Hidrolisis de Los Lípidos de La Leche Con Lipasa y Sales Biliares

HIDROLISIS DE LOS LÍPIDOS DE LA LECHE CON LIPASA Y SALES BILIARESObjetivo general:  Verificar la actividad enzimática de la enterasa lipasa en la hidrolisis y desnaturalización de los lípidos. Objetivo Específicos.    Comprobar in vitro la importancia de las sales biliares (tauroclorato de sodio) en la digestión de los lípidos. Establecer la efectividad de la hidrolisis de las enterasas en presencia de sales biliares haciendo usos de los cálculos químicos. Observar la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación de los ácidos grasos liberados utilizando como base al hidróxido de potasio. de cadena larga. y las específicas para las uniones beta. La hidrólisis de los triglicéridos que consumen los animales superiores se lleva a cabo principalmente en el intestino delgado. o sea triglicéridos de ácidos grasos. luego lentamente se rompe las uniones beta. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial y grasas. y la naturaleza del ácido graso o del alcohol tiene efecto no en la especificidad sino en la velocidad de reacción. Primero se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima. por medio de enzimas lipolìticas elaboradas en el páncreas. . Sin embargo las dos clases de enzimas son sumamente inespecíficas en cuanto a su acción. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las específicas para romper la unión éster en la posición alfa o alfa prima de los triglicéridos. La hidrólisis completa de los triglicéridos procede entonces por pasos.Introducción En las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos ésteres hay diferencia entre las lipasas y las esterasas. son los esteres sencillos de ácidos de bajo peso molecular. mientras que los substratos naturales de las esterasas. La lipasa es muy estable en suero. con la función fisiológica de hidrolizar las grasas en el intestino delgado para facilitar su absorción. mucosa intestinal y otros. La triacilglicerol lipasa cataliza la hidrólisis de los ésteres de glicerol con ácidos grasos de cadena larga.3) (triacil glicerol acil hidrogenasa). Se cree que esto se debe a que la enzima se absorbe a su substrato emulsificador. La lipasa es producida mayoritariamente por las células acinosas del páncreas y es vertida al duodeno con el jugo pancreático. tejido adiposo. extraída de diferentes fuentes biológicas.Marco teórico. por lo que es indetectable en orina.1. que van desde 39. lo que permite la posterior hidrólisis del tercer ácido graso por la lipasa. Para que la enzima actúe. .000. turbidimétricos y colorimétricos. Por el contrario su concentración en la sangre es muy escasa. y a la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. las más modernas y con mejores prestaciones son los colorimétricos. Actúa sobre los enlaces éster de los carbonos 1 y 3. Asimismo. También existen varios tipos de inmunoanálisis para medir su concentración de masa. y no ataca a substratos en verdadera solución. Se le llama Pancreatina a un extracto de páncreas con fuerte actividad lipolitica. El 2monoacilglicérido resultante isomeriza lentamente a 3-monoacilglicérido. La concentración catalítica de lipasa puede medirse con métodos titrimétricos.000 hasta 200. el sustrato debe estar emulsionado con sales biliares u otros emulgentes. consiste en estimar por titulación la cantidad de ácidos grasos liberados de los ésteres. filtra en el glomérulo renal. También llamada antiguamente esteapsina. pero es completamente reabsorbida en los túbulos. precisa de otra proteína denominada colipasa. De los métodos antes mencionados. por lo que puede almacenarse varios días a temperatura ambiente.1. todas ellas con actividad lipolìca.3. La mayor parte de la lipasa presente en el plasma sanguíneo procede del páncreas aunque también contienen lipasa el hígado. No se han descrito formas moleculares de interés para el laboratorio clínico. Lipasa: La lipasa (EC. El método titrimètrico para determinar la acción de la lipasa. contiene siempre diversas fracciones proteicas de muy diversos pesos moleculares. Estas esterasas hidrólisis substratos emulsificador. Como muestra debe emplearse suero ya que existen dudas sobre el posible efecto interferente de los anticoagulantes. en los que se acoplan varias reacciones enzimáticas a la principal hasta conseguir la formación de un producto coloread. Debido a su pequeña masa. Diagrama de proceso. Ensayo 1: Extracto pancreático y Lipasa.05 M Fenolftaleína al 0. 1 Pipeta volumétrica 10 ml 1 vaso precipitado de 250 ml 1 Pinzas de tubo de ensayos 1 Termómetro 1 Cubeta de aluminio Placa de calentamiento. Preparación del blanco. En un erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada Calentar 3 ml de extracto pancreático Adicionar 2 ml de tauroclorato de sodio y mezclar en el erlenmeyer .Metodología: Materiales:              5 Tubos de ensayo .1% en etanol Etanol 96% Tauroclorato de sodio al 1% Agua destilada. Reactivo:       Extracto pancreático 1% lipasa Hidróxido de potasio 0. Baño de agua termostática.(gradilla) 6 Erlenmeyer de 100 ml 2 Pipetas de 5 y 10 ml 1 Probeta de 50 ml 1 Bureta de 25 ml 1 Pipeteador. Calentar a baño maria a 37°C Cada 20 minutos retirar uno a uno Titular con KOH al 0. A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y calentar a 37°C Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de Ensayo 2: Extracto pancreático – lipasa más tauroclorato de sodio.ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína . En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y 2 ml de tauroclorato 1%. En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Titular con KOH al 0.05 % agitando contantemente.05 % agitando contantemente.Calentar durante 20 minutos a 37°C Agregar 3 gotas de fenolftaleína Titular con Hidróxido de Acción del extracto pancreático – lipasa sobre los lípidos de la leche. Calentar a Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína Acción del extracto pancreático (lipasa) y el tauroclorato en la hidrolisis de los lípidos de la leche. A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1%. mezclar. a cada erlenmeyer agregar 2 ml de tauroclorato y mezclar. Preparación del Blanco En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Titular con KOH al 0.05 % los erlenmeyer y agregar 10 agitando contantemente. 35 9. Titular con KOH al 0. En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada A los 4 erlenmeyer agregar 2 ml de extracto de tauroclorato 1% Titular con KOH al 0.00122 0.009 0.5 0.0007675 0. Calentar a 37°C en baño maría.02435 0.034 0. Lípidos de la leche más extracto pancreático – lipasa.0075 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0. Calentar a 37°C en baño maría. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0. añadir a la leche el extracto acompañado de 2 ml de tauroclorato 1%.00038 0.Ensayo 3: tauroclorato: Preparación del Blanco En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Calentar en ebullición 3 ml de extracto pancreático 1%.00170 0.05M de KOH 0. retirar cada tubo en intervalos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína.00049 0.05 % agitando contantemente.05M 9 34 24.05 % agitando contantemente.75 7.0012500 0.00975 0. Acción del tauroclorato de sodio en la hidrolisis de los lípidos.0000000 0. Resultados: Tabla N°1.00045 0.0000375 -0.0000750 . retirar cada tubo en intervalos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína. 6 19.4 24.05M de KOH 0.00098 0.0004550 0.2 0.0004800 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0.0000000 0.0224 0.00126 0.01 .01 0.0005 0.0005 0.0005 0 0 0 0 0 Tabla N°3.7 25.0247 0.5 22.0005 0.05M de KOH 0.01 0.00112 0. Lípidos de la leche más extracto pancreático más tauroclorato.0195 0. Lípidos de la leche más tauroclorato.Tabla N°2.0252 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0.00078 0. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0.05M 15.0003400 0.01 0.00124 0.0001950 0.0156 0. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0.05M 10 10 10 10 10 0.01 0.0005 0.