama de trabajo: Muestra Agar sangre Agar Vogel Johnson Identificación EMB Czapeck-Dox . agar Vogel-Johnson. Sembrar en agar selectivo para hongos Czapeck-Dox e incubar a 25°C (durante dos a tres semanas la identificación de los microorganismos aislados se realizará según las normas bioquímicas y seroirununológicas de cada problema en particular. sin embargo. Placa de Vogel Johnson. difteriodes Garrkya tetragena Bacillus. Valores normal: Flora no patógena constituida principalmente por Staphylococus coagulasa negativa. e incubar a 37°C durante 24 hrs. EMB. Sembrar en agar sangre.PARTE EXPERIMENTAL: Material: Placa de agar sangre. Hisópos estériles. para eliminar hasta donde sea posible la flora bacteriana contaminante. Placa de EMB. Esta valoración debe hacerse se acuerdo a las condiciones clínicas del caso. Benzal acuoso diluido 1: 1 000 Procedimiento: Antes de hacer la toma del producto debe limpiarse cuidadosamente el oído externo con solución acuosa de cloruro de Benzal diluido. Health 3$5. Ed. Fraser. Dis 124: 1-8 . Maxtec.U. Edición. Infect.h. Mosby Year Book (Times Mirror de España). 23.A. Haverkom. Med. New York. Microbiologia Médica. H. Lynch.P.p 132-136 Moody. Edición.BIBLIOGRAFIA: P. Exc. Ed. pub. P. 1971 STREPTOCOCCAL EPIDEMICS IN TWO POPlJLATIONS OF "NORMAL” FAMILIES.p 77 Sheehe. 1970 STREPTOCOCCAL INFECTIONS IN DIAGNOSTIC PROCEDURES . Diagnóstico Microbiógico. Médico Panamericana Argentina.. ANTIBODY TO STREPTOCOCCAL SERUM OPACITY FACTOR IN STREPTOCOCCAL DISEASE AND THE COUMUNITY. _Métodos de Laboratorio.A.m. Ed. Y H. Feldman.M. NLD. p. J. 1974. 1992 Bailey-Scott. p. W.A.Ed. E. Bodily.R. J.R. Ira.. Edición. México. 1983.A. 1969.Widdowson y C. E. Murray y Col. ed. J.L. Matthew. 5 edición amer. 6ta.U. Interamericana. La prueba del contagio se realiza con un examen de inmunofluorescencia. Estos causan la conjuntivitis que se presentan comúnmente en ambos ojos y que se caracteriza por los síntomas de ojos amarillentos y purulentos. Chlamidias La queratoconjuntivitis por Chlamidias (ataque de la córnea y conjuntiva) es causada por el germen Chlamydia trachomatis. . En los adultos es característico la aparición de ampollas localizadas en el párpado superior. Bacterias Los gérmenes más frecuentes son neumococos. Si las bacterias atacan la córnea. A veces los gérmenes pueden propagarse y causar infecciones en el interior de los ojos que son muy difíciles de tratar. éstas pueden causar ulceraciones. estafilococos y estreptococos. En algunos casos sólo una parte del ojo es afectado. pero la mayoría de veces se presentan infecciones de la conjuntiva y de la córnea junta. Este agente patógeno es el responsable más frecuente de ceguera en India. chlamidias o virus. El recorrido de la infección es directo desde la vía urogenital al ojo o se adquiere en las piscinas insuficientemente desinfectadas (Conjuntivitis de piscina). En la mayoría de casos se trata de bacterias. África y los países mediterráneos.Unidad IV Infecciones del ojo Las enfermedades infecciosas del ojo se clasifican según sus agentes provocadores. se utiliza para cultivar el exudado conjuntival Como sustancia reaccionante. 7 “CULTIVO DE EXUDADO CONJUNTIVAL” OBJETIVO: Identificar los microorganismos patógenos y de La flora normal en una maestra de muestra de exudado conjuntival de ambos ojos en una paciente. Frotes de raspado de conjuntiva. MATERIAL: Caja Petri con agar Brolacin. a su carencia de sustancias inhibidoras y la posibilidad de lograr una cierta diferenciación de las colonias. sobre él crecen solamente microorganismos que posean una elevada tolerancia a la sal común. TECNICA: Tomar la muestra de ambos ojos e inoculada en agar Brolacin y Chapman al mismo tiempo que se preparan 2 frotes para realizar las diferentes tinciones: Gram y Giemsa. Caja Petri con agar Chapman. . La alcalinización provoca un viraje a azul intenso. de azul de bromotimol. la degradación a ácido de esta última origina un viaje de color hacia el amarillo. la gelatinolisis y la formación de pigmento. El agar Chapman es una agar selectivo para estafilococos.PRACTICA No. FUNDAMENTO: EI agar Brolacin debido a la amplia disponibilidad de sustancias nutritivas que ofrece. Equipo para tinción de Gram. las colonias de Estafilococos son diferenciables utilizando como criterios la degradación de manitol. este medio contiene lactosa. . a la presencia de g1ucógeno en las inclusiones. que mide entre 600 y 1500 nm de diámetro. RNA Y proteínas. resistente a la tripsina y útil cuando es inoculado intravenosa mente en ratones y otra que se aplica intracelularmente dentro de vacuolas citoplásmicas de las células que están infectando y es llamada CUERPO RETIClJLAR o CUERPO DE INFUSIÓN. poseer ribosomas 70 S. es lisado por la tripsina y no es letal para el ratón. 8 Determinación de Chlamydia trachomatis FUNDAMENTO: El examen está basado en la investigación de Chlamydia trachomatis como agente patógeno en el raspado conjuntival por lo que se emplea inmunofluorescencia directa y tinción de Giemsa. a la homología de su DNA y a la presencia de DNA plasmídico. aunque sí pueden sintetizar DNA. es inefectivo. GENERALIDADES: Durante mucho tiempo se consideró que las clamidias eran virus. entre otros a las tetraciclinas y a la eritromicina. El estudio de este microorganismo.PRÁCTICA NO. al huésped que infectan. ya que son parásitos intracelulares obligados de las células eucarióticas debido a su incapacidad de sintetizar el adenosín trifosfato (A TP). Pneumoniae que pueden diferenciarse en base a su susceptibilidad a las sulfonamidas a la morfología de los cuerpos elementales y de los cuerpos reticulares. Psittaci y C. Las clamydias son bacterias INTRACELULARES OBLIGADAS que se diferencian de otras bacterias por su morfología y por presentar un ciclo de desarrollo único durante el cual se pueden observar dos formas. es antigénico. no es inefectivo. trachomatis. C. nos ha permitido conocer que son bacterias ya que contiene DNA y RNA. El género chlamydia está constituido por tres especies: C. son susceptibles a algunos antibióticos. tiene diversas enzimas y se multiplican por fisión binaria. una adaptada a vivir extracelularmente llamada CUERPO ELEMENTAL que mide entre 200 y 400 nm de diámetro. tienen una pared trilaminar parecida a la que presenta las bacterias Gram negativas. El biovar linfogranuloma venereum es el agente de linfogranuloma venéreo que es una enfermedad que se transmite por contacto sexual y se caracteriza por presentar una inflamación granulomatosa de los cambios linfáticos en las regiones inguinal y rectal. . se han descritos tres biovares con 15 serovares. que están relacionados como enfermedades en el humano. trachomatis es un patógeno exclusivo del hombre.C. manteniendo la preparación en cámara húmeda. Marcar un círculo de aproximadamente 0-5 cm2 en la parte inferior del portaobjetos donde se encuentra la muestra. e. f. . b. Dejar secar al aire. g.2. Frotes de raspado de conjuntiva. Fijar un frote con acetona durante 15 minutos. a. montar la preparación. TECNICA: Tomar la muestra de ambos ojos e inoculada en agar Brolacin y Chapman al mismo tiempo que se preparan 2 frotes para realizar las diferentes tinciones: Gram y Giemsa. c. Dejar actuar el conjugado durante 15 minutos. Observar en microscopio de fluorescencia INTERPRET'ACION: La formación de cuerpos elementales fluorescentes indica que la muestra tiene C. trachomatis.PARTE EXPERIMENTAL MATERIAL: Equipo para técnica de Inmunofluorescencia. Lavar el portaobjetos con solución amortiguadora a pH = 7. d. Equipo para tinción de Gram. trachomatis: Tinción de Inmunofluerescencia. Demostración de C. reactivo comercial). Colocar 30 microlitros del conjugado (gamaglobulina marcada con isotiocianato de fluoresceina. INTERPRETACION: La presencia de inclusiones intracelulares en las células epiteliales. trachomatis. preferentemente cerca del núcleo. b) Dejar secar c) Cubrir la preparación con giemsa 60 minutos. e) Dejar secar. . hace sospechar C.DEMOSTRACION DE Chlamydia trachomatis POR TINCION DE GIEMSA a) Fijar un frotis con metanol durante 5 minutos. d) Decolorar con etanol al 95%. f) Observar al microscopio. . . Staphilococcus aureus.. BACTERIAS: Haemophilus influenzae. carece de tratamiento específico. tampoco resulta sencillo su diagnóstico. Moraxella catarrhalis. Chlamydia pneumoniae El papel de las bacterias ha sido muy estudiado. Mycoplasma pneumoniae. Los virus pueden dañar la mucosa bronquial y favorecer así el asentamiento de bacterias causantes del cuadro infeccioso. El examen de la expectoración se complica por el hecho de que contiene muchos gérmenes potencialmente patógenos. ¿Qué quiere decir esto?. Rhinovirus. Pseudomona aeruginosa. Adenovirus. Virus parainfluenzae. Enterobacterias. La obtención de esputo para hacer un análisis microbiológico del mismo no es sencillo porque no siempre el paciente puede expectorar. Streptococcus pneumoniae. Streptococcus spp. El virus es. por una parte. No siempre son ellos la causa directa de la infección. en estos pacientes se produce con mucha frecuencia una colonización de la mucosa por bacterias. Los virus respiratorios suelen tener una relación muy clara con la estación del año. .Unidad V Infecciones de las vias respiratorias inferiores Cerca del 30% de las infecciones del paciente con EPOC son debidas a virus. como comensales en la garganta normal. Esto se debe a que como ya hemos comentado anteriormente. Por desgracia. Además los resultados pueden ser confusos al obtener en ocasiones diferentes tipos de bacterias. difícil de diagnosticar. Virus influenzae. por otra. y. Coronavirus. VIRUS: Virus respiratorio sincivial. de preferencia sembrando varias asas de esputo en distintas zonas de la placa. o sospecharse angina de Vincent. 3. Escherichia Corynebacterium diphtheriae Candida sp . También es útil para distinguir entre varios microorganismos una placa con agar de MacConkey. pero que un desarrollo intenso o predominante es muchas veces significativo. Agar Macconkey. El estudiante debe recordar que algunas colonias de estos microorganismos representan comensales normales. 4. tuberculosis siempre significan enfermedad. Algunos microorganismos como Corynebacterium diphtheriae y M. Actinomyces o Blastomyces. sanguinolento. Si existe la solicitud correspondiente o si está indicado. 6. Pueden encontrarse Candida. y de la posible duda en cuanto a poder patógeno. es prudente buscar un desarrollo predominante de cualquier germen particular y anotarlo en caso de que sea intenso. Agar Gelosa Chocolate. Se menciona a continuación una lista de los microorganismos que se encuentran en el esputo. Suele prepararse el cultivo directamente en agar sangre. Debe instruirse al cuerpo de enfermeras a que enseñen a los enfermos a recoger esputo y no saliva.PRÁCTICA NO. Equipo de tinción de Gram Equipo de tinción de Gram TECNICA 1. Agar De Biggy. se examina el esputo por la técnica de Ziehl Neelsen y se preparan cultivos para bacilos de la tuberculosis u hongos. aureus N eisseria sp. Se describe el aspecto macroscópico del esputo: purulento. con sangre digerida y su cantidad. 2. Agar Sal Y Manitol. Streptococcus pneumoniae Staph. 9 Cultivo de expectoración MATERIAL Cajas Petri Con: Agar Sangre. En vista de la naturaleza mixta de la flora de casi todos los esputos. y facilita el desarrollo de Haemophilus sp. Se prepara un frotis que se examina al microscopio después de teñido por el método de Gram. Un disco impregnado de bacitracina y factor V permite inhibir muchos microorganismos. 5. Cuando la licuación es completa. se remueve con una pipeta de Pasteur. Klebsiella. Se encuentra en el comercio t pancreatina amortiguada bajo forma de comprimidos que se disuelven en agua destilada para el uso. La velocidad con que ascienden las burbujas en el líquido. 4. El suero fisiológico sobrenadante. agitando de cuando en cuando hasta que la licuación sea completa. y es difícil obtener cultivos representativos. permite apreciar el grado de licuación. B. Para resolver este problema. no afecta a los hongos en el esputo. Casi todos los esputos se licuan en menos de 90 minutos. se centrifuga. anitratum Tratamiento del esputo con pancreatina Algunos esputos son muy viscosos. Actinomyces Mycobacteria. se utiliza pancreatina amortiguada al 1 por 100. Haemophilus sp. se desecha el líquido sobrenadante y se siembra el sedimento en el medio de elección. A la muestra lavada se añade un volumen igual de pancreatina amortiguada al 1 por 100 recientemente preparado y se agita. La enzima digiere el moco viscoso y la muestra es más fácil de manejar. después de agitarlo. La enzima no actúa sobre las bacterias en el tiempo que requiere la prueba. Se pone en baño tibio a 37°C y se incuba. .Difteroides. con la mayor parte de la saliva. aun después de varios días. 2. TECNICA (Tratamiento del esputo con pancreatina) 1. 3. Se mezclan cinco volúmenes de suero fisiológico estéril y un volumen de esputo y se agita. todavía hay mucho que se aprenderá sobre este insecto del misterio. sin embargo. 10 Mycoplasma pneumoniae. Los pneumoniae del M. por lo general. Los pneumoniae del M. El Mycoplasma pneumoniae es una causa común de neumonía leve y afecta. La mayoría de los casos de neumonía son leves y se tratan fácilmente. 17-83 del atlas.C.PRACTICA No. la página 1046). Varios estudios sugieren que esta enfermedad produce entre el 15 y el 50% de todas las neumonías en adultos e incluso un porcentaje más alto en los niños de edad escolar. la bacteria puede poder . 1997. utilizan los esteroles. Editores De Wm. IA. Anaeroplasma. Causas. incidencia y factores de riesgo La neumonía es una enfermedad común que afecta a 1 de cada 100 personas anualmente y es producida por muchos tipos diferentes de virus. Dubuqe. Las personas que se encuentran en mayor riesgo de adquirir neumonía por micoplasma incluyen aquellos que viven o trabajan en áreas concurridas como escuelas y hogares de personas abandonadas. como las células eukaryotic. bacterias y otros organismos infecciosos. los pneumoniae del M. en su membrana triple-acodada (fig. Principles de la microbiología. Aunque los pneumoniae del M. mucha de la investigación con respecto a esta bacteria está estando en conflicto. primero fueron ligados a las infecciones respiratorias en 1898 en que los roux y Nocard aislaron los organismos de especímenes del pleuropneumonia de los bóvidos. tienen uno de los genomes sabidos más pequeños . 2da edición. y Ureaplasma) son caracterizados por su genome inusualmente pequeño así como su carencia completa de una pared bacteriana de la célula. aunque muchas personas que contraen la condición no presentan un factor de riesgo que se pueda identificar. significando la piel suave.Brown. se piensan actualmente para ser responsables de tracheobronchitis y la pulmonía anormal primaria . a las personas menores de 40 años. Se estima que cada año se presentan 2 millones de casos en los Estados Unidos. mientras que otros casos son más serios y pueden ocasionar una enfermedad severa o incluso la muerte. Ronald M. Junto con los otros miembros de este mycoplasma de la clase (Acholeplasma. Estructura: Los pneumoniae del mycoplasma carecen una pared de la célula que conduzca a la inestabilidad osmótica. Asteroleplasma. Spiroplasma. Para crear una cierta ayuda estructural. Los pneumoniae del mycoplasma son un miembro de la clase Mollicutes. Transmisión e infección a través del mundo: Los pneumoniae del mycoplasma se pueden comunicar a través de contacto personal cercano vía gotitas respiratorias. Estos organelles son supremos en la virulencia asociada a pneumoniae del M.sobrevivir sin una pared porque vive en un ambiente osmóticamente estable. tales como el uso de polyenes. pero también compuestos metabólicos tóxicos. que penetra hacia abajo en el agar. no una toxina se haya identificado como el culpable. La combinación de estas características únicas crea un diverso panorama para el tratamiento de una infección mycoplasmal que otras bacterias. tal como penicilina y cycloserine. permite una diversa avenida para las terapias antibióticas generalmente ineficaces en bacterias. Algunos investigadores han notado un predominio de las infecciones que ocurrían en la caída y el invierno. rodeado por un área que se separa circular que sea más ligera en color. que es necesario para la ayuda del crecimiento bacteriano. sin embargo. sin embargo. La carencia de una pared de la célula previene la utilización de un antibiótico del B-b-lactam. el anfitrión (humano) animal de la célula. Muchas de la especie patógena del mycoplasma expresan los organelles especializados de la extremidad usados para hacer el contacto directo con las células eukaryotic. Esta transferencia puede incluir no solamente los alimentos y los aminoácidos suplementarios. porque actúan específicamente para interrumpir la pared de la célula. así como su red de la proteína que se asemeje a un citoesqueleto ancestral. El uso del colesterol en pneumoniae del M. Se piensa que este parasitismo superficial bacteriano causa daño severo a la célula huesped. el etc. La ausencia de una pared de la célula es probable facilitar una bacteria para recibir la interacción con la cual los compuestos pueden ser intercambiados. La morfología de las colonias del mycoplasma se compara a menudo a un "frei'r-huevo" porque forman una base central densa. . Mientras que esta teoría no se reconoce extensamente . puede seguir dos trayectorias. página 1046 La investigación reciente ha encontrado un receptor en la superficie de los pneumoniae del M. Editores De Wm. Ronald M. Dubuqe. los pneumoniae del M.C. en algunas personas. Ronald M.Brown. Se reproduce o con la fisión binaria o el alargamiento de la célula follwed por divisiones múltiples de la célula para formar las células del coccoid. Dubuqe. pueden inhibir la acción ciliary dentro de la zona respiratoria así como necrosis de la célula de la causa. hay mucha evidencia para sugerir que la pulmonía causada por una infección de los pneumoniae del M. Esta daños es causada por los cytotoxins de pneumoniae del M. 1997. IA. pueden progresar a un estado más severo. completa un ciclo con poblaciones cada 4 a 5 años. 2da edición. Principles de la microbiología. 1997. Atlas.Brown. En las altas concentraciones. El ciclo vital de los pneumoniae del M. Editores De Wm. . pensados para ser integral en el accesorio a la superficie de la célula huesped. IA. así como indirectamente de la inmunorespuesta del anfitrión. Este receptor puede unir a un número de diversos tipos de la célula tales como epithelia de la zona respiratoria y células de sangre rojas. Principles de la microbiología. página 1046 Síntomas Los síntomas generalmente son leves y aparecen en un período de 1 a 3 semanas y. 2da edición. Atlas.C.para ser verdad. Estos exámenes ayudan a confirmar el diagnóstico: • • • Exámenes de sangre para anticuerpos contra micoplasma Cultivo de esputo Radiografía de tórax .Entre los síntomas comunes se incluyen los siguientes: • • • • • • • Dolor de cabeza Fiebre que puede ser alta Escalofrío Sudoración excesiva Tos o con frecuencia seca o generalmente sin flema ni sangre Dolor en el tórax Irritación de la garganta Otros síntomas observados con menos frecuencia son: • • • • • • Lesiones de la piel o erupción cutánea Irritación o dolor en los ojos Dolor muscular y rigidez articular Tumoración en el cuello Frecuencia respiratoria rápida Dolor de oído Signos y exámenes Un examen físico puede mostrar agrandamiento de los ganglios linfáticos e inflamación del tímpano. El examen de tórax con el estetoscopio (auscultación) permite escuchar las crepitaciones. . . La orina sin contaminar de la vejiga es normalmente estéril. PRACTICA No. aseando el meato con jabón y agua y recolectando en un envase estéril la porción media de la orina expulsada: en mujeres pueden conseguirse especímenes equivalentes después de haber separado los labios y aseando la vulva. en la uretra se halla un flora normal. de modo que la orina expulsada en forma normal contiene una pequeña cantidad de bacterias. solo el examen cualitativo de la orina puede producir resultados significativos. B. los especimenes deben enviarse pronto al laboratorio o refrigerarse por un tiempo no mayor que una noche. El hallazgo de 105 microorganismos sobre mililitro en un espécimen de orina recolectada en forma apropiada es una fuerte prueba de infección activa de las vías urinarias (de la vejiga o de las porciones superiores del aparato urinario. Debido a que muchas especies de microorganismos se multiplican con rapidez en la orina a la temperatura ambiente o a la temperatura corporal. Debido a que es necesario distinguir los microorganismos contaminantes de los de importancia etiológica. Recolección apropiada del espécimen: Es el paso mas importante en un urocultivo se utiliza la orina de la mañana. La presencia de numerosas células epiteliales escamosas. Un frotis teñido con Gram sin centrifugar. Examen microscópico: Es un método rápido para el diagnostico de las infecciones de vías urinarias. que muestra bacilos Gram negativos es diagnóstico de infección urinaria.Unidad V1. si hay mas de 105 por mililitro. Se analiza una gota de orina fresca sin centrifugar para revelar leucocitos. La centrifugación breve de la orina sedimenta con facilidad las células de pus. Para un examen urinario apropiado es estéril. Sin embargo. lacto bacilos . A. En varones por lo general se obtienen especimenes satisfactorios. puede haber bacteriuria sin piuria. que pueden arrastrar consigo bacterias y por lo tanto ayudar al diagnóstico microscópico de la infección. INFECCIONES DE LAS VÍAS URINARIAS La orina secretada en el riñón es estéril salvo que dicho órgano este afectado.000 microorganismos por ml se toman como contaminantes. 11 UROCULTIVO OBJETIVO: El alumno conocerá la metodología para el diagnostico vías urinarias. Cuentas menores de 10. Puede haber células de pus sin bacterias y a la inversa. células epiteliales y también bacterias. 001 ml. 6. Placas de Agar Brolacin. EMB y Agar sangre. 3. Tomar una asada de orina con el asa calibrada y descargar en línea recta en el centro de la placa de Agar sangre. De acuerdo al volumen . TECNICA 1. Observar al microscopio Utilizando el objetivo seco-fuerte.o flora mixta sugiere una recolección incorrecta de la orina. Es conveniente en mujeres durante el primer trimestre del embarazo. Siempre deberá hacerse en quien se sospeche una infección generalizada y en los que presenten fiebre de origen desconocido. Pipeta Pasteur. PARTE EXPERIMENTAL: MATERIAL: Pipetas de l y 10ml. 2. Tubos de 16 x 150 con tapón de rosca. Contar las bacterias u los leucocitos por campo microscópico.9 mI. sembrar masivamente al inoculo. EMB y Agar Sangre de carnero. observar con inmersión. insuficiencia renal o hipertensión. Sal y Manitol y EMB y estriar masivamente. El examen bacteriológico de la orina se hace principalmente cuando los signos y síntomas son sugestivos de infección de las vías urinarias. Sal y Manitol. en 9. Contar el número de colonias que desarrollan en la placa. dejar secar fijar y teñir con Gram. 4. Incubar las cajas a 37°C por 24-72 hrs.1 mI de esta dilución sobre la caja estéril de Agar Brolacin. 5. de solución salina estéril. Asa calibrada en 0. Agitar el frasco y colocar 0. Colocar una gota sin extender. El presente examen se basa en la cuantificación de unidades formadoras de colonias desarrolladas en los diferentes medios inoculados: Brolacin. Portaobjetos y cubreobjetos Equipo de Gram. Homogeneizar y agregar0.1 mI. Agitar el frasco y colocar una gota entre porta y cubreobjetos. Contar el promedio de leucocitos por campo. BIBLIOGRAFÍA: IOVINE -SELVA El Laboratorio en la Clínica Tercera Edición Editorial Médica Panamericana.que tome el asa calibrada y la (s) dilución (es). así como que microorganismo se identifico y su comportamiento frente a los antimicrobianos probados.V. Pag. 7. 568 y 569. 8. 5. Editorial El Manual Moderno. Hacer las observaciones correspondientes. 3. de C. del crecimiento de cada una de las cajas. S. 992 y 993 Jawetz Ernest. 4. Microbiología Médica 13ª Edición. Identificar las colonias. Hacer un reporte del resultado del paciente. 6. 2. Pag. Unidad VII ENFERMEDADES DE TRANSMISIÓN SEXUAL Comprenden varios tipos de enfermedades que normalmente se transmiten o contagian durante las relaciones sexuales con penetración. AL. Las principales vías de transmisión son las . Realizar un diagrama de trabajo. RESULTADOS 1.. Sacar sus conclusiones 7. Bibliografía. Dibujar los campos observados en el microscopio. Informar el número de bacterias por ml. determinar el numero de bacterias por ml de orina. Si de acuerdo con el criterio de Kass y Sanford el número de bacterias es mayor de 100.000 UFC por ml se procede a identificar el microorganismo por los métodos usuales y realizar antibiograma. 1990. A. ET. especialmente el área que cubre el prepucio pueden tener micobacterium smegmatis además de otras bacterias Gram positivas. microbios. las mujeres con edad reproductiva pueden albergar grandes cantidades de enterobacterias estreptococos y estafilococos: así como bacterias anaerobias esporuladas y no esporuladas. En mujeres prepúberes y posmenopáusicas predominan los microorganismos que tienen su asiento en piel como los estafilococos y corinebacterias. lactobacilos y cocos. dando origen a una enfermedad sistemática. tales características lo hacen adecuado para la colonización de bacterias. mientras que. Están causadas por virus. La biota de los genitales femeninos varia con el pH y la concentración de estrógenos que a su vez depende de la edad. las corinebactérias y bacterias anaerobias. . algunos de estos pasan a formar parte de lo que se considera biotanormal. En la uretra se encuentra los estafilococos coagulosa negativos. gérmenes microscópicos. los órganos genitales y el ano durante la relación coital. y bacterias. El aparato genital masculino y femenino contienen epitelio transicional. el cual en determinadas circunstancias infecta el neonato durante el paso por el canal del parto. La vulva y el pene. levaduras y protozoarios. Muchas mujeres son portadoras de estreptococos betahemo1íticos del grupo B.mucosas de la boca. columnar y escamoso. así como el uso de pruebas bioquímicas. Poner una gota entre un portaobjeto y cubreobjeto y observar la preparación en fresco. El examen se basa en el cultivo del exudado vaginal y uretral con el fin de identificar la flora normal y patógena. selectivos diferenciales.. Medir el pH de la muestra aunque se recomienda hacerlo "in sitio". 6.B. 12 y 13 “CULTIVO DE EXUDADO CERVICO-VAGINAL EXUDADO URETRAL” Aislar e identificar los géneros y especies bacterianas responsables de procesos infecciosos en genitales. teñir por Gram y observar al microscopio. mediante la utilización de medios enriquecidos.M. 3. 4. de solución salina estéril y deben procesarse de inmediato. E. las placas de Thayer Martín y Casman incubarlas en tensión parcial de CO2. PARTE EXPERIMENTAL MATERIAL: Placas con medios de Thayer-Martín. TECNICA: “EXUDADO CERVICO – VAGINAL” 1. 5. Sal y manitol ó S-110 ó Chapman y Nickerson o Biggy. Agar Casman. pudiendo de esta manera detectar diferentes infecciones en el aparato genital de ambos pacientes. Hacer un frotis. 2. Con el fin de apoyar el diagnóstico del médico y siguiendo el cuadro clínico que presenta el paciente. Tubos de ensaye con medios de transporte de Stuart. Al terminar la incubación de los medios observar la morfología colonial y microscópica identificar la flora aislada de acuerdo a la metodología de la práctica .Práctica No. fisiológicas y serológicas cuando sean necesarios. Sembrar en los medios e incubar a 37°C durante 48 hrs. por necesidad de los exudados se proporciona en tubos con 1-2 ml. Material para tinción de Gram. Tubos de ensaye con medios de transporte de tioglicolato. Aunque es mejor la toma directa de la muestra por el alumno. La muestra se proporcionará en tubos de caldo tioglicolato. identificar la flora aislada y sensibilidad a lo antibióticos. 2. 8. Hacer las observaciones correspondientes. Hacer un reporte del resultado del paciente. Sembrar en medios e incubar a 37°C durante 48 hrs. Hacer frotis. cuando sea necesario. Bibliografía. Al terminar la incubación de los medios utilizado. TECNICA: “EXUDADO URETRAL” 1. incubar en atmósfera parcial de C02 (2-10%). . observar la morfología colonial: microscópica. Dibujar los campos observados en el microscopio. 7. 5. del crecimiento de cada una de las ajas. Identificar las colonias. 3. 6. Sacar sus conclusiones 9. teñir por Gram y observar el microscopio.del grupo microbiano que corresponda y determinar la sensibilidad a loa antibióticos. 4. en los medios de cultivo de GC y Casman. (Levaduras Gram Positivas) •Prueba de filamento En suero. Thayer-Martin (Selectivo N. observar a en microscopio en objetivo seco.) •Prueba de coagulasa • Tinción de Gram.) •Enterobacterias •Frotis con Gram (Gram neg. fuerte. •Frotis con T. •Hacer prueba de oxidasa con disco. . •Frotis con Gram Observar diplococos Gram negativos. gonorrheae) Casman (Para Gardnerella Vaginalis) EMB (Escherichia coli) Chapman (selectivo para S. (positiva) •colonias muy pequeñas •Frotis con T. 37°C. Gram (Bacilos Gram neg. incubar 3 hrs. Aureus) N ickerson (Selectivo Cándida albicans) •Observar colonias pequeñas.Diagrama de trabajo para el Cultivo de exudado Vaginal y Uretral. 0.1 ml de suero + suficiente colonias. Gram: Cocobacilos Gram negativos. Agar Verde brillante. pus y sangre con muy pocas materias fecales. XLD Tubos con Caldo de tetrationato y caldo de selenita F Tubos con agua peptonada pH 9. bilis-lactosa.Unidad VIII INFECCIONES DEL TRACTO GASTROINTESTINAL Práctica No. 6. o el exceso de moco. A 37°C. Sulfito bismuto. Los cambios de color pueden hacer pensar en melena. b) Se siembra un fragmento pequeño ( del tamaño de un guijarro) en medio de Caldo De Tetrationato y selenito F. ictericia obstructiva. la presencia de sangre. 14 Coprocultivo MATERIAL: Placas de EMB ó MacConkey. anotando su color. TCBS. huevos o quistes. XLD. Agar TCBS. buscando sangre. Equipo de Tinción de Gram Suero fisiológico Yodo parasicológico. agar sulfito de bismuto. c) con un hisopo o asa de platino pasar a un tubo con agua peptonada pH 9. posteriormente resembrar en una caja de TCBS e incubar 24 horas a 37°C . pus. (Para los estudios parasitológicos. Reactivo de oxidasa Reactivo de kovac Antisueros polivalentes Se realiza el examen macroscópico de las heces. La disentería bacilar produce típicamente una evacuación formada casi únicamente de moco. véase la sección correspondiente.8 hrs. consistencia.0 para enriquecimiento de vibrio cholarea Juego de Pruebas Bioquímicas. Material habitual para laboratorio de bacteriología. SS. Pueden encontrarse fragmentos de tenia o lombrices. Debe examinarse al microscopio una emulsión poco espesa en suero fisiológico.) Primer día: a) Se siembra en un medio de MacConkey. etc. citrato de simmons. buscando descarboxilasa. y es posible llevar a cabo una identificación antigéni ca completa.. se observa las colonias en crecimiento y se identifican . Debe inocularse también en tubo inclinado con fenilalanina. Las reacciones positivas se deben reportar por teléfono. 15 . medio SIM. las reacciones típicas de azúcares confirman las sospechas despertadas por las reacciones serológicas del día anterior. pequeño. Es posible ahora una identificación completa. empleando antisueros polivalentes. pueden ser útiles estudios auxiliares como las pruebas de oxidasa. Estos contienen. d) Se resiembra el caldo con selenita F en medio de cultivo de Verde brillante. y se continúa como en g. del rojo de metilo y de VogesProskauer. se vuelven a incubar estos tubos y se siembra otro conjunto de tubos con lisina. Tercer día: e) Nótese el tipo de reacción en los cinco tubos. Las colonias que no fermentan la lactosa se pasan del medio SS. se siembra en un conjunto de tubos con azúcares. Cuarto día: g) Se leen las reacciones de carbohidratos en los tubos preparados en e. se resiembran los microorganismos en un conjunto de pruebas bioquímicas. contiene un disco de gelatina con carbón en 1 mI de agua peptonada. etc. parahemolyticus Segundo día: e) Después de incubar toda la noche a 37°C. arginina y omitina. Si las reacciones eon azúcares no permiten establecer el diagnóstico. En el caso de Salmonella. se lleva a cabo una prueba de aglutinación en portaobjetos. que no fermentan la lactosa. f) Los microorganismos del paso d. Si las reacciones hacen pensar en Salmonella o Shigella. Entre tanto. respectivamente. XLD y sulfito bismuto. h) Se leen los cinco tubos del paso f. V. De ser necesario. y agar de Kliger. para aplicar medidas de aislamiento. Muchos microorganismos se pueden identificar en esta etapa. el quinto tubo. como en e.observar y bucar las siguientes Vibrio cholareae. agar con urea. PRÁCTICA NO. se seleccionan las colonias negras características de Salmonella typhi a un conjunto de cinco tubos para pruebas bioquímicas. se siembran en un conjunto de cinco tubos. Determinación de Helicobacter pylori (Método de ELISA) . . cuando se trata de H. uno de ellos contendrá citrato de sodio 0. placas con agar EMB.01 g. . Equipo para tinción de Gram.Unidad IX INFECCIONES DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL PRÁCTICA NO. Equipo para tinción de ZiehI-Nielsen.pneumoniae. Placas con agar sangre de carnero. de la muestra y de éste se hará el estudio citoquímico. La observación directa del frotis teñido por Gram o Giemsa permite dar un diagnóstico presuntivo. demostrando el agente etiológico en la muestra del líquido cefalorraquídeo la que debe ser tomada por el personal médico. 16 Cultivo de líquido cefalorraquídeo En las meningitis purulentas el diagnóstico microbiológico se realiza. Portaobjetos. por cada 5 mI. influenzae o S. MATERIAL: Placas con agar chocolate. El diagnóstico específico rápido. mientras que el otro sin anticoagulante se emplea para hacer pruebas bacteriológicas. se realiza con las reacciones de Quellung o por las pruebas de contrainmunoeletroforesis de inrnunofluorescencia directa o coaglutinación. El líquido cefalorraquídeo se recoge en dos tubos de preferencia con tapón de hule. Centrifugar el LCR a 2500 rpm durante 15 minutos y descartar el sobrenadante. 5. Los cultivos anaeróbicos deberán mantenerse por lo menos de 7 a 10 días. si lo hay. El resultado se debe informar de inmediato. 8. El líquido cefaloraquideo (LCR) debe ser manejado en condiciones de e sterilidad. enviando la porción correspondiente al laboratorio clínico para el estudio citoquímico. El líquido cefalorraquídeo normal es estéril. Es importante incluir en estas placas de sensibilidad a los antibióticos. Inocular en agar sangre. en agar chocolate enriquecido con los factores V y X para Haemophilus. 7. 6. si hay sospecha clínica o los frotis indican la presencia de hongos. 3. La identificación final de los microorganismos aislados se hace empleando las pruebas bioquímicas o serológicas indicadas en cada caso. 4. 2. . intluenzae y S. 1. observarlos en objetivo de inmersión. el segundo por Ziehl Neelsen y el último por tinción negativa (para investigar la posible presencia de Criptococcus neoformans encapsulado. 2. pneumoniae (si se cuenta con el equipo). Conservar en incubación los cultivos negativos de 72 a 96 horas antes de desecharlos. Incubar a 48 a 72 horas en atmósfera parcial de CO2. Inocular en medio de tioglicolato. Hacer tres frotis: uno teñirlo por la técnica de Gram. hacer tinción de Gram y subcultivar en los medios apropiados después de interpretar el frotis. en EMB.TÉCNICA: 1. Observar a las 24 horas ( y diariamente a partir de entonces) en busca de crecimiento. usar el medio Sabouraud y medio Lowestein-Jensen en caso de Mycobacterium tuberculosis. Realizar las pruebas de coaglutinación para H. de GC.F. Del sedimento: Preparar dos frotis. Enviara al laboratorio Frasco estéril de 10 mI.B.La toma de muestra es llevada a cabo por médico especialista o Q. Anotar morfología. Hacer frotis de las colonias y teñir con Gram. teñir uno con Gram y otro con Ziehl Neelsen. LCR es como agua de roca (transparente y cristalino). . agar sangre y EMB. Centrifugar a 2500 rpm.Durante 15 minutos. anotar la morfología de las colonias. algunas veces con eritrocitos. Sembrar con asas en los medios. especialista en la columna vertebral (Con anestesia de Xilocaína local). amarillento. Cuando es anormal puede ser de aspecto: turbio. Observar. Manual de Laboratorio de Bacteriología 58 . Bacteremia intermitente asociada con abscesos no drenados de localización intraabdominal. Bacteremia también puede ocurrir en forma temprana en procesos infecciosos localizados y sistémicos . La bacteremia pasajera ocurre después de manipulación de tejidos infectados (abscesos. dilatación uretral . cistoscopía. hepáticos. etc. Instrumentación de superficies mucosas contaminadas POR: procedimientos dentales. osteomielitis e infecciones gonocócicas y meningocócicas. Infecciones de la Sangre: Muestras: Sangre periférica Diagnóstico bacteriológico: Los patrones clínicos de la bacteremia pueden ser pasajeros. Hipotensión. Bacteremia pasajera. 59 .Manual de Laboratorio de Bacteriología Unidad X sistema hematopoyetico GENERALIDADES La sangre es un tejido estéril. ha sido reportada en casos de meningitis. Bacteremia intermitente. Shock séptico. y celulitis). forúnculos. Taquicardia. intermitentes o crónicos. Septicemia. y sigmoidoscopía. prostáticos. artritis piogénica. Este ocurre en las semanas de infección aguda de fiebre tifoidea y brucelosis. aborto. Bacteremia crónica es un signo importante de endocarditis infecciosa y otros focos de infección intravascular. Fiebre. por lo que la identificación de microorganismos contenidos en ella puede indicar tanto una bacteriemia transitoria como una septicemia. pelvicos. cateterización. Signos y Síntomas: Malestar. Las botellas deben observarse macroscópicamente a diario en busca de evidencia de desarrollo bacteriano por un total de 7 días. o Sistema Bioquímico. Pruebas diferenciales de Genéro y especie. Streptococcus pneumoniae. Cuando se obtiene un cultivo positivo se debe efectuar una tinción de Gram. para diferenciar Bacilos Gram Negativos. hemólisis de la sangre . para identificación de Enterobacterias.Manual de Laboratorio de Bacteriología PRÁCTICA NO. con incubación de 7 hrs ya hay crecimiento suficiente para ser utilizado como inóculo para las pruebas de sensibilidad. etc. HEMOCULTIVO POSITIVO El desarrollo bacteriano se detecta por turbidez del medio de cultivo. o detectar la presencia de Bacilos Gram Negativos. que es particularmente útil para distinguir Streptococcus de Staphylococcus. ANTIBIOGRAMA Subcultivos: una alícuota del caldo con desarrollo se siembra en un medio sólido. 60 . Escherichia coli. como son la catalasa y la coagulasa. colonias visibles en la capa sedimentada de sangre. 17 HEMOCULTIVO El hemocultivo complementa urocultivos y cultivos de LCR en la evaluación de neonatos con sospecha de sepsis. para cocos Gram Positivos. Uno de los medios más utilizados es el Medio Bifásico de Ruiz – Castañeda. o sobre ésta. Prueba de Oxidasa. PRINCIPALES PATÓGENOS CAUSANTES DE BACTEREMIA La bacteremia normalmente es causada por: Staphylococcus aureus. De los subcultivos se debe aislar e identificar la cepa con medios y pruebas diferenciales. producción de gas. Los organismos aislados de hemocultivos deben guardarse por algunas semanas en caso que se necesiten mayores estudios diagnósticos. Francisella tularensis. epidermidis.Manual de Laboratorio de Bacteriología La Sepsis se presenta principalmente en pacientes hospitalizados. ni anaerobio. 2. ni aerobio. b) CULTIVOS POSITIVOS. Seleccionar la zona que será puncionada para la extracción de sangre (Vena palpable). Especies de Brucilla. Rickettsias. EMB. después de tres días de incubación. el cultivo de sangre puede informarse así: No hubo desarrollo. Listeria monocytogenes. especies de Klebsiella. 3. coli. saprophyticus. a)CULTIVOS NEGATIVOS. Informe Final: No hubo desarrollo después de 7 a 14 días de incubación. Desinfectar alrededor la zona seleccionada. especies de Enterobacter. Tripanosomas. Especies de Leptospira. S. Los patógenos encontrados más comúnmente en cultivos de sangre incluyen los siguientes: Especies de Bacteroides. Bacilos Coniformes. etc. S. subcultivos y frotis teñidos por Gram fueran Negativos. Gonococo. Salmonella especies. Streptococcus pyogenes. Filarias. MATERIAL Medio Bifásico de Ruiz – Castañeda. Consignar esta información. Staphylococcus aureus. Interrogar al paciente si se encuentra bajo tratamiento con antibióticos. con agua y jabón (remover el desinfectante). 4. y comunmente se desarrolla a partir de un sitio de infección primaria. SAL Y MANITOL. Haemophillus influenzae. Lavar cuidadosamente la región. MATERIAL HABITUAL PARA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. Paludismo. Bacilos Gram negativos: E. Meningococo. AGAR CHOCOLATE. TÉCNICA: 1. 61 . JERINGA DE 10 ml GASA ESTERIL SOLUCION DE YODO ALCOHOL 70% PLACAS DE GELOSA SANGRE. Si todos los cultivos. 9. 6. por una aguja nueva estéril desechable con la cual se inyectará la muestra de sangre obtenida en los recipientes. resiembras. Mezclar suavemente los recipientes de hemocultivo. 8. incubación 37°C. una solución de yodo sobre el área seleccionada en forma concéntrica del centro hacia la periferia. Repetir este procedimiento cinco (5) veces. previa limpieza y desinfección de la zona de punción en la tapa de los mismos. y desechar el algodón o gasa utilizados. 10. revisión diaria de cultivos. debe reemplazarse la aguja con la cual se hizo la punción. palpar la vena utilizando guantes desechables y estériles. Permitir la acción del yodo durante tres (3) a cinco (5) minutos. No agitarlos bruscamente y procurar que la sangre se impregne en todas las superficies de los medios de cultivo de los frascos. para proceder con seguridad. 62 . 11. Remover completamente la solución de yodo con gasa o algodón estériles impregnados en alcohol de 70º. Aplicar con gasa o algodón.). etc. Proceder con actividades propias del estudio (Rotulación. 7. Antes de hacer la punción venosa con aguja y jeringa de 10 mL stériles. Realizar el procedimiento en forma concéntrica descartando siempre la torunda o gasa una vez se llega a la periferia de la zona de punción. No se debe tocar la piel con la mano una vez que el área ha sido desinfectada. interpretación de resultados. seguir cuidadosamente las instrucciones de utilización del equipo de venoclisis que usualmente se incluye. Colocar las cantidades necesarias de sangre en los recipientes de hemocultivo. Una vez concluida la toma.Manual de Laboratorio de Bacteriología 5. En caso de utilizar recipientes comerciales de hemocultivos. Manual de Laboratorio de Bacteriología PRÁCTICA NO. 18 Reacciones febriles 63 . 3. a nivel de género y especie. 19 Control de calidad en el laboratorio mediante la identificación de un organismo problema. 2.Manual de Laboratorio de Bacteriología Unidad XI Control de Calidad en el Laboratorio de bacteriologia PRÁCTICA NO. Se llevara a cabo un sistema de evaluación de la calidad Se solicita la identificación del organismo problema. OBJETIVO: Que el alumno aprenda a realizar control de calidad del laboratorio de bacteriología. así como la identificación de microorganismos. si hay cambios estos se señalan oportunamente y junto con los resultados se señalan los criterios para la evaluación. como parte importante de las etapa analítica del programa de control de calidad. Se proporcionan los datos clínicos del paciente del cual fue aislado y se señalan los datos a informar para la evaluación. 1. Para ésta evaluación se les proporcionará un microorganismo en las condiciones apropiadas para su transporte u otro material problema. 64 . a nivel de género y especie. por falta de reactivos. Se refiere a observaciones durante el desarrollo de la práctica. La calificación final del laboratorio se obtendrá de acuerdo a los siguientes porcentajes: Punto 1 . Incluirá la bibliografía consultada. . En ellas se describirán las conclusiones sobre el trabajo realizado y sobre los resultados obtenidos. 20 % Punto 4 . . . las cuales se considerarán en otro punto. * Resultado: En este punto se incluirá solamente el resultado obtenido. Se aplicarán 3 exámenes. los cuales versarán sobre las discusiones grupales y las investigaciones bibliográficas sobre las prácticas. comentarios. . . con la aclaración de que si alguna práctica. Los reportes incluirán los siguientes puntos: * Número y Nombre de la Práctica * Resolución de Guía de Estudio: Que se encuentra en cada práctica. . 3) Entregar los reportes correspondientes a todas las prácticas. . 4) Aprobar los exámenes teóricos que se aplicarán. . los alumnos deberán cubrir los siguientes requisitos: 1) Realizar el 100 % de las prácticas de acuerdo al programa. . . aclaraciones a la técnica. pudiendo ser modificada por el alumno. . . sin comentarios ni observaciones. tales como fuentes de error. * Observaciones: * Conclusiones: *REPORTE PARA PACIENTE * Bibliografía: Estos reportes deberán ser entregados cada 15 días. proporcionando sus datos completos. . siendo evaluado el trabajo individual de cada práctica mediante observación. . 20 % Punto 3 . Después de obtener el resultado se hara un formato de reporte para entregar al paciente. de acuerdo a las prácticas realizadas. . no llegara a realizarse deberá ser reportada. 2) Participar en las discusiones grupales sobre las prácticas. No repetir la descripción de los pasos de la técnica. 30 % Punto 2 . precauciones. 30 % La calificación final de la experiencia educativa incluirá el desempeño del alumno tanto en el curso teórico como en el laboratorio de acuerdo a los siguientes porcentajes: Teoría 60 % Laboratorio 40 % 65 . .Manual de Laboratorio de Bacteriología Sistema de Evaluación Para acreditar el laboratorio de Bacteriología. etc. BIBLIOGRAFIA 28. Microbiología. dulbecco. edit. Editorial Panamericana 1991 9) Kenneth L. Alexander Atlas de Microbiología Editorial Benjamín Cummings 2001 6) Revista Latinoamericana Microbiología Médica 2002-03 7) www.Manual de Laboratorio de Bacteriología Siendo requisito indispensable obtener calificación aprobatoria en ambos. Davis.L. 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Gersensen Hansen Microbiología de las fermentaciones edit. Interamericana. Microbiología Fundamentos y Aplicaciones. Edit. envasado. 1ª sección. recolección. Métodos Microbiologicos edit. Smith C. México 1997 2. 16. Díaz Santos S.M.Diario Oficial. Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995.Diario Oficial. Complementarias 1. almacenamiento. Mobiliario.. 1ª sección. Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-087-ECOL-SSA1-2000.Diario Oficial. Qr46637 (USBI) México 1998 10. Viernes 29 de octubre de 1999. México 1995 9. Atlas de Microbiología. México 1998 4. Acribia-zaragoza México 1990 8. Hispanoamericana México 1998 6. México 1997 12. Iberoamericana.Diario Oficial. Clasificación y especificaciones de manejo. Biología Molecular y Biotecnologia.2. para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos. México 1995 13) Jawetz E. Smith y Wood. 1ª sección. 67 . Biología de los Microorganismos. México 1991 13. Brock T. Edit. Manual de Laboratorio de Bacteriología 68 . Manual de Laboratorio de Bacteriología APENDICE A: MEDIOS DE CULTIVOS 69 . Manual de Laboratorio de Bacteriología 70 . Agar de Czapek Dox Cal. J.. Agar amarillo.M.00 Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Caseína Extracto de Carne Peplona de Gelatina Lactosa L-Cistina Azul de Bromotimol Agar pH tinal 7. Lab. Efectuar los recuentos de colonias después de 18 horas de incubación a 35°C. Shigella. amarillas elevadas.M. Hervir durante un minuto y esterilizar a 15 libras durante 15 minutos.P. con el centro ligeramente más obscuro. Tiene además la ventaja de impedir la difusión del Proteus en la superficie del medio.1 450 g Para cultivar gérmenes Gram positivos y Gram negativos en infecciones urinarias. Una vez solidificado. Fórmula aproximada en gramos por lilro: Sacarosa Nitrato de Sodio Fosfato Dipotásico Sulfato de Magnesio Cloruro de Potasio Sulfato Ferroso Agar 30. Olor "dulzón". (12 mi por caja).J. Calentar lentamente agitando con frecuencia. 0. Recordar que un número de 100. El Agar de Czapek Dox es un medio semisintético que contiene nitrato de sodio como la única fuente de nitrógeno y es uno de los medios sólidos más útiles (Jara el cultivo de hongos en general. Muy pequeñas. Para el desarrollo y el recuento en bacteriología urinaria de gérmenes Gram positivos y Gram negativos. J.0 4. 1967 8. Poco elevadas.50 0. lo que echaría a perder la prueba.3 I. Reportar el número de ellas como colonias o bacterias por mi de orina. Agar amarillo. especialmente saprófitos y fitopatógenos. Para ello vaciar el agar fundido enfriado entre 45 50°C.M. :>reparación: Suspender 50 g del polvo en un litro de agua destilada.R. Guttman. Si se requiere bajar el pH a 3.0 3. Serratia. 2 343-345. Azules. lactobacilos y otros microbios. Muy pequeñas. Providencia. Streptococcus fecalis.4 mm. Calentar agitando con frecuencia y hervir hasta disolución completa del material (aproximadamente un minuto).2 4. opacas.5. Cal.0 3.0 1. 1 1173.H" 1965 8. así como en la formación de Clamidosparas por Candida albicans. 26:38-41. Vaciar en cajas de Petri. Los microorganismos que provocan infecciones en las vías urinarias son por lo general abundantes y de una sola especie.Manual de Laboratorio de Bacteriología Preparación: Agar Cled (Cistina-Lactosa-Deficiente en electrolitros) Suspender 36. Ampliamente usado en Microbiología de suelos para cultivar hongos y bacterias del mismo. Agar amarillo pH final 7.0 MICROORGANISMOS Escherichia coli CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Grandes. y Sandys.0 0. Pequeñas de color amarillo intenso. D y Nayler G. amarillas. G. opacas. Mezcle muy bien antes de vaciarlo en tubos o en cajas de Petri. Pueden presentar una ligera tonalidad azulada. Mackey.H.000 (10)5 o más ya tiene un gran significado clínico para considerarse como un? infección en vías urinarias. opacas.2 Enterobacter Semejantes a E. Impide el swarming ael Proteus. invertir las placas para evitar el exceso de humedad.02 15. grises. Agar azul verdoso.0 0. nos indica con qué tanto cuidado fue tomada la muestra de orina en estudio. Utilicese el volumen medio de la misma para que la primera porción del chorro arrastre a los microorganismos estacionados normalmente en la uretra. Remojar de 10 a 15 minutos. Agar amarillo. Mackey.01 15. 1968.0 g en un litro de agua destilada. Los cultivos urinarios deberán realizarse con la primera muestra matutina y previo aseo escrupuloso de las zonas genital es.. 251-1 450 g Para cultivar hongos y promover la formación de Clamidosporas. translúcidas con bordes irregulares. un volumen de más o menos 12 mi por caja de Petri desechable de 9 cm de 71 ..E. Grandes amarillas o blanco amarillentas. y Sandys. Technol. agregue 10 mi de ácido láctico al 10% por litro de medio después de la esterilización. Verde azuladas pálidas. 1 1173. Med. Agar amarillo. Desde azules hasta azul intenso.0 10.J. 0. Técnica general para el cultivo de hongos: Klebsiellas Proteus Pseudomonas Salmonella.128 0. 232. El col ibacilo es el germen que se aisla con mayol frecuencia. de 0.P. GH.50 0.3 I. Remojar de 10 a 15 minutos. 1966 8. Con superficie mate típica y contornos irregulares. coli pero mucosas y de mayor tamaño. La presencia de bacterias contaminantes como difteroides. Deje que los tubos solidifiquen en posición inclinada.D. Esterilizar a 15 libras durante 15 minutos. Estafilococos Corinebacterias Evitar la humedad excesiva del medio. Sumamente mucosas y elevadas. Bibliografía: Bebis T.J. La siembra de la muestra puede hacerse por el método de las diluciones o por estría sobre la superficie del agar con asa calibrada. Usos: En el medio CLED (Cistina-Lactosadeficiente en electrolitos) crecen profusa mente la gran mayoría de las bacterias que provocan infecciones urinarias pudiéndose diferenciar o identificar sus colonias respectivas. Bioxon 270-1). colocar un disco de papel filtro impregnado con 30 mcg de kanamicina en el área de inoculación masiva de una placa de Agar Anaeróbico adicionada con un 5 % de sangre desfibrinada estéril de borrego o de conejo. El Medio de Tioglicolato sin indicador es un excelente caldo de en riquecimiento y con frecuencia da mejor re sultado que la siembra directa en placas. En este caso.0 1.Cislina Dextrosa Agar Tioglicolato de Sodio Formaldehído Sulloxilato de Sodio Azul de Metileno pH tinal 7. sin necesidad de recurrir a recipientes (jarras) para anaerobiosis.0 1.50°C. Una vez fría la suspensión. Dejar enfriar a 45 .002 El Agar de Glicina.0 2. Cuando se observe crecimiento. La parte central de la tapa no deberá tocar ningún punto del medio de cultivo a fin de dejar una pequeña cámara de aire como de 5 a 2 mm de altura. También se usa para pruebas de sensibilidad de los mismos. Hervir por un minuto o hasta que el medio se disuelva por completo. abrir las placas para seleccionar las colonias. pudiendo incubarlas después más tiempo. como Clostridium. Esterilizar en autoclave a 15 libras durante 15 minutos. Incubar hasta el día siguiente y resembrar en el Agar Anaeróbico. halos de inhibición son bastante grandes y pueden entrecruzarse.5 0. Las placas de Agar Anaeróbico también pueden incubarse en atmósfera normal cubriendo la superficie del medio de cultivo con las tapas de Brewer.2 iO.0 0. 3. Vaciar en -cajas de Petri a las 3/4 partes de su capacidad. Dichos antibióticos inhibirán a los gérmenes aerobios en la zona inmediata a su alrededor pero no a los microorganismos anaerobios. 1942. calentar la muestra suspendida en líquido dilu Suspender 45 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Levadura y Sulfito de Bismuto es útil para el aislamiento y la identificacion presuntiva de Candida por medio de la reacción de sulfuro. Agar Biggy Para aislamiento e identificación de Candida. Si por alguna circunstancia no es posible hacer la siembra del material en estudio en el Agar Anaeróbico.2 Una vez solidificado el medio. ca Depositar de 4 a 5 discos de papel impregnado con los antibióticos en estudio. es muy conveniente calentarlos y fundirlos para expulsarles el oxígeno disuelto.0 15. No probar más discos porque los 72 . en atmósfera normal. Citrato de Amonio y Bismuto Sullito de Sodio Dextrosa Glicina Extracto de Levadura Agar 5.8 i 0. La siembra de la muestra (clínica o alimento) puede practicarse por estría superficial o por vaciado. 4. el reborde interno de la tapa Brewer para obtener un sello hermético. utilizando aproximadamente 20 mi para cada placa. durante 10 minutos entre 70 y 80°C.0 pH final 6. A los medios de cultivo para anaerobios. para obtener así capas más gruesas que las usuales. Para cultivar anaerobios y efectuar pruebas de sensibilidad a los mismos. proceder de la siguiente manera: 1.Manual de Laboratorio de Bacteriología vente (agua peptonada. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Caseína Peptona de Soya Cloruro de Sodio L. 270. inoculando y mezclando el producto eQ estudio con el medio fundido y enfriado entre 45 y 50°C. Agitar circularmente y vaciar en placas de Petri estériles. Si la muestra en estudio contiene una mezcla de gérmenes diferentes para aislar anaerobios. Una vez que el medio haya sOldificado.0 10.5 2. Mezclar bien y calentar agitando continuamente. albicans y C. colocar la tapa anaeróbica de Brewer (sobre la capa superior) e incubar aeróbicamente. Sin embargo. solución amortiguadora de fosfatos). 2. Para llevar a cabo pruebas de sensibilidad (con gérmenes anaeróbicos). 95:587. Remojar de 10 a 15 minutos. es decir. dejar sin sembrar la franja circular externa del medio. Agar Anaeróbico Cal. Se obtienen mejores resultados utilizando "jarras anaeróbicas" más CO2 que con la sola anaerobiosis sin di óxido de Carbono. Inocular el cultivo puro sobre la superficie del agar (capa inferior). o bien. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante no más de un minuto. a veces es conveniente hacerlo cuando se trata de microorganismos formadores de esporas como Clostridium. La tapa de Brewer permite el desarrollo en la superficie de gérmenes anaerobios estrictos y microaerofílicos.5 2. hemisféricas o circulares. la tapa de Brewer especial para anaerobiosis. previamente calentado y enfriado. inocular 2 placas de Agar Anaeróbico e incubar una de ellas en anaerobiosis y atmósfera de CO2 a 35°C durante 18 a 48 horas y la otra también en anaerobiosis pero sin CO2.5 cm de ancho. tropicalis y para la diferenciación de especies en la forma siguiente según Nickerson: C. si no han sido preparados poco antes de su uso. Casi nunca deberá calentarse la muestra para destruir las formas vegetativas porque serían destruidos los anaerobios no esporógenos. No esterilizar en autoclave. en anaerobiosis si se emplea la tapa normal de la caja Petri.0 16.1 450 9 Recubrir cuidadosamente el inóculo y los discos con otra capa (capa superior) del mismo medio de cultivo (Agar Anaeróbico. Cuando esté indicado el calentamiento. Cato 205-1 450 9 17. Fórmula aproximada en gramos por litro: Preparación: Suspender 51 g de polvo en un litro de agua destilada.0 3. Medio de cultivo desarrollado por Brewer para cultivar microorganismos anaeróbicos.4 10. albicans Colonias lisas. Usos: El Agar Biggy es útil para aislar C. como de 1. y un disco de 10 unidades de bacitracina en otra placa de Agar Sangre.2 Preparación: Usos: Los tres agentes reductores provocan un descenso marcado y bastante estable del potencial del óxido-reducción. menos con Clostridium perfringes que muy pocas veces las forma.0 10. si es preciso. Remojar de 10 a 15 minutos. sembrar la muestra en Medio de Tioglicolato sin Indicador (Bioxon 2451). Bibliografia: Brewer. asegurando así buenas condiciones de anaerobiosis. SClence. depositar sobre él. El azul de metileno funciona como indicador Redox. Glucosa. Sobre esta franja estéril se aplicará con más o menos firmeza. . animal o humana..0 2. Incubar ambos medios a 35°C durante 5 días: Brucella abortus crece en Biotriptasa con fucsina pero no con tionina y requiere CO2.. tanto de muestras clínicas como de alimentos. Se recomienda que el medio se prepare inmediatamente antes de usarlo...0 0.2 i 0. Preparación: Suspender 41 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. y para la producción de toxinas clostridianas. 271-1 450 9 Fórmula aproximada: Peplona de Gelafína Laetosa Agar Especial Sulfito de Sodio Fuseina Básica Erioglaueina Cloruro Férrieo Fosla!o Monopotásieo Bilis de Buey Verde Brillante 8. o bien. Si el medio se va a emplear para aislar Brucella de la leche o de otros especímenes se añaden 1.5 mg 15. mezclar y vaciar en sus placas respectivas. Mezclar bien. incubarlas entre 35 a 37 ° C de 17 a 19 horas...0 1.. Una vez soldificado el medio invertir las placas para evitar que se les deposite un exceso de humedad. Se usa extensamente para aislar bacterias del género Brucella a partir de materiales contaminados con otros tipos de gérmenes.. Las colonias aisladas de este medio deben transferirse al medio de CTA o Agar de Soya Tripticaseína donde es posible conservarlas adecuadamente.0 5.1 % Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto.6 g del polvo deshidratado en un litro de agua destilada de buena calidad.. El medio se prepara de acuerdo a la fórmula del APHA. vísceras) podrán sembrarse directamente en las placas de Agar Brucella.. saprófita o comensal.. Edilion... placas Las muestras en estudio (leches..0 pH linal 6. Agar de Bilis Verde Brillante con Fucsina básica al 1: 25. APHA' Diagnostie Proeedures and Reagents 3a. practicar siembras de varias diluciones del material en estudio en el medio fundido. Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión durante 15 minutos. carnes. Ine. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. de diversos alimentos así como de otros materiales. B. 10th Ed.. suis no desarrolla frente a fucsina pero sí en tionina y tampoco requiere CO2 Cal.0 i 0. Las colonias de coliformes presentan una zona central roja intensa rodeadas de un borde de color rosa. Usos: Puede emplearse para apreciar el grado de éontaminación de muestras de aguas. cremas. que den cuando menos un número de 10 a 50 colonias por placa... Remojar de 10 a 15 minutos. Fórmula aproximada en gramos por lilro: Peptona de Carne Peptona de Caseina Dextrosa Extracto de Levadura Cloruro de Sodio Bisulfito de Sodio Agar 10.. Dejar en reposo de 5 a 10 minutos para que el agar se hidrate correctamente.J.250 9 1. 1951. 27:482.... Usos: Se emplea con buen éxito para aislar BrucelIas de diversos especímenes contaminados con una microflora..2 Es un medio de cultivo rico en nutrientes y factores accesorios de crecimiento.20 Dextrosa 1 Cloruro de Sodio 5 Agar 15 pH fínal 7. Cal.4 mi de solución acuosa de cristal violeta al 0.. APHA. New York.000 y tionina 1: 30. Usos: Se usa para el aislamiento y desarrollo de Brucella y en algunos procedimientos estándar de la APHA para el exámen de productos lácteos..Manual de Laboratorio de Bacteriología El medio es sensible a la luz lo que le provoca una disminución en la efectividad y en el color del mismo.. Reeomended Methods lor the Mieroblologleal Examinations 01 Foods.000. así como medio básico en bacteriología anaeróbica.1 450 9 Bibliografía: Weed A.. 1960. Es decir. New York. 1958. Para el recuento de bacterias coliformes deberán emplearse diluciones de la muestra. 124. Cuando se sospecha la presencia de Brucella en algun material de flora mixta se puede añadir al medio cristal violeta al 0... Fórmula aproximada en gramos por litro: Peplona especial No 2. y en el cual desarrollan adecuadamente los géneros Brucella y Listeria.. Para determinar el grado de contaminación causada por gérmenes del grupo coliforme en aguas de uso común.5 meg Cal. pH linal 7... alimentos y otros materiales de interés sanitario. Mezclar bien y calentar agitando continuamente y hervir más o menos un minuto hasta que se disuelva el material.6 mg 64.205 9 77. muy adecuado para aislar y desarrollar microorganismos exigentes..150 9 0.. Una vez sembradas éstas..9 mg 29. almacenarlo en la obscuridad y durante el menor tiempo posible. Vaciar en cajas de Petri. Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión (121 ~C) durante 15 minutos. y en caso necesario.... tne..95 mg 29.9 i 0.. utilizando la técnica del vaciado.900 9 10.1 15.. Agar Brucella Agar Biotriptasa Aislamiento de Brucella. a partir de suspensiones y/o maceradas en solución salina 73 ..1 %. potables y de drenaje.... Path.2 Preparación: Suspender 43 g del polvo en un litro de agua destilada de buena calidad. Bibliografía: Methods lor the Examination ot Water and Waste Waters... Clin. 140-1 450 9 Para cultivar Brucellas de diversos productos clínicos.0 10. Para diferenciar las 3 principales especies de Brucellas. APHA. natas.. se deberán preparar por separado y a partir del Agar Biotriptasa.. 1957. Es un medio muy empleado en bacteriología sanitaria. destacándose nítidamente del fondo azul obscuro del medio de cultivo. Distribuir y esterilizar a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos.2 Preparación: Suspender 20. pasando del azul fuerte al púrpura o al rosado. Dejar enfriar entre 45 a 50°C y distribuir en cajas de Petri o en otros recipientes apropiados.3 mg 2. Distribuir volúmenes de 3 mi en tubos de 13 x 100 mm. Si no se obtienen resultados precisos. book 01 Diagnostic Microbiology. o bien.1 450 9 Bibliografía: Simmons J. 1. raspados de mucosa vaginal. Usos: Este medio se puede emplear de la misma manera que el citrato de Koser para hacer la prueba de utilización de citrato como una de las reacciones delIMViC.0 g en polvo) por litro de medio (Bioxon 182-2). Publications 743.qrosa and Ortiz. USPHS. un lapso de 10 minutos para que se hidraten bien las partículas de Agar. esta base enriquecida de Agar Brucella sangre puede transformársele en un medio selectivo adicionándole los antibióticos apropiados o algunos otros inhibido res tales como 20 mi de bilis (2.5 mg de Cicloheximida por mi de medio de Agar para Clamidosporas. 1975.00 1. 1953. 216. Si se desea preparar este medio aún más selectivo: Dejarlo enfriar entre 45 . Esterilizar a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos. lIIinois. Inc. APHA. Torrp. London. Cicloheximida (actidiona) 6000 unidades 100 mg 100 mg Preparación: Medio especial que promueve y favorece la formación de Clamidosporas por Candida al- bicans.1 a 0. Charles C. 39:209. la mayor parte de las cepas de Candida Albicans son resistentes a 5 mg/ml de dicha droga. Este medio puede ser utilizado especialmente en la diferenciación de bacilos entéricos como se indica a continuación: Fórmula aproximada en gramos por litro: Agar Sulfato de Amorlio. Pediatrics 59:35. Negativos Escherichia Shigella Mima (.:!:. más 5 mcg/ml de hemina y 10 mcg/ml de menadiona (vitamina K1). Agar de Czapek Dox (Bioxon 251-1).9 :!:. Ed. Allen. 74 . . Preparación: Suspender 37 g del polvo en un litro de agua destilada de buena calidad. Mezclar bien y calentar agitando frecuentemente hasta ebullición y completa disolución.. Koneman. 1960. se inocula estriando la superficie y puncionando el fondo. de uso general. Recomendable para la diferenciación de coliformes aislados del agua. Smith Louis Os. Solamente los microorganismos que utilizan el citrato como única fuente de carbono. Si se desea restringir notablemente la difusión (swarming) de los Proteus.10 20. Bibliogratia: Kzudas y Mor~e. para cultivar gérmenes anaerobias. Una buena medida es practicar siembras por duplicado e incubar una placa en ambiente normal y la otra en una atmósfera enriquecida con CO2. 11 Th Edition. o si se prefiere el medio inclinado. Ann. La adición de antibióticos al medio de cultivo permite aislar directamente la Candida al bicans a partir de la muestra clínica en estudio e identificar la formación de Clamidosparas.50°C Y agréguele 40 unidades de Penicilina. globulosas.Boston 1977. se prepara una excelente base enriquecida no selectiva. incubando naturalmente en anaerobiosiso Es más. Washington.00 0. 0. 273-1 450 9 El Agar Brucella Bioxon puede hacerse más selectivo y dar un mayor número de aislamientos positivos. Renoux G. Int. simultáneamente incubar por duplicado. 40 microgramos de Estreptomicina y de 0. Dejar remojando el medio deshidratado (agitándolo de cuando en cuando). Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión durante 20 minutos.00 5. Hay que tener en cuenta que un cierto número de especies de Candida son inhibidas por 0. basándose en la utilización del citrato. Edwards & Ewing. J. Pueden hacerse cultivos en placa.08 Agar para Clamidosporas Cal. Dowell y Sommers.0 5. es necesario hacer nuevas pruebas incubando a temperatura ambiente durante 7 días.5 mg de Cicloheximida. Fosfato Monopotasico Azul de Tripan Polisacaridos purificados Blotina pH final 5. 1926.4 mg de violeta de etilo y la siguiente mezcla antimicrobiana: Sulfato de Polimixina B Bacitracina. New York.0 a 1.2 Manual de Laboratorio de Bacteriología 1.Philadelphia 1979.2 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Nota: Si al medio de Agar Brucella se le agregan 5% de sangre desfibrinada estéril de borrego. Suspender 24. redondas u ovales que presentan una pared doble y gruesa.. Lippinocotl Company.estéril de órganos. New York.2 15.00 0.0+) Listeria Positivos Enterobacter Arizona Klebsiella Citrobacter Salmonella Serratia Herella Agar Citrato de Simmons Prueba de utilización de citrato de entero bacterias. Ed. Pueden utilizarse otras mezclas antimicrobianas como Polimixina B 6000 unidades + Bacitracina 1 00 mg + 100 mg de Cicloheximida en un litro de medio de cultivo. siendo de ma El Agar Citrato de Simmons se usa para diferenciar las bacterias entéricas Gramnegativas. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater . Calentar con agitación continua y hervir un minuto. Enterobacteriacease. APHA Inc. La aparición de un crecimiento visible generalmente va acompañado de un cambio alcalina (azul) del indicador.00 0. 0. J. lo cual puede suceder con cepas de Providencia. agregar de 2 a 3 gramos de agar bacteriológico (Bioxon 150-1 ). si se le agrega a cada 1000 mi del medio esterilizado y enfriado entre 45 y 50°C.00 . Los tubos se dejan enfriar en posición inclinada de manera que el medio de cultivo en el fondo del tubo alcance una profundidad de 1. Cal.5 cm. Backt 66:502.00 2. Dis. 10th. Color Atlas and Text. Una tensión ligeramente baja de oxígeno favorece la formación de Clamidosporas por lo que la resiembra deberá hacerse por incisión profunda. heces. Fórmula en gramos por litro: . por cada litro de medio. etc. Fostato (5ihidrogenado de Amonio Fostato Dipotaslco Cloruro de Sodio Citrato de Sodio Sulfato de Magnesio Agar Azul de Bromotimol pH tinal 6.B.20 15. Thomas Pub. Los cultivos se incuban durante 4 días de 35 a 37°C. a 28 y 35°C de 24 a 76 horas. Inst. 1961. crecen en el Agar Citrato de Simmons. 87:325. The Pathogenic Anaerobic Bacteria. Obtención de Clamidosporas por Candida albicans.00 1. Las Clamidosporas son formas-de resistencia.1 . 1.0 mcg. Pasteur. Sin embargo. Standard Methods for the Examination 01 Dairy Products. Dejar remojar durante 5 a 10 minutos. 50 mg de Cloranfenicol en 1000 mi de medio. 1960. 1954. Sprinlield. Vaciar en cajas de Petri (12 mi por caja de 9-1 O cm de diámetro). Se puede emplear también como medio en placas. 1972. Véase en este mismo manual. H.50 0. Pueden presentar una ligera tonalidad azulada. Desde azules hasta azul intenso. 92:20. (12 mi por caja). 1 1173. 2 343-345. Agar amarillo Semejantes a E. lactobacilos y otros microbios. Calentar agitando con frecuencia y hervir hasta disolución completa del material (aproximadamente un minuto). opacas.P.3 I. así como en la formación de Clamidosparas por Candida albicans. Suspender 36. Vaciar en cajas de Petri. Recordar que un número de 100. Una vez solidificado. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Caseina Extracto de Carne Peptona de Gelatina Lactosa L. Azules. 1 1173. 1966 B.R. grises. Pequeñas de color amarillo intenso. de 0. Si se requiere bajar el pH a 3. Utilicese el volumen medio de la misma para que la primera porción del chorro arrastre a los microorganismos estacionados normalmente en la uretra. verdoso.0 3. Los microorganismos que provocan infecciones en las vías urinarias son por lo general abundantes y de una sola especie. Med..000 (10)5 o más ya tiene un gran significado clínico para considerarse como una infección en vías urinarias.50 0. J. y Sandys. Olor "dulzón". invertir las placas para evitar el exceso de humedad. Mezcle muy bien antes de vaciarlo en tubos o en cajas de Petri. 1965 B. Se presentan tanto en la punta del filamento (terminales) o intercaladas dentro de la hifa (Clamidosporas intercalares). Agar amarillo. 251-1 450 g Para cultivar hongos y promover la formación de Clamidosporas. opacas. Shigella. amarillas. Para cultivar gérmenes Gram positivos y Gram negativos en infecciones urinarias. 26:38-41. Sumamente mucosas y elevadas.1 450 g Bibliografía: Bebis T. opacas. Remojar de 10 a 15 minutos.2 30. Esterilizar a 15 libras durante 15 minutos. Mackey. "reparación: Suspender 50 g del polvo en un litro de agua destilada. Para ello vaciar el agar fundido enfriado entre 45 50°C. Retienen el colorante azul de tripán. Deje que los tubos solidifiquen en posición inclinada. 0. Técnica general para el cultivo de hongos: Klebsiellas Proteus Pseudomonas Salmonella. Tiene además la ventaja de impedir la difusión del Proteus en la superticie del medio. La siembra de la muestra puede hacerse por el método de las diluciones o por estría sobre la superficie del agar con asa calibrada. translúcidas con bordes irregulares. Providencia. Muy pequeñas.5. nos indica con qué tanto cuidado fue tomada la muestra de orina en estudio. coli pero mucosas y de mayor tamaño.E. Agar amarillo.00 MICROORGANISMOS Escherichia coli Enterobacter CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Grandes. amarillas elevadas.2 ~O 10 4~ IQO Q128 Q~ 1~0 Agar de Czapek Dox Cal.0 g en un litro de agua destilada.J. 1967 B. Calentar lentamente agitando con frecuencia. Impide el swarming ael Proteus.0 1. Verde azuladas pálidas.4 mm. Estafilococos Corinebacterias Evitar la humedad excesiva del medio. G. Agar azul. Poco elevadas.M. Usos: En el medio CLED (Cistina-Lactosadeficiente en electrolitos) crecen profusamente la gran mayoría de las bacterias que provocan infecciones urinarias pudiéndose diferenciar o identificar sus colonias respectivas. Serratia.1968. Los cultivos urinarios deberán realizarse con la primera muestra matutina y previo aseo escrupuloso de las zonas genitales. Efectuar los recuentos de colonias después de 18 horas de incubación a 35°C. D y Nayler G.J. Mackey. Technol. Remojar de 10 a 15 minutos. Con superficie mate típica y contornos irregulares. 232. Ampliamente usado en Microbiología de suelos para cultivar hongos y bacterias del mismo. GH. Muy pequeñas. Agar amarillo. lo que echaría a perder la prueba.Manual de Laboratorio de Bacteriología yor tamaño que las blastosporas. El Agar de Czapek Dox es un medio semisintético que contiene nitrato de sodio como la única fuente de nitrógeno y es uno de los medios sólidos más útiles IJara el cultivo de hongos en general.3 I. Agar amarillo. Dis.0 0..D. 1953. La presencia de bacterias contaminantes como difteroides.Cistina Azul de Bromotimol Agar pH linal 7. J. Reportar el número de ellas como colonias o bacterias por mi de orina.H. Guttman. Para el desarrollo y el recuento en bacteriología urinaria de gérmenes Gram positivos y Gram negativos. Inl. Preparación: Bibliografía: Nickerson y Mankowsky J. especialmente saprófitos y fitopatógenos. El col ibacilo es el germen que se aisla con mayol frecuencia. un volumen de más o menos 12 mi por caja de Petri desechable de 9 cm de 75 .P. Hervir durante un minuto y esterilizar a 15 libras durante 15 minutos.. Agar Cled (Cisti na-Lactosa-Deficiente en electrolitros) Cal.M. y Sandys. Lab. 0. Grandes amarillas o blanco amarillentas. Fórmula aproximada en gramos por litro: Sacarosa Nitrato de Sodio Fosfato Dipotásico Sulfato de Magnesio Cloruro de Potasio Sulfato Ferroso Agar pH final 7. Streptococcus fecalis.M. agregue 10 mi de ácido láctico al 10% por litro de medio después de la esterilización. con el centro ligeramente más obscuro.J.01 15. Se re.1 450 g Para aislar y diferenciar Estafilococos patógenos de la leche. pruebas de coagulasa.2 Preparación: Agar de Dextrosa Suspender 202 g del polvo en un litro de agua destilada.15 minutos. que esten rodeadas por un litro de agua destilada. Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión durante 15 minutos.Agar de Chapman Stone Cal. Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Levadura Peptona de Caseína Gelatina D.P.0 Agar de Eosina y Azul de Metileno Para el aislamiento y diferenciación de coliformes de otras enterobacterias de interés médico y sanitario. no productoras de pigmentos. pudiendo aislarse varios gérmenes como Neisserias patógenas. Bibliografia: Chapman J. a pesar de que estén rodeadas por zonas claras no deberán de tomarse en cuenta. es conveniente agregar una gota de solución de Usos: púrpura de bromocresol al sitio de donde se tomaron las colonias para determinar si hubo Se puede emplear en análisis microbiológifermentación del manito!. 76 .2 Este es el medio clásico.1 a 0.0 10.0 15. caciones por alimentos contaminados. Dejar que el medio se solidifique y luego invertir las placas para que no se deposite demasiada humedad sobre la superficie del mismo. Al agregársele sangre se mejoran las características nutritivas.vuelve incoagulable. Inc. son coagulasa positivas. Es un me. Hervir un minuto.065 13. Bacl..durante 15 minutos.2 Usos: El Agar de Chapman Stone se usa igual que el Agar para Estafilococos No.9 :t. Así mismo. Recuento y aislamiento de bacterias. especímenes clínicos).5 pH final 7. Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión durante 10 minutos. Standard Methods lor Examination 01 Dairy Products.medio ya que el agar sufre una hidrólisis que lo llas. se utiliza para el estudio de las enterobacterias. Calentar agitando con frecuencia y hervir más o menos un minuto hasta disolución del medio. Mezclar correctamente.2. Dejar que se enfríe la solución a unos 50°C.:1:.0 75. Calentar agitando con frecuencia. USOS: pH linal 6. por lo que se puede apreciar directamente la actividad de la gelatinasa (reacción de Stone). que al igual que el Agar con Eosina y Azul de Metileno de Levine (Bioxon 223). 110 (Bioxon 105).Esterilizar a 121°C (15 lb de presión) comienda repicar dichas colonias y emulsio.000 0. El medio tiene un color blanco y aspecto opaco. sido esterilizado.P HA Inc..\dir después de acidificar el (por ingestión de la enterotoxina) son amari. 0.cual indica reacción positiva. para que la composición del medio se uniformice y vaciar en cajas de Petri estériles.000 2. Remojar de 10 a una zona clara. 1945. 1960. que se recomienda para el recuento de microorganismos presentes en los concentrados de jugos de frutas.0 :t.000 5. Mezclar y remojar unos 10 minutos para que se hidrate correctamente el Agar.0 10. 0.2 mi de Caldo Infusión de Una vez esterilizado enfriar a 40 . amarillo-doradas o de color naranja.HA Inc. Las colonias de Estafilococos típicamente productoras de intoxicaciones alimentarias Nunca se vuelva a fu!. aspecto y color de las colonias e la misma en ambos medios.Suspender 43 g del medio deshidratado en mente anaranjadas). Un color amarillo cos de productos congelados. te por estría superficial y se incuban de 30 dePreparación: Manual Laboratorio de Bacteriología a 32°G-durante 48 horas. Cal. la. productos lácteos y de otros alimentos. Neumococos y otros.. Recomended Methods lor the Microbiological Examination 01 Foods A. 50: 201. dio de uso general mentan el manitol.frecuentemente y hervir durante un minuto.1 mi claros que se observan alrededor de la de solución de ácido tartárico al 10% por colonia indican degradación (proteólisis de la cada litro de medio. A. Recomended Methods lor the Mlcrobiological Examination 01 Foods APHA. Las zonas o halos es necesario acidificar el medio con 7. 1958. New York. New York. evitando la formación de burbujas. fundido y enfriado a unos 45°C.0 55. Calentar agitando tafilococos patógenos causantes de intoxi. Base de Agar Sangre (Bioxon 201) Y son gelatinasa positiva (reacción de Stone Bibliografia: positiva). Las muestras sospechosas de contener estafilococos patógenos (alimentos diversos. 297.0. Ed. Agitar suavemente. distinguiéndose de éste en que ya contiene sulfato de amonio.000 5.Manitol Sulfato de Amonio Cloruro de Sodio Foslato Dipotásico Agar 2.1 450 g Peptona de Gelatina Laclosa Sacarosa Fosfato Dipotásico Eosina Y Azul de Melileno Agar 10. Y vaciar Cerebro Corazón (Bioxon 112) y efectuar en cajas de Petri estériles. Cualquier colonia productora de pigmentos (amarillas o débil. probablemente serán de es. Remojar de 10 a 15 minutos. se siembran masivamen Es un medio de cultivo rico. Fórmula aproximada en gramos por litro: pH linal 7. 1958.0 5. narlas en 0. New York. después de que éste ha gelatina) por la enzima gelatinasa. fer. 106-1 Dextrosa Cloruro de Sodio Agar 3 10 10 5 15 450 g Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada de buena calidad. Vaciar en cajas de Petri aproximadamente 25 mi por placa.0 30. pero no es apto para reacciones de hemólisis por producen beta hemólisis en medios como su alto contenido en dextrosa.45°C. La morfología. 125. para lo. prácticamente desprovistas de color. Preparación: Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Carne Mezcla de Peptonas Cal. Las colonias pálidas. destinadas al consumo humano. 110 Medio selectivo para aislamiento de estafilococos. Por su contenido en lactosa y sacarosa es posible diferenciar en el primocultivo: Salmonellas y Shigellas.0 5. etc. casos de neumonía. con una gota de solución de ácido Sulfosalicílico al 20 %. 1950. 1953. Además de emplearse ampliamente en Bacteriología Médica. 10th Ed.36°C. de diámetro. Si se agrega a las colonias seleccionadas unas gotas de azul de bromotimol. COlü¡¡ias grandes de 4 a 6 mm. New York. New York. Puede evitarse la difusión del Proteus agregando al Medio de Cultivo huellas de alta-pnitrofenil-glicerol. elevadas y mucoides con tendencia a unirse.0 2. que entOrpece el aislamiento de los gérmenes de interés médico. 1952. Citrobacter y Aeromonas. Presentan a la luz transmitida un centro azul-negro. Lactosa y Sacarosa negativas de otras enterobacterias lactosa negativas pero sacarosa positivas. Inc.2 Preparación: Suspender 149 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. podemos apreciar la fermentación del manitol apareciendo alrededor de ellas un halo amarillo. pH final 7. También se emplea este medio para aislar estafilococos que contaminan alimentos diversos y que producen intoxicaciones alimentarias. Society 01 American Bacteriologists.HiII New York. semejantes a SalmonelIa y Shigella. pueden presentar colonias plumosas semejantes a telarañas (miceliales). desde incoloras hasta ambarinas. Escherichia coli Usos: El Agar para Estafilococos No. de diámetro. Ligeramente elevadas. 77 . a la luz reflejada.5 10. Homogenizar y calentar agitando frecuentemente. es ampliamente inhibida por los colorantes de la fórmula.0 30. Bacl. puntiformes.0 75.0 En este medio también es posible la identificación rápida de Candida albicans (incubado en CO2) y a veces se logra aislar a Nocardia. Bibliografía: American Public Heallh Association. Transparentes. Bacl.' 450 9 Es un medio altamente selectivo para el aislamiento e investigación de estafilococos. Cal. incoloros y bastante inhibidos. de 1 a 2 mm.0 10. para la detección y recuento de microorganismos coliformes. Por último. uretritis. 1946. forunculosis. vaginitis. APHA.Manual de Laboratorio de Bacteriología Agar para Estafilococos No. Remojar entre 10 y 15 minutos. las placas se pueden cubrir con 5 mi de una solución saturada de sulfato de amonio.0:t. 63:147. Chapman J. Esterilizar a 15 lb durante 15 minutos. Una vez esterilizado homogenizar para suspender el precipitado y vaciar en cajas de Petri. e incubarlas durante 12 minutos para apreciar la hidrólisis de la gelatina: Se observan zonas claras (Reacción de Stone). 105. M ICROORGAN ISMOS CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Elevadas o ligeramente convexas. o mejor aún. sobre todo la flora Gram positiva.Manitol Cloruro de Sodio Foslato dipotásico Agar 2. Examination ot Oairy Products. Usualmente no presentan brillo metálico. 51. Algunas cepas no muestran brillo metálico. meningitis. Muy pequeños. Bibliografía: Chapman J. Las colonias no siempre presentan un aspecto típico. Después de 24 a 48 horas de incubación en atmósfera de un 10% de CO2 ya 35 . de tamaño medio.0 15. 110 se emplea para aislar estafilococos de procesos purulentos. de diámetro. rodeado de un borde angosto y claro. American Public Heallh Association. Manual of Microbiological Methods McGraw. El medio contiene gelatina y manitol facilitando así el aislamiento de estafilococos que atacan y degradan dichas sustancias. De 2 a 3 mm. Enterobacter aerogenes Klebsiella Salmonella y Shigella Candida albicans Estafilococos Coagulasa Positivos Proteus Sp.409. y brillo métalico azul verdoso. A la luz transmitida muestran un centro grisáceo café y bordes claros. Poca tendencia al desarrollo confluente. se utiliza en las técnicas recomendadas por la American Public Health Association y la Sociedad Americana de Bacteriólogos. tales como Proteus vulgaris. Fórmula aproximada en gramos por litros: Extracto de Levadura Peptona de Caseína Gelatina Lactosa O. 2nd Ed. Cuando no hay swarming. 1957. APHA Inc. Hervir durante un minuto. que pueden estar contaminando diversos alimentos yaguas de bebida de diversa índote. Es posible enriquecer el medio agregando 5% de sangre con lo que se obtienen buenas reacciones de hemólisis y formación de pigmento amarillo dorado. La microflora acompañante. 0. Oiagnostic Procedures and Reagents. . 1960. 38:30.1 450 g Medio excelente para obtener desarroltos abundantes de microorganismos muy exigentes y difíciles de cultivar. 78 . embutidos... 11th Edition APHA. Petczar y Vera Milk Plant Monthy. Medio para enriquecer y aislar selectivamente Estreptococos de diversos materiales clínicos y de productos de importancia sanitaria altamente contaminados.5% de sangre desfibrinada estéril de conejo o de cordero.. sirviendo además como indicador de hemólisis. También se emplea para el análisis de materiales clínicos como sangre.. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peplona de Caseína 5.0 .... Ca!.Manual de Laboratorio de Bacteriología La adición de sangre desfibrinada (puede hacerse aún más rico adicionándole 1.. 0. Suspender 24 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. en caso de infección contienen un solo germen y generalmente no están contaminadas con flora acompañante alguna..0 0..2 Preparación: Usos: Este medio permite obtener una buena multiplicación de microorganismos (crecimiento eugónico) aún con los gérmenes más difíciles de cultivar. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peplona de Caseina Peptona de Soya Cloruro de Sodio Sulfito de Sodio L.. tales como Haemophilus...0 5.3. Neisserias.. se ajustan a las indicacíones del libro Standar Methods for the Examination of Water and Wastewaters. Lactoba.10 g del polvo en un litro de agua destilada estéril de buena calidad..5 g de Agar. Bruceltas. Mézcielos bien y déjelos remojando de 10 a 15 minutos para que se hidraten correctamente las partículas de Agar. y naturalmente... Preparación: Una vez esterilizado enfriar a unos 40-45°C y vaciar en cajas de Petri..:!:. 133. aumenta notablemente su poder nutritivo (ya de por sí bastante considerable). este medio es ideal para cultivar microorganismos delicados productores de enfermedades y para obtener cultivos masivos en la preparación de antígenos y vacunas... Para el recuento de colonias en alimentos enlatados.4 g de polvo en un litro de agua destilada.0 4. Las técnicas que se siguen para preparar diluciones.. Bac!. Frank J... Standard Methods for the Examination 01 Water and Was. así como en el análisis bacteriológico de la leche y otros productos lácteos. Evite el sobrecalentamiento.Cistina Dextrosa Agar pH final 7.. Bac!. Asimismo.. lewater. a los no hemoliticos. Remojar de 10 a 15 minutos. Ca!. pero si se le agrega 0.. Agar para selección de Estreptococos Agar Estreptosel Agar Eugon Cal.0 mi de polienriquecimiento por cada 100 mi del medio) achocolatada o no. 54:14. contar colonias.5 15..0 Extracto de Carne....0 . etc. 0... cilos... Esterilice en autoclave a 12 libras de presión (118°C) durante 15 minutos. LCR o líquido pleura!. Es muy útil tanto en Bacteriología Médica como en Microbiología de Alimentos. Remojar de 10 a 15 minutos. En Bacteriología Alimentaria se usa ampliamente para detectar la presencia de bacilos lácticos en carnes crudas.2 0. Inc.. pH linal 7. New York. si se desea. 1955. Pasteurellas. 1947. 70:269. Bibliografía: Suspender 44..... Distribuir en tubos de ensaye o matraces y esterilizar a 12 libras (118°C) durante 15 minutos.. Es un medio altamente nutritivo. y en general.1 4509 Bibliografía: Vera M... etc... Dejar que se enfríe el medio entre 45-50°C y agregar sangre desfibrinada estéril al 5% de cordero o de conejo.0 Agar Extracto.0 Agar 15.. ahumadas.0 Dextrosa 1. Déjelas solidificar y una vez endurecida SI inviértalas para evitar que se les deposite un exceso de agua de condensación... Vacíe en cajas de Petri. permite el desarrollo de Histoplasma capsulatum y Nocardia.. Glucosa y Tripticaseína Recuento en placas de bacterias en aguas potables y de drenaje..0 Usos: Tienen los mismos usos que el caldo anteriormente mencionado..2 15. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. y para pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos. 1949. incubar. y está preparado de acuerdo con la fórmula del agar estándar nutritivo (APHA).. Esterilizar a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos..1 450 g Básicamente no es más que el Caldo para selección de Estreptococos o Caldo Estreptosel (Bioxon 264-1 ).. distribuir en placas. Estas muestras.. Ca1entar agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta disolución completa de los grumos de agar. 254. Caliente a ebullición durante 1 minuto con agitación continua. al cual se le ha agregado 13. 299.:!:. Glucosa y Tripticaseína se emplea para el recuento bacteriano en aguas potables y de drenaje por el método de la cuenta en placas. Usos: El Agar Extracto.7 5. En estas condiciones da muy buenos resultados para aislar e identificar diferentes grupos de Estreptococos como a los alfa y beta hemolíticos. en la detección y estudio de problemas sanitarios que se presentan en la industria alimentaria. etc... Preparación: Suspender 45.J. Agar Tergitol 7. Asimismo. Véase en este mismo manual las indicaciones y usos de esos medios. rosadas. Remojar bien entre 1 O a 15 minutos y calentar a ebullición agitando continuamente. No son mucoides. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 lb) durante 15 minutos. o bien inocularlo en medios líquidos de enriquecimiento. Caldo Selenito Cistina o Caldo GN. Sta/e. GERMENES Escherichia coli Peptona de Gelatina Mezcla de Peptonas Lactosa Mezcla de Sales Biliares Cloruro de Sodio Agar Rojo Neutro Cristal Violeta 17. 109. Puntiformes. opacas y escasas. Cal. Agar XLD. Hacer resiembras de estas últimas en placas de Agar de MacConkey y volver a incubar. Incoloras. rosa pálido. Dep/. No son mucoides. Incoloras. Agar Sulfito de Bismuto (altamente específico para Agar de MacConkey Los gérmenes Gram positivos son inhibidos por las sales biliares y el cristal violeta. Agar Entérico Hektoen. Suspender 50 gramos del medio en un litro de agua destilada o desionizada de buena calidad. opacas de color rosa pálido. mucoides. Se recomienda sembrar simultáneamente las muestras en otros medios más selectivos tales como Eosina y Azul de Metileno.0 3. Pueden rodearse de un precipitado opaco de sales biliares. Las enterobacterias fermentadoras de la lactosa bajan el pH del medio que es detectado por el indicador rojo neutro dando colonias rojas o rosadas. rojas. orinas. Dejar solidificar y luego invertir las cajas para evitar que se deposite tlr¡ exceso de humedad en la superficie del medio. opacas y con un halo claro como de 1 mm de diámetro alrededor de la colonia. incoloras o ambarinas. 79 . Rojas o rosa. tales como Caldo Tetrationato. Escasas. puntiformes.5 0. Joseph Md. No son mucoides. Enfriar a 45-50°C'y vaciar en cajas de Petri unos 20 mi por placa. Procedures. especial para Salmonellas. En el agar de MacConkey crecen también bacilos Gram negativos que no pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. Agar Verde Brillante. Hervir durante un minuto. Shigellas y coliformes a partir de heces fecales. transparentes o rosa muy tenue.0 10. hasta café verdosas. Por último. como Pseudomonas y Aeromonas. Bibliografía: MacConkey J.03 0. aguas negras y diversos alimentos SalmoneJ/a typhi).1 450 9 Fórmula aproximada en gramos por litro: CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS De rojas o rosadas.1 :L 0.001 Grandes. Rojas si fermenta a la lactosa. 5:33.5 5. Las no fementadoras de la lactosa dan colonias transparentes. 1960. transparentes. rosadas. Híg. pueden desarrollarse en número reducido colonias puntiformes de Streptococcus fecalis (enterococos) de color rojo y de algunos estafilococos cuyas colonias son pequeñas. Grandes.0 1. Agar SS.0 13. Klebsiella Enterobacter Serratia Arizona Citrobacter Proteus Pseudomonas Salmonella Shigella Estafilococos Enterococos pH final 7. Incoloras. transparentes. Incubar placas y caldos a 35°C de 18 a 24 horas. transparentes o ambarinas.Manual de Laboratorio de Bacteriología Usos: El especimen puede sembrarse directamente en la placa por estría superficial. 1905.2 Preparación: Incoloras y transparentes Incoloras. rojas si fermentan la lactosa. Olor dljlzaino característico. este medio puede usarse en la diferenciación de especies de Mycobacterium. Medio empleado amp1iamente para aislar e identificar selectivamente a enterobacterias como Salmonellas. Incoloras.Heal/. Preparación: El Agar Nutritivo es un medio de uso general en el laboratorio.:!:. Si se desea. Enfriar a 40-45°C y vaciar en cajas de Petri.0 3. También se emplea.8 . conservación.0 mi del poli enriquecimiento (Bioxon 304). J. 4:147.Manual de Laboratorio de Bacteriología Para bajar el pH del medio a 4. Bibliografía. No sobrecalentar el medio en ningún momento. Proeedures and Reagents. se coloca una esponja o algodón húmedo y una vela encendida. Distribuir y esterilizar a 121°C (151b de presión) durante 15 minutos. Cal. 0.300.1956. Calentar agitando con frecuencia y hervir durante un minuto.J. Bael. por ejemplo indoldescarboxilasa y lisina-descarboxilasa. Una vez acidificado éste. 1958. Path 29:291. Mueller and Hinton A. envases de hojalata. 110. Proe. mohos y bacterias (recuento total de microorganismos) en diversos preparados de la industria farmacéutica. al Agar Micológico se le pueden agregar 0. mezclar y calentar a ebullición de 1 a 2 minutos hasta disolver el producto. no selectivo y adecuado para el cultivo de microorganismos poco exigentes. Soe. frasco de vidrio de boca ancha.. y como base para preparar medios de cultivo más ricos adicionados de líquido ascitico.5 1. Remojar de 10 a 15 minutos y mezclar bien. de uso industrial y residuales. leches y otros alimentos. Neauralh y Berliner Seienee. 5. se aconseja hacer cultivos simultáneos con médios que contienen antibióticos como el Agar para Selección de Hongos (Bioxon 259).4 . 1960. Ine. previa adición de sangre de carnero o humana. más 1. Bridges.05 g de cloranfenicol. Para obtener solamente el número de levaduras y mohos. etc.0 Preparación: Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Remojar unos 15 minutos. Usos: Muy empleado en los análisis bacteriológicos de aguas potables. Greenberg and Cooper Can. en las pruebas de sensibilidad (antibiogramas). preferiblemente la primera.7. médica e industrial. Mezclar bien agitando frecuentemente. Suspender 23 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. esto puede lograrse si dentro de la jarra. De cualquier modo. and Med. identificación y producción de pigmentos por diversos hongos presentes en bebidas. Usos: Es un medio útil para el desarrollo de bacterias del género Neisseria.2 Suspender 38 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Lo mismo que en pruebas bioquímicas.. 80 . calentando en baño maría a 80° C 10 minutos.0 a 4. 49:330.0 Preparación: En Microbiología Médica se le utiliza para aislar hongos patógenos causantes tanto de micosis superficiales como de micosis profundas. Almidón Agar pH fínal 7. alimentos. 1941.0 15. pueden prepararse placas o tubos de agar "chocolate". no se vuelva a calentar porque el agar sufre un proceso de hidrólisis y pierde su capacidad gelificadora. materiales clínicos y productos farmacéuticos. Applied. Lo anterior también es válido para la industria de bebidas y alimentos. Mierobiol. 83:143.. protein-free medium for primary . yesterilizar a 121°C (15 lb de presión) por un tiempo no mayor de 15 minutos. Olivo y Chandler. New York.5 g de cicloheximida por litro de medio para evitar el desarrollo de hongos saprófitos (mohos) y 0. 1956. El Agar Micológico se usa también para valorar la actividad fungicida de medicamentos farmacéuticos. Hervir durante un minuto. Med. Para realizar las pruebas de sensibilidad con sulfonamidas. cerrando luego herméticamente. 0. El medio deberá mantenerse húmedo en su superficie.2 Infusión de Carne de Res Peptona de Caseina Aeida '..104. Bibliografia: Harris and Coleman Diagnoslie.:!:. Agar Micológico (Agar Micofil) Se obtienen mejores resulados para aislar Neisserias patógenas preparando un agar chocolate con el Mueller Hinton adicionándole a cada 100 mi del medio terminado y flÚido 1. Bibliografía: Huppert y Walker.0 16. 0.0 . Fórmula aproximada en gramos por fítro: Peplona de Gelafína Extracto de Carne de Res Agar pH final 6. Después de este tiempo se tendrán que revisar periódicamente las zonas de inhibición ya que el microorganismo puede desarrollar cuando la concentración del agente antimicrobiano comienza a disminuir. 146:648. que impide el crecimiento de las bacterias contaminantes. 4th Edition APHA.0 17. A. Clin. por cada litro del mismo.0 se agregarán 15 mi de solución de ácido láctico al 10%. Biol. Remojar de 10 a 15 minutos. Assn. Se recomienda incubar las cajas a 35°C. 2471 Agar de Mueller Hinton 450 9 Pruebas de sensibilidad a antibióticos y cultivo de Neisseria Cal. 1956. en las pruebas de sensibilidad y resistencia.satation 01 the Gonoeoeeus and meningoeoeeus. Exp. en atmósfera de CO2 (técnica de la vela).0 10. Al mismo tiempo. También para efectuar recuentos de levaduras.5 17. 72:79.1 450 9 Para el cultivo. Fórmula aproximada en gramos p'" lilro: Agar Nutritivo Uso general en bacteriología Cat.0 pH final 7. etc.:!:. deberá bajarse el pH del medio de 4. Puede emplearse en bacteriología sanitaria. Esterilizar en autoclave a 12 libras de presión (118°C) durante 15 minutos. recuento. En un medio muy rico en nutrientes que se recomienda para el aislamiento y desarrollo de gonococos y meningococos. Wetmore and Goehenour J. sobre todo. 1963.0 mi de la suspensión VCN (Bioxon 303).2 . 1 450 9 Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Soya Dextrosa Agar 10. las cajas deben examinarse después de 12 a 18 horas de incubación. Se le emplea también en la multiplicación de microorganismos para producir vacunas y antígenos en general. Meet. No deberá esterilizarse en autoclave. transparentes e incoloras.5 0. Preparación: Suspender 111 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada y remojar unos 15 minutos. Dis. 1942. 146. Usos: Debido a su gran poder de inhibición.0 10. a partir de heces. Agar pH final 7. Mezclar bien y calentar a ebullición durante un minuto. Si el medio va a usarse para el cultivo de Neisseria. cofi. Proteus y algunas Salmonellas Incoloras. 1942. La inhibición de bacterias Gram positivas se obtiene por una mezcla de sales biliares.0 mi de la mezcla antimicrobiana VCN Bioxon más 1. Agar XLD y Agar Entérico Hektoen.1 Manual de Laboratorio Bacteriología Agar para de Salmonella y de bacterias Shigella (Agar SS) Aislamiento de enterobacterias patógenas Cal. Se obtienen mejores resultados para aislar Neisserias patógenas. Verter en placas. forman colonias pequeñas que varían del rosa al rojo. Fosfato de Sodio. incoloras. Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Carne Mezcla de Peptonas Cloruro de Sodio D.0 lO. 22 nd.224. agregando a cada 100 mi de agar chocolate. en cambio los coliformes que son bastante inhibidos. Steinberg and Mollov J. June 20-21. darán un precipitado amarillento de ácidos grasos alrededor de la colonia. Agar de Eosina y Azul de Metileno. Mezclar bien. Agar de MacConkey. 1950. en un tarro con bujía o vela encendida.0 5.Manitol Agar Rojo de Fenol. Inl. Vaciar en cajas de Petri. Remojar de 10 a 15 minutos.1 Agar de Sal y Manitol Aislamiento de estafilococos Cal.5 8. Health Reporls. carnes y derivados cárnicos incluyendo conservas de pescado. Pequeñas que van del rosa al rojo.0 8. se pueden añadir materiales de enriquecimiento tales como plasma de caballo.3 lO. Preparación: Usos: La degradación del manitol con producción de ácido cambia el color del medio. exudados faríngeos. Generalmente se incuban las placas unas 36 hrs. Para obtener un desarrollo satisfactorio de Gonococos. Agregar antibióticos VCN (Bioxon 303) y polienriquecimiento (Bioxon 304). Bacl.. Agitar para obtener una suspensión homogénea. Fórmula aproximada en gramos por litro: Mezcla de Peptenas Dextrosa Cloruro de Sodio. Las placas del medio se conservan en buenas condiciones de trabajo durante una semana en el refrigerador. Normeastern Cont. Clin.0 15. Debido a su alto contenido de cloruro de sOdio. Ann. hemoglobina y azul nilo o almidón y sangre.0 10. Remojar unos 15 minutos. 204. Ven. apareciendo las colonias de estafilococos no patógenos de tamaño pequeño y rodeadas de una zona roja. Vel. Velilla. J. Evítese la congelación. etc. De mayor tamaño que las de E. Faber and Pelczar Am.0 0. con un centro negro si producen H2S. de rosado a amarillo. Enfriar y añadir 5% de sangre de cordero desfibrinada y estéril. Proc. heridas. 27:56. 1947.0 Es un medio selectivo muy empleado para aislar estafilococos patógenos de materiales clínicos diversos (orina.4 lO. este medio puede sembrarse con una buena cantidad del material en estudio. Incubar a 35°C pero no a más de 37°C. enfriar y vaciar en cajas de Petri sin dejar de agitarla. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto.5 1. COLONIAS Usos: El agar "chocolate" se utiliza en diversas formas. 1947 Suspender 60 9 del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Al incubar placas para el cultivo de Neisseria deberá usarse una atmósfera reforzada con bióxido de carbono.0 5. Research 8:275. calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto. opacas de crema pálido hasta rosa.2 5.0 10. dan colonias más grandes y rodeadas de una zona amarilla. pH final 7. Workers in Pullorum Dlsease Control Burlington. 1950. 3 ha sido utilizado para el aislamiento y cultivo de gérmenes patógenos exigentes. 23. 3 Aislamiento patógenas Cal.5 5.0 75. BACTERIAS Shigel:a y la mayor parte de las Salmonellas Escherichia cofi Claras. Enterobacter. Bibliografía: Pelzer and Steffen J. las colonias de estafilococos patógenos fermentadores del manitol. Cutloch Am. Las bacterias formadoras de sulfuros dan colonias que presentan un centro negro y un halo claro alrededor cOmo Proteus y algunas especies de Salmonella. los estafilococos. 81 . calentar la mezcla a 80°C. en cambio. Research 8:173. Las bacterias no fermentado ras de la lactosa (supuestamente patógenas) dan colonias claras. tanto frescos como enlatados. J.330 mg Preparación: Suspender 45 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. una yema de huevo en condiciones de esterilidad.0 13. durante 10 minutos o hasta que adquiera un color café chocolate. si se desea.1 450 g 450 g 450 g El Agar Proteosa No. Bibliografía: Me. También se utiliza en la industria alimenticia con los mismos fines. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos. 1950. genitales. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos.0 mi de solución de Polienriquecimiento Bioxon. 65: 1075. Bibliografía: Pub.).025 0. Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Carne Mezcla de Peptonas Lactosa Mezcla de Sales Billares Citrato de Sodio Tiosulfato de Sodio Citrato Férrico Agar Rojo Neutro Verde Brillante pH final 7. Este fenómeno concuerda bastante bien con la propiedad de coagular el plasma que presentan los estafilococos patógenos coagulasa positivos. Si agregamos a cada litro del medio. Agar Tergitol7. orina y alimentos diversos.Agar Proteosa No.2 1. Vermont. especialmente Neisseria gonorrhoeae. puede hacerse una siembra masiva del material en estudio. 144.5 8. el aislamiento e indentificación de Estafilococos que se encuentran en la leche y productos lácteos. 1. transparentes. Med. Paper Read Al Microbiological Congress. Lab.025 Medio diferencial selectivo muy empleado en bacteriología sanitaria para aislar Salmonella y Shigella. pero además deberán inocularse paralelamente otros medios menos inhibidores como Agar de Desoxicolato. transpa[entes. Vel. Klebsiella mucosas.0 15.0 0.2 20. que además de fermentar el manitol producen lipasa. Manual de Laboratorio de Bacteriología 82 . 2 Preparación: Suspender y remojar de 10 a 15 minutos 40 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. 69:516. Bibliogralía: Altord.A" Inc.. Bacl. Si se desea puede agregársele antibióticos. Clin. 38:304. 1955. Path. Brucella. Standard Methods for the Examination of Dairy Products 11th Ed. como Neumococos. Permite la multiplicación abundante y satisfactoria de gérmenes de desarrollo difícil y exigentes. Neumococos. Fórmula aproximada de gramos por litro: Peptona de Caseína Peptona de Soya Cloruro de Sodio Agar 15 5 5 15 pH final 7. 1962. Si se preparan placas de agar sangre para estudios de hemólisis.H. 1960. Haemophilus vaginalis. Esterilizar en autoclave entre 118 y 121°C ya una presión no mayor de 15 lb por 15 minutos. Pasteurella. Neisseria. Neisserias. elc. Hentges A. Wiese and Gunter J. Vibrio..P.1 450 g Una lista somera de microorganismos que se desarrollan en este medio es la siguiente: Estreptococos. Appleid Microbiot. preferiblemente de esta última. 70:125. Muy útil para pruebas de hemólisis y de sensibilidad a los antibióticos (antibiogramas). Calentar agitando frecuentemente durante un minuto para que se disuelva. 1959. 108.Manual de Laboratorio de Bacteriología Agar de Soya Tripticaseína Aislamiento y cultivo de gérmenes exigentes Cal. aumentar el tiempo de esterilización pero no la presión ni la temperatura. 1955. New York. Ctapper and Parker J. etc. Usos: Por contener dos P1ptonas obtenidas por hi drólisis enzimática a partir de caseína y soya. Candida. Listeria..3 1:. Enfriar y vaciar en placas de Petri. incluyendo aquellos de cultivo difícil y delicado. A. 0. tanto aerobios como anaerobios.J. Bacl. Es un medio sólido. muy rico en nutrientes por lo que tiene un "uso general" en los labo ratorios de Microbiología. En caso de preparar volúmenes grandes. en este medio se desarrollan ampliamente una gran variedad de microorganismos. También se le pueden agregar otros nutrientes o bien inhibores para usos especiales. Corynebacterium. Estreptococos. agregar de 5 a 10% de sangre de conejo o de carnero. 83 . Como carece de carbohidratos es muy útil para estudiar reacciones de hemólisis y también para preparar agar-chocolate. Hereluk and Gunderson. 22:299. se irá oxidando inhibiendo el ennegrecimiento de las colonias' poco a poco hasta adquirir un color productoras de sulfuros. gallinarum. y gradualmente un color verde muy pálido. dejar que solidifique (que se forme un gel) e incube de 24 a 48 hrs. Elevadas y generalmente más pequeñas que las de S. por ser fuertemente in. las Salmonellas reducen las sales de hierro y bismuto a sulfuro de hierro negro que se deposita en la colonia. En el medio caliente una vez depositado en las placas. aguas negras. el medio que pronto y dan reacciones retardadas.precipita en el medio de cultivo. Verdosas si no son productoras de sulfuros como S. 84 .n refrigeración durante 4 días antes de usarlo para aislar Salmonella typhimurium * No confundirlo con el medio de Wilson y con el fin de hacerlo menos inhtbidor. Agar SS.000 0. Colonias en "ojo de pescado o de conejo" Se vuelven uniformemente negras a las 48 horas. Las placas deben permanecer parcialmente descubiertas hasta que se seque la superficie del medio y usarlos el mismo día. Si Las placas delgadas con poco medio. 0. typhi y por lo general sin brillo metálico en el medio que rodea a la colonia.000 5. Halo negro griOtras Salmonellas sáceo con brillo metálico después de 36 a 48 horas de incubación. debido a la concentración francamente verde. Agar Entérico Hektoen. Sh.300 8. Pequeñas y pardas como S. 1962) que se Junto a este medio. Proteus des. descártelo.025 20.de Metileno. como gotas de Arizona y Citrobacter plomo. Salmonella typhi Preparación: Suspender 52 g del polvo en un litro de agua destilada. 5 mi de la suspensión en no menos de 20 mi del medio previamente fundido y enfriado a unos 4550°C.000 4. choleraesuis y S. Entre las 18 a 24 horas se forma en el medio de cultivo un halo negro grisáceo y con brillo metálico rodeando a la colonia. Al llegar a este momento de los ingredientes. Agar Mac Manual de Laboratorio deyBacteriología Conkey. Usos: a bismuto metálico (Mac-Coy. vacíe en cajas de Petri no menos de 20 mi del medio fluido. Cook (1952) recomienda dejarlo p. Halo gris negro y con brillo metálico. Cal. flexShigella neri y Sh. está en forma reducida. bordes claros y translúcidos. Por lo común. Casi todas inhibidas. los autores ingleses recomiendan no reconstituir más de 400 mi en un solo matraz para lograr una mejor uniformidad de mezclado. Vaciar aproximadamente. etc. formando un hibidor. Negras si producen H2S. deprimidas en el centro y con bordes elevados (crateriformes). Grandes elevadas. así como otros baCilos entéricos. Hervir no más de un minuto agitando continuamente para que se disuelva completamente el Agar. Mezclar muy bien y remojar el medio deshidratado de 10 a 15 minutos para obtener un . Desarrollo ocasional. Agar XLD. negras gisáceas. typhi. Agar Tergitol7. En el caso de crecer.buen gel. se desecan se guarda en refrigeración. que son bastante inhibidas. Pueden hacerse inoculaciones por vaciado de una suspensión de heces como del 10% en agua destilada o en solución salina estériles. aguas de bebidas y diversos alimentos La selectividad del medio depende en gran parte de la dispersión uniforme del precipitado del sulfito de bismuto en el gel final. Dejar que el medio se enfríe a 45°C Esto es muy importante) y sin dejar de agitarlo. Las cepas no fermentadoras de la lactosa varían del verde al café. Es por esta razón que el medio debe mantenerse bien mezclado y no vaciarse mientras estédemasiado caliente. Colonias que pueden ser verCOllformes. medios selectivos menos inhibidores. tiende a precipitarse el sulfito de bismuto en forma irregular y desordenada propiciando que en unas zonas se encuentre demasiado concentrado y en otras casi sin nada o ausente.2 Elevadas con centro negro. presencia de H2S. cafés y aún negras. tales CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS pH final 7.como Agar Eosina Azul. Evite el sobrecalentamiento. Mezclar perfectamente.5 :!:. se aconseja inocular también otros halo brillante pero menos obscuro alrededor de la misma. aunque en general. 212-1 450 9 Fórmula aproximada en gramos por litro: Mezcla de Peptonas Extracto de Carne Dextrosa Fosfato Disódico Sulfato Ferroso Indicador de Sulfito de Bismuto Verde Brillante Agar 10.000 Las placas una vez solidificadas deberán presentar una opacidad crema uniforme. En Blair para aislar C/ostridium perfringes. el Agar Sulfito de Bismuto se siembra por estría superficial tratando de obtener colonias muy bien aisladas..000 0. Agar Sulfito y Bismuto Es un medio de Wilson y Blair* modificado y altamente selectivo para aislar Salmonella typhi. sonnei son de color café. Estas últimas más pequeñas que S. paratyphi A. y.000 5. de heces. Manual de Laboratorio de Bacteriología Azul de Bromotimol Agar 0.04 14.0 sa y dan colonias amarillentas por la producción de ácido. Algunas cepas de Proteus fermentado res de la sacarosa pueden formar colonias amarillentas similares a las de los Vibrios. Bibliografia: Cholera Inlormation (W.H.O. 1965). WHO Expert Comitee on Cholera (2 and Rep. Techn.. Rep. Series No. 352 1967). Felsemfeld, Bu" World Org. 34: 161, 1966. Kobayashi. T. Enomoto S. Sakasaki. R.Y. Kwajaras. S., Jap. J. Bact 18 387 291. 1963. Tanto el color negro de la colonia como el brillo metálico del halo aumentan si la placa se deja de 2 a 3 horas a temperatura ambiente y en presencia de la luz. pH final 8.6 :t. 0.2 Preparación: Las colonias de coliformes, Shigella (que generalmente no desarrollan) y Proteus presentan un color verde, café o negro y no ennegrecen el medio. Las placas deberán incubarse hasta 48 horas. Suspender 86 g del polvo en un litro de agua destilada. Remojar de 10 a 15 minutos. Calentar agitando con frecuencia y hervir durante 1 minuto. Enfriar entre 45 - 50°C Y vaCiar en cajas de Petri. No esterilizar en autoclave. Usos: Se emplea ampliamente para aislar y cultivar diversas especies del género Vibrio que pueden provocar cólera, diarreas coliformes e intoxicaciones por alimentos contaminados. Las 2 últimas afecciones provocadas sobre todo, a partir de diversos pescados y mariscos que se ingieren crudos o semicrudos y que pueden ser causadas por Vibrio parahemolyticus. Agar Tech Cal. 265-1 450 g Agar TCBS Para cultivar Vibrios selectivamente Cal. 268-1 450 g Incrementa y promueve la formación de piocianina por Pseudomonas. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Gelatina. Cloruro de Magnesio Sulfato de Potasio. Agar 20.0 1.4 10.0 13.6 Para el aislamiento selectivo de vibrios patógenos a partir de materiales clínicos, aguas y alimentos. Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Levadura. . 5.0 Mezcla de Peplonas................................................10.0 Citrato de Sodio 10.0 Tiosulfato de Sodio.. 10.0 Bilis de buey. .. .. . .. . .. .. .. . . . .. .. .. .. .. .. . ... 5.0 Colato de Sodio .3.0 Sacarosa. . . 20.c Cloruro de Sodio. 10.0 Citrato de Hi~rro. 1.0 Azul de Timol. .0.04 El Agar TCBS, es altamente inhibitorio para las Enterobó,"":.~ri;:¡s, incluyendo coliformes y Proteus. Los Enterococos son también inhibidos en gran parte, de tal manera que se favorece grandemente la proliferación de los Vibrios, como el antes mencionado, el V. cholerae y el V. algino/yticus. El material sospechoso (heces, vómitos, hi~(';:Jos rectales, pescados u otros alimentos), se siembra masivamente por estría superficial y se incuba a 35°C, de 18 a 24 horas. Casi todos los Vibrios fermentan la sacaro pH final 7.2 :t. 0.2 Preparación: Suspender 45 g de polvo en un litro de agua destilada de buena calidad. Agregar 10 mi de glicerina y mezclar muy bien. Remojar durante unos 10 minutos para que se hidraten correctamente las partículas de Agar. MICROORGANISMOS Vibrio choleare y su biotipo el Tor V. parahemolyticus CARACTERISTlCAS DE LAS COLONIAS Grandes, lisas, elevadas, amarillas o café claroamarillentas. De 2 a 3 mm. de diámetro. Agar amarillo. Incoloras con el centro verde. De 3 a 4 mm. de diámetro. El Agar sin cambio. Amarillas o café claro-amarillentas. De 3 a 4 mm. de diámetro. Agar Amarillo. Amarillas, grandes. Escaso desarrollo, puntiformes, transparentes. Agar sin cambio. Pequeñas azules. Escaso desarrollo, puntiformes. Agar amarillo. Agitando continuamente, calentar a ebullición, más o menos por un minuto. Distribuir en tubos de ensaye colocando la cantidad suficiente para que se forme un fondo de buen tamaño y esteriliz8r en autoclave a 15 libras de presión (118-121°C) durante 15 minutos. Los tubos de ensaye se dejarán solidificar en posición inclinada. Pueden prepararse placas de Agar, si así se requiere. Usos: El cultivo en estudio deberá sembrarse por estría superficial e incubarse a 35°C de 24 a 72 horas, o más si es necesario. El Agar TECH promueve y favorece la producción de piocianina. El pigmento de color verde difunde el agar del medio de cultivo a partir de la colonia. A la observación bajo luz ultravioleta, la piocianina da una fluorescencia verdosa o azul verde. (GRUPO 1) V. parahemolyticus (GRUPO 11) V. algino/yticus Enterobacteriaceae Pseudomonas Aeromonas Enterococos Si la cepa de Pseudomona forma también fluoresceina, la fluorescencia observada es de color azul verdoso. En cambio, si hay formación de piorrubina, la fluorescencia es de color rojizo. El color y tonalidad del pigmento varían con la cepa de Pseudomonas. El pigmento puede extraerse con cloroformo. Bibliografia: King Ward and Ramey J. Lab. and Cin. Med. 44:30. 1954. Burton. Eagle Campell Canad J. Res. C. 25:121, 1947 Sellers and Graber. Bacteriol Proc. M. 108: 129. 1961. 85 Manual de Laboratorio de Bacteriología COLONIAS Sin TIC. MICROORGANISMOS Agar Tergitol 7 Amarillas, con halo amarillo. Amarillo-verdosas, grandes, mucosas. Azules Escherichia cofi. Enterobacter, Klebsiella Gérmenes lactosa-negativos Detección de coliformes organismos Con TIC. Amarillo-verdosas, con halo amarillo. Escherichia cofi. Enterobacter Hafnia, Serratia, Providencia, Proteus, Pseudomonas y Citrobacter. Lactosa-negativos, levaduras Bibliografia: Cal. 118-1 450 9 Rojizas, con halo azulado. Azuladas. Es un medio de cultivo selectivo muy útil para detectar bacterias coliformes en materiales clínicos como heces y orina. Se le ha empleado así mismo en análisis bacteriológico de aguas y alimentos. Fórmula aproximada en gramos por litro: Hepladecil Sullato de Sodio Mezcla de Peptonas Extracto de Levadura. Lactosa Agar Azul de Bromotimol . QI 5.0 .3.0 10.0 15.0 0.025 Chapman J. Bact. 53:504, 1947 Chapman J. Bact. 64:769. 1952. Chapman AJPH 41:1381.1951. Mossel J. Applied Bact. 25:20. 1962. Usos: Debido a que es un medio fuertemente inhibidor, inocule las placas con una asada bien cargada con el material en estudio. Al mismo tiempo siembre otros medios selectivos menos inhibido res como el Agar Desoxicolato, SS, XLD, MacConkey, EMB, Agar Tergitol 7, Agar Entérico Hektoen. Cuando se sospecha que el material en estudio contiene bajas concentraciones de Salmonella es necesario inocular la muestra inicialmente en Caldo Tetrationato o Caldo Selenito-Cistina (Bioxon 266). pH final 6.9 .:t. 0.2 Agar Verde Brillante Aislamiento de Salmonella Cal. 145.1 450 9 Preparación: Suspender 33 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada o desmineralizada y dejarlo remojar unos 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Esterilizar a 15 libras durante 15 minutos. Esperar a que se enfríe a unos 45 -50°C Y si se desea, agregar 3.0 mi de una solución de trifenil tetrazolio estéril al 1 %. Distribuir en placas de Petri. Es un medio altamente selectivo empleado para aislar Salmonella (excepto S. typhi y Shigellas), de heces, orina, leche y productos lácteos y de otros alimentos de importancia sanitaria. Fórmula aproximada en gramos por litro: Extracto de Levadura. Mezcla de Peptonas. Cloruro de Sodio. Lactosa. . Sacarosa. . Rojo de Fenol Agar.. . Verde Brillante 3.0 10.0 5.0 .10.0 10.0 0.08 . 20.0 .12.5 mg Usos: Este medio es muy adecuado para el desarrollo de microorganismos coliformes ya que da alrededor de un 30% de recuentos más altos que otros medios selectivos empleados para el mismo fin. Escherichia cofi produce colonias de mayor tamaño, amarillo verdosas y mucosas. Los microorganismos que no fermentan la lactosa desarrollan colonias azules. El heptadecilsulfato de sodio (tergitol 7) inhibe la flora secundaria indeseable e impide la difusión del Proteus (swarming). En ocasiones se agrega trifenil tetrazolio para el reconocimiento e identificación de E. cofi y E. aerogenes. El medio, de un color café al principio pasa a rojo durante la incubación a 37°0: Los gérmenes que degradan la lactosa son inhibidos completamente, presentando algunas de las cepas no inhibidas, colonias verde amarillentas, opacas y rodeadas de un halo amarillento. Los microorganismos lactosa negativos, como Salmonella y ocasionalmente Proteus, forman colonias de color rosa pálido transparentes y rodeadas de un halo rojo brillante. Algunas colonias de Proteus forman colonias rojas. pH final 6.9 .:t. 0.2 Preparación: Suspender 58 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada y dejar remojar unos 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos y distribuir en cajas de Petri. Bibliografia: American Public Health Association. Standar Methods for the Examination of Water and Wastewater 11Th Edition APHA. New York. 1960. American Public Health Association. Recommended Methods lor the Microbiological Examination 01 Foods. APHA. Inc. New York. 1958. 86 Manual de Laboratorio de Bacteriología Recomendado especialmente en la detección ae portadores y para estudios de control sanitario. Tiosullato de Sodio Cllrato de Hierro y Amonio pH finat 7.4 :t. 0.2 6.80 0.80 Agar de Vogel Johnson Aislamiento y diferenciación de Staphylococcus aureus Cal. 217-1 450 g Excelente para la determinación de estafilococos coagulasa-positivos en los alimentos. Bibliografía: Vogel and Johnson, Public. Health lab. 18:131, 1960. Zabovitx, Evars and Niven J. Bacl. 70:687, 1955. Preparación: Suspender 55 9 del medio deshidratado en un litro de agua destilada y dejar que se remoje durante 10 a 15 minutos. Calentar con todo cuidado y agitando con frecuencia justamente hasta que el medio hierva. No sobrecalentar. Dejar de calentar en cuanto se obtenga la disolución completa del polvo. Una vez disuelto, enfriar rápidamente en agua o en baño maría a 50°C y verter.en cajas de Petri. El medio debe ser transparente o casi transparente y tener un color rojo rubí anaranjado. El Agar de Vogel Johnson permite una determinación temprana de las colonias de estafilococos coagulasa positivos y manitol positivos. Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Caseina. Extracto de levadura Manitol . Fosfato Dipotásico. Cloruro de Litio. Glicina. Agar. ... Rojo de Fenol . AgarXLD Xilosa-Lisina Desoxicolato Cal. 211-1 450 g 10 5 .10 5 5 10 16 .25 mg Para aislamiento de bacterias enteropatógenas, especialmente de los géneros Shigella, Salmonella y Arizona. Fórmula aproximada en gramos por litro: Xilosa l-Lisina. lactosa . . Sacarosa.. . Cloruro de Sodio. Extracto de ~c'.'cdura. Rojo de Fenol. Agar .. ... .. Desoxicolato de Sodio. 3.50 5.0 7.50 7.50 5.0 3.0 0.08 13.50 2.50 pH final 7.2 :t. 0.2 Preparación: El calentamiento excesivo o el mantener el medio demasiado tiempo en baño maría a 50°C puede ocasionar que se formen precipitados. En este caso se corre el riesgo de que las colonias sean de menor tamaño y presenten reacciones menos nítidas. Sin embargo, el precipitado no perjudica el desarrollo bacteriano y puede eliminarse por filtración con papel filtro. Usos: En el Agar XLD es posible obtener las si Suspender 61 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Mezclar bien. Remojar de 5 a 10 minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50°C y agregar 20 mi de una solución de telurito de potasio al1 %. Agitar vigorosamente y vaciar en placas, utilizan do unos 20 mi para cajas de Petri de viar;:) y 15 mi ¡:Jara las de plástico. CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Arizona Citrobacter Edwarsiella E. cofi. Enterobacter, Serratia Rojas y transparentes con 31 c¡ntro negro Amarillas y opacas. Pueden presentar un centro negro y orillas claras. Rojas con el centro negro y bordes claros. Amarillas y opacas. Halo de precipitado amarillo alrededor de las colonias. Grandes amarillas pálidas, mucoide y Klebsiella opacas. Halo de precipitado amarillo rodeando a la colonia. Amarillas transparentes con bordes claros. Rojas y transparentes Rojas y transparentes Rojas transparentes y bordes amarillos con centro negro si producen H2S. Sin centro negro si no son productoras de H2S. Bibliografía: Taylor A.J. Clin. Path 44:471, 1965 Taylor and Harris A.J. Clin. Path. 44:476. 1965. Usos: Las placas de agar pueden inocularse intensamente estriando con hisopos y se incuban a 35°-37°C. Las placas se examinan entre 24 y 30 horas, y generalmente también después de 48 horas en busca de colonias negras con zonas amarillas. Durante las primeras 24 horas la mayor parte de los microorganismos, excepto los estafilococos coagulasa-positivos están total o marcadamente inhibidos. A las 48 horas aparecen en el medio numerosos estafilococos coagulasanegativos fermentadores y no fermentadores del manitol.Staph. Epidermidis, casi siempre inhibido, forma pequeñas colonias negro. grisáceas sin halo amarillo. P. vulgaris Proteus morganii y P. rettgeri Providencia y Shigella Salmonella Los estafilococos coagulasa-positivos, forman pequeñas colonias negras en las placas rojas. Si hay fermentación de manitol, las colonias aparecen rodeadas por zonas amarillas debido a la formación del ácido del manitol. Si no hay fermentación del manitol, no se observa ninguna zona amarilla y el color del medio alrededor de las colonias puede ser aún más roio de lo normal. 87 Tuberc. 77:648. Heallh.8 . Fórmula aproximada en gramos p'or litro: Inlusión de Músculo Cardiaco Peplona de Carne Cloruro de Sodio Agar 375 10 5 15 . la caja se hace girar suavemente para homogenizar la muestra.Manual de Laboratorio de Bacteriología Preparación: Suspender 40 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Otra forma que ha sido propuesta por Tarshis y Frisch consiste en preparar gelosa sangre con 25% de sangre de banco y 1 % de glicerol.2 Preparación: Base de Agar Sangre Aislamiento. y vaciar posteriormente el medio fundido a unos 50°C. La adición de 5 a 10% de sangre estéril desfibrinada proporciona un medio excelente para el aislamiento de pneumococos.8. Cal. Remojar entre 5 y 10 minutos. meningococos.1951. Hosty. 219. pH final 6. También está indicado para estudiar reacciones de hemólisis. Se usa en la misma forma y para los mismos fines que la Base de Agar Sangre.:t. Suspender '40 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Tarshis and Weed A. Bacl. Dejar reposar durante 5 minutos y mezclar bien. Schubert. fórmula aproximada en gramos por litro: Bibliografía: Snavelyanél Brahier A.1 % de glicerol.. 1959. gonococos. 67: 117. De preferencia utilice sangre de cordero o de conejo. Añadir de 5 a 10% de sangre estéril desfibrinada de carnero o de conejo.1 450 9 La Base de Agar Sangre es adecuada para aislar y cultivar diversos microorganismos de difícil crecimiento. Esterilizar a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos. Esterilizar a 121°C (15 lb de presión) durante 15 minutos. Al añadir sangre. Path. Infusión de Músculo Cardiaco Peptona de Carne. No es recomendable emplear sangre humana. Después de esto enfriar a 45-50°C y añadir de 5 a 10% de sangre desfibrinada estéril. 33:511.J. Path.1 450 g La Base de Agar de Sangre con bajo pH es un agar de infusión de corazón con un pH de 6. APHA Diagnostic Procedures and Reagents 3rd edition. Edwards and Ramsey J. Lab. La Base de Agar Sangre también puede usar se para la preparación de antígenos. Después de esterilizar hacer rotar los matraces y enfriar a unos 45°C. J. la base de Agar Sangre con 0. 2. tuberculosis a partir de inóculos pequeños y daba resultados equiparables a otros tres medios usualmente empleados para este propósito. Tuberc. 64:55. 201. (Tarshis). Rew. Bibliografía: Frisch and Tarshis A. 1951. 1953. Agar Cloruro de Sodio. Los matraces pueden taparse y colocarse directamente en el autoclave.0. 2. y vaciar en cajas de Petri estériles.:t. Este medio era satisfactorio para el cultivo de M. Public. Clin. Cal.5 % de sangre humana de banco de sangre y 100 unidades de Penicilina por mililitro ha dado resultados comparables con los del medio de Lowenstein-Jensen.1 % de glicerol. Usos: Para el aislamiento del Mycobacterium tuberculosis.5% de sangre humana y 100 unidades de Penicilina por mili litro dió resultados comparables al medio de Lowenstein Jensen. Hervir durante un minuto.0.2 375 10 15 5 Base de Agar Sangre con bajo pH Aislamiento y diferenciación de bacterias exigentes con actividad hemolítica. 67:391. También es posible inocular el fondo de una caja de Petri estéril con un pequeño inóculo. Usos: La Base de Agar con bajo pH se recomienda como un medio para el cultivo de varios microorganismos de dificil crecimiento. Tarshis J. puede usarse para descubrir la actividad hemolíti ca y para aislar bacilos tuberculosos. la Base de Agar Sangre con 0. Rev. freeman and Irwin. 1953. 1954.3 . se obtiene un buen desarrollo de bacilos tuberculosos. 1951. Bacl. 21:101. Para el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis. pH final 7. homogen izar y vaciar en cajas de Petri estériles. Los matraces pueden taparse y colocarse directamente en autoclave. Con la adición de uno por ciento de glicerol y de 15 a 20 % de sangre humana de banco de sangre. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. 88 . Clin. cultivo y actividad hemolltica de gérmenes difíciles En algunos laboratorios se emplea el medio de cultivo preparado en tubos con tapón de rosca que se pueden inocular (a 45°C) y posteriormente vaciar en cajas de Petri estériles. 1960. Tharshis and Frish AM. especialmente para estudios de tipificación serológica. Cuarta Edition APHA. meningoco-I cos y otros microorganismos de difíci crecimiento. Para la organización y Bibliogralia: funcionamiento U. Microbio!.0 0. 1963.5 medio está especialmente adaptado para Este pH final 7.2 Disolver 29. NORMA Oficial Caldo Tioglicolato (NIH) NOM-166- Mexicana SSA1-1997. Milk and Food Tech. se observa a diferentes intervalos de tiempo.:t. Hervir hasla disolución.Hewitt Cultivo de Estreptococos Bhemolíticos para tipificación serológica Cal 2061 450 9 El Caldo de Tripticaseína y Fosfato es un! rel dio que se recomienda para el desarrollo de' estreptococos. El frasco Preparación: se incuba a 35-37°C.0 2. Esterili~ar a 121°C (15 lb de presión) durante 18 Iflinulos.1 . 0. Mezclar bien. 3rd. Procedures and Reagents. Inc. Diagnostic Procedures and Reagenls. 0. 1954.0 5. Preparación: Fórmula aproximada en gramos por litro: Peptona de Caseína Extracto de Levadura Dextrosa Cloruro de Sodio Tioglicolato de Sodio L.8 .5 9 del medio deshidratado en un litro de agua destilada. y de la USP.3 . Esterilizar en autoclave a 121°C (151b de presión) durante 15 minutos..2 20 ~ 2r 5. Calentar agitando frecuentemente.5 9 del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Preparación: durante 15 minutos. 1932. 1962.Cistina 15. Usos: Suspender 28. J. 35:973. El Caldo de Todd Hewitt se usa en los dios de agrupamiento y tipificación serológicas de estreptococos beta hemolíticos.5 Infusión de músculo cardiaco Peptona Dextrosa Cloruro de Sodio Fosfato disódico Carbonato de Sodio pH final 7. Prueba de esterilidad de de los laboratorios clínicos productos biológicos y farmacéuticos Caldo de Tripticaseína y Fosfato Hemocultivo exigentes Cat 225-1 de bacterias 450 9 Cal 132-1 450 9 Caldo de Todd . Updyke and Nlckle. Path. Fó' APENDICE B. Distribuir y esterilizar un medio sólido para hacer el aislamiento e en autoclave a 121°C (15 lb de presión) identificación de los mismos.0 5. 16:1950.4 2.:t. 53:1083. para su identificación en estudios clinicos y epidemiológicos. ya que es realmente inestable y se oxida rápidamente. AJPH. Applled. Slegel.2 hemocultivos: un procedimiento frecuente es la inoculación de 1 O mi de sangre a un frasco o matraz con 150 mi del medio de cultivo.. Bibliogralia: Todd and Hewitt J. Pharmacopea XVI. Distribuir en tubos.Usos: Para obtener mejores resultados debe prepararse sólo unos días antes de usarlo. Plttman and Winler. 1950. El caldo modificado por Updyke y Nikle se emplea de preferencia para el cultivo de estreptococos beta hemolíticos. New York. Bacl. Bibliografía: Diagnostic. 2:117. se transfieren los microorganismos a litro de agua destilada.0 20.0 Usos: 2.S. 1960.5 0. Cuando se obtiene el Disolver 30 9 del medio deshidratado en un desarrollo. 500. Peplona de Caseina Dextrosa Cloruro de Sodio Fosfalo Disódico pH final 7. Para la elaboración del agar de Todd Hewitt se añaden de 13 a 15 9 de Agar Bacteriológico por litro de medio de cultivo. Edition. Fórmula aproximada en gramos por litro: Fórmula aproximada en gramos por litro: El Caldo de Todd-Hewitt fue originalmente desarrollado para la producción de hemolisina estreptocócica.:t. Noody. para el análisis de esterilidad de productos farmacéuticos. pneumococos.5 0. 1. También se conoce como caldo para pruebas de esterilidad y se puede usar en lugar del Medio Líquido de Tioglicolato. Distribuir en tubos de fermenlación o en recipientes adecuados.0 2. Está elaborado de acuerdo a la fórmula del "Nationallnstitute of Health . 13:226. 0. 0 2. estu- . 26. 150. 3o. Sufragio Efectivo. 152. 48. me permito ordenar la publicación en el Diario Oficial de la Federación de la Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997. 148. 22.. fueron publicadas previamente a la expedición de esta Norma en el Diario Oficial de la Federación. 161. José Ignacio Campillo García. 33. 46. 6o. 167. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-166-SSA1-1997. 78. 233. con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal. los interesados presentaran sus comentarios a la Dirección General de Regulación de los Servicios de Salud. 160. 46. 157. 21. INDICE Prefacio 90 . 155. 44. 149. 1o.. 43. 222.... a efecto de que dentro de los siguientes sesenta días naturales posteriores a dicha publicación. 226. fracción XI. 159. 166. 229. 51. 144. D. 147. 9o.. 25... JOSE IGNACIO CAMPILLO GARCIA. 18.. 13 apartado A. 140. 225. 12. Para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos. se expide la siguiente: Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997. 27. 5o. 220. 37. 10.. 2o. 43. 163. 218. PARA LA ORGANIZACION Y FUNCIONAMIENTO DE LOS LABORATORIOS CLINICOS.. 164. se publicó en el Diario Oficial de la Federación el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana. 162. 48. Para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos.Rúbrica. 1o. 141. Que las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado comité. 45. CONSIDERANDO Que con fecha 4 de diciembre de 1998. 45. Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. 19. Que en atención a las anteriores consideraciones. 151. contando con la aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. 47 fracción I y 52 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. 8o. 7o. 143. 223. en los términos del artículo 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. a 14 de septiembre de 1999. Al margen un sello con el Escudo Nacional. 23. 156. que dice: Estados Unidos Mexicanos. 165. 158. 5o.. 3o. 79 y demás relativos de la Ley General de Salud. 227. 216. en cumplimiento del acuerdo del Comité y de lo previsto en el artículo 47 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. 20.Manual de Laboratorio de Bacteriología NORMA Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997. 32. 145. México. No Reelección. 41. 238 y 258 del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Prestación de Servicios de Atención Médica y 23 fracción III del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud. 24. 18. 27. 142. 224. 46.F. fracción VII. 3o. 24.El Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. 146.Secretaría de Salud. 10. Para la organizacion y funcionamiento de los laboratorios clínicos.. 154.. 40 fracciones I y XII. 21. 139. Referencias. 13. Coordinación de Laboratorios Clínicos. Objetivo y campo de aplicación. Concordancia con normas internacionales y mexicanas.Manual de Laboratorio de Bacteriología 0. Dirección General de Sanidad Naval. 11. 12. 6. 15. SECRETARIA DE SALUD DEL DISTRITO FEDERAL. Vigencia. INSTITUTO NACIONAL DE LA NUTRICION "DR. 10. Coordinación de Institutos Nacionales de Salud. Recursos humanos. Recursos materiales y tecnológicos. Dirección de Centro Médico Naval. 1. Definiciones. Observancia de la norma. 91 . Higiene y bioseguridad. Hospital Central Militar. Subsecretaría de Regulación y Fomento Sanitario. Jefatura de Patología Clínica. Aseguramiento de la calidad. Introducción. Dirección General de Regulación de los Servicios de Salud. 7. Sección de Microbiología. Principios científicos y éticos. 5. Dirección General de Sanidad Militar. 8. Contratos y procedimientos de servicios de referencia. SALVADOR ZUBIRAN". SECRETARIA DE LA DEFENSA NACIONAL. 9. 3. Especificaciones. Bibliografía. 14. SECRETARIA DE MARINA. 2. PREFACIO En la elaboración de esta Norma Oficial Mexicana participaron: SECRETARIA DE SALUD. Coordinación de Hospitales. 4. Publicidad. 1. envasado. PETROLEOS MEXICANOS. Coordinación de Planeación e Infraestructura Médicas. almacenamiento. Facultad de Química. FEDERACION MEXICANA DE PATOLOGIA CLINICA. Hospital Central Sur.2 La aplicación de la presente norma es obligatoria en el territorio nacional para los profesionales. A.1 La presente Norma Oficial Mexicana tiene por objeto establecer los requisitos que deben satisfacerse para la organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos. 1. Servicios de Normatividad. recolección. Dirección de Prestaciones Médicas. Banco de Sangre y Cuadro Básico. A. Subdirección Técnica. INSTITUTO DE SEGURIDAD Y SERVICIOS SOCIALES DE LOS TRABAJADORES DEL ESTADO. Gerencia de Servicios Médicos. Oficina de Laboratorio. A. Jefatura de Laboratorio de Investigación en Bioquímica Clínica. Hospital Central Norte. CONFEDERACION NACIONAL DE QUIMICOS CLINICOS. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. CONSEJO MEXICANO DE PATOLOGIA CLINICA. ASOCIACION MEXICANA DE PROPIETARIOS DE LABORATORIOS CLINICOS. COMITE ESTATAL PARA LA MEJORIA DE LA CALIDAD DE LOS LABORATORIOS CLINICOS. Referencias Para la correcta aplicación de esta Norma es necesario consultar las siguientes: 2. A.C. 92 . CENTRO ESTATAL DE LABORATORIOS DE LA SECRETARIA DE SALUD DEL ESTADO DE JALISCO.C. INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL. A. social y privado que intervengan en la organización y funcionamiento de laboratorios clínicos. Objetivo y campo de aplicación 1. 2. transporte. Subdirección General Médica. Que establece los requisitos para la separación.C. tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológico-infecciosos.C.C.Manual de Laboratorio de Bacteriología INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL. Jefatura de Laboratorios de Análisis Clínicos. Jefatura de Laboratorios de Análisis Clínicos. ASOCIACION MEXICANA DE BIOQUIMICA CLINICA. técnicos y auxiliares para la salud de los sectores público.1 NOM-087-ECOL-1995. renuncia o sustitución.1.5 Atender en forma directa las reclamaciones que se formulen en la prestación de los servicios. así como adoptar las medidas necesarias para la vigilancia epidemiológica. 3. los casos en que se presuma la comisión de hechos ilícitos. por servicios de referencia. Definiciones Para efectos de esta Norma Oficial Mexicana.1 Informar por escrito a la Secretaría.3 Reglamento. por el proveedor o por el usuario. Sistema para la identificación y comunicación de riesgos por sustancias químicas en los centros de trabajo. 4. forma y periodicidad que la misma determine. a la Secretaría de Salud. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan. técnicos o auxiliares independientes que en él presten sus servicios.4 Notificar en su caso al ministerio público y demás autoridades competentes.2 Ley. 3. así como cualquier modificación al mismo. usen. en los términos. Especificaciones 4. 3. 3. 4. 93 .1 Los laboratorios deberán contar con un responsable sanitario cuyas funciones son: 4. manejen. a los establecimientos públicos.5 Servicios de referencia. a la Ley General de Salud. sociales y privados. 4. resolución y tratamiento de los problemas de salud.1. independientes o ligados a algún servicio de atención médica.1. a la realización de análisis clínicos por un laboratorio a solicitud de otro laboratorio. almacenen o transporten fuentes generadoras o emisoras de radiaciones ionizantes.1 Laboratorios clínicos.4 Secretaría. 3. que tengan como fin realizar análisis clínicos y así coadyuvar en el estudio. 4.2 NOM-009-STPS-1993. y coadyuvar para su resolución.2 Comunicar por escrito a la Secretaría el horario de asistencia al establecimiento. tomando en cuenta lo dispuesto en la ley y demás disposiciones generales aplicables. 2. irritantes y tóxicas en los centros de trabajo. sin perjuicio de la responsabilidad profesional en que se incurra.4 NOM-114-STPS-1994. Relativa a las condiciones de seguridad e higiene para el almacenamiento. se entenderá por: 3. 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología 2. diagnóstico.1. al Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Prestación de Servicios de Atención Médica. transporte y manejo de sustancias corrosivas. prevención.3 Comunicar por escrito a la Secretaría la fecha de su designación. los casos de enfermedades transmisibles de notificación obligatoria.3 NOM-012-STPS-1993. 2. ya sean las originadas por el personal del establecimiento o por profesionales.1. 4. 4. 4.1.Manual de Laboratorio de Bacteriología 4. en su caso.4 Estructura orgánica. 4. 4. el formato con los datos y requisitos que correspondan al trámite que se realiza.9 Vigilar que dentro de los establecimientos a su cargo se apliquen las medidas de seguridad e higiene para la protección de la salud del personal expuesto por su ocupación.1 Los laboratorios que utilicen fuentes de radiación ionizante.3 Los informes de resultados de los análisis deberán tener impresos los valores de referencia conforme a las técnicas empleadas. 4. 4.5.5 Organización.10 Mantener actualizada la documentación curricular y laboral de su personal.1. 4.1.1.5. Manual de organización que deberá contener como mínimo los apartados siguientes: 4. 4.1.1.2 Los laboratorios llevarán un registro cronológico de los análisis que realicen. conservación.1. los responsables.7 Vigilar que se lleven a cabo los sistemas de control.1.1. 94 .5.5 Objetivo. en su caso.4 Para la obtención de licencia sanitaria o aviso de funcionamiento que ampare el legal funcionamiento del laboratorio. 4. 4.1.2 Introducción.8 Firmar los reportes de los análisis realizados o.5. tanto internos como externos que determine esta norma.5.3 Atribuciones u objeto. salvo en aquellos casos donde no se requiera.1.4. Contar con los siguientes documentos actualizados: 4.5. de conformidad con lo dispuesto en el acuerdo por el que se dan a conocer los trámites inscritos en el Registro Federal de Trámites Empresariales que aplica la Secretaría de Salud y se establecen diversas medidas de mejora regulatoria y su anexo único. 4. 4.1.6 Vigilar y mantener el buen funcionamiento de la recepción.1. los propietarios y. transporte y procesamiento de muestras dentro y fuera del establecimiento.1 Indice.11 Las demás que señalen otros ordenamientos legales aplicables.5. Estos deberán conservarse por un periodo mínimo de seis meses.6 Descripción de funciones. vigilar que sean firmados por el personal profesional o técnico por él autorizado y de manera autógrafa. toma. 4. deberán presentar ante la autoridad sanitaria. requerirán de licencia sanitaria y únicamente aviso de funcionamiento aquellos que no manejen este tipo de materiales. 4. 4.2 Presentación. fabricante y número de serie.6 Diagramas de flujo.3.5. 4. 4.6 Valores de referencia.4. 4.1 Indice.5.5.1 Indice. 4. 4.5.5 Descripción de actividades.3.5.5.3 Preparación.3.2 Fundamento.2.4 Procedimientos.3 Objetivo del manual.4 Bitácora de mantenimiento y calibración de equipo que deberá incluir: 4. 4.2.5.5.4 Tipo de muestra que se requiere.5.5.5.3.2 Introducción.2.3 Relación de pruebas que se efectuarán. 4.5. 4.2. 4. conservación y transporte de muestras que deberá incluir: 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología 4. 4. 4.4 Procedimientos.5.1 Nombre de todos los métodos utilizados. 4.5 Resultados. de acuerdo a un programa de mantenimiento preventivo.7 Bibliografía. manejo.5.5.5.2 Fecha de recibo y fecha de inicio de operaciones del equipo. 4.3 Manual de todos los métodos analíticos en idioma español que deberá contener: 4.7 Formatos e instructivos.5. identificación.5.5.2.2.4.2.4.3.3 Fechas de mantenimiento.5.1 Nombre del equipo. especificando las calibraciones y verificaciones realizadas al equipo. 95 .5 Guía para la toma. 4.5.5.5.5.2 Manual de procedimientos administrativos que deberá contener como mínimo: 4.3.5. 4. 4. 4.5.5. 4.5. 4.5.3. 5.5.6. 4.6. hidráulicas y de gas.4 Almacén. en la que deberán existir instalaciones eléctricas. para la recepción de solicitudes de exámenes y entrega de resultados.5. tratamiento y disposición final de los residuos peligrosos biológico-infecciosos que se generen en establecimientos que presten atención médica. Recursos humanos 5.6.3 Area de laboratorio.1 Todos los documentos anteriores podrán integrarse con información en español que el fabricante envíe con los reactivos o equipos. transporte.9 Programa de mantenimiento preventivo de instrumentos de medición y equipo utilizado en el establecimiento.1 Contar con un responsable sanitario de laboratorio clínico que podrá ser: 96 . 4. Que establece los requisitos para la separación.6.5. 4.6 Los laboratorios deberán contar con las siguientes áreas: 4.5.5. 4.6. 5.8 Manual de procedimientos para el manejo de desechos peligrosos.10.5 Servicios sanitarios. o bien.2 Procedimientos de uso.6. 4. de seguridad radiológica. esterilización o antisepsia y secciones para la realización de análisis.5.5. 4.5 Instrucciones y precauciones especiales para la toma y conservación de cada tipo de muestras. 4.6 Manual de manejo de equipo en el idioma español que incluya: 4.6 En su caso.1 Nombre del equipo.5 Bibliografía. conforme a la NOM-087-ECOL-1995.5.6.10 Programa de desinfección y desinfestación del establecimiento. 4.6.1 Registro de pacientes y sala de espera para toma de muestras.5. 4.5.2 Toma de muestras.6. 4. ser elaborados por el propio laboratorio clínico y quedar contenidos en uno o varios volúmenes. 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología 4. área de lavado de material.5. recolección. almacenamiento. en su caso. instrucciones para el transporte de las muestras.5. 4.7 Manual de seguridad e higiene ocupacional y. envasado.6.4 Mantenimiento preventivo. 4. 4.3 Cuidados especiales. 4.5. 4.5. 5 Informar a los usuarios.1. expedidos por instituciones de educación superior y registrados ante la autoridad competente. excepto al médico o laboratorio que solicite el servicio de referencia. En estos casos. Principios científicos y éticos 7. comprobable con documentos oficiales. con grado de maestría o doctorado en las áreas de laboratorio clínico.2 Médico cirujano con certificado vigente de la especialidad en patología clínica. agujas y lancetas utilizadas para la toma de muestras sanguíneas deberán ser desechables.1. así como los requisitos para su realización. 7. excepto cuando sea solicitada por la autoridad competente.3 Puede contar además con personal de enfermería.2. 7.1 La prestación de servicios de laboratorio clínico deberá sujetarse a los siguientes principios: 7. 7. 5.2 Las jeringas.1. 6.6 El personal de laboratorio clínico no podrá emitir opiniones ni sugerir interpretaciones sobre los resultados obtenidos. Recursos materiales y tecnológicos 6. 97 .Manual de Laboratorio de Bacteriología 5.1 Químico con curriculum orientado al laboratorio clínico y mínimo 3 años de experiencia en el área técnica. 5.1. 5. 5.1. será imprescindible que el consentimiento sea realizado por escrito ante dos testigos idóneos.4 Mantener la confidencialidad de toda la información relacionada con los resultados de los análisis realizados. auxiliar y administrativo en sus respectivas áreas de competencia. 6. sobre los servicios y procedimientos a los que se va a someter al paciente.1 Los Laboratorios deberán comprobar que cuentan con los recursos materiales y tecnológicos de acuerdo al tipo de análisis que realicen. 7.2. en su caso.2 Respetar la personalidad.2 Técnico en laboratorio clínico con certificado o diploma legalmente expedido y registrado por la autoridad educativa competente. si los procedimientos a los que se va a someter serán utilizados en función de un proyecto de investigación o docencia.1. 7.2. 5.1.3 Brindar información completa. con las formalidades que para tal efecto establezca el Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigación para la Salud.2 Contar con personal suficiente e idóneo: 5.3 Médico.1 Profesional del área de laboratorio clínico con título y cédula profesional legalmente expedidos y registrados por las autoridades educativas competentes. dignidad e intimidad de todos los usuarios. Químico o Biólogo. expedido por el Consejo correspondiente o constancia de grado de maestría o doctorado en las áreas de laboratorio clínico. en términos comprensibles. expedida por institución educativa competente.1. 9. con el fin de que cumplan con las normas de seguridad correspondiente y utilizar el equipo de protección personal. 8.2 El mensaje deberá tener contenido orientador. Publicidad 11. 8. tomando en cuenta los requisitos que señalen las disposiciones generales aplicables en la materia. Higiene y bioseguridad 10. 98 .1 Los contratos de servicios de referencia deberán ser por escrito y ajustarse a lo que establece esta Norma y otras disposiciones generales aplicables.2 Los responsables que suscriban los contratos de servicios de referencia asumirán mancomunadamente la responsabilidad de los resultados.3 El responsable sanitario deberá informar al personal sobre los riesgos que implica el uso y manejo de sustancias tóxicas. 10.Manual de Laboratorio de Bacteriología 7.2 Cuando el médico requerira los servicios de un laboratorio clínico privado. e infecciosas.2 Todo el personal del laboratorio deberá adoptar las medidas preventivas para su protección en el almacenamiento.1 La superficie libre por trabajador no podrá ser menor de dos metros cuadrados. Contratos de servicios de referencia 8. 9. los prestadores de los mismos deberán cumplir con las disposiciones reglamentarias del país en el que estén establecidos. educativo y en idioma español.3 Acreditar la evaluación de cada una de las pruebas incluidas en programas externos y desarrollar una investigación dirigida para solucionar la problemática de aquellos análisis en los que la calidad no sea satisfactoria. 9. NOM-009-STPS-1993.2 Deberán participar al menos en un programa de evaluación externa de la calidad en el cual deberán integrar los análisis que realice y que incluya el programa. a la presentación de los resultados de un determinado laboratorio exclusivamente. NOM-012-STPS-1993 y NOM-114-STPS-1994. corrosivas o irritantes y. analítica y postanalítica.2. en particular las normas oficiales mexicanas NOM-087-ECOL1995. material infectocontagioso y los inherentes a los procesos de las muestras. 10. en su caso. no pudiendo condicionar la prestación de sus servicios profesionales. 8. características y finalidades de la prestación de servicios. así como. fuentes de radiación ionizante. transporte y manejo de substancias tóxicas. 11. se sujetarán a los principios científicos que los sustenten.1. 11.7 Las técnicas y procedimientos realizados en los laboratorios clínicos. 10. En caso de que los servicios de referencia se realicen en el extranjero. Aseguramiento de la calidad 9.1 Será de carácter informativo sobre el tipo.1 Deberán aplicar un programa interno de control de calidad que incluya las etapas preanalítica. deberá ofrecer cuando menos tres opciones al paciente. 7.1 Los resultados podrán transmitirse por medios electrónicos. Sufragio Efectivo.5. 15.5. 4. 4. 4.Rúbrica. 9.5.2. Las disposiciones contenidas en los subnumerales 4.Manual de Laboratorio de Bacteriología 11..5.1.5.2 Ley Federal sobre Metrología y Normalización.1. 4.5. 4.3 La publicidad no podrá ofrecer técnicas y tratamientos preventivos. presione aquí 99 .1 Ley General de Salud. 12.6. Bibliografía 13.3.1.3 Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Prestación de Servicios de Atención Médica. 13.5.El Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. Vigencia Esta Norma entrará en vigor al día siguiente de su publicación en el Diario Oficial de la Federación a excepción de las disposiciones contenidas en los apartados 9.5. 13.1. José Ignacio Campillo García. No Reelección.3 entrarán en vigor tres años después de su publicación.2 y 5.7..1.4.3 que entrarán en vigor un año después. 5. a 14 de septiembre de 1999.1.5. curativos o rehabilitatorios de carácter médico o paramédico. 1984.F.8. 4. D.9 y 4. 14.. 4.10 surtirán sus efectos dos años posteriores a la publicación de esta Norma y las disposiciones contenidas en los subnumerales 5. 4. México.5.2 y 9. Concordancia con normas internacionales y mexicanas Esta Norma equivale parcialmente con los lineamientos y recomendaciones internacionales para laboratorios de análisis clínicos y no es equivalente con ninguna Norma Mexicana.5. Fecha de publicación: 13 de enero de 2000 Si quiere obtener una copia del texto completo. Observancia de la norma La vigilancia de la aplicación de esta Norma corresponde a la Secretaría de Salud y a los gobiernos de las entidades federativas en sus respectivos ámbitos de competencia. 1992. 13. 1986. Manual de Laboratorio de Bacteriología 100 .