Liebermann–Burchard testFrom Wikipedia, the free encyclopedia Jump to: navigation, search The Liebermann–Burchard or acetic anhydride test is used for the detection of cholesterol. The formation of a green or green-blue colour after a few minutes is positive. Lieberman–Burchard is a reagent used in a colourimetric test to detect cholesterol, which gives a deep green colour. This colour begins as a purplish, pink colour and progresses through to a light green then very dark green colour. The colour is due to the hydroxyl group (-OH) of cholesterol reacting with the reagents and increasing the conjugation of the un-saturation in the adjacent fused ring. Since this test uses acetic anhydride and sulfuric acid as reagents, caution must be exercised so as not to receive severe burns. Method : Dissolve one or two crystals of cholesterol in dry chloroform in a dry test tube. Add several drops of acetic anhydride and then 2 drops of conc.H2SO4 and mix carefully. After the reaction finished, the concentration of cholesterol can be measured using spectrophotometry. References[edit] Campbell, Mary K. & Shawn O. Farrell. Biochemistry. (4th ed.). Singapore: Thomson Asia Pte Ltd. (2005). http://www.clinchem.org/cgi/reprint/20/7/794.pdf http://alquimiafacil.blogspot.com/2012/03/guia-para-complementar-la-10ma.html Guía Para complementar la 10 ma. Práctica de Lab. Bioquímica I,PRACTICA No. 10: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES . FOLLETO PARA COMPLEMENTAR EL APRENDIZAJE DE BIOQUIMICA I AREA: CIENCIAS DE LA SALUD . M. Objetivos: reconocer y diferenciar los esteroides colesterol y ergosterol . Por ejemplo se calcula que en un hombre de 80 kilos. 10: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES . I.ASIGNATURA: laboratorio de Bioquímica I. con un LDL (colesterol malo) inferior a 130 . su nombre procede del griego (chole. PRACTICA No. Bioquímica I Dr. Guía Para complementar la 10 ma. Daniel E. Está presente normalmente en los tejidos.A. El colesterol es el esteroide de origen animal mas conocido y uno de los mas estudiados. el límite elevado del nivel “casi óptimo” . MED195. Rodríguez C. Poseen la estructurara del ciclopentanoperhidrofunantreno. . por ser el componente más abundante de los cálculos biliares). Esteroides Los esteroides se encuentran asociados a las grasas. hay unos 240 gramos de colesterol. Práctica de Lab. (Farmacéutico). y el HDL (colesterol alto ) superior a 40. A los médicos por lo general les gusta ver el colesterol total menor a 200mg/dL . que quiere decir bilis. Esta sustancia es considerada como una pro-vitamina. y la otra en la cadena lateral entre C22-C23. las dan todos los esteroides que lleven uno o mas dobles enlaces en el anillo A o B. hormonas de la corteza suprarrenal . Difiere del colesterol por tener en su estructura dos doble ligaduras adicionales. ya que por irradiación con luz ultravioleta adquiere propiedades antiraquíticas . una entre C7C8 en el anillo B. esto es de manera cuantitativa. Estas reacciones no son específicas. El ergosterol también se diferencia del colesterol por llevar un grupo metilo extra en posición 2. “Otros esteroides de gran importancia bioquímica son las hormonas sexuales. los compuestos saturados no desarrollan color. El ergosterol es un esteroide de origen vegetal. glucósidos cardiacos y los ácidos biliares”.como consecuencia de la apertura del anillo B. .4.(Asbun . para esto se lleva a cabo una reacción química que desarrolle color. 168) Los esteroides se pueden analizar por medios fotométricos. p. vitamina D.1972.Las plantas contienen una variedad de esteroles. REACCION DE ROSENHEIM: se utiliza para diferenciar al ergosterol del colesterol. se desarrolla un color rojo-purpura . El ergosterol . el desarrollo de un color rojo que cambia a azul pálido indica una reacción positiva. Esta reacción consiste en tratar la muestra de solución clorofórmica de un esteroide con una solución de ácido tricloroacético.por ejemplo.116 g de colesterol y se disuelven en cloroformo .BUCHARD: en esta reacción se trata una muestra de esteroide en cloroformo con anhídrido acético y ácido sulfúrico. sólo los compuestos que dan la reacción positiva son aquellos que tienen dos dobles enlaces conjugados. Reactivos -Solución de colesterol 0.REACCION DE SALKOWSKI: cuando se trata la muestra de solución clorofórmica de un esteroide.003 M: se pesan 0. .Reacciones de los esteroides: -REACCION DE LIEBERMAN. se desarrolla un color purpura que pasa a azul verdoso y se estabiliza en verde.cantidad suficiente para completar 100mL. . posee dos dobles enlaces conjugados en el anillo B. Se deja reposar en la obscuridad durante una hora .calidad reactivo. Experimento I :Técnica : Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos . luego en 20 mμ . -Anhídrido acético . Se anotan los valores obtenidos y se traza una curva de absorción para cada uno de los compuestos . -H2SO4 concentrado. Cada vez que cambia la longitud de onda se lleva la escala a 100 % T con el blanco.003 M.119 g de ergosterol (recientemente recristalizado de etanol) en cloroformo . se mide la densidad óptica en el espectrofotómetro. luego 400 mμ. Se usa cloroformo como blanco.A uno se le agrega 2 miL de Solución de colesterol 0.003 M y al otro 2 miL de Solución de ergosterol 0. Empezando en 380 mμ. -Ácido tricloroacético. se completa el volumen a 100mL.calidad reactivo. hasta llegar a 680 mμ. Se le agrega a cada tubo 6 miL de cloroformo .003 M:se disuelven 0.Seguidamente transcurrido ese tiempo. Se mezcla bien y se adiciona 2 gotas de ácido sulfúrico. indicando la densidad óptica sobre el eje de las ordenadas y la longitud de onda ensobre el eje de las .calidad reactivo.-Solución de ergosterol 0. y 10 gotas de Anhídrido acético . se usa cloroformo como blanco . se toman lecturas sucesivas incrementando la longitud de onda en 20mu hasta llegar a los 680 mμ.003 M y al otro 2 miL de Solución de ergosterol 0. 6 miL de cloroformo y se mezclan bien . Experimento III: .cada vez que se cambia la longitud de onda se lleva la escala a 100% T con el blanco. en tanto que el ergosterol presentara una marcada curva de absorción. El colesterol al dar una reacción negativa carecerá de de curva de absorción en la frecuencia señalada .003 M.Después de 30 minutos se mide la densidad óptica de cada una de las soluciones Empezando en 380 mμ . Se le agrega a cada tubo 2 miL de solución de Ácido tricloroacético.A uno se le agrega 2 miL de Solución de colesterol 0. anotando la densidad óptica sobre el eje de las ordenadas y la longitud de onda sobre el eje de las abscisas .abscisas. Con los datos obtenidos se construye una curva de absorción para el colesterol y otra para el ergosterol. Se observara que el colesterol y el ergosterol tienen curvas de absorción similares. Experimento II REACCION DE ROSENHEIM: Técnica : Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos . Si el filtrado esta muy oscuro . Los cristales se recogen por succión . se le decolora con 0.BUCHARD para esteroides insaturados. se calienta hasta disolución y se deja enfriar. mientras se calienta la suspensión en bañoo de María. En un matraz erlenmeyer de 100 miL se colocan 4 g de cálculos biliares pulverizados y se revuelven con 40 miL de acetona . observar los cambios de color en 5 minutos.Obtención del colesterol de cálculos biliares.( se pueden obtener éstos en un hospital. Mezclar 5 gotas de cloroformo con 4 gotas de anhídrido acético y 1 gota de ácido sulfúrico. utilizando dos hojas de papel filtro.el filtrado se destila a la mitad de volumen y se deja enfriar recogiéndose una segunda cosecha. se secan y se pesan . hablar con las estudiantes de enfermería). hasta disolución del colesterol. Tomar con un capilar .un poco de esta mezcla y juntarla con 1-2 mg de colesterol.1 g de carbón activado (norita. Al filtrado se le añaden 20 miL de metanol . La solución se filtra en caliente . se puede conseguir en el laboratorio de tecnología farmacéutica).se vuelve a calentar hasta ebullición y se le va añadiendo agua hasta turbidez. Hacer la prueba de LIEBERMAN. . en un embudo previamente calentado. se vuelve a calentar y filtrar en caliente . D. Ph. Págs. Santo Domingo. 1-Asbun Wady.(1972). Ph. Bioquímica experimental.. 1-Asbun Wady. Alberto. Santo Domingo R. 2-Brito. (2006).Química Orgánica.(1979).D. Cuaderno de trabajo. Bioquímica experimental. 40-43. Buenos Aires.D.D. Argentina (1964). José. Págs.(1972). 4-Celsi. Santiago-Iacobucci. Santo Domingo R. Santo Domingo R. 3-Casanova. ED Kapelius.Observar y apuntar________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ _______. BIBLIOGRAFIA. 235-237. Química elemental moderna orgánica. . ED universitaria _UASD.D. 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