UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE AGRONOMÍA DEPARTAMENTO DE QUÍMICA Y TECNOLOGÍA CÁTEDRA: ANÁLISIS DE PRODUCTOS AGRÍCOLAS I ETAPA ISección: __________________ Fecha: __________________ Integrantes: Victor Monasterio Adriana Mendoza INFORME POST - LABORATORIO CROMATOGRAFIA CAPA FINA 1.- Introducción: La cromatografía es una técnica sumamente empleada en varias aéreas científicas debido a que permite la separación de una mezcla de solutos, basándose esta separación en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. Actualmente existen diversas técnicas de cromatografía, siendo la cromatografía de capa fina (CCF) una de las más utilizadas debido a que permite separaciones por reparto (aislar e identificar), filtración sobre gel, adsorción e intercambio iónico en escalas de tiempo muy corta, sin afectar la muestra a analizar. (Abbott D. Et al. 1973). Es por ello que diversos autores como (Rodríguez, S., et all 2012) han utilizado esta técnica para la cuantificación de polisacáridos en especies de (Opuntia) en la agroindustria, asimismo (Mennickent, S., Et al. 2000), realizo una metodología para la cuantificación del ácido acetilsalicílico a través de CCF, el cual es un antiinflamatorio que se hidroliza fácilmente en contacto con la humedad atmosférica, tradicionalmente este compuesto es analizado por cromatografía liquida de alta resolución, lo cual es mucho más lento y más costoso que la CCF, debido a que la CCF permite analizar varios analitos en una sola placa ahorrando tiempo y solventes lo cual se traduce en disminución de costos. Por este orden de ideas su versatilidad y rapidez la hace ideal para la enseñanza de la cromatografía, dirigida a los estudiantes de la UCV-FAGRO de la cátedra de análisis de productos agrícolas I, en la cual se realizara una práctica de CCF con la finalidad de aislar e identificar los compuestos de un analito de importancia agrícola. 2. Objetivos de la práctica: Realizar inoculaciones de muestras en placas cromatografías Determinar el Rf de las distintas manchas desarrolladas en Cromatografía de capa fina. Muestras utilizadas y fundamento de los equipos utilizados Muestras: Colesterol al 1,2 %, Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón Placa Cromatografía con silicagel G-60: Es una placa de vidrio de (20x20) cm con silicagel G-60, el cual es un absorbente que funcionara como fase estacionaria en donde se inoculara el analito a estudiar y se desplazara la fase móvil, seguidamente las Pág. 1 de 7 MM 2012 25 mm Pág. FE: Silicagel G-60 activa. Et al. El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0. Estufa de secado: Para la activación de las placas se introducen en una estufa en donde se secaran a un temperatura entre (100. empapado de disolvente. para conseguir que la atmosfera este empapada del disolvente (fase móvil). asimismo algunas placas comerciales y absorbentes contienen sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuesto. por ello estos compuestos. (Abbott D. Et al.iníciales G-60 indican el nivel de granulometría del absorbente y dependiendo de las características de la fase móvil este se desplazara con mayor facilidad.105) °C durante 1 hora. 1973). permite localizar los compuestos del o los analitos a estudiar. sin mover la cubeta. representa una característica del compuesto y se usa como método de identificación. Según la longitud de onda de la luz emitida y por consiguiente. de esta forma se elimina la humedad de la placa y se deja lista para ser introducidas en las cámaras de desarrollo. 1973). (Abbott D. Et al. debido a la propiedad de absorber las radiaciones ultravioleta y emitir radiaciones de mayor longitud de onda. 1973). Cámara de revelado de vapores de Iodo: consiste en una cámara con una cubeta que contiene en el fondo cristalitos de Yodo. 3. (Abbott D. Placa cromatografía con silicagel F-254: Posee el mismo fundamento de la placa cromatografía de silicagel G-60. pueden detectarse con una lámpara de rayos ultra violeta. presentan fluorescencia. que cubra las paredes interiores de la misma. (Abbott D. Los vapores de el yodo tiende a concentrarse alrededor de los compuestos hacer analizados. Cámara de desarrollo [cloroformo (1): benceno (2) y Etanol (1): butanol (3): amonio (1)]: consiste en una cubeta en donde se encuentra la fase móvil. Cámara de revelado de luz ultra violeta: Consiste en una cámara con una lámpara que emite luz ultra violeta. 1973). 1973). Et al. (Abbott D. aunque invisibles en el cromatograma con la luz ordinaria. en el interior de la cubeta debe colocarse un papel de filtro. este método es uno de los más utilizados para la revelación debido a su carácter no destructivo. 2 de 7 MM 2012 . Et al. su fundamento consiste en que muchos compuestos orgánicos. no saturados. 1973). por lo cual aparece una mancha marrón oscura. Esquematice el procedimiento empleado para el desarrollo de cada Práctica. Et al. con la diferencia de que posee Fluoresceína que es capaz de detectarse a una longitud de onda de 254 Å. Resultados: A. 1 hora a 100 ° C grosor de la placa 0. se deja que ascienda el disolvente unos 10 cm por encima del origen repartiendo los componentes que sean afines a la fase móvil y a la fase estacionaria. el color que presenta.5 a 1 cm luego se introduce la placa. se saca la placa y se deja evaporar al ambiente. en el cual se introduce la placa cromatografica y se deja reposar unos minutos. que al revelarse en luz ultra violeta. sobre un fondo amarillo pálido.(Abbott D. extracto de naranja.M: Butanol (3). tinta azul. estanol (1). amonio (1) Desarrollar en cámara de revelado de luz ultra violeta Fuente del solvente 10 cm Medir la distancia recorrida por las manchas Pág.25mm Muestra: Tinta roja.2 % Fase móvil: Cloroformo (1): Benceno (2) Vapores de Yodo Revelar Frentecámara solvente de10 vapores cm Yodo Desarrollar en cámara Medir distancia recorrida por las manchas Calcular Rf de c/u ellas M1 2da parte FE: Silicagel F-254 activada por 1 hora a 100 °C. 3 de 7 MM 2012 . espesor de la placa 0. Tinta roja 10 ml Tinta azul 10 ml Extracto Naranja 10 ml Extracto Espinaca 10 ml Extracto limón 10 ml M2 M3 M4 M5 F. extracto espinaca y extracto limón.1 10 μl 2 20 μl 3 30 μl 4 40 μl 5 50 μl 1 2 3 4 5 Muestra: Colesterolo 1. 2% M2 M3 M4 M5 Concentración 10 μl 20 μl 30 μl 40 μl 50 μl color del compuesto amarillo pálido amarillo pálido amarillo pálido amarillo pálido amarillo pálido distancia distancia recorrida recorrida de del compuesto por el frente (cm) (cm) 2.Luz visible Hacer dibujo de placas M1 Cuadro 1.5 2.25 0. Calculo de Rf de colesterol al 1. extracto espinaca y extracto limón.5 2.725 1A 1M-Tinta roja 1B 1C negativo negativo negativo Verde manzana Naranja intenso Naranja intenso Rosado Fuccia fuccia claro Pág.25 0.2%. Tinta roja.6 0. tinta azul. extracto de naranja.5 2.5 10 10 10 10 10 Rf 0. extracto de naranja. Colesterol al 1. extracto espinaca y extracto limón. yodo UV Luz visible Distancia recorrida Rf por el frente (cm) 10 10 10 0.25 V. Distancia recorrida por el compuesto (cm) 6 6.25 0. tinta azul.25 0. 4 de 7 MM 2012 . Calculo de Rf de tinta roja.65 0.25 Cuadro 2.5 2.5 7. Con respecto a la segunda practica se determino que los Pág. extracto de naranja.95 0.V y color frente a luz visible. por lo cual se pudiese tratar de el mismo compuesto.4 0. Conclusión: En la muestra analizada en la primera parte de la práctica el analito de colesterol al 1.Tinta azul 3MExtracto naranja 4MExtracto espinaca 2A 2B 3A 3B 4A 4B 5A 5B 5C Positivo negativo Positivo Positivo negativo Positivo negativo Positivo negativo negativo Naranja intenso incoloro verde claro verde claro azul claro verde claro azul claro azul claro azul claro azul claro ocre azul claro ocre amarillo incoloro ocre incoloro incoloro incoloro incoloro 8 5 9.4 0. color de su Fluorescencia en presencia de rayos U. 5 de 7 MM 2012 .95 0.8 0.2% es una muestra pura y simple debido a que se pudo observar que el analito está conformado por un solo compuesto y que su Rf es el mismo para todas las concentraciones. debido a que a diferentes concentraciones se obtuvo una sola mancha del mismo color (amarillo pálido) y el cálculo de Rf arrojo el mismo resultado para todas las concentraciones. Asimismo los resultados de Rf en la gran mayoría de los compuestos fueron distintos. tinta azul. 2da parte: Análisis de Tinta roja.275 0.5 4 9. 5.5 4 9.P de yodo. por lo cual se verifica que no existe la presencia de otros compuestos y que a pesar de que el diámetro de la mancha varié debido a las diferentes concentraciones realizadas en práctica el Rf permanece igual debido a que los compuestos poseen la misma afinidad por la fase móvil y esta es independiente de la concentración del analito. 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.1D 2M. rayos UV y color en presencia de luz visible. extracto espinaca y extracto limón).15 0.95 5MExtracto limon 4. extracto espinaca y extracto limón: El análisis determino que los analitos estudiados están conformados por varios compuestos.5 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 0. debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B.2 %: El análisis determino que la muestra de colesterol está conformada por un solo compuesto. y se observo su capacidad de reacción en presencia de Vapores de yodo (incoloro o amarillo pálido). Discusión de resultados: 1era parte: Análisis de colesterol al 1.5 0. Cabe destacar que se pudo observar que existe una relación entre los analitos (extracto naranja.95 0.5 1.75 9.5 2. Et al. S. Instituto de Biologia UNAM.php?script=sci_arttext&pid=S036616442000000400015&lang=pt. 33. Estado del conocimiento de las especies del Nopal (Opuntia spp. y Andrews. Boletin de la sociedad chilena de química. L.gob. Et al. Scheinvar..biodiversidad. extracto de naranja. N° 4 concepcion. S. donde esta otorga al estudiante una herramienta más para el análisis de productos agrícolas. seguidamente para verificar la acertividad de esta relación se sugiere la revisión de bibliografía en donde otros investigadores hayan realizado pruebas con los analitos estudiados en práctica o buscar en tablas los analitos estudiados con los mismos resultados en práctica en libros o publicaciones acreditadas. Anexos REALICE UN BREVE RESUMEN DE LA SEPARATA QUE SE PRESENTA A CONTINUACION: Resumen: Las especies de Opuntia son de gran importancia en la biodiversidad de mexico.. 45. Por último la CCF es un análisis cualitativo de rápida manipulación y obtención rapida de resultados lo cual según (Abbott D. gran parte de estas especies silvestres están en peligro de extinción debido al desplazamiento por parte de las actividades humanas y al cambio climatico (Scheinvar. seguidamente se pudo observar que existe una relación entre los analitos (extracto naranja. extracto espinaca y extracto limón). Introducción a la cromatografía. España. además según (Rodriguez. en la metodología empleada se usaron CCF con lavados y sin lavados a temperatura ambiente. Et al. 1973. tinta azul. Desarrollo de un método por cromatografía en capa fina instrumental para análisis cuantitativo de acido acetilsalcilico. 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V. Alhambra. 2011). Bibliografía Abbott. et all 2012) diversos autores han hecho referencias sobre sus posibles beneficios para la industria alimentaria y farmacéutica. Madrid. 75°C y 83°C a diversas concentraciones de nopal con H2O (sin H2O.P de yodo. R. 6 de MM 2012 7 . rayos UV y color en presencia de luz visible. (21 Oct 2013) [En línea] http://www.. por este orden de ideas (Rodriguez. debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B. 7. 6. L. (21 Oct 2013) [En línea] http://www. et all 2012) realización un trabajo de investigación aplicando cromatografía de capa fina o cromatografía de capa delgada en la caracterización de musilago de (Opuntia hyptiacantha) con la finalidad de caracterizar sus polisacáridos.scielo. 2011.pdf Mennickent. 65°C. S. et al. 1973) se verifica que permite una enseñanza mucho más fácil de la cromatografía. Pag 1. 49-60. Vol.. D.analitos estudiados (Tinta roja.) Productoras de Xconostles silvestres y cultivadas. Pág. 2000.cl/scielo. extracto espinaca y extracto limón) son sustancias complejas y no puras debido que están conformadas por varios compuestos y poseen distintos Rf.mx/genes/centrosOrigen/Opuntia/Informe_Final/I nforme%20final%20Opuntia. de las CCF empleadas la más eficiente fue la CCF con musilago precipitado con etanol al 96% debido a que logra precipitar el polisacárido sin la presencia de los monosacáridos y los ácidos uronicos. Pág.(1:1). (1:2) durante un tiempo de (0 min. 7 de 7 MM 2012 . por lo tanto para futuros análisis se recomienda concentraciones de H2O (1:1) para obtener resultados confiables. trayendo como consecuencia que esté listo para estudios de importancia a nivel de agroindustria y la industria farmacéutica. Nopal en concentraciones H2O con etanol a 50% y 80% sin temperatura y tiempo de extracción y musilago en polvo en concentraciones de etanol a 96%. 1 hora y 2 horas). Cabe destacar que la concentración de agua afecto considerablemente la concentración de monosacáridos. polisacáridos y ácidos uronicos.