UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA Facultad de Ciencias de la Salud Escuela Profesional de Medicina Humana Cátedra de Fisiología HumanaGUÍA DE PRÁCTICAS de FISIOLOGIA HUMANA Autores: Docentes del Curso Dr. Carlos Ramírez Velasco (Docente responsable del Curso) Dra. Pedro Núñez Huamani Dr. Enrique Ávila Zamora Dra. Kristel Morales Espinoza Dr. Edgar Zárate Sáez Chorrillos, Marzo 2013 - I. LIMA - PERÚ BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN ANIMALES Y SERES HUMANOS. MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACION. Introducción Definición de Bioseguridad: Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biológicos, físicos, químicos y mecánicos. Agentes de riesgo o causantes de daño: agentes biológicos trasmitidos por ingesta, inhalación, inoculación, y por contacto directo a través de piel y mucosas. Agentes físicos y mecánicos: Temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, contacto y conexiones eléctricas, defectuosas, vidrios rotos. Agentes químicos: corrosivos, tóxicos, carcinogénicos, inflamables, explosivos. La Bioseguridad implica una acción de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El descuido de una persona es el riesgo de todos" Riesgo Biológico: es la probabilidad de infectarse con un agente patógeno (agente patógeno se llama a toda aquella noxa que es capaz de producir una enfermedaden la actividad laboral. Exposición: Es un contacto que implica riesgo con un patógeno capaz de trasmitirse por la vía donde se está produciendo la exposición. Propósito de la Bioseguridad: Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada área de trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biológico y vigilancia del cumplimiento de las normas de bioseguridad. Además promover, sugerir y establecer políticas que apoyen la educación continua de los trabajadores de salud. Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la protección. La disponibilidad de agua potable es primordial. Disponibilidad de lavamanos cerca del área de atención de pacientes ó Laboratorio de trabajo. PRACTICAS DE SEGURIDAD Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiológico o ingresa a él debe seguir reglas de seguridad. Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditación académica, sino porque consisten en prácticas que otorgan seguridad y protección al personal, alumnos e investigadores que trabajan en los laboratorios bioquímicos, fisiológicos, bacteriológicos, biológicos, químicos, etc. Muy especialmente en el campo médico donde trabajamos con muestras ó material biológico que es considerado potencialmente patógeno ó patógeno. La máxima seguridad y protección es necesaria en estos casos PRACTICAS GENERALES Se prohíbe fumar, comer y aplicarse cosméticos, para evitar la diseminación de agentes infecciosos o productos químicos tóxicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo, mandil, ó la bata de laboratorio. Estas prendas de protección externa no deben usarse fuera del laboratorio. Los zapatos han de ser de punta y talón cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan más tiempo en la córnea. Se recomienda el uso de lentes de protección o protectores para la cara a las personas que usan lentes de contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyería de tipo colgante, el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como máquinas rotatorias o centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier otra sustancia biológica deberán usarse pipetas manuales automáticas. DERRAMES . . Es necesario desarrollar y tener políticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los empleados acerca de la manera de manejar derrames químicos y biológicos. Existen en el comercio estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institución el laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo. LAVADO DE MANOS El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminación de agentes infecciosos. Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que éstos tengan huecos microscópicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos aunque se utilicen guantes. LIMPIEZA No debe permitirse que la basura, los desperdicios biológicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes etiológicos deben taparse cuando no se estén empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las superficies de trabajo con algún desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de laboratorio fisiológico es responsable de mantener el área de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya servicio de limpieza adicional por parte de la institución. ETIQUETAS Y SEÑALES Todos los recipientes que contienen productos químicos deben etiquetarse con claridad, indicando el nombre del producto y cualquier precaución para su manejo. Las áreas en que se almacenan productos inflamables, peligrosos o tóxicos y carcinógenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas claramente. Las áreas en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas claramente con el signo de riesgo biológico. DESECHO DE DESPERDICIOS Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biológicos. El desecho de materiales biológicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes específicas del Ministerio de Salud Pública. AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS. Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo físico de infección potencial para el personal de laboratorio fisiológico. Todas las agujas desechables y demás objetos punzantes deben colocarse en un reclpl9nte resistente a la perforación y a prueba de fugas, marcado con el símbolo de riesgo biológico. Estos recipientes se descartan, siguiendo las políticas de la institución, cuando están llenos hasta la mitad o las tres cuartas partes. La mayoría de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos punzantes. Inmediatamente después de usada una aguja deberá incinerarse y para ello existen en la actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas.Nunca, deberá reenfundarse ó volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algún dispositivo como pinzas diseñadas para este fin, para evitar la punción cutánea accidental. Las agujas nunca deben cortarse, ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros líquidos al medio. En caso de que se produzca un incendio es necesario ponerse en contacto con el departamento de bomberos y solicitar ayuda antes de intentar extinguirlo. SEGURIDAD BIOLOGICA Protección Personal La dispersión epidémica del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupación acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el laboratorio. si se emplea para incendios de equipo eléctrico en el laboratorio. Sin embargo.SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS Tipos de Incendio En el laboratorio Fisiológico u otros laboratorios biológicos se requieren líquidos inflamables y combustibles para ciertos procedimientos. Solicitar ayuda. Generalmente este tipo de extintores es el que se compra para uso en el hogar o en las oficinas.Contienen un polvo seco y pueden utilizarse con eficacia y seguridad para las tres clases de incendios. Los extintores contra incendios contienen diferentes sustancias y están marcados según el tipo de incendio para el que deben emplearse. 4. Por tanto. Los extintores clase C están llenos de dióxido de carbono o Halon. En general. Los incendios se clasifican de la clase A a la D. sobrecarga de circuitos eléctricos . la vigilancia adecuada. Los extintores clase B contienen productos químicos secos. Rescatar a cualquier persona que se encuentre en peligro. ya que el agua puede conducir la electricidad de regreso a la persona que tiene el extintor en las manos. El científico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de afrontarlos en caso de urgencia. Los pasos que deben seguirse en caso de incendio son: 1. Clases. Para cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuadocon el fin de controlar de manera eficiente el fuego y evitar que se éste se extienda. es probable que sea difícil o imposible eliminar posteriormente dicho polvo de los instrumentos. sin importar el combustible. 5. con el fin de recordar a los empleados la manera segura de proceder para evitar incendios y otros tipos de accidentes. son producidos por metales combustibles como el sodio. Evacuar las instalaciones en caso de que no se pueda apagar el fuego Por supuesto. Hay extintores que pueden emplearse para Incendios de clases A . en los de la clase C participan circuitos eléctricos energetizados. Extintores ó Extinguidores para incendios. Se pierde tiempo importante cuando se trata de apagar el incendio primero. .B y C. Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios. los de la clase D de un polvo seco especial que contiene un enlazante termoplástico que permite que el agente forme una corteza sólida al calentarse. y después se solicita ayuda. llamas de gas abiertas. 3. permitir que se efectúen procedimientos sin. estos pasos pueden llevarse a cabo de manera simultánea y rápida en un esfuerzo conjunto. cuando hay varias personas presentes. Intentar extinguido. como madera o papel. 2. Aislar el incendio cerrando alguna puerta. se recomiendan los extintores de dióxido de carbono para incendios de equipo eléctrico. y en ellos también existe el riesgo potencial de incendios eléctricos y de basura. Los extintores clase A están llenos de agua y nunca deben utilizarse para incendios de tipo eléctrico. el departamento de incendios de la localidad o el comité de seguridad de la institución proporciona este entrenamiento. Causas de incendio y su Prevención Las causas fundamentales de incendios en el laboratorio son descuido.Es necesario adiestrar al personal de laboratorio en el uso de los extintores contra incendios. los de la clase B ocurren con líquidos inflamables. espuma acuosa que forma una capa (AFFF) o dióxido de carbono. Es necesario impartir periódicamente conferencias para instrucción sobre seguridad en el trabajo. fisiológicos. y los de la clase D. Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios médicos en general. falta de conocimiento acerca de los productos químicos que se utilizan. dicha norma incluye instrucciones para el lavado de manos. Esta regla indica que el patrón debe proporcionar equipo de protección personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos entren en contacto con la ropa. En 1991 la OSHA publicó una regulación final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens (Exposición ocupacional a patógenos que se transmiten por la sangre). indicando el riesgo. los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. El área se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. conforman un grupo de alto riesgo para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vacía desinfectante sobre ellas. Tras dejarlo reposar algunos minutos. Además de describir equipo de protección personal. Identificación del producto químico (nombre químico. ya que hay otras enfermedades además de HBV y HIV que se transmiten a través de diversos líquidos del organismo humano y de los animales. haciéndola extensiva a todas las industrias. En 1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la infección por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. guantes descartables y protectores para los ojos al manipular sangre y líquidos corporales en el laboratorio. desechos de desperdicios y descontaminación del equipo. La revisión de los CDC en 1988 recomendó usar equipo de protección personal para manejar todas las sustancias biológicas y animales. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los cojinetes absorbentes son útiles para derrames grandes) A continuación se coloca el material contaminado en un recipiente para riesgos biológicos: bolsas plástico grueso color rojo en el Perú y bolsa de color negro para basura doméstica. y se mantendrá una lista de productos químicos peligrosos. dilución de Lejía 1:10. como guardapolvos. un inventario de productos químicos. 1.)a OSHA enmendó la norma Federal Hazard Communication Standard 29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard). y sinónimo y/o nombre vulgar. incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud.Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para protección personal. Deben tratarse todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas. forma de recoger derrames. y desarrollen un programa de comunicación de riesgos por escrito.bacteriólogos. Entre las recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones congruentes al manejar sangre y líquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que se obtengan". La regla también indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo biológico y señala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposición a todos los empleados que corran este riesgo. la piel. Esto se conoce como precauciones universales.1987. uso de pipetas. por ejemplo. SEGURIDAD QUIMICA Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales En Agosto de . Información que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material ó grupo de sustancias relacionadas. Esta norma establece que los responsables de cada área determinen si se utilizan productos químicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados hojas con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente los recipientes que contienen el producto.) . transporte de muestras. La solución desinfectante se absorbe con material desechable. Después de absorber la mayor parte de material. de uso en Laboratorio fisiológico y otros Laboratorios biológicos.biólogos y otros relacionados con la salud en general. batas. Es conveniente preparar un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biológico que contenga todos los materiales necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan dichas muestras. el área se limpia con un desinfect8nte de fuerza intermedia o alta. mandiles. Derrames Es necesario que las personas que limpian algún derrame biológico utilicen guantes descartables y bata de laboratorio. es decir. y proporcionen al empleado información y entrenamiento. . b). Toma de Muestras de Sangre La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en diferentes sitios: capilar o periférica. pero raras veces intenta éste lesionar al operador. 2. 3. La sangre no debe exprimirse o se obtendrá una muestra diluida. si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan.3 mm con una lanceta o aguja estéril desechable. Procedimientos para derrames. En cualquier caso. 9. Ingredientes peligrosos 3. Por lo tanto. cobayas. las cosas cambian. TECNICA 1. Datos de reactividad 7. el talón en los niños pequeños En cualquier de estos sitios el área debe de estar tibia (ni fría ni congestionada) ya que de otra manera la composición de la sangre varia por la éxtasis o la dilución. venosa y ocasionalmente arterial. debe reportarse de inmediato.. sea plasma o suero. y tratarse médicamente cualquier lesión. pero con frecuencia también se puncionan las venas de las manos las muñecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo ó la yugular externa o la femoral) Las venas deben examinarse cuidadosamente. Limpie la piel con una torunda de algodón con alcohol de 70º o con otro desinfectante adecuado y deje secar. Para . Información de riesgos para la salud 6. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que debe presionar sobre el sitio de lesión.2. Sin embargo debe recordarse que aun ejecutando una buena toma. peso sí puede hacerse presión a distancia del sitio de la punción. Pueden enunciarse aquí algunos principios generales. Sangre Capilar o Periférica La sangre que suele llamarse capilares. el borde del lóbulo de la oreja. pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. es indispensable que aun los pequeños arañazos de animales se traten en forma adecuada. Si la muestra sanguínea no se recoge con una técnica adecuada puede ocurrir que los exámenes proporcionen información inexacta o incorrecta ó bien que la muestra se rechace y sea necesario repetir la punción. Precauciones especiales y comentarios Manejo de Animales La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instrucción práctica directa. También los monos deben manejarse con cuidado. al menos parte arteriolar se obtienen por o general de: a). En el caso de las ratas. fugas y desecho 8. La punción debe efectuarse de un golpe y rápidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del lóbulo de la oreja). y c). Esta muestra se utiliza para la valoración de diversos parámetros del medio interno que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fracción de la misma. por pequeña que sea. Datos de incendios y explosiones 5. El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. y producir mordeduras peligrosas. Haga una punción profunda (2. Información de protección personal. Datos físicos 4. Deben tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtención y manipulación de las muestras se harán con guantes quirúrgicos descartables. SANGRE VENOSA Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas antecubitales. si el animal ha sido inyectado con material patológico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al personal contra las consecuencias de la mordedura. La primera gota de sangre se elimina porque contiene desechos tisulares. La yema del dedo. ratones). los valores de los parámetros difieren entre la sangre capilar y la venosa. pequeños arañazos cuando el animal trata de escapar. Usar alcohol y lancetas descartables. Si la determinación que se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. La muestras se toman previa desinfección con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19 ó20 x1 (cuanto más bajo es el numero mas es el grosor de la aguja. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una tracción ligera sobre el embolo evite realizar una tracción excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de la sangre hacia la jeringa. La retracción del coágulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un aplicador de madera. TECNICA 1. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fácilmente. quite el torniquete y pida al paciente que abra el puño. Una vez elegido el sitio de punción se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena. 2. El bisel de la aguja debe quedar hacia arriba. entonces debe retirarse ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena. se empuja el tubo hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vacío y la sangre entra al tubo. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos. el tubo se retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra . Al perforar la pared se percibe una sensación de crujido. la punción se efectúa en dos tiempos: primero se punza la piel y luego la vena.La sangre se vacía suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemólisis. 6. esta última operación se efectúa cuando la sangre termina de entrar a la jeringa. 3. La jeringa se sujeta entre el pulgar y los tres últimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del paciente. . Antes de retirar la aguja. 4. Enseguida se fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. Los tubos están sellados con un tapón de goma y extraen un volumen de sangre predeterminado. pero no penetra y por lo tanto no rompe el vació. Esta operación puede producir hematomas. El paciente debe estar acostado o sentado cómodamente y con el brazo apoyado en una mesa o soporte. 7. de preferencia de 37 ª C para que el coágulo se forme más rápido. La aguja más corta se mete dentro del tapón de goma. retire la aguja de inmediato y aplique presión local. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas. Cuando el flujo cesa. Tras la obtención de la sangre. USO DE VACUTAINER En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre venosa. Algunas pacientes – en especiales los jóvenes – pueden sufrir malestar o incluso desmayarse.No debe usarse el Vacutainer para dosaje de gases arteriales.facilitar el examen se usa un torniquete de jebe. en lugar de las jeringas. En cuanto se adquiera la destreza necesaria. El paciente debe mantener la presión con una torunda en el sitio de la punción y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas. las de menor grosor pueden hemolizar la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtención de sangre para transfusiones). si se advierte señales de extravasación de sangre a los tejidos. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapón de goma alcancé justo la línea guía. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y dirigida en paralelo a la vena. EQUIPO. El dedo índice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como guía. Cuando el acceso a la vena no es tan perceptible. Por tanto manténgase alerta ante señales como palidez o piel fría. la sangre se coloca en tubo. 5. se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un movimiento de torsión y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la pared interna del tubo. No efectué demasiada presión ya que puede detener la circulación arterial. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan. Si en cambio se desea obtener suero. Pida al paciente que abra y cierre el puño un par veces para obtener mayor distensión de las venas. a razón de 0. Sequestrene (EDTA) y heparina. Debe practicarla el médico. Convendrá disponer de jaulas separadas para los animales normales que no se utilicen. En esos casos la arteria se ubica localizado el latido por palpación muy cuidadosa. así como adecuada y suficientemente alimentados. como conejos. y todos los métodos operatorios de importancia habrán de efectuarse con el animal anestesiado.8%. cobayos. no afecta el tamaño corpuscular ni el hematocrito. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiológico es indispensable disponer de los animales apropiados. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. INOCULACIÓN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES y DIAGNOSTICO DE SUS ENFERMEDADES Fundamentos 1. Las jaulas para los animales pequeños. 3. También es posible realizar el recuento de plaquetas aun después de unas pocas horas. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con rapidez formas dentadas en los hematíes.2 mg/ml de sangre. La heparina. se mezcla a razón de 1/9 con sangre para investigaciones de coagulación.1 a 0. hematocrito y recuentos globulares. Asimismo. a fin de comprobar que no están enfermos. vacuolización en el citoplasma de los granulocitosy artefactos en los núcleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. ya que impide la deformación y artefactos incluso después de un reposo prolongado. la sangre tomada con esta mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para determinados químicas de nitrógeno ni potasio. Si se dispone de suficiente espacio será conveniente guardarlos en aislamiento durante una semana a diez días. La punción es necesariamente más profunda y se requiere mayor cautela para impedir hematomas. pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica. . Para el estudio del hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfológicos lo supera. CUIDADO.SANGRE ARTERIAL Para la determinación de gases se requiere punción arterial. e inhibe la activación de los factores de la coagulación. La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina. El Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin. Se consiguen frotis aceptables aun cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24hs si la sangre se refrigera. Pocos métodos de inyección y sangría producen mayor dolor que los similares empleados en los seres humanos. Por otra parte estos animales habrán de ser tratados con la solicitud que merecen por los servicios que prestan a la humanidad . La sal di sódica o di potásica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el recuento de las células sanguíneas. No resulta satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teñidas con el colorante de Wright. Es el mejor anticoagulante para prevenir la hemólisis y para las pruebas de fragilidad osmótica. Los animales recién llegados al laboratorio deberán ser examinados cuidadosamente. ratones y ratas deben construirse y disponerse de modo que los animales se conserven sanos y cómodos. 2. Los tres primeros impiden la coagulación al sustraer el calcio del plasma sanguíneo por precipitación o fijación en forma no ionizada. ANTICOAGULANTES Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio. Los animales habrán de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar instalados con limpieza y comodidad. Se evitara atestar las jaulas con lotes demasiados numerosos. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentración de 1 a 2 mg/ml de sangre. ALOJAMIENTO DE LOS ANIMALES. El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulación de la sangre destinada a transfusiones. antes de colocarlos en las jaulas de los normales. El citrato trisódico en solución acuosa al 3. citrato trisodico. en jaulas aparte. para protegerlos de las molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse.Las jaulas habrán de rotularse. álcalis y otras soluciones peligrosas por medio de pipetas. Cuando se use únicamente este método de identificación y haya que alojar juntos en una misma jaula varios animales. el investigador ha de tener especial cuidado en no herirse los dedos con las agujas y evitar cortarse con los instrumentos afiliados.El sexo debe registrarse en la descripción (macho y hembra).Para facilitar el registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratón .Las jaulas se construirán de modo que permitan la limpieza y desinfección mas completas y posean suficiente luz y ventilación. Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeñas chapas de aluminio que se fijan a una oreja de animal por medio de una grapa o un hilo metálico que perfore estos órganos y atraviese también los orificios de las chapas. Es de suma importancia preocuparse del trabajo sin conversar ni distraerse. sierras. Descripción. Para los animales de mayor tamaño pueden adquirirse identificadores especiales . como ratones y ratas. deben usarse pipetas con bulbos de goma de aspiración y nunca hacerlo con la boca. Vale la redundancia. pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintándose la piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohólicas saturadas de fucsina o ácido picrico). etc. álcalis. De igual modo. Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados . ó con ácidos. Chapas. etc.etc.Se procurara conservar a una temperatura uniforme. deben seleccionarse los que presenten señales o colores diferentes . debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o seña particular . de modo especial a causa de las infecciones que pueden contraer durante el manejo de los animales de experimentación. . ó al manipular productos sépticos durante las investigaciones o sufrir quemaduras o la deglución accidental productos biológicos ó producirse a heridas consecutivas rotura de cristales . ó durante el trabajo mismo con ellos como actos quirúrgicos. u otros trabajos que así lo demanden los experimentos fisiológicos. Las pipetas de vidrio. al aspirar ácidos. Deben usarse pipetas automáticas manuales de volúmenes regulables con punteras descartables.La practica de rotular las jaulas sirve para la distinción de los lotes numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro completo conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo. exposición de órganos. Señales o marcas para identificación de animales Los animales pequeños. IDENTIFICACION DE LOS ANIMALES Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificación de los animales . Debe disponerse de compartimientos.Pueden obtenerse en las casas de artículos veterinarios. descripción. aunque no es recomendable hacerlo. habrán de tener la parte bucal tapada con algodón de modo obligatorio y tendrán bulbos de goma para aspiración. etc. PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS LABORATORIOS DE FISIOLOGIA Las personas que trabajan en los laboratorios fisiológicos se hallan rodeadas de múltiples peligros. A estos peligros están principalmente expuestos los investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o distraen mientras trabajan con animales de experimentación ó con productos infecciosos. en caso de ser usadas. y jaulas de aislamiento para los animales inoculados y deberán estar solos. Asimismo.cobayo o conejo. como bisturís.. PREVENCION DE LOS ACCIDENTES Deben emplearse siempre guantes de goma descartables en los experimentos. deben construirse expresamente para fines experimentales fisiológicos. y nunca aspirar con la boca. día y noche. el alumno deberá tomar todas estas preocupaciones con el máximo cuidado. Pueden utilizarse asimismo diversas jeringas. Este método se utiliza junto con el de la chapa metálica a fin de asegurar la identificación si la chapa se perdiera. Las pipetas. como por ejemplo lisol o tricresol al 2 por 100. como hemos indicado líneas más arriba Los calentadores y demás aparatos eléctricos se comprobarán con frecuencia para verificar la exactitud de su funcionamiento.Siempre se verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio . El éter. algunas veces es recomendable trabajar sobre una toalla humedecida en una de estas soluciones. Es obligación del servicio de mantenimiento realizar revisiones periódicas de mantenimiento preventivo.Las manos del operador habrán de estar libres de cortes y escoriaciones. debiendo lavarse cuidadosamente con jabón y agua y luego sumergirlas en una solución desinfectante antes y después de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas. el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto eléctrico. igualmente se asegurará de cerrar la llave del balón contenedor del gas ó la llave general del gas del Laboratorio de ser el caso. Una vez terminado el experimento deberá lavarse la superficie de las mesas con una solución desinfectante. láminas portaobjetos u otro material contaminado con orina ò heces ò secreciones biológicas de los animales. Los recipientes. reparando sin pérdida de tiempo sus averías a fin de evitar cortos circuitos incendios . o se esterilizarán inmediatamente por ebullición durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal. ò contaminados con productos biológicos humanos. .tubos de ensayo y demás instrumentos empleados en la experimentación fisiológica también se desinfectarán con una solución lisol o tricresol al 2 por 100. particulares en la proximidad de las uñas. no se volverán a tocar por ningún concepto sino que se someterán a un proceso de desinfección inmediata.El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables . en la en la cual se ha demostrado una disminución de la proteína membranal Espectrina del hematíe. en medicina usamos el sub múltiplo miliOsmol /Kg H20 Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partículas que se encuentran en 1 Litro ó Kg de solución. Esta hemólisis total se observa entre las concentraciones de 0. que normalmente se presenta entre las concentraciones de 0.34 a 0. en otras palabras.E esto se le llama hemólisis inicial o resistencia mínima.liberándose la Hb. En la presente práctica trataremos de una de ellas que es la Osmosis.Cuando dos soluciones de diferentes concentraciones están separadas por una membrana semipermeable. Pero si efectuamos suspensiones de hematíes en soluciones de cloruro sódico a concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una determinada concentración empiezan a destruirse . Estas funciones las realiza a través de diversos mecanismos. el solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes de que rigen el fenómeno de la ósmosis. y que una vez sedimentados (espontáneamente ó por centrifugan).76 a 0.La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas. son defectos genéticos heterogéneos que afectan a las proteínas constitutivas de la membrana del eritrocito . pues los hematíes son muy frágiles y se hemolizan produciendo anemia intensa. Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan hemólisis por mayor fragilidad de la membrana . es semipermeable.30 % .9 % y suspendemos dentro de ellas los hematíes veremos que éstos se conservan sin alteración durante varias horas. La membrana celular tiene propiedades bien establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan y solo deja salir las secreciones. Si empleamos soluciones salinas de 0. Fundamento Se llama resistencia globular osmótica a la que presentan los hematíes suspendidos en soluciones salinas hipotónicas.) La capacidad de una partícula para producir un flujo de agua a través de la membrana celular se llama tonicidad.La osmolaridad depende del número de partículas que se encuentran es solución .42 %. dicho de otro modo. (Hiper osmolar) La membrana del glóbulo rojo nos servirá en la presente práctica para demostrar este fenómeno y asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos límites de resistencia normales a variaciones de la tonicidad en el medio interno. los productos de desecho y las sustancias no indispensables.La Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O . que hemos revisado con detalle en las clases teóricas. a través de la cual obtienen sus alimentos y el oxígeno y excretan sus productos de deshecho y el C02 resultante de su metabolismo.46 y 0. lo que confiere al liquido una ligera coloración rojiza que no desaparece por centrifugación .FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE FRAGILIDAD OSMÓTICA Introducción Todas las células del organismo están rodeadas de una membrana limitante. (Na+ y Cl. Una solución extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la célula haciendo que ésta se hinche se llama hipotónica (Hipo osmolar) Una solución que permite que el agua fluya hacia fuera de la célula se llama hipertónica. Cada partícula (átomo) ejerce una presión osmótica independientemente. En general la osmosis significa el paso de líquidos y solutos a través de una membrana semipermeable . Aplicación clínica.Esta hemólisis de los hematíes va aumentando en cantidad a medida que la solución de cloruro sódico va siendo mas hipotónica hasta presentarse una hemólisis total. el líquido que sobrenada es claro y transparente como la misma solución salina. una de sodio y otra de cloro. en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercerá una presión Osmótica de dos Osmoles debido a las dos partículas en que se disocia. y el grado de déficit de la proteína Espectrina parece asociarse con la gravedad clínica de esta enfermedad. por ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presión osmótica de 1 Osmol /kg agua. la presión osmótica es la fuerza de atracción que ejercen las partículas sobre el agua atrayéndola . El agua es transportada a través de la membrana celular por una fuerza hidrostática llamada presión osmótica. 3.. después de haber mezclad.0 2.-Solución salina al 0.0 Si 0. mezclar bien.30 % 5 3.5 Si 0.75 6.5 6.0 Si 0.375 % 7 4. añadir 0. NOTA: EL NUMERO 19 ES CONTROL DE HEMOLISIS TOTAL (100% HEMOLISIS) 2.Muestra de sangre venosa desfibrinada ó hematíes lavados.25 5.0 Si 0.40 % 8 4.5 4.1 ml 4.Preparar soluciones seriadas.425 % 9 4.Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde Metodo 1.01 10 ml al 0.Espectrofotómetro 6.0 5.475 % 11 5.5 Si 0. 7.0 8 Sí 0.5 Si 0.Micropipetas de 0.0 3.0 Si 0.5 3.5 2.Agua destilada 8.10 % 2 2.. .75 Si 0.50 5. según la tabla adjunta.5 7.20 % 3 2..0 Si 0. Reacivos y Equipos Necesarios 1.5 1. haciendo las diluciones con agua destilada según lo indicado : Marcar 19 tubos de prueba y repartir así: Sol.75 % 2.5 Si 0.0 6.85 % 19 -----10.55 % 13 6. Agua % NaCl Mezclar Tubos NaCl Destil de Por inNº ml la sol resul 1% version tante ml 1 1.5 Si 0.Fiola de 100 ml 5. por inversión cada uno de los tubos.5 Si 0..35 % 6 3.0 Si 0.0 9 sí 0.60 % 14 6.NO OLVIDAR ESTE PASO.25 Si 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los tubos.0 4.25 % 4 3.Una vez hecha la distribución anterior..75 % 17 8....1 3..5 Si 0.70 % 16 7.Esta práctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glóbulos rojos a la hemólisis en presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotónicas a temperatura ambiente y veremos en cual de ellas se presenta hemólisis inicial y total.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.25 Si 0.50 % 12 5. en tubos de prueba marcados del 1 al 11.Recién ahora.70 % 15 7.1 5 ml al 0.80 % 18 8.45 % 10 4.0 7.75 5.0 --0 % El alumno calculará la Osmola ridad correspondiente a cada uno de los tubos :( expresar en unidades mOsm/Kg H20) Control de hemolisis total para comparación visual. MD. Referencias Bicliográficas S. Examinar por simple inspección visual en cual de los tubos se inicia la hemólisis (hemólisis leve). y se hemolizan muy fácilmente) -Anemia Hereditaria Esferocítica. W.Saunders Co.USA.B Saunders Co. En el Tubo Nº 19 se producirá hemólisis total y corresponde al 100% de Hemólisis.Laboratorio y Clínica.En la Hemoglobinuria paroxística nocturna.Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar por inversión suave.0. 1996.02 Hemólisis Total (Hemólisis completa): 0. Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate. Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. en 0.B.Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversión suave..Phila. Edit.02 CAUSAS DE AUMENTO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICAGLOBULAR: (Los hematíes son más frágiles que lo normal. tienen poca resistencia ante ligeras hipotonías.4. Leucemias. Valores Normales: Hemólisis inicial (leve) (empieza Hemólisis): 0.2004.Lea Febiger.44 % + -. Cirrosis. etc. BostonUSA. Diagnótico Hematológico . USA.32 % + -. En algunas Anemias por deficiencia de Hierro Talasemia mayor ( ó anemia de Cooley. 5. Cáncer. usualmente la fragilidad globular realizada en sol. ó anemia del Mediterráneo ) Anemia Drepanocitica ( Hoz. 6.. es NORMAL. PERO la fragilidad globular realizada en MEDIO ÁCIDO( pH ácido)SÍESTA AUMENTADA . Durante 10 minutos. CAUSAS DE DISMINUCIÓN DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA (Los hematíes son mas resistentes que lo normal a la hipotonía): En la primera Infancia. generalmente a partir del tubo Nº 8. Little Brown Co. . salina solamente. Mellor Leslie . Sickle cell anemia) Anemia Megaloblástica Nutricional Post Esplenectomía y algunas hepatopatías con ictericia FRAGILIDAD EN MEDIO ACIDO: .0. 2002 Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .. Ciscar y Farrera. de 0.Reich P. tempranamente en la infancia. Todd. 1999.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo del líquido) y luego examinar en qué otro tubo la hemólisis es intensa (aproxim. Phila.36 % NaCl ). en los casos que evolucionan con anemia hemolítica. 1998. en la Enfermedad Hemolítica del recién nacido por incompatibilidad ABO -Después de alguna injuria térmica (quemaduras) -Anemias Hemolíticas sintomáticas en algunos casos de: Linfoma Maligno.. Clinical Diagnosis by Lab Methods. Inwood. Linch R.W. Stanford.(Destrucción total de los hematíes y no deja nada de sedimento).Centrifugar a 2000 rpm. Medical Laboratory Technology.J. La FRAGILIDADMECANICA está aumentada en la Ovalocitosis hereditaria (ó Eliptocitosis).Jims 1998. que cursa con anemia hemolítica. hipertónicas o isotónicas.Cuando cambia la composición del liquido extracelular los riñones excretan las sustancias presentes en excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.incluyendo el agua.Otras requieren consumir energía para moverse a través de las membranas contra sus gradientes de concentración .Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones para producir cambios en la composición de los líquidos corporales. Material 17 sapos Beakers Agua destilada Solución de NaCI 7.Estos fenómenos de difusión pasiva y transporte activo permiten la creación de una composición orgánica diferenciada. Experimento Nº2 Se inyecta a los sapos 4ml de una solución en el saco linfático dorsal. Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular. Se registra los cambios obtenidos: Saco Linfático . el sodio .INTERCAMBIO DE LÍQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A TRAVÉS DE MEMBRANAS Introducción Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo. el cloro y la glucosa. Los cambios de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y después de la exposición a distintas condiciones experimentales.Se vuelve a pesar para confirmar que todo el liquido inyectado se encuentre en el animal. de cloruro de sodio o dextrosa . digestivos y respiratorios. Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza.sino que permite el pasaje de muchas sustancias .Se tapa el beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Antes de la pruebas se vacía la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina formada en condiciones experimentales.El liquido debe cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyección debe permanecer por encima del nivel . Se colocan 150 ml de liquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de el. Los animales son pesados antes de realizar la prueba y después de haber vaciado sus vejigas. pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Después de esto se pesa al sapo y se registra su peso.5% Solución de dextrosa al 15 % Balanza Urinómetro Tubos de ensayo Pipetas de Pasteur Goteros Pinzas mosquito Método Experimento Nº 1: Preparación del animal Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente húmedo para que estén adecuadamente hidratados. Esta solución puede ser hipotónica. a través de los epitelios dérmicos. Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusión pasiva . Sise coloca un sapo en una solución de dextrosa y luego se encuentra dextrosa en la orina. también inyectaremos en algunos casos agua destilada . sin llegar a cortar la piel . puede deducirse que fue absorbida a través de la piel hasta alcanzar una concentración suficiente en liquido extracelular que obligase a los riñones a excretar el exceso en la orina.La dirección del intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentración de los solutos . La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente . tubo Baño externo 2* 4 6* 8 10 12 14* 16* NaCl 0.68% agua NaCl 1.36% NaCl 0.68% Dextrosa 3.87% agua Dextrosa 7.74% Dextrosa al 3.87% Baño Saco linfático (inyectar 4 ml). Agua NaCl 0.68% NaCl 0.68% NaCl 1.36% Agua Dextrosa 3.87% Dextrosa 3.87% Dextrosa al 7.74% (Inyectar 4ml) Peso del Glucosa Peso al final sapo al basal del inicio del (inicial) experimento experimento Glucosa pos experimento (final) Experimento Nº 3 Después de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vacía comprimiendo el abdomen y se recolecta la orina. Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso después de recolectar la orina del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento. Se debe tomar en cuenta el peso después de inyectar los 4ml.de solución en los sacos dorsales .Se calcula el porcentaje de variación de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina formada durante el experimento. Experimento Nº 4: Análisis de glucosa en orina del sapo. La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el método de la glucocinta (Urine Strip Winer Lab). Estimulación muscular Introducción Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estímulos, es decir variaciones del medio químicas o físicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformación mecánica, etc. En los fenómenos estímulo respuesta, la respuesta depende de las características del estimulo y de las condiciones del tejido estudiado. La descripción correcta de la relación entre estimulo y respuesta requiere el control de la duración , intensidad y frecuencia del estimulo. Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en función al tiempo y al espacio. Material Sapos grandes Tabla de fijación para batracios Miógrafo Alambre de cobre Estimulador eléctrico Alambre de zinc Equipo de disección Quimógrafo Método Experimento N°1 Se anestesia al sapo por destrucción del cerebro y la médula espinal. Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la región anterior homóloga al tronco. Se continúa la incisión de la piel en cinturón. Una vez completado el cinturón, se desprende la piel de un tirón hacia abajo. En la región dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo. Se levanta el urostilo con la pinza de disección y se seccionan los elementos paravertebralmente y en dirección cefálica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso transverso de la novena vértebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen por tres raíces más arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios ciáticos. Por debajo se observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones. Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios ciáticos. Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios ciáticos y se realiza una ligadura lo mas proximal posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reacción muscular. Se secciona el nervio proximalmente a la médula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda del hilo se puede efectuar la disección del nervio ciático, no siendo necesario manipularlo con ningún instrumento. Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el músculo piriforme, después se lo aísla por disección roma entre el semimembranoso por dentro y el bíceps por fuera. A todo lo largo del nervio se irá seccionando sus colaterales y se lo aislará hasta la rodilla, comprobando que exista conexión funcional entre el nervio y el músculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se seque humedeciéndolo constantemente en solución fisiológica. Experimento N° 2: Experimento de Galvani Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre se toca la piel del animal y con el zinc el nervio. Experimento N° 3 Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrándola fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la disección de la aponeurosis, que en el sapo se continúa hacia la pierna por el tendón de Aquiles que tiene un sesamoideo. Se libera el tendón de Aquiles por disección roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su inserción superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fémur un poco por encima de esta. Se libera el fragmento de fémur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura. Con este mismo hilo se fija al miógrafo. El hilo amarrado a la aponeurosis plantar se fija a la otra barra del miógrafo. Con cuidado se colocael electrodosobre el nervio y se procede a estimular la preparación neuromuscular. Con el estimulador eléctrico se realiza el estimulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente. Humedecer constantemente la preparación con un gotero. Experimento N° 4: fenómeno de la escalera Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulación y después se disminuye el voltaje para obtener el estimulo subliminal. Luego de repetir la estimulación por un tiempo se observará que las contracciones son cada vez mayores hasta alcanzar un valor máximo. Experimento N° 5: tetania Se realizan estimulaciones intensas y continuadas y se obtiene una serie de contracciones sucesivas antes de que el músculo alcance su relajación completa. Se continúa hasta obtener una contracción permanente. Experimento N° 6: Relación longitud - tensión Se da una vuelta completa del quimógrafo para inscribir una línea basal en reposo. A continuación se estimula para que el músculo se contraiga sin vencer ninguna resistencia. Se obtiene un trazado en el quimógrafo. Se colocan 10 gramos de peso, con lo que la línea basal del quimógrafo desciende. A continuación se estimula al músculo y se obtiene un trazado. Se aumentan otros 10 gm de peso con lo que la línea basal desciende aún mas.Se vuelve a estimular el músculo y se obtiene un trazado. Repetir varias veces el procedimiento, incrementando sucesivamente el peso. Discusión Este potencial de acción excita a las miofibrillas para que se contraigan. pero emite antes una rama colateral. La transmisión de este sistema inhibitorio está a cargo de la glicina. y a sus vecinas. Salvo en el caso de las fibras musculares intrafusales. liberando acetilcolina. A medida que el axón del nervio se acerca a su fin emite varias ramas. se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del músculo y de la arteria. las cuales han sido sintetizadas en el soma neural. . Esta rama se desprende a partir del primer nódulo de Ranvier. dejando libre al nervio. La acetilcolina actúa sobre receptores nicotínico presentes en el miocito y produce despolarización de la membrana celular muscular. la acetilcolina. la rama recurrente. Luego se estimula directamente al músculo gastrocnemio a través de una incisión hecha en la piel. Esta vía inhibitoria provee un mecanismo para evitar la contracción muscular persistente. tanto hacia aquella en la cual se originó la primera sinapsis desde el hasta dorsal. La terminal presináptica posee vesículas sinápticas. un mecanismo de retroalimentación negativa que mejora la resolución espacial de la acción neural. terminan en sinapsis inhibitorias. Estás ramas terminales son de poco diámetro y carecen de mielina. Para el control de la actividad muscular existe además una vía inhibitoria recurrente. Se aplica estímulos de baja intensidad a los nervios ciáticos y se va incrementando su intensidad hasta obtener la contracción muscular. evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio. La generación del potencial de acción da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la concentración citosólica de calcio. es decir. representadas como motoneuronas B. Este incremento promueve la fusión de las vesículas sinápticas con la membrana citoplasmática del rafe sináptico. cada una de las cuales inerva una fibra muscular. La placa mioneural es una discontinuidad entre la células nerviosa y la muscular donde la transmisión del impulso de despolarización queda a cargo de un mediador químico. Material Sapos grandes Miógrafo Estimulador eléctrico Equipo de disección Tabla de fijación para batracios Succinilcolina Estricnina Vecuronio Neostigmina Atropina Método Experimento N° 1 Se l anestesia a un sapo por destrucción del encéfalo. Se diseca y se expone el nervio ciático en la cara posterior de ambos muslos. Este fenómeno es denominado potencial de la placa terminal. representada como la motoneurona A. Introducción La placa mioneural media la transmisión de la señal de la fibra nerviosa motora a la célula muscular. El axón de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal. existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. por lo que la velocidad de conducción en ellas es baja. Está rama forma sinapsis con interneuronas que se encuentran en la región ventromedial del asta anterior y son denominadas células de Renshaw. permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente.Placa mioneural 1. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas α. En una de las extremidades. y presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje. creando contracciones similares a las tetánicas. en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que bloquea los efectos inhibitorios de la glicina. Inicialmente puede producir excitación. . Experimento N° 3 Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linfático dorsal del sapo. Inicialmente simula el efecto de la acetilcolina. Origina una contracción muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular persistente. La estricnina actúa a nivel de la medula espinal. Discusión La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. bloqueando la sinapsis inhibitoria de las células de Renshaw sobre las motoneuronas α. Luego de unos minutos procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos. La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos. Esta fase es seguida por el bloqueo de la transmisión neuromuscular y parálisis flácida. Luego de unos minutos se procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos. Experimento N° 4 Se administra 1 mL de solución de atropina y neostigmina en el saco linfático dorsal del sapo. la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Luego de unos minutos se procede a estimular con el carrete de inducción ambos ciáticos. produciendo apertura de los canales iónicos y despolarización persistente.Experimento N° 2 Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linfático dorsal del sapo. acuosas. Turck.. 0. de la pata opuesta y finalmente de las extremidades anteriores. se espera y se registra el tiempo necesario para la respuesta. Suero fisiológico Equipo de disección.Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se contrae y se mueve enérgicamente.3. Una vez que se haya .4. reflejos del salto. b) Ley de SIMETRÍA. los movimientos espontáneos y respuesta a los diversos estímulos. 0. 1% sol. 0. c) Ley de IRRADIACIÓN. 0. Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efectúa el pinzamiento de uno de sus dedos.Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce contracción de la misma pata y de la pata opuesta.2. Se fija al animal con la mono izquierda y se determina lasa siguientes líneas: una línea transversal a nivel del límite posterior de la membrana timpánica ( A-B). los que producen respuestas determinadas: a) Ley de UNILATERALIDAD. En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulación eléctrica y luego realice el corte a lo largo de la línea A-B. Se objetivará las respuestas motoras. ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.Se pellizca fuertemente un dedo y se produce contracción de la misma pata. Sumacion Espacial. En este caso. Este es el sapo descerebrado.Ringer para batracio. empezando por la de menor concentración.Se pellizca suavemente un dedo y se produce contracción de la misma pata solamente.3 %. movimientos respiratorios.1 %. 0.Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se efectúa el pinzamiento de uno de sus dedos. Se toma una tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo decapita con un solo golpe. 0.5 %. Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de ÁCIDO SULFÚRICO desde 0.1.. guantes látex descartables Sol. 0. Carrete de Runckford Acido sulfúrico diluído 0.. respuesta a la rotación y posición de espalda del sapo normal.Material Sapo Beakers.4%. A continuación se efectúa una secuencia de estímulos graduados.5 y 1%. Una segunda línea entre el ojo y la membrana timpánica (X-Z). estilete de acero. Sumacion Temporal y efecto de la ablación medular. Se la cuelga de un estativo y se espera que esté en reposo. a lo largo de la línea X-Z Realizar hemostasia por compresión y realizar las mismas observaciones que en el sapo normal.. d) Ley de GENERALIZACIÓN. Método Experimento N° 1: PREPARACIÓN DEL SAPO ESPINAL Observar la postura. Experimento N° 2: leyes de Pfluger Se pasa un hilo a través de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo espinal de un estativo. Experimento N° 3: experiencia de Turck Se emplea la preparación de sapo espinal. procurando que en este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia abajo. 0.PRÁCTICA DE SHOCK ESPINAL PARA ESTUDIAR LOS REFLEJOS EN EL SAPO Leyes Pfluger. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas soluciones. el sapo puede realizar movimientos complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la posición normal.2%. Se objetivará la depresión motora que constituye uno de los componentes del shock espinal. - . Experimento N° 9 Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la médula. Después se repite las mismas estimulaciones hechas previamente. Experimento N° 8 Se hace una incisión en el abdomen y se expone con mucho cuidado una parte del intestino. la pata y la rodilla. Al principio se observará una ligera contracción de la musculatura abdominal que aumentará al incrementar la intensidad del estímulo hasta llegar a desarrollar una respuesta flexora amplia. Experimento N° 5: sumación espacial Se sumerge en una solución de ácido sulfúrico al 0. Se observa y se registra las características y tipo de respuesta en cada caso. luego el dedo completo. Experimento N° 4: sumación temporal Se sumerge la pata del animal en una solución de ácido sulfúrico al 0.producido la respuesta.1% primero la punta del dedo.1% varias veces. Experimento N° 6 Se repite las experiencias anteriores empleando el carrete de Runckford y administrando estímulos eléctricos de intensidad creciente. Se estimula cuidadosamente con el carrete de inducción. se lava la pata del animal en suero fisiológico antes de pasar a la solución siguiente. Se observa el incremento progresivo de la respuesta. Experimento N° 7 Se empapa un papel de filtro en ácido acético puro y se lo coloca en el dorso del animal Se observa y se registra las características de la respuesta. Se observa la mayor intensidad de las respuestas. Se observa y se registra las características de la respuesta. la respuesta apropiada es la contracción del bíceps. se deja el pulgar sobre el tendón y se da un golpe sobre el pulgar. Esta neurona manda impulsos al músculo y produce una sacudida rápida. se localiza el tendón rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensión rápida y brusca. a través de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el músculo. El sistema puede originarse en el exterior y afectar la parte somática del sistema nervioso. La respuesta adecuada es la contracción del cuadriceps. puesto que la respuesta adecuada parece estar prevista dentro del sistema nervioso. son de este tipo. un órgano efector y una red de comunicaciones entre ambos. lo que produce flexión del antebrazo. mientras que los reflejos somáticos pueden ser percibidos concientemente. lo que produce extensión del pie. La acción refleja se inicia por un estímulo de entrada y tiene como resultado una respuesta de salida. La respuesta apropiada es la contracción de los músculos gemelos y del sóleo. mandan impulsos a la médula espinal y. La pierna superior debe estar relajada. Los reflejos espinales no requieren de intervención del sistema nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya médula se ha seccionado por encima de la localización de las neuronas de los nervios correspondientes. Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia. Experimento N° 2: reflejo aquiliano El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin contracción de los músculos de las pantorrillas. El estímulo puede originarse en los órganos internos y afectar la parte visceral del sistema nervioso. . Un mismo arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somáticas. Se busca el tendón de Aquiles y se estimula. Se busca el tendón del bíceps con el pulgar de la mano que sostiene el antebrazo. Cualquier estímulo produce una respuesta. Experimento N° 3: reflejo bicipital El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo. Muchos reflejos pueden considerarse como parte de un programa. mientras el examinador soporta el antebrazo. El sistema nervioso comprende un gran número de arcos reflejos. Por palpación. Las inserciones tendinosas de los músculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala distensión y envían la información al sistema nervioso central sobre la posición de un músculo o de un miembro. La acción refleja abarca el reflejo axónico sencillo hasta los reflejos complejos en los que existe intervención cerebral. La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitación de la médula espinal. Esta facilitación puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza. Los reflejos espinales.REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE Introducción Los mecanismos reflejos están constituidos por un órgano receptor. lo que produce extensión de la pierna. que requieren transmisión del estímulo desde la periferia hasta la médula y de allí regresar al órgano efector. Material Sujeto de prueba Martillo de reflejos Método Experimento N° 1: reflejo rotuliano Se sienta al sujeto en una posición cómoda y cruza las piernas. La respuesta apropiada es la contracción del tríceps. mientras el examinador soporta el antebrazo. La respuesta adecuada para el reflejo cubital es la pronación de la mano y para el reflejo radial la flexión del antebrazo.Experimento N° 4: reflejo tricipital El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo. y se golpea el tendón con el martillo. Experimento N° 5: reflejos radial y cubital Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos. Discusión . inmediatamente por encima de su inserción en el codo. por encima de la muñeca. El examinador sostiene el brazo del sujeto. Se palpa el tendón del tríceps. lo que produce extensión del pie. antebrazo. Introducción La estimulación de un receptor táctil de la piel es transmitida por la vía del asta posterior (sensitiva) hasta la corteza somestésica. Objetivos 1. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones.EVALUACIÓN DE LA PERCEPCIÓN SENSORIAL Y SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR. por lo tanto. En esta la excitación del receptor activa un determinado número de neuronas que constituye su campo cortical. Las capacidades táctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos de estimulación sobre la piel. Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel. 3. El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y frío. a la temperatura indiferente. dorso de la mano. EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIÓN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL Materiales Sello especial Hoja de papel Pelo de cerda (pelo de Von Frey) Sujeto experimental (alumno 1) Sujeto experimentador (alumno 2) Procedimiento 1. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulación. Las diferencias en las capacidades de discriminación en las diferentes zonas del cuerpo se deben al número de receptores que exista en esa zona y a la representación cortical que éstos poseen. 2. Otras zonas del cuerpo tienen menor densidad de receptores siendo éste uno de los factores que conlleva a que la información que llega al área de la corteza sea reducida y. al fresco. de ahí su mayor posibilidad de discriminación. sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma máxima y las de la periferia en menor magnitud. 3. cada uno excitará de forma máxima al centro de su campo cortical. a lo tibio. Discriminar procesos y modalidades de percepción sensorial en el ser humano de tal manera que pueda sistematizarlos. no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma magnitud. sea menor su posibilidad de discriminación. al frío. una ligera presión en cada uno de los cuadrantes del . Los dedos están profusamente poblados de receptores y el área de corteza a que llega la información proveniente de ellos es amplia. Sellar en una hoja de papel un área similar y proporcional Luego el sujeto experimental deberá cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento sensibilizador llamado pelo de Von Frey. la resultante será una excitación mayor. que pasan del frío glacial. dorso del cuello. estas observaciones deberán ser correlacionadas con sus conocimientos neuroanatómicos y neurofisiológicos. Sin embargo. 2. 4. aunque se mantienen los máximos de excitación separados. Por medio de un sello especial marcar un área en la piel de un compañero: cara. Comprobar la distribución anatómica de los receptores cutáneos y la importancia fisiológica de dicha distribución. caliente y quemante. pero como los campos se superponen parcialmente. Marcar con notación diferente. pregunte al compañero cuantos puntos discrimina y anote su respuesta.5. cara y nuca. 5. En cada paso la separación de las puntas del compás se aplicarán de forma tal que la diferencia entre ellas sea diferente y. alternante. Durante la aplicación de las agujas. Regla. actuando cada uno como sujeto experimental y como experimentador. los puntos correspondientes. Indique a su compañero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir. dolor. Se deberá estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos. 1. 2. Sujeto experimentador (alumno 2). 4. 1. manteniéndose constante para cada zona corporal esto es 0. 2. 6. 5.5 y 3 cm. en un esquema.área delimitada por el sello. 2. Analice el comportamiento de los receptores. Sujeto experimental (alumno 1). temperatura. Resultados EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIÓN DE DOS PUNTOS Materiales Compás de doble punto.5. 1. antebrazo. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas. 3. 4. Aplique los dos extremos del compás de forma tal que lleguen simultáneamente al área de piel estimulada. otros). El sujeto experimental deberá reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de cada cuadrante (tacto. Resultados . Procedimientos Para la realización de estos experimentos los estudiantes se dividirán por parejas. 5 1.5 2.5 3.0 1.0 .Area de la Piel Estimulada Yema de los dedos Antebrazo Cara Dorso del Cuello Dorso de mano Distancia de separación de las puntas del compás ( cm ) 0.0 2. Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisión del dolor (2) ascienden en dos tractos diferenciables tanto anatómica como funcionalmente. menos de 10°C. como el quejido y la expresión del dolor. se dice que hay grupos étnicos más sensibles al dolor que otro. Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e inmediatamente retiramos el brazo para evitar un mayor daño tisular. pellizcar. y el sexo femenino es más resistente al dolor que el sexo masculino. 2) Dolor Lento. pinchar. Todo ser viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel. y asimismo responden a estímulos mecánicos intensos. se transmite a través de fibras de tipo A y la señal dolorosa llega al sistema nervioso central vía el haz neoespinotalámico. térmicos y químicos. aparece después de un segundo o más y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o minutos. se transmite a través de fibras tipo C y las señales dolorosas llegan al sistema nervioso central vía el haz palioespinotalámico. el cual aparece siempre que un tejido está siendo lesionado y obliga al individuo a reaccionar para suprimir el estímulo nocivo. siendo pequeño el número de las fibras que la componen. El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vías neurales específicas. El dolor es una respuesta sensorial medible. 3) Los nociceptores polimodales responden a estímulos dolorosos mecánicos. que aparece en menos de una décima de segundo. aunque también pueden participar otras sustancias como el ácido glutámico. Los axones del Páleo-espinotalámico se enlazan sinápticamente con neuronas del tronco encefálico en especial con la información reticular tegmental y los cuadrigéminos (Tracto espino-tectal).SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIÓN DEL UMBRAL DEL DOLOR Introducción El dolor es un mecanismo de protección y por tanto puede definirse como una respuesta de defensa corporal. y el tracto Neo-espino-talámico con proyecciones menores y circunscritas. El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rápido. puede haber una respuesta verbal. en que el dolor es insoportable. Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de estímulo al cual responden y básicamente son de tres clases: 1) Los mecanociceptores responden a estímulos mecánicos muy intensos de la piel como apretar. y puede haber una respuesta fisiológica como cambios en la presión sanguínea. suele ir acompañado de destrucción tisular. y altas temperaturas. mientras que otras de sus fibras alcanzan directamente a los núcleos talámicos intramamilares. . El estímulo doloroso (E) actúa sobre un terminal nervioso que lleva su axón hacia la neurona sensorial primaria (1) en las astas posteriores de la médula espinal. entre 45° y 55°C. la somatostatina y el polipéptido intestinal vasoactivo (VIP). el tracto Páleo-espino-talámico con proyecciones amplias y difusas. El dolor puede también ser socialmente determinado. denominado umbral. sudoración y taquicardia. por encima de 42-45°C. tales como el retiro de la fuente del estímulo o la fuga. 2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas. etc. La respuesta al dolor puede expresarse en términos conductuales. su magnitud varía con la intensidad del estímulo. no se percibe en los tejidos más profundos del cuerpo. La vía neuronal del neo-espino-talámico es responsable de la localización certera en la superficie corporal de los dolores agudos. se percibe en la piel como en cualquier órgano o tejido profundo. El mediador excitatorio de esta información dolorosa es la sustancia P. Hasta este nivel no hay participación de la corteza cerebral en las sensaciones del dolor. También pueden responder a estímulos térmicos repetitivos. colocando el brazo sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazón. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor. Sujeto Experimentador (alumno 2). Procedimiento 1. Aumentar la presión del sistema. Es aquí. Coloque el manguito del esfigmomanómetro. 4.termómetro y gotero. conectando el hervidor en el suministro eléctrico. Temperatura y determine el umbral del dolor. 3. Solicitar al sujeto de experimentación que abra y cierre rítmicamente ambas manos. 6. Procedimiento 1. 4. donde ocurre la modulación del dolor.Construir una curva tiempo vs. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda. Resultados . 5. Sujeto Experimental (alumno 1). alrededor del brazo de manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo. 2. hasta alcanzar una presión de 200 mm Hg. y donde socioculturalmente puede variar la expresión del dolor EXPERIMENTO N° 1: SENSACIONES TÉRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR Materiales: Hervidor eléctrico con agua . Cronómetro. Introducir el termómetro en el hervidor eléctrico y registrar la temperatura del agua. 8. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el dolor se torna insoportable. 5.. con la pera insufladora. Disminuir rápidamente la presión del sistema. 3. Igualmente existen neuronas de tercer orden en el núcleo ventro-basal y grupo posterior del tálamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano sienta dolor. Aumentar la temperatura del agua. abriendo la válvula de la pera insufladora.En el tálamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los núcleos intramamilares del tálamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza cerebral. 7. completamente desinflado. Resultados TIEMPO (MIN) TEMPERATURA °C DOLOR EXPERIMENTO N° 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR Materiales Tensiómetro. 2. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentación perciba un cambio en la temperatura del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto. El sujeto de experimentación deberá sentarse cómodamente. BRAZO Derecho Inicia el dolor Dolor insoportable Desaparece el dolor Izquierdo UMBRAL DEL DOLOR DOLOR Insoportable TIEMPO (MIN) TEMPERATURA (°C) ISQUEMA LOCAL Y DOLOR BRAZO Derecho Inicia el dolor Dolor insoportable Desaparece el dolor Izquierdo . PRACTICA DE Fisiología del CEREBELO 2013.. Síntomas y Signos de la alteración Cerebelosa. Anatomía. Rol Fisiológico.I Marco Teórico. .PRUEBAS CEREBELOSAS CEREBELO. Evaluación de la Fisiología Cerebelosa. EL CEREBELO REGULA EL TONO MUSCULAR. vestibuloespinales y reticuloespinales). modificando la actividad de las motoneuronas gamma. núcleos vestibulares y formación reticular. núcleo rojo. los núcleos del cerebelo mantienen una activación tónica de las vías motoras que facilita la realización del movimiento. Las células de Purkinje inhiben a los núcleos profundos. los núcleos profundos tienen una actividad continua en situación basal. así. y así DAR FORMA AL MOVIMIENTO. que son el origen respectivamente de las vías motoras corticoespinal. con lo que pueden inhibir unos componentes del movimiento y otros no.FUNCIÓN DEL CEREBELO la principal función del cerebelo es la coordinación del movimiento. . de manera QUE AUMENTA EL TONO PARA MANTENER LA POSTURA. permitir que el movimiento se realice con facilidad y precisión. y tienen conexiones excitadoras con el origen de las vías motoras (corteza motora a través del tálamo. es decir. rubroespinal. O LO INHIBE PARA FACILITAR LA REALIZACIÓN DE LOS MOVIMIENTOS VOLUNTARIOS. y en su recorrido pueden actuar sobre células de Purkinje correspondientes a VARIAS ARTICULACIONES. Por eso debe ampliar la base de sustentación. Puesto que las células de Purkinje inhiben a los núcleos profundos. Y las lesiones de la línea media (VERMIS) producen inestabilidad en la marcha. Por5 eso las lesiones del . La estructura microscópica es semejante en las tres. envía señales correctoras. por lo que una vez que el movimiento se ha aprendido disminuye la frecuencia de las espigas simples. puesto que la corteza del vestibulocerebelo inhibe a los núcleos vestibulares ipsolaterales. La razón de esto es que. Colabora con los núcleos vestibulares en las funciones de mantenimiento del equilibrio y de ajuste del reflejo vestibuloocular. la lesión del vestibulocerebelo produce hiperactividad vestibular ipsoateral. Las lesiones del vestibulocerebelo en un lado producen síntomas parecidos a las lesiones de los núcleos vestibulares en el lado cotralateral. El espinocerebelo se encarga de controlar la ejecución de los movimientos. Esto produce depresión a largo plazo. la disminución de las espigas simples produce una mayor actividad de los núcleos profundos y de las vías motoras. El vermis junto con el núcleo fastigio se asocia a los movimientos axiales (del tronco y raíz de los miembros) y la zona intermedia de los hemisferios cerebelosos se asocia a los movimientos la parte distal de las extremidades. REGIONES FUNCIONALES DE CEREBELO El cerebelo se divide en tres regiones funcionales. El núcleo fastigio envía las señales correctoras al origen de las vías que controlan los . COORDINANDO SU ACTIVIDAD. Vestibulocerebelo El vestíbulocerebelo corresponde anatómicamente con el nódulo-flóculo. que equivale a una lesión de los núcleos vestibulares contralaterales. Recibe información por las vías espinocerebelosas de cómo se están realizando los movimientos. Las fibras paralelas recorren una larga distancia en la corteza del cerebelo. y si detecta que el movimiento comienza a apartarse del objetivo deseado. Espinocerebelo.los hemisferios cerebelosos se asocian con alteraciones de los movimientos de las extremidades partes distales. EL CEREBELO PARTICIPA EN EL APRENDIZAJE DE LOS MOVIMIENTOS. por lo que las diferencias entre ellas se deben a que tienen distintas conexiones aferentes y eferentes. MIENTRAS SE ESTÁ APRENDIENDO UN MOVIMIENTO NUEVO SE PRODUCEN FRECUENTES ESPIGAS complejas en las células de Purkinje. Incluye al vermis cerebeloso y la zona intermedia de los hemisferios cerebelosos. y realizan el mismo tipo de procesamiento pero con distinta información. También contribuye a la COORDINACIÓN DE LOS MOVIMIENTOS POLIARTICULARES. disdiadococinesia (juego sucesivo de palma. para que se ejecute. a través del tálamo. Cuando se altera produce el temblor intencional( no puede ensartar la aguja con un hilo).dorso de las manos muy dificultoso) . ej. y en qué secuencia. . y también la contracción del antagonista al final del movimiento para frenarlo cuando llega al objetivo. y el núcleo interpuesto envía señales correctoras al origen de las vías que controlan los movimientos distales. que son la vestibuloespinal y reticuloespinal. a través de los núcleos del puente. Comprende la parte lateral de los hemisferios cerebelosos y el núcleo dentado. elabora el plan motor (determina qué músculos hay que contraer.:Cuando se retrasa esta acción de descompone el movimiento en sus partes ( movimientos roboticos) El cerebrocerebelo es necesario para el aprendizaje de movimientos complejos (p. Cerebrocerebelo. para realizar ese movimiento) y envía ese plan motor a la corteza motora. sobre el movimiento que se desea realizar.movimientos axiales. aprender a tocar el piano). Participa en la preparación del movimiento. El cerebrocerebelo también interviene en funciones cognitivas no relacionadas directamente con el movimiento. Cuando se altera la parte lateral (hemisferio neocerebeloso se produce la ataxia. Recibe información de la corteza. Regula la relajación del antagonista durante realización del movimiento. que son la vía corticoespinal lateral y rubroespinal. disimetría. El espinocerebelo coordina la actividad de músculos agonistas y antagonistas durante los movimientos. oreja . Por ello se pone de manifiesto cuando se le pide cerrar los ojos. con los pies juntos y las palmas de las manos adosadas al cuerpo(en actitud de “firme”). duda ó zigzaguea el talón . lo debe hacer en forma precisa. un déficit en las vías de conducción aferentes de la sensibilidad profunda o laberíntica corregido por la visión. exacta. por ejemplo tenemos: La Prueba del talón rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocará con el talón de un pié la rodilla del la otra pierna. A veces esta maniobra no es suficiente para detectar el signo de Romberg y y entonces se buscará lo que se denomina ROMBERG Sensibilizado que consiste en poner de pié a la persona con un pié delante del otro . es anormal. Si existe Romberg positivo aparecerán oscilaciones y tendencia a la caída. Revelan también alteración de los cordones posteriores de la médula. Evaluación ce la TAXIA ESTATICA: Signo de ROMBERG: La investigaremos con un voluntario de pié. Evaluar Disimetría . Para el Tronco: Se invita a la persona a efectuar cambios de postura: incorporarse. El mismo significado fisiológico tienen las alteraciones de la taxia dinámica cuando se le pide al paciente que cierre los ojos.Para evaluar la FUNCIÓN CEREBELOSA se estudia la Taxia es decir se explora la Taxia durante la ejecución de los movimientos ( Taxia dinámica) ó se evalúan en la posición de reposo( Taxia estática). El signo de Romberg positivo pone de manifiesto la presencia de ataxia estática. Si estas pruebas se alteran se dice que existe ataxia dinámica. Para Miembros superiores: Prueba de Indice-Nariz ó de índice. por el contrario aparecen oscilaciones y la persona busca apoyo para no caerse. Significado Fisiológico: Este signo revela un trastorno del sistema propioceptivo. Luego le pediremos que cierre los ojos: si la persona oscila mucho y tiende a caer decimos que es ROMBERG POSITIVO (anormal). sistema laberíntico y degeneraciones espinocerebelosas. Con los dedos de la mano contraídos se le pide que con el índice extendido se toque la punta de la nariz y luego el lóbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados. Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la distancia. También índice del mismo paciente o con el del examinador. enseguida se le pide que descienda el talón bordeando la tibia de la pierna opuesta y no debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pié. sentarse o caminar: En caso de ataxia dinámica se producirán movimientos oscilantes del tronco. con los ojos cerrados. Si tiembla. Se observará si la persona mantiene la postura erecta o si. o sobre un solo pié . Debemos permanecer cerca de la persona examinada o para sostenerlo en caso de caída. o bien “haciendo un cuatro” ( el paciente levanta un pié hasta la altura de la rodilla. Evaluación de la Taxia DINÁMICA: Se examina por medio de pruebas que consisten en establecer una meta u objetivo a los movimientos de la persona. Cuando un movimiento implica a varias articulaciones de un miembro. Dificultad para los movimientos alternantes y repetitivos. Disartria. Consiste en que el movimiento pasa de largo del objetivo. Por alteración en la regulación del tono muscular. Se produce porque se contraen a la vez los músculos agonistas y antagonistas al realizar el movimiento Disdiadococinesia.Evaluar Disdiadococinesia Evaluar Temblor intencional LESIONES DEL CEREBELO Los síntomas de las lesiones cerebelosas se pueden comprender fácilmente si se conocen las funciones del cerebelo: Ataxia. porque los músculos antagonistas no se activan a tiempo para frenarlo Temblor intencional. Descomposición de los movimientos. como golpear rítmicamente con el dorso y la palma de la mano. Alteración del equilibrio y nistagmus si la lesión afecta al vestibulocerebelo . Se debe a la falta de coordinación en la activación alternante de agonistas y antagonistas. Hipotonía. primero se mueve una articulación y luego otra. el temblor cerebeloso o intencional se acentúa con los movimientos voluntarios. Significa falta de coordinación de los movimientos Dismetría. Dificultad en el habla. por falta de coordinación en los músculos de la articulación de las palabras. de los estímulos auditivos. Las frecuencias del juego completo de diapasones van desde 64 Hertz hasta los 4000 Hertz. Rinne y Schwabach) y evaluar hipoacusia solamente.recogidas por el receptor: órgano de Corti .FISIOLOGIA DEL VIII PAR CRANEAL VESTIBULO COCLEAR En esta practica evaluaremos solamente la función de la rama coclear del VIII Par craneal (mediante test Weber. • Para la evaluación fisiológica de la percepción del sonido evaluaremos la transmisión aérea y la transmisión ósea. Rinne y Schwabach. nerviosa o de Percepción . • Y LAS AFECCIONES DE HIPOACUSIA POR ALTERACIONES EN LA CONDUCCIÓN ÓSEA EN LOS TRANSTORNOR DEL NERVIO AUDITIVO)RAMA COCLEAR Ó DEL LABERINTO(Hipoacusia sensorial. nervio ó vias auditivas nerviosas(hipoacusia sensorial nerviosa ó de percepción). • No nos olvidemos que el nervio vestibular conduce los estímulos específicos del sentido del equilibrio que traduce las sensaciones de posición o movimientos del cuerpo en relación al espacio. Con ellos se puede hacer el diagnóstico cualitativo de las hipoacusias y decir si se trata de una hipoacusia conductiva o de transmisión. Evaluación fisiológica de la audición. pues la rama vestibular será evaluada de modo diferencial conjuntamente con el estudio del cerebelo en su oportunidad. que son instrumentos metálicos vibrantes de acero o de magnesio cuyas ramas son de forma de «U» alargada y con un mango corto que sirve para cogerlos. lo cual se averigua mediante las siguientes pruebas: . • El estudio de la transmisión ósea se efectúa por medio de tres pruebas CLÁSICAS QUE SON Weber.nervio vestíbulo coclear) • El nervio coclear conduce los estímulos auditivos inducidos por las vibraciones sonoras . • Las pruebas de audición constituyen lo que se llama: Acumetría Puede ser Fónica o Instrumental. Exploración de la rama coclear del Nervio acústico VIII par. • La hipoacusia POR ALTERACIÓN EN LA TRANSMISION Ó CONDUCCION AÉREA (HIPOACUSIA DE CONDUCCIÓN) : en AFECCIONES DEL OIDO EXTERNO O MEDIO ó acumulo de cerumen o perforación timpánica. una hipoacusia neurosensorial o de una mixta. AUDIOMETRIA INSTRUMENTAL: Se realiza mediante los DIAPASONES. El objeto de ellas es comprobar si la eventual hipoacusia se debe: • a que existe una pérdida de la conducción aérea(hipoacusia de conducción ó si se trata de una perturbación de la transmisión ósea como ocurre en la afecciones del laberinto . Discusión Algodón Jeringas descartables Suero fisiológico Electrocardiógrafo con juego de agujas de metal Atenolol Solución de Ringer para batracios .1% y obtener un trazado electrocardiográfico. relacionados a respuesta de stress y antiestrés. Abrir el peto esternal y exponer el corazón. Instilar dos gotas de solución de Adrenalina al 1/2000 y obtener un trazado electrocardiográfico. Conectar el electrocardiógrafo por medio de las agujas de metal y obtener un trazado electrocardiográfico basal.Sistema Nervioso Autonómico EFECTOS SIMPÁTICOS Y PARASIMPÁTICOS Introducción El sistema nervioso autónomo comprende dos grandes divisiones antagónicas: sistema simpático y parasimpático. Material Sapos grandes Conejos Adrenalina Acetilcolina Atropina Tabla de fijación para batracios Pilocarpina Equipo de disección Método Experimento N° 1 Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y la medula espinal. Experimento N° 2 Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Colocar al animal en la tabla de fijación. Humedecer periódicamente con la solución de Ringer para batracios. Instilar una gota de solución de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. A continuación instilar dos gotas de solución de Adrenalina al 1/2000 y obtener un nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. Instilar una gota de solución de Atenolol y obtener un trazado electrocardiográfico. Experimento N° 5 Instilar 1 gota de Pilocarpina en el ojo derecho de un conejo y una gota de solución de Adrenalina en el ojo izquierdo. Se emplea el sapo para observar los efectos simpáticos y parasimpáticos en la actividad cardiaca. A continuación instilar dos gotas de solución de Acetilcolina 1/5000 y obtener un nuevo trazado electrocardiográfico. Lavar la preparación con la solución de Ringer y dejarla reposar por al menos 2 minutos. Experimento N° 4 Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solución de Atropina al 0. Experimento N° 3 Emplear la preparación descrita en el experimento anterior. Carrete de estimulación eléctrica .Sol.Agua caliente (40°). CIK 1% .sapo .Propranolol 1/1000 . relacionarlo con el ciclo cardiaco 4. La actividad eléctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y graficarse en ondas por medio del Electrocardiógrafo.-Materiales . Experimento de Gaskel. conductibilidad y contractilidad que le permite al corazón trabajar como bomba. Existe una correlación entre la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco.Tablilla de fijación ..Fundamento El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo. Relacionar la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco e. Observar los latidos por minutos (Seno Venoso. Conocer el efecto vagal 3.Sol.FISIOLOGÍA CARDIOVASCULAR Corazón “in situ”: Propiedades del Corazón 1.Equipo de disección y 2 pares de guantes) . Aurículas y Ventrículo) Con tubo de ensayo (agua fría) tocar el Seno venoso y observar los latidos .-Objetivos a.2 N° 2.Electrocardiógrafo .Sol.Miógrafo para cardiografía por suspensión . Ringer Reconocer la punta del esternón y cortar por su lado izquierdo Con tijera cortar el esternón en su línea media Exponer al corazón e identificar el pericardio. .-Experimentos 4. fría (80°) .ciclo cardiaco Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal Colocar al sapo en la tablilla en decúbito dorsal-fijarlo con alfileres Cortar la piel del tórax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porción media del abdomen Humedecer permanentemente las vísceras y tejidos con Sol. Tiene inervación autónoma y sistema de conducción eléctrica organizada.Atenolol 1/1000 4. Reconocer la anatomía del corazón y vasos b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-características del músculo cardiaco c. 2. Demostrar los efectos de estímulos físicos y químicos (adrenérgicos y colinérgicos) sobre el corazón f. excitabilidad.Tubos de ensayo (03) . Ringer.1 N° 1: Exposición del corazón-anatomía. Detectar la actividad eléctrica del corazón (Electrocardiograma) d.Quimógrafo . C12Ca 1% .Adrenalina 1/2000 .Acetilcolina 1/5000 . (la cabeza hacia abajo). de una manera adecuada a las necesidades del organismo. identificar la pared posterior del corazón.Estímulo físico (temperatura) al corazón Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical. cortarlo y observar las partes del corazón y vasosreconocer las fases del ciclo cardiaco Colocar el Electrocardiógrafo y tomar un basal.Animal para experimentar. A: Cardiografía directa.ventricular) 5. frecuencia y amplitud del trazado .C Ligadura de Stannius. Ringer Fase B: Proceder a los siguientes experimentos: 4.3.Efectos del vago en el corazón Colocar el clamp del Cardiógrafo en al punta del ventrículo .- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente. en donde cambian de dirección y se dirigen al piso de la boca Entre los dos nervios. Lavar Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%. Ringer Instilar una gota de adrenalina 1/2000. observar latidos Interpretar los eventos que acontecen 4. analizar e interpretar los experimentos realizados .Efecto Vagal y Farmacológico Fase A: Disecar el nervio vago derecho: Cortar piel y subcutáneo hasta llegar al ángulo externo del maxilar Identificar y cortar y transversalmente al músculo cutáneo pectoral derecho Colocar el brazo derecho a 45° con respecto al eje del cuerpo Observar debajo de la mandíbula a dos nervios :glosofaríngeo(lateral) y el hipogloso (medial). Cardiografía directa por suspensión. Graficar. Observar efectos en el ECG.3 N° 3. Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de inducción ). Ringer y ligar. reconocer la arteria carótida primitiva (en el ángulo externo de la mandíbula). observar efectos.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina Instilar una gota de acetilcolina 1/5000. Aproximar el Quimógrafo a la palanca y obtener un trazado Determinar el ritmo. Lavar Instilar 1 gota de sol CIK 1%. señalando sus características Desconectar Electrocardiógrafo. Lavar c/Sol. relacionarlo con el ciclo cardiaco Dibujar un gráfico. observar los cambios en el latido (Durante/estimulación desconectar / Electrocardiógrafo) Estimular con una aguja a las aurículas y al ventrículo y reconocer la contracción prematura – morfología y la pausa compensadora. observar efectos. individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la línea media . ligar y observar ECG Observar la frecuencia de contracción de aurícula y el ventrículo (Bloqueo aurículo. observar efectos. Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho.Conducción eléctrica – automatismo En el surco en el Seno venoso y las aurículas colocar un hilo humedecido con sol.3. Lavar 4. 4. Analizar Una segunda ligadura entre las aurículas y el ventrículo .3. observar efectos. relación de la sístole y diástole con la irrigación coronaria. . Experimento N° 1: Preparación Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal Fijar al animal a la tablilla. insertar el anzuelo. Ringer Frasco B: Sol Ringer con CLCa Frasco C: Sol. El potencial de acción es consecuencia de la entrada y salida de los iones. Sinusal y fibra ventricular: Canales iónicos en la despolarización y repolarización.Sol. Ringer con CIMg Evitar que quede aire en el sistema de perfusión llenar un lado del sistema con sol.Innervación cardiaca: efectos en las propiedades del músculo cardiaco .B) . Fundamento Los potenciales de membrana de la célula cardiaca tienen relación directa con la concentración de los iones dentro y fuera de la célula. excitabilidad Diferencias del potencial de acción entre N.Diferenciar entre el músculo auricular y ventricular: relación con presiones que manejan. 4.ACTIVIDAD ELÉCTRICA DEL CORAZON Y EFECTO DE LOS ELECTROLITOS 1. Objetivos Reconocer y analizar los cambios de la actividad cardíaca cuando se le expone a soluciones con Potasio. sinusal comanda el inicio de la despolarización cardiaca? .equipo de disección 4. Ringer Se inicia la perfusión hasta que el corazón se contraiga . a la punta del corazón Levantar el corazón para exponer la vena cava y canularla Conectarla a un sistema de perfusión graduando la altura de los frascos Se conecta los frascos de perfusión a través de tubos en Y a una vía común que seinserta en la vena cava Cada una de los frascos posee una llave para abrir o cerrar el flujo Frasco A: Sol. calciocambios en el ECG. Calcio y Magnesio b. a. MATERIAL Animal de experimento: sapo Tablilla de fijación y alfileres Catéteres EV Frascos de perfusión de 125 ml Anzuelos Cera EXPERIMENTOS: 3.auscultación cardiaca) . coronarias y venas cardiacas. conducción. El alumno será competente para entender los conceptos : . ¿Por que el N. de la célula. Esquematizar los lugares de acción de dichos cationes en el potencial de Acción c. Ringer (Sol A) . Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D) . Algunos iones INTERVIENEN en la despolarización y otros en la repolarización celular.1. efectos y su fundamento de administración de Potasio.Relaciones espaciales de lasCavidades cardiacas: (aplicación en el ECG.Sol. con un hilo.Ringer con CIK Frasco D: Sol. .Sistema de conducción: automatismo.Quimógrafo .Periodo refractario absoluto y relativo :consecuencias ante estímulos . 2.3 g/lt)(Sol. con alfileres Exponer al corazón a través de una incisión media toraco –abdominal Cortar el pericardio.Irrigación cardiaca: a.Sol. velocidad de conducción. Ringer con CIK (0.Sol.C) . La perfusión del corazón con soluciones que tienen mayor concentración de iones van a alterar los potenciales de la célula y se expresaran en la contracción del miocardio. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol. Graficar y analizar los efectos de los iones Potasio. D.3. Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones 4. Experimento 2: Exponer al corazón al Cloruro de Calcio Prefundir al corazón con la sol. Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones 5. Experimento 3: Exponer al corazón al Cloruro de Magnesio Prefundir al corazón con la sol.4.4. B. C.2. Experimento 4: Exponer al corazón al cloruro de Potasio Prefundir al corazón con la sol. Registrar la actividad cardiaca y las características de las contracciones 4. Calcio y Magnesio . Material Sujetos de prueba varones y mujeres. 1 Colocar al sujeto en decúbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convención internacional. La electrocardiografía puede realizarse en reposo (electrocardiografía clínica de reposo) o en actividad (prueba de esfuerzo). Derivaciones de la cara inferior y posterior del corazón 6.1. ¿Por que hay diferencias entre la morfología de ondas en cara diafragmática y caralateral? 5. Eje eléctrico del QRS: importancia y relación con la masa ventricular 10. Es transmitido a través del volumen conductor a la superficie del cuerpo. Relación entre la ubicación de una derivación y las ondas del ECG.Relacionar la actividad eléctrica del corazón con las ondas e intervalos del ECG 2. 1. Estandarizar el aparato aplicando 1 mV . A Objetivos y competencias que obtendrá el alumno: Electrocardiografía 1. leptosómicos y pícnicos 3. Introducción El corazón tiene la capacidad de generar su propio potencial de acción . debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud.ELECTROCARDIOGRAFIA EN EL SER HUMANO EN REPOSO 1. En la presente práctica se realizara la electrocardiografía de reposo. Derivaciones de la cara anteroseptal del corazón 9.Conceptos de derivaciones periféricas y precordiales 3. Derivaciones de la cara anterior del corazón 8. Experimento N°. Donde es captado por los electrodos del electrocardiógrafo. Electrocardiógrafo. Informar de acuerdo al siguiente protocolo: Nombre: Edad: Peso: Informe electrocardiográfico: Ritmo: Intervalo PR: Complejo QRS: Eje QRS Morfología de P Morfología de QRS: Morfología de T: Conclusiones: Comentario: 4. Discusión Fecha: Talla: Tipo constitucional: Frecuencia cardiaca: Intervalo Q-T: Q-Tc: . la velocidad de registro del aparato deberá ser 25 mm/seg. 4. Concepto de ritmo sinusal y noción elemental arritmias y bloqueos. el que es transmitido a través del sistema de conducción a las aurículas y los ventrículos. 2. Método 3. Derivaciones de la cara lateral del corazón: morfología del QRS 7. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros y 6 trazados de de derivaciones precordiales. físicos (temperatura). previo descanso entre cada posición 2. 3.6 cm. a los dos y cinco minutos Registrar la frecuencia cardiaca en el basal y post ejercicio Interpretar los cambios Experimento 3: Efecto de la posición del cuerpo sobre la presión arterial Registrar la presión arterial y frecuencia cardiaca en la posición de decúbito dorsal. presión venosa central. OBJETIVOS Determinar la presión arterial sistólica.PRESIÓN SANGUÍNEA EN EL HOMBRE ADULTO 1.Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean vasodilatoras – ¿cómo actúan? ¿Cómo se regulan? .13 Kpa = 13. - - - . La presión arterial puede determinarse en forma indirecta por medios de un aparato Esfigmomanómetro de mercurio o aneroide. Sistólico.¿Cuales son los factores mecánicos y humorales que determinan la presión arterial? . presión arterial. H2O Experimento 2: Efecto del ejercicio físico sobre la presión arterial Realizar un ejercicio físico intenso (20 abdominales o 20 cuclillas) Tomar la presión inmediatamente.¿Qué importancia tiene la PAM? ¿Cómo la determina? . 1.Relacionar presión hidrostática y oncótica con la PA .-FUNDAMENTO El volumen sistólico produce en la circulación periférica cambios en el flujo y presiones intravasculares. regulación de agua y sodio por el riñón a. Estas presiones están relacionadas con la longitud y radio del vaso y con la viscosidad de la sangre. volumen sanguíneo. presión venosa. frecuencia cardiaca. MATERIAL Sujeto de prueba: alumnos Tensiometro de mercurio o anaeroide Estetoscopio Beakers Agua fría (5° C) EXPERIMENTO Experimento 1: Determinar la presión arterial Sujeto de prueba en posición sentada. La presión promedio se denomina presión arterial media. brazo descubierto a la altura del corazón Esperar 5 minutos Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial Desinflar el manguito lentamente y Registrar la presión sistólica con el primer ruido de Korotkoff Registrar la presión diastólica con el quinto ruido de Korotkoff Recordar: 1mmHg = 0. precarga. sentado y de pie. Calcular la presión arterial media-El alumno tendrá competencia para saber: . diastólica. capacidad venosa.Relacionar gasto cardiaco.Relacione los cambios de PA y FC en relación con el ejercicio y la postura corporal . Inotropismo. b. resistenciavascular. La presión arterial tiene un pico mayor denominado presión sistólica y un nivel inferior denominado presión diastólica. cambios de posición y de actividad física c. en forma indirecta Determinar los cambios de la presión arterial cuando se expone factores. vol. factores que producen resistencia al flujo. Fisiología Médica Arthur Guyton y may John. Bibliografía - Mc Graw Hill: Practicas de Fisiología. hasta cubrir la muñeca Determinar la PA La prueba se considera positiva si la PAS sube más de 20mmHg y la PAD más de 15 mmHg. Tratado de Fisiología Médica .- Interpretar los resultados Experimento 4: Efectos del frió sobre la presión arterial Sumergir la mano en agua fría (5° C) por 30 a 60 segundos. Interamericana William Ganong. Emplearemos el Espirómetro Pneumotacómetro Fleich Datospir 120 En esta práctica el alumno adquirirá competencia para entender: 1.: a) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima y luego respirar normalmente. para que se acostumbre a ella. . CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF) Es la máxima espiración forzada y rápida realizada después de una inspiración profunda. 2. c) Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima seguida de una inspiración máxima. Volumen residual (VR) 3. 1.Relación entre VA. Introducción La medición de los volúmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometría. Volumen alveolar (VA) . borde de los labios. espiratorio forzado(VEF). Capacidad funcional residual (CFR). Capacidad pulmonar Total (CPT) 4. Acontinuación solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras según instrucciones del profesolr de Practicas. colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacómetro. V. Método 3. Unavez que la frecuencia respiratoria seha vuelto constantey la profundidad de la respiración uniforme. Equipo Pinza Nasal Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar EQUIPO ESPIRÓMETRO NEUMOTACÓMETRO FLEICH DATOSPIR 3. . Obtención del Espirograma Sentar al sujeto de prueba. Capacidades Pulmonares (relación de dos ó más volúmenes): Capacidad Vital (CV). Ventilación Pulmonar: FR x VT 10. cuya medición serealiza por métodosindirectos. 2.1. TESTS DE FUNCIÓN VENTILATORIA. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares. Ventilación: (volumen de aire por minuto): tipos 8. exceptoel volumen residual. b) Al final de una espiración normal (FEN) realizar una inspiración máxima y luego respirar normalmente. Espacio Muerto fisiológico (EMF): ejemplos 6. conectar al espirómetropara obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal. Mediciones de la capacidad ventilatoria. Ventilación alveolar: FR x VA 9. Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal Volúmenes pulmonares: V. Constatar que no haya fugas de aire por la boca. EM y VT 7. ni nariz. Este procedimiento permite determinar todos lo volúmenes pulmonares.ESPIROMETRÍA: VOLÚMENES Y CAPACIDADES PULMONARES. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV) 11. Inspiratorio Forzado(VIF) . Espacio Muerto (EM): relación con el VT 5. luego respirar normalmente. . cuyo valor normal para un sujeto joven es de 150L/minuto. FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%) Es la medición del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF. De esta medición se obtiene el flujo espiratoria máximo medio. Los valores normales son: 83% para el primer segundo. Es el test más sensible parael diagnóstico de la enfermedad obstructiva. MÁXIMA VENTILACIÓN VOLUNTARIA (MVV) o máxima capacidad ventilatoria o máxima capacidad respiratoria Es el máximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los pulmones en un minuto. Velocidad del flujo medio respiratorio máximo (MMEFR) o velocidad del flujo espiratorio forzado (FEF 25-75%) Es la relación del medio de la CVF y el TEM.VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF 1) Es elvolumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiración deuna CVF. 94% para el segundo segundo y 97% para el tercer segundo. Se discutirán los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prácticas en cada mesa. La hemoglobina A. el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito mantiene al hierro de la molécula en estado ferroso. la hemoglobina. y las formas correspondientes de hernoglobina se denominan ferrohemoglobina y ferrihemoglobina ometahemglobina. Durante la vida embrionaria aparece la hemoglobina embrionaria (HbE ). el hierro. La molécula de hemoglobina. y solamente la ferrohemoglobina puede captar oxigeno. se observa una heterogeneidad de la hemoglobina durante el ciclo vital. está integrada por cuatro grupos "heme" ycuatro cadenas polipeptídicas.2% de oxigeno presente en la sangre. Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de monóxido. en la cual las 2cadenas a están combinadas con las 2 cadenas epsilon (a2E"z). la principal proteína transportadora es la hemoglobina Fetal (HbF) donde las cadenas alfa están combinadas con cadenas gamma (α2 γ2) Un tercer tipo de heterogeneidad de lahemoglobina. La globina constituyeel 96% de la molécula de hemoglobina y está compuesta por cuatro cadenas polipeptídicas que aparecen como dos pares no idénticos. EI hierro puedeestar en el estado de oxidación ferroso (+2) o en el ferrico (+3). y representa el 90% del total de la hemoglobina. con una porfirina. con el hierro. al igual que con el oxígeno. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2. dando lugar a la aparición de hemoglobinas anormales. de lo que podemos deducir que una molecula de hemoglobina puede transportar cuatro moleculas de oxigeno. la principal hemoglobina en los adultos. Para que esta reacción ocurra. La hemoglobina es una proteína conjugada con un peso molecular de 68000. También juega un papel importante en el transporte de di6xido de carbono(C02) y del ion hidr6geno (H+). resulta de mutaciones de genes que controlanla secuencia de aminoacidos en las cadenas alfa y beta. Además de la heterogeneidad presente a nivel individual. rnientras que durante la vida fetal. como ocurre en la metahemoglobina. Cuando el átomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (férrico). Estáformada por cuatro subunidades de peso molecular cercano a 17000. y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (α2 y δ2) Además de estas dos hemoglobinas. . respectivamente. y representa el 2. perdiendo la hemoglobina la capacidad de transportarlo. el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe2+o ferroso). que en su conjunto constituye la globina. En condiciones normales in vivo. otras seis formas adicionales se encuentran en pequeñas cantidades y cuyo significado fisiológico aun falta precisar. constituye el principal componente del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del 99. Cada subunidad está constituida por un grupo “heme” yuna cadena polipeptídica. 2) La hemoglobinatambién se combina con el monóxido de Carbono(CO2). por lo tanto.OXIMETRIA: SATURACION ARTERIAL DE OXIGENO Introducción En los seres humanos como en todos losmamíferos. Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenación y no oxidación de la hemoglobina. EI producto resultante recibe el nombre de "carboxihemoglobina". consta de dos cadenas α y dos cadenas β siendo su estructuraα2y β2. El grupo "heme" constituye el 4% de la molécula de hemoglobina. no reacciona con el oxigeno.5% del total. hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno molecular (Oz) y logra fijar una molécula de oxigeno por cada átomo de hierro. unión que serealiza. yes una rnetaloporfirina que resulta de lacombinación de un metal. La hemoglobjna presenta las siguientes caracteristicas: 1)Cada atomo de. Contenido/ capacidad x 100 La medición de la saturación arterial de oxígeno requería de métodos invasivos. 3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidación. El peligro de la intoxicación con monóxido de carbono radicaen el hecho de que la carboxihemoglobina no tranporta oxigeno. la vida peligra. Esta combinación se efectúa con la globina de la molécula. 5) La combinación de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxígeno da lugar a la formación de oxihemoglobina(HbO2). constituyen tan sólo una fracción insignificante de la hemoglobina total. pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la capacidad de oxigeno. por disminución de la actividad de la diaforasa o bien por síntesis de hemoglobinas anormales. enzima que permite acoplar la NADH2generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasaen la reacción de Embden-Meyerhoff Entre los factores que ocasionan una acumulación excesiva de metahemoglobina se encuentra: a) Lametahemoglobinemia hereditaria.. La conversión de una fracción de hemoglobina en metahemoglobina tiene un efecto similar al de lacarboxihemoglobina. si loesta un 50 %. estufas. es decir. que ocurre como resultado de lai ingesta de fármacos oxidantes (nitritos. En la mayoría de circunstancias clínicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina. y b) La metahemog!obinemia adquirida. como la oxirnetría de pulso. produciéndose la carboxihemoglobina. nitratos. gas de alumbrado. motores a explosión). forrnas disfuncionales de la hemoglobina. se dice que el contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de oxigeno" del compuesto.Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta ocupada con monóxido de carbono aparecen las cefaleas y vómitos. si lo está un 60-70 %. formándose la metahemoglobina. en relación a la totalidad de hemoglobina presente en sangre (oxihemoglobina. La oximetría permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse reversiblemente al oxígeno [hemoglobina funcional uoxihemoglobina (HbO2)]. compuesto producido por la combustión incompleta del carbono (braseros. Cuando toda la hemoglobina está como oxihemoglobina. El monóxido de carbono se combina más fácilmente con la hemoglobina.se produce la muerte por asfixia. que el oxigeno. reacción que aumenta considerablemente cuando desciende la saturación con oxígeno. el contenido de oxígeno se expresa en términos de porcentaje de saturación (SO2).Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de monóxido de carbono. deoxihemoglobina. punción vascular arterial. 4) La hemoglobina se combina con el dióxido de carbono. De tal forma que la medición de la saturación arterial de oxígeno puede ser representada por la siguiente fórmula: . mediante la formación de compuestos carbamínicos. que hacían difícil su utilización en estudios dinámicos yen estudios poblacionales. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por día. carboxihemoglobina ymetahemoglobina). es la cantidad de oxígeno unida a las moléculas de hemoglobina en relación a la cantidad total de moléculas presente en la sangre arterial. Esta combinación es reversible yla proporción de desoxihemoglobina que se transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con el oxigeno depende de la presión parcial de oxigeno (PO2) del medio que rodea a la molécula. derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende la administración de las drogas. Esta limitación se ha superado en laactualidad gracias al advenimiento de métodos no invasivos. La saturación arterial de oxígeno (SaO2). En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es reducida a hemoglobina por acción de ladiaforasa del eritrocito. pierde la capacidad de transportar oxigeno. unas 200 a 300 veces. con algodón y alcohol. Colocar el sensor de oxígeno en el dedo índice. en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos. Cardiaca . 4. en ambas longitudes de onda. capaz de medir por separado y en forma secuencial la luz transmitida a través de la piel.[HbO2 ] Saturación (%) = ---------------------------. Leer y registrar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca. 2) . Encender el oxímetro de pulso. Medición 2da.Alcohol Procedimiento: 1.Oxímetro de pulso . y una célula fotosensitiva. 2. Lasaturación arterial de oxígeno normalmente varía entre 95a 100% en sujetos de nivel del mar y entre 84 a 92% en sujetos adultos. La oxihemogobina absorbe másluz cerca del infra-rojo (vg. Por lo tanto.Algodón . 3. Medición Promedio 5. 660 nm). Los oxímetros de pulso (figura 1) basicamente están constituidos por dos diodosque emiten luz en forma intermitente. nativos-residentes en las grandes alturas. Experimento N° 1: MEDIDA DE LA SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: . son cuantificadas y cornparadas por la célula fotosensitiva para determinar el porcentaje de la saturación arterial de oxígeno. Medición 3ra. Valores que se modifican con el ejercicio físico y la altitud de residencia. tres veces.x 100 [HbO2]+ [ Hb ] La oximetría de pulso mide la fracción de luz transmitida a través de los tejidos. Resultados: Saturación (%) 1ra.Sensores de Oxígeno (Fig. Limpiar y secar el dedo índice. mientras que la deoxihemoglobina absorbe más luz roja (vg. Determinar si la saturación arterial de oxígeno varía en los diferentes dedos de la mano derecha e izquierda Saturación (%) Fr. En recién nacidos varía entre 85 a 90%. 900 nm). la absorción de luz por la oxihemoglobina y la deaxihemoglobina es diferente en estas dos longuitudes de ondas. Cardiaca Derecha Dedo Pulgar Dedo Índice Dedo Cardinal Izquierda Derecha Izquierda Fr. Con el sujeto experimental cómodamente sentado. Determinar si la postura modifica la saturación arterial de oxígeno. Medición 7ma.Sujeto experimentador (alumno 2) Procedimiento: 1.-10ma. Medición 5ta. Medición 3ra. Saturación (%) Fr.) Pre-Ejercicio Post-Ejercicio 1ra. 3. Cada dos minutos monitorizar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca hasta obtener valores similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.Sensor de oxígeno . Medición 8va. Medición 2da. Desconectar el oxímetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente ambas manos durante 10 minutos.Alcohol . monitorizar registrar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca. Medición).Dedo Anular Dedo Meñique 6. hasta lograr valores constantes con un + 5% de variación (Medición Pre-Ejercicio). Medición 6ta. Medición saturación (%) Fr. Resultados: Tiempo (min.Algodón .Sujeto experimental (alumno 1) . Cardiaca Posición Decúbito Posición Sentado Posición de Pie Experimento N° 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: . 2. Medición 4ta. Al final del ejercicio motorizar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca (Medición Post-Ejercicio) 4.Oxímetro de pulso . Cardiaca . Medición 4ta. 6. Medición 5ta. Resultados: Saturación (%) Frecuencia Cardiaca Índice Derecho 1ra. hasta alcanzar una presión de 200 mmHg. medir la saturación arterial de oxigeno en el dedo índice de ambas manos (1ra. (4ta. . Medición Índice Izquierdo Índice Derecho Índice Izquierdo . Medición).-6ta. Medición 10ma. 7. Medición). El sujeto experimental deberá sentarse cómodamente. de manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. Procedimiento: 1. Medición Experimento N° 3: ISQUEMIA Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: . Coloque el manguito del tensiómetro. Medición 6ta. Medición 2da. 3. hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. . Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rítmicamente la mano derecha hasta el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturación arterial en ambas manos (3ra.9na. con la pera insuflora. Medición 3ra.Tensiómetro .Sensor de oxígeno. 4. colocando los brazos sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazón. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente la mano derecha hasta que el sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturación arterial en el dedo índice de la mano derecha y luego en el dedo índice de la mano izquierda (2da.Cronómetro. cada dos minutos durante 10 min. 2. sobre el pliegue del codo. alrededor del brazo derecho. Aumentar la presión del sistema.Oxímetro de pulso. Disminuir rápidamente la presión del sistema abriendo la válvula de la pera isuflora y retirar el tensiómetro. Medición). completamente desinflado. Medir y registrar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca. Medición). 5. ...................Kg Lugar de Nacimiento:.................Kg Talla:..........................................años Peso:.....) de Recuperación BRAZO IZQUIERDO: Basal Iniciar Dolor Dolor Soportable Tiempo (min.............. Resd........... 2) Ocasional: ............................ Edad:..................... Lima:......................................... Actividad Física: 1) Sedentaria: ....) de Recuperación ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO: Saturación (%) BRAZO DERECHO: Basal Iniciar Dolor Dolor Soportable Tiempo (min......) de Recuperación Fr........ mts Peso Ideal:....... ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------EJERCICIO FÍSICO Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO: Saturación (%) Pre-Ejercicio Post-Ejercicio Tiempo (min...Fecha:......./............... Cardiaca ..... 3) Frecuente: ............................................................. ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ANTECEDENTES PERSONALES: ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Nombre:..........Sexo:.......... T. Cardiaca Fr..................................SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO INFORME DE PRACTICA Nombre:....../.............................................. Sellar el extremo inferior con plastilina. csp. excluyendo los glóbulos blancos y plaquetas. Reactivos . Jeringas y agujas descartables. Centrifugar a 12. durante 10 min.5 ml en cada frasquito de vidrio y desecarlos en estufa a 56 ºC. Cada frasco así preparado servirá para anticoagular 5 ml de sangre. tetramérica proteica.000 rpm en la centrífuga para microhematocrito. ------------------------------ HEMOGLOBINA Es una molécula de estructura cuaternaria. Procedimiento: Macrométodo de Wintrobe. 100 ml. Material de Vidrio y Equipos Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0. a 3000 rpm. MEDICION DE LA HEMOGLOBINA: . Lectura en la escala ascendente en el límite del paquete globular. Lectura en la tabla Adhoc para este efecto. Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina. Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre.8 gm y oxalato de amonio 1. Valores Normales: Hematocrito Valores Referenciales % Recién Nacidos 60 Infantes Varones Adultos Mujeres Adultos 35 a 44 41 a 52 38 a 46 -----------------------------Procedimiento: Método MICROHEMATOCRITO. Expresar el valor porcentual. Esta determinación es muy útil para del diagnóstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.. Evitar formación de burbujas. Sangre venosa anticoagulada . Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca 100. Guantes descartables Centrífuga Clínica Centrífuga para Microhematocrito Existen 2 métodos: Macro y Micrométodo para determinar el Hematocrito. Centrifugar el tubo (contrapesado). Está formada por un núcleo Hem y una proteína llamada Globina. Expresar el Hematocrito en valor porcentual. Desinfectante para piel. es el pigmento rojo portador del Oxígeno de los hematíes.FISIOLOGIA DE LA SANGRE HEMATOCRITO Es la relación porcentual entre la cantidad de glóbulos rojos y el plasma sanguíneo en relación a la sangre total. durante 30 minutos.) Colocar 0.2 gm y agua dest. son elementos de juicio muy importantes para clasificar las anemias.4 a 18. Solución de HCl 0. Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta. Reposo 10 min. de HCl 0. Anotar la lectura de Absorbancia.02 ml Tubos de prueba. CALCULOS: Absorbancia del Problema X Factor de Calibración = gm Hb % Valores Referenciales: Hemoglobina Valores Referenciales gm% Recien Nacidos 17 a 25 Infantes 10 a 15 Hombre Adulto l4a17 Mujer Adulto 12 a 16 Hombre de Altura 16. Alcohol. suavemente. VOLUMEN GLOBULAR MEDIO Volumen Globular Medio = Valores Normales: Al nacer : Infancia: Adulto: Hcrito x 10 = micras cúbicas GR 105 micras cúbicas 83 a 87 micras cúbicas 83 a 95 micras cúbicas HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos GR Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos . Procedimiento Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Ligadura.1 N Espectrofotómetro. Desinfectante. leer luego la muestra problema. sin agitar.00 Abs.02 ml). . Algodón.1 N Mezclar. Pipeta de Sahlí de 0. en Long. Anticoagulante de Wintrobe. Lectura en el Espectrofotómetro. por inversión. Onda de 540 nm. en relación a su contenido de hemoglobina.Materiales: Jeringa y agujas descartables.0 ml de la Sol. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahlí (0. volumen globular y valor porcentual de la concentración de hemoglobina en cada uno de los glóbulos en promedio. Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5. Colocar el espectrofotómetro en 0.8 Índices Hematológicos o Constantes Corpusculares Los índices hematológicos. En presencia de una de estas anomalias debe hacerse la “corrección” de los resultados obtenidos con la gráfica diseñada por el mismo Wintrobe.Raphael Saunders USA 1989.perpendicular a la mesa (plomada). Se corrgirá la VS. y disminuir en la Policitemia. Gradilla tipo soporte vertical para el tubo Wintrobe. Materiales: Tubo de Wintrobe Algodón.agujas y jeringas descartables.000 a 5 500.. Pipetas Pasteur.ligadura. durante 60 min. Los Valores Referenciales de Velocidad de Sedimentación. perpendicular. Lynch.000 pmm3 pmm3 pmm3 pmm3 .CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA C Hb Glob Media = Hb gr% Hto Valores Normales: 32 a 36% Referencias Bibliográficas: Clinical Hematology Wintrobe ". X 100 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR La Velocidad de Sedimentación globular consiste en determinar la rapidez de caída ó sedimentación de los glóbulos rojos de la sangre cuando está anticoagulada. alcohol. según el método Wintrobe son: Hombres: 0 a 6.000 Mujeres adultas: 5 200.000 a 6 000.Luego dejar en reposo vertical. S. Little Brown 1998. Lea Febiger.. Manual of Clinical Hematology.5 mm a la hora Mujeres: 0 a 15 mm a la hora Gráfica de Wintrobe y Landeberg para “corregir” la Velocidad de Sedimentación cuando existe Anemia ó Policitemia. Guantes de látex descartables. Lectura en la escala de valores descendentes para Velocidad de Sedimentación. empleando la pipeta Pasteur. Procedimiento Llenar el tubo con sangre venosa anticoagulada hasta la marca 0de lectura de la Velocidad.000 Niños: 4 000. Valores Referenciales de Glóbulos Rojos: Recién Nacidos: 6 000. Anticoagulante de Wintrobe. 1993 Medical Laboratory Technology. esto se realiza en un tubo de caracteristicas especiales llamado tubo de Wintrobe.000 a 5 400.000 Hombres adultos: 4 500. Joseph Mazza. en función del Hematocrito del paciente. Phila USA 9ª Edition. La V. tiende a ser más rapida en la anemia intensa. En el torrente sanguíneo normalmente predominan los anticoagulantes de forma que la sangre no se coagula mientras esté circulando en los vasos.. se "activan" los Procoagulantes del área de la lesión tisular y anulan a los anticoagulantes. MECANISMO GENERAL DE LA COAGULACION Ó CASCADA de la Coagulación. A) ESPASMO O CONSTRICCION VASCULAR: Ante un corte o lesión de un vaso inmediatamente se produce el espasmo vascular que es el resultado de un reflejo miógeno local y factores humorales locales de los tejidos traumatizados y de las plaquetas..Traumatismo pared vascular o tejidos adyacentes (endotelio) .. con lo que se forma el coágulo. aumenta el ADP y se forma Tromboxano A2. C) COAGULACION SANGUINEA: Formación del coágulo de fibrinadebido a la coagulación de la sangre: Teoría básica: En la sangre hay sustancias que favorecen la coagulación: PROCOAGULANTES y sustancias que la inhiben: ANTICOAGULANTES. ADP Y Tromboxano activan las plaquetas y aumentan su "Adherencia" y se van "Agregando" en el sitio lesionado y se forma el "Tapón plaquetario". La lesión directa de la pared vascular genera la contracción miógena refleja de la pared vascular además la adrenalina ejerce acción vasoconstrictora.. Cuando se lesiona o rompe un vaso la hemostasia se consiguemediante: A) ESPASMO o CONSTRICCION VASCULAR B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO C) COAGULACION SANGUINEA: FORMACION DE UN COAGULO DE FIBRINA DEBIDO A LA COAGULACION DE LA SANGRE D) PROLIFERACIÓN FINAL DE TEJIDO FIBROSO DENTRO DEL COÁGULO SANGUÍNEO PARA CERRAR DE FORMA DEFINITIVA EL AGUJERO DEL VASO. B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO: Ante un vaso dañado las plaquetas se hinchan. Cuanto mayor es el vaso sanguíneo mayor es el grado de espasmo. La Coagulación se realiza en TRES ETAPAS: 1. que en algunos casos puede impedir una pérdida mortal de sangre.Conversión del Fibrinógeno en Fibrina (conversión catalizada por la Protrombina). En los vasos de menor calibre las plaquetas se acupan de la mayor parte de la vasoconstricción al liberar el vasoconstrictor Tromboxano A2.Conversión de la Protrombina en Trombina (conversión catalizada por el Activador de la Protrombina). 3. emiten pseudópodos y hacen pegajosas yse adhieren fuertemente al tejido colágeno expuesto y se unen al Factor von Villebrandt. Sin embargo cuando se rompe un vaso. Los mecanismos de la coagulación se ponen en funcionamiento por: 1.HEMOSTASIA Y COAGULACIÓN DE LA SANGRE HEMOSTASIA: significa prevención de la pérdida de sangre.Los reflejos nerviosos se inician por impulsos dolorosos o de otro tipo originados en el vaso traumatizado o en los tejidos vecinos.Formación del Complejo Activador de la Protrombina 2. La coagulación de la sangre depende del equilibrio entre estos dos grupos de sustancias. Luego Fribrinógeno ---.Xa.. aunque en realidad las dos vías interactúan constantemente: LA VÍA EXTRÍNSECA:Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los tejidos subyacentes(lesión tisular) o un tejido extravascular sufre un traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante. el tejido lesionado ha liberado esta serie de sustancias o complejo de factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINAIIITISULAR) quetrabaja como una verdadera enzima activando al Factor VII ----VIIa.IXa.y éste en presencia del Ca++ activan al Factor X ---. VÍA INTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la exposición de la sangre al propio tejido colágeno expuesto por el traumatismo del vaso sanguíneo lesionado.Va el cual genera el COMPLEJO ACTIVADOR DE LAPROTROMBINA.Así pues.2.Fribrina coágulo. fosfolípidos y un complejo lipoproteico y se desata así la vía Extrínseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se coagulará por ningunade las dos vías. Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulación excepto en los primeros pasos de la vía intrínseca. Y sigue luego la vía final común de conversión de la Protrombina en Trombina y Fibrinógeno en Fibrina y el coágulo es consolidado por el factor XIII.Xa.Contacto de la sangre con las células endoteliales dañadas ó con colágeno y otros elementos titulares en el exterior del vaso sanguíneo.Traumatismo de la sangre 3.VIIIa activan al X ----.. hay contacto de la sangre con epitelios distintos del vascular normal: Se Activa el Factor XII ---XIIa y se liberan fosfolípidos plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL"ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA"que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos posteriores de la Coagulación (Vía final común). . El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. éste a su vezactiva al V ----. y el IXa junto con el VIII…. La célula endotelial vascular dañada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III. Luego se activa el XI --. Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vías.XIa en presencia de Cininógeno.. Se activa luego el IX…. (Observar las retroalimentaciones enzimáticas en elcuadro de la cascada).. Método del Tubo Capilar: Valor referencial de 3 a 7 min. gota a gota.Disminución de la Tromboplastina. de reposo ir sacando cada uno de los tubos e ir inclinándolos suavemente en 90° cada minuto. Sirve para detectar groseramente alteraciones de la coagulación que puedan alargarla. estériles. papel de filtro. Anotar el . METODO DE LEE – WHITE Reactivos y Aparatos: Tubos de prueba de 8 mm diámetro. El trauma que significa la obtención de sangre venosa marca el inicio. y el intervalo de tiempo entre la obtención de la muestra y su coagulación es lo que se denomina Tiempo de Coagulación. 3.. Anotar el tiempo. 2. La prolongación del Tiempo de Coagulación puede deberse a varias causas. Usando tubos de diámetro interno de 8 mm: 6 a 10 min. hasta que no se observe desplazamiento de sangre y pueda ser completamente invertido el tubo sin caerse la sangre. Valores referenciales: Con este método de Lee White los valores normales para hombres y mujeres varía entre: 5 a 8 min.desinfectante de piel. Baño maría 37 °C Reloj cronómetro Procedimiento: Obtener 3 ml de sangre venosa. limpios y secos Agujas y jeringas para uso endovenosos descartables. El tiempo de sangría es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una punción standard profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aquél en que la sangre deja de brotar de la herida.EVALUACION DE LA HEMOSTASIA Y LA COAGULACION DE LA SANGRE TIEMPO DE COAGULACIÓN Se denomina así al tiempo que transcurre desde que la sangre es extraída hasta que pasa al estadote gel.Disminución de la Protrombina. anotando la hora exactamente (Para controlar el tiempo de inicio) Inmediatamente transferir 1. sin necesidad de exprimir la piel. Luego de tres min.. METODO DE DUKE Reactivos y Aparatos: Cronómetro. Existen otros métodos para determinar el tiempo de Coagulación por ejemplo el método del portaobjetos: Valor normal de 2 a 8 minutos..A la presencia en la sangre de algún anticoagulante. Procedimiento: Desinfectar la yema de un dedo (anular) ó el lóbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable standard de manera que la sangre fluya libremente.Disminución del Fibriógeno ó 4. Esta es en términos generales una prueba grosera de la coagulación.5 ml de sangre a cada uno de dos tubos y colocarlos en Baño María a 37°C. Los valores referenciales dependen del diámetro del tubo empleado: Usando tubos de diámetro interno de 11 mm: 9 a 15 min. Tiempo de Sangría El tiempo de sangría depende de la elasticidad de la pared vasos sanguíneos y de la cantidad y capacidad funcional de las plaquetas. Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los tejidos (factor tisular).lancetas descartables..: 1. luego con el papel de filtro ir secando cada gota. El método que emplearemos para TP es el de la Casa Wienerque se llama Soluplastín y que es una Tromboplastina tisular (de cerebro) dealta calidad e incluye cloruro de calcio y cloruro de sodio.5 ml de sangre venosa Mezclar suavemente.(No pre incubar mas de 10 min. que determina los factores involucrados en esta vía como son: Factor VII llamado Proconvertina. cada 30 segundos sin tocar la piel. Soluplastin pre incubado 37°C ( incluye calcio) ml 0.5 mI de anticoagulante citrato trisódico 3.).(No pre incubar mas de 10 min. Anotar el tiempo transcurrido.tiempo de aparición de la primera gota y. centrifugar y separar el plasma. por 3 min.8 % u oxalato de sodio añadir 4. hasta que deje de sangrar. Argentina) Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm. XII).2 . Materiales: Soluplastin (Tromboplastina cálcica) Casa Wiener Lab. Procedimiento para TP: Usar tubos de 13x 100 mm: Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo. Puede usarse Simplastin de Warner Chilcota.el Factor Vó Proacelerina y el Factor X llamado Factor de Stuart-Prower. (El saldo del plasma refrigerarlo). Esta prueba no detecta deficiencias en los factores de la vía intrínseca (VIII. (Rosario. disparando simultáneamente el cronómetro.) Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0. Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y añadir rápidamente al tubo conteniendo los 0.marcado (Px) colocar 1 ml del plasma en BM 37 °C. XI. el Factor II ó Protrombina.Cualquier alteración de estos factores será detectado por la determinación del Tiempo de Quick. Cronómetro Baño María 37°C Asa de alambre Níquel Cromo Nuevas (Bacteriológicas) Micropipetas 100 y 200 lambdas. IX.2 ml de Soluplastin en cada uno y colocar en BM a 37°C por 3 min. Valores Referenciales: 1 a 3 MIN TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL En la presente práctica evaluaremos las dos vías de la coagulación por separado: Primero determinaremos la VÍA EXTRÍNSECA de forma global mediante la determinación del Tiempo de Protrombina o Tiempo de Quick. Muestra de plasma sanguíneo: En un tubo de ensayo contendiendo 0. Para el TP usaremos un exceso de Tromboplastina Tisular o Factor III(de cerebro) y calcio.2 ml de Soluplastin. X. de inmediato iniciar cronómetro Mezclar y esperar coágulo y de inmediato frenar cronómetro Anotar tiempo en segundos. y Factor X (Factor Stuart-Prower). Factor VII (Factor Estable ó Proconvertina). El TP se encuentra prolongado en pacientes con dieta deficitaria en Vit K. ictericia obstructiva. diarrea crónica. Y debe ser usada junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada. Factor H (Protrombina). Factor V (Proacelerina ó F. Valores Referenciales: 11. Con estos valores en segundos a través de una curva de calibración podemos expresarlos en porcentaje de actividad protrombinica en relación a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra los valores porcentuales: Tiempo Protrombina en segundos 11 -12. Previo al tiempo estimado de coagulación sacar el tubo del baño e inclinar suavemente por una o dos veces por segundo y detener el cronómetro en el momento exacto de la aparición del coágulo.12 sgs.Lábil).0.infantes recién nacidos de madres que están con deficits de Vit K (es la enfermedad hemorrágica del recién nacido). Por Drogas (tipo coumarínico de la terapia anticoagulante) Presencia de anticoagulantes circulantes. En resumen.2 segs del control Normal El control Normal estará entre 10 a 13 segundos +. hipofibrinogenemia adquirida o hereditaria. etc.5 2DS. Calcular el valor promedio en segundos. cirrosis).5 15 17 19. hepatitis. VII. Protrombina y Fibrinógeno.Plasma pre incubado 37°Cml Simultáneamente.infantes prematuros. debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines: 1.Para la evaluación de los desórdenes de la Coagulación:para investigar la anormalidad de los factores involucrados en la víaExtrínseca V. 0.1 y ! cronómetro!! simultáneo Mantener el tubo dentro del Baño María cerca de una fuente de luz. En la mala absorción de las grasas. El TP está prolongado también en el daño hepático severo (envenenamientos. Repetir por triplicado esta prueba. que se manifestara por la aparición de muy discretos hilos de fibrina. en ese instante precisamente para el cronómetro. + .5 22 24 – 36 37 – 40 55 – 65 Actividad Protrombínica Valores porcentuales Respecto de lo Normal 100 % 60 50 40 30 25 20 10 5 % % El tiempo de Protrombina se encuentra alargado por defectos de Factor I (Fibrinógeno). ..5 13. Emplearemos en esta practica el método de la casa WIENER LAB.. DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO. tapar y mezclar suave por inversión. XI. Al tubo N° 1 añadirle solución de cloruro de calcio pre incubado a 37 °C …. IX. Que usa cefalina fosfolípido y que se llama reactivo APTTEST METODO DE CASA WIENER LAB. (TTPA Ó APTT Ó PTT). VIII. que se manifestara por la . listo para usar (0. queda así listo el homogenizado. yX . Centrifugar para separar el plasma. (que es un sustituto de las plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaolín tamponado.2. agitar suavemente y mantenerlo en el baño maría por 25 segundos solamente y luego retirarlo para observar la formación del coagulo. Obtencipón de la muestra de sangre: A 4.1 mol/l) B. REACTIVOS: Cloruro de calcio.5 cc de agua destilada.0125 mol/l y ClNa 0. 3. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado. 100 ul. PTT Ó APT TEST A.5 cc de sangre venosa añadirle 0.Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados indanedionas. El test de TTPA consiste en la recalcificación del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolípido. añadir el volumen de agua indicado en el rasco que es 2.Evaluación de la función hepática: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas útiles para evaluar la capacidad del hígado en la síntesis de los factores del complejo Protrombínico: II. Además este reactivo tiene una especial reactividad con la presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la terapéutica con heparina. V. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de diámetro o 13 x 100 ml: TUBO 1 Plasma desconocido PLASMA CONTROL NORMAL O ESTANDAR REACTIVO DE APTT (HOMOGENIZADO) 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS) TUBO 2 100 ul (LAMBDAS) Mezclar e incubar por 3 minutos cada uno de los tubos a 37°C. El TTPA es un método de investigación de la VÍA INTRÍNSECAde forma global XII.. VII. II y I. X. Inmediatamente disparar el cronometro. C.En esta prueba APPT se usa un activador específico de la Vía Intrínseca (del Factor XII) y es un Fosfolípido CEFALINA activado con caolín ó sílice micronizado. Esta prueba usa este activador específico de la vía intrínseca que es el Factor plaquetario -3 sustituido por la cefalina fosfolípido de cerebro de conejo y que tiene además un activador kaolín en finísimas partículas ó sílice micronizado(activador para el Factor XII)de la vía intrínseca solamente y un tampon de piperazida estanolsulfónico. D.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. -(idem que TP). este es el tiempo de Tromboplastina Parcial. anticoagulantes circulantes. etc .500 ml Pipetas automáticas de 100 lambdas En un tubo ensayo 13x100mm que está previamente en el BMa 37 °C colocar: Plasma paciente 0. para embeber el gel.. Ó en el tratamiento con inhibidores de la trombina como hirudina. reactivos y materiales. XI.025M precalentado e INICIAR CRONOMETRO Mezclar y esperar coágulo. Y después de la imbibición..1 ml Los valores referenciales varían de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relación a un control normal Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial está prolongado.1. en la terapia anticoagulante oral.38 gm Agua destil ……………………………. argatroban. IX(Hemofilias). oen la heparización.025 M Cl2 Ca anh ……………………. puede haber una deficiencia de HMWK kininógeno (Factor Fritgerald)..1 0. XII. Coagulopatía por consumo.Dejar que repose 30 min.1 ml ml ml 3 minutos 0.aparición de filamentos de fibrina inmediatamente detener el cronómetro. valores normales de 33 a 48 segundos. Al tubo N°2 que es el control normal le añadiremos luego Cloruro de calcio 100 ul y procederemos exactamente igual que el caso anterior y servirá como control normal.1 0. También podemos emplear los reactivos de cefalina con caolín de la casa francesa que vemos a continuación. pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos indica un a alteración de alguno de los factores de la vía intrínseca de tipo congénito: VIII.Procedimiento para APTT: Emplearemos CK Prest™ activado (Cefalina con Kaolin)(APTT)(Diagnostica Stago-Francia). agitar suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura. Solución de Cloruro de calcio (C12Ca): 0. Parar cronómetro inmediatamente que aparezca el coágulo Anotar tiempo en segundos EXACTO 0.Si todos estos factores están normales.1 ml Plasma paciente duplicado Plasma pacientetriplicado ó Control Normal React 1 Cefalina Bien Reconstituido y resuspendido Mezclar y pre incubar 37°C Exacto Simultáneamente: Añadir Cl2Ca 0. cuyos valores normales van desde 33 a 48 segundos.También se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas ó condiciones anormales como: Enfermedades hepáticas. Reactivo N° 1: Cefalina Reactivo N° 2: Kaolín tamponado : Agitar el contenido del frasco N°2 y transferido completamente dentro del frasco N°1. Equipos. Phila. London.Vía Intrínseca XII Pre K HMWK Vía Extrínseca FACTOR TISULAR Tiempo Tromboplastina Parcial Activada Celafina y kaolín (activador del XII) APPT VII XI Tiempo Protrombina Tromboplastinas Tisulares: Simplastin Soluplastin IX VIII VÍA FINAL COMUN X V PF -3 Protrombina Fibrionógeno XIII Trombina Fibrina Referencias Bibliográficas: Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. 1998 . que le es característico. Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad mayor y menor entre el Donante y el Receptor antes de realizar una transfusión de sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh.Technical HematologySimmons. El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de aglutinación de los hematíes con antisueros monoclonales Anti A. Anti AB y antisueros de los Subgrupos correspondientes. The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993 Fisiología Médica W Ganong El Manual Moderno 2002 An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Lippincott. Determinación del Grupo Sanguíneo: Este procedimiento se basa en la aglutinación de los glóbulos rojos (que transportan un Antígeno específico). . Saunders Co. El plasma de las personas tiene Aglutininas Naturales ó Anticuerpos diferentes al de su propio grupo.Dividir una lamina portaobjetos en 3 secciones: izquierda. La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura. y luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas distintas. También se han identificado antígenos de los subgrupos del tipo A y B. MÉTODO EN LÁMINA PORTAOBJETO: Materiales y Reactivos: Suero monoclonal Anti A Suero monoclonal Anti B Suero monoclonal Anti AB Lámina excavada o lámina portaobjetos Lancetas descartables Muestra de sangre Algodón y desinfectante Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguíneo 1. Laboratory Methods by J. B. La determinación del grupo sanguíneo puede hacerse por el método del tubo de ensayo ó por el método en lámina portaobjeto. B. Henry. El plasma de las personas del Grupo O tiene un título bajo de Aglutininas Anti A y Anti B. Cada tipo de glóbulo rojo transporta un Antígeno determinado. y AB. Pfila. que se produce cuando está en presencia de su correspondiente anticuerpo específico. Se reconocen 4 fenotipos cimunes: O. Estos reactivos producirán aglutinación directa de los glóbulos rojos que transporten el antígeno específico correspondiente. central y derecha con lápiz de cera marcador. 1999. El plasma de las personas del Grupo B tiene Aglutininas (Anticuerpos naturales) Anti A. así por ejemplo las personas del Grupo A tienen aglutininas Anti B. A. London 1997 GruposSanguíneos y Factor RH Introducción: En 1900. 1999. Landsteiner descubrió que el suero de algunas personas aglutinaba los glóbulos rojos de otras y que éste fenómeno podría ser usado para clasificar a las personas en diferentes fenotipos de grupos sanguíneos. Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero correspondiente sin tocar los reactivos !!. específico.. (Es muy importante saber que algunas personas del Grupo O pueden tener un título elevado de aglutinininas Anti A y Anti B y ser donantes peligrosos). Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B en el centro y una gota del suero Anti – AB en la derecha de una lámina de vidrio plana. Anti B. Los reactivos usados para la tipificación de los grupos del Sistema ABO contienen anticuerpos monoclonales IgM. para evitar contaminación cruzada. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar el Rh es un suero Anti D. porque pequeñas cantidades de sangre del feto se filtran a la circulación materna en el momento del parto y desarrollan títulos elevados de aglutininas Anti Rh durante el post parto. existe otro que es el sistema de Antigenos del Rh que son de gran importancia fisiológica y clínica. INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUÍNEO Suero Anti Suero Anti Suero Anti Grupo Sanguineo -A -B . el más antigénico y el término “Rh Positivo”. La aglutinación se producirá en unos pocos segundos. Las personas Rh negativas (D Negativas) que reciben una transfusión de sangre Rh Positiva (aún muchos años antes) forman Anticuerpos Anti Rh y tienen títulos Anti D apreciables y dan reacciones transfusionales graves cuando reciben una transfusión de sangre Rh (D) Positiva. significa que el individuo tiene Aglutinógeno D.2. Durante el embarazo siguiente las aglutininas desarrolladas contra el antígeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antígeno Rh .. El individuo Rh Negativo no tiene antígeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando se le inyectan células D positivas. El 85% de los caucásicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. La lectura deberá hacerse antes de que se seque la mezcla.AB O A B AB + + + + + + + + : Indica aglutinación macroscópica . es en realidad. es con mucho. un sistema compuesto por mucho Antígenos: Ver Tabla Fisher-Race Dce DCe DcE Dce dCe dcE dCE DCE Wiener Rho Rh1 Rh2 rh (hr’) rh’ rh” Rhy Rhz El factor D. El tiempo máximo habitual es de tres minutos.: Indica que no hay aglutinación -----------------------------FACTOR RHO (D) Aparte de los Antígenos del sistema ABO.Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinación macroscópica. Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo. El Factor Rh (Aglutinógeno o Antígeno) llamado así por que fue estudiado por primera vez en los monos del género Rhesius. como generalmente se usa. DETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh. éstas aglutininas Anti Rh de la madre difunden por la placenta al feto y recubren los glóbulos rojos del feto. Procedimiento: En una lámina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.Rh por la exposición al antígeno (Aglutinógeno Rh) del niño. El niño hereda el Rh Positivo del padre. . A su vez. Garnmaglobulina . durante el tercer embarazo el 10 % presentarán EF. concibe un niño Rh positivo. y esto ocurre por ejemplo en la Eritroblastosis Fetal(EF). Durante el embarazo la madre desarrolla Aglutininas Anti . y así va aumentando la incidencia. que se produce cuando una madre siendo Rh Negativa y el esposo Rh Positivo.IgG) se fija y recubreal glóbulo rojose dice que el eritrocito está sensibilizado. Los hematíes del niño están ahora sensibilizados y esto produce la aglutinación y lisis de los hematíes del propio hijo. ó también puede ser un preparado monoclonalmente obtenido. Observar inmediatamente para ver si existe o no aglutinación. TEST DE COOMBS DIRECTO: Esta Prueba se realiza en los hematíes del paciente. Fundamento Esta prueba se fundamenta en la aglutinación de los eritrocitos humanos sensibilizados por anticuerpos gamma-globulínicos que se produce cuando se les coloca en presencia de un suero antihumano gammaglobulínico preparado en conejos. Durante el primer embarazo puede no producirse daño. Mezclar bien. pero durante el segundo embarazo el 3 % presentarán E F. que es una enfermedad del Feto y del Recién nacido y se caracteriza por aglutinación y fagocitosis de los eritrocitos del feto.Rh (D) AGLUTINACIÓN NO AGLUTINACIÓN RESULTADO Rh (D) POSITIVO Rh (D) NEGATIVO INVESTIGACIÓN DE LA SENSIBILIZACIÓN DE LOS HEMATÍES Cuando algún anticuerpo (por ej. Se puede investigar la presencia de estos anticuerpos (IgG. Los eritrocitos pueden sensibilizarse in vivo. Materiales y Reactivos: Reactivo Antisuero Monoclonado Anti . Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh. Este suero antiglobulínico puede ser específico para globulina IgG. INTERPRETACIÓN: Sangre total paciente + Suero Anti.positivo del padre y se produce la reacción Antígeno-anticuerpo que produce hemólisis y la Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (Eristroblastosis Fetal).Rho (Anti D) Lámina portaobjeto Varillas de vidrio ó aplicadores Lancetas descartables Desinfectante y Algodón Lápiz de cera marcador.anti Rh) que recubren a los hematíes del niño mediante el Test de Coombs Directo(test de Antiglobulina directo) y que es el objeto dela presente práctica. absolutamente límpido y transparente. Varillas de vidrio ó mondadientes de plástico. y luego añadir una mayor cantidad de solución salina lavando hacia abajo la pared interna del tubo de prueba. y añadir una cantidad de solución salina como para hacer una suspensión de glóbulos al2% 6. 2.4 ml de sangre y colocar en el fondo de un tubo de prueba de 13 x 100 mm. desinfectante de piel (Alcohol iodado).Muy suavemente. aguja y jeringas descartables.... durante 15 segundos. anotar este volumen.-Centrifugar a 3400 rpm. con gran cuidado.85 %.Esta Prueba DIRECTAMENTE demuestra la sensibilización de los eritrocitos que se ha producido in vivo. Procedimiento: Lavado previo de los glóbulos rojos: 1. Después del tercer lavado el sobrenadante debe estar completamente limpio de sangre.-Decantar la solución salina completamente. demostrando que los eritrocitos están sensibilizados.. ligadura venosa. Por 30 segundos hasta que las células se empaqueten al fondo del tubo.Anemias Hemolíticas Autoinmunes y sirve también para el diagnóstico de reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sanguínea. y.En otro tubo de prueba colocar 2 gotas de esta suspensión al 2 %y añadir 1 gota de 1 suero de Coombs. 5.Medir aproximadamente 0. Interpretación: Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de: Eritroblastosis Fetal . se recubran con el anticuerpo sérico) si es que está presente. 8. pipetas Pasteur. 3. añadir luego 6 ml de solución salina 0. TEST DE COOMBS INDIRECTO Detecta los anticuerpos presentes en el suero del paciente(madre) y para ello deben sensibilizarse primero in vitro algunos glóbulos rojos de otra persona de grupo conocido (Tipo O por ejemplo) y luego de haber sensibilizado los glóbulos rojos escogidos se les aplica el Coombs Directo. lo suficiente para dislocar el fondo celular y observar la aglutinación tanto macroscópica como microscópicamente con objetivo en seco a 40 X. Materiales y Reactivos: Centrífuga Clínica y Microscopio Binocular Suero Antiglobulínico de Coombs (Gamma IgG) (Monoclonal) Hematíes del paciente (Niño) Solución Salina 0. calcular (aproximadamente) el volumen de los glóbulos rojos lavados.-Ahora. añadiendo una pequeña cantidad de solución salina al comienzo y mezclar para suspender bien los eritrocitos. después averiguar si están sensibilizadas aplicándoles el test de Coombs Directo. tal como hemos descrito líneas arriba. Ausencia de Aglutinación: Test de Coombs Directo: NEGATIVO. percuta con un dedo el fondo del tubo.Repetir el lavado dos veces mas. algodón.. 7.Centrifugar a 5000 rpm. 4. TEST DE COMPATIBILIDAD CRUZADA MUESTRAS Y REACTIVOS Suero del Paciente Receptor TUBO A 2 gotas TUBO B 2 gotas .85 % Tubos de prueba de vidrio 13 x l00 mm y 12 x 75 mm..Mezclar suavemente por inversión. limpiando la boca del tubo con papel servilleta. Resultado: La presencia de aglutinaciónindica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA. Para sensibilizar a los para glóbulos rojos seleccionados (conocidos) se debe primero incubar el suero del paciente (madre) con los eritrocitos seleccionados (grupo O por ejemplo) para que las células se sensibilicen (es decir. Cellano y Antic. en BM a 37 °C por 15 minutos CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM.Hematíes del Dador Suspensión al 2 % En salina Albúmina Bovina 22% Centrifugar (serofuga a 1000 rpm) 1 minuto 2 gotas 2 gotas 2 gotas sí ---------sí EXAMINAR ambos tubos por aglutinación ó hemólisis.calientes. P. Lectura del tubo B por aglutinación ó hemólisis. Lewis TUBO "B":detecta incompatibilidad: Antic. MN. Rh. . Luego INCUBAR ambos tubos A y B. Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0. Kidd.9 % Añadir suero de Coombs 2 gotas Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min Lectura por aglutinación ó hemólisis Interpretación de Anticuerpos: TUBO "A":detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO .Duffy. La selección en diferenciar lo propio de lo no propio no depende de un reconocimiento específico. el subsecuente reconocimiento y la reacción hacia ella. sostenimiento de la homeostasis celular y vigilancia celular.La definición contemporánea del término inmunidad incluye todos aquellos mecanismos que le dan al animal la capacidad de reconocer tanto los materiales extraños a su propio organismo para neutralizarlos. como en los unicelulares. estos mecanismos persistieron y fueron suplementados e implementados por la adición de nuevos componentes tales como la . En la actualidad se consideran que las respuestas inmunológicas sirven a tres funciones: Defensa. Vigilancia Endógena Remoción de células Enfermedad celular Exógena mutantes. Entonces filogenéticamente los elementos no específicos más importantes. el mecanismo de resistencia es la fagocitosis la cual es esencialmente una función nutritiva: y en las formas evolutivas más elevadas involucra también un mecanismo defensivo. Función Naturaleza del Ejemplo Aberraciones estímulo Hiper Hipo Inmunológico Defensa Exógeno Microorganismos Alergia Deficiencia Polen inmune Homeostasis Endógena Remoción de células Enfermedad celular Exógena viejas o dañadas autoinmune: Formación de auto anticuerpos Artritis reumatoidea. A medida que evolucionan a formas más complejas aprenden a reconocer los cuerpos extraños. b) Respuestas inmunológicas no específicas: Se producen siguiendo a una exposición inicial y subsiguiente exposición a una configuración extraña. Las respuestas inmunes pueden ser clasificadas en dos categorías: a) Respuestas inmunológicas específicas: Estas respuestas dependen de la exposición a una partícula o sustancia de configuración extraña. eliminarlos o metabolizarlos sin injuria a sus propios tejidos.En los animales más primitivos. lupus. tres de los cuales son fagocitarias o fagocíticas (monolitos. Con la evolución.PRÁCTICA SOBRE LA FISOLOGÍA DEL APARATO INMUNE FUNDAMENTOS. fagocitosis y respuesta inmunitaria vienen desde la forma más primitiva de vida. En los invertebrados superiores se desarrollan un sistema vascular en el cual la fagocitosis se desarrolla además por medio de células circulantes y en el ser humano por fin hay cinco células circulantes (leucocitos). maligna FILOGENIA DE LA INMUNIDAD NO ESPECÍFICA. polinucleares y eosinófilos). La maduración del sistema inmune en el hombre comienza durante el segundo a tercer mes de la gestación a partir de las células madres pluripotenciales o hemocitoblastos en la médula ósea se generan dos líneas celulares: Hematopoyética y linfopoyética. según el siguiente esquema ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LAS INMUNOGLOBULINAS Ig Función Estructura Cadena pesada Cadena Adicional Concentración Plasmática . peces de rio. Invertebrados Amebas Fagocitosis Vertebrados En lampreas. en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se añaden la Ig D y E. etc. posteriormente en los anfibios apareció la inmunoglobulina G. por ejemplo el complemento. coagulación. en resumen. Entonces. ciclóstomos. pues. Ig M Anfibios Ig M Ig G Mamíferos Ig M Ig G IG A Sistemas de amplificación biológicas Ser humano Ig M Ig G Ig A Ig D Ig E Sistemas de amplificación biológicas ONTOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE EN EL HOMBRE.La primera evidencia de la inmunidad específica apareció en los vertebrados primitivos que presentan un sistema linfoide diseminado (elasmobránquios) que generan inmunoglobulinas M. etc. FILOGENIA DE LA INMUNIDAD ESPECÍFICA. Con la evolución filogenético también aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificación y reforzamiento de la eficienciade la resistencia como el sistema complemento. estos mecanismos antiguos no fueron reemplazados por la evolución de las especies sino que más bien continuaron y fueron reforzados adicionalmente con nuevas respuestas (amplificadoras).inmunidad específica y los sistemas de amplificación de esta inmunidad. turbios. En la presente práctica tiene por objeto determinar la respuesta bursal en personas normales y en pacientes con inmunodeficiencia por desnutrición. neutralización de los antígenos. a través de la determinación cuantitativa de Ig A./ml (LIQUEMINE). anti Ig M.Ig G Fijación del Complemento Monomérica Ig A (secretora) Ig M Ig D Ig E Protección Mucosas – secreciones externas lágrimas.I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA. anti Ig G. IgM. dímero o trímero. frasco por 5 ml. y su medición espectrofotométrica. activación del complemento. Ig G empleando anticuerpos específicos que formen inmunocomplejos insolubles. Buffers Ig A.- . MATRIALES Y REACTIVOS. Espectrofotómetro y microcubetas.. Liberación de histamina por los basófilos (alérgias) y de reaginas (prot inespecíficas: sífilis.05 El rol fisiológico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del huésped es la síntesis de anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infección y esto lo hace por medio de varios mecanismos: opsonización. Solución salina fisiológica 9/1000ml Solución anticoagulante: heparina sódica. con cadena J Gama 1 gama2 Gama 3 gama 4 Alfa 1 Alfa 2: mg/dl 700 . secreción intestinal. 1 sapo grande para punción intracardiaca Equipo de disección completo y estilete para obtener animal espinal. Micropipetas automáticas de 0 á 200 y de 0 a mil microlitos o lambdas. pian) Monómero. uniéndose al antígeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su acción ganándole la entrada a la célula huésped. Tubos de prueba 10x75 mm Cronómetro PROCEDIMIENTO. Ig M. Antisueros: anti Ig A. Suero sanguíneo o plasma heparinizado normal Suero sanguíneo o plasma heparinizado de paciente desnutrido. 500 U. Solución patrón de proteínas de concentración conocida. CS 70 -400 Pentámero con cadena J Monomérica Mu Delta J 40 -260 3 Monomérica Épsilon 0. bronquial Fijación del complemento Reconocimiento de antígeno por las células B. Jering descartabla por 5 ml y aguja de 20x1´´. Ig G.1600 J. antitoxicidad. VALORES DE REFERENCIA NORMALES: 70 – 400 mg/dl DOSAJE DE LA Ig G Suero diluído 1/10 : 40 ul Buffer IgG 900 ul Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego agregar: Antisuero anti Ig G 160 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2). ml DOSAJE DE Ig A Suero diluído 1/10 : 50 ul Buffer IgA 900 ul Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego agregar: Antisuero anti Ig A 80 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2). llevando el aparato a 0 con agua destilada.9. Mesa 5: determinará en el suero de un paciente desnutrido la Ig G. CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS Calcular la diferencia de absorbancia DO2 .Se repartirá el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo: Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A Mesa 2: determinará en un suero normal la IgM Mesa 3.0. llevando el aparato a 0 con agua destilada. Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina deberán ser diluídas al 1/10 antes de empezar a trabajar: Suero problema: ----------------------------.-------------.1 ml Solución salina fisiológica: (9 por mil) -----------------. determinará en un suero normal la Ig G Mesa 4: determinará en la sangre de un sapo la Ig A (punción intracardiaca con anticoagulante). Interpolar el valor de esta diferencia en la curva de calibración para determinar la concentración en mg/100 mlcorrespondiente o multiplicar por el factor de calibración .0. Distribuir las muestras y reactivos según los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina.DO1 correspondiente a cada muestra analizada. VALORES DE REFERENCIA NORMALES: 700 – 1600 mg/dl DOSAJE DE LA Ig M Suero diluído 1/10 : 60 ul Buffer Ig M 900 ul Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego agregar: Antisuero anti Ig M 100 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente . etc.Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2). aminoácidos. dentro de ciertos límites. de mantener una presión de filtración eficiente mediante mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente. NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1 min. La presión oncótica proteica 32 mmHg b. sodio.50 mm Hg Presión Neta de Filtración +10 mmHg El riñón trata.40. y no reabsorbida. y LA FORMULA DE LA DEPURACIÓN SERÁ: C=UxV P . aminoácidos. desnutridos y en el sapo y explicarán las razones de las diferencias encontradas FUNCIÓN GLOMERULAR DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA. creatinina. Llamemos V’ el Vol. La depuración de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en unml de plasma. que solo se filtran por el glomérulo. lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178. potasio. thiosulfato. El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporción que en el plasma sanguíneo exceptuando las proteínas. Es una medida muy aproximada de la función glomerular. Concepto de Clearance: El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke. caps. Ig G e Ig M en las personas normales. La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7. y otros. Si una sustancia es únicamente filtrada por el glomérulo. La presión hidrostática dentro del glomérulo es + 60 mmHg (70% de la presión aórtica) 2. La filtración glomerular es un proceso mecánico que se produce como resultado de un juego de presiones: 1. Se oponen a la filtración: a. sales. recolectado/tiempo de recolección en minutos (cc/min. En 24 horas se filtran 180 litros de líquido por los glomérulos pero se excretan solamente 1 a 1. etc. por el riñón. cloro. su depuración medirá el número de ml que los glomérulos filtran en un minuto.5 a 179 litros en 24 horas. (Vol. No solamente hay reabsorción de agua a nivel tubular sino también de muchas otras sustancias del filtrado glomerular y que son útiles al organismo como glucosa. Minuto de orina. etc. el manitol..)) U a la concertación de una sustancia “x” en orina mg/ml y P a la concentración de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml SI MULTIPLICAMOS U x V´ . Bowman 18 mm Hg . VALORES DE REFERENCIA NORMALES: 40 – 260 mg/dl DISCUSIÓN: Los alumnos compararán los resultados en las distintas mesas en relación a la respuesta bursal encontrada para Ig A. ácido úrico. Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la acción tubular el organismo perdería grandes cantidades de agua. ni secretada por el túbuli. pero no se reabsorben ni secretan por los túbulis renales. llevando el aparato a 0 con agua destilada.5 litros de orina en 24 horas. la palabra clearance significa depuración o limpieza y se entiende por Clearance o Depuración renal de una sustancia al número de centímetros cúbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto). elementos útiles como glucosa. Junto con los productos finales del metabolismo de las proteínas como la urea. La Presión Inters. Es el caso de la Inulina. Equipos. previa desproteinización de la muestra de suero con ácido pícrico directamente proporcional a la concentración de creatinina cuando se mide en 510 mm de Longitud de onda.65 m. Que es el método de Jaffé modificado empleando picrato alcalino en medio taponado con glicina.5 mg/ml. Sol.009 mg/ml entonces P = 0. y se usa como índice de función glomerular.04 ml/min. de 1. EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. Depuración corregida = depuración sin corregir x 1.4).04 ml/min. EL DOSAJE DE CREATININA EN LA SANGRE ES 0. 0.009 mg/ml El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 – 1. Muy cáustico (alcalino): Precaución.4 mMol / Lt Reactivo N° 2: Buffer de Glicina / Na OH 1 mol/Lt (pH = 12.9 mg/dl EN SUERO.73 m2 de ASC ASC 115 mlmin 1.65 m. Reactivo N° 1: Ácido Pícrico 41. Se escoge la CREATININA para medir la filtración glomerular porque el manejo renal de este metabolito es muy parecido al de la Inulina y Manitol. es decir V = 1.73 m2 X= 115 x 1. Es decir 0. DE PESO Y MIDE 1.60 m2 X 1. Se comparará con la absorbancia de un patrón de creatinina de concentración conocida./1. para separar sobrenadante. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg.60 METODO PARA EL DOSAJE DE CREATININA EN SANGRE Y ORINA En esta práctica emplearemos el Método espectrofotométrico colorimétrico de la casa comercial WIENER LAB.Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.60 m2 de acuerdo al Nomograma según la fórmula de Du Bois. La depuración será: C = 1. alcohol yodado y ligadura 09 tubos de ensayo de 13 x 100 mm en cada mesa 01 tubo de ensayo de 12 x 75 mm en cada mesa 06 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100 en cada mesa 03 Pipetas de 5 ml graduadas al 1/10 en cada mesa Frasco con agua destilada 100 ml en cada mesa Pipetas Pasteur de Vidrio (capilares) con chupón jebe.73 = 124 ml/min. Standard de Creatinina: 2 mg/dl Procedimiento . Frascos de boca ancha de 1 litro de capacidad ó beakers de plástico de 1 litro para obtención de muestras de orina. es decir 1.009 Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomérulo han sido liberados de toda su creatinina en 1 minuto.73 m2 ASC (DEPURACIÓN CORREGIDA) 1./1. por eso su Depuración es una medida muy aproximada de la filtración glomerular.04 = 115 ml/min. Y TALLA: 1.0x1.. Materiales y Reactivos 01 Espectrofotómetro y 01 Centrifuga clínica Jeringa descartables de 10 ml con aguja 20 x 1” Algodón. La concentración de creatinina en la orina fue de 100 mg %.73 / ASC = ml/min. le corresponde una ASC. a. la muestra guardada en refrigeración puede durar 4 días. 4. Ambiente.Creatinina Sérica (Crs): mg/dl Crs = Conc StX Abs suero = 2 X Abs suero – Abs Blank = mg/dl Abs St – Abs blank Abs St – Abs Blank b.4) ml 0.. y colocando el espectofotometro en 100% de T osea 0% de Absorbancia.Lecturas: Colocar el Espectrofotómetro en 510 mm de Long.Cálculos.5 Agua Destil. Medir exacto el volumen y tiempo de recolección.Recolectar muestra de orina de 12 ó 24 horas para dosaje de creatinina urinaria.7 ml de suero y añadir 3.5 0.Calcular la Depuración Creatinina Endógena (Corregida por el ASC): Según: Depuración = U x V P X 1.5 0.5 0. c. estándar.5 Mezclar por inversión. a Temp. Min ml/min P = Crs mg/ml Valores Referenciales Depuración de Creatinina endógena: ..4 mMol/l) ml 2 2 2 React Nº 2 (Buffer Glicina alcalino pH 12. 2. Si se recolecta en frasco estéril.. Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank. 3. Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y trasladarlo a otro tubo y marcarlo: Sobrenadante suero (SS).Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm según la siguiente tabla y marcarlos según lo indicado: Tubos Blanco Standard Sobrenad del Orina Dilución Suero (SS) 1/50 Sobrenadante Suero SS ml 3 Sol St.. : 2 mg/dl ml 0.5 ml Reactivo N° 1 (ácido pícrico) Mezclar por inversión y reposo 10 minutos..Creatinina en Orina (CrO): mg/dl Exactamente igual al anterior. Ml 1.DESPROTEINIZACION de la muestra de suero: En un tubo prueba 13 x 100 mm ó 12 x 75: Medir 0.5 Orina Dil 1/100 ml 0.73 m2 ASC m2 Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los cálculos Por ejemplo: U = CrO en mg/ml V = Vol. Onda. sobrenadante del suero (SS) y de la orina diluida.0 0.5 0..5 React Nº 1 (Ac. Centrifugar a 3000 RPM x 5 min. Anotar El mismo día de la recolección de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina sérica. sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica ademas por 100 (factor de dilución de la orina).. 1.Pícrico 41. Reposar 15 min.Primer paso. Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. Depuración de Creatinina Disminuida: Insuficiencia renal glomerular ó Insuficiencia Cardiaca. / año después de los 40 años. Medicamentos nefrotóxicos Mala recolección urinaria .73 m2 ASC Creatinina Sérica Adultos Varones: 0.2 mg / dl Creatinina en Orina: 1.73 m2 ASC (+/.0 a 1. / 1. / 1.8 a 1. Edad avanzada: Disminuye aprox.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg.25) Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min.73 m2 ASC Promedio 85 ml / min.73 m2 ASC Promedio 120 ml / min. / 1. peso Corporal/24 hs) Depuración de Creatinina Aumentada: Gestación. / 1. 1 ml / min. Ejercicio físico. representada por CH2O. de donde tenemos que: CH2O = V – Cosm . (El Plasma tiene 280 a 290 mOsm/Kg. Adaptando el principio fisicoquímico del flujo térmico a contracorriente. pero con electrolitos y que estudiamos con detalle en nuestras clases teóricas. Uosm x V: Es la excreción de solutos por minuto. a la presión osmótica diremos que en el asa de Henle ocurre un fenómeno similar. agua.FUNCIONES DE CONCENTRACIÓN Y DILUCIÓN Fundamento El riñón tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario concentrado y diluyendo la orina. literalmente es agua químicamente pura.Posm: Es la concentración osmolar plasmática. Los valores normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. y se conoce desde hace más de 50 años. CH2O: Es depuración de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto. Cosm. mas un vol. normalmente puede variar desde 280 a 290 mOsm/Kg agua. La depuración basal ó endógena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 % del filtrado glomerular. Uosm: Es la concentración Osmolar urinaria ó concentración de solutos en la Orina u osmolaridad Urinaria. es la concentración de solutos en el plasma. relación Uosm/Posm. la orina consiste de una mezcla de agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuración osmolar. Durante la diuresis de agua pura. TcH2O sometiendo a una persona sana a una dieta hidropónica primero y luego a una sobrecarga acuosa. El trasporte activo de Cloro en el Asa de Henle es también responsable del sostenimiento de esta alta osmolaridad en el interticio medular renal. de agua osmóticamente libre. la diuresis se debe a la inhibición de la hormona antidiurética de la neurohipófisis. agua). Cosm: Depuración Osmolar: Uosm x V / Posm Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo. Representa la tasa a la cual las sustancias osmóticas activas son aclaradas ó depuradas del plasma. de cualquier duración ó magnitud. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos términos: V = Cosm + CH2O. Definiciones previas. Esta práctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentración y dilución de la orina por el riñón a través de los parámetros fisiológicos siguientes: Densidad Urinaria. es agua libre de solutos. lo mismo que a nivel de la Vasa Recta. Generalmente la orina es tres veces más concentrada que el plasma. Durante la diuresis de agua caracterizada por la excreción de gran volumen de orina diluida debido a la gran ingesta de agua. Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar: CH2O = V – Cosm La depuración de agua libre es ese núcleo de agua en la orina en exceso de su depuración osmolar. Se realiza según un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador. agua. Este mecanismo impide que se disipe la gradiente de Osmolaridad llegando a tener así el intersticio medular y papila hasta 1200 mOsm/Kg. es la cantidad de solutos osmóticos activos excretados por minuto. Esta característica fisiológica es una de las más importantes del riñón normal. El riñón reabsorbe agua hasta concentrar el filtrado glomerular unas tres veces más que osmolaridad plasmática. . es agua que el organismo se reinfunde.Tc H2O: Durante la concentración urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por encima de la Osmolaridad Plasmática por sustracción dependiendo de la de agua libre de solutos del filtrado glomerular. En este caso el Vol. es menor que la dep. esto concentra la orina tubular. min. Osmolar. TcH2O = Cosm – V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular. con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. y CH2O. V1 . numerándose todas las muestras emitidas durante casi tres horas. En este momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmática. TcH2O. 8 am. en un mismo frasco hasta las 6 am del día siguiente. de peso corporal. supresión total de líquidos pero con una dieta normal en proteínas. cada una en frascos separados. Dos horas mas tarde.12 11 10 9 8 HIPER TCH20 = Cosm .V1 HIPO Cosm > V1 ISO Cosm 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 CH2O = V1 – Cosm HIPO V1 > Cosm Procedimiento Para esta práctica se seleccionó a una persona a quien el día anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad Plasmática y luego al día siguiente se le sometió a una prueba de hidropenia. para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. Cosm. Uosm. Se recolectaron las muestras emitidas. Para la práctica. Luego empezó a recolectar toda la orina emitida. y Posm se determinarán. Aquí termina el test de Concentración. Inmediatamente se inició la Prueba de Dilución. cada 20 ó 30 minutos. es decir dieta seca. A las 6 de la tarde miccionó (vejiga vacía). para cada muestra. y se descartó esta orina y se anotó la hora exacta. se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. tiempos de recolección. Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las Osmolaridades plasmáticas. los valores de U/P. a partir de estas muestras calcularemos las Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volúmenes urinarios. hasta conseguir en lo posible una disminución del 3% del peso corporal. en el osmómetro. según el protocolo del cuadro adjunto. min (minutos) N° Vol. .Tabla-Protocolo de trabajo para las PRUEBAS de CONCENTRACIÓN Y DILUCIÓN Urinaria Tiempos Tiempo de Acumulat Recolecc. de Orina Mues ml tra Vol. minuto (Abscisa). Minut ml/ min Posm Densi mOsm Dad Kg H2O Urina ria Uosm U/P Cosm Tc CH2O mOsm/ H2O ml/ Kg ml/ min H2O min Prueba De 12 Hs 2 Hs De Inmedia to se hizo: CONCEN TRACIÓN Supres líquidos 720 840 1a 2a Inges ta de 20 ml agua/ Kg Peso 432 60 Y se Conti Nuó Reco leccion 298 ----------- Prueba De DILU CION 30 25 20 22 20 18 15 30 55 75 97 117 135 150 3a 4a 5a 6a 7a 8a 9a 18 200 190 209 140 126 38 295 ------------------- ------ 294 290 A continuación graficar en papel milimetrado: Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades(abscisa) Cosm((Ordenada) vs Vol. y determinar TcH20 y C H2O Interpretar los resultados de cada prueba. hay un incremento de la excreción de ácidos y una conservación de base. el mecanismo respiratorio yel mecanismo renal. Introducción: Bases Fisiológicas: Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los líquidos del organismo: el mecanismo de intercambio i6nico (entre las células y los líquidos). Esta capacidad de excretar cantidades variables de ácido es de una gran importancia fisiológica porque convierte al riñón en el mecanismo de defensa final contra cualquier cambia del pH corporal o de la composición anión-catión. al aumentar la acidez del medio. es ácida y su pH habitual es de 6. disminución del HC03.40.REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO Acidificación y/o alcalinizaci6n urinaria. al mismo tiempo que recobra el HC03. dependiendo de la dieta.5 hasta 8. se excretará fosfato en la forma Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto neto será la perdida de 2 Na+ (base).40. en vista de que realizan la EXCRECION de los llamados ácidos fijos ó propiamente dichos. Por ejemplo las relaciones entre el Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado glomerular donde el pH es 7.8. con lo cual impiden cambios importantes en el pH. .circulan en la sangre en equilibrio con los aniones correspondientes como el HC03. y el pH urinario baja a 5. en la alcalosis.1 mEq/hora). El resultado neto de la producción de una orina ácida es la ganancia de un Na+ y SE RECUPERA EL HCO3.0 hasta 8. Los riñones son los reguladores mas eficientes del equilibrio ácido básico. La magnitud de esta eliminación es variable de acuerdo con las exigencias fisiológicas del momento y se refleja en el pH de la orina que puede variar de 4. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso del metabolismo es de hasta 100 mEq. En resumen. los HIDROGENIONES H+. mientras los H+ se excretan. En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el riñón el fenómeno inverso: Disminuye la excreción tubular de H+.2.La orina de un sujeto sano. el filtrado glomerular tiene un pH de 7..4.0. con una dieta normal mixta.La eliminación del H+ a cambio de un Na+ permite así retener el HC03.0. diarios ( 4. Esta disminución en el pH urinario. se debe a que están siendo eliminados los Hidrogeniones por el riñón. El Riñón se encarga de excretarlos. pero que se convierten en formas no disociadas. Puede así entonces el riñón eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+ extracelular ni perder su bicarbonato en condiciones normales. Cómo se logra excretar una orina ácida ? Se logra por la adición de H+ secretados por las células de los túbulis renales hacia la luz tubular lo cual permite la modificación de algunos ácidos que están disociados en el plasma.. Si la relación bajase hasta 1/99 (mayor predominancia aún del fosfato ácido) el pH llegará hasta 4. Si se baja el pH por la adición de H+ esta relación disminuye hasta 4/100 (predominancia del Fosfato ácido).y tener reserva de HC03para situaciones de emergencia. según las necesidades del organismo.del plasma y los ácidos orgánicos serán eliminados a un pH más alto en equilibrio con más Na+ que se pierden. hay un incremento de la excreción de base y conservación de ácidos y el pH de la orina cambiará correspondientemente y puede variar como les acabo de señalar en muestras de orina random desde pH 4. se reabsorbe menos bicarbonato. pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del mecanismo renal responden a requerimientos específicos: en el caso de la acidosis. Se recupera el NaHCO3. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lotanto proviene de las células del túbuli renal.EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el riñón es la EXCRECION DEL H+ EN LA FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGÉNESIS. se excreta como NH4+. el cual con el NH3 proveniente de la desaminación de aminoácidos ode la glutamina. Sin embargo su excreción no es rápida sino tardía y solo empieza a funcionar después de un lapso prolongado de acidosis . Eliminación constante de H+ sin vaciar el Na+ del LEC. a partir del NH3 de la glutamina o los aminoácidos. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por medio de la excreción del NH4+. AMONIOGÉNESIS: .. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+.En la producción de orina ácida: Resultado neto:Ganancia de un sodio a cambio de excreción de de un H+. En cada una de las muestras de orina se medirá el volumen y el pH. luego se le administra al paciente cloruro amónico a la dosis de 0.) Acidificante El H+ liberado se combina con el Na2HPO4 de la orina tubular: Na2HPO4 + H+ NaH2PO4 Sal más ácida y baja el pH hasta menos de pH 5. durante tres días consecutivos y se va recolectando la orina de 24 horas cada día. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas después de la administración del Cloruro amónico. Luego se le prescribe una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal. Fundamentode la prueba de sobrecarga ácida de Cloruro de amonio para medir la capacidad de acidificación del túbuli urinario: El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la célula. Peso corporal por la vía oral. De preferencia con tostadas y mermelada. NaOH 0. Formol 40 % 50ml. Se dará en cápsulas de gelatina de 0.El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias ácidas: NH3 + H+ NH4 Se conserva sodio por medio de la excreción de NH4. PRUEBA DE ACIDIFICACIÓN URINARIA MODIFICADA. el sodio ingresa en favor de la salida de H+ EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4. . recogiendo la orina durante las 6 horas siguientes.50 gm.1 Normal titulada. Materiales y Reactivos pH Meter para determinación de pH sanguíneo Potenciómetro para determinar pH en soluciones. Sol.4 en la orina. y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. Cinta para determinación universal de pH 06 Cilindros graduados de vidrio o plástico de 500 ml 08 beakers de 50 ml 02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0. El Hígado depura el amonio que llega por la circulación portal y se produce la siguiente reacción que libera H+: 2 NH4+ + CO2 ----------.1 gm / Kg. Después de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de una hora. Acidez de titulación fosfática y acidez amoniacal. durante tres días. Se determinará el pH sanguíneo basal y al final del test. (ClNH4) TEST DE SOBRE CARGA ÁCIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres días) Un día antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulación Basal. (Durante de 6 horas).CO(NH2) 2 + 2 H+ + H2O (La conversión de amoniaco en urea e acidificante. Con la carga administrada el pH urinario deberá descender por debajo de 5.4 En nuestra práctica solamente haremos una prueba de corta duración (2 horas) del siguiente modo: Equipos.1 02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100 03 Buretas para titulación química 03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada Fenolsulfotaleína indicador (PSP) sol alcohólica 1 % o Rojo fenol. Titular con NaOH 0. Titularemos la acidez Fosfática y Amoniacal urinaria con sol. Iniciar la recolección de orina cada 20 min. Determinar el pH sanguíneo al inicio de esta prueba. . entonces si hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH. Cada ml NaOH gastado 0.1N hasta rosado. acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol / litro. Hacer la sumatoria de acidez fosfática + amoniacal. valorada NaOH 0. Corresponde a la acidez del Fosfato ácido.Procedimiento Colocar a una persona de prueba en reposo.1 mEq H+ Luego añadir 0.1 Normal y retitulación de la acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado: Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. valorada NaOH 0. Calcular la Depuración de Hidrogeniones. CÁLCULOS: En la práctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuración de una sustancia.1 Normal y retitulación de la acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado. todos los cálculos también se harán exactamente iguales al caso anterior. Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal. Administraremos luego 400 ml de una solución de Cloruro de amonio al 0. en muestras separadas durante 2 horas. Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fría por kilo de peso corporal así: Colocar a una persona de prueba en reposo. por micción espontánea. Titularemos la acidez Fosfática y Amoniacal urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. (identificarla). Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. en la Alcalosis será la inversa: Vol. por micción espontánea. Evacuar la vejiga por micción espontánea (con deseos de orinar) y será la muestra basal. Anotar gasto. min.. > Dep H+ Para estos cálculos recordar que: D=UxV/P y pH (H+) = -log (H+) = antilog pH -pH = 10 (H+) EXAMEN QUIMICO DE ORINA INVESTIGACIÓN DE ALBÚMINA: Excreción normal: Menos de 75 mg en 24hs. en muestras separadas durante dos horas. CONCLUSIONES: En la condición Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min En la Acidosis como la concentración de H+ urinaria es mucho mayor que la sanguínea tendremos: Dep H+ será > Vol. No detectable por los métodos habituales rutinarios. Iniciar la recolección de orina cada 20 min.. y además se conocemos el pH sanguíneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuración del ión Hidrógeno. min.5% en 15 minutos. Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas. (identificarla). Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas. Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Evacuar la vejiga por micción espontánea (con deseos de orinar) y será la muestra basal. Determinar el pH sanguíneo al inicio de esta prueba. Por métodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria. Para detectar presencia de albúmina se emplea el método del Ácido Sulfosalicílico al 3% así: Filtrar la orina a través de papel de filtro. Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo Añadir 1 ml de ácido sulfosalicílico. Reposar 5 minutos. Si no se produce enturbiamiento no hay albúmina: Negativo Si aparece enturbiamiento indica presencia albúmina. El grado de turbiedad está en relación con la cantidad e albúmina presente. Hacer un control negativo sustituyendo el ácido sulfosalicílico con 1 ml de agua destilada y proceder exactamente igual. Comparar grados de turbidez. Entre los métodos rutinarios cualitativos, el más simple: test de calor y acidificación: Filtrar la orina a través de papel de filtro. En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen ó Baño María hirviente. Un precipitado blanco ó floculante al hervir indica: a) Proteína ó fosfatos. b) Para diferenciar: Fosfatos: si al añadir ácido acético 5% desaparece la turbidez: Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio ácido). Si hay efervescencia: carbonatos presentes. Proteínas: si al añadir ácido acético 5% la turbidez aumenta. INVESTIGACIÓN DE GLUCOSA Reacción de Benedict Cualitativa: Por reducción del cobre el solución alcalina y calor. Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Añadir 0.3 ml orina Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min. Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado. Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas. TEST PARA ÁCIDOS BILIARES Los ácidos biliares reducen la tensión superficial de los líquidos que las contienen: Colocar 3 ml de orina en un tubo 18 x 150 ml. Espolvoréese sobre la superficie peque cantidad de azufre pulverizado finamente (flor de azufre). Si el azufre cae al fondo enseguida, la orina tiene ácidos biliares en cantidad mayor de 0.01 % ó más. El cloroformo, alcohol, trementina, timol dan resultados falsos. INVESTIGACIÓN DE CUERPO CETÓNICOS En tubo ensayo colocar 3 ml orina, añadir 3 gotas ácido acético. Mezclar. Añadir 1 ml de agua oxigenada. Luego, añadir unos 500 mg de nitroprusiato en polvo y agitar suave para disolver. Colocar en zona 1 ml de hidróxido de amonio. Anillo verde en la interfase: positivo a cuerpos cetónicos. Referencias Bibliográficas: Libro: Fisiología Renal, Autores Manuel y Carlos Ramírez Velasco Editorial Escomel. Arequipa. Perú. 1a Ed. 1988. Libro: Fisiología Medica Guyton 1996 PhysiologyandKidneyDiseases, Brow, LondiniunEdCo.2002. First Ed. ROL FISIOLÓGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIÓN DEL ALMIDÓN) Fundamento Fisiológico El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticación que fragmenta las partículas grandes de alimentos y mezcla a éste con las secreciones de las glándulas salivales. En las glándulas salivales los gránulos secretorios (cimógeno) que contienen las enzimas salivales se descargan en los conductos a partir de las células acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de saliva y el pH es ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la secreción activa. La saliva contiene dos enzimas digestivas: la lipasa lingual, secretada por la glándula de la lengua, y la alfa amilasa salival (ptialina) secretada por las glándulas salivales. La saliva también contiene mucinas, que son glucoproteínas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Además contiene IgA, inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria contra bacterias y virus. La alfa amilasa salival ataca al almidón. Sin embargo, el pH óptimo para esta enzima es de 6,7 y su acción es inhibida por el jugo gástrico ácido en el momento del ingreso del alimento al estómago. El activador de la amilasa salival es el cloro; siendo su substrato el almidón hidroliza los enlaces alfa 1 - 4 para producir dextrinas, alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta función hidrolítica la acción catalítica que estudiaremos en la presente práctica. El almidón, polímero de la glucosa da color azul con la solución de yodo. El almidón está constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas. Objetivo Estudiar la acción de la amilasa sobre el almidón y determinar los substratos y productos de la actividad alfa-amilásica salival y el efecto del pH y activador enzimático sobre esta reacción enzimática ó digestión hidrolítica. Procedimiento Digestión del substrato por la alfa-milasa salival: Tubo No. Sol. almidón 1 % Tampón fosfato pH 6,8 HCI 0,3 N CIN a 0,9% ml. ml. ml. ml. 1 2,0 1,0 ---3,0 ---si ---ml. si 2 2,0 1,0 ---2,4 ---si 3 2,0 1,0 ------2,4 si 4 2,0 ---3,4 -----si Agua destil. ml. Baño María 37 °C x 5'(Preincubación,no añadir saliva todavía Después de los 5 minutos,recién añadir: Sol. amilasa salival ( diluída 1/20) Baño María 37°C x 20' 0,6 si 0,6 si 0,6 si Luego se determinarán los substratos remanentes y los productos de degradación intermedia del almidón en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo. A. DETERMINACION DEL SUSTRATO TUBOS N° 5 DIGERIDO DEL TUBO 1:ml DIGERIDO DEL TUBO 2:ml DIGERIDO DEL TUBO 3:ml DIGERIDO DEL TUBO 4:ml HCl 0.05 N : mI Sol. De Lugol: mI 0.5 5 0.5 - 6 0.5 5 0.5 7 0.5 5 0.5 8 0.5 5 0.5 Mezclar, reposar 15': Observar los resultados B. DETERMINACION DEL PRODUCTO TUBOS N° DIGERIDO DEL TUBO l:ml DIGERIDO DEL TUBO 2:ml DIGERIDO DEL TUBO 3:ml DIGERIDO DEL TUBO 4:ml SOLUCION DE BENEDICT: mI SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml Baño hirviente: 100° X 5' Enfriar en agua helada y observar los resultados. Conclusiones: Influencia del pH salival y gástrico en la digestión del almidón. Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival. Verificar la ubicación de los puntos de hidrólisis del almidón por acción de la alfa amilasa salival 9 0.5 2 10 0.5 2 11 0.5 2 12 0.5 2 13 2 0.5 Se recolecta luego J. W. III 15 a 30 min. En estas condiciones la sonda se conecta a una bomba de succión continua eléctrica y el contenido del estómago es aspirado continuamente a presión negativa de 30 a 50 mmHg. ó mejor Pentagastrina: 6 microgramos x Kg. Bajo control fluoroscópico debe insertarse una sonda naso-gástrica de modo que la punta de la sonda se encuentre en la parte más baja del cuerpo del estómago. V 45 a 60 min. Tiempos de recolección Anotar los volúmenes Recolectados cada vez (ml) De cada una de las muestras anteriores medir: Jugo Gástrico (ml) Agregar: Agua Destilada (ml) Indic. En el contexto de la fisiología gástrica. Kay describió un método con el objeto de lograr una estimulación máxima de las células apriétales del estómago. empleando indicador de Fenoltaleína solución alcohólica al 1%. peso. 15 min. es la muestra llamada BASAL. 15 min. Fenoltaleína (gotas) Agitar suavemente Anotar la cantidad gastada de NaOH 0. se considera condición basal aquella en la cual el paciente está en completo ayuno después de haber dormido unas 6 horas tranquilamente. sin estar expuesto a ningún estímulo visual.1 N en la titulación Resultados según Cálculos (expresados en mEq/litro) 15 min. vía subcutánea.G.. Inyectar Antihistamínico y luego Histamina ó Pentagastrina II 0 a 15 min. de peso. Luego debe inyectarse un antihistamínico como Clorotrimetón 20 mg Intramuscular (para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte dosis de Histamina que recibirá luego). Se continúa recolectando las muestras de jugo gástrico durante los lapsos de tiempo de 15 min. IV 30 a 45 min.FUNCIÓN DE LAS CÉLULAS PARIETALES DEL ESTÓMAGO..1 Normal. 10 ml 10 ml II sí 10 ml 10 ml II sí 10 ml 10 ml II sí 10 ml 10 ml II sí 10 ml 10 ml II sí . El Gastroenterólogo A.04 mg x Kg. durante los primeros 30 minutos y se mide el volumen y se conserva esta primera muestra para trabajarla. Fosfato de Histamina a una dosis de 0. Procedimiento Identificación de las Muestras Descripción de los tiempos I Primera Muestra (Basal) 30 min. 15 min. En seguida el paciente se coloca en decúbito lateral izquierdo y escupe toda saliva que tenga durante toda la prueba. y 45 a 60 min. hasta la neutralización. ni auditivo. Se usa como estimulante de la célula parietal. se aspira primero todo el contenido gástrico de la noche anterior y se descarta. ACIDEZ GÁSTRICA TOTAL ESTIMULADA Y DÉBITO ACIDO/HORA. cada uno y que son los siguientes: 0 a 15 min. El flujo Gástrico debe ser chequeado a menudo lo mismo que la succión. Se medirá la acidez de titulación e cada una de las muestras empleando NaOH 0. 30 a 45 min. 15 a 30 min. ni olfativo. .5 Acidez sin Estímulo: 1 a 4 mEq H+ / litro Acidez post estímulo (Kay) ó Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro Débito Ácido Basal/hora: Normal Hombres: 1 a 10.1 N gastados indicarán -----------..1 N que se gaste en la titulación indica – 0. Valores Referenciales Residuo Gástrico Después de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50 ml) pH: 1. Pero en fisiología expresamos la acidez en débito acido Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado.. hasta la aparición de un color rosado muy tenue y persistente. si en los primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gástrico tendremos: En 10 ml jugo gástrico = 024 mEqH+ En los 30 ml obtenidos en los primeros 15 minutos tendremos: X X= 30 x 024 / 10 = 072 mEqH+ en 15 minutos.1000 0.40 ml de NaOH 0... H+ 2.. Esto se llama debito acido..24 mEq. Y es el débito acido de los primeros 15 minutos. La sumatoria de estos 4 valores será por consiguiente el débito acido/ hora o gasto acido de la célula parietal.1 mEq. CALCULOS: Ejemplo: Se gastó 2.. En el ejemplo anterior encontramos 0. 45 y 60 minutos....24…………………..24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gástrico usado.H+/cada litro de jugo gástrico.1 Normal... gota a gota.1 = 0..H+ / lt de Jugo Gástrico 10 En este caso hemos calculado la concentración ácida expresada en mEq.....5 a 3.. color que indica la completa neutralización del ácido del Jugo Gástrico.Luego se titularán cada una de las muestras obtenidas por separado. empleando Solución de NaOH 0.6 mEq/hora Débito Ácido Máximo/hora: Normal Hombres: 12 a 60 mEq/hora Mujeres: 8 a 40 mEq/hora ..10 ml de Jugo Gástrico usado x ... asi continuaremos en la misma forma calculando el débito acido para los 30.. estas son unidades de expresión química en rigor.5 mEq/hora Mujeres: 1 a 5.. agitando suavemente después de la adición de cada gota de NaOH..X mEq.4 x 0.40 ml en la titulación de una de las muestras Cada 1 ml de NaOH 0.24 x 1000 = 24 mEq.H+ 1 0. por ejemplo cada 24 horas.. H+ 2.. 3. 2 Se añade unas gotas de acetilcolina en el bañornaría yse obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. Experimento No. Experimento No. el estómago y los intestinos tienen inervación parasimpática predominante.8. Experimento No. 3. 4.3. Experimento No. 7 Se suspende la oxigenación y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. 5 Se añade unas gotas de pilocarpina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. 3. 3. 8 Se introduce un pedazo de algodón embebido en aceite en el extremo proximal intestinal y se observa su progresión. 3. Se lava la pieza operatorio con suero fisiológico.7.5.1.6. se le sumerge en un baño de solución de Ringer a 40 °C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimógrafo.4. 6 Se añade unas gotas de atropina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. Experimento No. Experimento No. 2. Material Equipo para órganos aislados Conejo Quimógrafo Equipo de disección Solución de Ringer para mamiferos Suero fisiológico Bañomaría a 40 °C Balón de oxígeno Algodón embebido en aceite Acetilcolina Pilocarpina Adrenalina Atropina Tesmostato 3. 3. 3 Se añade unas gotas de pilocarpina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. Método 3. 3. 1 Se sacrifica al animal y se realiza una laparotomía para resecar una segmento de intestino delgado de unos 20 centímetros. Discusión . 4 Se añade unas gotas de adrenalina en el bañomaría y se obtiene un nuevo registro en el quimógrafo. Se mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante. La acetilcolinaes el neurotransmisor de este sistema y actúa como un agonista de la motilidad intestinal.MOTILIDAD INTESTINAL 1. Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1. Introducción El esófago.2. Se marca el extremo proximal. Experimento No. . Experimento No. las neuronas que pasan en dirección anterógrada activan a las neuronas secretoras de NO. Esta onda de contracción se mueve en dirección oral-caudal para impulsar hacia adelante los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm.. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gástricas y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo eléctrico basal (REB)de una frecuencia de 3/min. que son células mesenquimatosas estrelladas similares al músculo liso y actúan como marcapasos. cuando pasa por el antro. Las neuronas colinérgicas que pasan en dirección retrógrada en este plexo mientérico activan a las neuronas liberadoras de la sustancia P.-La inervación intrínseca del estómago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientérico de Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal. CCK. y una velocidad de 1 cm. Neuropéptido Y. El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo mientérico. ATP. vía plexo celíaco. Este REB se inicia en las células intersticiales de Cajal. las células intestinales endocrinas y los vasos sanguíneos de la submucosa y además está involucrado sobre todo en el control de la secreción intestinal. Existe además un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estómago dentro de la capa muscular longitudinal. noradrenalina.El REB por sí solo rara vez produce contracción muscular. El REB del músculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y . y aumenta hasta 3-4 cm./seg. en cambio el plexo submucoso inerva el epitelio glandular. El plexo mientérico inerva las capas de músculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor. Gaba. Oxido nítrico. pero contrae los esfínteres. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las . Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la vía gastrointestinal desde el esófago hasta el recto. etc. Esta elongación inicia una onda de contracción circular detrás del estímulo y una de relajación en el frente de éste. la peristalsis del antro influencia la peristalsis del bulbo duodenal. así como de acetilcolina y dan lugar a la contracción del músculo liso. vía del Nervio Vago. VIP. Introducción La actividad motora del estómago está gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervación ó redes de fibras nerviosas: una intrínseca a la vía gastrointestinal y otra extrínseca. a. su presencia es independiente de la inervación extrínseca. El sistema nervioso entérico se conecta con el SNC mediante fibras simpáticas y parasimpáticas. Los neurotransmisores en el sistema nervioso entérico incluyen la acetilcolina. Y ATP para producir la relajación que precede al estímulo. /seg. La inervación simpática inhibe la motilidad lisa. estas células de Cajal envían múltiples prolongaciones hacia el músculo liso intestinal. además demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y adrenalina sobre las funciones de contracción y relajación de la musculatura lisa gastrointestinal. endotelina 2.La inervación extrínseca es autonómica dual y proviene del Sistema Nervioso Autónomo: la Simpática de actividad noradrenérgica inhibidora. . y la Parasimpática de actividad colinérgica excitatoria. VIP. serotonina. pero es capaz de funcionar de manera autónoma sin estas conexiones. SustanciaP. b. Aunque la actividad peristáltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autónoma del intestino./seg. CO y numerosos péptidos. Como este sistema es continuo entre el estómago y el duodeno.MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL Objetivo El objeto de esta práctica es estudiar los movimientos peristálticos rítmicos del aparato gastrointestinal y el control que el Sistema Nervioso Autonómico tanto Simpático como Parasimpático ejercen sobre la motilidad gástrica e intestinal. como lo hacen a través de toda la vía intestinal. lisa pero relaja los esfínteres.45 mV. pero los potenciales de espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la tensión (contracción) muscular. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrínseco. y la parasimpática estimula la contracción de la fibra m. Al mismo tiempo. cuando pasa por el cuerpo del estómago. . equipos.. píloro e intestinos. ciego 16/min.El alumno realizará la preparación de sapo espinal según lo aprendido para producir el shock espinal en el sapo (Ver práctica de reflejos en animal espinal) y realizará la hemostasia con algodón por compresión. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristálticos espontáneos del estómago e intestinos. colon. En el estómago la frecuencia del REB es de 4/min.. anotar y lavar con Ringer e. Acetilcolina 1% Sol. Sustancia P. algodón 04 jeringas descartables de 3 ml 01 Aguja descartable de 18 G x 1 ½ 01 Aguja descart. Anote estas observaciones basales . c. Procedimiento l.Adrenalina: observar visualmente la respuesta.-Para cada mesa de trabajos prácticos: Reactivos: Materiales: 01 sapo vivo Tabla de corcho para soporte y fijación anfibio Alfileres para sujeción extremidades 01 par guantes descantables Equipo de disección quirúrgico Estilete para sección medular y tijera. 5. Conclusiones y Comentario . Graduar las observaciones visuales de relajación o contracción con cruces. Ringer.repolarizaciones a la salida del K. sin embargo sus alteraciones pueden producir enfermedades del tránsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras). 3. comparando con los movimientos peristálticos espontáneos del inicio del experimento.. ad-hoc Solución de Ringer para anfibio fresca a 30 °C Col. largo N° 50 para las ligaduras Cánula de vidrio 2mm diám. enterogastrona. e siguiente: a. 2. b. en el duodeno 12/min.Acetilcolina: observar visualmente la respuesta. Otros grupos: Motilina. Si hacemos una vagotomía el peristaltismo estomacal de hace irregular ó a veces caótico. algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas gastrointestinales. d. doblada en 90° 3 hilos blancos de 15 cm. animales de experimentación y reactivos. aunque sus efectos fisiológicos son discretos. Azul de metileno Sol. Serotonina.. Las contracciones se producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si estuviesen ausentes estimularlos mecánicamente.. nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta. 4.5 mg / 1ml ampolla parasimpáticomimétrico.. anotar y lavar con Ringer c. y entre algunas ellas tenemos: Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK (ó CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina) Familia de la Secretinas: GIP. Secretina.. Muchos polipéptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo eléctrico basal por ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensión (contracción de la F m lisa) en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensión. anotar y lavar con Ringer d. VIP.. 9/min.. Por lo tanto el rol fisiológico del REB es coordinar la actividad peristáltica y otras actividades motoras gastrointestinales. Atropina 1% Prostigmine (Neostigmina): 0.Con un algodón mojado en Ringer-Batracio a 30° mantener en todo momento la preparación bien húmeda con instilaciones abundantes de la sol.Al final. Adrenalina 1% Sol. Se agrupan en familias..Disección: Sujetar luego el animal en posición decúbito dorsal en la tabla de fijación con los alfileres y realizar un corte en toda la línea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.Fisostigmina: observar visualmente la respuesta.Atropina: observar visualmente la respuesta.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estómago cardias. estómago.Aplicar sobre el estómago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en el orden: a. anotar y lavar con Ringer b.. La motilidad gastrointestinal y la secreción es regulada también por polipéptidos biológicamente activos que son segregados por las células nerviosas y las células glandulares de la mucosa. Materiales. anotar y lavar con Ringer. En humanos. Material Ratones Jaulas Jaulas ó cámaras metabó1icas Cal sodada Metimazol Levotiroxina Termómetro Plastilina Método Experimento N° 1 Se coloca en tres jaulas metabó1icas a un ratón eutiroideo. hipertiroideo e hipotiroideo. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxígeno. de la misma edad y similar peso. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea grasas para cubrir las necesidades metabólicas. A esta última condición se le denomina METABOLISMO BASAL. temperatura inferior a la normal. Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal. pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los movimientos bruscos. Debido a que los mecanismos de disipación de calor están sobrecargados. EI aumento odisminución del metabolismo basal a partir de la determinación del consumo de oxígeno se empleó como un método diagnóstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. Se espera cinco minutos para que se equilibre la temperatura dentro de la jaula y se registra. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares. Se recomienda que los animales reciban luz. el consumo de oxígeno por los tejidos y la producción de calor por el organismo. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia cardiaca y la presión arterial sistólica. EI sujeto hipotiroideo presenta síntomas opuestos: metabolismo bajo. Los ratones serán pesados todos los días. . depósito de grasa y reacciones lentas. En la presente práctica se comparará los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con ratones eutiroideos ( normales). del 30 a 50% de lo normal. los sujetos hipertiroideos toleran muy mal los ambientes cálidos. ya que esta permite que se mantengan quietos. Este produce pérdida de peso y aumento de la temperatura corporal. EI ratón hipertiroideo recibe diariamente 15 ug.EFECTOS DE LA HORMONA TIROIDE EN RATONES Introducción EI trabajo biológico tiene como fuente de energía a los enlaces intramoleculares y puede ser medido en condiciones de actividad o reposo. Diez a quince días antes del experimento se toma ratones machos adultos jóvenes. Se coloca un termómetro dentro de cada jaula metabólica. que se rotulan eutiroideo. que puede ser medido directamente por el método calorimétrico oindirectamente por el consumo de oxígeno.25 g de metimazol. Las jaulas o cámaras metabó1icas deben contener cal sodada. Se los coloca en jaulas separadas. D levotiroxina. uno hipertiroideo y uno hipotiroideo. En los sujetos hipertiroideos con sintomatología definida el metabolismo basal está incrementado en 40 a 60% y puede superar más del 100%. Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa. extirpación de la glándula tiroidea disminuye el consumo de oxígeno a cifras inferiores. EI ratónhipotiroideo recibe diariamente 1. 92 5.75 0.5 11.85 0.05 Animal Hombre Conejo Caballo Ratón Constante de von Muralt 12.69 4.74 4.80 4. PH2O= presión de vapor de agua Ts= temperatura del aparto EI valor cal6rico del oxigeno varia según el cociente respiratorio.2 8.8 cal/l x L/h Dado que el número de calorías es proporcional al peso y a la superficie corporal. entonces: S=K x W2/3 o S = K x logW X 2/3 Donde: S = superficie corporal K =constante de von Muralt Equivalentes calóricos a diferentes Cocientes respiratorios (R) R no proteico 0.80 0.8 Kcal/l. Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de acuerdo a la siguiente fórmula: o Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb .70 0.4 EI resultado esta expresado en centímetros cuadrados y debe convertirse a metro cuadrados: .8 y el equivalente cal6ricodel Oxígeno es 4.Se coloca una película de espuma de jabón al final de la pipeta y se observara como.86 4. A continuación se calcula en consumo de oxígeno por minuto del animal y se convierte litros por hora. Con un cronómetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los segundos en fracción centesimal.3 11.PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)] Donde: Vol = L/h Pb= presión barométrica. EI CO2 producido será absorbido por la cal sodada. por 1o que el número de calorías por hora será: Cal/h = 4.90 1. Con una dieta promedio el cociente respiratorio es 0. la película de jabón va moviendo a lo largo de la pipeta.00 Equivalente calórico en cal/L 4. a que medida que el animal va consumiendo el oxígeno. 825 kcal ) 1 L de O2 0.867)= 0. razonando así: 1L de 02 …………………………. en condiciones ATPS El ratón consume 1. en condiciones STPD? a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calórico del O 2 es de 4. enml/h .078 L de O2 equivale a…………………x Kcal O sea: 3) x Kcal c) 0. 4) ¿Cuántas Kcal se habrán producido cuando el ratón en su metabolismo consumió 0.367 kcal / h Pero para poder comparar un indivíduo con otro debemos referir este resultado al área de superficie corporal (ASC). b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratón.5 ml de oxígeno en 1 min El ratón consumirá x ml de oxígeno en 60 min Consumo de O2 en 1 hora = x ml O2 /h (1.078 L de O2 / h (4.09 L/h b) Encontrar el factor de conversión: Si la presión barométrica fue de 754 mm de Hg y la temperatura fue de 37ºC encontramos en la tabla que el factor de conversión es 0.867.equivale a 4.09 L/h) (0.m2= cm2/10000 EI metabolismo es igual: Metabolismo =(cal/h) / S en m2 o Metabolismo =cal/m2/h Consideremos un ejemplo práctico: MEDICIÓN DE LAS Kcal PRODUCIDAS EN UN RATÓN EN SU METABOLISMO Peso del ratón: 28 g 1) Consumo de O2 en ml/min Si el ratón en 40 seg consumió 1ml de O 2 en 60 seg cosumirá x ml de O 2 xml O2 2) (60 seg ) (1 ml de O2 ) 1.5 ml de O2 ) (60 min) 1 min 90 ml de O2 / h en condiciones ATPS Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD a) 90 ml/h = 0.835 Kcal 0. c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversión tendremos: (0.078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD.078 L/ de oxígeno.5 ml de O2 / min 40 seg Consumo de O2.825 Kcal/L de oxígeno. . 4(9.01 m2 5) ¿Cuántas Kcal por m2/h produce nuestro ratón? Si el animalito produce 0.000 iv) 0.376 kcal/h/0.376 kcal Entonces producirá x Kcal X Kcal/m2/h= por por 0.01 m 2 como ASC en m2 Entonces nuestro ratón produce 0.i) ASC = Calculo del ASC: peso del ratón de 28g de peso 11.11cm 2 iii) Convertir los cm2 a m2: 1 m2 tiene 100 cm(100 cm)= 10.4 (3 784 ) 11.00 m 2 (0.4 ii) Aplicando la fórmula en nuestro ratón: ASC 11. Profesor Enrique Avila Zamora Lima 13 de noviembre del 2010 .000 cm2 Luego nuestro ratón tiene como ASC: 105 cm 2 10.22) 105.4(3 28 2 ) 11.376 Kcal ) (1 m 2 ) 37.4 (28 2 / 3 ) 11.01 m 2 1.01 m N 2 ATPS: Ambient Temperature Pressure saturated (con vapor de agua) STPD: standard temperatura and pressure dry El consume de Oxígeno y CO2 producido son estandarizados a la temperatura standard (0ºC) a la presión barométrica a nivel del mar (760 mm de Hg) y a condición de gas seco.4( peso 2 / 3 ) según Mulralt la K=11.6 Kcal / mm m 2 / h (RESPUESTA) 0. Luego numerosas células del citotrofoblasto se convertirán en sincitio trofoblasto y éste en el Corion Liso y otras corion frondoso o velocidades . es el Corion velloso.. antes de entrar a la Fisiología de la hormona hCGH: Son 4 figuras de la Embriología : Fig N° 1 Fig N° 2 FIG N° 2 . Sigue la multiplic celular hasta MORULA. Así la Placenta tendrá dos partes Fetal (Corion ) y Materna (mucosa uterina). Luego viene la IMPLANTACION del blastocisto en mucosa uterina a los 6 días de la fecundación. 16 células al 4º día .GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA CORION PLACENTARIO Embriol y Estructura Liso y Frondoso (Vellosidades) DIBUJO PRACTICA hCGH crv 2013: Fases : Fecundación Blastómero de dos células a las 24 hs. Veamos pues las figuras para mejor repasar la embriología del CORION . Luego Blastociste y Blastocele. luego 4 células a las 6 hs. Figura N°3 . 4 . Relaxina. Somatotrofina o Lactógeno placentario humano (HPL) Fig. hCG .Fig N° 4 La Gonadotrofina aperece precozmente y desde ya funciona: El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA. ( 0 3. Reactivos para análisis de glucosa en orina: Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17. Estudiaremos la Diabetes de Tipo I por medio de la destrucción experimental de las células beta del páncreas por medio de la administración intraperitoneal de una sustancia tóxica Alloxan en la rata . Anhidra disuelta en 300 ml de agua más zumo de tres limones. Hacer una determinación de glicemia en ayunas y después administrar una solución de 75 gr de glucosa. Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. la creatinina.6 mmol/L. Insulina Dependiente (tipo 1) e Insulina No Dependiente (tipo 2). Pipetas. c1oroformo ó aldehídos.3 g Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173. Glucosa 75 gr. La solución de Benedict no es reducida por el ácido úrico.Construir el gráfico correspondiente.0 ml Peso previo: Colocar el chip del glucómetro. el Phlorizin (Floricina) que es un glucósido que provoca glucosuria en el mamífero . Diferenciaremos la glucosuria diabética de la glucosuria renal y para ello emplearemos además. Balanza. Simultánea buscar presencia de glucosa en orina. Tubos de prueba.. Glucómetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.p. La floricina es un veneno enzimático que disminuye la cantidad de energía disponible para el transporte activo de la glucosa desde la .TOLERANCIA A LA GLUCOSA Introducción La glicemia en condiciones basales. varía entre 70 y 110 mg/dl. Tallímetro.s. EXPERIMENTO N°2: Test de Benedict EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeñas como 0. Matraz de 1000 ml. Método Experimento N° 1 Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas. 1 fiola de 100 ml. Colocar la tira reactiva en el glucómetro para su reconocimiento.15 a 0.0 g Carbonato de sodio (cristalizado) 200. c. 1000.2 por ciento de glucosa.0 g Agua destilada.8 a 5. en esta práctica otra sustancia tóxica. Encender y ver el número de cinta reactiva que reconoce para su uso. Material Sujeto de prueba en ayunas. DIABETES EXPERIMENTAL ALLOXANTICA Introducción En la práctica la Diabetes Mellitus se presenta en dos modalidades. )En la diabetes mellitus se presenta elevación de la glicemia en ayunas En la práctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de Tolerancia a la glucosa. es la Diabetes experimental. Administrar vía intraperitoneal: . por kilogramo de peso corporal. 3 Jaulas metabólicas.73 m2 para los hombres y 303 mg/min/1. A la rata diabética administrar Insulina intraperitoneal a la dosis de 1 U! por cada 100 gramos de peso. De peso. Determinar la glicemia basal en las tres ratas previamente pesadas (la muestra de sangre se obtiene de la cola a través de un corte en el extremo). esto demuestra que la floricina disminuye la reabsorción tubular de glucosa y puede llegar a producir un bloqueo completo de la reabsorción tubular de la glucosa y así se explica presencia de glucosuria renal por floricina. 3 Animales de experimentación: ratas de 200 a 300 gr. 1 tijera. La administración del tóxico floricina produce aclaramiento de la glucosa y esta tasa de aclaramiento de la glucosa va aumentando hasta igualar a la inulina. En la rata B hacer control cada 5 minutos hasta que se haga diabética. Sabemos que los estudios con micropunción han demostrado que la glucosa es reabsorbida completamente en el tubo proximal y su depuración es cero. 1 glucómetro con cintas reactivas. (que es una afección tubular en la cual aparece glucosa en la orina con niveles normales de glucosa en la sangre). . bien hidratadas en ayunas.. y es cuando la carga de glucosa filtrada por los glomérulos rebasa la capacidad máxima de reabsorción de los túbulis que aparece glucosa en la orina.luz del túbuli proximal al interior de la célula tubular y desde ésta a la sangre y disminuye la reabsorción tubular de glucosa. Alloxan en solución 4% (4000 mg en 100 ml de suero fisiológico). Materiales y Reactivos y Animales de experimentación. El valor medio de la TmG es de 375 mg/min/1. y luego cada 20 minutos. B. es decir.5 ml de Suero fisiológico. intoxica al túbulí renal produciendo glucosuria renal. En la Diabetes Mellitus existe un nivel elevado previo de glucosa en la sangre antes de que aparezca glucosuria. par kilogramo de peso corporal. Discusión . 2 tubos de prueba. y C .A la rata C: se administra vía intraperitoneal Phorizin en solución al 4% a la dosis de 200 mg.A la rata A (control) se administra vía intraperitoneal 1. 3 Jeringas de insulina 3 Jeringa con aguja de 5 ml.73 m2 para las mujeres. En la Diabetes Mellitus el orígen de la glucosuria es diferente siendo el mecanismo primario la hiperglicemia y cuando la glucosa en el plasma va incrementando hasta llegar a un nivel en que las células tubulares proximales alcanzan su máxima capacidad de reabsorción de la glucosa.A la rata B: se administra vía intraperitoneal Alloxanen solución al 4% a la dosis de 200 mg. Insulina cristalina Phlorizin ( Floricina ) en solución al 4% en solución salina. Reactivos de Benedict Procedimiento Identificar tres ratas A. .