Género Leptospira: El género Leptospira (Noguchi, 1917) perteneciente a la familia Leptospiraceae, Orden Spirochaetales, comprende dos especies: Leptospirainterrogans con aproximadamente 100 variantes serológicas (serovars) patógenos y Leptospira biflexa que son saprofitas, ambas diferenciadas sobre la base de sus propiedades antigénicas, el análisis por la endonucleasa de restricción o la composición del DNA. La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial. Los resorvorios naturales son los roedores y una gran variedad de animales silvestres y domésticos, los cuales eliminan con la orina el agente etiológico, contaminando el agua, suelo, alimentos, etc. El mecanismo de transmisión puede ser directo (orina u órganos de animales infectados) o indirecto (a través de las aguas o suelos contaminados). La puerta de entrada es a través de lesiones de la piel y mucosas incluyendo conjuntivas. Las leptospiras son microorganismos helicoidales, flexibles, usualmente con una longitud de 6 a 20um. y 0,1 um. de diámetro, sus extremos semejan a ganchos semicirculares (ocasionalmente son rectos), son muy móviles. Se colorean por métodos especiales como: Morosov, Vago, Kiktenko, ya que toman débilmente los colorantes de anilina; debido a su diámetro también se visualizan con el microscopio de campo oscuro. Desarrollan en medios especiales líquidos, semisólidos y sólidos, enriquecidos con suero de conejo o de carnero al 8-10% a temperatura de 28-30ºC, en un período de 5-10 días, en condiciones de aerobiosis. El diagnóstico definitivo de leptospirosis requiere de: 1.-Aislamiento de Leptospira interrogans a partir de muestras clínicas (sangre, líquido céfalo-raquídeo u orina), en medios de cultivo o por inoculación de Hamster o cobayos. 2.-Evidencia de conversión serológica en sueros pareados con un incremento cuádruple del título de diagnóstico inicial de 1/100. Otras alternativas para la tipificación son el uso de anticuerpos monoclonales, análisis de factor y los métodos moleculares (PCR, RFLP, PFGE y DNA fingerprinting). las leptospiras se aislan de sangre y LCR. en la tercera semana de enfermedad. Set de colorantes de Kiktenko. Aglutinación-lisis. en la primera semana de enfermedad. a partir de cultivo. Hemoaglutinación indirecta. Mechero de alcohol. Otras pruebas serológicas utilizadas son: Fijación del complemento. La presencia de anticuerpos puede ser detectada en muestras pareadas: 1ra muestra. Durante y después de la segunda semana de iniciada la enfermedad: Período de inmuno-espiroquetúrico.Aislamiento Primera semana de enfermedad: Período agudo espiroquetémico. ELISA e Inmunofluorescencia. Frotises coloreados. . Cultivo de leptospira en medio semisólido de Korthof modificado. la orina puede contener leptospiras. Láminas portaobjetos. antes del tratamiento con antibióticos. 2da muestra. MATERIAL Cultivo de leptospira en medio líquido de Korthof modificado. Eliminar el mordiente y sin lavar. Cubrir el frotis con una solución mordiente y calentar con el mechero de alcohol. COLORACIÓN: 1. Observar al microscopio con objetivo de inmersión.- Asas de siembra en aro.- PROTOCOLO Microorganismo Medio Líquido Medio Semisólido Microscopia con Coloración Kiktenko Leptospira sp. PREGUNTAS . No agitar el medio. añadir el colorante de violeta de genciana al 1%. hasta la aparición del vapor. Las leptospiras se tiñen de un color rosado-violeta en fondo incoloro. caracterizado por la opalescencia en el medio al ser agitado suavemente y observarlo a través de la luz o de una lámpara. Observar en el tubo con medio líquido de Korthof modificado el desarrollo particular de las leptospiras.5.4. 2. 3. Se presentan células solas o entrelazadas. Lavar con agua corriente. evitando la evaporación del mordiente. PROCEDIMIENTO 1. En forma de anillos a unos milímetros de la superficie del medio. semejando la letra C o S generalmente con ambos extremos en forma de gancho.Realizar un frotis en la lámina portaobjeto desengrasada y limpia a partir del cultivo de Leptospira en medio líquido. En el medio semisólido de Korthof modificado. durante un minuto.2. Microscopio de luz y campo oscuro. observar el desarrollo de las leptospiras. calentar el mechero con alcohol hasta la aparición del vapor por 45 segundos. secar al medio ambiente. Aceite de inmersión. 1. bacilos).3.2. ¿Para el diagnóstico de leptospirosis es necesario conocer el serovar infectante? ¿En qué casos está indicada la prueba de FTA-ABS? .- Mencionar dos características que diferencian a las leptospiras de las otras bacterias (cocos.