UNIVERSIDAD NACIONALMAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) FACULTAD DE CIENCIA BIOLÓGICAS E.A.P. GENÉTICA Y BIOTECNOLOGÍA Informe N°1: MICROSCOPÍA Curso : LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR Profesores : ROSA GONZALES GONZALES JORGE ZEVALLOS ALVA Alumna : LLACSAHUANGA ALLCCA, Lidia Elena Código : 14100113 Ciclo : 2° Ciudad Universitaria, setiembre del 2014 .......................................................................................................................................................................................................... 6 OBSERVACIONES .................................................................................................................. 10 CONCLUSIONES ......................... 9 CUESTIONARIO ..................................................................................................................... 12 BIBLIOGRAFÍA ..................................................... 4 PROCEDIMIENTO ....................................................................................................................................................................Laboratorio de Biología Celular UNMSM ÍNDICE Contenido MARCO TEÓRICO ............ 5 ESQUEMAS ..................................................................................................................................................................................................................... 3 MATERIALES ...................... 13 Microscopía Página 2 ................................................................................................................................... Nos concentraremos en las partes del microscopio óptico.Laboratorio de Biología Celular UNMSM MARCO TEÓRICO Desde un principio. Ocular: Es el lente que se encuentra cercano al ojo del observador. mientras que el micrométrico para más pequeñas. El orificio permite el paso de luz y posee pinzas para sujetar la preparación en su lugar. Revólver: Sistema rotador que porta a los objetivos de diferentes aumentos. dirige esta al condensador. Tubo óptico: Cilindro mecánico que porta al ocular en un extremo y a los objetivos en el revólver en el otro. es decir. Macro y micrométrico: Tornillos de enfoque. el avance en los estudios celulares ha estado determinado en gran medida por nuestra capacidad de observar sus estructuras. Es debido a esto que la microscopía juega un papel fundamental en la biología celular. Existen diversos tipos de microscopios: óptico. al ser el principal método de estudio de la célula. Es el lente que permite la mayor y regulable ampliación de imagen. Varían la distancia entre la platina donde se ubica la muestra y los objetivos en el revólver. etc. Foco: Origen de la luz. Diafragma: Es el regulador de la cantidad de luz que llega al condensador. electrónico de barrido y de transmisión. Platina: Plataforma con orificio central donde se coloca la preparación (muestra en un portaobjetos). Otros conceptos importantes en microscopía óptica: Índice de refracción: Apertura Numérica (NA): capacidad del objetivo de poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está constituido el objeto que se observa Poder de resolución (PR): capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. Son considerados los más importantes en la formación de la imagen microscópica pues determinan el poder de resolución Condensador: Concentra y regula los rayos luminosos. Capta y amplía la imagen formada en el objetivo. El macrométrico es utilizado para variaciones más amplias. Microscopía Página 3 . de ampliarlas para poder observarlas a pesar de su minúsculo tamaño. Objetivo: Son los lentes que se encuentran en el revólver. Laboratorio de Biología Celular UNMSM MATERIALES Del Alumno: Papel lente Cubreobjetos Portaobjetos Navaja de afeitar Frasco y gotero Pinza de punta fina Especímenes: Bulbo de cebolla Hojas de elodea Del Laboratorio Microscopio de campo claro con condensador móvil y diafragma de campo. Microscopía Página 4 . Nos aseguramos que su luz funcione y luego la apagamos y preparamos las muestras a observar. la epidermis. formando un ángulo de 45° entre la laminilla y lámina. colocamos una gota de agua de caño en un portaobjetos. Formando un ángulo de 45° entre el portaobjetos y un cubreobjetos. Microscopía Página 5 . Con la pinza. Colocamos la muestra en el medio del campo iluminado. Esta capa fina la colocamos en la laminilla con una gota de agua. Con el Gillette o la navaja cortamos un pequeño rectángulo de cebolla. estos se encuentran en la siguiente sección del informe. Observación de Elodea Con el gotero. cogemos una fina capa. cubrimos la muestra. soltamos este último para así cubrir la muestra. Colocamos el portaobjetos con la muestra de Elodea en la platina del microscopio. 10 y 40. Observación extra También realizamos la observación de una letra pequeña cortada de un periódico para confirma la orientación de la imagen: volteada. la más externa. sin mover ya el macrométrico. De este pedazo de cebolla. verificamos que el microscopio se encuentre en óptimas condiciones. Nuevamente. en ambos casos usamos el micrométrico para terminar de enfocar. moviendo el macrométrico primero y luego el micrométrico. Observamos también con el objetivo de 10 y 40.Laboratorio de Biología Celular UNMSM PROCEDIMIENTO Primero. Abrimos y cerramos el diafragma hasta encontrar una buena iluminación para esta muestra. cogemos un pequeño pedazo de una hoja de Elodea y lo colocamos sobre la gota en el portaobjetos. Enfocamos observando con el lente objetivo de 4. Realizamos diagramas de lo observado. con la pinza. Observación de Catáfila de cebolla Extrajimos la envoltura externa de la cebolla. Llevamos a la platina a observar y graficamos lo observado en el microscopio con el objetivo de 4. Laboratorio de Biología Celular UNMSM ESQUEMAS Elodea Microscopía Página 6 . Laboratorio de Biología Celular UNMSM Catáfila de bulbo de cebolla Microscopía Página 7 . Laboratorio de Biología Celular Microscopía UNMSM Página 8 . X100: Con este aumento ya se puede ver la pared celular entre las células e incluso unas estructuras dentro de la célula (el núcleo) aunque no muy claramente. vimos con cada uno de ellos diferentes niveles de detallismo. Microscopía Página 9 . además. hay lugares donde se encuentran uno sobre otros los cloroplastos. X400: Se ve claramente el núcleo dentro de las células y la pared celular que las rodea. Catáfila de cebolla x40: Vimos un complejo organizado de células. pero ya se puede ver ciertas separaciones en los filamentos que componen a la hoja. Vemos que cada célula está separada de otra por una estructura un poco más oscura. de una manera más definida. la pared celular. Se ve. al mirar detenidamente. encajando como ladrillos no rectangulares. No se podía observar más detalles. logramos discernir que estos cloroplastos se encuentran en movimiento (ciclosis). x40: Con este aumento aún podíamos observar los bordes de la hoja de Elodea. la envoltura que separa a las células unas de otra. Además. se observa las diferentes tonalidades de verde. Hay zonas más “verdes” que otras debido a estos cloroplastos. siendo la muestra tridimensional. A continuación una descripción de los observado a distintos aumentos totales. parecidos a ladrillos de construcción. también. y estaban ordenadas con las demás. como en celdas alargadas. X400: Se observa una mayor cantidad de detalles.Laboratorio de Biología Celular UNMSM OBSERVACIONES Elodea Como observamos este espécimen con 3 diferentes lentes objetivos. estas tenían gorma hexaédrica. e incluso observar a los cloroplastos esparcidos en estas. pues. se podría incluso contar los cloroplastos en cada célula. X100: Este aumento nos permite ya ver a las células de la hoja. 2. Al trabajar con el aceite de inmersión se debe tener en cuenta las siguientes precauciones: Apenas se termine la observación. se tendrá que usar una mezcla de alcohol-acetona o xilol para limpiarlo. pues lo dañaría. causando raspaduras u otros daños graves al objetivo. limpiar cuidadosamente el lente objetivo con el papel lente para evitar que el aceite se seque. Microscopía Página 10 . y evitar derramarlo. Además. que a largas o en demasiada cantidad dañan el lente o su sujeción. como echar el aceite en el portaobjetos cuando este NO está en la platina. También tener otras precauciones para evitar que esto suceda. al realizar la iluminación con la muestra deseada se obtiene una mejor observación. es muy difícil de limpiar completamente. o en un caso peor. este puede fluir dentro de la carcasa del microscopio y causar daño a sus engranajes o a la lente del condensador. Además. entonces. Es necesario para la iluminación Kohler debido a que se tendrá que hacer un enfoque de los márgenes del campo iris. pues de dejar rastros de aceite en el objetivo. pues de pasar esto. Tener cuidado de no acercar el lente objetivo demasiado a la muestra cubierta del aceite. Descartar rápidamente el papel lente usado para la limpieza del objetivo con aceite para evitar su reutilización. se puede romper el objetivo en sí. es recomendable realizar esta iluminación con la muestra que se desea observar. puesto que si el aceite de inmersión fluye dentro de una lente cóncava. Mencione qué cuidados del microscopio hay que tener al usar el aceite de inmersión. pues la forma en que esta muestra refracte la luz es única o diferente a la de otras. y si no hay un espécimen que observar. nunca girar una lente seca en la posición de visión. Al cambiar de muestra y colocar el portaobjetos. Explique por qué al hacer la iluminación Kohler se requiere enfocar una preparación antes de desplazar el condensador. Sabremos que el campo iris está correctamente enfocado cuando veamos los márgenes de la muestra claramente. pues se puede romper el portaobjetos. tener cuidado de realizar bien esta limpieza. por ejemplo. no se puede saber propiamente si está o no enfocado. No inclinar el microscopio para que el aceite de inmersión no caiga en otras partes del microscopio como el condensador.Laboratorio de Biología Celular UNMSM CUESTIONARIO 1. Microscopía Página 11 . gracias a las tinciones permite una mejor observación de la muestra. puede ser teñida y fijada a fuego y es utilizada para observar estructuras no dinámicas de los microorganismos. Es la que se usa cuando se desea observar la movilidad de los microorganismos y tiene la desventaja de no permitir demasiado contraste y que muchas muestras no llegan a ser visibles con esta preparación. Demora más en realizar. En esta práctica hemos realizado preparaciones en fresco. en ella se pone la muestra directamente entre el portaobjetos y el cubreobjetos con una gota de agua. aunque sí se le puede hacer tinciones vitales. Preparación fija: Esta es la preparación que es tratada o fijada ante de ser observada. No se fija al fuego ni se le trata demasiado. pero sin movimiento. Explique qué es una preparación en fresco y qué es una fija. Preparación en fresco: Es una preparación inmediata.Laboratorio de Biología Celular UNMSM 3. pues permite la rápida y eficaz observación de cuerpos minúsculos. Microscopía Página 12 . pues consta de diversas partes que podemos ajustar para una buena observación. Los componentes del microscopio óptico brindan la mayor comodidad para el trabajo. de ser maltratado el microscopio su vida útil se reducirá en gran manera y la imagen que nos proporcionará no será la mejor.Laboratorio de Biología Celular UNMSM CONCLUSIONES El microscopio óptico. definitivamente no visibles a simple vista (“Bajo aumento” para estudios moleculares o sus semejantes). La preparación correcta y el adecuado mantenimiento del microscopio son necesarios para una buena observación. es una herramienta vital para el estudio celular. incluso con su “bajo aumento”. España.html http://zeiss-campus. 2da edición.Laboratorio de Biología Celular UNMSM BIBLIOGRAFÍA Karp.. T.fsu. Alberts. Iberia. 1997.html Microscopía Página 13 . J. Barcelona. teoría y práctica”. 2009: 728 Ma. “Biología de los microorganismos” Prentice Hall. 5ta edición. AGT Editor. S. M. Genoveva González-Morán..fsu. 1996 Madigan. Martinko.magnet. Y Parker. Editorial Mc Graw Hill. “Biología Molecular de la Célula” Ediciones Omega. J. 1era edición. “Técnicas en Biología Celular. M. México.magnet. Bruce.edu/articles/basics/care. 8va edición.A.edu/articles/basics/kohler. Gerald. 1994 http://zeiss-campus. “Biología Celular y Molecular”.