INFORME DE LABORATORIO CLOSTRIDIUMPRESENTADO POR: CONTRERAS VILLALOBOS SONIA YASMIN COLONIA SANCHEZ NATALIA ANDREA GARAY PEÑA JORGE ALBERTO SUAREZ SOSA LIZETH ELIANA PRESENTADO A: ALEXANDRA CUCAITA CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA TURISMO Y ALIMENTOS –SENA TECNOLOGIA EN CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS 365267 JUNIO 2013 BOGOTA D.C CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA. 3. RESULTADOS. OBJETIVOS. 1. . 6.CONTENIDO INTRODUCCIÓN 1. 4. 2.1 OBJETIVOS GENERALES. 1. 5. DISCUSIONES. PROCEDIMIENTOS. MATERIALES Y EQUIPOS.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS. poderosa neurotoxina causante del botulismo que afecta al hombre y algunos animales. Características: 1-Capacidad para sobrevivir a condiciones ambientales adversas mediante la formación de esporas. pero son Patógenos Oportunistas Epidemiología: Los microorganismos son ubicuos en el suelo. Las neurotoxinas botulínicas son proteínas extremadamente tóxicas (1). pero sobre todo a aquellos cercanos a las superficies mucosas. C. término derivado de la palabra latina Abotulus que significa embutido en general.. 3-Síntesis de numerosas toxinas. principalmente en el suelo y en el tracto intestinal de muchas especies animales incluido el hombre y puede causar infecciones de origen exógeno y de origen endógeno . botulinum y otras especies. enterotoxinas y neurotoxinas. 2-El rápido crecimiento en un ambiente enriquecido y privado de oxígeno. son productores de distintos serotipos de toxina botulínica. en parejas o a lo máximo en cadenas cortas. donde son parte abundante de la biota comensal. Fue reconocido como entidad clínica en 1793 en Alemania y recibió ese nombre en 1870. El género Clostridium comprende bacilos Gram positivos. Asimismo. El género Clostridium está ampliamente distribuido en la naturaleza. anaerobios obligados. se trata frecuentemente de infecciones mixtas en donde estos microorganismos se encuentran junto a otras bacterias anaerobias. la mayoría móviles. formadores de en-dosporas. el agua y las aguas residuales y forman parte de la flora microbiana normal del aparato digestivo de los animales y el ser humano. Se comportan como Saprofitos. .INTRODUCCIÓN Los Clostridium son organismos que se observan solos. Patogenia: La importante capacidad patógena de los clostridinum se puede atribuir a las siguientes. Poseen antígenos somáticos y flagelares que permite dividirlas en tipos y subtipos Pueden afectar a cualquier órgano o sistema. . Conocer e identificar las características típicas de estos clostridium a realizar el recuento.1 OBJETIVOS GENERALES. Conocer el método de análisis para determinar la contaminación de un producto alimentacion por clostridium perfringens. OBJETIVOS 1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS. Aprender los métodos relacionados para la determinación con el fin de ser aplicados en los diferentes productos a elaborar o ya elaborados en nuestros talleres. 1. Realizar el análisis de clostridium perfringens a una salchicha la cual no estaba debidamente rotulada.1. Agar Nitrato Movilidad en tubos 16 x 160 t/ rosca. Caldo Tioglicolato en tubos 18 x 180. Indicador de Anaerobiosis Oxoid.5 % en ácido acético 5 M. Sílica gel con indicador u otro desecante . Medio Lactosa Gelatina en tubos 16 x 160 t/ rosca. Solución de cicloserina al 0. Solución Ácido Sulfanílico 0. cerdo y aves.5 %. ü Reactivos para producir anaerobiosis Oxoid (Gaspack).4 % en ácido acético 2. Solución de α naftol 0.2.6 M. Agua peptonada 0. y alimentos sometido a esterilización y escaldado) ● Baño Maria ● Jarra de anaerobiosis ● Placa de Petri estériles ● Tubos de ensayo con tapa rosca ● Pipetas Estériles de 1ml ● Frascos estériles ● Gradillas ● Mechero Bunsen ● Contador de colonias. Merck o Biomerieux. MATERIALES Y EQUIPOS ● Medios de Cultivo: Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiazina (SPS) ● Diluyente: Agua peptonada 0.1 %. Medios de Cultivo y Reactivo ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiazina (SPS) Agar Triptosa Sulfito Cicloserina (TSC) en frascos Schott. Emulsión de Yema de Huevo al 50 %. carne de res. ● Tubos de ensayo con tapa rosca ● Incubadora a 37ºC.1 % ● Muestre ( Embutidos. la clave. Siembra de la muestra ● Fundir el medio SPS y mantener a 47 ° C. N° de muestra. . ● Luego enviamos a incubar. una placa por cada dilución. en anaerobiosis. fecha y naturaleza de la muestra. por observación de color. a 37 °C por 48 h. Homogenizamos. ● Preparar las diluciones seriadas 10-2 y 10-3 o más si fuese necesario a partir de la Dilución 10-1 de la muestra preparada cuidando de airear lo menos posible la muestra. al hidratarse vira de azul a rosado. 10-3). si la hay. Preparación de la jarra anaerobiosis ● Comprobar que la sílica–gel esté seca. ● Tomar 10 g de La muestra. ponemos todo eso en un frasco estéril y le agregamos el diluyente (agua peptonada) la cantidad suficiente. si no está dispuesto para comenzar la siembra. ● En el caso de muestras de brotes de ETA. 10-2 . ● Luego realizamos las diluciones respetivas (10-1. ● De las diluciones realizadas sembramos por método de “siembra en Profundidad”. PROCEDIMIENTOS Recepción de la muestra en el laboratorio ● Recibir la dilución 10-1 de la muestra procesada en el laboratorio de Recepción de muestras. ● Mantener la dilución de la muestra refrigerada mientras se prepara el material. ● Comprobar viraje del color del indicador.3. ● la positividad de las colonias se verá por su característico color negro. ● Anotar en el cuaderno de inscripción de muestras del laboratorio. Para muestra de alimentos. ● El período transcurrido entre la preparación del homogeneizado de la muestra y la siembra no debe superar los 20 minutos. ● Luego. anotar la información adicional que se disponga. perfringens en medio yema de huevo son negras con 2 a 4 mm de zona blanca opaca alrededor de la colonia como resultado de la actividad de la lecitinasa. ● En caso de no haber desarrollo (presencia de colonias negras) o son muy pequeñas. incubar por 24 horas más en anaerobiosis. Asegurar cerrar las tapas de los tubos. observar que haya suficiente desarrollo. ● Dejar un rato a temperatura ambiente. Incubación ● Incubar a 37º C por 24 – 48 horas. perfringens. preparar la jarra de Anaerobiosis.● Una vez comprobado el color del indicador y del sílica gel.00-080. aplicando una segunda capa. debe quedar hermética. ● Tapar la jarra cuidadosamente. ● Colocar un sobre de Anaerogen. colocando en su interior estos dos reactivos cubriendo el sílica-gel con papel filtro y adherir el indicador a las paredes de la jarra. Lectura Recuento presuntivo de células viables de C. ● Registrar las lecturas hoja de registro de análisis del laboratorio RG-712. ● Una vez concluido el período de incubación. ● Una vez transcurrido el tiempo. ● Ordenarlas de acuerdo al número de la muestra y a las diluciones realizadas. sacar las jarras de la estufa. ● Las colonias de C. ● Calcular el recuento presuntivo aplicando la fórmula que aparece a continuación: Recuento presuntivo = Lectura x factor de dilución ● En caso de no tener colonias aisladas. ● Sembrar por agotamiento en superficie una gota de cultivo utilizando el mismo medio que para el recuento. . ● Comprobar que el indicador de anaerobiosis esté virado de incoloro a rosado. ● Incubar durante 24 horas a 37° C en anaerobiosis. ● Incubar durante 24 horas a 37° C en anaerobiosis. trasladar rápidamente los tubos y enfriar en agua de grifo. ● Colocar las placas sin invertir dentro de jarras de anaerobiosis. para ello después de cumplido el tiempo de ebullición para eliminar el oxígeno disuelto. recién sacado del sobre protector en un costado de la jarra y utilizar según instrucciones del fabricante. ● Abrir la jarra y sacar cuidadosamente las placas. ● Seleccionar las placas que contienen entre 20 y 200 colonias. tomar con asa una porción del cultivo inocular en Caldo tioglicolato previamente calentado en agua a ebullición por 20 minutos y enfriado rápidamente en agua fría antes de inocular. ● Registrar este procedimiento si fue realizado para aislar colonias e indicar la dilución de las placas utilizadas. ● Calcular el número de unidades formadoras de colonias por g de muestra. Cálculo y Expresión de resultados ● Anotar todos los resultados en el registro. El recuento confirmado se obtiene mediante la siguiente fórmula: ● Recuento Confirmado = ● Promedio de Rto Presuntivo * N° colonias confirmadas * dilución N° colonias sometidas a confirmación . . RESULTADOS.4. . 10-3. En el día 7 se analiza los tubos y se encuentra lo siguiente: En el tubo 10-1 se encuentran 8 colonias de color blanco redondeadas. También pudo ser que el choque térmico no se haya realizado en el tiempo conveniente o de la manera más cuidadosa para que este no sufriera roturas. A los dos días siguientes se observan los cultivos los cuales no demuestran ningún crecimiento de clostridium. En la elaboración del análisis se presentan inconvenientes con el enfriamiento del agar ya que este se realiza por medio de choque térmico para ser guardado en la caja la cual ya se encontraba cerrada. y una de color grisáceo pero no se encuentra colonias de clostridium lo cual se determina en presencia negativa de clostridium la muestra. pero el tubo número 10-3 se encuentra con el agar roto lo que pudo causar daño al cultivo. al ser las muestras finales en faltar por introducir se realiza un nuevo sellamiento en el cual no se puede determinar si pudiese ocasionar resultados diferente en el análisis de clostridium. Al no haber presencia de colonias negras características de Clostridium se dejó en incubación por más tiempo para que proliferaron Clostridium. La caja ya se encontraba cerrada con el procedimiento del alka seltzer y esperma para volver a abrir en la caja se debía repetir el procedimiento para sellar nuevamente. . Esto pudo ocasionar la rotura del agar. no se encuentra presencia de colonias pero sí se observó el agar roto lo cual nos permite determinar que tuvimos fallas durante la incubación de estas muestras ya que se cometieron errores al guardarlos apresuradamente. Sin la especificación de estos datos no se pueden determinar una información veraz y específica del producto a analizar. DISCUSIONES Para la elaboración de análisis de clostridium se toma una muestra de salchicha de la cual no se encuentra determinada la marca y fecha de vencimiento.5. En los tubos 10-2. . CONCLUSIONES Se conocieron y desarrollaron los métodos de aislamiento del microorganismo clostridium perfringens analizando la muestra de una salchicha desconocida sin rotulación. Adquirimos el conocimiento de este análisis para la determinación de este microorganismo lo cual nos permite tener una mayor aplicación en nuestro ámbito laboral en la elaboración de los diferentes productos los cuales puedan ser afectados por estos microorganismos asegurando la inocuidad de los alimentos.6. No se pudo determinar las características específicas del género clostridium debido a que su presencia fue negativa. para el alimento analizado. Se analizó que esta no se encontraba contaminada lo cual es un producto con determinación negativa en clostridium. com/doc/6674027/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-n-14Aislamientoe-identificacionde-Clostridium-perfringens http://es.htm http://www.gov/poisoning/causes/bacteriaviruses/cperfringens/ http://www.foodsafety.buenastareas.pdf .com/doc/6672534/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-n-13Aislamientoe-identificacion-de-Clostridium-botulinum-productora-de-toxina http://espanol.scribd.BIBLIOGRAFÍA http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-034.comersinriesgos.scribd.com/?p=29 http://es.com/ensayos/Resumen-Clostridium/3804031.