Guia Para Elaboracion de Protocolos de Investigacion IPN

Edmundo Resenos DÍAZGuía para la elaboración de protocolos de investigación Instituto Politécnico Nacional m é x i c o INTRODUCCIÓN MI AÑO SABÁTICO 1993-1994 lo gocé como profesor visitante en el Departamento de Contaduría y Finanzas de la Universidad de las Américas-Puebla. Una de las preocupaciones del Departamento es iniciar las actividades de investigación. Tal vez, es difícil explicar por qué no han iniciado esta actividad. Una de las explicaciones que encuentro es la tradición. La escuela se constituyó para satisfacer la demanda de estos profesionales en la zona de influencia de la Universidad, al menos así lo infiero de diversas conversaciones con los colegas. Desde luego, no era mi propósito averiguar estas razones, ni lo es ahora que inicio este tema. Considero que éstas no afectan la intención de elaborar esta guía, ni su posible uso. Pero sí explica el motivo de hacerla. Se pretende que esta guía sea útil para toda persona que desea hacer investigación formal. El protocolo consiste en un formulario que elabora una institución para sistematizar la presentación de los proyectos de investigación que recibe para su estudio, análisis y dictamen. En general, el formulario se elabora para aquellos proyectos que concursan por apoyos financieros. El proyecto debe convencer a comités, comisiones o jurados, de que el alcance o el resultado de la investigación puede llegar a constituir una apor-ración a la ciencia, a la tecnología, o a ambas. En su mayoría los proyectos de investigación proporcionan en su mismo 7 INTRODUCCIÓN informe datos, entre otros, acerca de qué tipo de proyecto es, qué problema se aborda, la teoría en la que se sustenta, la metodología que se seguirá, los recursos que se requieren para su realización, así como la mención de los casos donde se presente de los recursos con los que ya se cuenta. La experiencia ha mostrado que cada investigador proporciona esta información de manera diferente. Algunas de éstas se hacen evidentes en la secuencia del informe; otras por la omisión de información y algunas por el exceso de ésta. Esto dificulta tanto la evaluación de los proyectos como los criterios para seleccionarlos y apoyarlos. Tal problemática llevó tanto a las instituciones como a los organismos encargados del apoyo a las actividades de investigación a diseñar formularios que les permitan sistematizar la información que se requiere, a fin de facilitar el seguimiento. Estos formularios se conocen como "protocolos". La guía que se propone es de orientación general. Está enfocada a proyectos de investigación relativamente complejos y para personas que se inician en estas actividades. Lo que implica que se reconoce que los investigadores experimentados ya no requieren guías, pues ellos mismos son una guía para los iniciados; asimismo se reconoce que en la práctica actual no existen guías para proyectos complejos o extremadamente complejos, ya que éstos son elaborados por los propios investigadores experimentados. En virtud de que la fecha de culminación de mi estancia académica está próxima, se tomó la decisión de elaborar la guía con base en la experiencia personal, sin acudir a la Se pretende que sea una guía práctica y de fácil utilización. que es muy amplia y numerosa. para las adecuaciones pertinentes a su caso particular. . al usuario de ésta se le recomienda consultarla y estudiarla.INTRODUCCIÓN 9 bibliografía existente. Por lo tanto. No estoy seguro de las fechas o épocas que estudiosos de la historia y evolución de la investigación dan como nacimiento de esta actividad humana. investigación es la actividad humana que se realiza para conocer la realidad (creación del conocimiento. lógica. Hoy día quien decida hacer investigación deberá incrementar sus estudios sobre ciencia. entre otros. filosofía de la ciencia y estadística. y en particular la ciencia y la actividad sobre la cual va a investigar. tecnología y desarrollo. 11 .JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN La actividad de +}´´investigación pone de manifiesto el uso de la inteligencia humana como uno de los elementos diferenciadores de otros seres vivos. la faz de la tierra para satisfacer sus necesidades. y concretamente dentro del reino animal. pasar un periodo de entrenamiento al lado de un investigador con algún grado de experiencia. y lo que a continuación voy a decir puede ser muy cuestionable. En términos sencillos. Además. No entraremos ahora en la cuestión de si es para bien o para mal. El hombre ha sido capaz de transformar el medio ambiente. Simplemente lo hemos hecho. Sin embargo. hemos sido capaces de. método de investigación. lograr descubrimientos) y para usar ese conocimiento en el manejo de la realidad o en la creación de nuevas realidades (modificaciones a lo existente e invenciones) . Por lo mismo. No es posible asegurar que haya sido exactamente de esta manera. pero lo útil es que el proceso de adquirir el conocimiento y aplicarlo para satisfacer mejor nuestras necesidades y tener mayor capacidad de influencia en el medio ambiente. complejo y riguroso. también puede ayudar a desmitificar y clarificar algunas concepciones de la investigación: Tal vez. con los conocimientos científicos y los desarrollos tecnológicos actuales. y entre cada paso pasaron muchas cosas y muchos años. Pero no se queda ahí. es probable que la observación de la unidad total: brazo. Todo ello. mano y piedra golpeando. el "background".12 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN puede ser sencillo. útil e ilustrativo para las pretensiones de esta guía. cuando observa y concluye que golpea más fuerte con el puño cerrado que con la mano abierta (observación. Además. lo haya conducido a amarrar una piedra a un palo y crear así la primera extensión del hombre. prueba. Por ejemplo. es algo que se reproduce continuamente y ahora mucho más sofisticado. en esa secuencia y tan rápido. y guardando las debidas proporciones. muchos inventos son ya obras comunes. toda investigación está basada en los conocimientos y tecnologías existentes. tanto de dominio común como del científico y tecnológico. Muchos conocimientos científicos ya son conocimiento común. comprobación. toda in- . la investigación nace cuando el hombre primitivo logra sus primeros conocimientos. pues posiblemente fue un leño primero. constituyen el acervo. conclusión en un conocimiento). para la investigación que cada vez se inicia. Más tarde descubre que con una piedra en su mano golpea aún más fuerte. Hoy día. Lo mismo ha sucedido con los desarrollos tecnológicos. también se realizarla el desarrollo tecnológico que permitiera y apoyara la investigación científica. sea científica. Esta contribución o aportación no necesariamente ha de ser grandiosa o espectacular. paralelo a los desarrollos tecnológicos de la in- . pero todo este trabajo científico va conformando. Muchas de ellas con aportaciones significativas. o a ambos a la vez. y cuánto desarrollo tecnológico gradual. muchas veces imperceptible. imagínese cuánto trabajo de investigación científica se realizó antes de llegar a conocer la estructura del ADN. se llevó a cabo sobre el carburador de los automóviles. otras con contribuciones modestas algunas de ellas casi imperceptibles y otras que fueron juzgadas como fracasos.JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN vestigación expresará claramente y con la mayor precisión posible cuál es su contribución al conocimiento o a la tecnología. por ejemplo los microscopios e instrumentos más potentes y precisos para su observación y manipulación. antes de llegar al "full injection". Asimismo. Esto es lo que justifica la investigación. de la revolución. Como explica Thomas Khun en su libro en el que hace referencia a las revoluciones científicas. desarrollando y cultivando el conocimiento hasta Ilegal al momento de la ruptura. Por ejemplo. entre una ruptura del conocimiento y otra siempre ha existido una gran cantidad de investigación. tecnológica o bien una combinación de ambas: la contribución la aportación que se desea lograr. De manera paralela al desarrollo científico del conocimiento de la genética. año tras año. cómo se entreteje la complicadísima red de la investigación y de sus resultados. Lo anterior también nos permite percatarnos de que casi es imposible pensar que sobre tal o cual tema no hay nada escrito y que se parte de cero. los resultados de cualquier investigación abren nuevas fuentes de investigación.14 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN yección de gasolinas a los motores de autos que incrementaban los conocimientos de la combustión interna de los motores y del comportamiento de ciertos elementos de los combustibles en diferentes condiciones de trabajo. Estos ejemplos nos pueden ayudar a visualizar. Pero también resulta difícil imaginar que en la actualidad se agotan los temas de investigación. A cada momento. se estaban desarrollando maquinarias. instrumentos y procesos nuevos para fabricar estos nuevos motores. . y además lo importante que ésta es para la vida actual y futura del hombre. DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓN CONSISTE EN DEFINIR lo que se va a investigar. La relación o relaciones que tiene un elemento con otros elementos dentro de un fenómeno. 3. Su enunciado se hace de la manera más concreta que sea posible. las relaciones que guardan. tratándose de investigación científica o básica se observan algunos lineamientos. las estructuras que conforman según su jerarquización y clasificación y. Cuando existen varias relaciones. de qué tipo son cada una de ellas. La existencia de un elemento en el fenómeno que se estudia. 2. criterios con los cuales se pueden jerarquizar o clasificar los elementos y las relaciones que establecen. en la mayoría de los casos conviene iniciar su estudio una por una y después todas a la vez. las relaciones o funciones entre ellos. O bien. Una investigación de estas caractetís15 . sin que éstos constituyan una limitación a las posibilidades de la definición de temas. simplemente se anuncian como una orientación y pueden ser los siguientes: 1. realizar un estudio genérico de todas a la vez y después una por una. De manera general. sin apartarse del objetivo de transmitir con precisión la idea de lo que se pretende aportar. Determinar cuáles son los elementos que integran un fenómeno particular. c) (Del 4 y 6) Las investigaciones de Likert aporran una clasificación del liderazgo y una escala para su evaluación y clasificación. . organización. Como se puede apreciar. Descubrir criterios de clasificaciones.■ grada por cinco principales funciones (determinación de elementos): planeación. 6. d)(Del 5) Uno de los hallazgos de los estudios de-Hawthorne que dirigió Elton Mayo.16 DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓN ticas es conveniente planearla en varias investigaciones sucesivas o complementarias. contar con un esque* Las cursivas son del autor para fines explicativos. Proposición de parámetros de medición. 4. tipificaciones. b) (Del 3) Fayol encontró que la administración está inte. Ejemplos: a) (Del 1 y 2) Taylor descubre y demuestra que la división del trabajo* (elemento de la administración) incrementa (relación casual) la productividad'(elemento de la administración) . elementos. funciones. caracterizaciones de fenómenos. dirección. componentes. 5. relaciones. coordinación y control. no hay investigaciones totalmente puras de cada tipo. sin embargo. fue el de la estructura de los grupos informales dentro de las empresas. Descripción y explicación de estructuras. al menos de los más usuales. no un propósito de la investigación. de que existe la duda fundamentada de que estamos equivocados. es decir. no es así. lo que va se sabe. o el grado de importancia. Lo que es o no importante. y que lo que todo mundo acepta como algo conocido. permite iniciar la búsqueda del tema que se desea investigar y si ya se tiene experiencia en los más comunes se puede incursionar en esquemas más particulares. lo que ya es conocimiento común. la "importancia" es un resultado natural de la investigación. No se investiga lo obvio.DEFINICIÓN DEL TEMA DE INVESTIGACIÓN 17 ma. Tampoco se investiga la importancia. . el que sea. generalmente se determina en las investigaciones sobre las estructuras. a menos que se tenga una teoría suficientemente sustentada en investigaciones que plantean una duda razonable acerca de lo considerado obvio. ESTADO DEL ARTE EL ESTADO DEL ARTE o marco teórico {background para los estadounidenses) es el acervo de conocimientos y experiencia que se tiene sobre el ámbito de estudio donde se ubica la investigación a realizar. Consiste en describir los antecedentes teóricos, el trabajo de investigación, los estudios o ensayos que se han realizado y que permiten fundamentar, justificar y buscar la investigación propuesta. Esto implica que se conoce el campo del conocimiento relativo a la investigación. Asimismo que se cuenta con una bibliografía que ha sido estudiada, lo que demuestra un cierto dominio sobre ese campo del conocimiento, y se hace evidente cuando se redacta. Es decir, el estado del arte o marco teórico constituye una investigación bibliográfica. Entre los requisitos que debe cumplir toda investigación está el de que sea verificable y replicable. Estos también son aplicables a la investigación bibliográfica. Verificable significa que pueda comprobarse lo que se afirma en forma oral o escrita. Por replicable se entiende que otro investigador esté en posibilidad de realizar la misma investigación con las mismas condiciones. Para cumplir lo anterior, durante el discurso científico se debe hacer evidente el uso de la bibliografía que se utilizó haciéndola figurar en las notas de pie de página. No son convenientes ni recomendables frases como: "muchos estudiosos dicen...", "se ha establecido que ...", "algunos 19 20 ESTADO DEL ARTE tratadistas han concluido ...", si nunca se indica quienes son los estudiosos, quién o quiénes han establecido o quiénes son los tratadistas, y se pretende llenar este hueco en los discursos relacionando la bibliografía al final del documento. Lo recomendable y la práctica más generalizada universal-mente es que se indique quién o quiénes dicen, establecen o concluyen, mencionando su primer apellido y el año de la publicación, cuando menos. Algunos más rigurosos indican la página o páginas. Por ejemplo: "Apoyados en el modelo del equilibrio (Miller y Friesen, 1980; Tushman y Romanelli, 1985) han argumentado que las organizaciones ...", "en una investigación que realizaron Rosen, Templetony Kichiine (1981) encontraron que las mujeres gerentes ...". Sin embargo, es imprescindible citar la página o las páginas cuando se hace una cita textual, p. e. "la relativa importancia de estos factores en una decisión de promoción particular o a través de las decisiones, ha recibido poca atención" (Stumpf and London, 1981b: 543). Otro aspecto que es recomendable cuidar es el estilo de redacción. Las ideas deben ser expresadas de manera directa; con un uso conecto de las palabras que evite utilizarlas con los significados gráficos que tienen en el lenguaje popular; a menos que sea un hecho, dato o información que va a ser sujeto de análisis, entonces se cita entrecomillado y con el menor número de palabras posible sin perder la claridad, p. e.: "es importante tener en cuenta que cuando se está en el estudio de la reputación de las actuaciones, el enfoque estructu*- 21 ESTADO DEL ARTE ral nos permite examinarlas de la manera en que se analiza la estructura de relaciones en una organización completa." (39 palabras). "el enfoque estructural sugiere examinar la reputación de las actuaciones en términos de la estructura de relaciones en una organización completa." (21 palabras). Obsérvese que se eliminan algunos adjetivos no necesarios y consideraciones que están implícitas en la idea que se transmite y no se afecta la información ni la comunicación. En el discurso científico la transmisión de las ideas se estructura de la manera más directa y concisa que sea posible. Al final de este capítulo deberá relacionarse cuando menos la bibliografía utilizada. Sin embargo, es recomendable indicar con que bibliografía complementaria se cuenta. por ejemplo: "las firmas que secuencialmente entran a los mercados extranjeros. se moverán de su línea de negocios hacia nuevas líneas de negocios". El tema es la denominación del problema. Las hipótesis son enunciados concretos de los cuestionamientos que se plantean en el problema o proposiciones que se pretende probar. El problema se infiere del análisis que se realiza en el estado del arte. El planteamiento del problema permite enunciar las hipótesis que se pretende probar. significados que tienen o provocan los fenómenos. Es la descripción analítica del tema. El problema es el objeto de la investigación y está constituido por el conjunto de implicaciones. Puede observarse que en el primer caso se plantea una proposición que trata de probar una relación causal entre el tamaño de las organizaciones y el nivel de responsabilidad de los empleados.PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN EL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN no es el tema de la investigación. los elementos. las relaciones que se pretenden estudiar. lo que tal vez permita plantear una teoría en torno del tamaño de las organizaciones y la con- 23 . mayor es el nivel de responsabilidad de los empleados": o las aseveraciones a priori en que se sustenta la investigación aplicada o el desarrollo tecnológico. Es común que se constituya con una descripción de las hipótesis. tratándose de una investigación básica. por ejemplo: "entre mayor sea el tamaño de una organización. efectos. En el segundo caso se trata de una aseveración. proveniente de otra u otras investigaciones en la que se podrían sustentar ciertos planes o restructuraciones organizacionales específicas u otros desarrollos tecnológicos administrativos.24 PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN ducta de los miembros. . Se insiste nuevamente en que deben revisarse las investigaciones publicadas en revistas especializadas extranjeras y nacionales a fin de familiarizarse con la diversidad de planteamientos de problemas y de hipótesis que ha sido posible formular y que son sugestivas para expresar el problema y las hipótesis que se pretenden abordar en el protocolo que se está elaborando. de preferencia con referencias bibliográficas. los cuales es recomendable consultar. BIBLIOGRAFÍA La presentación de la bibliografía debe hacerse observando los convencionalismos más generalizados. De ser posible.JUSTIFICACIÓN LA JUSTIFICACIÓN ES LA EXPOSICIÓN de las implicaciones que puede llegar a tener el conocimiento que se espera lograr. Aquí se mencionarán las más usuales: las de libros y revistas. que son publicados en manuales o guías de redacción y en algunos libros de metodología. acompañarlo de comparaciones y evaluaciones (cuantitativas o cualitativas y de preferencia ambas). o de qué trabajos proviene la duda o qué trabajos científicos insinúan la existencia de escaso o nulo conocimiento. su utilidad práctica y las ventajas que tiene. 25 . ordenándolos. la justificación consiste en explicar. Tratándose de investigaciones aplicadas o de desarrollo tecnológico. el problema que se resuelve. explicando en qué consiste el avance y qué duda o sospecha pretende resolver. se debe referenciar con notas de pie de página hasta donde haya quedado el último avance. la posibilidad de aplicaciones y usos inmediatos y potenciales. bajo algún criterio de jerarquización. de preferencia. Desde luego. Griffin. es decir si no se indica la edición. Si no se cuenta con computadora y un procesador de textos. y C. Observaciones En ambos casos obsérvese que el uso de las letras mayúsculas se limita a lo estrictamente necesario.E.L. Seashore. sólo a partit de la segunda cuando es la primera no se acostumbra indicarlo.G. Irwin. Bower.) Homewood. Academy of Management Review. Nueva York. J..E. R.R. en cuanto a los nombres. Cammann (comps.. Revistas Woodman. se sobreentiende que es la . Busines Policy: Text and Cases (5th ed. John Wiley. únicamente la letra inicial con mayúscula. Porter.E. (1982). Rousseau. R. subrayar o escribir entre comillas. K.W. se inicia con el apellido de los autores. "Technology in Organizations: A Constructive Review and Analitical Framework".. 18: 293-321. J.26 JUSTIFICACIÓN Libros Christensen. D. el título de éste se destaca usando letra cursiva. Lawler. A continuación la edición. Hamermesh y M. III.W.E. Tratándose de libros. a continuación el año de la publicación. C. 229-253. (1983). E. (1993).). "Toward a Theory of Organizarional Creativity".R. Assessing Organizational Change. Andrews. Sawyer y R. en S. II. 27 JUSTIFICACIÓN primera. el volumen de la revista. no es usual "Prentice-Hall. destacándose el título de éste. Por lo que hace a revistas. lo acostumbrado es: "Prentice-Hall". mencionándola por su nombre comercial. en seguida la indicación "en" y la cita del libro en la forma acostumbrada. se inicia indicando el autor del trabajo y el título del trabajo. no por su denominación social. después de indicar los autores y el año. Cuando se trata de un trabajo publicado en un libro (véase el segundo ejemplo de libros). y finalmente las páginas donde se encuentra el artículo de referencia. destacándolo con letra cursiva y negrita o en la forma ya indicada en libros. el título del trabajo: el nombre de la revista. . incluyendo desde la página del título hasta la página de la bibliografía. Después la ciudad donde se editó el libro y finalmente la casa editora. La mayoría de las revistas tienen los siguientes datos: volumen. por ejemplo. Inc. o en su defecto el número o la fecha.". número y fecha. pueden consistir en lo siguiente (de manera enunciativa. pueden ser los siguientes: • la invención de un producto nuevo. • una comprobación. • una demostración. • la descripción de una estructura. equipos o instrumentos. • la sustitución de materiales. • la aportación de una teoría o una hipótesis. • la mejora (innovación gradual) de productos. Tratándose de una investigación aplicada o de desarrollo tecnológico. materiales.OBJETIVOS LOS OBJETIVOS EXPRESAN LOS LOGROS que se pretende alcanzar con la investigación. de la misma manera enunciativa. material. no limitativa): • un hallazgo. • la invención de un proceso nuevo. • la experimentación de un producto. Tratándose de una investigación básica. 23 . • la invención de equipos e instrumentos de trabajo. proceso. equipo o instrumento nuevo o mejorado. • una refutación. • la aportación de una clasificación. procesos. es útil apoyarse en la problemática que pretende resolver y en las utilidades que se vislumbran. . En cualquiera de los casos. y simplemente se le da un nombre que únicamente tiene significado para los involucrados. en el protocolo de investigación se debe indicar el objetivo principal y los secundarios en orden jerárquico. material. en ese caso estamos frente al desarrollo tecnológico de un sistema. proyecto satélite solidaridad. • la construcción de plantas piloto. equipo o instrumento.OBJETIVOS • el diseño de un producto. también bajo un criterio de jerarquización. También son frecuentes los proyectos de desarrollo tecnológico complejos o altamente complejos que involucran varios propósitos o todos los anteriores y algunos otros más. por ejemplo: proyecto apolo. • el diseño de modelos o sistemas operativos. Para el enunciado de los objetivos en una investigación básica es de mucha ayuda el planteamiento hipotético. proceso. Tratándose de una investigación aplicada o de desarrollo tecnológico. aún cuando generalmente no se indica así. la utiliza para su problema. crítica y discusión de la bibliografía. Generalmente son expresados en forma muy concreta y dentro de un criterio secuencial. Comentario: Es recomendable que el estudio de la bibliografía que se hizo no quede únicamente en la memoria del investigador. 4. pues cada investigación tiene sus propias metas): 1. Acopio de bibliografía. Análisis. 2. debe divulgarse para utilidad de la comunidad científica a la que pertenece. 31 . Algunos investigadores utilizan esta etapa para construir el o los primeros manuscritos del estado del arte. la cuestiona. la interpreta. La forma en que la analiza. Participación con ponencia en foros académicos. Si recibe críticas o comentarios ¡enhorabuena! pues ha interesado a su comunidad y constituyen una retroalimentación a su proyecto. Algunas de éstas ofrecen resultados parciales tangibles que deben mencionarse. De manera ilustrativa se ofrece un ejemplo sencillo (desde luego no constituye ningún patrón a seguir. 3. la aplica. de manera que den una idea clara de lo que se va a realizar en cada etapa de la investigación. Elaboración de artículo o artículos.METAS LAS METAS SON LAS ETAPAS o pasos que se planea realizar para llevar a cabo los objetivos del proyecto de investigación. experimentos.] 10. 8. 9.Análisis y discusión de los resulrados obtenidos. Comentario: Los artículos y las ponencias se elaboran generalmente para dar a conocer los instrumentos de observación o de medición que se han construido. Observaciones.. Elaboración de artículo o artículos. 12. .Participación con ponencia en foros académicos. 6. Este trabajo se simplifica cuando se han realizado publicaciones y ponencias previas sobre diversas etapas o aspectos de la investigación. Selección y elaboración de instrumentos de observación y medición. Comentario: La difusión de los resultados y conclusiones de una investigación en revistas especializadas es ineludible.. 11.Elaboración de artículo. mediciones [. Participación con ponencia en foros académicos. 7. Universo de estudio y selección de la muestra. En estos artículos se expone la justificación teórica y problemática que sustentan su construcción. sus usos inmediatos y los potenciales. sus limitaciones y condiciones restrictivas bajo las que opera.32 META 5. 33 .PLAN DE TRABAJO EL PLAN DE TRABAJO es la descripción con cierto grado de detalle del proceso que se pretende seguir para realizar la investigación. Su enunciado se hace atendiendo a la secuencia lógica de eslabonamiento y a la continuidad propia de cada uno de ellos. El uso de técnicas de programación como la ruta crítica y las barras de Gantt son un buen apoyo para este proceso y ios siguientes. Consiste en el enunciado concreto de cada uno de los procesos (conjunto de actividades que tienen un fin predeterminado) necesarios en que se ha subdividido el trabajo de investigación. CALENDARIO DE ACTIVIDADES EL CALENDARIO DE ACTIVIDADES es la programación cronológica de las actividades que se van a realizar para llevar a cabo el proyecto de investigación. amigo y colega. No lo he verificado. en función de la infraestructura y recursos con que cuenta y por lo mismo tienen un alto grado de originalidad. Comentario: Para elaborar el plan de trabajo y el calendario de actividades es conveniente tener en cuenta la metodología que se definió seguir (que deberá estar explícita en algún documento publicado o inédito) y las metas. La elaboración de la metodología. Fernando Ibarra. pero como consecuencia de las investigaciones que he conocido. las metas. dijo en alguna ocasión que existen tantas metodologías como investigaciones hay. 35 . el plan y el calendario están impregnadas del grado de creatividad e innovación que es capaz de desarrollar el investigador. encuentro mucho de verdad en su aseveración. ya que si se desea genuina-mente realizar la investigación. tanto físicos como humanos. edificaciones. instrumentos de trabajo. con que se cuenta para tealizar la investigación. equipamientos. Incluye expertos. Es importante tener en cuenta este aspecto desde el momento en que se genera la idea. laboratorios. ésta deberá planearse de manera que sea realizable con los recursos con que se cuenta o porque sea muy alta la certeza de adquirir lo que falta. bibliotecas. instrumentos y sistemas de apoyo.INFRAESTRUCTURA DISPONIBLE EN ESTE CAPÍTULO se relacionan las instalaciones. equipos. técnicos. 37 . en buena parte está en función del grado de dependencia de la adquisición de infraestructura. sistemas de cómputo y comunicación incluyendo tedes. El grado de viabilidad de un proyecto de investigación. Ahí se forja el investigador. prefiero la primera descripción) se refiere a las acciones concretas que se llevan a cabo durante ia realización de las investigaciones para satisfacer la necesidad social de incrementar el número de investigadores en activo. Estudios y trabajo son complementarios. Las instituciones educativas que imparten estudios de postgrado sin programas de investigación. tienen la posibilidad de acudir a las que sí cuentan con ellos. La investigación se aprende trabajando en ella. es indispensable que realicen trabajos con investigadores experimentados. de manera creativa. negociar estrategias y acciones que satisfacen sus necesidades de formación de investigadores. y. ya que todas las investigaciones permiten y requieren la incorporación de personas en formación a diferentes niveles. 39 . no obstante ante la falta de uno de ellos. lograr la formación de los investigadores es mayor cuando se trabaja desarrollando la propia investigación. En la actualidad existen grupos donde se puede aprender a investigar.FORMACIÓN DE INVESTIGADORES LA FORMACIÓN DE INVESTIGADORES o formación de recursos humanos (sin entrar en la polémica sobre si el hombre es o no un recurso. La opción "echando a perder se aprende" debe tomarse en casos muy extremos. Además de realizar los estudios formales convenientes para que las personas se capaciten y habiliten en la actividad de investigación. 40 FORMACIÓN DE INVESTIGADORES El supuesto más generalizado es que una investigación es realizada por un equipo de investigadores, constituido por: directores, asociados, asistentes, técnicos, tesistas, estudiantes. El tamaño del equipo, su experiencia y madurez, incrementan la viabilidad del proyecto de investigación. En general, en el proyecto se integra un resumen de la curricula de cada uno de los participantes, misma que destaca la formación académica a partir de licenciatura: la(s) tesis que ha dirigido, membresías de asociaciones académicas y profesionales a las que pertenece, reconocimientos académicos que le han otorgado, actividades como consultor o experto y relación de publicaciones a la fecha. RECURSOS NECESARIOS PARA EL PROYECTO ESTE CAPÍTULO TRATA acerca del informe relativo a la cantidad, tipo de personas y recursos físicos que son necesarios para la realización de la investigación que se propone. Por lo que respecta a personas, de manera general se refiere a asesores, investigadores, especialistas, técnicos, tesistas, alumnos. El director del proyecto determinará el perfil de capacidades y habilidades que debe cubrir cada persona. En cuanto a recursos físicos, generalmente son los relativos a construcciones, equipos, aparatos, instrumentos, herramientas, hardware, software, materiales, sustancias, etcétera. El director debe conocer ampliamente lo relativo a las especificaciones y características de cada uno de estos recursos, así como el precio aproximado y posibles proveedores. Es conveniente que dutante la gestación de la idea el director inicie las negociaciones con autoridades y organismos de financiamiento que lo lleven a obtener cuando menos un compromiso moral que le dé un alto grado de seguridad de que apoyaron el proyecto y las adquisiciones necesarias. 41 PRESUPUESTO EL PRESUPUESTO CONSISTE en la evaluación monetaria, lo más aproximada posible, del costo de las inversiones necesarias para la realización de la investigación. Los conceptos más comunes son: • director(es) del proyecto, • investigadores, • personal, • expertos, • bibliografía (libros, revistas, compra de artículos y otros documentos), • consultas a bancos de información, • pasajes y viáticos (trabajos de campo, visitas a investigadores con los que se trabaja conjuntamente, asistencia a foros académicos, etc.), • terrenos y construcciones, • equipo de laboratorio, • sustancias y materiales, • maquinaria y equipo para talleres, • herramientas y accesorios, • equipo de computación y paquetes para procesamiento de datos. Es necesario indicar cuáles son las instituciones que participarán en el financiamiento del proyecto, determinando 43 entre ellas curriculum del director y/o responsable del proyecto y de los participantes. por ejemplo. cada institución particular tiene elaborado su protocolo con sus propias especificaciones respecto de los tipos de apoyos que ofrece a la investigación. que es el único medio y tal vez la única vía que se tiene para demostrar y convencer a quien está dirigido. o bien. Por lo tanto. generalmente se informa sobre las aportaciones y responsabilidades de cada institución y el papel que asumen sus representantes. Recuérdese al llenar el protocolo. ¡Buena suerte! . Si se trata de un proyecto de investigación conjunta donde participan dos o más instituciones. de lo importante del proyecto y el porqué debe ser apoyado. Éstos son los puntos más generales que requieren los protocolos de investigación.44 PRESUPUESTO montos y porcentajes que aportarán cada una de ellas y las partidas que cubre cada aportación. con especificaciones propias de cada proyecto de investigación. el investigador que llena el protocolo deberá tener una concepción clara y completa del proyecto de investigación que se va a realizar. Las diferencias entre los protocolos de una institución a otra pueden consistir en informaciones específicas adicionales. Cada proyecto de investigación tiene sus propias características. De manera que el protocolo debe y merece ser llenado con todo cuidado y rigor. ya que el protocolo es únicamente un formulario o formato que se ha elaborado. En fin. de la capacidad del investigador. no es lo mismo un proyecto de investigación básica que un proyecto de investigación aplicada. éste puede ser un formulario en papel o estar incorporado en un disket. información sobre el centro de investigación donde trabajan tanto el director y/o el responsable del proyecto. . Se conserva una página de cada tipo de información como muestra ilustrativa para el lector.EJEMPLO I* EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN DE COLAGENASA EN CÉLULAS HEPÁTICAS EN CULTIVO * En este ejemplo se eliminan hojas de información detallada. C. Juan Socorro Armendáriz Borunda Nombramiento: Profesor e Investigador titular.P.F.P.: AEBJ-570309 Dr. 975 Sector Juárez C. Raúl Vargas López Datos del responsable del proyecto R. Sector Hidalgo C.U.P. tiempo completo Domicilio laboral: Sierra Mojada s/n Independencia C. C.000 (nuevos pesos) Datos de la institución solicitante: Universidad de Guadalajara Dependencia: Centro Universitario de Ciencias de la Salud (C.U.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DATOS GENERALES NO ESTÁ ASOCIADO A NINGÚN PROGRAMA Título. Rector o responsable ante Conacyt: Dr.C.: Teléfono particular: 915 616-9441 Datos del administrador del proyecto Med.:.) R.S. Víctor Manuel González Romero Nombramiento: Rector General de la Universidad de Guadalajara Director de la dependencia Dr.: UGU250907-MH5 Domicilio: Juárez núm. Esp. Expresión y regulación del gen de colagenasa en células hepáticas en cultivo Comité a evaluarlo: Ciencias de la salud Disciplina: Ciencias de la salud Especialidad: Biología molecular en medicina Duración del proyecto: 6 cuatrimestres Monto solicitado a Conacyt: 291. 44340 Teléfono laboral: 913 617-4159 Extensión: 0 Fax: 915 617-4159 Domicilio particular: López Cotilla 1542 Int.C.F. Víctor Manuel Lara Vélez Nombramiento: Secretario Administrativo del C. en C. 7 Moderna.C.S. 47 . materiales y útiles diversos163.5 00 54.900 Gasto de inversión Equipo de laboratorio Equipo de cómputo Herramientas y accesorios Total gasto de inversión Total solicitado 236.900 Animales para rancho y granja 0 Total gasto corriente 199.48 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO DESGLOSE FINANCIERO Gasto corriente Honorarios por servicios profesionales20.00 0 .10 0 491.000 Viáticos 0 Pasajes 0 Gastos de trabajo de campo 0 Ediciones e impresiones 6.000 Documentos y servicios de información5.000 Servicios externos y comerciales 0 Cuotas de inscripción 0 Profesores visitantes 0 Becas para proyectos de investigación 0 Artículos.60 0 0 291.000 Libros 5. vena portal. perisinusoidal y pericentral). Una de las características principales de la fibrosis y cirrosis hepática es la deposición en exceso de varias proteínas de matriz extracelular (MEC) (particularmente colágena tipo I) (Aycock y Seyer. 1989) en diversos sitios del lóbulo hepático (periportal. La fibrosis periportal distorsiona la triada portal (ducto biliar. lo que ha su vez es un determinante principal de los efectos patológicos en la función hepática. en la cual las proteínas de matriz se acumulan entre los hepatocitos y el endotelio sinusoidal. La cirrosis del hígado es "un proceso difuso caracterizado por fibrosis y una conversión de la arquitectura en nódulos estructuralmente anormales" (Boyer. Datos de 1993 indican que la cirrosis hepática y otras enfermedades crónicas del hígado se situaron como tercera causa de mortalidad hospitalaria en México (SS. altera la función celular y puede alterar el flujo de los nutrientes a . La fibrosis perisinusoidal.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 49 PROTOCOLO DEL PROYECTO ANTECEDENTES PATOFISIOLOGÍA DE LA CIRROSIS HEPÁTICA LA CIRROSIS DEL HÍGADO es un padecimiento que lleva necesariamente a la muerte si el paciente no recibe oportunamente un adecuado tratamiento de soporte. 1993). y arteria hepática) restringiendo así el flujo biliar y sanguíneo. 1994). Con este proceso se asocian cambios vasculares importantes que conllevan a una alteración en el suministro sanguíneo y por ende en la nutrición de la célula hepática. 1994). MECANISMOS PATOMOLECULARES EN LA CIRROSIS HEPÁTICA En el proceso fibrogénico están involucrados diversos tipos celulares presentes en el microambiente hepático. La participación de las células de Ito en este proceso depende de su previa activación por diversos factores bioquímicos.. 1990. La fibrosis pericentral puede impedir el flujo sanguíneo sinusoidal e incrementar la presión portal en la cirrosis (Friedman y Bisell. de necrosis tumor al alfa (TNF-a). Armendáriz-Borunda et ai. entre los que se cuentan: la propia MEC.50 EJEMPLO I los hepatocitos. 1990). Se ha descrito ampliamente la participación de las células de Ito como la principal fuente celular de síntesis de MEC durante la fibrogénesis hepática (Melani etal. las células de Kupffer . derivado de las células de Kupffer. Asimismo. mediadores solubles como los factores de crecimiento transformante beta (TGF-B. 1989. comprendiendo las bases moleculares de la síntesis y degradación de las proteínas de matriz y de las citocinas envueltas en la fibrogénesis hepática. de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF). corticosteroides y el acetaldehido (Friedman y Bisell. Armendáriz-Borunda etai. 1992). Las nuevas perspectivas terapéuticas en el tratamiento de la cirrosis se basan en el conocimiento de la biología de la modulación de la MEC en la fibrosis hepática. por sus siglas en inglés). de crecimiento epidemial. un proceso conocido también como capilarización de sinusoides. se impide el libre intercambio de nutrientes entre la sangre sinusoidal y el hepatocito. 1990). Estos fenómenos explican algunas de las características clínicas de la cirrosis hepática como analbuminemia. enzima intersticial que degrada de manera específica las colágenas tipo I. finalmente. entre otros. en condiciones normales existe un equilibrio entre las proteínas de colágena y la coiagenasa. la pérdida de fenestraciones de las células endoteliales. es por ello . Con el cierre de este espacio.. entre estos cambios se cuentan la pérdida de vellosidades del hepatocito. las células de Ito y los fibroblastos y neutrófilos circundantes (Hasty et ai.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 51 presentes en el sinusoide desarrollan un papel fundamental en la activación de las células de Ito al secretar algunas de las atocinas descritas e incluso al contactar directamente con ellas con la emisión de prolongaciones a través de las fenestraciones de las células endoteliales del sinusoide (Armendáriz-Borunda et al. Diversos cambios se presentan en el microambiente hepático ante el exceso de proteínas colagénicas en el espacio subendotelial. En el hígado. II o III y que es secretada por los hepatocitos. así como también la incorporación de metabolitos producidos por el hígado al torrente sanguíneo. de igual manera se ven impedidas la destoxificación de diversas sustancias por el hepatocito. 1989). la aparición de una membrana basal y. esta homeostasis se ve alterada por el incremento de las primeras durante la cirrosis. disminución en la sangre de algunos factores de coagulación y la encefalopatía hepática. Al proceso de introducción de ADN exógeno a una célula eucariótica se le conoce como transfección y consiste en la incorporación de un gen deseado a una célula a través . TRANSFECCION DE CÉLULAS EUCARIÓTICAS Una de las formas para lograr cantidades suficientes de la enzima colagenasa en el microambiente hepático es a través del incremento en la transcripción del gen que la codifica en las células hepáticas. probablemente debido a que no se ha alcanzado la cantidad suficiente de la enzima en el espacio subendotelial. ahora es posible la modificación transitoria o estable del genotipo de casi cualquier tipo de célula mediante la introducción de ADN exógeno. Diversos tratamientos se han efectuado en este sentido con relativo éxito. no se ha logrado la reversión total del padecimiento.52 EJEMPLO I que una de las estrategias terapéuticas para la eliminación del exceso de colágena se haya enfocado en la inducción de la síntesis y de la actividad de la enzima colagenasa por las células hepáticas. Para ello. o bien su actividad es reducida. 1994). y gracias al desarrollo de diversas herramientas de biología molecular. mediante la incorporación de un mayor número de copias de dicho gen en el ADN cromosómico de la célula. sin embargo. de una manera tal que se pueden incrementar o disminuir funciones específicas e incluso desarrollar nuevas funciones en una célula que contenga la maquinaria transcripcional requerida para la síntesis de la nueva pro teína (Martínez-Fong etal. los cuales son segmentos circulares extracromosomales de ADN que contienen regiones donde se inserta el gen de interés (sitios de clonación múltiple). el gen de lac es inactivado. lo cual se utiliza para la identificación de las células transformadas con este plásmido (ensayo colorido de actividad de B-galactosidasa sobre el sustrato X-gal). . Amp: gen de resistencia a ampicilina. coli de la enzima metabolizante del azúcar galactosa (B-galactosidasa). regiones que promueven la expresión general o específica del gen insertado (promotores). ésta transcribe al gen exógeno. lac Z: gen estructural de E. producto de la transcripción inversa del ARN mensajero (mARN) que codifica para la proteína de interés. Una vez incorporado el plásmido al ADN de la célula eucariótica. O: origen de replicación del plásmido pBR322 P: secuencia codificante de poli-Adenosina. El gen se presenta en forma de ADN complementario (cADN). lo que finalmente se traduce en la síntesis de la proteína deseada completamente funcional. Cuando los fragmentos de ADN se clonan en esta región. Figura 1. Entre los vectores más utilizados para este fin se encuentran los plásmidos. Dentro de la región de lac Z hay una secuencia que contiene varios sitios de reconocimiento único para enzimas de restricción. regiones donde se localiza la capacidad de resistencia a antibióticos y regiones que codifican a alguna enzima utilizada para la identificación de las células transfretadas.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 53 de un vector de expresión dado. en la cual se inserta el gen de interés. Regiones componentes de un plásmico tipo (pUC19). característica que la hace atractiva para el manejo experimental del nivel de expresión de un gen deseado controlado bajo el mencionado promotor (Tilghman et al. ya que se conoce plenamente que ante decrementos en el nivel de azúcar (glucosa) en el organismo o incrementos en el nivel de proteínas. enzima citosólica que participa en la gluconeogénesis hepática. .g.e. Por ejemplo. Además. el gen de PEPCK del hepatocito se activa y por ende se induce la expresión del gen asociado a dicho promotor (Martínez-Fong etal.. 1974. se puede lograr a voluntad la expresión de dicho gen. diversos plásmidos tienen insertada la región promotora del gen de fosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK. glucocorticoides. 1994). 1994.. variando el contenido de azúcares o proteínas en la dieta. por sus siglas en inglés). además de interactuar específicamente con los factores transcripciones del hepatocito. 1988). Perales etai. insulina.. puede ser regulada positiva o negativamente por ciertos elementos presentes en el entorno celular (e. el promotor de albúmina (p alb) dirige la expresión del gen que le acompaña únicamente en las células que cuentan con los factores transcripciones que interactúan específicamente con esta región (í. Así por ejemplo.54 EJEMPLO I Se han utilizado diversos promotores con características particulares dentro de los vectores de expresión. AMPc). Esta secuencia. McGrane et al. hepato-cítos). según sea la necesidad de controlar el grado de expresión de un gen determinado o la de expresarlo en un tejido específico. en roedores en los que se les ha transfectado un gen dado con el promotor de PEPCK. Con ello.56 EJEMPLO I lizar pruebas en modelos in vitro en condiciones experimentales controladas. Armendáriz-Borunda. seamos capaces de modular el grado de expresión de la enzima. P. GreenwelyM.. 267:14316-14321. (e. BIBLIOGRAFÍA Armendáriz-Borunda. N. J. Se han utilizado para este fin líneas celulares en cultivo.P. el gen de la enzima puede estar bajo el control de la región promotora de PEPCK. Rojkind (1989). Seyer (1994). A.. en nuestro caso la expresión de la colagenasa. Armendáriz-Borunda. y utilizando plásmidos con regiones promotoras específicas para hepatocitos. proveniente de células hepáticas humanas.M. C. de tal forma que mediante la adición de diversos compuestos como insulina. J. KangyJ.. Seyer (1992). K. Simkevich.H. La línea celular HepG2. 9:150-158. Crem. ].M. KatagawayJ. con la finalidad de regular experimentalmente la expresión del mismo.. Además. Roy.g.. AMPc y glucocorticoides. . las cuales retienen aún algunas características propias del tipo celular de la que derivan y facilitan el control de variables con respecto al origen de las células que provienen. Matrix. J. /. Biochem. Biol. contiene la maquinaria transcripcional específica del hepatocito requerida para la síntesis de nuevas moléculas proteicas. promotor de albúmina) se puede dirigir la transcripción del gen de interés insertado en el mismo vector de expresión. S.M. Chang. L. Hasty.. Seyer (1989). T. Sci. Reshef y FJ. EUA. K. Mainardi (1990). 19 Ed.I.G.D. Chem. Nati.Y. Bloom. M. 265:11421-11424. L.A. Goldberg. 15: 43-50. yJ.F. R. Saunders Co. R. Stevens y C. A. 71:13041308. Practice.M..M. Secretaría de Salud (SS) (1993).W. O.W. E. pp 913-924. Nati Acad. Spinella.B. J. Hepatology. Proc. . deVente. Martínez-Fong. Hanson. S. Ferkol. Thompson.. Beegen. Connective Tissue Res. Tratado de medicina interna. J. Wynshaw-Boris..EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 57 Aycock.yG.A. Hanson (1994). (Eds). Yun.S. A. T. 263:11443-11451. Smith.H.G. G.R Pourmotabbed./. Pennsylvania. D.P. S..M. McGrane. Proc. Acad. (1989). Hosp.C Bennet. T. Wyngaarden. 106:10761084. Perales. Tilghman. Purchio. Sci. Friedman. J. J. mayo. Hanson (1988). Bisell (1990). Park.D.B. Ratnoffy R./ Biol. Ballard (1974). Milani. EUA. J. Martínez-Hernández (1994). Boyer. 91:40864090. H. (1994). Meyuhas. en: Cecil. J. 23:19-31. EUA. D. O. T. Mullersman.W. Biol Chem.Wu(1994). Gastroenterology. J.. F. R. 20:1602-1608.L. W.E.. Armendáriz-BorundayA.M.C. J. Wagner. y M... J. Rottman y R. células del parénquima hepático). es necesario corroborar que la línea celular HepG2.12 alb CAT Además de conocer la eficiencia de la transfección transitoria de ADN a diversas líneas celulares en nuestras condiciones experimentales. Evaluar la eficiencia de transfección del gen exógeno de colagenasa y del gen reportero CAT a células en cultivo. Dirigir específicamente la expresión del gen reportero cloranfenicol acetil transferasa (Cat) a células hepáticas en cultivo mediante el empleo de un promotor exclusivo de cé lulas hepáticas (promotor de albúmina) en el vector de ex presión p9. tipo celular en donde se enfocará principalmente nuestro estudio. proteína que es producida fundamentalmente por las células hepáticas. Por la transfección con el plásmico pUCl 9/colagenasa se determinará el grado de expresión de la enzima colagenasa . puesto que deben contener aún los factores transcripcionales específicos requeridos para la expresión de albúmina. aún retiene algunas de las características propias de las células de las que derivaron (Le. 2..58 EJEMPLO I OBJETIVOS LOS OBJETIVOS A ALCANZAR en este proyecto de investigación son los siguientes: 1. 3. o no. El promotor de PEPCK controlaría al gen de la colagenasa.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 59 y se relacionará con ia actividad de CKT producto de CAT. De esta forma. . Con este ensayo se evaluará la eficiencia de la trans-fección de ADN exógeno así como la capacidad de producción de la enzima colagenasa por la célula hepática a partir de la integración del gen exógeno en su genoma. bastaría con adicionar al medio de cultivo algunos de los compuestos mencionados. cotransfección con el plásmido pSV2CAT en la misma célula. dependiendo de la respuesta presentada por la célula transfectada. si se requiriese un aumento o disminución de la enzima en el microambiente celular. y no haciéndolo cuando hubiere insulina. Regular la expresión in vitro del gen exógeno de colagenasa en células hepáticas en cultivo mediante el control de sustratos que interactúan con la región promotora del gen transfectado. Es importante poder controlar a voluntad la expresión. expresándola cuando estuviese en presencia de factores tales como AMPc y glucocorticoides. debido a ello es que se plantea la necesidad de regular este gen exógeno bajo el promotor de PEPCK. del gen de colagenasa. en C. 4. 2. Establecer y optimizar la metodología de introducción de ADN exógeno a células eucarióticas en cultivo (proceso de transfección). Fernando Siller una participación fundamental en el desarrollo de este proyecto. capacitados en el manejo de las técnicas de frontera de la biología molecular. Conocer los mecanismos de expresión del gen de cola-genasa controlado bajo una región promotora regulable y específica para las células hepáticas en cultivo. del cual se pretenderá la producción de su tesis doctoral. recayendo particularmente en el M. dedicado a la investigación básica y clínica de la biología molecular en los problemas de salud que son de importancia relevante para México. Cómo parte de ello se involucrará a diversos estudiantes del doctorado en Biología Molecular en Medicina. . Apoyar la formación de recursos humanos con los conocimientos y la capacidad de análisis en diversos tópicos del área de biología molecular. para posteriormente intentar in vivo la incorporación y regulación de dicho gen en un modelo experimental de cirrosis hepática.60 EJEMPLO I METAS DENTRO DE LAS METAS a alcanzar por este proyecto se contemplan: 1. 3. Crear un polo de desarrollo regional en el país. con los expertos en el área del trabajo que se pretende desarrollar. . así como en los principales foros de comunicación del área. Divulgar los resultados obtenidos por este trabajo en publicaciones de circulación nacional e internacional. 6. Establecer relaciones de apoyo e intercambio a niveles nacional e internacional.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 6l 5. OBJETIVO PRINCIPAL Transfectar el gen exógeno de colagenasay regular su expresión en células hepáticas en cultivo. mantenidas a 80% de confluencia en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 10% de suero bovino fetal. para posteriormente ser incorporado por la célula e integrado transitoriamente en el ADN cromosomal. Para ello. se incubarán células HepG2. Bajo condiciones similares se mantendrán células de Ito. en la cual el ADN exógeno se deposita como un precipitado fino sobre la superficie de la célula en suspensión. provenientes de una línea celular de hepatoma humano (células parenquimatosas). TRANSFECCIÓN DE CÉLULAS Uno de los métodos que más se utilizan para la introducción de genes a células eucariónticas es la transfección de ADN con fosfato de calcio. utilizadas como control en los ensayos de transfección.62 EJEMPLO I METODOLOGÍA CULTIVO DE LÍNEAS CELULARES SE PROPAGARÁN LAS DIVERSAS LÍNEAS celulares en las condiciones óptimas de cultivo. de Ito y COS-& en monocapa a aproximadamente un 70% de confluen- . a 37°C en aire 95% y C025%. provenientes del mesénquima hepático y células COS-7. con el objetivo de proveer de una población adecuada de ellas a cada uno de los diferentes ensayos de transfección. línea celular descendiente de riñón de mono. Para este fin. se crecerán las células HepG2. pSV2CAT (plásmido con el promotor fuerte del virus de SV40 —control positivo—) pUC19/colagenasa (plásmido con el promotor de SV4 y el gen de colagenasa) y PEPck/ colágena (plásmido con el promotor d PEPck y el gen de colagenasa). con los plásmidos p9. En breve: A las células en cultivo se adiciona el precipitado recién formado de la solución de CaC12 con el ADN a ser transfectado y una solución salina de HEPES. 1994). (promotor de albúmina y gen reportero CAT —específico para la expresión en células hepáticas—). pSVoCAT (plásmido sin promotor—control negativo—). por el método de precipitación de fosfato de calcio (Chen y Okayama.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 63 cia y serán transfectadas. según corresponda. posteriormente se lavan y siembran con medio completo.12albCAT. pSV2CAT (plásmido con el promotor fuerte del virus de SV40 —control positivo—). La transfección se hará. 1988. Se incuban de 4 a 16 h bajo condiciones estándar de crecimiento para permitir que el precipitado se adhiera a la superficie de las células y el ADN se integre a los cromosomas de las células huésped. para determinar la expresión del gen incorporado. Armendariz-Borunda et ai. ENSAYOS DE EXPRESIÓN TRANSITORIA USANDO EL SISTEMA REPORTERO DE CLORANFENICOL ACETILTRANSFERASA (CAT) Este sistema determina la actividad de la enzima CAT como una medida del nivel de expresión del gen de interés . individual o conjuntamente. Se recolectan las células a las 2-48 h posteriores a la transfección. Finalmente se expone la placa cromatográfica a una película autorradiográfica y los productos acetilados son analizados cualitativamente y cuantitativamente por análisis de las bandas de la placa cromatográfica correspondiente a las de la impresión autorradiográfica mediante espectroscopia de líquidos de centelleo (Gorman et al. Las células transfectadas son recolectadas y Usadas en varios pasos de congelación/descongelación. Se adicionan a los Usados celulares acetil CoA y cloranfenicol marcado radiactivamente y los productos modificados del antibiótico son separados del material original por cromatografía de capa fina. La CAT es una enzima bacteriana que cataliza la transferencia del grupo acetil proveniente de la acetil CoA al cloranfenicol.64 EJEMPLO I transfectado conjuntamente con el gen que codifica para dicha enzima. la ventaja de ello radica en la posibilidad de regular experimentalmente el grado de expresión . REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DEL GEN DE COLAGENASA La región promotora del gen de fosfoenolpiruvato carboxicinasa (PEPCK) controla la expresión del cADN un gen dado cuando ambos se encuentran en el mismo vector de expresión. La secuencia de PEPCK tiene la característica de incrementar o disminuir la expresión del gen cuando están presentes ciertos compuestos que interactúan directamente con ella. 1982).. Los filtros se lavan y secan y posteriormente son expuestos a una película autorradiográ-fica para observar la banda de ARN específica de colagenasa. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE ARN DE COLAGENASA Se extraerá el contenido total de ARN de las células en cultivo utilizando el sistema de aislamiento de ARNzol (Biotecx. glucocorticoldes y AMPc a las células hepáticas y después de un tiempo de incubación se recolectarán las células para determinar en ellas el nivel de expresión de la colagenasa por análisis de Northern blot así como por análisis de su actividad enzimática. AMPc o glucocorticoldes a las células transfectadas. 1980). Se hibridiza el filtro con una sonda radiactiva de ADN de colagenasa. En un gen desnaturalizante de agarosa se coloca una alícuota de ARN total. Se adicionarán de manera individual los compuestos insulina. 1994).EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 65 mediante la adición de insulina. se efectúa el análisis densitométrico de las ban- . La regulación de la expresión del gen de colagenasa se realizará en las células HepG2 transfectadas con el plásmido PEPCK/colagenasa (Valera y Bosch. Finalmente. se somete el gen a electroforesis y posteriormente se transfiere el ARN a filtros de nitrocelu-losa. de manera que complemente específicamente con el ARN de mismo gen. 1992) para realizar el análisis del ARN específico de colagenasa con la técnica de Northern blot (Thomas. ya que esta proteína pudiera encontrarse enzimáticamente inactiva. Seyer (1994). Roy. Raghow. Simkevich. Shapiro et al. (1986). Del sobrenadante se toma una alícuota para determinar por espectrometría de líquido de centelleo la radiactividad residual. C. el medio de cultivo se recolecta y se determina en éste la actividad de colagenasa secretada por las células. siguiendo el método descrito por Hasty y cois. 1993.66 EJEMPLO I das en las placas autorradiográficas para cuantificar el contenido de ARN de cada muestra (Armendáriz-Borunda et aL. Después de 24 h de mantener a las células en cultivo en un medio libre de suero. R. H. N. En breve: se incuba el medio con fibrillas solubles de colágena radiactiva (marcada con 14C). J. se adiciona acetato 4-aminofenilmercúrico para activar la colagenasa latente y se somete a centrifugación para precipitar la colágena no degradada. 1993) ENSAYO DE ACTIVIDAD DE COLAGENASA El análisis de la actividad enzimática de la colagenasa es necesario para determinar la funcionalidad de la enzima producida. Kang y]. lo que no se podría conocer a través de la determinación única del ARN que la codifica. "Activation of Ito Cfí'G .P. BIBLIOGRAFÍA Armendáriz-Borunda.. Okayama (1988). A. Biol. 222:533-539./.M.H. L. Biochem. Gorman.M. A. Hibbs. "Induction of Macrophage Metallopro- . Eur. R.L. Seyer. Armendáriz-Borunda. "Transforming Growth Factor B Gene Expression isTransiently Enhaced at a Critical Stage During Liver Regeneration After CC14 Treatment". Welgus (1993). Raghow (1993). Bosch (1994). 304:817-824. Chen. y F.. Invest.. "Secreted Forms of Human Neutrophil Collagenase". 6:632-638. y H. Valera. S.. Biotecx (1992). A. Biochem.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 67 Cells Involves Regulation of AP-1 Binding Proteins and Induction of Type I Collagen Gene Expression". Michael.S. Kang y C. Mol. K. 261-5645-5650. "Recombinant Genome which Express Chloramphenicol Acetyltransferase in Mammalian Cells". A New and Improved Method for the Isolation of Total ARN from Tissues/Cells/Bacteria/Plant/Yeast and Biological Fluids". C.D. "Glucokinase Expression in Rat Hepatoma Cells Induces Glucose Uptake and is Rate Limiting in Glucose Utilization".E Moffat y B. J. A. "Calcium-Phosphate Mediated Gene Transfer: A Highly Efficient System for Stably Transforming Cells with Plasmid ADN. Shapiro. Kobayashi.A. Howard (1982).G. C. 69:283-294. Lab.K. 27.. "Ultraspec ARN Isolation System.H. M. Biotecx Bulletin.H. C. Cell.. BioTechniques. Biol 2:1044-1501. J. Pentland y H.P. Chem. J.. Kang. Hasty. D.. Mainardi (1986). /.. . Biol. Thomas. (1980). Acad. EUA. Proc. Sel. . 77:5201-5205. Nati. "Hybridization of Denatured ARN and Small ADN Fragments Transferred to Nitrocellu-lose".68 EJEMPLO I teinases by Extracellular Matrix./. P. Chem.S. Evidence for Enzyme-and Substrate-Specific Responses Involving Rostaglan-din-DependentMechanisms". 268-8170-8175. C. — Ultracentrííuga Beckman mod. — Centrífuga Hermle mod. XL-90. Zeiss mod. — Contador de líquido de centelleo Beckman mod. — Microscopio óptico.S. Zeiss.. DU650. LS6500.EXPRESIÓN Y . . Área de análisis — Espectrofotómetro UV-VIS. Labconco mod. Purifier Class II. Roper. — Microscopio invertido. Área común — Congelador REVCO. J2-MI. — Incubadora de C02. — Refrigerador. UVP. — Centrífuga Beckman mod. Labline. Beckman mod. cuenta con las áreas de trabajo y el equipo de laboratorio que a continuación se describen: Área de cultivo de células — Campana de flujo laminar. Axiovert 135.U. ZK 364. Área de extracción y análisis de ARNy ADN — Transiluminador ultravioleta. VWR Scientific.REGULACIÓN DEL GEN 69 INFRAESTRUCTURA Y APOYO TÉCNICO DISPONIBLE EL INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR (IBM) del C. — 1 Cámara de electrofóresis. gracias a lo cual se puede abordar un mismo problema desde diversas perspectivas. .70 EJEMPLO I El grupo de investigación del Instituto de Biología Molecular está conformado por especialistas de varias disciplinas. inmunólogos. toxicólocos. biólogos celulares y biólogos moleculares. farmacólogos. bioquímicos. Dentro de este grupo se cuentan médicos. Para identificar las variables que pudieran estar involucradas en cada tipo de ensayo y así lograr una total confiabilidad de los resultados a obtener. Una vez obtenida la confluencia de las células en las cajas de cultivo. se requiere la estandarización de los mismos bajo las condiciones experimentales de nuestro laboratorio. La base principal de los ensayos a realizar son los cultivos celulares y de aquí la importancia de estandarizar las condiciones óptimas para el crecimiento de las líneas celulares a utilizarse. • Estandarización de las técnicas bioquímicas y moleculares a utilizar.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 7\ CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 1 Durante el primer cuatrimestre se emprenderán las actividades que a continuación se describen: • Adquisición del equipo y material de laboratorio faltante. se efectuará el resto de las actividades programadas. . • Cultivo de líneas celulares. una alícuota de las mismas se guardará en congelación (-70°C) para mantener un stock constante de células destinadas a los ensayos subsecuentes. en las cuales no se involucra la necesidad de los mismos. En tanto se consiguen. • Desarrollo de los ensayos preliminares de transfección de plásmidos a las líneas celulares. ya que permite corroborar tempranamente la factibilidad y viabilidad de la hipótesis del trabajo postulado.g. Es necesario contar con la suficiente cantidad de plásmidos para realizar cada uno de los ensayos de transfección. después de un tratamiento de choque para lograr la entrada del plásmido a las células.12albCAT y pUC19/colagenasa en bacterias en cultivo. se multiplican por la adición de un antibiótico dado y posteriormente se recuperen en el centrifugado del lisado de la célula bacteriana. en las cuales. pSVoCAT. Esta etapa es crítica.j E. Para ello se requiere efectuar su amplificación en bacterias en cultivo (e. . coli). Periodo donde se evaluará la integridad y funcionalidad de cada uno de los elementos participantes en las reacciones de transfección. • Análisis estadístico de resultados. p9.72 EJEMPLO I CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 2 • Efectuar la amplificación de los plásmidos pSV2CAT. Ensayo de actividades de CAT Análisis estadístico de resultados. .EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 73 CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 3 Una vez establecidas las condiciones experimentales óptimas. los que a continuación se mencionan: • Transfección del gen reportero cloranfenicol acetiltrans-ferasa (CAT a las líneas celulares en cultivo). CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 4 • • • • Transfección del gen de colagenasa a células en cultivo. • Análisis estadístico de resultados. • Ensayos de actividad de CAT. Determinación del contenido de ARNm y la actividad de la enzima colagenasa. CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 5 • Transfección del plásmido PEPCK/colagenasa a células HepG2. se iniciarán los ensayos bioquímicos y moleculares propuestos para la resolución del problema al que nos hemos enfocado. . • Análisis del contenido de ARNm y la actividad de la enzima colagenasa. CALENDARIO DE ACTIVIDADES CUATRIMESTRE 6 • Conclusión de experimentos y en su caso comprobación de resultados con amplias desviaciones estándar. • Publicación y divulgación de resultados en foros y revistas nacionales e internacionales. • Análisis estadístico de resultados.74 EJEMPLO I • Regulación de la expresión del gen de colagenasa. • Análisis estadístico de resultados. • . becario NIH (National Institutes of Health. en C. U.: AEBJ-570309Nobilis: Dr. Nombre: Juan Socorro A.C. Materno: Borunda Nombramiento: Profesor e investigador titular C.76 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA RESPONSABLE CONCENTRADO DE DATOS CURRICULARES R. Paterno: Armendáriz A.F. Gastroenterology y Life Sciences. of Tennessee 93 79 91 Total de tesis dirigidas Licenciatura: 0 Maestría: 0 Doctorado: 0 Otros datos académicos relevantes: Becario Conacyt para maestría y doctorado. University of Tennessee Research Associate. revisor de las revistas internacionales: Hepatology. USA) para postdoctorado. receptor de donativos del NIH. Tiempo completo Nivel del SNI: 1 Relación de grados obtenidos GRADO L M D D D INSTITUCIÓN AÑO Universidad Autónoma de Chihuahua CINVESTAV-IPN 84 CINVESTAV-IPN 87 POST-DOC. . SNI nivel I. C. Simkevich.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 77 CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA DR." Nombre de revista: Biochemistry Journal Páginas: 817-824 Año: 1994 Volumen: 304 Número: Artículo. Martínez Título del artículo: "Nonenzymatic Glycosylation of Poly-L-Lysine: A New Tool for Targeted Gene Gelivery" Nombre de revista: Hepatology Páginas: 1602-1608 " Año: 1994 Volumen: 20 Número: 6 Artículo Autores: J. Seyer Título del artículo: "A Pentapeptide From Type I Procollagen Promotes Extracelluíar Matrix Production" Nombre de revista: Journal ofBiologkal Chemistry Páginas: 9941-9944 Año: 1993 Volumen:-268 Número: Artículo Autores: J. J. Katayama. Seyer Título del artículo: "Activation of Ito Cells Involves Regulation of AP-1 Proteins and Induction of Type I Co. EN C. Mullersman. Martínez. Katay. Michael. A. Raghow Título del artículo: "Transforming Growth Factor B Gene Expression is Transiently Enhanced at a Critical Stage During. Armendáriz y A. Armendáriz-Borunda..E. A. C.. J. Armendáriz-Borunda. Raghow y J.. H.. R. Armendáriz-Borunda. K.. Roy. Purchio. Seyer Título del artículo: "Transcriptional Mechanism of Type I Collagen Expression are Diferentially Regulated by Interle.H. J. Kang y R..F.M. Armendáriz-Borunda. J.P." Nombre de tevista: Laboratory Investigation Páginas: 283-294 Año: 1993 Volumen: 69 Número 3 Artículo Autores: K.M. Autores: D.M." Nombre de revista: Journal ofBiologkal Chemistry Páginas: 14316-14321 Año: 1992 Volumen: 267 Número: 20 . N. Seyer.M. Katayama y J. A. JUAN SOCORRO ARMENDÁRIZ BORUNDA RESPONSABLE RELACIÓN DE PUBLICACIONES 5 últimas publicaciones Artículo Autores: Binding J. Kang y J.H. 60 3 5 0 0 0 10.65 40.750 0 0 0 0 0 6.125 113.600 0 59.5 5.75 40.900 0 0 0 61.125 54.750 5.00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6.00 C 0 0 0 0 0 0 c 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40.00 0 0 0 0 81.00 00 5.900 0 108.0 0 00 0 0 6.850 281. materiales y útiles diversos Documentos y servicios de información Libros Animales para rancho y granja Total gasto corriente Gasto de inversión Equipo de laboratorio Equipo de cómputo Herramientas y accesorios Total gasto de inversión: Total solicitado año: 1 10.725 0 172.12 59.78 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO DESGLOSE FINANCIERO AÑO: 1 Cuatrimestre Cuatrimestre Cuatrimestre Total 1 2 3 Gasto corriente Honorarios por servicios profesionales Viáticos Pasajes Gastos de trabajo de campo Ediciones e impresiones Servicios externos y comerciales Cuotas de inscripción Profesores visitantes Becas para proyectos de investigación Artículos.250 054.250 (Nuevos Pesos) . 400 0 0118.00 0 59.000 0 0 5. 00 se dedicará al pago de servicios profesionales de dibujante y fotógrafo.000. así como de los compuestos radiactivos. así como para el pago de personal de apoyo especializado de limpieza y mantenimiento de equipo de laboratorio y de oficina. entre los que se cuentan: .000 El monto solicitado se requiere principalmente para la compra de los reactivos de laboratorio de calidad en biología molecular o de la mayor pureza disponible.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN 79 CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA SOLICITUD DE APOYO JUSTIFICACIÓN DE REQUERIMIENTOS FINANCIEROS Honorarios por servicios profesionales Importe solicitado: 20. materiales y útiles diversos Importe solicitado: 163.000 El apoyo a este rubro con el monto de N$ 20.000 El apoyo solicitado en este rubro es para solventar los gastos de publicación de artículos de investigación y divulgación en revistas internacionales. Artículos. Ediciones e impresiones Importe solicitado: 6. 80 — — — — — — — — — — — — — — — — EJEMPLO I vectores (plásmidos) comerciales: pUCl9. . Hind III. medios de cultivo para crecer bacterias. etcétera). tanques de C02 y aire ultrapuro. membranas de nitrocelulosa para análisis de Northern blots. reactivos para la preparación de soluciones amortiguadoras.000 para el pago de consultas a bases de datos especializadas como SECOBI. medios de cultivo para crecer células eucariónticas.000 Se requiere el monto de N$ 5. cloranfenicol marcado con 14C. película y emulsión fotográfica para la revelación de radiactividad. coctel para líquidos de centelleo. p9. solventes y reactivos para la cromatografía de capa fina. Sma I. Documentos y servicios de información Importe solicitado: 5. así como para la compra de software de discos compactos con información específica en el área de biología molecular. etcétera. etcétera.12albCAT. suero fetal de ternera para cultivo de células. colágena tipo I marcada con 14C. enzimas de restricción (EcoRI. acetil CoA. reactivos para la extracción de ARN (ARNzol). antibióticos para medios de cultivo. PEPCK/ bHG. Sambrook. Jakoby. Kenneth. 2nd Ed. Arias. D. Llarner.2y3 J.). Lewin.. Maniatis. —Methods in pharmacoiogy: Molecular and cellular biology of pharmacological targets. T. 2nd Ed. — Molecular cell biology. StriessningJ (Eds). 3a. Inglaterra. Glossmann H. W. — Gene Expression. para apoyo didáctico del programa de doctorado de biología molecular en medicina. Brody. Cold Spring Harbor Laboratory.E Fritsch y T. — Human Pharmacoiogy: Molecular to Clinical. (comps. . Ed Oxford University Press.900 En este rubro se solicitan 5. Molecular Cloning: A laboratory Manual. J. Oxford. D.900 nuevos pesos para la compra de material bibliográfico de consulta básica de ediciones actualizadas en el área de biología molecular y terapia génica. Vols l.B. E. Raven Press. Nueva York. 2nd Ed. Algunos de los libros que se pretende adquirir son: — The Liver. Darnell Jr.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN Libros Importe solicitado: 81 5. M. — Genes V B. H. Karin Ed. Lodish. 1994. Popper. Shafrit. T. M. Nueva York. Cell and Tissue Specificity M. 1989. H. Schachter. Biology and Pathobiology. ed.W.. 761) es un equipo de medición básico necesario en la preparación de soluciones amortiguadoras y de medios de cultivo entre otros. La máquina de hielo frappé también es un equipo de amplio uso dentro de un laboratorio.700 c/u) son indispensables para la separación y resolución de las muestras de ARN sometidas a análisis de Northern lot. .750).500 Se solicitan $ 236.82 EJEMPLO I Equipo de laboratorio Importe solicitado: 236. equipo indispensable para la obtención de agua de alta calidad. en los cuales recae importantemente la buena funcionalidad de las líneas celulares con las que se pretende trabajar. En este recipiente se puede almacenar por periodos prolongados el nitrógeno líquido. en el cual se sumergerán las muestras.500.00 en este rubro para adquirir diversos equipos de laboratorio que se requieren directa o indirectamente para la realización de gran parte de los ensayos experimentales. utilizada para la preparación de soluciones. El tanque de almacenamiento de nitrógeno líquido ($ 9. El pH metro ($ 14. necesaria para la producción continua de hielo.887 c/u) junto con sus fuentes de poder respectivas ($ 3. Desionizador de agua ($ 22.164) se requiere para la congelación instantánea y la conservación de diversas muestras biológicas por nitrógeno líquido. la cual se emplea durante el desarrollo de experimentos en los que se requiere mantener a temperaturas bajas las muestras biplógicas. Las cámaras de electroforesis ($ 3. . La formación de una red electrónica local dentro del Instituto de Biología Molecular conectada al CEDOSI y configurada para satisfacer los requerimientos específicos de nuestra área de Investigación permitirá el acceso directo a las fuentes de generación de conocimientos del área. es la comunicación electrónica a través de redes computacionales de ámbito local e internacional. de G. se ha vuelto una de las tareas enormemente facilitadas por el uso de este medio. forma parte de la red de cómputo de la Universidad de Guadalajara y cuenta con el acceso a la red de cómputo internacional y con la capacidad para brindar conección a gran número de redes locales dentro de la misma Universidad. un auxilio rápido y efectivo en la investigación desarrollada por nuestro grupo.84 EJEMPLO I Una de las formas de comunicación que cada día va siendo más utilizada por las ventajas que presenta. donde la obtención de datos diversos y el establecimiento de comunicaciones personales interactivas. El Centro de Documentación y de Sistemas de Información (CEDOSI) del Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la U. por decir algunas de las funciones posibles. finalmente. obteniendo. . R 1 1.90 US Dolar 1.164 1.750 22.650.222 2.570. Marca Cole-Parker País de origen: Estados Unidos Valor unitario en moneda extranjera: Valor total en moneda extranjera: Proveedor: País de origen: Estados Unidos Valor unitario en moneda extranjera: Valor total en moneda extranjera: Proveedor: Bio S.409.500.750 País de origen: Estados Unidos Valor unitario en moneda extranjera: Valor total en moneda extranjera: Proveedor: Casa Rocas Máquina para hielo Frappe.90 US Dolar Dehionizador Barnstead con 4 cartuchos 22.00 US Dolar 1.208 1 7.00 US Dolar 2.00 US Dolar 3.650.21 Lt.A.EXPRESIÓN Y REGULACIÓN DEL GEN CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA Equipos de laboratorio 236.208 17. de R. dimensiones 62.222 .00 US Dolar 1.00 49. S.50 Importe solicitado: Valor Valor Descripción unitario Cantidad Unidad total Tanque de nitrógeno theo 20.00 US Dolar 7.00 9.164 País de origen: Estados Unidos Valor Unitario en moneda extranjera: Valor total en moneda extranjera: Proveedor: Bioselec.00 US Dolar 49.7% 36 1.500.409.570.L.00 1 17.00 1 3. 9. 590 1.00 1 1.680 . Hayes Int 1. S.050 2. de C.050 Ptoveedon Hersymac Sistemas CD Rom Interno Mitsumi doble velocidad 1.86 EJEMPLO I CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA Equipo de cómputo Importe solicitado: 54.590 Proveedor: Comlex Servidor Hewlett-Packard 486 DX2/66 Mhz.00 1 472 1.400 BPS.00 1 2.00 17.680 Proveedor: Hersymac Sistemas 1 17.000 Proveedor: Capacitación y soluciones en computación y redes (Comlex) Impresora HP LaserJet II 4.A.00 1 4.6ÍK Descripción Valor Valor Cantidad Unidad unitario Drive 1.2 KB 5 1/4 472 total 1.V Modem Fax 14. 20 MB ram.00C Proveedor: MHS. 720 MB 1.00 1 780 780 Proveedor: Hersymac Sistemas Scanner Genius GS-CI05+color 1. EJEMPLO II MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN APLICADA Y DE DESARROLLO TECNOLÓGICO . . . . (Anexar hojas).1 Antecedentes y Justificación Especificar las razones por las que se desea llevar a cabo este proyecto y los beneficios científicos que se espera se deriven del mismo. Incluir cartas de intención de las instituciones con las que se desee colaborar. (Anexar hojas). 4 Calendario de actividades Llenar la forma I adjunta. además de la aquí solicitada. especifique las acciones en las que se prevé la participación internacional. así como de la industrialización y comercialización. 6 En caso de proyectos de riesgo compartido. 7 Cooperación internacional Únicamente para proyectos de este tipo. 3 Propuesta del plan de trabajo. EMPRESAS O PERSONAS QUE ESTÁN INTERESADAS EN EL APROVECHAMIENTO DE LOS RESULTADOS DEL PROYECTO (anexar documentos oficiales . (Anexar hojas). 5 Resumen del proyecto Llenar la forma II adjunta. (Anexar hojas). así como las metas que se deriven de ellos. indicando en su caso las gestiones realizadas y su grado de avance. VINCULACIÓN CON EL SECTOR PRODUCTIVO DE BIENES O SERVICIOS (En caso de proyectos de desarrollo tecnológicos) 1 INSTITUCIONES. UNA POR AÑO. (Anexar hojas). tanto generales como particulares. suministrar la información sobre el oferente y el usuario. 8. Señalar los antecedentes que existen en la literatura al respecto relacionando en el texto la bibliografía pertinente. incluyendo metodología y procedimientos. Incluya en anexos toda la información que considere relevante para la evaluación de su proyecto. 2 Objetivos y Metas Señalar los objetivos. IV. 2 Personal académico y de apoyo con el que cuenta la institución para la realización de este proyecto. de los conceptos incluidos como participación del CONACyT en las formas de PRESUPUESTO TOTAL DEL PROYECTO Y DESGLOSE DEL PRESUPUESTO REQUERIDO. VI. SEÑALE SI EXISTEN (anexar documentación comprobatoria): PERFIL DE FACTIBILIDAD SI ESTUDIO DE MERCADO SI DISPONIBILIDAD DE MATERIA PRIMA SI ESTUDIOS DE PREINVERSIÓN SI V. las formas III y IV anexas de PRESUPUESTO TOTAL DEL PROYECTO Y DEGLOSE DEL PRESUPUESTO REQUERIDO. que se entregará después de la recepción de los informes finales técnicos y financiero. (Anexar hojas). niveles académicos y el número de los recursos humanos que se forman a través del proyecto. etc. RECURSOS Y PRESUPUESTOS 1 Infraestructura con que cuenta la institución para desarrollar el presente proyecto. (Anexar hojas). (Anexar hojas). para la realización del proyecto. 3 Llenar con cifras expresadas en MILES DE PESOS. tal Como instalaciones. información bibliográfica. materiales. Tomar en cuenta que del presupuesto total otorgado por CONACyT se retendrá el 10%. (Anexar hojas). FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS 1 Indicar las áreas de especialización. 4 justifica! la necesidad. equipo. .MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 93 2 ENTIDADES QUE ESTÁN DESARROLLANDO ACTIVIDADES SIMILARES O RELACIONADAS CON EL PROYECTO PROPUESTO: 3 EN CASO DE QUE ESTE PROYECTO ORIGINE DESARROLLO(S) O INNOVACIÓN(ES) INDUSTRIAL(ES). Esto se debe. Por ello la actividad de administración ha cobrado tanta importancia en nuestros días. Una característica común a las organizaciones es que todas ellas son administrables (Resenos. el hombre ha encontrado la forma de realizar las grandes empresas que demandan las necesidades modernas. 1982. PROTOCOLO ANTECEDENTES Una de las características de nuestra sociedad moderna es el predominio que han tomado las organizaciones en su estructura. en buena medida. Si bien todas las organizaciones son administrables. 1967). Dentro de este proceso administrativo está el proceso del control de gestión. de publicidad. No es lo mismo administrar fábricas de calzado. incluso para realizar investigación científica y tecnológica requerimos de organizaciones. Perrow. firmas de ingeniería u organismos de investigación científica y tecnológica (Mintzberg. casi para atender cualquiera de ellas se requiere de una organización. de televisores. 1976). lo cierto es que no todas se administran en la misma forma. y tan es así. a través de las organizaciones. que se reconoce que nuestra sociedad es una sociedad de organizaciones (Etzioni. que administrar empresas cinematográficas. Resenos. La característica común de las primeras es que son . 1972. a que.EJEMPLO II III. de autos. 1976). por lo tanto. la creatividad. o el control están basados en la experiencia. por lo cual generalmente se controla el dilema de la eficacia a través de la ineficiencia y en atención a las necesidades de los expertos y los costosos medios de enlace. En cambio. La autoridad no se ejerce en la forma tradicional de las empresas de producción masiva. en general. la originalidad. son a las que los investigadores . a la vez que se produce el artículo. se trata de que los expertos ocupen el lugar que les corresponde dentro de otros equipos y la potestad. de tal manera que propicie el empleo de los medios de enlace. donde el proceso de control pone énfasis en el cumplimiento de las rutinas preestablecidas. ésta se va adaptando o creando. está todo calculado y predeterminado para realizarse con una tecnología que estandariza las actividades y que el control cuida de que así suceda. las operaciones se autodirigen y se autocontrolan. se controla. no en la autoridad lineal administrativa. el control descansa en la adaptación mutua de los expertos que trabajan en forma independiente para perfeccionar sus habilidades. la innovación. Parece que nada puede realizarse si antes no se ponen todos de acuerdo. en serie. sino más bien. la innovación. la característica común de las segundas es que producen artículos únicos donde se ha puesto en juego la creatividad. que llamaremos creativas. Estas organizaciones. es decir. lo que ocurre sólo una vez. la cooperación. en el logro de las cuotas de producción y ventas convenidas. y no hay una tecnología conocida. la administración apoya el cambio. En esencia.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 95 organizaciones de producción masiva. En la teoría de control se han desarrollado estructuras teóricas útiles. Para ilustrar este modelo. En Klein. y la conducta es iniciada desde el propio deseo de resolver aquellas discrepancias (Carver y Scheier. 1982:13). que en su forma consta de cuatro elementos: normas o metas de referencia.96 EJEMP LO II han tenido menos oportunidad de estudiar. El componente afectivo emerge de las discrepancias percibidas entre los propios deseos y los estados en curso. Las conductas complejas se intenta explicarlas a partir de la jerarquía de los lazos de retroalimentación. En la teoría del comportamiento. comparador. 1987). y ejecutor o función de salida (Powers. frecuentemente se toma como referencia el ejemplo del termostato que controla la temperatura de una habitación. 1989). la retroalimentación involucra algo más que un sensor mecánico del ambiente. como son los lazos de retroalimentación hipotétizados en la cibernética (Wiener. sensor o función de entrada. las discrepancias de la retroalimentación de orden elevado pa- . Este es un modelo mecánico simplista. submetas y normas. la teoría de control tiene dos elementos primarios: el cognoscitivo y el afectivo. En los sistemas de control humano. 1982. (Mintzberg. 1973). 1948). El componente cognoscitivo consiste en metas internalizadas. el procesamiento de la información relativa al propio estado en curso y a la comparación de ese estado con las metas. donde dada una cadena de metas. ya que las metas y normas humanas no son tan inflexibles y tan predeterminadas y casi siempre hay alternativas para reducir las discrepancias (Lord y Hanges. un examen de estos modelos revelará algunas inconsistencias. HollenbeckyWilliam. las formas de caracterizarlas. más que una teoría del control. 1989). la importancia de las metas comprometidas. Campion y Lord. sino que las diferentes perspectivas los limitan para proporcionar un modelo comprensivo. la inconsistencia de las suposiciones y tratamientos. La teoría del aprendizaje social aborda. la competencia de metas múltiples. fundamentalmente la autorregulación. 1987. Fisher eligen. 1984). las tareas estratégicas y la modificación de metas sobre la marcha (Campion y Lord. Sin . 1982). La teoría del conjunto de metas que ha adoptado la teoría del control. 1982. la jerarquización de las metas. incluyendo la existencia de la interdependencia y las acciones recíprocas de submetas. 1989). proporciona explicaciones importantes de aspectos. no permiten aterrizar en un modelo coherente a través de la simple mención de la literatura disponible (Klein. No obstante que alguno de estos autores ha trabajado para elaborar un modelo de la teoría de control de la motivación del trabajo. El problema no es que los modelos sean incongruentes con los principios de la teoría de control o con los hallazgos empíricos.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 97 san a ser las normas de orden bajo. Tayloro. Por ejemplo un plan jerárquico para aumentar las ventas a través de incrementar los contactos (Klein. Además. Varios autores han reconocido el poder explicativo de la teoría del control y la han usado para examinar la conducta en las organizaciones (por ejemplo. tales como: el origen de las metas personales. Lo más valioso de la meta es la fuerza de la reacción. Observando las atribuciones. categorías. pero si se está abajo de la norma. y. implicaciones. Además. resultarán efectos negativos. aunque es probable que muchos de los administradores que desconocen la teoría tengan este concepto limitado. existen paralelismos entre las dos perspectivas. El desarrollo de un modelo de control incluye una nueva estructura conceptual que abarque los conceptos de regulación. autorregulación por aprendizaje. 1989). La teoría de la satisfacción aborda las reacciones afectivas que predice la teoría de control. incluyendo las similitudes entre expectativas de eficacia y expectativas de resultados. y que dependen primeramente de la dirección y magnitud de la discrepancia actuación-meta y la importancia de la meta (Taylor etai. 1984). atenuadas cuando se atribuye a causas externas. en cambio. metas. esto producirá reacciones positivas. 1977. Bandura y Cervone. complejidad. las reacciones emocionales pueden ser amplificadas cuando el éxito o fracaso es atribuido a causas internas. y sus interacciones . De acuerdo con la teoría del aprendizaje social. combinaciones. la motivación involucra un proceso cognoscitivo en el cual las metas son comparadas con conocimiento de la propia actuación (Bandura.98 EJEMP LO II embargo. las discrepancias negativas son percibidas como lo que crea disatisfacción y motiva cambios correctivos (Klein. 1983). La teoría de control de gestión o administrativo está más allá de verse como un simple mecanismo de regulación. La retroalimentación indica que si uno va más allá de la norma. 1976).MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 99 de retroalimentación en sus diversas manifestaciones e implicaciones (Resenos. de otros constructos teóricos sobre procesamiento de información. cómo se evalúan. lo anterior aún no es suficiente para un modelo de control de gestión de organismos de investigación científica y tecnológica. porque el concepto de control va más allá de la verificación con lo planeado. se trata de controlar la creatividad. el matiz restrictivo. de efectos afectivos. 1974. JUSTIFICACIÓN Este proyecto tiene dos propósitos fundamentales: 1) Proporcionar a los directores y gerentes de organismos de investigación aplicada y de desarrollo tecnológico un . criterios de jerarquía y discriminación. aprendizaje social. y menos aún se tienen medios. y muchas veces la genialidad. procedimientos. cuando menos. da la impresión de que desaparece para transformarse y adquirir énfasis sólo en el apoyo para facilitar y promover la innovación y la creatividad. Todo esto para un modelo general de control de gestión. son parámetros o criterios que aún no han sido suficientemente elaborados. Cómo se miden. de motivaciones. y a veces coercitivo que tiene el control en las organizaciones de producción masiva. o al menos cómo se pueden apreciar. y en este sentido. la capacidad innovadora. Sin embargo. o criterios para apoyar y fomentar la creatividad y la innovación. 2) Aportar al acervo de la práctica y del conocimiento científico de la administración. son inadecuados. en forma tal. la creatividad y la innovación de los organismos dedicados a la investigación aplicada y del crecimiento tecnológico.' 191 -215. (1977). en forma más específica y con mejores resultados. pp. y cuya aplicación. los criterios. orientar y fomentar la productividad. "Self-Efficacy: Toward a Unifying Theory of Behavioral Change". . 84. Procede lo anterior a partir de su enlace con la planeación estratégica. Con ello se pretende que el modelo de control se constituya en un elemento adhoc que apoye el incremento de la racionalidad administrativa. disminuyendo a la vez las extrapolaciones indiscriminadas de modelos y métodos de control de organizaciones que operan dia-metralmente opuestas. por lo mismo. entorpecen su funcionamiento y sus operaciones.100 EJEMPLO II modelo de gestión que contenga los elementos clave y de aplicación más general para la administración de estas instituciones. crecimiento y desarrollo de estos organismos de investigación. que estos elementos propicien el desarrollo de lo que miden y evalúan. A. de manera que permita a esos directivos conducir y retroalimentar el funcionamiento. Psychobgical Review. indicadores y parámetros que permitan controlar. en lugar de controlar para el logro de los objetivos de la investigación. y que. BIBLIOGRAFÍA Bandura. Campion. 30. (1972). y D. "A Framework for the Comparative . (1989). 150-172. 3-20. Behavioral Science. Cervone (1983). 32. Unión Tipográfica Editorial Hispano Americana. Mintzberg. pp. pp. "Self-Evaluation and Self-Efficacy Mechanism Goberning the Motivational EíFects of Goal Systems". "A Control Systems Conceptualizations of the Goal Setting and Changing Process". Ch. reimpresión. y P. 265-287. Self-Focus. HJ.H. Hollenbeck. México. pp. y M. R. Scheier (1982).G. A. Etzioni. PsychologicalBoulletin. "Estructuras de organización. 204-211. 161-178. pp. C. la. Organizaciones Modernas. A. Williams (1987). Perrow.S. "Control Theory: A Useful Conceptual Framework for Personality-Social Clinical and Health Psychology". M.A. Carver. pp.G. Hages (1987). Klein. 72. "An Integrated Control Theory Model of Work Motivation".F. Henry (1982). and Goal Setting Process". Lord (1982). pp. J. 45. 111-135. "A control Systems Model of Organizational Motivation: Theorical Development and Applied Implications". 1017-1028. Biblioteca Harvard de Administración de Empresas. 14. Academy of Management Review. pp. Lord. y R. 330. 92. OrganizationalBehavior andHuman Performance. "Goal Importance. (1967).MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 101 Bandura. ¿Por moda o por necesidad?". y GR. Journal of Personality and Social psychology. Journal of Applied Psychology.R. Taylor. Cambridge. (1973). 14. 317. MIT Press. "El control administrativo". Resenos. (1976). E. "Los organismos sociales y la administración". Organization. 81-124. C. BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA General Alien. Aldine. Research in Personnel and Human Resources Management. 2. Investigación Administrativa. Fisher e D. TJ. (1977). Burgelman. "Control administrativo y equilibrio".S. pp. Cibernetics: Control and Comunication in the Animal and the Machine.102 EJEMPLO II Analysis of O rganizaúons". Stewart y David Dunkerley (1980). Robert A. Powers. Cambridge. E. 13-18. Resenos. y Modesto A. Weiner. Mass. 9-17.T. 32. Investigación Administrativa. 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Ralph y Alien.L. ASQ27(1): 81-104. y L.106 EJEMPLO II Trabajo en equipo Crouch. (1986). SJ. Andrew (1987). Katz. "The Effects of Group Longevity an Project Communication and Performance". (1986). Paul (1982). TJ. Commings (1983). Sage Pu-blication. AMJ29(4): 715-726. J. Ralph (1982). Katz. 32:370-398. Haré. OBJETIVOS 1. Identificar los elementos (normas. 5. 3.1 Reunir una muestra significativa de organismos de investigación aplicada y de desarrollo tecnológico del sector público en el área metropolitana. METAS 1. Organizational Behavior and Human Performance. Integrar un modelo generalista de control de gestión que considere las características y el funcionamiento distintivo de este tipo de organismos.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 107 dback: A Preliminary Investigation". 4. 2. 1. Identificar las características distintivas que presentan los organismos mexicanos de investigación aplicada y de desarrollo tecnológico que inciden de manera preponderante en la estructura de los sistemas de control que actualmente están operando. Determinar el estado actual del control de gestión en la praxis de los organismos de investigación. 13: 244-256. Adaptar. . estándares y parámetros) más generalizados del control de gestión de los organismos de investigación.2 Identificar la estructura de organización y de funcionamiento. integrar y desarrollar algunos métodos y procedimientos fundamentales que apoyen la realización. a partir de los resultados del punto 2.11 Determinar los factores o fenómenos limitantes o po-tencialmente limitantes del funcionamiento de los modelos de control. 1.9 Integrar un modelo de control de gestión teórico derivado de la revisión bibliográfica.7 Derivar. PLAN DE TRABAJO Este plan de trabajo se apoya en las siguientes consideraciones sobre el control de gestión: .4 Identificar los problemas operativos principales de control de gestión.1 integran un modelo. 1. 1.8 Determinar sus alcances y limitaciones. un sistema o un procedimiento de control. e integrar el modelo de control de gestión de la praxis detectada. los modelos de control de gestión que funcionan en los organismos de investigación. cómo se dan las funciones de control. qué elementos utilizan. en su caso.6 Determinar si los elementos identificados en el punto 2.10 Contrastar el modelo de control teórico contra el de la praxis. 1.i 1. qué aspectos cubren. 1. qué actividades realizan y a la vez detectar cómo deberían ser para las instituciones que no lo tienen establecido.3 Identificar las actividades distintivas.2. 1.5 Conocer cómo se da el control de gestión o. 1. 1. 1. compañías publicitarias. . participación en congresos o simposium.110 EJEMPLO II 1.4). a partir de la primera aproximación a un modelo de control de gestión (punto 1. Selección de una muestra de organismos de investigación públicos del área metropolitana 2.4 Publicación de avances.* 3.1 Se obtendrá un censo de organismos de investigación. 2.). procedimientos.3 Se integrará la muestra con el procedimiento de entrevista directa dirigida por alguna de las clasificaciones del punto 2.3 Desarrollos teóricos y empíricos de modelos de control específicos para los organismos de investigación y para otras organizaciones creativas (ejemplo.1 Se estructuran preguntas concretas sobre aspectos operativos.5 Publicación de avances. indicadores. métodos. 1. empresas de consultoría.2 Desarrollos teóricos y empíricos de modelos de control generales. Diseño del cuestionario 3. firmas de ingeniería. etc.2 Se clasificará bajo diversos criterios. empresas cinematográficas. etc. 2. estándares.. 2. 1.4 Primera aproximación a un modelo de control teórico para organismos de investigación. participación en congresos o simposium.2. sistemas.* 2. . CALENDARIO DE ACTIVIDADES AÑO DE 1991-1992 . sus sistemas administrativos y de control son o deberían ser diferentes. En las organizaciones de investigación existe incertidumbre y riesgos de difícil previsión y evaluación sobre lo que se quiere lograr y cómo se va a lograr. Objetivos: • Tipificar a los organismos de investigación aplicada y de desarrollo tecnológico en atención a las características . indicadores y parámetros que dirijan. se sabe que se va a hacer con la materia prima. Justificación: Proporcionar a los directivos de organismos de investigación un modelo de control de gestión específico para este tipo de instituciones que contenga criterios. Por lo anterior sus modelos. qué. producen artículos únicos provenientes de la creatividad y de la innovación. y cuánto podemos producir con ella. retroalimenten y fomenten la creatividad y la innovación.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISiMOS DE INVESTIGACIÓN 115 RESUMEN DEL PROYECTO (Ceñirse a los espacios en cada rubro) Antecedentes: Las organizaciones de investigación aplicada y de desarrollo tecnológico son diferentes a las organizaciones de producción masiva o en serie. En las organizaciones de producción masiva las cuotas de producción y ventas están predeterminadas. Identificar los elementos de control de gestión de aplicación general. Metas: • • • • Conocer el control de gestión de diversos organismos de investigación. Analizar los elementos que caracterizan a cada modelo de control. teóricos y prácticos. Desarrollar métodos y procedimientos generales para el control de gestión.116 • • • • EJEMPLO II distintivas que inciden en la estructura de los sistemas de control de gestión o las funciones que practiquen como control de gestión. teóricos y prácticos. Validación del modelo de control administrativo en su caso real. teóricos y prácticos. Integrar un modelo general de control de gestión para organismos de investigación. Determinar el estado actual del control de gestión de los organismos de investigación del área metropolitana. Identificar normas y parámetros de trabajo. Identificar métodos y procedimientos de trabajo. Metodología: Investigación bibliográfica e investigación empírica a través de cuestionarios. . internamente. presentan la posibilidad de generar criterios y herramientas de alcance global. Por medio de la presente. estimamos que el desarrollo de estudios y modelos de control de gestión. Consideramos que la información y la metodología que se produzcan a través de dicho proyecto nos serán de utilidad para probar.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 117 CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA YTECNOLOGÍA Circuito Cultural Universitario 04515 México. bajo el título: "MODELO DE CONTROL DE GESTIÓN PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN APLICADA Y DESARROLLO TECNOLÓGICO". de la Sección de Graduados de la Escuela Superior de Comercio y Administración del IPN. Edmundo Resenos Díaz.F. para integrar sus sistemas de seguimiento y análisis institucional. enmarcar y complementar la infraestructura que el HE ha venido desarrollando. como los que se propone abordar el proyecto de referencia. . D. susceptibles de coadyuvar en el reforzamiento de la administración de las instituciones de investigación en el medio mexicano. Asimismo. me permito manifestar a ustedes que el Instituto de Investigaciones Eléctricas tiene interés en aprovechar los resultados del proyecto de investigación propuesto por el Dr. Carlos Manuel García Velasco Investigador asociado y tesista doctoral Tema propositivo: El control de gestión de los desarrollos tecnológicos. . Anahí Gallardo Velázquez Tesis doctoral Tema propositivo: Las políticas gubernamentales y su incidencia en el control de gestión. Alejandro Ramírez Iglesias Tesis doctoral Tema propositivo: Indicativos de evaluación de gestión de la innovación en el diseño de prototipos. José Romualdo Rosas Vázquez Tesis doctoral Tema propositivo: Metodología para tipificar productos y servicios tecnológicos en centros de investigación y desarrollo.I1: EJEMPLO II V. FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS Ma. 4 Proyectores de transparencias 4 Proyectores de cuerpos opacos Información bibliográfica 8300 Libros del área de la administración o relacionados con esta área.MODELO DE CONTROL PARA ORGANISMOS DE INVESTIGACIÓN 119 VI. 148 Títulos de publicaciones periódicas del área de la administración o relacionadas con la misma. RECURSOS Y PRESUPUESTOS Infraestructura Instalaciones Cubículos con mobiliario adecuado Equipo Equipo audiovisual 1 Proyector de películas de 8 mm. . DESGLOSE DEL PRESUPUESTO REQUERIDO (En miles de pesos) SI EL PROYECTO CONTEMPLA MÁS DE TRES AÑOS. USAR UNA HOJA ADICIONAL . 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