“Año de la consolidación del Mar de Grau”.UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS ASIGNATURA: BIOQUIMICA TEMA: REUNIÓN DE LABORATORIO N° 1 ALUMNO(A): ARANDA ULLOA, JHOSLEY MARILID GRUPO: 1 AÑO DE ESTUDIO: 3° PROMOCIÓN: LIII ASESOR: DR. JORGE HUAMAN SAAVEDRA TRUJILLO – PERÚ I UNIDAD REUNION DE LABORATORIO N°1 PRACTICA N°01 DEMOSTRACION DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS ENZIMAS I. INTRODUCCION: La vida depende de una serie ordenada de reacciones químicas que son catalizadas por enzimas formadas para este fin. Las enzimas, salvo los ribozimas, son proteínas relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización e inactivación, es decir alteraciones en su conformación, por efecto de diversos agentes físicos y químicos como: temperatura, ácidos y álcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc. Las enzimas se encuentran en muy pequeñas concentraciones en los materiales biológicos, resulta un trabajo arduo y complicado individualizarlas o purificarlas. Para poder verificar directamente las propiedades comunes o similares a la naturaleza proteica que las caracterizan , desde el punto de vista experimental se pueden utilizar las propiedades de catalizadores específicos que tienen las enzimas, como indicador de las alteraciones que pueden sufrir éstas cuando son sometidas a la acción de diferentes agentes físicos y químicos . De esta manera, sin necesidad de individualizar o purificar una determinada enzima se pueden verificar cómo afectan los agentes físicos y químicos la naturaleza proteica de las enzimas, disminuyendo su actividad. La finalidad de la presente práctica, es poner en evidencia las características proteicas de las enzimas que gozan de propiedades comunes y que expuestas a la acción de diversos agentes físicos y químicos hacen variar su comportamiento y actividad catalítica. - II. REACTIVOS A UTILIZAR: NaOH 1N - Amilasa salival 1.0% SO4 Cu 20% - Solución iodada - - NaCl 0.15M - III. - Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 Ácido tricloro acético (A.T.C.A.) al 20% HCl 3N y 0.05N PROCEDIMIENTO E INTERPRETACIÓN La enzima es desnaturaliza da al agregar el HCl (ácido fuerte) pues este cambia el PH del medio. SISTEMA B: La enzima es desnaturaliza da al agregar el NaOH (base fuerte) pues esta cambia el PH del medio.SISTEMA A TUBOS COMPONENTES (en ml) Amilasa al 1% NaOH 1N HCl 3N Ácido Tricloro acético 20% Sulfato de Cobre al 20% Buffer fosfato 0.6 I II III IV V VI 1.0 2.0 - 1.4 - - - - 2.4 El contenido del tubo se mantiene transparente. La enzima es desnaturalizad a al agregar el Sulfato de Cobre (sal pesada) El conten del tubo mantiene transparen la enz está en medio ópt para reaccionar pero enzima desnatural da por calor.0 - 1. .4 - 1.4 - 2.1M / pH 6.4 1.4 - - - - - - 2. la enzima Observar e está en el interpretar medio óptimo para reaccionar. La enzima es desnaturalizad a al agregar el Ácido Tricloro acético pues este cambia el PH del medio.0 - 1.0 - - - - 2.0 2. Observar e interpreta r SISTEMA C: Todos los tubos del sistema B contienen el sustrato(almidón).4 2.0 Agregar 0.0 M / pH 6.4 2. buffer fosfato/ PH 6.0 1. NaCl y agua destilada. .0 1.0 II III IV V VI 1.0 1.0 5.6 NaCl 0.4 2.0 1.1 5.0 1.0 5.6 ml. dejar en incubación a 37 ° por 20 min.0 1.4 2.0 5.0 5. este sistema constituye un medio óptimo para la acción de la enzima.0 1. de cada uno de los tubos del sistema (A) a su correspondiente tubo del último sistema (B). Al agregar la solución del primer sistema que contiene amilasa a cada tubo correspondiente del al segundo y luego dejarlo en incubación a 37° por 20 min. se consigue que haya una reacción enzima(amilasa) –sustrato(almidón) siendo la temperatura un factor que aumenta la actividad de la enzima y el NaCl cofactor de esta.4 2.0 en solución acuosa Buffer fosfato 0.0 1.0 5. de la enzima tratada.0 1.TUBOS COMPONENTES I (en ml) Almidón al 1.15 M Agua Destilada 1.4 2.0% 1.6 . n I. dado que al estar desnaturalizada la enzima.5 0.5 0.5 La actividad enzimática se evidencia en el tubo 1.5 0.5 0.5 0. agregar: Solución yodada Observar e interpreta r 0.5 0.05N 5 5 5 5 5 5 0. dado que al agregar la solución iodada a solución esta viro de ser transparente a amarillenta.TUBOS COMPONENTES (en ml) I II III IV V VI HCl 0.5 0.5 0. lo que indica que la amilasa degrado almidón es decir hubo reacción enzimática.5 De los tubos de reacción del 0.5 0. La actividad enzimática se puede ver afectada por mecanismos desnaturalizantes lo qu Conclusió demuestra la naturaleza proteica de las enzimas. esto no sucede en los otros tubos en los que solución se tornó azul oscura.5 sistema (B). el almidón no f degradado por lo que no puede ser marcado por el yodo. CUESTIONARIO: 1 ¿Cuál es el mecanismo de acción de las sales pesadas sobre la proteína (enzima)? . se separa el ion sulfato y el cobre (ambos en estado ionizado. esto hace variar el PH lo que causa variación en el grado de ionización de distintos grupos funcionales (carboxilo. 2 ¿Cómo actúan los ácidos y bases fuertes sobre la proteína (enzima)? Los acidos y bases cuando están en solución tienden a ionizarse liberando asi iones hidrogeniones u oxidrilos. Al encontrarse en solución estos dos componentes se separan en el caso del sulfato de cobre. etc. producida por los agentes? Todas las proteínas dada su naturaleza y configuración necesitan de condiciones de Ph y temperatura adecuadas que no alteren las interacciones ni fuerzas entre moléculas que mantienen la estructura proteica estable.) implicados en interacciones débiles que estabilizan la conformación proteica. PRACTICA N°02 DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOLÉCTRICO DE LAS PROTEÍNAS I. INTRODUCCION . amino.Las sales son compuestos químicos que se forman tras reaccionar un ácido y una base. 3 ¿Cómo actúa la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima? Bajo ciertas condiciones de temperatura cada poli péptido asume una conformación específica Corresponde a una estructura termodinámicamente estable y un sistema organizado con mínima energía libre. en este caso con el grupo carboxilo de las cadenas laterales de las proteínas (coo-). Estas variaciones provocan la rotura de dichas interacciones (sobre todo enlaces iónicos y también puentes de hidrógeno) y por lo tanto la desnaturalizan. es decir inestables) por lo que pueden reaccionar fácilmente con otros grupos químicos. razón por la cual cambia la configuración química de la enzima y afecta su actividad. Ejemplos: *El HCl mantiene adecuado el Ph acido del estómago adecuado para la actividad enzimática de la pepsina. Los aumentos de temperatura provocan una mayor agitación molecular que hace que las interacciones débiles que mantienen estable la conformación de la proteína terminen por ceder con la consiguiente desnaturalización. 4 ¿Cómo repercute la modificación de la estructura proteica. hidroxilo. por ello constan de una parte catiónica y otra aniónica. por ello al existir modificar la estructura proteica se verá alterada su actividad y función. PROCEDIMIENTO Preparar el siguiente sistema TUBOS Reactivos(en I II III IV V VI VII VIII IX ml) Acido 3. iguales o mayores al PI. II. Reactivos(e n ml) Contenido anterior TUBOS I II III IV V VI VII VIII IX 5.El punto isoeléctrico es la concentración de iones hidrógeno en el cual la proteína es eléctricamente neutra.2 Acético 1 N Agua 6. d En el tubo N°9 una vez efectuada la mezcla se extrae 5 ml de solución y se elimina e Al contenido anterior del sistema agregar rápidamente 1 ml de caseína en acetato de sodio 0. porque el número de cargas positivas es igual al número total de cargas negativas es igual al número total de cargas negativas contenidas en la proteína.Indicador de pH: papel indicador o pH metro .0 .0 5.0 5.0 5.1 N III. Cuando una proteína se encuentra en diferentes soluciones que tienen valores de pH menores. Aprovechando este comportamiento.0 5. La presente práctica tiene por finalidad demostrar que el punto isoeléctrico de las enzimas es característica físico química común de estas moléculas.NaOH al 10 % .0 5.0 5.Acido acético 1 N .0 5.8 5 5 5 5 5 5 5 5 destilada a Mezclar el tubo N° 1 b Extraer 5 ml de solución del tubo N°1 y agregar al tubo N°2.0 5. Completando del mismo modo hasta completar la serie. REACTIVOS A UTILIZAR . la proteína sufre variaciones en la constitución de sus grupos químicos. Cuando se encuentran en su PI las proteínas son menos solubles y precipitan.Solución de caseína en Acetato de Sodio 0.1 N en cada tubo. Mezclar c Extraer 5 ml del tubo N°2 y trasferir al tubo N° 3. produciéndose en consecuencia variaciones en la estructura terciaria o cuaternaria y por tanto en su función biológica. que precipitan porque la solubilidad en estas condiciones disminuye al mínimo. Por tanto cada proteína posee un determinado punto isoeléctrico (PI). se puede determinar el PI de una proteína observando los cambios de solubilidad que se producen cuando la proteína se encuentra en varias soluciones que tienen pH conocidos. 7 5. h Anotar i 1.1N 1.495 3.0 (sal) f g 1.0 1.0 1.603 5.0 1.0 el cuadro que se da a continuación Observar después de 30 minutos de reposo y anotar también en el cuadro respectivo TUBOS N° EFECTO INMEDIATO EFECTO CALCULO DESPUES DE DEL 30 MINUTOS pH I II III IV V VI VII VIII IX O + ++ +++ ++ + O O O O + XX XXX X + O O O Emplear los símbolos siguientes: O= No cambia += opalescente j 1.0 Mezclar al instante por inversión.904 X= precipitado Determinar el tubo que presenta el máximo de precipitación.302 5.796 4.Caseína 0.0 1.75 5 6 6.398 4.5 7 CALCULO BAJO FORMUL A 3.25 4.001 5. lo cual se producirá en el tubo que tiene pH próximo a la solubilidad mínima de la proteína. .5 4.0 1. Observar el efecto inmediato que se produce en la solubilidad de la proteína en los diferentes tubos.097 4.0 3 4 4. La formación de precipitado responde a la inexistencia de repulsión electrostática lo que nos indica que la proteína se encuentra en su punto isoeléctrico. verificar el pH de cada uno de los tubos con el indicador de pH. esto ocurre debido a la diferencia de concentración iónica y PH de cada tubo con dilución. luego de los 30 min de reposo la mayor formación de precipitado.k Luego de transcurridos los 30 minutos de reposo. por lo tanto mayor insolubilidad también la verificamos en el tubo III. . Anotar los resultados en la columna respectiva del cuadro anterior Observar e interpreta r EL efecto inmediato al agregar caseína a los tubos con la dilución de ácido acético a diferentes concentraciones nos muestra que el tubo III se volvió más opalescente. CUESTIONARIO 1 Señale el PI aproximado de la proteína que encontró en su experimento.Conclusió n *La caseína pierde solubilidad y forma mayor cantidad de precipitado a un PH de 4. se llama a este valor de punto isoeléctrico. El PI aproximado encontrado para la casina fue de 4. en la forma: pK = -log K El pK es la constante de disociación (ionización) de un ácido (pKa) o una base (pKb) y mediante estos valores se puede obtener el valor del PI. se define el pK. para una reacción en equilibrio. como potencias de diez. por lo general. es posible extender la idea recogida en la definición de pH al caso de los valores de K. 3 ¿Qué es el pK? Es la descripción del grado de acidez o basicidad en términos de pH que tiene la enorme ventaja de evitar operaciones con potencias decimales de exponentes negativos. es decir cuando el número total cargas negativas iguala al número total de cargas positivas presentes en la molécula. Dado que las constantes de equilibrio vienen dadas. Por ejemplo: Si consideramos un aa sencillo. este puede adoptar tres formas iónicas diferentes: . El indicador que nos permitió determinarlo fue la precipitación de la proteína dada por la inexistencia de repulsión electrostática.5 2 ¿Cómo interpreta el resultado obtenido del punto isoeléctrico? Cuando el PH de la solución es tal que la carga neta de la proteína es cero. IV. en este estado la proteína se encuentra como un zwitterion. Así.5 lo que indica el punto isoeléctrico de esta proteína. el cual adquiere un valor de 7 5 ¿Qué importancia tiene el PI en la purificación de una proteína? La importancia radica en que si se conoce el PI de una proteína.El pI es el pH en el que la molécula se disocia por igual en ambos sentidos. PRÁCTICA N° 3 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA I INTRODUCCIÓN Las enzimas son biocatalizadores que tienen un alto grado de especificidad y eficiencia haciendo posible que las reacciones químicas ocurran rápidamente dentro de la célula a través de vías bien definidas.Esta técnica. puede obtenerse por su semisuma: 4 ¿Es igual pH neutro que pK? Explique. por el contrario el Ph neutro está determinado según la disociación del agua. por ejemplo mediante la técnica electroforesis de soporte. se desplazan las especies separadas hacia el detector. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su punto isoeléctrico (al pI su carga neta es nula). Su naturaleza es proteica en el mayor número de casos. (pK2) . Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que cada reacción química debe ser catalizada por una enzima. el COOH se comporta como un ácido moderadamente fuerte y El segundo grupo en disociarse es el NH3+.El primer grupo que se disocia es el carboxilo (pK1 ) . El reactante o substancia química que reacciona para dar un producto en un sistema enzimático se llama sustrato. la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras . esta puede ser identificada y aislada de una solución. y como equidista de los dos valores de pK.02 unidades de pH. No. consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un anfótero. salvo los ribozimas. ya que el pK hace referencia a la constante de disociación. bajo el efecto de una presión hidrostática y manteniendo el campo eléctrico. En general. es decir un valor en relación a las concentraciones iónicas de los reactantes y productos en el que la reacción esta en equilibrio. Seguidamente. Las altas eficiencias obtenidas con este procedimiento permiten separar péptidos con pI que apenas difieren entre sí 0.Por la proximidad del grupo NH3+. 1 M en solución tiende a disociarse en sus iones Na + y Cl-. isomaltosa y glucosa.Cloruro de sodio solución 0.1 II III Por el SUSTRATO RESIDUAL .0 al 1 % . est último actuará como cofactor de la enzima.Solución a de almidón pH6. forma maltosa . el cloruro de Sodio 0.0 al 1 % Solución de cloruro de 1 ml sodio 0.1 M Agua destilada 4 ml II 5ml 1 ml 3 ml Colocar los tubos al baño de agua a 37°C por 5 minutos . 2 Por los PRODUCTOS FORMADOS. Los tubos en baño maría adquieren una temperatura ideal para asegurar la actividad enzimátic de la amilasa.Ácido Clorhídrico 0.Verificando el sustrato no transformado o residual después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.1 M .Reactivo de Folin Wu: a Solución Cúprico alcalina b Solución fosfomolíbdica PROCEDIMIENTO Armar el siguiente sistema: ETAPA A: COMPONENTES - TUBOS I Solución de almidón pH 5 ml 6. Verificando los productos liberados después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura REACTIVOS A UTILIZAR .Agregar 1 ml de enzima al tubo II . por último el agua destilada proporciona un ambiente acuoso para la amilasa (proteína hidrosoluble).Volverlos a colocar al baño de agua a 37°C durante 10 minutos Observar e interpreta r La solución de almidón vendrá a actuar como sustrato en la reacción catalítica que va a se inducida. la cual hidroliza los enlaces glucosídicos ( 1-4) del componente α-Amilosa qu unen residuos de glucosa en el almidón.05N . .Solución yodada .Enzima al 1% (amilasa salival) . Al agregar Ácido Clorhídrico se crea un ambiente ácido el cual es desfavorable para la acción enzimática que se indujo en la etapa anterior. que los átomos de yodo se introduce entre las espirales provocando la absorción o fijación de yodo en las moléculas del almidón (amilosa). *El método de control de la actividad enzimática por productos residuales permite verificar.5 ml II 5 ml 0. una vez que se agregó un volumen de los tubos del sistema A.5 ml En esta etapa se controla la actividad enzimática por los productos residuales. en el que se inducimos la reacción catalítica.5 ml 0. debido a que el almidón ha sido degradado por la enzima a maltosa. valorar y determinar la catálisis de una enzima teniendo como indicador el cambio de color de la solución. isomaltosa y glucosa.ETAPA B: CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR LOS PRODUCTOS RESIDUALES. es decir. forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo.05 N De los tubos I y II 0. se suma Solución Yodada que será un indicados de la reacción enzimática: TUBO I: Tomó una coloración azul negruzco TUBO II: Tomó una coloración amarillo Observar e interpreta r Conclusió n Los cambios en el color de cada solución es el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo. En el primer tubo que contiene almidón al agregar la solución de yodo se tornó a una coloración azul negruzco esto se debe a que en esta reacción el yodo entra a la estructura helicoidal del almidón. . El segundo tubo. tomó una coloración amarillenta transparente. La amilosa.5 ml de Etapa A Solución yodada 0. un color azul oscuro. armar este nuevo sistema COMPONENTES TUBOS I clorhídrico 5 ml Ácido 0. -Inmediatamente cumplidos los 10 minutos. observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante .ETAPA C: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMATICO POR LOS PRODUCTOS FORMADOS Armar el siguiente sistema: COMPONENTES TUBOS I II De los tubos I y II etapa A 1 ml 1 ml Solución Cúprico Alcalina 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 2 ml 2 ml Hervir 8 minutos Enfriar Solución fosfomolíbdica Agua destilada Mezclar. la presencia de una enzima es determinada por la medida de la reacción que cataliza. TECNICAS DE ANÁLISIS La técnica analítica específica más empleada es la espectrofotometría ultravioleta – visible (UV-V). Observar e interpreta r En el tubo I no hubo reacción. el cual posee glucosa y maltosa(degradación del almidón por la enzima amilasa).*En el tubo I se agregó el producto I mas solución cúprico alcalina. inmediatamente después de mezclar los reactivos con la muestra biológica no se debe medir la absorbancia. ¿Qué métodos conoce para determinar la actividad enzimática? La actividad enzimática se mide por métodos continuos y discontinuos. En la fase de retardo. debido a que el almidón no fue degradado hasta azucares reductores por la nula cantidad de enzima. y la solución fosfomolibdica es un indicador de la presencia de este ion cuproso al tornar el producto a una coloración azulada la cual puede cuantificarse para el análisis de glucosa. ya que es una fase de encuentro y acoplamiento de sustrato y enzima. Puede durar de unos segundos . luego se le añadió solución fosfomolibdica +H2O y nos dio un producto VIII de color azul. esto se puso hervir y a enfriar y nos dio un producto VII de color naranja. esto se puso hervir y a enfriar y nos dio un producto V de color celeste. pudiéndose estimar la cantidad de enzima por la velocidad de la reacción. estos reducirán el ion cúprico a cuproso tornando a la solución a una coloración naranja. luego se le añadió solución fosfomolibdica +H2O y nos dio un producto VI de color claro *En el tubo II de le agrego el producto II más solución cúprica alcalina. Conclusión IV *El control de la actividad enzimática por los productos finales permite determinar el final de una hidrólisis teniendo como indicador el color que adopta la solución. no hubo una reducción del ion cúprico a cuproso siendo esto indicado por el mantenimiento del color turquesa de la solución cúprico alcalina. *La presencia de azucares reductores como la glucosa y la maltosa reducirán al ion cúprico a cuproso el cual da una coloración naranja. por ende. CUESTIONARIO 1. En el tubo II si hubo reacción debido que se le añadió el producto I. 4). si se detectan desvíos de la linealidad. o NADP-NADPH. el equilibrio entre sustrato y producto y / o variaciones de pH que no han podido ser amortiguadas por el tampón. En los productos comerciales nos indican el tiempo que dura este período de retardo. comienza la fase lineal. Al finalizar esta fase. no es importante un dato puntual de absorbancia sino la variación de la absorbancia por unidad de tiempo ocasionada por la actividad de la enzima que se pretende analizar su actividad. Explique la acción bioquímica de cada uno de los componentes en los pasos seguidos para determinar la actividad enzimática. 2. etc. con intervalos de minutos. A medida que va transcurriendo la reacción. que median en la reacción: complejos NAD-NADH. debido a factores como el agotamiento de sustrato. ideal para la determinación.método cinético: consisten en medir la absorbancia varias veces. donde la velocidad de formación del producto permanece constante y es en esta etapa donde se determina la actividad enzimática.a varios minutos. a efectos de inhibición del enzima. MÉTODOS ANALÍTICOS DE DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA En estos métodos. llega un momento en que la velocidad comienza a disminuir. permiten comprobar que se encuentra en la zona lineal de la curva. de desprecian alguna de las medidas finales de absorbancia. en el cual se estima ha tenido lugar la reacción . Hablamos de dos métodos de análisis: .métodos a punto final: se mide la absorbancia tras un tiempo determinado. ALMIDÓN (SUSTRATO): Es un polisacárido de reserva más abundante en vegetales y constituye la principal fuente de nutrición glicídica para la humanidad. Muchos métodos de determinación se basan en la medida de absorbancia de cofactores. . Los almidones están constituidos por una mezcla de dos componentes: Amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces α (1. ETAPA A: 1. 7 y 7. 3. el cloro actúa como cofactor de la enzima. rompiendo al azar los enlaces α (1. ÁCIDO CLORHÍDRICO: Creará un ambiente ácido que inhibirá la acción de la enzima y detendrá la reacción catalítica. AMILASA SALIVAL (ENZIMA): Es una proteína enzimática presente en la saliva. . La alfa-amilasa cataliza la hidrólisis de la cadena lineal de la amilosa y la amilopectina del almidón. al agregar NaCl. pues el pH para que la enzima catalice la reacción varía entre 6. ETAPA B: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL 5. se desintegra la hélice y por tanto en presencia de I2/IK ya no dará una coloración azul y por ello no se produce cambio de color y se observa amarillo. Es decir.4) con numerosas ramificaciones α (1. Cuando la α-amilasa actúa. incluso pudiendo desnaturalizarse la enzima si el pH se vuelve muy ácido. El polímero contiene unas 1000 unidades de glucosa. AGUA DESTILADA: Es empleada es para lograr un medio acuoso favorable para la actividad enzimática.2 entonces al bajar el pH la acción enzimática se inhibirá . 4. ya que no ataca los enlaces α (1. formando un complejo de color azul. y por ello.6). los aniones cloruro se unen al sitio activo aumentando la actividad enzimática. 2.4) del interior de la cadena (endoamilasa) para formar una mezcla de dextrinas. eritrodextrina. 6. CLORURO DE SODIO (COFACTOR): La α-amilasa contiene cloro en los restos aminoacídicos de su sitio activo. Amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo α (1. El iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilosa (en las regiones hidrofóbicas). por ello se la conoce como enzima dextrinogénica (mezcla de amilodextrina. acrodextrina y maltodextrina) con poca producción de maltosa. degrada la amilosa.6) de la amilopectina.SOLUCIÓN YODADA: Solución de iodo/ioduro de potasio (I 2/IK. SOLUCIÓN FOSFOMOLÍBDICA: La cual también nos indicará si es que hay reducción del Cu2+ siempre y cuando haya producto. El ácido fosfomolíbdico será reducido por el óxido cuproso a ácido fosfomolíbdoso. El ion cúprico es reducido a Cu1+ por compuestos reductores(azucares) con formación de hidróxido cuproso amarillo o de óxido cuproso rojo. SOLUCIÓN CÚPRICA ALCALINA: Los azúcares reductores.ETAPA C: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS ( FOLIN WU) 1. El cambio de coloración o la formación de un precipitado rojo-ladrillo (Cu2O) indica la presencia de un compuesto reductor. lo que confirmará que hay presencia de producto. son capaces de reducir el ion Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. ALMIDON AZUCARES REDUCTORES . que es de color azul. Elabore una gráfica de la acción de una enzima sobre su sustrato. 3. En medio fuertemente básico como en nuestro caso el NaOH el ión Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por eso añadimos tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con el Cu2+. con la energía de activación y el estado de transición. 2. en medio alcalino. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo. y se forma un complejo enzima-sustrato. Haga una lista de todos los componentes de un sistema enzimático y defínalos SUSTRATO: Es cualquier compuesto químico sobre la cual actúa una enzima. 5. COFACTORES: Molécula que se une de manera transitoria y disociable a la enzima.4. APOENZIMA: Parte proteica de una enzima sin ninguno de los cofactores o grupos prostéticos orgánicos o inorgánicos que puede modificar la actividad catalítica ENZIMAS: Son proteínas complejas que producen cambios químicos específicos en algunas sustancias.. PRODUCTO: Es la molécula o moléculas finales de una ruta metabólica. Como por ejemplo: las enzimas pueden convertir los almidones y azucares en sustancias que el cuerpo pueda utilizar. se forman tras la acción catalítica de la enzima sobre el sustrato.¿Cuál es la importancia clínica de la medición de la actividad enzimática? De ejemplo En el laboratorio es mucho más práctico medir la actividad de una enzima que medir su cantidad en el suero. se une al sitio activo de la enzima. COFACTORES: COENZIMA: Son cofactores orgánicos no proteicos. que unidos a una apoenzima constituyen la holoenzima o forma catalíticamente activa de la enzima. Revela mucho mejor la presencia y el accionar de esta. los más comunes son los metales. Por este . GRUPO PROSTETICO: Molécula que se une de manera estable a una enzima mediante fuerzas covalentes.dicho de otra forma. sin que exista un cambio en ellas mismas. los más comunes son los iones metálicos. las enzimas se encargan de catalizar las reacciones químicas que involucran a su sustrato. termoestables. 4mg/dl (0. Se puede afirmar que existe intolerancia a la lactosa si la glucemia (nivel de glucosa en sangre) después de la toma de la lactosa no sube más de 14. en este caso se puede realizar el estudio de dicha enzima en suspensión eritrocitaria.8mmol/l) respecto al valor basal (inicial). pero también sirve para evaluar el proceso en una enfermedad y brindar un posible tratamiento. Después. Seguidamente pasados 60 y 120 minutos se toman de nuevo muestras de sangre.motivo la medición de la actividad enzimática constituye un poderoso método para diagnosticar algunas patologías. Si no se produce la liberación de la glucosa -por la ausencia de la acción de la lactasa que debería estar en el intestino. el resultado es la pérdida del color azul en el colorante al final de la reacción lo que ocurre si hay integridad en dicha enzima. Por ejemplo: En el caso de intolerancia a la lactosa. Otro ejemplo que podemos citar es la deficiencia de la enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa. páncreas. músculo esquelético y hueso entre otras. se realiza “Test sanguíneo de sobrecarga de lactosa” Primero al paciente se le hace una extracción de sangre para conocer su glucemia basal (nivel de glucosa en sangre inicial). Las mediciones de enzimas son importantes para el diagnóstico y monitoreo de enfermedades del hígado. . utilizamos el método de breger que se fundamenta en la reducción del azul de metileno por la mencionada enzima.no se produce una absorción de la glucosa al torrente sanguíneo a través de la pared intestinal y por tanto no se incrementa el nivel de glucosa en la sangre y por tanto se puede decir que existe una intolerancia a la lactosa.se le suministran 100 gramos de lactosa en una solución con agua. esp.php? script=sci_arttext&pid=S0864-03002012000200009&lng=es. 2014 Jun [citado 2016 Mar 10] . Falcón Yadira. Koolman. [revista en la Internet]. 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