SUBMODULO 1PROCESAR CULTIVOS BACTERIOLÓGICOS “MANUAL DE PRÁCTICAS” Villahermosa, Tab., Enero del 2013 MANUAL DE PRÀCTICAS ASIGNATURA Procesar cultivos bacteriológicos. SEMESTRE: CUARTO PERÍODO ESCOLAR: FEBRERO 2013 JULIO 2013 2 INDICE P AG. I. II. III. IV. V. INTRODUCCIÓN...................................................... 4 OBJETIVO GENERAL.............................................. ÍNDICE DE PRÁCTICAS.......................................... 5 6 CREDITOS DE ELABORACIÓN............................... 61 VALIDACIÓN........................................................... 61 3 I. INTRODUCCIÓN El presente cuadernillo de trabajo pretende que el estudiante reafirme sus conocimientos y domine la metodología para realizar cultivos bacteriológicos a partir de muestras clínicas aislando e identificando el agente patógeno. 4 II. OBJETIVO GENERAL Aplicar las técnicas de laboratorio para reafirmar los conocimientos teóricos sobre el cultivo de bacterias a partir de muestras biológicas en apoyo al diagnóstico clínico. 5 INDICE DE PRACTICAS Nombre de la práctica Cultivo e identificación de Enterobacterias Cultivo e identificación de Bacterias Gram Negativas no Fermentadoras ( BGNnF ) Diagnóstico de Micobacteriosis ( Baciloscopia ) Coprocultivo Urocultivo Cultivo de exudado faríngeo Práctica Número 1 2 3 4 5 6 Pagina 7 17 26 34 44 53 6 .III. APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtener una muestra biológica. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones Anaeróbicas con o sin la producción de gas (en especial glucosa y lactosa).. No son exigentes. ESTRATEGIA ENSEÑANZA. se ha observado que estos microorganismos pueden aislarse de infecciones de cualquier sitio anatómico causando las infecciones nosocomiales. son oxidasa negativo. incluido el cloro. Los miembros de esta familia causan principalmente infecciones en los aparatos gastrointestinal y urinario. 1 Titulo de la Práctica: Cultivo e identificación de Enterobacterias Fecha de realización: Enero 2013 Submódulo 1 Procesar cultivos bacteriológicos Competencia profesional: Aísla e identifica Enterobacterias RESULTADO DE APRENDIZAJE: Realiza un cultivo de muestra biológica para aislar e identificar las Enterobacterias más relevantes de importancia médica con el uso de pruebas bioquímicas. Son Anaeróbicos facultativos. carecen de la enzima citocromo oxidasa. en plantas o en animales acuáticos. son de fácil cultivo. Actividad 2: Seleccionar los medios adecuados para la siembra de la muestra biológica. INTRODUCCIÓN: Enterobacteriaceae es una familia de bacterias Gram negativas que contiene más de 30 géneros y más de 100 especies que pueden vivir en tierra.Práctica No. es decir. 7 . Son capaces de reducir nitrato en nitrito. sin embargo a partir de la era de los antibióticos la quimioterapia moderna y las medidas inmunosupresoras. seleccionar los medios para el primo aislamiento. Actividad 5: Interpretar los cambios en las pruebas bioquímicas para identificar la enterobacteria aislada.OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Conocer las características morfológicas de cultivo y bioquímicas más relevantes de las enterobacterias de mayor importancia clínica. Shigella. Anota sus observaciones y reporta resultados.Actividad 3: Realizar las siembras con la técnica de aislamiento de la estría cruzada. 8 . Salmonella y Yersinia. 2..INTRODUCCIÓN: Las Enterobacterias constituyen uno de los grupos más importantes en la Microbiología Médica Diagnóstica. mientras que otros tienen un papel patógeno ampliamente reconocido como: Escherichia. La clasificación se basa inicialmente en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas que están involucradas en el metabolismo bacteriano que pueden ser evidenciadas en medios especiales in vitro en las que el sustrato se incorpora junto con un sistema indicador que pone de manifiesto su degradación a la presencia de un metabolito especifico. Para el diagnóstico de estas infecciones se requiere conocer el manejo adecuado de los productos.. ya que en él se incluyen una variedad de géneros. 1. algunos de los cuales forman parte de la biota normal. conociendo estas como pruebas bioquímicas. Actividad 4: Seleccionar la colonia sospechosa de enterobacteria y sembrar con un asa recta las pruebas bioquímicas para su identificación. así como el criterio para interpretar el resultado y decidir cuál es el agente causal.. FUNDAMENTO La clasificación se basa inicialmente en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas que están involucradas en el metabolismo. Asa bacteriológica estándar Asa bacteriológica recta Algodón Gasas Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 ml Tubos de 13X100 Papel estraza Pipetas graduadas de 10 ml. poniéndose de manifiesto con cambios de color por los indicadores de pH que contiene cada uno de los medios en base al pH que presentan cada uno de los productos formados...3. ) Estufa bacteriológica Mecheros Fisher Mecheros bunsen Rejillas con centro de asbesto Tripies 9 DESCRIPCIÒN . 4..EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 1 2 4 4 4 Microscopio Autoclave ( Olla de presión Presto de 21 lt.MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN Cajas Petri desechables sin división Portaobjetos Cubreobjetos Aplicadores de madera. 5. DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA: a) Sembrar la muestra biológica en Agar de EMB. SS y XLD por medio de la estría cruzada e incubar las placas a 36 +/.. durante 24 hrs. MC.MATERIAL BIOLÓGICO: DESCRIPCIÓN Muestra clínica ( Cepas de Enterobacterias ) 7..1 ° C. c) Sembrar la colonia sospechosa con un asa recta en las siguientes pruebas bioquímicas: 10 .6. b) Seleccionar por la morfología colonial sospechosas de Enterobacterias.REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Reactivo de Erlich Agua destilada Reactivo de ortoparafenilen diamina Agua oxigenada Agar de Eosina Azul de Metileno ( Agar de EMB ) Agar de Mac Conkey ( Agar de MC) Agar de Xilosa Lisina Desoxicolato ( Agar de XLD ) Agar de Salmonella y Shigella ( Agar de SS ) Agar de Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa ( Agar de TCBS ) Agar de Hierro de Kligler ( Agar KIA ) Agar de Hierro y Lisina ( Agar LIA ) Agar Citrato de Simmons ( Agar CIT ) Medio de Movilidad Indol y Ornitina ( Medio MIO ) Caldo Urea ( Caldo UR ) Caldo Malonato ( Caldo MAL ) Kit para tinción de Gram 8.. MIO: Picadura en el centro. e) Llevar a cabo las lecturas en base a los cambios de color. CIT: Estría en la superficie. MAL: Introducir el asa dos veces sin agitar.Tomar el inoculo con el asa recta de una sola colonia y sembrar de la siguiente manera. KIA: Picadura y estría en la superficie. d) Incubar a 36 +/. LIA: Picadura y estría en la superficie. UR: Introducir el asa dos veces sin agitar. f) En base a las lecturas y utilizando la tabla de Géneros y especies identifique la bacteria de acuerdo a la siguiente tabla TABLA DE IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS FRECUENTES IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN 11 .1 °C durante 24 hrs. stuarti Serratia S.-Cambios de color después de la incubación 6.-Color inicial de las pruebas bioquímicas 5. alcalifaciens P. ozanae K. cloacae Providencia P. rhinoscleromatis K..Bacteria aislada e identificada. pneumoniae K.Escherichia coli Salmonella sp Shigella sp Klebsiella K.. freundii Enterobacter E. planticola Proteus mirabilis Proteus penneri Proteus vulgaris Citrobacter C.REPORTE DE RESULTADOS: Reportar lo observado durante la práctica. oxytoca K. 12 .-Color inicial de los Medios de cultivo 2. 1. aerogenes E. amalonaticus C.Las lecturas de cada una de las pruebas bioquímicas 7. rubidea + + V + + + + + + V - + + V + + - + + + V + + + + + V + + + V + + + V + + V + + V V V + + + V + + + + + + + + + + + + + V V V V + + V + + + + + V V V V V + V V - + + V + + V V V + V + V V + + + + V + + + + + + V + + + + V + + + + V - 9.Color de los medios después del crecimiento 3. rettgeri P. marcescens S.. diversus C. licuefaciens S.odorifera S. agglomerans E.-Morfologia colonial 4.. 12. 3. debidamente abotonada. bata de laboratorio blanca.. 2.Investigar que son las infecciones nosocomiales o intrahospitalarias. manga larga.¿Géneros y especies más frecuentes causantes de infecciones 13 . Reporta los resultados del estudio.10. Comenta conclusiones con tus compañeros. 11..CUESTIONARIO 1.Diga cuales son los principales indicadores de pH que contienen los medios de cultivo y bioquímicas que se utilizan para el aislamiento e identificación de las Enterobacterias.. Completa el glosario.RECOMENDACIONES: Al trabajar en el Laboratorio: • Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias. • No colocarse ni llevarse nada a la boca..ACTIVIDADES: Anota tus resultados. • Todos los materiales contaminados deben colocarse en de inmediato en un desinfectante o en el recipiente de RPBI. • Deben utilizarse cubre boca.. Contesta el siguiente cuestionario.. pH que presentan los productos que se forman a partir del metabolismo fermentativo de los carbohidratos. Mencione que géneros de las Enterobacterias se caracterizan por ser inmóviles. ¿Que menciona la NOM. GLOSARIO DE TERMINOS: Desaminación Descarboxilación Aminoácido Medio selectivo Medio diferencial Indicador de pH 14. ¿Géneros de Enterobacterias considerados como patógenos? Carbohidrato que todas las Enterobacterias fermentan.EVALUACIÓN: GUÍA DE OBSERVACIÓN 14 .7.166 .nosocomiales? 4.9.6.5.8. la NOM 005 y la NOM-087? 13.. pH que presentan los productos que se forman a partir del metabolismo de peptonas y aminoácidos. Geo F importancia .BIBLIOGRAFÍA : AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana.Instrucciones: a) Lee y analiza el fundamento de la práctica b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos c) Desarrolla el procedimiento de la práctica d) Lee e interpreta los resultados e) Observaciones con base a la norma 166 y 087 Aspecto a observar SI a) Leyó y analizó el fundamento de la práctica. Sahm. 2004 Manual moderno. 2p f) Leyó. 2005 15 Bayled – Scout Brooks. 1p c) Desarrollo correctamente el procedimiento.1p g) Cumplió con los aspectos de las NOM 005 y 087. interpretó y contrastó eficazmente sus resultados con los valores referenciales. Prats Forbes. la identificación de de 2003 bacterias médica.. 2006 Panamericana. 2p Cumple NO N/A Observaciones Puntos 15. Microbiología clínica Weissfeld. Diagnóstico microbiológico Microbiología médica Panamericana. 2p d) Interacción grupal e individual. 1p b) Seleccionó y preparó adecuadamente el material y reactivo. 1p e) Manipuló con destreza el equipo. Interamericana Práctica No. Micología Médica. Klein Microbiología inmunología médica. 1999.Harley. Microbiología. e Interamericana.Levinson Conant E. 2 Titulo de la Práctica: Aislamiento e identificación de Bacterias Gram Negativas no Fermentadoras(BGNnF) Fecha de realización: Enero 2013 Submódulo 1 Procesar cultivos bacteriológicos Competencia profesional: Aísla e identifica BGNnF 16 . Prescott. 2006 Interamericana. Anota sus observaciones y reporta resultados. nebulizadores. constituyendo reservorios de potenciales infecciones. no fermentadores. Actividad 3: Realizar las siembras con la técnica de aislamiento de la estría cruzada.OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Conocer las características morfológicas de cultivo y bioquímicas de los géneros de las BGNnF de mayor importancia clínica. 1.RESULTADO DE APRENDIZAJE: Identificar algunos bacilos no fermentadores de la glucosa y distinguir los grupos de King-Weaver de bacilos Gram negativos fermentadores. catéteres. aerobias estrictas que.. o los degradan a través de vías metabólicas diferentes a la fermentación. o bien no utilizan los carbohidratos como fuente de energía. humidificadores. Actividad 5: Interpretar los cambios en las pruebas bioquímicas para identificar la BGNnF aislada. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y dado su ubicuidad. oxidativos y no oxidativos. Actividad 4: Seleccionar la colonia sospechosa de BGNnF y sembrar las pruebas bioquímicas para su identificación..APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtener una muestra biológica. INTRODUCCIÓN: Los bacilos Gram Negativos no Fermentadores (BGNnF) constituyen un grupo heterogéneo de microorganismos que se consideran generalmente patógenos oportunistas y que en la actualidad han cobrado relevancia por su incidencia en las infecciones hospitalarias.. Actividad 2: Seleccionar los medios adecuados para la siembra de la muestra biológica. superficies húmedas.INTRODUCCIÓN: La identificación de estas bacterias se hace aplicando las características morfológicas y bioquímicas recomendadas por King – Weaver. ESTRATEGIA ENSEÑANZA. los no fermentadores se reconocen por su inactividad en el medio de TSI o KIA y a la 17 . 2. soluciones desinfectantes y en superficies inertes. incubadoras. Son bacterias no esporuladas. pueden sobrevivir en el ambiente hospitalario en: agua destilada. tubuladuras.. Algunas especies psicrófilas pueden contaminar sangre de banco y hemoderivados. soluciones salinas. debido a esto es necesario conocer las características morfológicas. 3. ) 18 DESCRIPCIÒN ..EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 Microscopio Autoclave ( Olla de presión Presto de 21 lt.FUNDAMENTO Las BGNnF son de gran importancia ya que son microorganismos involucrados como causantes de infecciones intrahospitalarias.MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN Cajas de Petri desechables sin división Portaobjetos Cubreobjetos Aplicadores de madera. Capacidad de producción de la enzima citocromo oxidasa y la determinación de la movilidad. basándose en la utilización de cuatro pruebas preliminares para diferenciarlos como son : La utilización del medio de Hugh y Leifson ( Medio de O/F).vez este criterio permite llegar al género en la identificación. Capacidad de crecer en el agar de Mac Conkey... Asa bacteriológica estándar Asa bacteriológica recta Algodón Gasas Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 ml Tubos de 13X100 Papel estraza 5. 4. agares a utilizar para su aislamiento así como las pruebas bioquímicas para su identificación. 1 2 4 4 4 Estufa bacteriológica Mecheros Fisher Mecheros bunsen Rejillas con centro de asbesto Tripies 6.MATERIAL BIOLÓGICO: DESCRIPCIÓN Muestra clínica ( Cepas de BGNnF) 7...REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Reactivo de Erlich Agua destilada Reactivo de ortoparafenilen diamina Agua oxigenada Agar de Eosina Azul de Metileno ( Agar de EMB ) Agar de Mac Conkey ( Agar de MC) Agar de Xilosa Lisina Desoxicolato ( Agar de XLD ) Agar de Salmonella y Shigella ( Agar de SS ) Agar de Tiosulfato Citrato Biis Sacarosa ( Agar de TCBS ) Agar de Hierro de Kligler ( Agar KIA ) Agar de Hierro y Lisina ( Agar LIA ) 19 . EN AGAR MC + + Pobre o Pobre o Pobre o 20 .5 ml de aceite mineral. KIA: Sembrar por picadura y estría en la superficie d) Incubar a 36 +/.1 ° C. BAB o MH: Sembrar una estría en la superficie. MC: Sembrar una estría en la superficie.. METABOLISMO MOVILIDAD Pseudomonas Acinetobacter Flavobacterium Bordetella Moraxella Stenotrophomonas O O o I O O O o I O + V V + OXIDASA + + + + . MIO: Sembrar por picadura en el centro.DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA: a) Sembrar la muestra biológica en Agar de EMB. O/F: Sembrar por picadura en el centro dos tubos y a uno agregarle 0. SS y XLD por medio de la estría cruzada e incubar las placas a 36 +/. MC. b) Seleccionar por la morfología colonial sospechosas de una BGNnF . c) Sembrar la colonia sospechosa con un asa recta en las siguientes pruebas bioquímicas: Tomar el inoculo con el asa recta de una sola colonia y sembrar de la siguiente manera.1 °C durante 24 hrs.Agar Citrato de Simmons ( Agar CIT ) Medio de Movilidad Indol y Ornitina ( Medio MIO ) Caldo Urea ( Caldo UR ) Caldo Malonato ( Caldo MAL ) Medio de Hugh – Leifson ( Medio de O/F ) Kit para tinción de Gram 8./ Débil CREC. e) Llevar a cabo las lecturas en base a los cambios de color en los medios de O/F. crecimiento en agar de MC y a partir del la estría en BAB o MH agregar un pequeño inoculo en la tira reactiva con reactivo de ortoparafenilen diamina para determinar producción de oxidasa. determinar la movilidad. f) En base a las lecturas y utilizando la tabla de Géneros de King – Weaver identifique la bacteria de acuerdo a la siguiente tabla. durante 24 hrs. 5.Color de los medios después del crecimiento. 11. Comenta conclusiones con tus compañeros.Realizar un frotis y teñir con la tinción de Gram.. 1. Reporta los resultados del estudio.ACTIVIDADES: Anota tus resultados.-Color inicial de 21las pruebas bioquímicas..-Cambios de color después de 21la incubación..Alcaligenes O o I + + - 9.-Color inicial de los Medios de cultivo. 6. 4. • Deben utilizarse. bata de laboratorio blanca. 7.CUESTIONARIO 21 . 4.RECOMENDACIONES: Al trabajar en el Laboratorio: • Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias. Contesta el siguiente cuestionario. • Todos los materiales contaminados deben colocarse en de inmediato en un desinfectante.REPORTE DE RESULTADOS: Reportar lo observado durante la práctica. debidamente abotonada..Bacteria aislada e identificada... 10. 3.. 12.. cubreboca. larga y manga larga.Las lecturas de cada una de 21las pruebas bioquímicas. • No colocarse ni llevarse nada a la boca. Completa el glosario. 2.-Morfologia colonial. Mencione las tres pruebas claves para sospechar de una BGNnF. 2. . . 1p b) Seleccionó y preparó adecuadamente el material y reactivo 1p Cumple NO N/A Observaciones Puntos 22 .Diga que es el metabolismo fermentativo.EVALUACIÓN: GUÍA DE OBSERVACIÓN Instrucciones: a) Lee y analiza el fundamento de la práctica b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos c) Desarrolla el procedimiento de la práctica d) Lee e interpreta los resultados e) Observaciones con base a la norma 166 y 087 Aspecto a observar SI a) Leyó y analizó el fundamento de la práctica. GLOSARIO DE TERMINOS: O/F Inerte No sacarolítica Oxidación Fermentación 14. 6.1. . 5. .Defina el significado de metabolismo oxidativo.Diga por qué se le agrega aceite mineral a uno de los tubos de O/F. 13.Género y especie de BGNnF comúnmente aislada de pacientes hospitalizados.. . 3. .Explique el significado de K/N en el agar de KIA. 4. 2p 15. Interamericana Bayled – Scout Brooks. 1999. 2005 Levinson e Interamericana. 2004 Manual moderno. Conant E. 2006 Panamericana. interpretó y contrastó eficazmente sus resultados con los valores referenciales 1p g) Cumplió con los aspectos de las NOM 005 y 087. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana. 2p f) Leyó. Klein Micología Médica.. Microbiología. Panamericana. Prescott.BIBLIOGRAFÍA : AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. Sahm. 1p e) Manipuló con destreza el equipo. 2p d) Interacción grupal e individual.c) Desarrollo correctamente el procedimiento. la identificación de de 2003 bacterias médica. 2006 Interamericana. Diagnóstico microbiológico Microbiología médica Microbiología inmunología médica.Harley. Prats Forbes. Geo F importancia 23 . Microbiología clínica Weissfeld. 24 . 3 Titulo de la Práctica: Diagnóstico de las micobacteriosis ( Baciloscopia ) Fecha de realización: Enero 2013 Submódulo 1 Procesar cultivos bacteriológicos Competencia profesional: Realizar una baciloscopia RESULTADO DE APRENDIZAJE: Aprender a realizar la baciloscopia como apoyo en el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar.Práctica No. como la desnutrición. Actividad 3: Realizar la Tinción de Ziehl Neelsen.INTRODUCCIÓN: La baciloscopia. es mejor alternativa en comparación a otras técnicas sofisticadas. Si bien la complejidad del cultivo y su costo resultan ser mayores que la baciloscopia. Por lo tanto. drogadicción. parasitosis.. Con un costo bajo y de rápida ejecución.. 1. la baciloscopia no puede ser utilizada como única opción en el diagnostico de la tuberculosis extrapulmonar y se debe utilizar el cultivo en todos los especímenes no pulmonares. Actividad 5: Anota sus observaciones y reporta resultados. SIDA y alcoholismo hacen que el problema aumente. 3. teniendo en cuenta la toma de la muestra y la baciloscopia directa para la búsqueda de los BAAR. Actividad 4: Llevar a cabo el recuento de BAAR. es la técnica fundamental en toda investigación bacteriológica de la tuberculosis. Actividad 2: Realizar un frotis de acuerdo a las indicaciones de seguridad. su asociación con la pobreza y las condiciones características de las misma. en México en el programa de control de la tuberculosis se tiene establecido que el diagnóstico de esta enfermedad se realice preferentemente por técnicas bacteriológicas ( La baciloscopia ) solicitando tres muestras de esputo cuando se sospecha de esta enfermedad. ESTRATEGIA ENSEÑANZA.INTRODUCCIÓN: La tuberculosis humana es una de las enfermedades más viejas que todavía se encuentra ampliamente distribuida en el mundo. 2.OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Determinar el diagnóstico de laboratorio de la tuberculosis pulmonar.. en la detección de casos y control de tratamiento. se sabe que el 95 % de los enfermos se ubica en los países subdesarrollados.APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtiene la muestra del paciente en un recipiente de boca ancha de acuerdo a las indicaciones para la obtención adecuada. Cuando se 25 . la baciloscopia es una técnica que permite identificar al 70-80% de los casos pulmonares positivos.FUNDAMENTO La técnica de tinción utilizada fue la de Ziehl-Neelsen tradicional. examina muestras de esputo u otras lesiones en donde estas bacterias se encuentran. 4. su característica principal es bacilos ácido-alcohol resistencia (BAAR) ya que son difíciles de teñir con fucsina pero una vez teñidos resisten a la decoloración con alcohol-ácido.MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN Portaobjetos Aplicadores de madera.Neelsen Alcohol etílico Cloro al 10 % 8. Algodón Gasas Papel estraza Recipiente con cloro al 10 % Lámpara de alcohol Puente de tinción 5.EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 Microscopio DESCRIPCIÒN 6.RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA: Se obtiene una muestra de esputo por la mañana en un área abierta en un frasco de plástico de boca ancha evitando la contaminación externa del 26 ..REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Agua destilada Kit para tinción Ziehl .MATERIAL BIOLÓGICO CANTIDAD DESCRIPCIÓN Muestra de esputo 7... al microscopio.. previa coloración de los extendidos.. -Si usa palillo para realizar el extendido. tratando de dispersarla por toda la superficie central. Si es demasiado fino. 12.-Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el asa con movimientos circulares. lápiz para marcar los portaobjetos. 9. tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado.. la que descartará con el material a esterilizar.Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero. enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo.-Antes de comenzar a trabajar. 11. 8.. parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas.. 6. quémela primero desde el mango hacia el aro.Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos. soporte para los extendidos.recipiente. 3. . en forma homogénea.-Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos el extendido debe quedar de grosor homogéneo. El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado .-Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla.DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA 1. si usó asa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol.Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración. déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta.. 9. disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero..Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente.-Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos.-Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. pásela con movimientos circulares por la arena y 27 . si es muy grueso. 2.-Si usa asa no descartable. el material puede desprenderse durante la coloración. 5. el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. sin llegar a los bordes. 7. al finalizar el trabajo. 10.Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos. 4. frasco con arena y fenol o alcohol. aplicadores o asas. El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco. es posible producir un resultado falso negativo. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar. Tinción de Ziehl Neelsen 15......Realizar el reporte de a cuerdo al siguiente a la siguiente tabla. 15. 14. 16.luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro..Cuando haya terminado. 17.Dejar secar el frotis a temperatura ambiente. 16. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio. 23.. 13. 22.REPORTE DE RESULTADOS Resultado del examen microscópico No se encuentran BAAR en los 100 campos revisados Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 campos revisados Se observaron de 10 a 99 BAAR en 100 campos revisados Se observan de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos revisados Se observan más de 10 BAAR por campo en 20 campos revisados Informe No se observaron BAAR Número exacto de BAAR en 100 campos Positivo ( + ) Positivo ( ++ ) Positivo ( +++ ) 28 . junto con los palillos.Lavar con agua de la llave a presión baja. 19... 18..Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido.. puede descartar las muestras colocándolas. 20. no lo queme ni lo sobrecaliente..Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo. 10.Calentar a emisión de vapores durante cinco minutos sin que hierva y sin que se seque el colorante.Observar al microscopio al objetivo de 100 X revisando cien campos. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente.Lavar con agua de la llave a presión baja.Colocar el frotis en un puente de tinción y cubrir con el colorante de Fucsina fenicada básica.Decolorar con alcohol ácido al 3 % enjuagando con agua de la llave a presión baja hasta que ya no salgan restos de colorante.Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado. 21...Cubrir el frotis con el azul de metileno durante un minuto. para evitar confusiones. A veces se observan con gránulos o cuentas intensamente coloreados en el interior.NOTAS IMPORTANTES La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes para aumentar la probabilidad de identificar los casos de tuberculosis mediante la baciloscopia directa de esputo. 2..¿Nombre de los compuestos característicos de la pared celular de las bacterias del género Mycobacterium que le dan la propiedad de ser Acido Alcohol Resistentes? 4. rojo fucsia. 13.11.¿Medio que se utiliza comúnmente para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis? 29 . Completa el glosario de términos. -Explica el fundamento de la técnica de la Tinción de Ziehl Neelsen. Los extendidos deben ser teñidos de inmediato. 14.Mencione el género de otra bacteria que se tiña como BAAR. Con la coloración de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados. Contesta el siguiente cuestionario... ya que algunos bacilos pueden permanecer vivos después de fijados con calor hasta que se le agrega la fucsina. 12.... destacándose claramente contra el fondo azul. 3. ligeramente curvos.OBSERVACIONES Los bacilos acidorresistentes tienen entre 1 y l0 µm de largo.ACTIVIDADES Anota tus resultados.CUESTIONARIO 1. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compañeros.. GLOSARIO DE TERMINOS BAAR Auramina Extrapulmonar Renal Meníngea 16. ¿Nombre del método de concentración que se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis? 8.. 1p Cumple NO N/A Observaciones Puntos 30 .Mencione en que otras muestras se pueden encontrar los BAAR para el diagnóstico de tuberculosis 7.Mencione otra técnica de tinción que se utiliza para la baciloscopia..5.EVALUACIÓN: GUÍA DE OBSERVACIÓN Instrucciones: a) Lee y analiza el fundamento de la práctica b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos c) Desarrolla el procedimiento de la práctica d) Lee e interpreta los resultados e) Observaciones con base a la norma 166 y 087 Aspecto a observar SI a) Leyó y analizó el fundamento de la práctica...¿Diga porqué se utiliza la baciloscopia como diagnóstico de la tuberculosis y no el cultivo? 15. 6. 2p 17. Prats Forbes. interpretó y contrastó eficazmente sus resultados con los valores referenciales. 2p f) Leyó. 2006 Interamericana.BIBLIOGRAFÍA : AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. Interamericana Bayled – Scout Brooks. la identificación de de 2003 bacterias médica. 1p c) Desarrollo correctamente el procedimiento. Panamericana. Prescott. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana. 2005 Levinson e Interamerica. 2p d) Interacción grupal e individual. 1999.1p g) Cumplió con los aspectos de las NOM 005 y 087. Sahm.. Klein Micología Médica. 1p e) Manipuló con destreza el equipo. Microbiología. Microbiología clínica Weissfeld.Harley.b) Seleccionó y preparó adecuadamente el material y reactivo. Geo F importancia 31 . 2004 Manual moderno. Conant E. Diagnóstico microbiológico Microbiología médica Microbiología inmunología médica. 2006 Panamericana. Actividad 2: Realiza el primoaislamiento en los agares de EMB o MC.APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtener una muestra de material fecal utilizando el medio de transporte de Cary-Blair. XLD o SS y sembrar un hisopo en el caldo de tetrationato.. 32 . 4 Submódulo 1 Procesar cultivos bacteriológicos Titulo de la Práctica: Coprocultivo Fecha de realización: Enero 2013 Competencia profesional: Aislar e identificar enteropatógenos RESULTADO DE APRENDIZAJE: Realizar un coprocultivo para el aislamiento e identificación de bacterias enteropatógenas en el diagnóstico de las enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal. INTRODUCCIÓN: Las enfermedades infecciosas del aparato gastrointestinal representan una de las principales causas de mortalidad y morbilidad infantil por la diarrea aguda de niños menores de cinco años. En el tercer mundo es un serio problema y está relacionado con la desnutrición donde se crea un circulo vicioso para el niño enfermo aumentando las cifras a nivel mundial.Práctica No. ESTRATEGIA ENSEÑANZA. Shigella y Yersinia. bacilos Gram positivos. Streptococcus. cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implica la separación de los géneros patógenos. 4. Actividad 4: Seleccionar colonias sospechosas de los agares de resiembra y sembrar pruebas bioquímicas.. lo que involucra usar varios medios de cultivo selectivos y diferenciales para el aislamiento primario y la identificación.. bacterias entéricas Gram negativas.MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN 33 . Salmonella.Actividad 3: Realiza el cultivo de la resiembra en los agares de XLD o SS y VB o SB.FUNDAMENTO La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal muy excesivamente amplia. 3. los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios ( Bacteroides. 2. este porcentaje ha aumentado si se incluye en la búsqueda agentes como Escherichia coli. Actividad 5: Interpretar las pruebas bioquímicas sembradas a partir de los agares de resiembra e identificar la bacteria . Actividad 6: Anota las observaciones y reporta resultados. diferenciales y de caldos de enriquecimiento. interpretar las pruebas bioquímicas sembradas a partir de los agares de primoaislamiento e identificar la bacteria.. usualmente a través del empleo de medios selectivos. 1. de esta manera es posible ofrecer apoyo para que puedan ayudar a los enfermos a combatir estas enfermedades. Hasta hace algunos años la proporción de análisis positivos eran de un 10 a 20 % aún en las mejores condiciones de laboratorio.OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Aislar e identificar Enterobacterias a partir de materia fecal procedente de pacientes con diarrea..INTRODUCCIÓN: El estudio de la materia fecal para el aislamiento e identificación de bacterias productoras de diarrea se denomina coprocultivo y apoya el diagnóstico clínico. seleccionar colonias sospechosas de los agares de primoaislamiento y sembrar pruebas bioquímicas. .REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Reactivo de Erlich 34 . 5..Cajas Petri desechables sin división Hisopos estériles.MATERIAL BIOLÓGICO CANTIDAD DESCRIPCIÓN Muestra de material fecal en medio de transporte de Cary .EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 2 4 4 4 Estufa bacteriológica Mecheros Fisher Mecheros bunsen DESCRIPCIÒN Autoclave ( Olla de presión Presto de 21 lt.. Asa bacteriológica estándar Asa bacteriológica recta Algodón Gasas Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 ml Tubos de 13X100 Papel estraza Pipetas graduadas de 10 ml. ) Rejillas con centro de asbesto Tripies 6.Blair 7. DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA a) Una muestra recién evacuada o un hisopado rectal en Cary Blair sembrarla como primoaislamiento en agar EMB o MC. Seleccionar colonias sospechosas de Salmonella o Shigella a partir de los medios de primoaislamiento ( Colonias lactosa negativa y/o productoras de ácido sulfhídrico ) y tomar el inoculo de una sola colonia con el asa recta y sembrar de la siguiente manera los tubos de las bioquímicas : 35 ..1 ° C durante 24 hrs.RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA: La materia fecal se obtiene con el uso de un hisopo del medio de transporte de Cary – Blair o bien una muestra recién evacuada 9. b) Realizar una resiembra a partir del caldo de tetrationato en agar SS o XLD y VB o SB estriando por estría cruzada.Agua destilada Reactivo de ortoparafenilen diamina Agua oxigenada Agar de Eosina Azul de Metileno ( Agar de EMB ) Agar de Mac Conkey ( Agar de MC) Agar de Xilosa Lisina Desoxicolato ( Agar de XLD ) Agar de Salmonella y Shigella ( Agar de SS ) Agar de Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa ( Agar de TCBS ) Agar de Hierro de Kligler ( Agar KIA ) Agar de Hierro y Lisina ( Agar LIA ) Agar Citrato de Simmons ( Agar CIT ) Medio de Movilidad Indol y Ornitina ( Medio MIO ) Caldo Urea ( Caldo UR ) Caldo Malonato ( Caldo MAL ) Caldo de tetrationato Kit para tinción de Gram 8.. XLD o SS estriando por estría cruzada e introducir un hisopo con muestra en un tubo de caldo tetrationato con dos gotas de lugol e incubar a 36 +/. d) Llevar a cabo la interpretación de las pruebas bioquímicas en base a los cambios de color.) Lac ( .) MC Lac ( . MAL: Introducir el asa dos veces sin agitar. anotar las lecturas para identificar la bacteria utilizando la tabla de géneros y especies.) Lac ( . c) Seleccionar colonias sospechosas de Salmonella ( Colonias lactosa negativa y/o con acido sulfhídrico ) y sembrar los tubos de las pruebas bioquímicas de la misma manera e incubar a 36 +/. Incubar los agares de la resiembra y pruebas bioquímicas a 36 +/.KIA: Picadura y estría en la superficie.tabla CARACTERISTICAS DE LA MORFOLOGIA COLONIAL DE Salmonella y Shigella EN LOS MEDIOS UTILIZADOS PARA AISLAR ENTEROPATÓGENOS EMB Salmonella Lac ( . UR: Introducir el asa dos veces sin agitar. MIO: Picadura en el centro.1 °C durante 24 hrs.) s Lac ( .) Ojo de pescado SS Negras Lac ( .) 36 .) XLD Negras Lac ( . anotar las lecturas para identificar la bacteria utilizando la siguiente . LIA: Picadura y estría en la superficie.1 °C durante 24 hrs.) Ojo de pescado VB Transparentes Medio rojo SB Negras con Brillo metálico Ojo de pescado Transparentes Transparentes Shigella Transparentes Transparentes Trabnsparente Transparentes Lac ( . Además llevar a cabo la interpretación de las pruebas bioquímicas en base a los cambios de color. CIT: Estría en la superficie. Medio rojo TABLA DE IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS FRECUENTES IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN 37 . amalonaticus C.Escherichia coli Salmonella sp Shigella sp Klebsiella K.. agglomerans E. con su género iniciando con mayúscula y la especie con minúscula.. rettgeri P. diversus C. aerogenes E. planticola Proteus mirabilis Proteus penneri Proteus vulgaris Citrobacter C. primero se escribe el nombre de la bacteria. cloacae Providencia P. ozanae K.odorifera S. rubidea + + V + + + + + + V - + + V + + - + + + V + + + + + V + + + V + + + V + + V + + V V V + + + V + + + + + + + + + + + + + V V V V + + V + + + + + V V V V V + V V - + + V + + V V V + V + V V + + + + V + + + + + + V + + + + V + + + + V - 10. alcalifaciens P. Reporte: Ejemplo Se aisló Salmonella sp 11. pneumoniae K. licuefaciens S. ya que si se 38 . marcescens S. oxytoca K.OBSERVACIONES Leer las placas y pruebas bioquímicas en el tiempo especificado. rhinoscleromatis K. stuarti Serratia S. subrayando ambos o escribiéndolo con letra cursiva y negrita. freundii Enterobacter E.REPORTE DE RESULTADOS Para reportar los hallazgos en el cultivo. CUESTIONARIO 1.Diga cuál es el segundo azúcar en importancia que se toma como referencia para identificar las Enterobacterias... Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compañeros.Mencione el nombre de los indicadores que contienen los medios de cultivo y pruebas bioquímicas utilizados para el estudio de las Enterobacterias. no recolectar la materia fecal de la tasa del baño ni de recipientes donde se haya defecado con restos de orina. Contesta el siguiente cuestionario. 4. 14..NOTAS IMPORTANTES Las muestras deben de ser sembradas lo más pronto posible para el primoaislamiento ya que Shigella es muy lábil al pH.leen antes o después del tiempo los cambios de color presentados no serán confiables al determinar las lecturas de interpretación..Mencione ejemplos de otras bacterias causantes de diarrea.¿Diga por qué en la resiembra a partir del caldo de tetrationato no se aisla la Shigella? 3... 12.ACTIVIDADES Anota tus resultados.Investigue el nombre de otros ejemplos de caldos que se utilizan como enriquecimiento para el aislamiento de enteropatógenos.Mencione el nombre de otros medios de cultivo utilizados para aislar bacterias Enteropatógenas. 6. 8. 2.¿Medio de transporte recomendado en la toma de muestra para realizar el coprocultivo? 39 ... .. 7..Diga que significa el precipitado negro formado en el agar de TSI o KIA. 5. 13. Completa el glosario de términos. 2006 Panamericana.15. 2005 e Interamerica.Harley. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana. Microbiología. Geo F Levinson Conant E. Sahm. Micología Médica. Microbiología clínica Weissfeld. 1999.-BIBLIOGRAFIA: AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. Prescott. Klein 40 . Diagnóstico microbiológico Bayled – Scout Brooks. 2006 Interamericana. la identificación de de 2003 bacterias médica. Interamericana Prats Forbes. 2004 Microbiología médica Microbiología inmunología médica. importancia Panamericana. Manual moderno. 41 . 5 Submodulo:1 Procesar cultivos bacteriológicos Titulo de la Práctica: Urocultivo Fecha de realización: Enero 2013 Competencia profesional: Realizar urocultivo aislando e identificando el agente patógeno.Práctica No. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: 42 . INTRODUCCIÓN: El urocultivo es uno de los métodos tradicionalmente realizados en el laboratorio de microbiología clínica que sigue manteniendo su vigencia y utilidad.APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtener la primer muestra de orina de la mañana previo aseo de genitales con la técnica del chorro medio. sino porque además establece un diagnóstico de certeza identificando al agente causal de infección en vías urinarias. micótica o vírica.RESULTADO DE APRENDIZAJE: Realizar el cultivo de orina para el apoyo en el diagnóstico de infección en vías urinarias ( Urocultivo ). no sólo por ser sencillo y barato. La infección de vías urinarias (IVU) es la enfermedad más frecuente del aparato urinario.. 1. La mayoría se consideran IVU no complicadas. se define como la presencia y proliferación de gérmenes en el tracto urinario. Actividad 4: Anota sus observaciones y reporta resultados. En el ámbito hospitalario es la infección más usual y en el comunitario sigue a las infecciones respiratorias. Habitualmente es bacteriana y excepcionalmente. Se pone en evidencia mediante el cultivo de la orina en medios de crecimiento apropiados. permite conocer la sensibilidad de dichos patógenos a los antimicrobianos.. ESTRATEGIA ENSEÑANZA. Actividad 2: Realizar el sembrado de la muestra en los agares apropiados. Actividad 3: Identificar el uropatógeno aislado. hospitalizados o ambulatorios.. En la mayor parte de los casos. se dicen que hay bacteriuria cuando existe una infección a nivel de vías urinarias. Proteus sp. el crecimiento de más de 100 000 UFC/ml en una muestra de orina adecuadamente recogida puede significar infección. Las infecciones de las vías urinarias son comunes en todo el mundo. Klebsiella sp y Enterobacter sp.INTRODUCCIÓN: La orina de personas aparentemente sanas es estéril. Si hay bacterias. en cambio en pacientes hospitalizados se aísla Escherichia coli. La bacteriuria puede ser asintomática o presentarse como una enfermedad crónica o aguda.El alumno conocerá la metodología para el diagnóstico de las infecciones en vías urinarias 2. Staphylococcus saprophyticus. 3. hay más de 100 000 UFC/ml de un microorganismo en cultivo puro en dos muestras diferentes de orina. Se considera que hay bacteriuria asintomática cuando. Son causadas generalmente por una sola bacteria aunque ocasionalmente pueden encontrarse dos o más. crecerán formando colonias que pueden ser contadas como unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml). Las bacterias que se aíslan de la orina de pacientes ambulatorios con infección en vías urinarias son: Escherichia coli. en todas las épocas del año y se presentan en pacientes de cualquier edad y de ambos sexos. Klebsiella sp.MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN Cajas Petri desechables sin división Asa bacteriológica calibrada de 0. 4.FUNDAMENTO Se pone en evidencia mediante el cultivo de la orina en medios de crecimiento apropiados. sin embargo.. Enterococcus faecalis. en ausencia de síntomas.01 ml ( Mango negro ) Asa bacteriológica recta Algodón Gasas Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 ml Tubos de 13X100 Papel estraza 43 . Staphylococcus epidermidis.. En presencia de síntomas o piuria puede haber IVU con recuentos de bacteriuria menores: 100 UFC/ml. y Streptococcus pyogenes. Frasco estéril de boca ancha 5.RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA: 44 ..REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Reactivo de Erlich Agua destilada DESCRIPCIÓN Reactivo de ortoparafenilen diamina Agua oxigenada Placas de gelosa sangre Agar de Eosina Azul de Metileno ( Agar de EMB ) Agar de Mac Conkey ( Agar de MC) Agar de Hierro de Kligler ( Agar KIA ) Agar de Hierro y Lisina ( Agar LIA ) Agar Citrato de Simmons ( Agar CIT ) Medio de Movilidad Indol y Ornitina ( Medio MIO ) Caldo Urea ( Caldo UR ) Caldo Malonato ( Caldo MAL ) Caldo de tetrationato Kit para tinción de Gram 8.MATERIAL BIOLÓGICO CANTIDAD Muestra de orina 7.EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 2 4 4 4 Estufa bacteriológica Mecheros Fisher Mecheros bunsen Rejillas con centro de asbesto Tripies DESCRIPCIÒN Autoclave (Olla de presión Presto de 21 lt...) 6..Pipetas graduadas de 10 ml. Resultados: 1. 4.000 45 . 9. Tomar con una asa bacteriológica calibrada de 0. 3. Homogenizar la muestra y abrir el frasco junto al mechero.01ml o 0. descartando la primera porción y recolectando la micción media en un envase estéril de boca ancha. 5.REPORTE DE RESULTADOS Para la valoración del urocultivo se cuantifica el número de colonias crecidas por mililitro de orina. por medio de la regla de tres. Depositarla en la parte central de extremo a extremo en una placa de gelosa sangre y sembrar con la técnica de la estría cerrada. 7.000 UFC/ml.001 ml estéril de la muestra de orina.La recogida de la muestra se hará con la primera muestra de orina por la mañana mediante lavado previo de genitales.Calcular el número de UFC / ml de orina. homogenizar la muestra y volver a tomar una muestra de orina..Revisar si el crecimiento corresponde al mismo tipo de morfología colonial. 6. 10. 9. Se informará “se aíslan menos de 10..Realizar un frotis de una de las colonias y teñir con la tinción de Gram. 10. con jabón y bastante agua.De acuerdo a la morfología microscópica y tinción de Gram identificar la bacteria.. Depositarla en la parte central de extremo a extremo en una placa de agar de eosina azul de metileno y realizar la siembra con la técnica de la estría cerrada. Esterilizar el asa.. Menos de 10. Incubar las placas a 37 ° C de 24 a 48 hrs.. en menos de dos horas a temperatura ambiente o de 24 horas a 2-8 °C En caso de orinas por punción supra púbica se utilizarán envases para transporte de anaerobios. 8..DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA Siembra de la muestra: 1. 2. como niños que precisan un urocultivo de control después de una infección pasada. embarazadas o diabéticos. c) obstrucción uretral. Si corresponde a un único microorganismo patógeno. Con dos microorganismos aparecerá el número de colonias. Especial atención merece cualquier cantidad de colonias de Streptococcus agalactiae en gestantes. 4. En casos especiales. De 10. .000 UFC/ml.Para la búsqueda de micobacterias.000 a 100. y siempre en caso de cultivo puro. b) micción reciente. consideraremos la orina contaminada. 3. una identificación de género y se solicitará una nueva muestra. en el informe aparecerá la identificación por especie y el antibiograma de cada uno de ellos.000 UFC/m. 2.UFC/ml”. d) pH urinario muy bajo. Más de 100. identificación a nivel de especie y antibiograma con la indicación de valorar clínicamente. y se elegirá preferentemente la primera micción de la mañana. con su género iniciando con mayúscula y la especie con minúscula.Para la investigación de anaerobios es necesario que la orina se obtenga por punción suprapúbica.OBSERVACIONES En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por sí mismos. y en el caso de 46 .. En cultivo puro de uno o dos uropatógenos. e) infección por microorganismo “exigente” o de crecimiento lento. Con tres o más uropatógenos se considera muestra contaminada.-Muestra contaminada si crecen más de una bacteria diferentes. pues es difícil saber si alguno de ellos está causando la ITU. la orina se recoge de la forma descrita anteriormente durante tres días consecutivos. subrayando ambos o escribiéndolo con letra cursiva y negrita. 11. se indicará el número de colonias. Se escribe el nombre de la bacteria. a menudo secundaria al síndrome cístico. se realizará sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas asépticas oportunas. . El urocultivo puede ser negativo o tener recuentos bajos en caso de: a) tratamiento antibiótico previo. puede informarse del número de colonias y una identificación mínima. Cuando se sospecha la presencia de hongos el volumen será superior a 20ml. En este caso el volumen de orina debe ser 100-150ml. ¿Mencione tres factores que influyen para que una muestra salga contaminada? 5. No recolectar la orina desde el inicio de la micción. ¿Escriba los nombres de las bacterias que se aíslan con mayor frecuencia en pacientes hospitalizados? 6. siendo admisible.. CUESTIONARIO 1.¿Bacterias más comunes aisladas en los urocultivos positivos? 2.parásitos se recogerá la orina de 24 horas.. Completa el glosario de términos. 14. . Contesta el siguiente cuestionario. 12.¿Diga que se utiliza para recolectar la muestra de orina en niños pequeños? 4. si no puede garantizarse el transporte correcto... Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compañeros.. El laboratorio debe controlar el transporte.ACTIVIDADES Anota tus resultados.NOTAS IMPORTANTES La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 24 horas. la utilización de algún conservante (ácido bórico al 2% o el sistema comercial con bóricoformiato).. garantizándose el que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma.GLOSARIO DE TERMINOS 47 . 13.¿Mencione un factor que influye para que un urocultivo pueda reportarse como un falso negativo?.¿Diga por qué se descarta la primera porción de orina al momento de recolectar la muestra? 3. 48 importancia .EVALUACIÓN GUÍA DE OBSERVACIÓN Instrucciones: a) Lee y analiza el fundamento de la práctica b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos c) Desarrolla el procedimiento de la práctica d) Lee e interpreta los resultados e) Observaciones con base a la norma 166 y 087 Aspecto a observar SI a) Leyó y analizó el fundamento de la práctica. la identificación de de 2003 bacterias médica. 1p c) Desarrollo correctamente el procedimiento. 2p Cumple NO N/A Observaciones Puntos 16. Prats Microbiología clínica Panamericana. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana. interpretó y contrastó eficazmente sus resultados con los valores referenciales.Disuria Suprapúbica Uropatógeno Antibiograma 15. 2p d) Interacción grupal e individual..1p g) Cumplió con los aspectos de las NOM 005 y 087.. 1p e) Manipuló con destreza el equipo.BIBLIOGRAFÍA: AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. 1p b) Seleccionó y preparó adecuadamente el material y reactivo. 2p f) Leyó. Microbiología. Conant E. Geo F 49 . 1999. Klein Micología Médica. 2006 Interamericana. Diagnóstico microbiológico Microbiología médica Microbiología inmunología médica. 2004 Manual moderno.2006 Forbes. Prescott. 2005 Levinson e Interamerica. Weissfeld. Panamericana. Sahm. Interamericana Bayled – Scout Brooks.Harley. especies del género Staphylococcus. Neisseria no gonorrhoeae y meningitidis.Práctica No. aislados esporádicamente. INTRODUCCIÓN: La biota normal en vías respiratorias con frecuencia está constituida por bacterias raramente patógenas como Streptococcus no hemolóticos . Actividad 3: Seleccionar e identificar el agente patógeno. Es posible que la garganta y las amígdalas presenten manchas o una capa de color amarillo y. que se inflaman e irritan. Haemophilus influenzae. los ganglios linfáticos del cuello estén inflamados.. lo cual provoca dolor de garganta particularmente molesto al tragar. La bacteria más común causante de faringoamigdalitis es el Streptococccus pyogenes ( Streptococcus beta hemolítico gpo A ) aunque también como patógenos de este sitio se encuentran Corynebacterium diphtheriae.APRENDIZAJE: Actividad 1: Obtener la muestra del exudado faríngeo. Actividad 2: Realizar el sembrado de la muestra. La faringitis estreptocóccica es una infección bacteriana que afecta la parte posterior de la garganta y las amígdalas. 50 . 6 Titulo de la Práctica: Cultivo de exudado faríngeo Fecha de realización: Enero 2013 Submodulo:1 Procesar cultivos bacteriológicos Competencia profesional: Realizar el cultivo de exudado faríngeo RESULTADO DE APRENDIZAJE: Realizar el cultivo del exudado faríngeo para el apoyo en el diagnóstico de la faringoamigdalitis de origen bacteriano. quizás. ESTRATEGIA ENSEÑANZA. Las infecciones estreptocóciccas de la garganta no suelen ir acompañadas de síntomas de resfrío. laringe. los médicos recetan antibióticos con el fin de evitar complicaciones relacionadas. que comprenden las áreas anteriores a la laringe. dolor de estómago. el dolor de garganta se debe a un virus..OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Determinar e interpretar adecuadamente los aislamientos bacteriológicos obtenidos en el cultivo del exudado faríngeo. 3.. náuseas. como la fiebre reumática. estornudos. neisserias.. Moraxella catarrhalis. congestión o mucosidad nasal. micrococos. El cultivo del exudado faríngeo puede ayudar a determinar las causas del dolor de garganta. Fusobacterium.Actividad 4: Anota sus observaciones y reporta resultados. epiglotis. el agente etiológico más frecuentemente aislado es el Streptococcus pyogenes. estafilococos. oído externo y medio. Peptostreptococcus. corinebacterias. y los senos paranásales. Si bien los síntomas de la faringitis estreptocócica suelen desaparecer en unos pocos días sin tratamiento directo. Haemophilus spp. Actinomyces. La infección puede provocar dolor de cabeza. otros 51 . pero también. y vías bajas o inferiores que incluyen todas las estructuras posteriores a la laringe. pero el cultivo permite determinar si se debe a una bacteria estreptocócica para que los médicos puedan brindar el tratamiento adecuado. etc. Con frecuencia. orofaringe.INTRODUCCIÓN: La faringitis estreptocóccica se presenta comúnmente en niños en edad escolar. vómitos y languidez. Sin embargo. 1. Veillonela. cuando encontramos una patología en la faringe. incluyendo la nasofaringe. Porphyromonas. 2. Prevotella. como tos.FUNDAMENTO El sistema respiratorio se divide en vías altas o superiores. El tracto respiratorio habitual (la faringe) está formado por distintos microorganismos entre los que destacan los siguientes grupos y especies: estreptococos. La faringitis estreptocóccica se presenta comúnmente en niños en edad escolar. náuseas. estornudos. los ganglios linfáticos del cuello estén inflamados. La infección puede provocar dolor de cabeza.microorganismos patógenos que podemos hallar son: Streptococcus pneumoniae. que se inflaman e irritan.) 6. Es posible que la garganta y las amígdalas presenten manchas o una capa de color amarillo y.. vómitos y languidez. Además se procederá a realizar diferentes pruebas La faringitis estreptocóccica es una infección bacteriana que afecta la parte posterior de la garganta y las amígdalas. etc. como tos. dolor de estómago.MATERIAL BIOLÓGICO CANTIDAD DESCRIPCIÓN Muestra de exudado faríngeo 52 . quizás. Para poder identificar el agente microbiano de la muestra problema. se procederá a la siembra del mismo en diferentes medios de cultivo. congestión o mucosidad nasal.EQUIPO A UTILIZAR: CANTIDAD 1 1 2 4 4 4 Estufa bacteriológica Mecheros Fisher Mecheros bunsen Rejillas con centro de asbesto Tripies DESCRIPCIÒN Autoclave (Olla de presión Presto de 21 lt. y así observar si hay o no crecimiento en cada uno de ellos..MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 a 7 integrantes) CANTIDAD DESCRIPCIÒN Cajas Petri desechables sin división Asa bacteriológica estándar Algodón Gasas Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 ml Papel estraza 5. 4.. Las infecciones estreptocóciccas de la garganta no suelen ir acompañadas de síntomas de resfrío. Streptococcus alfa-hemolítico grupo viridans. lo cual provoca dolor de garganta particularmente molesto al tragar. 53 .RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA: 1.REACTIVOS: CANTIDAD DESCRIPCION Agua destilada Placas de gelosa sangre Agar de Eosina Azul de Metileno ( Agar de EMB ) Agar de Mac Conkey ( Agar de MC) Agar de sal y manitol ( SM ) Kit para tinción de Gram 8.. lengua .Identificar al Streptococcus pyogenes con la prueba de la bacitracina de la siguiente manera: a) Sembrar la colonia a identificar en la parte central de una placa de gelosa sangre .Con un hisopo y abatelengua estéril. agar de sal y manitol y agar de eosina azul de metileno. 2. 6...Buscar colonias pequeñas. b) Con una pinza flameada tomar un disco impregnado con bacitracina y colocarlo en el centro de la siembra masiva e incubar a 37 ° C 24. inflamadas . 9..Sembrar con la técnica de la estría cruzada. en forma masiva.Se cita la paciente en ayunas y sin aseo bucal.. con pústulas . 3..Incubar a 37 ° C de 24 a 48 hrs.. saliva para no llevar contaminantes y se coloca en un medio de transporte de Stuart... 4. con el hisopo se tocan las partes edematosas . blancas beta hemolíticas sospechosas de Streptococcus beta hemolítico. evitar tocar paladar .Realizar un frotis y colorear con la tinción de Gram (observar cocos en pares o cadenas Gram positivos).7.Depositar la muestra en una placa de gelosa sangre.. 5. 2.DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA 1.. c) Observar si se formó el halo de inhibición. d) O bien identificar utilizando antisueros específicos de grupo A. y si no ocurrió lo anterior . La infección puede provocar dolor de cabeza.. dolor de estómago. se dice que no es un Streptococcus pyogenes sino un Streptococcus beta hemolítico no del grupo A. congestión o mucosidad nasal. 12. lengua. se reporta se aisló un Streptococcus beta hemolítico no del grupo A y practica la prueba con el resto de los antisueros para identificar el grupo a que pertenece. ya que se encuentra una variedad de bacterias que forman parte de la flora normal y el crecimiento dificultará la observación del agente patógeno. 11. Cuando la colonia beta hemolítica sospechosa de Streptococcus pyogenes resulta positiva la prueba de la bacitracina o aglutina con el antisuero específico del grupo A.OBSERVACIONES Al momento de la toma de la muestra evitar tocar el paladar. como tos. Las infecciones estreptocóciccas de la garganta no suelen ir acompañadas de síntomas de resfrío.NOTAS IMPORTANTES El cultivo del exudado faríngeo puede ayudar a determinar las causas del 54 .REPORTE DE RESULTADOS Un resultado normal o negativo significa que no se encontró ninguna bacteria u otros microorganismos que puedan causar un dolor de garganta. C. F. parte interna de la mejilla o saliva. B. La faringitis estreptocóccica se presenta comúnmente en niños en edad escolar. Si la colonia beta hemolítica sospechosa de Streptococcus pyogenes resulta negativa la prueba de la bacitracina o no aglutina con el antisuero específico del grupo A.. vómitos y languidez.. D. 10. náuseas. G. estornudos. se reporta que se aisló Streptococcus pyogenes. esto indica que se trata de un Streptococcus pyogenes o Streptococcus beta hemolítico del grupo A . si ocurrió. 13. pero el cultivo permite determinar si se debe a una bacteria estreptocócicca para que los médicos puedan brindar el tratamiento adecuado. 14. Contesta el siguiente cuestionario..ACTIVIDADES Anota tus resultados. Completa el glosario de términos.¿Diga que otro medio de transporte se puede utilizar para la toma del exudado faríngeo? 2.¿Investigue el nombre de los virus que también pueden ocasionar una faringoamigdalitis? 4. CUESTIONARIO 1. Informa tus resultados Comenta conclusiones con tus compañeros.¿Mencione las complicaciones que puede ocasionar una infección por Streptococcus pyogenes? 3.dolor de garganta.Mencione tres recomendaciones al paciente antes de tomar la muestra. el dolor de garganta se debe a un virus...¿Mencione que otros grupos de Streptococcus se consideran agentes causantes de faringoamigdalitis? 5.¿Investigue de que otra manera a través del laboratorio se diagnóstica la faringoamigdalitis ocasionada por Streptococcus pyogenes? 6... Con frecuencia.EVALUACIÓN GUÍA DE OBSERVACIÓN 55 ....GLOSARIO DE TERMINOS Exudado Secreción Escarlatina Erisipela 15. Micología Médica.BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA AUTOR Koneman Elmer Mac Fadin TÌTULO Diagnóstico Microbiológico EDITORIAL Panamericana. Conant E. 56 Bayled – Scout Brooks. 2008 Pruebas bioquímicas para Panamericana. 1p e) Manipuló con destreza el equipo. 2p Cumple NO N/A Observaciones Puntos 16. 2006 Interamericana.1p g) Cumplió con los aspectos de las NOM 005 y 087. 2p d) Interacción grupal e individual. Sahm. Prats Forbes. Diagnóstico microbiológico Microbiología médica Microbiología inmunología médica. Panamericana. interpretó y contrastó eficazmente sus resultados con los valores referenciales. 1p b) Seleccionó y preparó adecuadamente el material y reactivo. Geo F importancia . 1p c) Desarrollo correctamente el procedimiento. 2004 Manual moderno.. 2006 Panamericana. 2005 Levinson e Interamerica.Instrucciones: a) Lee y analiza el fundamento de la práctica b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos c) Desarrolla el procedimiento de la práctica d) Lee e interpreta los resultados e) Observaciones con base a la norma 166 y 087 Aspecto a observar SI a) Leyó y analizó el fundamento de la práctica. Microbiología clínica Weissfeld. la identificación de de 2003 bacterias médica. 2p f) Leyó. F.B. Pedro Joaquín Perales Sabido Q. Alejandra Guadalupe García Pantoja 57 .F.Harley. Prescott. María Esther Sánchez Serra Q. Edgardo Salvador Acevedo Casarrubias Q. INTEGRANTES Q.F. Xóchitl del Carmen Ríos Ochoa Q.B. Interamericana IV.B.F.P.F.B.F.F.B.B. Esly Hernández Torres Q.1999. Miguel Ángel Quijano Couoh Q. Klein Microbiología.B. CREDITOS DE ELABORACIÓN Este cuaderno de trabajo fue elaborado por la academia de Laboratorio Clínico del CBTis 32.B. Andrés Barrientos Acosta Q. QUIJANO COUOH PRESIDENTE DE LA ACADEMIA (Nombre y firma) ACADEMIA ESTATAL DE: Laboratorista Clínico Q. Mario Alberto López Jesús M. MARIA ESTHER SÁNCHEZ SERRA PRESIDENTE DE LA ACADEMIA (nombre y firma) Villahermosa.F. MIGUEL A. Tabasco a Enero de 2013 CONTROL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Nombre del Alumno:_________________________________________________ Grupo:____________________________________________________________ No de Equipo: _____________________________________________________ Nombre del Profesor: ________________________________________________ 58 .F.B.B.Jul 2013 ACADEMIA LOCAL DE: Laboratorista Clínico Q.i.s.Dr.T. No. Ramón Pichardo Hernández V. VALIDACIÓN DEL CUADERNO DE PRÁCTICAS PERÍODO ESCOLAR: PLANTEL: C. 32 Feb 2013 .Z.B.V. 1 2 3 4 5 6 Fecha de realización Observaciones Calificación 59 .Práctica No.
Report "Manual de Practicas Procesar Cultivos Bacteriologicos 2013"