I - INTRODUCTION: Les protéines sont les éléments essentiels de la vie de la cellule : elles peuvent jouer un rôle structural (comme l'actine), un rôle dans la mobilité (comme la myosine), un rôle catalytique (les enzymes), un rôle de régulation de la compaction de l'ADN (les histones) ou d'expression des gènes (les facteur de transcription), etc. En fait, l'immense majorité des fonctions cellulaires sont assurées par des protéines. II -RAPPEL SUR LES PROTÉINES : Ce sont des macromolécules constituées d'un très grand nombre d'ACIDES AMINES (AA), unis entre eux par une liaison peptidique. Celle-ci résulte de la réaction entre les fonctions amine primaire et carboxylique de deux acides aminés. Il s'agit donc d'une amide secondaire, encadrée par deux groupements (C-H) : NH2-CH-CO-NH-CH-COOH Les protéines présentent quatre types de structures : - primaire : correspondant à un enchaînement d'acides aminés unis par des liaisons covalentes (liaisons peptidiques). - secondaire : où les liaisons peptidiques forment entre elles un angle - tertiaire : où les chaînes peptidiques s'organisent dans l'espace(liaisons par des ponts disulfures) - quaternaire : correspondant à l'association de plusieurs sous unités unies par des liaisons non covalentes. A ² SYNTHÈSE: Les protéines sont assemblées à partir des acides aminés en fonction de l'information présente dans les gènes. Leur synthèse se fait en deux étapes : La transcription où la séquence d'ADN codant le gène associé à la protéine est transcrite en ARN messager La traduction où l'ARN messager est traduit en protéine, au niveau du ribosome, en fonction du code génétique L'assemblage d'une protéine se fait donc acide aminé par acide aminé de son extrémité N-terminale à son extrémité C-terminale. Également, un gène n'est pas forcément associé à une seule protéine mais bien souvent à plusieurs B- FONCTIONS: Les protéines remplissent des fonctions très diverses au sein de la cellule et de l'organisme [2]: -les protéines des structures, qui permettent à la cellule de maintenir son organisation dans l'espace, -les protéines de transport, qui assurent le transfert des différentes molécules dans et en dehors des cellules, -les protéines régulatrices, qui modulent l'activité d'autres protéines, -les protéines de signalisation, qui captent les signaux extérieurs, et assurent leur transmission dans la cellule ou l'organisme, -les protéines motrices, permettant aux cellules ou organismes de se mouvoir. - Les protéines plasmatiques dont les fonctions sont très variées: immunité, transport d'hormones, .... Elles permettent, entre autres, de maintenir la pression oncotique du plasma, et ainsi cela assure la rétention de l'eau dans les vaisseaux sanguins III - LES PROTÉINES PLASMATIQUES : a-définition Une protéine plasmatique ou sérique est une protéine contenue dans le sérum. Ces protéines peuvent être séparées par électrophorèse. On obtient : L· albumine (les plus abondantes) les globulines: y Alpha 1-globulines. y Alpha 2-globulines. y Bêtaglobulines. y Gammaglobulines (aussi appelées immunoglobulines). .B-ESQUISSE DU MÉTABOLISME DES PROTÉINES PLASMATIQUES : 1-BIOSYNTHÈSE : La majorité des protéines plasmatiques sont synthétisées par le foie. sauf les immunoglobulines qui sont synthétisées par les plasmocytes. essentiellement au niveau du fois .mais peut se faire au niveau de la circulation sanguine par des protéases. on peut prévoir le temps que cette protéine mettra pour varier en quantité. Ex : Albumine :19 jours IGg :18 jours Haptogolbine :4jours Fibrinogéne :5jours Orosomucoide :5 jours 3-dégradation : Le siége de leurs synthèse est le siège de leur catabolisme. 2-vitesse de renouvellement : A partir d·une demi-vie d·une protéine. la plus utilisée en analyse .les liaisons peptidiques réagissent avec le sulfate de cuivre dans un milieu alcalin pour donner une coloration violette dont l·intensité est mesuré a 550 nm. Valeurs normales : Adulte : 60-80 g /l Prématuré : 40-60g/l Nouveau né : 50-70 g/l Nourrisson :60 g/l . simple et automatisable. il existe des méthodes quantitatives. 1 -Dosage des protéines totales a-Méthode de biuret C·est la méthode de référence.C-MÉTHODES D·INVESTIGATIONS DES PROTÉINES PLASMATIQUES ces méthodes permettent d·obtenir une analyse simultanée de l·ensemble des protéines sériques . La concentration des protéines est proportionnelle à l·intensité de la coloration.semi quantitatives et qualitatives. b-Méthode réfractométrique Basée sur l·indice de réfraction du sérum clair 2-méthodes de fractionnement -Méthode de précipitation sélective -méthode chromatographique -les méthodes électrophorétiques qui sont les plus utilisées . L·électrophorèse permet la séparation des protéines sériques en 4 groupes ou plus. lorsqu·elles sont soumises à un champ électrique. qui est ensuite coloré pour permettre la lecture de la densité optique des différentes bandes de migration. la charge négative des globulines diminue en intensité des alpha1 globulines aux gamma globulines (très peu chargées). Chaque groupe électrophorétique est composé de plusieurs protéines qui ne peuvent être distinguées que par immunoélectrophorèse. c·est elle qui migre le plus loin vers l·anode. . en fonction de leur charge. L·albumine est la protéine sérique la plus électronégative.RAPPEL DU PRINCIPE DE L·ÉLECTROPHORÈSE DES PROTÉINES: L·électrophorèse repose sur la propriété qu·ont les protéines à se charger négativement en milieu alcalin et à migrer à des vitesses différentes. La séparation des différentes fractions protéiques se fait par migration de la cathode vers l·anode sur un support d·acétate de cellulose. Les densités optiques sont alors converties en pourcentage. D-SÉMIOLOGIE DES PROTÉINES PLASMATIQUES : . I-Sérum albumine : Propriétés : --holoprotéine --PM=69Kd --Valeur normale = 35-40g/l (la plus importante quantitativement) --La quantité totale dans l·organisme = 300 gr dont 60% extravasculaire (peau et viscères). Rôle : --réserve importantes d·acides aminés --transport de nombreuses molécules y compris les médicaments --maintient la pression oncotique. 40% intravasculaire (= 120g dans le plasma) --Synthèse par le foie. . pertes gastro-intestinales aux cours des diarrhées profuses (cholera. Augmentation : En vérité on ne connaît pas en pathologie d·augmentation d·albumine sauf qu·il existe de fausses élévations produites par une hémoconcentration ou une perfusion d·albumine. typhoïde).insuffisance hépatocellulaire . Remarque : parfois a l·électrophorèse.brûlures étendues . -mal absorption intestinal -catabolisme excessif -analbunemie congénital. il existe un bis albuminémie = dédoublement du pic d·albumine cause génétique.syndrome nephrotique . Généralement sans conséquences .Variation physiologique : --Hématocrite = Volume globulaire / volume sanguin total --Elle varie en fonction de l·état d·hydratation de l·organisme --Augmente en cas d·hémoconcentration déshydratation --Diminue au cours des hémodilution : EX Grossesse. Variation Pathologique : Diminution : . .6-1. valeur normale = 0.2g/l Protéine très acide Contient beaucoup de glucides Synthèse au niveau du foie. Elle diminue dans le syndrome nephrotique et l·insuffisance hépatique.II-ALPHA 1-GLOBULINE y Orosomucoide : propriétés : PM 44 Kda. Protéine de la réaction inflammatoire Fonction : Antiprotease Immunospresseur Variation et Interet sémiologique : c·est une protéine de la réaction inflammatoire donc elle augmente dans les inflammations d·une manière non spécifique. 8 à 4 g / litre L'alpha 1 antitrypsine est un inhibiteur glycoprotéique de la TRYPSINE.y 1-antitrypsine : Son taux normal dans le sérum est de 1. lors du cancer du foie et du pancréas Ce taux est particulièrement bas en cas d'emphysème pulmonaire. Son taux s'élève lors des syndromes inflammatoires. La fonction principale de l'alpha1 antitrypsine est d'inhiber l'elastase des neutrophiles qui est une enzyme (une protéase) qui détruit le tissu interstitiel pulmonaire et hépatique. Elle permet le dépistage d'une anomalie génétique souvent associée à un emphysème pulmonaire . en cas de contraception orale. lors de la grossesse. . Le déficit en alpha1 antitrypsine est une maladie héréditaire transmise selon le mode autosomique récessif. Lors de l'électrophorèse elle migre avec les alphas 1 globulines. et est codée par un seul gène situé sur le chromosome 14. Cette glycoprotéine est synthétisée dans le foie. hémolyse intra ou extra vasculaire .5-1. Rôle : . 3) Variation Pathologique : . syndrome néphrotique.2g/l Lieu de synthèse : le foie T1/2=4-5jrs mais quand elle fixe l·hémoglobine T1/2 devient 30 min.L·un des éléments du processus inflammatoire.Ex hématome.2-globuline : y Haptoglobine (HP) : Propriétés : Valeur normale : 0. car son augmentation peut aller de 4 a 5 fois la normale -Diminution lors de l·insuffisance hépatique. .III.HP fixe l·hémoglobine après hémolyse donnant un complexe très uni qui est éliminé par le système réticuloendothélial. 25-0. fabriquée par les hépatocytes Valeur normale : 0.Variation la plus importante est observée dans la maladie de Wilson qui est due à une diminution de la synthèse de la Ceruloplasmine caractérisée par un dépôt de cuivre au niveau de l· il (un anneau vert pericornéen c·est l·anneau de Kayser-fleishe) .60 g/l Protéine de la réaction inflammatoire Activité oxydasique et antioxydasique en fonction du milieu où elle se trouve ceci est due aux 6 atomes de Cu+2 qu·elle transporte Variation pathologique : .y Ceruloplasmine : Propriétés générales : PM 130 Kda.Augmente dans la grossesse et la prise des oestroprogéstatifs . cupriurie élevée. . y 2-Macroglobuline Propriétés générales : protéine très très grosse PM = 750 Kda. Valeur normale 2. signes apparaissent 15-20ans : neurologiques insuffisance hépatique ASAT+ALAT élevées.Remarque : la seule indication du dosage de la Ceruloplasmine est dans le cas de la maladie de Wilson qui est une dégénérescence hepato-lenticulaire. insuffisance rénale et hémolyse qui peuvent être associer Bilan biologique : Ceruloplasmine basse.8 g/l Variation pathologique : diminution en cas d·insuffisance hépatique et augmente dans le syndrome nephrotique. biopsie hépatique on trouve le cuivre tissulaire très élevé. cuprémie basse. synthèse par le foie.2-3. Beta-globulines : Transferrine : sidérophiline : PM : 80 Kda Protéine responsable du transport du fer dans le sang. 1) Paramètres : TIBC (ou Total Iron. sous forme de Fe+3. et ils sont peu sensibles à l·état de réserve . les 2/3 restants s·appellent capacité latente de fixation. puisque ils sont seulement des indicateurs de transport dans le sang. y La transferrine transporte le fer a un 1/3 saturée. Banding Protein) c·est la capacité totale de fixation TIBC = concentration de transferrine (g/l) * 25 Coefficient de saturation : fer serique/TIBC Ces parametres ne reflètent qu·un aspect du métabolisme du fer. Une forte diminution de ces derniers entraîne une synthèse accrue de transferrine. La synthèse de la transferrine subit une régulation qui est en fonction de l·importance des réserves martiales (feritine). fraction du complément c3 c 4et la B2-microglobuline . Fibrinogène. Si présence d·un état inflammatoire il faut doser le récepteur soluble de la transferrine STFR. -Autres B-globuline : CRP.Remarque : le dosage de la feritine peut être considérés en dehors d·une réaction inflammatoire comme meilleur indicateur de l·état de réserve. -Augmentation de la transferrine dans : carence d·apport Saignement digestif ou urinaire. 2) Variation pathologique : -Diminution de la transferine dans : l·insuffisance hépatocellulaire Syndrome nephrotique Hemocromatose Syndrome inflammatoire. hypo gamma: peut être AQUISE ou PRIMITVE y Hypo gamma acquise : Par fuite qui peuvent etre par voie rénale dans le syndrome nephrotique ou par voie digestive Par défaut de production.15-0.35 g/l -IgE 0.8-0. . EX Leucémie Lymphoïde Chronique.35 g/l -IgD 0. Formes secondaires a d·autres maladies.Gamma-Globuline On décrit 5 classes d·immunoglobulines -IgG 8-14 g/l -IgA 1-4 g/l -IgM 0.2-0.50 mg/l Variation Physiologique : Graphique Variation Pathologique : . y Hypo gamma primitive : La classification proposée par l·oms repose sur la nature vraie semblable du déficit cellulaire qui peut toucher les Lymphocyte B ou Lymphocyte T. ils seront étudiés dans les dysproteinémie . Remarque : les hypo gamma globulinemie de l·enfant sont beaucoup plus fréquente que l·on croit alors il faut y penser pour détecter. Hyper Gamma : vue leur importance donc. II) Hyperproteinemies : Défini par une protéinémie total supérieur a 80g/l. . Il faut toujours éliminer une hyper protéinémie due à une hyper concentration.DYSPROTEINEMIE I) Introduction : Une protéinémie basse ou élevée ne permet pas en général de définir un type de pathologie. mais elle est le plus souvent le point de départ d·investigation plus complète. dirofilariose. abcès. Le fibrinogène est supérieur à 400 mg/dl dans 45-60% des cas. tuberculose -Leishmaniose: l·augmentation des gglobulines est en général accompagnée d·une hypoalbuminémie. cirrhose.) -Ehrlichiose..Hyper gamma-poly clonale : Modification électrophorétique la plus fréquente. ainsi qu·une augmentation des a2globulines (due à l·augmentation du fibrinogène et de l·haptoglobine) et des bglobulines.. A l·électrophorèse. -Péritonite infectieuse féline (PIF): elle s·accompagne d·une hyperprotéinémie (protéines totales souvent entre 7. donnant un taux de protéines totales souvent normal.8 et 12 g/dl) dans 50% des cas de PIF humide et dans 70% des cas de PIF sèche. Elle est souvent accompagnée d·hypoalbuminémie.. elle traduit une élévation globale de toutes les gglobulines. parasitose cutanée (démodécie. Le rapport A/G est très souvent inversé. on note une hypergammaglobulinémie polyclonale (rarement monoclonale). Elle se développe suite à une prolifération bénigne des plasmocytes en réponse à une stimulation antigénique persistante: Pathologies inflammatoires ou infectieuses chroniques: -Pyodermite. -Pathologies suppuratives chroniques -Hépatopathie chronique: hépatite chronique. néoplasie -Lors de virémie persistante dans l·anémie infectieuse équine (due essentiellement à une augmentation des IgG) . 1993) . pemphigoïde. -Hyper gamma-pathies monoclonales : Définition : appelés encore Immunoglobulinopathies monoclonales les gamma-pathies monoclonales sont des affections caractérisées par une prolifération. pemphigus. lupus érythémateux disséminé.des chaînes lourdes délectées et par l·absence de chaînes légères. plasmocytaire ou lymphoplasmocytaire bénigne ou maligne.-Pathologies à médiation immune: Anémie hémolytique auto-immune. thrombocytopénie auto-immune. Cette immunoglobuline monoclonale peut être complète ou incomplète caractérisée par : . polyarthrite rhumatoïde. de type lymphocytaire. anémie infectieuse équine.des chaînes légères ayant un poids moléculaire anormalement bas ou élevé (D. Hurez . . allergies Tumeurs du système réticuloendothélial: Lymphome. d·un clone de cellule B produisant en quantité variable une population homogène d·immunoglobulines retrouvées dans le sérum ou les urines. deux caractères constants : . .caractère monoclonal avec synthèse d·Ig ou de chaînes d·Ig ou de fragments d·Ig.prolifération cellulaire B (lymphoplasmocytaire ou plasmocytaire) . La maladie de kahler . amaigrissement Caractère malin du myélome multiple. . leucopénie. thrombopénie et infections à répétition envahissement de la moelle .Signes cliniques : atteinte osseuse +++: . anorexie. fractures spontanées Et hypercalcémie voire calciurie atteinte rénale (protéinurie) altération de l·état général. signes neurologiques peuvent être en rapport avec une compression médullaire ou radiculaire liée aux lésions vertébrales anémie. .tassements vertébraux.lésions ostéolytiques (action des cytokines produites par les cellules du stroma médullaire) Géodes (os du crâne).douleurs osseuses +++. Signes biologiques : y y y y y y y VS augmentée à trois chiffres (90% des cas) anémie (70% des cas) hypercréatinémie hypercalcémie résultant de la lyse osseuse Protéinurie bande homogène à l·électrophorèse des protéines sériques et/ ou urinaires = (85% des cas) +++ hypogammagloblinémie polyclonale est plutôt rare (10% des cas) . . Critères immunologiques : y y y y y taux d·Ig monoclonale sérique élevé ou évoluant en hausse taux d·Ig polyclonales bas ou évoluant en baisse plasmocytose médullaire supérieur à 10% protéinurie de BJ présente et évoluant en hausse taux sérique d·Il-6 élevé (rôle dans la prolifération des plasmocytes). ÉLECTROPHORÈSE DES PROTÉINES SÉRIQUES Graphe représente le Pic d·une Ig normale . GRAPHE REPRÉSENTE LE PIC D·UNE IG ANORMALE (ÉLEVÉE) . prélèvement : urines des 24 heures.dosages de la protéinurie concentration des urines dans les « minicon » ou utilisation sans concentration avec kit recherche de la protéine de Bence Jones : protéines présentes dans les urines correspondants à des chaines légères libres monoclonales du même type que celle du composant sérique (Ig complète ou chaine légère) doit être identifiée par Ouchterlony (immunodiffusion double) ou immunofixation Elle a un interet pronostic.2% . ainsi que le type des chaînes légères par Néphélémétrie laser immunofixation des protéines sériques électrophorèse des protéines urinaires : L·étude du sérum doit toujours être couplée à celle des urines . azide de Sodium 0. bocal stérile.Diagnostic immunologique : Possibilité de déterminer les différentes classes des Ig. . FORMES BIOLOGIQUES : myélome à chaine légère myélomes à IgD ou à IgE peu fréquents atteinte rénale fréquente problèmes pour leur identification myélomes non sécrétant y cliniques évocateurs de myélome y absence de pic monoclonal y Hypogammaglobulinémie y VS normale y diagnostic analyse en IFD des plasmocytes de la moelle osseuse (Ig monoclonale intracytoplasmique) . mais un important polymorphisme est observé allant du petit lymphocyte au plasmocyte. ganglionnaire et splénique caractérisée par la production et la sécrétion d·un composant monoclonale typique correspondant à une IgM 19 S pentamérique (macroglobuline) maladie qui touche surtout les hommes entre 50 et 70 ans 5 à 10 fois moins fréquente que le myélome multiple .LA MACROGLOBULINÉMIE DE WALDENSTRÖM : Définition : les cellules caractérisant la prolifération monoclonale B sont de type lymphoplasmocytaire. de topographie médullaire. SIGNES CLINIQUES : anémie très marquée hépatosplénomégalie et des adénopathies sont souvent présentes syndrome d·hyperviscosité manifestations hémorragiques (hémorragies muqueuses) cephalées et troubles visuels pertes de conscience signes d'insuffisance cardiaque occlusion vasculaire . thrombopénie et neutropénie Bande homogène à l·EPP Cryoglobulinémie Hyppogammaglobulinémie IgM monoclonale 19S à chaînes légères ou PBJ détectée dans 10% des cas NB: IgM 19 S faible diffusion à l·EPP et l·IEP : bande ou arc au niveau du depot.SIGNES BIOLOGIQUES : VS très accélérée FNS : Anémie. verifier le caractere 19 S par une diffusion plus rapide après réductionalkylation par le F Mercapto-Ethanol . MCL mu ( ) et MCL gamma (K) la MCL (= lymphome digestif méditerranéen) est La plus fréquente des MCL: . Ces maladies concernent les trois principales classes d·Ig : MCL alpha ( ). fortement glycosylées. appartenant à une classe ou sous-classe d·Ig.LA MALADIE DES CHAINES LOURDES Définition : les maladies des chaînes lourdes (MCL) sont caractérisées par la présence dans le sérum de molécules d·Ig ne comportant pas de chaînes L. Elles sont constituées de chaînes H incomplètes. dérivé du même clone . nausées. caractérisée par une prolifération lymphoplasmocytaire à IgA infiltrant la totalité de l·intestin grêle et des ganglions mésentériques. elle atteint les sujets jeunes avec une légère prédominance chez le sexe masculin manifestations cliniques : diarrhée chronique avec stéatorrhée et syndrome de malabsorption. amaigrissement important. douleurs abdominales. vomissements avec atrophie villositaire au stade initial des lésions le traitement est basé sur l·emploi des tétracyclines elle evolue spontanement vers un sarcome à grande cellules. . HYPOPROTEINÉMIE : y syndrome Nephrotique définition : c·est une entité pathologique caractérisée par une perméabilité accrue aux protéines y Sur le plan biologique : Protéinurie élevée 30 a 35 g/24h les normes sont de 0.15g/24h Hyperlipémie Cholestérol TG élevés Oedeme due a une baisse de pression oncotique . ELÉCTROPHORÉSE DES PROTEINES : Alb alpha1 alpha2 B Gamma Dans les urines : les urines dont rares graisseuse . proteinure élévée Le S N est dit pure s·il n·est pas associé a une I R Hematurie HTA . elle est secondaire a l·hépatite chronique et l·alcoolisme Diagnostic est anatomopathologique Hyperbilirubinémie mixte Gamma gt élévée Hypoprotidemie Rapport Iga/transferrine augmenté A l·éléctrophorese : migration d·Iga entre la région B et Gamma Phase d·etat ou stade terminal Prot effondrées ( inf a 60 g/l) Electrophorèse: soudure totale entre region b et gamma ALb/Globuline inf a la normale Fibrinogène effondré hemorragie importante. y y Definition : Sur le plan biologique .CIRRHOSE Maladie hépatique caractérisée par une desorganisation compléte de l·architecture du foie. accessibles à un traitement pour un grand nombre d'entre elles. Les aminoacidopathies sont des maladies d'intoxication. Un déficit enzymatique entraîne l'absence d'un composé biochimique situé en aval du déficit et/ou l'accumulation d'un composé toxique situé en amont du déficit. protides ou acides gras ou du trafic intracellulaire. les tyrosinémies. car elles sont le plus souvent révélées par un coma néonatal ou une insuffisance hépatique. . Le traitement est essentiellement diététique. Il s'agit de maladies d'expression postnatale car l'enfant est protégé jusqu'à la naissance par sa mère grâce au placenta qui effectue l'épuration.V . la leucinose.AMINO-ACIDOPATHIES Les maladies héréditaires du métabolisme résultent le plus souvent d'un déficit enzymatique sur l'une des nombreuses voies métaboliques. Les plus fréquentes sont la phénylcétonurie qui fait l'objet d'un dépistage néonatal. liées à un déficit enzymatique sur la voie de dégradation des acides aminés. Ces aminoacidopathies nécessitent une prise en charge thérapeutique en urgence. dérivées des glucides. b-trouble pouvant toucher plusieurs transporteurs : ex :maladie de HARTRUP :le rein laisse fuir les acides aminés neutre :valine et alanine c-trouble touchant tous les transporteurs : ex :syndrome de DETONI DEBRI FANCONI : trouble de transport de tous les acides aminés avec le glucose.A .partiel ou complet .les acides aminés non catabolisés augmentent dans le sang et passent dans les urines. bloquant une des premiéres étapes du catabolisme d·un ou plusieurs acides aminés.MÉCANISMES PHYSIOPATHOLOGIQUES DES AMINO-ACIDURIE : plusieurs mécanismes sont responsables de passage des acides aminés dans les urines : 1-par débordement : Sans altération de système de transfert.phosphat et le potassium.se syndrome peut etre primitif ou bien secondaire a une accumulation du cuivre dans le tube contourné proximal . Maniféstation clinique : calcul rénal.en général hériditaire.il existe un déficit enzymatique. 2-par altération du systéme de transfert : a-trouble d·un seul transporteur d·acides aminés : ex : cystinurie : c·est une anomalie des acides aminés dibasiques.dans ce cas. Comme exemple : Hyperamoniemie : dans ce cas les signes apparaissent dans les 48 h après la naissance Phénylcétonurie : dont le diagnostic précoce permet d·éviter les lésions irréversibles test simple 1 .l·odeur des urines qui est parfois caractéristique Exemple : l·odeur de sourie et de moisissure fait penser a la Phénylcétonurie L·odeur de sirop d·érable fait penser à la Leucinose L·odeur de beur rance hypermethioninemie L·odeur des pieds acidemie et accumulation isovalerique (anomalie de catabolisme de leucine) 2 -Réaction au Fecl3 : elle permet de déceler des métabolites des acides aminés comme les acides alpha cétonique. 3 -Réaction au 2. La phénylalanine et tyrosine donnent une coloration verte fugace.B -INVESTIGATION ( EXPLORATION ) : REMARQUE : Dans un bon nombre des cas. l·investigation rêvait un caractère d·urgence.4 DNPH : en milieu acide il donne un précipité jaune en présence des acides alpha cétoniques 4-Réaction de Brandt : nitropruciate + milieu alcalin + acides aminés soufrés coloration rouge caractéristique . .Tous les acides aminés sont colorés en pourrpre de Ruhemann ( = 570 nm).2dihydroxyindan-1.3-dione) est un composé aromatique utilisé comme révélateur des acides aminés . seule la proline et l'hydroxyproline sont colorées en jaune ( = 440 nm).C-DOSAGE GLOBAL DES ACIDES AMINÉS Deux méthodes qui sont celle au DNPH et a la Ninhydrine qui est la plus utilisé Méthode a la ninhydrine : La ninhydrine ou nihydrine (2. Principe : est la mise en culture d·une bactérie (bacilus subtilus) en présence d·une goutte de sang dans un papier filtre incubation. Remarque : c·est un principe très élégant mais les résultats sont approximatifs .D-METHODES DE DOSAGES SPÉCIFIQUE Chromatographie sur couche mince Chromatographie par échange d·ions Méthodes microbiologiques : c·est le test de culture . la croissance de cette bactérie s·aperçoit sous forme d·anneau dont le diamètre est proportionnel a la concentration en acides aminés. 4-METHODES CHIMIQUES : basée sur la mesure de la fluorescence de certains acides aminés tel que la tyrosine et la phénylalanine . en excès. En France et dans de nombreux pays.ETUDE DE QUELQUES ACIDO-AMINO-PATHIE I)Phénylcétonurie : A) Définition : Est une maladie génétique autosomique récessive grave en relation avec un trouble du métabolisme de la phénylalanine qui est un acide aminé d·origine alimentaire. on procède à la naissance à un dépistage systématique de la phénylcétonurie. diminuer la synthèse de certaines protéines cérébrales. Elle pourrait. pénètre dans le cerveau. provoquant des anomalies de la substance blanche à type d'atteinte de la myéline.F. ce qui pourrait provoquer des troubles neuropsychologiques. Remarque : Diagnostic précoce avant le 2éme mois permet de mettre en uvre un traitement diététique qui consiste à éliminer la Phénylalanine de l·alimentation du nourrisson atteint pendant 5ans qui va permettre a ce dernier d·avoir un développement cérébral normal. de même. B) Physiopathologie : La phénylalanine. Elle affecte un nouveau-né sur 16 000 et est responsable d'une arriération mentale (oligophrénie phénylpyruvique) progressive en l'absence de traitement approprié. . due a un déficit enzymatique (enzyme : Phenylhydroxylase). D) Sur le plan biologique Taux de phénylalanine dans les urines et dans le sang Concentration normale 1 à 10 30 Concentration chez un malade 15 à 63 300 à 1000 Phénylalanine (mg/100ml) Dans le plasma Dans les urines Toute valeur dépassant 240micomol/l est considérée comme pathologique Phénylalanine très élevée dans les urines et le sang Augmentation des métabolites de la phénylalanine (phenylacétique + phenyllactique responsables de l·odeur des urines) qui sont produits par l·activation d·une voie secondaire à la voie du métabolisme principal inactivée par le déficit enzymatique. C) Signe cliniques : Nouveau né présente une : Microcéphale Yeux bleus cheveux clairs et blanche de peau = un BLOND ce qui fait la joie de sa petite famille alors que c·est des signes de gravité Troubles cutanés a types d·exema Convulsion et vomissement L·odeur des urines « moisissure ou ufs pourries ». E) Diagnostic de certitude : Fluorémetrie : dosage de la fluorescence Spectrophotométrie de la Phénylalanine . Le diagnostic anténatal est possible. l'isoleucine et la valine. Frequence 1/300 000 naissance C) Diagnostic : Dans toutes ces formes. avec présence d'allo-isoleucine. . déficiente. L'enzyme céto-acide décarboxylase. respiratoire et neurologique. isoleucine et valine. B) Sur le plan clinique : l·odeur est caractéristique (odeur de sirop d·érable) Difficulté de succion Trouble digestif.II) LEUCINOSE A) Définition : est une maladie génétique congénitale qui se transmet sur le mode autosomique récessif et comprend plusieurs formes dans laquelle le corps est incapable de dégrader correctement certains acides aminés notamment la leucine. provoque une accumulation de ces acides aminés dans le corps à des niveaux toxiques. le diagnostic repose sur l'élévation plasmatique et urinaire de leucine. elle conduit à des lésions cérébrales et une progressive dégénérescence du système nerveux. Lorsque la maladie n'est pas traitée. parfois notée seulement au cours des accès dans les formes intermittentes. HOMOCYSTINURIE : Maladie due à un déficit en cysthathionine bsynthaste Sur le plan clinique : retard mental Troubles oculaire. neurologique Sur le plan biologique : augmentation de l·homocysteine dans les urines et dans le sang . cardiovasculaire.III .