Delia Whu Whu INTEGRANTES: Pizarro Machaca. Manuel Santiago LIMA-PERÚ 2010 . DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN ÓPTIMA” PROFESORA: Dr.UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú. Decana de América) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL TOXICOLOGÍA QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL “CURVA DE RINGBOWN. DETERMINACIÓN DE LA ZONA DE TRABAJO. Conocer las limitaciones de la ley de Lambert – Beer. Conocer la concentración óptima de un compuesto para que cumpla con la Ley de Lambert – Beer a través de la curva de Ringbom.OBJETIVOS Aprender a graficar la curva de Ringbom. INTRODUCCIÓN . luego la relacionaremos sus concentraciones y de acuerdo a la curva reconoceremos la concentración óptima en la cual se cumpla con la Ley de Lambert – Beer. Para reconocer una sustancia hallamos su curva espectral la cual después era comparada con la curva espectral de una sustancia patrón. Mediremos la absorbancia de diferentes concentraciones de un analito. La curva de Ringbom relaciona la absortancia con la concentración del analito. esto lo lograremos con el uso de la Curva de Ringbom. En esta práctica se aprenderá a hallar la concentración óptima para una mejor lectura en el espectrofotómetro UV-vis y para que el analito cumpla con la Ley de Lambert . FUNDAMENTO TEÓRICO . hallaremos el porcentaje de transmitancia y con esto la absortancia. el manejo y el cuidado del espectrofotómetro UV-vis y la importancia que tenía dicho instrumento para el reconocimiento de una sustancia.Beer. otra manera es que debe de cumplir con la Ley de Lambert – Beer pero debemos de saber que esta ley tiene sus limitaciones y que una de las limitaciones tiene que ver con la concentración del analito.En la primera práctica aprendimos la constitución. con concentraciones que permitan que se cumpla la ley de Beer. se ha encontrado desviaciones frecuentes de la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la concentración cuando b es constante. Ésta relación se representa con la siguiente fórmula: A= abc a : constante de proporcionalidad llamada absortividad b : longitud (cm) c : concentración (g/L) Cuando la concentración de la ecuación se expresa en moles por litro y el largo de la celda está en centímetros. Para que no ocurran errores durante nuestro análisis y hacerlo demanera adecuada hacemos uso de la curva de ringbown. . que cubran una variación de por lo menos dos órdenes de magnitud de concentración de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de onda analítica escogida. con la parte baja y con la parte alta. los cruces de la parte recta (la intermedia).LEY DE LAMBERT Y BEER Ocurre cuando en el caso de la radiación monocrómatica. en lo posible. Por otra parte. GRÁFICA DE RINGBOW Cuando se realiza un análisis espectroscópico se debe trabajar. con el fin de obtener una curva de calibración que tenga una relación lineal. Para la mayoría de los sistemas la curva de Ringbown corresponde a una curva en forma de S. lg Concentración. En esta gráfica. la absortividad se llama absortividad molar. en lo posible. La parte lineal de esta gráfica permite obtener el intervalo de concentraciones óptimo o el intervalo que presentara una relación lineal entre absorbancia y concentración. y se representa con el símbolo especial Ɛ. respectivamente. pueden servir para determinar un valor para los límites de detección mínimo y máximo. Por tanto. se debe trabajar. Los datos se obtienen preparando una serie de soluciones patrón del analito. la absorbancia es directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a través de un medio y la concentración c de la especie absorbente.%T) vs. Para obtener el intervalo óptimo de concentraciones primero se construye la curva de Ringbom. que consiste en construir una gráfica de absorbancia (100. cuando b está en centímetros y c en moles por litro se tiene: A = Ɛbc Se han encontrado pocas excepciones a la generalización de que la absorbancia está relacionada en forma lineal con la longitud de la trayectoria. 25 y 10ml) .1) .Aseptil Rojo (Azosulfamida 5%) .Pipeta volumétrica (15.2.Parte Experimental MATERIALES Y REACTIVOS Materiales: .Agua destilada .Tubos de ensayo .10.Matraz Aforado (100.5.Vaso precipitado (250. 50. 100ml) .Matraz simple (250. 100 ml) Reactivos: . Permite graficar la curva de Ringbown. Lo que buscamos es determinar la longitud óptima analítica de la azosulfamida Las curvas espectrales -Absorbancia vs Longitud de onda serán graficadas al final del presente informe.Espectrofotometría: Absorbancia y %T entre una sustancia una orgánica Tomaremos a continuación los datos leídos en el espectrofotómetro. Lectura del espectrofotómetro: Longitud óptima de la onda y % Transmitancia Longitud Óptima de Azosulfamida: 530 nm Lectura del espectrofotómetro: % Transmitancia . Procedimiento Realizamos dos tipos de análisis: 1 Determinación de la longitud óptima de onda para poder graficar las curvas espectrales –Abostancia vs Log[C]– de la Azosulfamida 2 Determinación de la concentración óptima de la muestra (verificar del mismo modo la zona de trabajo). junto a un patrón –Agua–. 8 ug/ml. 4 ug/ml.1 ug/ml. 0.4 ug/ml. nuestra labor consiste en Absortancia=100−%T. 2° Si deseamos graficar la curva de Ringbown (la que nos permite formar nuestra curva de calibración) primero debemos realizar las disolución.6 ug/ml. El procedimiento a seguir fue el desarrollado en la primera práctica: La sustancia es colocada. 0.2 ug/ml. Las lecturas serán del % Transmitancia. 6 ug/ml.3 ug/ml. . 20 ug/ml. determinar la absortancia: Para luego graficar nuestra curva Absortancia vs Log (C). 30 ug/ml . El punto en el cual la transmitancia sea la más baja posible será nuestra absorbancia más alta. procedemos a realizar las lecturas en el espectrofotómetro. en el espectrofotómetro medimos la transmitancia conforme aumentamos la longitud de onda. 0. 0. 0. 1 ug/ml. 10 ug/ml. Prepararemos soluciones de una concentración (C) desde 0. La forma en cómo se procedió con las diluciones está explicada en el presente informe. Preparamos cada concentración a partir de la muestra estándar de aseptil rojo. es decir: La longitud óptima de la onda nos otorga la absorbancia más alta posible de la sustancia problema.1°Para poder determinar la curva de ringbown. 2 ug/ml. 40 ug/ml y 50 ug/ml a partir de la solución estándar de azosulfamida 500 ug/ml Con las diluciones ya hechas.8 ug/ml. 1 0.2 9.7 26.3 6 3500 65.3 .8 4.8 1000 91.5 10 5000 48.6 4. La longitud de onda a utilizar será: La longitud óptima de la azosulfamida es 530nm .0 6 0.9 6.7 8.3 1 1500 90. Curva de Ringbown: Absortancia vs Concentración ~ Azosulfamida En esta parte desarrollaremos la curva de Ringbown.3 100 94. Log C y % Transmitancia.4 0. A partir de la transmitancia leída estaremos en la facultad de poder graficar la Curva de Ringbown (Absortancia vs Log [C]).6 7.9 19.1 34.Iremos añadiendo en las cubetas del espectrofotómetro cada dilución unitariamente.8 2 2000 81.2 200 95. Azosulfamida: Sustancia estudiada 1 Tabla completa: Absortancia. podemos comenzar con las lecturas de la transmitancia.6 800 92.2 0.4 0.1 4 2500 73.7 51.1 100 95.9 8 4000 54. µg/mL mg/mL %T Absortancia 0.5 45. la cual nos permite encontrar la zona de trabajo y lo más importante: La concentración óptima de la muestra.Una vez que ya tenemos nuestras diluciones preparadas.4 600 93. Nuestros datos serán acoplados en las posteriores tablas. El análisis de la transmitancia será llevado a cabo en la longitud óptima. pueden servir para determinar un valor para los límites de detección mínimo y máximo. con la parte baja y con la parte alta.5 93. La zona lineal corresponde al intervalo de concentraciones de mínimo error. los cruces de la parte recta (la intermedia). En esta gráfica.2 96. respectivamente. Para la mayoría de los sistemas la curva de Ringbown corresponde a una curva en forma de S.3 87.7 40 10000 6.3 75.3.20 6000 24.7 30 8000 12. por lectura y el punto de inflexión corresponde al valor de: 100%-%T= 51. La parte lineal de esta gráfica permite obtener el intervalo de concentraciones óptimo o el intervalo que presentara una relación lineal entre absorbancia y concentración. que corresponde al valor de mínimo error. C/C. CONCLUSIONES - Se determina la concentración optima que es muy importante para realizar un arametro en el cual encontraremos la zona de trabajo Se concluyo con la identifiacionde la azosullfamida a su espectro de absorción Se llego a determinar la concentración optima de la muestra (azosulfamida) a la curva de Ringbown . T=48.8 DISCUSIÓN DE RESULTADOS CURVA DE RINGBOWN: AZOSULFAMIDA Para obtener el intervalo óptimo y adecuado de concentraciones con el menor error por lectura primero se construye la curva de Ringbown que consiste en construir una gráfica de absortancia (100%-T) vs la concentración.5 50 15000 3.7. Radiación no monocromática Radiación parásita Errores de lectura c.CUESTIONARIO 1. acido-base. Explique cuáles son las desviaciones que puedan presentarse en la aplicación de la ley de Beer. Desviaciones químicas. Influencia del equilibrio (dimerización. Desviaciones instrumentales. Deducción de la ley de Lambert y Beer La deducción de la ley de Beer se hizo sobre la base de utilizar radiación monocromática.8 b.01 M La absorbancia debe darse en un rango de 0. complejos) Influencia del disolvente Influencia de la temperatura Impurezas de los reactivos Interacción entre especies absorbentes 2. lo cual nunca se cumple y la absorbancia medida es la relativa al intervalo de λ. La concentración debe ser inferior a 0. Algunas desviaciones que podmos encontrar son las sgtes : a.15 -0. Desviaciones reales. . Diversos factores -como pH. . Cuando la pendiente tiende hacia el eje de la ordenada. enlaces peptídicos.que alteran la carga de las moléculas. se dice que la desviación es positiva. Es una región de energía muy alta. En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite. Este tipo de escala es la más apropiada para realizar la calibración espectrofotométrica. El color que absorbe es el complementario del color que transmite. por lo que ésta es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos. ¿qué diferencia existe entre la fuente de radiación de los espectrofotómetros de la región ultravioleta y los de la región visible? La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. por lo tanto. para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solución coloreada. Explique gráficamente que diferencia encuentra en una curva de %T Vs concentración y una curva de absorbancia Vs concentración Tramitancia vs concentración: al correlacionar en escalas aritméticas el % de tramitancia vs la concentración. concentración de sal y el disolvente. provocan desplazamientos de los espectros UV. grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su máxima absorbancia en la región UV. no que absorbe. La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio. Los compuestos con dobles enlaces aislados. La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm. Provoca daño al ojo humano así como quemadura común. Absorbancia vs concentración: al correlacionar en escalas aritméticas absorbancia vs concentración. y cuando la pendiente se aproxima a la abscisa. la desviación es negativa 4. esta no es la mejor opción para realizar la calibración.3. se obtiene una gráfica de relación directa lineal. con una sola pendiente. Se muestra que la pendiente cambia con la concentración. Existen muchas razones por las que este tipo de graficas se tornan curvas. se obtiene una curva exponencial de relación inversa como la que se muestra. sistemas aromáticos. Por tanto. triples enlaces. dicho proceso se denomina reacción fotoquímica. 2) Relajación en especial la conversión de esa energía de excitación en calor M * → M + calor La relajación puede producirse también por la descomposicion de M* para dar lugar a nuevas especies. produciéndose distintos proceso de relajación. ¿Qué rangos de longitud de onda abarca el UV-vis. .5. y qué tipo de transiciones ocurren cuando se trata de analito en forma atómica? La absorción de radiación UV-vis por una especie atómica se puede considerar como un proceso en dos etapas: 1) Excitación electrónica como se muestra en la ecuación M + hv → M* El producto de la reacción entre M y el fotón hv es una especie excitada electrónicamente simbolizada por M* El tiempo de vida de la especie excitada es breve (10-8 a 10-9 s). mx/amyd/archivero/Documento_de_A poyo:_Precision_en_espectrofotometria_2598.virtual.unam. Principios de análisis instrumental.htm .URL:http://www. Establecimiento de un método espectrofotométrico.unal.pdf Universidad Nacional de Colombia.BIBLIOGRAFIA Skoog Douglas. 6ta edición. 2007.pquim. URL: http://depa.co/cursos/ ciencias/2001184/lecciones/Cap10/01_01_01.edu. 2007 Química analítica instrumental I Precisión en espectrofotometría.