Guía de Practicas de Biología Celular y MolecularUniversidad Ricardo Palma Biología Celular y Molecular Guía de Prácticas Lima – Perú 1 Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma UNIVERSIDAD RICARDO PALMA FAMURP Dr. Elio Iván Rodríguez Chávez Rector Dr. Manuel Huamán Guerrero Decano de la Facultad de Medicina Humana 2 Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Instrucciones Generales El estudiante ingresará al laboratorio vistiendo el mandil blanco manga larga (largo). Y a la hora indicada en la Guía de Matricula. Esta prohibido Fumar, Comer y Beber dentro del laboratorio. Todo material biológico será manipulado con guantes y según lo requiera la práctica se utilizara mascarilla. Está prohibido pipetear con la boca las soluciones químicas. Los alumnos participarán activamente durante el desarrollo de cada práctica como parte de su evaluación. Antes de iniciar la practica correspondiente el alumno rendirá un test para verificar que posea los conocimientos básicos introductorios y conozca: Conceptos teóricos básicos para esa practica Los objetivos de cada práctica. El material y equipo de laboratorio necesario para la realización de dicha práctica. Material de uso permanente (obligatorio) El material obligatorio y de uso permanente para cada practica constará de lo siguiente: Material indicado en la guía de práctica. Laminas porta objetos: una caja por mesa de trabajo. Laminas cubreobjetos: una caja por mesa de trabajo. Guantes descartables: dos pares por alumno. Mandil blanco largo (manga larga). Guía de práctica y colores. Presentación de resultados Los resultados serán presentados al finalizar la práctica en el formato respectivo. Toda la guía de práctica será presentada al finalizar el semestre académico. 3 Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma CRONOGRAMA DE PRACTICAS 2013 I SEMANA 18/03 al 22/03 25/03 al 29/03 01/04 al 05/04 08/04 al 12/04 15/04 al 19/04 22/04 al 26/04 29/04 al 03/05 06/05 al 10/05 13/05 al 17/05 20/05 al 24/05 27/05 al 31/05 03/06 al 07/06 10/06 al 14/06 17/06 al 21/06 24/06 al 28/06 01/07 al 05/07 TITULO DE LA PRACTICA Reconocimiento de materiales y equipos de laboratorio Microscopía Niveles de organización de los seres vivos Medición de poblaciones celulares Interacción de sistemas autopoyeticos eucariotas multicelulares y procariotes. Organización celular: Células Procariotas y Eucariotas Receptores de Membrana: Antígenos sanguíneos EXAMEN PRACIAL Permeabilidad de la Membrana Celular Identificación de Citoesqueleto y Organelas celulares Cromatina Sexual: Cuerpo de Barr Identificación del Núcleo Interfásico División Celular Extracción de ADN y Técnicas en Biología Celular y Molecular Gametogénesis EXAMEN FINAL 4 esta solución debe tener la misma concentración global de soluto que la sangre del paciente: debe ser isotónica. Existen dos clases de proteínas de transporte de membrana.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA N° 8 PERMEABILIDAD DE MEMBRANA CELULAR I) INTRODUCCIÓN: La bicapa lipídica de las membranas celulares es permeable a moléculas pequeñas no polares como el oxigeno y el dióxido de carbono y a moléculas polares muy pequeñas como las moléculas del agua. Son las proteínas de transporte específicas (proteínas transportadoras carriers y las proteínas de canal) las responsables del tránsito selectivo de las moléculas pequeñas a través de la membrana permitiendo a la célula controlar la composición del citoplasma. La bicapa lipídica es sumamente impermeable a la mayoría de las moléculas hidrosolubles de gran tamaño y a todos los iones. metabolitos e iones a través de la membrana plasmática y las membranas internas de las células depende de proteínas de transporte de membrana. proteínas transportadoras y proteínas de canal. transportando nutrientes moleculares pequeños con ella. La osmosis es de gran significado práctico. el interior de los eritrocitos tendría mayor concentración de soluto (menor concentración 5 . La transferencia de nutrientes. El agua se mueve con facilidad a través de una membrana semipermeable de una región con menor concentración de solutos a una región con mayor concentración de solutos. moléculas pequeñas y los iones hidratados. Este proceso se denomina osmosis. Si se usara agua pura. a saber. Las membranas celulares contienen una diversidad de proteínas de transporte y cada una de ellas es responsable de la transferencia de un tipo particular de soluto a través de la membrana. en los pacientes que se deshidratan por enfermedades a menudo requieren de agua y nutrientes por vía intravenosa. Las membranas semipermeables permiten pasar el agua. No obstante bloquean el pasaje de las enzimas y proteínas sintetizadas dentro de la célula. La diferencia en las concentraciones de soluto dentro y fuera de una célula da origen a la presión osmótica y el agua ingresa en la solución más concentrada en el interior de la célula. pero con el tiempo van entrando las moléculas de etilenglicol. que se expresará en una hinchazón de la membrana espermática. generalmente. 6 . es decir. en lugar de la suspensión turbina de los glóbulos rojos. Estos cambios se inician cuando el espermatozoide ha reacomodado sus proteínas de membrana que le confieren integridad a la membrana espermática. casi todo lo que se conoce sobre transporte de membrana se ha hecho utilizando el modelo del "eritrocito fantasma". Evaluar la madurez de la membrana espermática. la hipertonicidad. empiezan a hincharse rebasando el límite de turgencia de manera que la estructura molecular de la membrana queda alterada permitiendo la salida al espacio extracelular de la hemoglobina. En la práctica. necesita de ciertos cambios morfofisiológicos para poder adquirir capacidad fértil. si sobrepasamos este límite. El espermatozoide humano. II) OBJETIVOS Medir el tiempo de penetración de diversas sustancias observando la hemólisis de glóbulos rojos humanos. La situación opuesta.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma de agua) y entraría el agua a la célula. el agua ingresa al interior en un intento de llegar al equilibrio osmótico. Esta hinchazón se aprecia. Estas aumentan la cantidad de moléculas osmóticamente activas en las células y se absorbe una cantidad correspondiente de agua. los eritrocitos se hemolizan. Reacción hiposmótica de la membrana plasmática: Cuando una célula se expone a condiciones hiposmóticas. Esta reacción de la membrana celular. ocasionaría que la membrana de los eritrocitos sobrepasen el límite de turgencia y exploten (experimentarán lisis). Cuando el espermatozoide es expuesto a condiciones hiposmóticas. En este caso la célula perdería agua y se encogería (crenación) El tiempo de Hemólisis: Se usa para medir la velocidad de penetración de sustancias en los eritrocitos. lo cual es un indicador de la integridad de la membrana y de su actividad fisiológica normal. La membrana plasmática sólo puede extenderse hasta cierto punto sin que se modifiquen sus propiedades. La integridad de la membrana espermática es importante para el metabolismo de los espermatozoides y además sirve para propiciar la interacción espermatozoide-ovocito. Como la célula vació todo su contenido se le llama "eritrocito fantasma". Se expresa por la aparición brusca de una solución roja transparente. en el extremo de la cola del espermatozoide que es la zona más sensible al shock hiposmótico. es un signo de que el transporte del agua a través de la membrana está ocurriendo normalmente. Esta solución se denomina hipotónica. mediante el test de reacción hiposmótica. ocurre cuando la solución intravenosa está más concentrada que el contenido del eritrocito. Al principio el agua abandona la célula y aparece crenación. se colocaran glóbulos rojos en soluciones hipertónicas como etilenglicol. En pruebas de infertilidad masculina. el influjo de agua aumentará el volumen. se considera una muestra como normal cuando el porcentaje de colas de espermatozoide hinchadas es mayor del 60%. se corta una ventana rectangular de 2. Serie de alcoholes 4.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular III) MATERIALES El laboratorio proporciona: 1. Por mesa de trabajo: 01 Muestra de sangre humana Material Indispensable u Obligatorio 02 Instrumentos para medir tiempo de hemólisis. Medio hiposmótico NaCl 0. Algodón. Cartulina Papel cebolla Hilo negro 7 . Gradillas 15. Papel parafilm 16. Pipetas 11. Jeringa 8. * Se extiende una hebra de hilo negro de manera que atraviese la ventana por el centro del eje mayor. Alcohol 10. Microscopio compuesto de campo claro 3. Universidad Ricardo Palma Los alumnos deben traer: Por grupo de practica: 1. Tubos de ensayo 14. Propipetas 12. * Se cubre la ventana con el papel cebolla. deberá ser recolectada en un frasco estéril (frasco para orina de venta en farmacias). (mesa que no presenta el instrumento antes de iniciar la practica será retirada del laboratorio. 9. x 5cm. El instrumento para medir el tiempo de hemolisis: se construye de la siguiente manera: * En un pedazo de cartulina. Agua destilada 6.9 % 7. Papel lente.5 cm. Cloruro de Sodio 0. Muestra de Semen humano: la muestra deberá ser tomada el día de la práctica. Pipetas pasteur 13. Incubadora 2.065 M 5. 8 .9% . 3. se coloca una gota pequeña en un portaobjetos. Se incuba a 36° C por 45 minutos. Después del tiempo de incubación. 2. Adicione 2 gotas de sangre en el tubo. se medirá en función al "tiempo requerido para la hemólisis". Realizar este procedimiento con cada uno de los tubos (uno por uno). y registre en la tabla el tiempo requerido para hemólisis 3. 1. definido como el tiempo total desde la adición de la sangre hasta que el hilo negro del aparato de hemólisis se hace visible. Colocar 3 ml de cada solución en un tubo de ensayo (utilizará un total de 7 tubos) 2. * * Coloque el aparato detrás del tubo de ensayo y se coloca a contra luz de forma que. Repetir para cada solución. Coloque en un tubo de cultivo: 1 gota de semen o de suspensión espermática en 9 gotas de una solución hiposmótica. se cubre con una laminilla y se observa a 40X. hasta poder observar con claridad el hilo negro a través del tubo de ensayo. La velocidad relativa de penetración de cada alcohol. Repita el procedimiento para cada una de las otras sustancias y anote los tiempos Respuesta de la membrana plasmática el espermatozoide ante un shock hiposmótico. Trabaje en pareja y pruebe una solución cada vez. la ventana quede completamente iluminada. etileno-glicol. Como controles se usará: agua y una solución de NaCl 0. Se usará la siguiente serie de alcoholes: metanol. etanol. coloque papel parafilm y homogenice despacio (no agitar) inmediatamente lleve el tubo al aparato de hemólisis y tomar el tiempo.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular IV) PROCEDIMIENTO: Universidad Ricardo Palma Medición relativa de la velocidad de penetración de una serie de alcoholes en eritrocitos humanos. n-propanol y glicerol. procediendo de la siguiente manera: 1. 70: 219-228.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Representación esquemática de un espermatozoide sin respuesta (A) y con respuesta hiposmótica (B). J. 2. Averigüe si la glucosa ingresa más rápido o tarda mucho más que el etileno glicol. Pérez-Pérez M. V) CUESTIONARIO 1. 1984: Development of an assay to asses the funtional integrity of thehuman spem membrane and its relationship to other semen characteristics. Que efectos en el organismo produce el exceso de Metanol y Etanol. Por qué la reacción hiposmótica es una prueba importante en la evaluación de la calidad del semen humano. Introducción a la Biología Celular. Van der Ven HH. Fet. 9 . Editorial Medica Panamericana. Grabo BG. & Zaneveld IJD. Reprod. 2da Edición. 4. VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Jeyendran RS.Explique porque las diversas sustancias tiene velocidades relativas diferentes de ingreso a la célula. Bruce Alberts. Dennis Bray – 2006. 3. 8 M ETANOL 0.) HEMOLISIS Universidad Ricardo Palma OBSERVACIONES Muestra: ……………………………………….9 % METANOL 0.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Hoja de Resultados SUSTANCIAS AGUA DESTILADA NaCl 0.8M n-PROPANOL 0.8 M TIEMPO (seg. Solución: ……………………………………… Estructuras: …………………………………… 10 .8 M GLICEROL 0.8 M ETILENO GLICOL 0. Movimiento de orgánulos internos Microtúbulos: los microtúbulos forman husos mitóticos. La tubulina es la principal proteína. Gracias a sus movimientos coordinados. Los flagelos y cilios son estructuras piliformes ancladas por uno de sus extremos y capaces de ejecutar diversos movimientos con su extremo libre. Ciertas drogas interfieren en la polarización y despolarización. la Euglena. filamentos intermedios y microtúbulos. desempeñan un importante papel en la locomoción. Los filamentos de actina son esenciales para posibilitar los movimientos celulares. depende del ordenamiento de los filamentos de que a manera de rieles de un tren permiten que circulen organelas como los cloroplastos. Microfilamentos: la actina es la proteína más abundante en las células de los mamíferos. como por ejemplo: ciclosis realizado en las plantas. resistentes a los cambios de temperatura y dispuestas en densas redes tridimendionales en el citoplasma que se relacionan y forman parte de la uniones intercelulares. sino que les provee de subcompartimentos funcionales cerrados que constituyen los diferentes organoides 11 . Son estructuras fuertes. que presentan cilios y los tripanosomas. elementos longitudinales de los axones y de los flagelos. Movimiento celular. División celular. Los cilios pueden ser encontrados en tejido epitelial y los flagelos en los espermatozoides. para la adhesividad entre las células o entre células y matrices. Balantidum.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA Nº 9 IDENTIFICACION DE CITOESQUELETO Y ORGANELAS CELULARES I) Identificación de citoesqueleto: El citoesqueleto de las células eucarióticas está formado por filamentos de actina. vinca (esta última se utiliza como drogas antimitóticas en el tratamiento antitumoral. estables. II) Identificación de organelas: Las células eucarióticas se caracterizan por tener un subsistema o nivel de organización de organelas. Funciones del citoesqueleto: Estabilidad y forma celular. insolubles. en estos orgánulos tienen lugar actividades celulares específicas. las organelas se caracterizan por presentar una membrana que separa el compartimiento interno de la organela del entorno citoplasmático. Dentro de los protozoarios tenemos el Paramecium. para determinar la dinámica de la forma celular. y en múltiples niveles para la organización de la superficie celular. son los centríolos. rayos astrales de células en división. alcaloides como la colchicina. los cilios y los flagelos y el huso mitótico. que poseen flagelos. Filamentos intermedios: le dan a la celula un soporte puramente mecanico. etc. Las estructuras especializadas por los microtúbulos. La enorme superficie de membranas internas proporciona a las células no solamente un soporte para la localización ordenada de multiples sistemas enzimáticos diferentes. Estas estructuras definen la forma de las células. El movimiento intracelular. se transfiere al aceptor final. Estas organelas se caracterizan por tener doble membrana que separa su compartimiento interno o matriz del medio citoplasmático. esta es una hemoproteína con amplia distribución en muchos tejidos. entre las cuales se encuentran la separación y asociación de sistemas enzimáticos. oxigeno. constituye el componente terminal de la cadena de acarreadores respiratorios presente en la mitocondria. como el aparato de Golgi y los lisosomas. III) MATERIAL Por grupo de practica: 1. es el componente responsable de la reacción por la cual los electrones resultantes de la oxidación de las moléculas del sustrato. La presencia de pigmentos fotosíntéticos en el cloroplasto. la digestión intracelular de sustancias. es necesario para ello. En la membrana interna de ambas organelas se encuentra una serie de proteínas que define en conjunto la llamada cadena transportadora de electrones. F0. El mayor sistema de membranas corresponde al retículo endosplasmático (RE). por tanto. En cambio en el citoplasma el colorante es reducido a su leucobase. catalizada por las deshidrogenasa.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma membranosos especializados. Utilizar los colorantes adecuados para cada organela.oxidasa. la distribución de cada una de las miles de proteínas diferentes de la célula hacia sus destinos finales. dotación enzimática y propiedades funcionales que lo caracterizan.verdoso. Los lisosomas intervienen en la digestión celular uniéndose a las vesículas endocíticas o fagocíticas constituyendo lisosomas secundarios o fagolisosomas. cada uno de ellos con estructura. Las células eucarióticas poseen organelas que traducen la energía y reciben el nombre de mitocondrias y cloroplastos. así como presentan una estructura denominada complejo F1. Describir el movimiento de cilios y flagelos Explicar las funciones de cilios y flagelos. utilizar colorantes en concentraciones muy diluidas. Numerosos compartimentos rodeados de membrana son responsables de funciones celulares vitales. Esta coloración se debe al sistema citocromo . hace posible observarlos sin necesidad de utilizar colorantes. de donde se originan la mayoría de las organelas celulares. Algunas vesículas provenientes del RE o del Aparato de Golgi. Los lisosomas varían en cuanto a su tamaño y forma y en una célula pueden encontrarse en grandes cantidades. de tal manera que no presenten toxicidad a las células. Tanto los lisosomas como las mitocondrias no pueden ser observados directamente al microscopio óptico. que contienen hidrolasas ácidas (enzimas que degradan polímeros en sus unidades monoméricas). a través del cual y por quimiosmosis se va a formar el ATP. Muestra de semen: (ver procedimiento de la practica 8) 12 . Reconocer lisosomas y mitocondrias e preparaciones frescas. forman orgánulos limitados por membranas llamados lisosomas. Las mitocondrias pueden ser observadas en células vivas mediante coloración con una solución de verde de Janus muy diluida con la cual toman un color azul . Actualmente existen muchas evidencias de que el rojo neutro en concentraciones no tóxicas es tomado por la célula y se concentra en el sistema lisosomal. II) OBJETIVOS Al finalizar la práctica el alumno será capaz de: Identificar los movimientos dependientes de microflamentos y de microtubulos. Solución de rojo neutro (1/20000) 4. Papel lente. Agua estancada en frasco oscuro (recolectaela con 4 días de anticipación y añadirle pocas hojuelas de avena). Hisopos (3 unid. Incubadora III) PROCEDIMIENTO CITOESQUELETO: a) 1.Observación de cilios en Paramecium. 2. Solución de cristal de violeta 3. Regule la entrada de luz. 10. 13 . 2. 4. 5. 3. 4. 3. Pipetas rotuladas 7. Observación de flagelos Diluya el semen humano con suero fisiológico. Solución de verde de Janus (1/10000) 5. Suero fisiológico (en goteros) 2. Material indispensable 2.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular 2. b) 1. Observe al microscopio a 10 y 40 la forma y el movimiento de los espermatozoides. Coloque una gota de Agua estancada sobre un porta objeto y cubran una laminilla. Coloque una gota de la dilución anterior en el portaobjeto y cubra con una laminilla. Ajuste el diafragma para incrementar el contraste. Observe con el objetivo de menor aumento. mezclando una gota de semen y tres de suero. para mejorar el contraste. Hojas de Elodea (planta acuática) Universidad Ricardo Palma Por mesa de trabajo: 1. Observe el movimiento de los cilios en el Paramecium. Pipetas pasteur 6. Después de observar esta preparación coloque una gota del colorante cristal violeta en el tubo de ensayo donde se realizó la dilución.) El laboratorio proporcionara: 1. Tubos de ensayo 8. Gradilla 9. 3. 3. de la muestra de agua estancada con 1 ml de la solución rojo neutro a 37° C por 15 minutos. 2. Observe al microscopio a 10 y 40 . Describa la forma como se mueven los cloroplastos Observación de Cloroplastos Elodea sp. 3. c) 1. coloque la laminilla y observe a 10 y 40. Coloque una gota de la incubación en el portaobjeto. ORGANELAS: a) Observación de lisosomas en protozoarios 1. añadas una gota de agua y cúbralo con una laminilla.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular 6. Revisar la muestra de agua estancada para determinar la presencia de Paramecium. Si se observa Paramecium en la muestra se procederá a incubar 1 ml.- Observación de cloroplastos y movimiento de ciclosis Coloque una hoja del Elodea sobre el cubreobjeto. 2. 14 . Universidad Ricardo Palma Tome una muestra con la pipeta pasteur y colóquelo en un portaobjeto cubra con la laminilla y observe nuevamente. deje secar a medio ambiente.Wesley Iberoamericana .Cuestionario: 1.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Observación de Lisosomas Universidad Ricardo Palma b) 1.Por que reacciona la mitocondria con el verde de Janus? 9. 1997: Biología Celular Ed. Smith C.. 2002. Agregar unas gotas de colorante verde de Janus hasta cubrir la muestra por 10 minutos. Porque? VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Smith C.J. 7.. 8. 1997: Biología Celular Ed.. 4. Observe a 10 x y 40x. Addison .J.A.Si hiciéramos una tinción posterior para fosfatasa acida. De ejemplos de células humanas que presentan cilios y flagelos. veríamos que los gránulos son lisosomas .¿Cuáles son los componentes del citoesqueleto? 2. Escriba la importancia de la mitocondria. Marban Libros. Edit. La Célula. 15 . Ed. Observación de mitocondrias en epitelio bucal Obtenga una muestra de células de epitelio bucal mediante un raspado suave utilizando un hisopo largo... Describa la función que realizan los lisosomas. 2. Addison . Mc Graw Hill. 5.Wesley Iberoamericana Fred H. Realice el frotis extendiendo la muestra sobre una lámina portaobjetos. 3. ¿Qué función tiene el flagelo en el movimiento de los espermatozoides? 3.. En que parte de la mitocondria se localiza la citocromo oxidasa? 6. ¿En que tipo de tejidos se localizan y cual es la función que tienen este tipo de células? 4.A. V .E. Cooper G. y Wood E. Que función cumple los filamentos de actina en el tejido muscular? 5. y Wood E. lavar con agua corriente y deje secar al medio ambiente. 1990: Biología. ..... ………………………………………... Colorante: ……………………………………………... Colorante: ………………………………………….. V°B° Dra..... Célula que observa ……………………………….. Chambers Fecha: …………………. Estructuras: …………………………………………... Colorante: …………………………………………….. ORGANELAS parte a: Muestra: ………………………………………………. Muestra: ………………………………. Reacción que evidencia la presencia de mitocondrias: ………………………………………….Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Hoja de Resultados CITOESQUELETO: parte b..….. Organela: …………………………………………….... ORGANELAS parte b: Muestra: ………………………………………………. 16 ...….. Célula que observa: ………………………………...…….. Micoorganismo: ……………………………….... Corpúsculos o cuerpos de Barr: es una masa condensada de cromatina sexual ubicada en el núcleo de las células somáticas de las hembras debido a un cromosoma X inactivo. A esta observación siguió el desarrollo de una técnica sencilla que permitía detectar cuerpos de Barr en células de mucosa oral. El cromosoma X posee miles de genes que no están presentes en el pequeño cromosoma Y. en condiciones normales. transformándose en heterocromatina. Según la hipótesis de Lyon (propuesto por Mary Lyon en 1966). Esto es debido a un mecanismo de compensación de dosis en el que uno de los cromosomas X de las células de las hembras se inactiva en etapas tempranas de desarrollo. El corpúsculo de Barr solamente se encuentra en las células de la mujer y nunca en las del hombre. descubrió en 1948 una importante estructura celular a la que se denominó “Cuerpo de Barr”. con un tamaño de 0. se puede observar como una masa plano convexo. Esta heterocromatica. 17 . 1995) un Médico Canadiense y un investigador en Medicina. de este modo las hembras tienen el doble de genes localizados en el cromosoma X que los machos. A pesar de estas diferencias. uno de los dos cromosomas X en cada célula somática femenina es genéticamente inactivo. Las células que se reproducen mitóticamente de esas células embrionarias tienen el mismo cromosoma inactivado. las hembras tienen dos cromosomas X y los machos tiene un cromosoma X y un cromosoma Y. El fenómeno de inactivación del cromosoma X es un ejemplo del papel de la heterocromatina en la expresión génica. 1908 – Mayo 4.7 * 1.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA N° 10 CROMATINA SEXUAL Introducción: Murray Llewellyn Barr (Junio 20. las células de las hembras y de los machos tienen una misma cantidad de proteína codificadas por los genes del cromosoma X. En muchos animales. incluyendo los humanos.2 micras. pero que existían excepciones: Las pacientes con síndrome de Turner no tienen cuerpos de Barr. mediante la detección de los cuerpos de Barr en células epiteliales de la cavidad bucal. el embrión humano se desarrolla como macho. Su incidencia es de alrededor de 1/2. a su vez. es una condición que se presenta en los hombres como resultado de la presencia de un cromosoma X extra y cuyo síntoma más común es la infertilidad. Esto confiere a las mujeres que padecen el síndrome de Turner un aspecto infantil e infertilidad de por vida. mientras que en ausencia del Y se desarrolla como hembra. Materiales: La mesa de trabajo deberá traer: 04 Bajalenguas Material obligatorio (por alumno) El laboratorio brindará: Acetorceina Microscopios Aceite de inmersión 18 . Estos hallazgos también demostraron que en presencia de un cromosoma Y. expresándose en la falta de desarrollo de los caracteres sexuales primarios y secundarios. Esta una enfermedad genética y. Los pacientes con síndrome de Klinefelter o síndrome 47XXY si presentan cuerpos de Barr.500 niñas. independientemente del número de cromosomas X. una enfermedad rara caracterizada por una alteración en el cromosoma X o ausencia del segundo cromosoma X en algunas o en todas las células de su cuerpo. Objetivos: Al término de la práctica el alumno sabrá verificar el sexo en forma genética de un individuo.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Como resultado de su aplicación se reconoció que las células femeninas eran “croma tina positiva” mientras que las masculinas eran “cromatina negativa”. Que es la heterocromatina? Hoja de resultados Muestra: …………………………………………………………. 4. Tomar la segunda muestra la cual se va a colocar en un portaobjetos limpio y seco. 2. 19 . Dibuja los resultados obtenidos de las muestras comparativas de hombre y mujer. 10. procura que se coloque una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos. Se obtienen células epiteliales del interior de la mucosa oral. 6. Colorante: ……………………………………………………… Estructura que señala el puntero: ……………………………. Descartar esta primera muestra. 7. localizando las células epiteliales y posteriormente con el objetivo de 100. Cubre con el cubreobjetos y espera aproximadamente 10 minutos. deja secar la muestra al medio ambiente por unos minutos.. entre la preparación y el objetivo de 100... Los cuerpos de Barr son corpúsculos pequeños que se localizan muy próximos a la cara interna de la membrana nuclear. Localiza los núcleos de las células y observa cuidadosamente.Que otros Síndromes hay relacionados al cromosoma X? explique cada uno de ellos.En que otras células podemos encontrar Corpúsculos de Barr. Por separado el hombre y la mujer se enjuagan la boca con agua varias veces. 3. raspando suavemente la parte interna de la mejilla con un bajalenguas. 8. haciendo un frotis o extendido sobre el mismo portaobjetos. 3. Cuestionario: 1. Observar con el objetivo de 40. Una vez seca la muestra..Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Procedimiento: Cada alumno procederá de la siguiente manera: 1. 2. se le agrega una gota de acetorceina. Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA Nº 11 NÚCLEO INTERFASICO I) INTRODUCCIÓN: El núcleo es el compartimiento de las células eucarióticas donde se encuentran las moléculas biológicas portadoras de la información genética: ADN y ARN. Durante su ciclo vital. Esta delimitado por la envoltura nuclear. Este fenómeno es conocido con el nombre de fagocitosis. es decir. las células alargadas tiene un núcleo ovalado. Un glóbulo blanco algunos presentan granulaciones en el citoplasma y un núcleo a veces lobulado estos son de forma variable. Poder completar el procesamiento de los ARNm antes que se inicie la síntesis proteica. Utilizando como ejemplos los glóbulos blancos del tejido sanguíneo y mediante la coloración con Wright o Giemsa. Basófilos: presentan gránulos que se tiñen con colorantes básicos. tenemos: Neutrófilos: núcleo lobulado y su citoplasma se tiñe con colorantes neutros. las células cúbicas tiene un núcleo redondo. Proteger al ADN de posibles colisiones generadas durante los desplazamientos de las proteínas motoras asociadas a los microtubulos y a los filamentos de actina. que se halla sostenida por la lamina nuclear y otra externa que se continua con la membrana del retículo endoplasmatico. debido a su migración en todos los tejidos entran y salen de los capilares por los movimientos amiboideos y ante gérmenes o sus toxinas presentan un quimiotaxismo positivo. La envoltura nuclear contiene poros. que también esta integrado por el ADN nucleolar. La forma del núcleo interfásico determina la forma de la célula. esenciales para transportar a los elementos citoplasmáticos. o sea la propiedad de absorber y digerir a los gérmenes. Los leucocitos polimorfonucleares presentan núcleo lobulado y citoplasma granuloso. compuesta por dos membranas concéntricas: una interna. 2. Son fagocitos y se forman en la médula ósea. asociadas con proteínas. a través de los cuales se realiza el intercambio de sustancias núcleo-citoplasma. Sin embargo existen una variedad de formas de núcleo en células altamente especializadas. Eosinófilos: Gránulos del citoplasma mas grandes y se tienen con colorantes ácidos. el núcleo sufre cambios morfofisiológicos muy importantes que permiten mantener la estabilidad celular (núcleo interfásico) por un lado y también originar otras células (núcleo en división). Cuando el ARN se asocia con proteínas forma el NUCLÉOLO. podrá reconocer los diferentes núcleos que caracterizan a cada glóbulo blanco. los cuales son un conjunto de proteínas que forman una estructura llamada complejo poror. las células aplanadas tiene un núcleo plano. son atraídos hacia ellos por las sustancias que difunden en el medio. Ud. El ADN asociado a proteínas determina la asociación supramolecular conocida como CROMATINA. 20 . ya que esta debe producirse a partir de ARNm plenamente formados. Los motivos por los cuales las moléculas de ADN han sido confinadas en un compartimento aislándolas de los componentes citoplasmáticos serian: 1. Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente. Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrofilos. 10. Lancetas 5. Dibuje cada forma de núcleo. 6. Alcohol 7. Aplicar técnicas para su coloración e identificación. Láminas patrón. 4. previa desinfección con algodón y alcohol. Algodón 6. Microscopio compuesto de campo claro 2. III) MATERIAL El alumno deberá traer: 1. 9. 5. Agregar el colorante Wright hasta cubrir la lámina portaobjetos. luego agregar una gota de aceite De inmersión utilice el objetivo de 100x para la observación de las células y núcleos. si es posible con la lamina en forma vertical. IV) PROCEDIMIENTO 1. Aceite de inmersión 8. El laboratorio contará con: 1. * Diferenciar los tipos de núcleos en diferentes tejidos.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma II) OBJETIVOS: * Reconocer las diferentes formas de núcleos y su ubicación en las células sanguíneas. Con ayuda de una lanceta desechable. monocitos y linfocitos. sobre una base plana en posición totalmente horizontal. 2. Agua destilada 4. realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano izquierda. Colorante WRIGHT 3. 6. basofilos. Colocar el frotis extendido ya seco. Material indispensable. Observe al microscopio con el objetivo de 10x. eosinofilos. inmediatamente agregar sobre el colorante 5 gotas de agua destilada y homogenizar soplando suavemente de arriba hacia abajo hasta que se forme una capa plateada. Papel lente 9. Dejar reposar la mezcla por 10 minutos. 21 . Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto como indica el siguiente dibujo: 3. Determina cual son los valores normales en la formula leucocitaria en porcentaje.3.. A. John Wiley & Sons.2. Vol II Ed. Explique con un ejemplo. 1983.C. Omega S. New York. J. A. 253 pag. 1980. Boruguet.. Laboratory Investigations in Cell Biology.4. Biología y Fisiología Celular.Explique la relación existente entre estructura y función nuclear. Ed.A. J.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma V) CUESTIONARIO 1. A. Barcelona 256 Bregman. 22 . Lacroix.. lo que ocurre al incrementarse o disminuir el porcentaje de los diferentes leucocitos en la formula leucocitaria. Que es la anemia? VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Berkaloff. Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Hoja de Resultados Universidad Ricardo Palma Muestra: Sangre Colorante: Wrigth Técnica utilizada para obtener la muestra: Punción de la yema del dedo Célula que observa: Glóbulo Rojo y Plaquetas Basófilos Neutrófilos Eosinófilos Linfocitos Monocitos 23 . así como a las células de muchos órganos internos. es un intervalo donde la célula crece. Este proceso se llama División Celular. La citocinesis. esta fase incluye: El proceso de mitosis. algunas células del animal adulto cesan por completo su división y muchas otras células solo se dividen ocasionalmente. pero no se replica su ADN Fase S (síntesis): durante la que se produce la replicación del ADN. Durante la interfase ocurren muchos preparativos para la mitosis próxima. como el hígado. El ciclo celular constituye el proceso básico de la génesis de nuevas células. Durante esta fase la célula es metabólicamente activa y está creciendo. en la que toda la célula se divide en dos células hijas. A diferencia de la rápida proliferación en las células embrionarias. La interfase cuenta con 03 fases: Fase G1 (gap1) que corresponde al intervalo entre la mitosis y el comienzo de la replicación del ADN. en el que permanecen activas metabólicamente pero no proliferan a no ser que sean requeridas para ello mediante las señales extracelulares apropiadas. hasta su propia división en dos células hijas. Un tipo de división celular es la mitosis que conduce a la producción de células con características genéticas idénticas a las de su antecesora. mientras que en la meiosis se producen células con la mitad del contenido genético de la célula madre. El final de la mitosis da como resultado a dos células e incluye la división nuclear o cariocinesis y la división del citoplasma o citocinesis. El ciclo celular puede dividirse en dos fases principales: La fase M y la Interfase. Esta unidad de tiempo represente EL CICLO DE VIDA DE UNA CÉLULA EN PROLIFERACION y constituye una unidad de repetición en todo proceso de reproducción o proliferación celular. cuando es necesario reemplazar la perdida de las células debido a la lesión o a la muerte celular. La interfase: es el periodo entre las divisiones celulares. se utilizan los índices del ciclo mitótico. el riñón y el pulmón. interfásico y de fases.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA Nº 12 CICLO CELULAR I) INTRODUCCIÓN: Las células nuevas solo se originan de otras células vivas. y se extiende desde su formación de una célula. Entre este último tipo de células se incluyen a los fibroblastos de la piel. Fase G2: aquí prosigue el crecimiento de la célula y en la que se sintetizan proteínas en preparación para la mitosis. Estas células salen de G1 para entrar en un estado de reposo del ciclo denominado G0. Para el estudio del ciclo de división celular. y efectúa diversas actividades metabólicas. 24 . por división de la célula madre. durante el cual los cromosomas duplicados se separan en dos núcleos. La Fase M: es el periodo en el que el contenido de la célula se divide. incluye la replicación del ADN celular. Es el porcentaje de células mitóticas en cada una de sus fases. Indice Interfásico.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular CICLO CELULAR Universidad Ricardo Palma Indice Mitótico: está dado por el porcentaje de células proliferativas que se encuentran en mitosis. Se calcule restando de 100. el criterio para identificarlas de aquellas que han iniciado los primeros estadios de diferenciación es considerar como meristemáticas a las que tienen núcleo con un diámetro superior a la tercera parte del eje mayor de la célula. Indice de Fases. 25 . el índice mitótico. En el caso de las células meristemáticas de la raíz de la cebolla. Es el porcentaje de células proliferativas en interfase. La fosforilación de las moléculas de la lamina por la cinasa mitótica Cdk promueve el desensamblaje de la lamina nuclear que constituye la capa interna de la envoltura nuclear. Anafase: el paso de la metafase a la anafase se debe a la proteólisis de proteínas reguladoras mediada por la ubiquitinas. El movimiento de los cromosomas hacia el polo se acompaña de un acortamiento evidente en los microtúbulos cromosómicos. que se unen a los cromosomas y por microtúbulos polares.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular DESCRIPCION DE LA MITOSIS Universidad Ricardo Palma Profase: el comienzo de la profase queda determinado por la aparición de los cromosomas condensados. este es el lugar de anclaje de los microtúbulos del huso. Los microtúbulos de los polos opuestos del huso se acaban uniendo a los dos cinetocoros de las cromátidas hermanas y el equilibrio de fuerzas que actúa sobre los cromosomas hace que estos queden alineados en la placa metafásica en la mitad del huso. 26 . AL final de la profase ocurre la rotura de la envoltura nuclear lo que posibilita la interacción entre el huso y los cromosomas. Prometafase: Los cromosomas se mueven al ecuador del huso. Metafase: Se caracteriza por la organización del huso mitótico. que es una secuencia de ADN a la que se unen proteínas dando lugar al cinetocoro. Estas cromátidas se mantiene unidas a través del centrómero. la cual se dispara por la activación de una ubiquitina ligasa denominada complejo promotor de la anafase. Además los pequeños microtúbulos astrales irradian desde los centrosomas hacia la periferia celular. Este mecanismo de separación recibe el nombre de DISYUNCION. que se superponen unos con otros en el centro de la célula. Este huso está constituido por microtúbulos cinetocóricos. cada uno de los cuales está constituido por dos cromátidas hermanas. con número diploide 2n = 16. En esta práctica se estudiará el ciclo de división celular en las células meristemáticas de la raíz de Allium cepa "cebolla". de fases y mitótico en el modelo estudiado 27 . Simultáneamente se produce la citocinesis (división del citoplasma). Observación a 10 de las diferentes fases de la mitosis. los nucléolos están en fase de reorganización y la envoltura nuclear se forma paulatinamente alrededor de los cromosomas.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Telofase: Los cromosomas empiezan a desarrollarse. Hallar los índices interfásico. Reconocer las características del núcleo interfásico en las células meristemáticas de cebolla. Este sistema es muy adecuado porque la población celular está en equilibrio dinámico y los cromosomas son relativamente grandes. Coloración con hematoxilina – eosina. II) OBJETIVOS Al término de la práctica los estudiantes serán capaces de: Reconocer las fases de la mitosis. Cubra el frasco con una cartulina negra. 2. Fósforos. 4. Láminas patrón. 3.3. Que proporciona el laboratorio: 1. Microscopio compuesto de campo claro. Lápiz con cabeza de borrador. 8. Papel toalla. Palitos de madera Agua 1. 1. 2. Material obligatorio. (La cebolla se remojara previamente por 02 días en un recipiente con agua.clorhídrica Mechero de alcohol Placas Petri. 2. 7.2. El agua debe removerse cada 24 horas. de tal manera que la parte inferior toque el agua. Raíces de bulbo de cebolla. 4. Preparación De Las Láminas Para Observar Las Diferentes Fases De La Mitosis. Las raíces que se desarrollan se usarán en la práctica. 1. Caliente cuidadosamente el petri en la llama de un mechero hasta 60 C aproximadamente. Desarrollo De Las Raíces 1. unas 4 o 5 raicillas y colóquelas en una placa petri que contenga Orceina acética. de la parte apical de la raíz. como lo indica el grafico. Papel filtro. con la finalidad de dar oscuridad a las raíces. 3. 5.1 Coloque bulbos de cebolla en vasos pequeños con agua. momento que coincide con la emisión de vapores blancos (la 28 . 9. Orceina acética . unas 72 horas antes de la práctica. 2. Mascarillas. IV) PROCEDIMIENTOS 1. 6. Corte unos 2 mm.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular III) MATERIALES Que debe traer la mesa de trabajo: Universidad Ricardo Palma 1. Papel lente. 7. Ed.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma temperatura puede controlarse pasando el material de vidrio por el dorso de la mano. ¿En qué etapa de la mitosis los cromosomas se observan con mayor facilidad? Porqué?. 4. ¿Cuáles son las características de los núcleos interfásicos? VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Smith CA. anafase. Gerald 2009: Biología cellular y molecular. Observe la preparación a menor y mayor aumento (40). Coloque una raicilla en una lámina porta objeto y añada una gota de Orceina fría. Identifique y haga esquemas de células meristematicas en interfase con sus prominentes nucléolos. V) CUESTIONARIO 1. ¿Qué es una población celular en equilibrio dinámico? 2. Addison Wesley Iberoamericana. 5. y Wood EJ. Cubra la muestra con una laminilla. No debe de permitirse la ebullición del colorante). 1997: Biología Celular Ed. Este aplastamiento se denomina "squash". 8. Deje enfriar y repita esta operación tres veces. metafase. Mc Graw Hill 29 . Después del último calentamiento deje enfriar y reposar durante 10 minutos. Raicillas con orceína 3. 4. ¿Por qué los cromosomas no son visibles durante la interfase? 3. Karp. ¿Del índice mitótico. Coloque un trozo de papel filtro sobre la laminilla y con el borrador de un lápiz golpee el material describiendo círculos concéntricos para permitir la extensión del tejido meristemático. 9. células en profase. 6. ¿qué fase observo en mayor frecuencia? ¿Hay alguna relación con el tiempo de duración de cada fase y con la hora del día? 5. Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Hoja de Resultados Muestra: Tejido meristemático de Allium cepa Colorante: Orceína Acética. Fases que observa: Universidad Ricardo Palma Interfase Profase Metafase Anafase Telofase 30 . Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Hoja de Resultados Universidad Ricardo Palma Muestra: Corte Histologico de Tejido meristemático de Allium cepa Colorante: Hematoxilina .Eosina Fases que observa: Interfase Profase Metafase Anafase Telofase 31 . que en conjunto se conocen como cromatina. Se basa en una serie de lavados de la muestra y agregado de proteinasas que eliminan las proteínas del medio. búsqueda de alelos más o menos frecuentes asociados a una característica que nos interesa seleccionar. detergentes para eliminar las membranas plasmáticas y luego ir purificando el ADN de esa mezcla de ARN proteínas y restos celulares. H4. Ahora se sabe que cada nucleosoma contiene una partícula nuclear de nucleosoma que consiste en 146 pares de bases de ADN superenrrollado envuelto por lo menos dos veces alrededor de un complejo en forma de disco de ocho moléculas de histona.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA No. Algunos virus solo contienen ADN. H3. mientras otros solo poseen ARN. Kornberg postulo que el ADN y las proteínas histónicas se organizan en subunidades repetidas denominadas nucleosomas. corte de una determinada región con enzimas de restricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt polymorphism). H2A. diagnóstico de identidad forense. El ADN constituye el depósito fundamental de la información genética. un importante grupo de pequeñas proteínas que poseen un inusual contenido alto de los aminoácidos básicos arginina y lisina. visualizarlo para ver su estado. Los ácidos nucleicos son macromoléculas de suma importancia biológica. Entonces se produce la síntesis de proteínas. test de paternidad. Esta serie de fenómenos ha recibido el nombre de dogma central de la Biología Molecular. amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en bacterias u otros vectores como virus y PCR). Las histonas se dividen en cinco clases: H1. Mycobacterium sp) diagnóstico viral o de infección viral (HIV. PIF. que significa: diferencias en los tamaños de los fragmentos de restricción debido a polimorfismos en el ADN entre otras. y para ello es necesario purificarlo desde cualquier tejido aunque usualmente se hace a partir de sangre. Los cromosomas se componen de ADN y proteínas relacionadas. Hepatitis C. 13 EXTRACCION DE DNA I) INTRODUCCION Técnicas en Biología Celular y Molecular Se denomina así a todas las técnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza. etc. Todas estas técnicas tiene diversas aplicaciones generalmente en el diagnóstico de enfermedades hereditarias. otros). cepas diferentes de Salmonellas. Esta información es copiada o transcripta en las moléculas de ARN. en un proceso llamado de traducción del ARN. cortarlo y pegarlo (nacimiento de la Ingeniería genética). diagnóstico de contaminación bacteriana en alimentos (detección de Escherichi coli 0157. que puede resumirse de la siguiente manera: 32 . selección de marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento genético de una especie. Todos los organismos vivos contienen ácidos nucleicos en forma de acido desoxiribonucleico (ADN) y acido ribonucleico (ARN). El empaquetamiento ordenado del ADN eucariota depende de las histonas. La primera técnica que todas las demás necesitan es la extracción del ADN. cuyas secuencias de nucleótidos contienen el código para las secuencias específicas de aminoácidos. H2B. Una pequeña cantidad se halla en el citoplasma. II) OBJETIVOS .Interpretar el origen del sistema de Información: RNA – DNA III) MATERIALES Que debe traer el alumno: 1. Una vez ocurrida la duplicación. Toda la vida celular actual almacena su información en código de tripletes en moléculas de DNA lineales o circulares. la mayor parte de las veces quizá por el fenómeno de entrecruzamiento desigual. La organización y secuencia del genoma es capaz de cambiar.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma En las células superiores el ADN se halla principalmente en el núcleo integrando los cromosomas. sería de esperar que la sustitución de nucleótidos modifique a varios miembros en diferentes formas y produzca una familia de secuencias repetidas con estructura similar pero no idéntica.Material obligatorio 33 . Se debe tomar en cuenta la estructura así como la secuencia de nucleótidos o de aminoácidos y la composición del producto del gen para evaluar las homologías y la magnitud y el significado de la divergencia evolutiva en los genes y sus productos. ya sea con lentitud en el curso de la evolución o con rapidez a consecuencia de una trasposición. como en el citoplasma. cuyos elementos evidencian datos de una evolución originada en un gen ancestral común. Se cree que el primer paso en este proceso es la duplicación de un gen. Los genes eucariotas que codifican proteínas casi siempre son miembros de una familia de multigenes. El ARN se localiza tanto en el núcleo donde se forma.. donde tiene lugar la síntesis proteica. dentro de las mitocondrias y los cloroplastos. Hígado de pollo o res 2.Examinar un extracto crudo de DNA en células hepáticas . Extrae el sobrenadante producto del centrifugado con una pipeta pasteur y colocarlo en un tubo de ensayo. Mc Graw Hill. Agrega poco a poco. 34 . Pipetas Pasteur 4. IV) CUESTIONARIO 1. se habrá formado una capa de alcohol encima de la capa de extracto. Microscopio Universidad Ricardo Palma IV) PROCEDIMIENTO 1. Ed. 10 gr. Con que finalidad se le agrega lauryl Sulfato de Sodio? Explique 3. 2. Esta mezcla se debe homogenizar por aprox.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Que proporciona el laboratorio. Que indica esto con respecto a la estructura de la molécula de ADN? 2. Cortar Aprox. Si el procedimiento se realizó como es debido. Centrífuga 5 600 RPM 7. 3.1 hora (NO BATIR). 2008. 4 tubos de ensayo en sus gradillas 2. Mortero de porcelana 5. 10 ml de alcohol de 95% helado. De hígado en trozos pequeños en una placa petri. Gerald. 3. al término del cual es llevado a centrifugar por 5 minutos a 5300 RPM. 3. A qué se debe que en este tipo de experimentos los resultados sean casi siempre mezclas en lugar de sustancias puras? 4. 1. Colocar el hígado cortado en trocitos en un mortero y agregarle 10 ml de solución de lauril sulfato de sodio al 5%. Si 30% de las bases de una cadena sencilla de ADN es T. Por que únicamente 20 aminoácidos están incluidos en el código genético cuando muchos otros no están? 5. Propipetas 6. 3 ml de alcohol al 95% que haya estado refrigerado. ¿Cierto o Falso? ¿Por qué? Referencias bibliográficas: Karp. entonces 30% de las bases de las cadenas es A. Biología Celular y Molecular. Este proceso a nivel de individuo recibe el nombre de Reproducción Asexual. para dar origen a las células reproductivas llamadas gametos En los animales y en los humanos. En el nivel de organización de individuo se denomina Reproducción Sexual. Cada uno de estos procesos ocurre en etapas diferentes del ciclo biológico de los organismos vivos. en su nivel de organización celular. otro proceso reproductivo celular origina células germinales a partir de una célula somática. es decir la capacidad de originar nuevos individuos de su misma especie. Gameto génesis Procesos espacio-temporales multifacéticos que ocurren en las gónadas o estructuras reproductivas de los organismos que se reproducen sexualmente . se pueden identificar los siguientes procesos: GONIAS: Mitosis CITOS: Meiosis GAMETOS: Cito diferenciación. utilizan el mecanismo reproductivo para perpetuar su especie . Este mecanismo consiste en que una célula (2n) da lugar a células (n) mediante la reducción del número de cromosomas a la mitad. Se distinguen dos formas generales de reproducción: Asexual y Sexual Los sistemas vivientes multicelulares. 35 . produciéndose a su vez una recombinación génica. Los procesos gameto génicos en los mamíferos y en la especie humana. se inician y terminan en tiempos diferentes en las hembras y machos. han desarrollado procesos por los cuales las células somáticas o germinales originan descendientes a partir de una célula materna.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma PRACTICA Nº 14 GAMETOGENESIS I) INTRODUCCIÓN Una de las características notables de los sistemas vivientes es la reproducción. La mitosis. Todo los los sistemas vivientes . es el proceso reproductivo mediante el cual una célula somática da origen a dos células hijas con características idénticas a las que la origino. La meiosis. 36 - . En el ser humano las células palidas de tipo Ason las que representan la reserva no cíclica y las oscuras son mitóticamente activas. paquiteno. es la secuencia de eventos celulares a través de los cuales las células troncales espermatogoniales se transforman en espermatozoides. Producto de las divisiones mitóticas puede distinguirse diferentes tipos de espermatogonias: tipo con núcleo muy tenido (Ad). Células redondas . grandes con núcleos esféricos y algunos nucleolos que inician la meiosis (profase I : leptoteno.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma ESPERMATOGENESIS La espermatogenesis. con núcleo difuso (Ap) y tipo B. proceso que se inicia con la pubertad. diacinesis ). diploteno. zigoteno. Tres categorías de células están involucradas en este proceso: Espermatogonias ( mitosis) Espermatocitos (meiosis) Espermatidas (espermiogenesis) Citología de las células germinales: Espermatogonias y mitosis: Células troncales situadas en la periferie de los tubulos seminíferos entre las células de Sertoli. Espermatocitos y meiosis: Espermatocitos primarios se originan de las espermatogonias tipo B. Incluye reorganización nuclear (histonas por protaminas). Crecimiento de los folículos ovulatorios y su regulación. almacena y desarrollan los ovocitos formados durante la vida embrio-fetal o en los primeros momentos del nacimiento. Algunas etapas de las funciones ováricas: 1. Etapas del desarrollo folicular : Folículo primordial Folículo Primario Folículo Secundario o Antral Folículo Maduro o de Graaf Folículo Primordial Los folículos primordiales. Formación del cuerpo luteo y las funciones del mismo. son los folículos de reserva que están almacenados en el ovario. los cuales van a ser usados durante la vida de la hembra o de la mujer. 4.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular - Universidad Ricardo Palma Espermatidas y espermiogenesis : La metamorfosis de espermatides a espermatozoides constituye el proceso de cito diferenciación denominado espermiogenesis . 3. FUNCION OVARICA El ovario es la estructura que en los mamíferos y en las mujeres . Este esta en la fase inactiva de dictioteno 37 . Ruptura folicular en el momento de la evolución. Se localizan en la periferie de la corteza del ovario y contienen un ovocito primario. Crecimiento folicular y a tresia de los folículos pequeños. Este proceso es continuo. formación del acrosoma. hasta el momento que este es ovulado o se transforma en un folículo atresico . ensamblaje de las estructuras del flagelo y reorganización citoplasmática cuya fase final es la liberación de los espermatozoides en el lumen de los tubulos seminíferos. 2. Foliculogenesis La foliculogenesis debe medirse desde la formación de esta unidad estructural y funcional ovárica denominada folículo. Alrededor del ovocito primario esta una sola capa de células epiteliales foliculares planas también conocidas como células de granulosa. en esta fase se denomina Folículo Primario Unilaminar. convirtiéndose en células cubicas. rodeadas por una membrana basal. Zona pelúcida: Cubierta celular de naturaleza glicoproteica que es sintetizada por el ovocito en crecimiento. Folículo Primario: En la Pubertad la secreción de la hormona estimulante del folículo (FSH) por la hipófisis estimula la el desarrollo de un pequeño número de los folículos primordiales. Bloquea la polispermia. aquí se puede observar con mayor claridad la zona pelúcida. asociado con el aumento de tamaño de las células de granulosa que lo rodean. Las células de estroma que rodean al folículo se diferencian en la teca Si continua la secreción de la FSH las células de granulosa se dividen recubriendo al ovocito en crecimiento con múltiples capas. Este Folículo se conoce con el nombre de Folículo Primario Multilaminar. Se puede observar un incremento de tamaño del ovocito. Específica para cada especie. 38 .Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma de la meiosis I. por separación del oocito primario y sus células de granulosa. En folículos < 1mm de diámetro se caracterizan por una regresión del ovocito. Atresia Folicular: La atresia es el destino de la mayoría de los folículos. 39 . Aquí aparece una laguna llena de líquido viscoso y rico en acido hialurónico.3 x 106 células de granulosa en rata 3. provenientes del cumulus oophorus. La capa externa de células estromales (la teca externa) se mantiene pequeña y compacta y no posee actividad secretora conocida. retracción de las células de la granulosa e hipertrofia de las células de la teca. entre las células. este espacio se denomina antro. No existen criterios objetivos para detectarlos en las etapas de folículos primordiales e intermedios. pero solo se completa si es fecundado el óvulo. Antes de la ovulación el folículo contiene: 0. El ovocito se sitúa a un lado separado del líquido folicular por una capa de células de granulosa denominada cúmulo ooforo. La ovulación es precedida por una acumulación importante de liquido folicular.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Foliculo Secundario : La capa interna de las células estromales (la teca interna) aumenta de tamaño al desarrollar las células un abundante retículo endoplasmático liso y mitocondrias con crestas tubulares (característica de las células productoras de hormonas esteroides).50 x 106 células de granulosa en la mujer. estas células comienzan a segregar estrógeno.5 x 106 células de granulosa en oveja . que exuda la teca interna. Por rotura del folículo maduro el oocito secundario producido. En humanos. el oocito maduro penetra en el extremo proximal de la trompa vecina y la célula comienza su segunda división de maduración que llega hasta la metafase II. ovejas y rata se pueden detectar folículos atrésicos: 1. sobresale en superficie ovárica aun recubierto de células de granulosa que constituyen la llamada corona radiada. Folículo Maduro o de Graaf: la hormona luteinizante se encarga de la maduración final del folículo. y la terminación de la meiosis I. Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular 2. espermátides. la atresia puede visualizarse por la presencia de vesículas picnóticas. espermatozoide) desde la base el túbulo seminífero a la luz del mismo. 3. Universidad Ricardo Palma En folículos grandes. el número de las cuales determina el estado de atresia. Material Obligatorio. Foliculogénesis 1. 2. Láminas preparadas de cortes de testículos y ovario. Que proporciona el laboratorio: 1. Observe con diferentes aumentos el corte de testículo humano teñido con HE. Observe con diferentes aumentos el corte de ovario teñido con HE y distinga el hilo. desde el primordial hasta el folículo de Graaf o maduro. Esto es visible en humanos decrecen a partir de los 38 años. la médula y la corteza. espermatocitos y espermátides. Cambios relacionados con la edad: decrece el número de folículos en todos sus tamaños. Cinética del crecimiento folicular: El índice mitótico de las células de la granulosa se utiliza para establecer el rango de crecimiento folicular. En los preantrales la atresia se visualiza por la invasión de la cavidad folicular por fibroblastos. IV) PROCEDIMIENTOS Espermatogénesis 1. Distinga y dibuje como se disponen los distintos tipos celulares (espermatogonias. III) MATERIALES Que debe traer el alumno: 1. II) OBJETIVOS: Al término de la práctica los estudiantes serán capaces de: Reconocer formas de espermatogonias. 2. Reconocer las diferentes formas de folículos. espermatocitos. 40 . En muchos mamíferos el número de folículos en la reserva no son marcadamente afectados por la edad. Microscopio compuesto de campo claro. La ovogénesis tiene lugar en la corteza ovárica. 1997: Human Histology. Addison Wesley Iberoamericana. ¿Qué diferencia encuentra entre un folículo primordial y un folículo secundario? ¿En que fase de la meiosis está el ovocito dentro del folículo de Graff? ¿Qué es el cuerpo lúteo y qué función cumple? ¿Por qué los folículos ováricos no reaccionan a la hormona folículo estimulanteen la menopausia? VI) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Smith CA. & Wood Ej. Mosby.7. 2. London. 3. o folículos antral y de Graff. En el folículo de Graff identifique el ovocito. 4. 2da. Identifique folículos atrésicos. Ed.Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular 2. & Lowe J.¿Qué diferencia existe entre una población de espermatogonias y una de espermatocitos? ¿Cómo se diferencian las espermátides? ¿En que etapa de la meiosis se encuentran: las espermatogonias. las espermátides y los espermatozoide?. 1997: Biología Celular. México. 5.. 41 . 4. los espermatocitos primarios. Stevens A. Edición. Bogotá. Universidad Ricardo Palma Usando diferentes aumentos reconozca y dibuje: folículo primordiales y folículos en crecimiento: primarios. 6. V) CUESTIONARIO 1. 3. secundarios. Eosina Etapas que observa y características: Universidad Ricardo Palma Folículo Primordial Folículo Primario laminar Foliculo Primario Multilaminar Folículo Secundario o Antral Folículo Maduro Folículo Atrésico 42 .Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Hoja de resultados Muestra: Corte de ovario Colorante: Hematoxilina . Eosina Etapas que observa y características: Túbulo Seminífero Espermatogonia Espermatocito Primario Espermatocito Secundario Espermatide 43 .Guía de Practicas de Biología Celular y Molecular Universidad Ricardo Palma Hoja de Resultados Muestra: Corte de Testiculo Colorante: Hematoxilina .
Report "Guia de Practicas de Biologia Celular y Molecular 2013 I A"