3B-2GUÍA DE PRÁCTICA Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ANÁLISIS CLÍNICOS I Autor: Dr. Juan Manuel Parreño Tipian F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 INTRODUCCIÓN El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los diversos procesos utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación bioquímica y patológica de los resultados. Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en: hematología, inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica, parasitología clínica y líquidos biológicos. Es por ello que para fines didácticos se desarrollará dichos campos en los 2 semestres académicos que corresponden a los análisis clínicos I y II. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 I. PRÁCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LÍQUIDOS BIOLÓGICOS. SANGRE TOTAL, SUERO, PLASMA, SANGRE DESFIBRINADA. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES EN SANGRE FRESCA Y COLOREADA. RESISTENCIA GLOBULAR 1.1 Marco Teórico La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene importancia en la buena determinación de los análisis clínicos ya que constituyen el primer paso en todo el proceso dependiendo de una serie de factores. El reconocimiento de los elementos formes nos informa acerca de las características y diferenciaciones en una muestra de sangre fresca y sangre coloreada. Líquidos Biológicos: 1. Sangre 2. Orina 3. Esputo 4. Jugo Gástrico 5. Contenido Duodenal 6. Líquido Cefalorraquídeo 7. Liquido sinovial 8. Lìquidos serosos (pleural, peritoneal, articular) 9. Líquido amniótico y seminal 10. Heces Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total, suero o plasma. 1.2 Competencias 1.-Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos biológicos 2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo. 3. Identifica los diversos elementos formes 4. Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada. 1.3 Materiales y Equipos 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Materiales Agujas descartables 20 G x 1 ½ Algodón Alcohol Tubos de ensayo Viales con anticoagulantes Perlas de vidrio Matraz Pipetas Rev. Junio 2007 F-CV3-3B-2 Reactivos a. Anticoagulantes: De Wintrobe: Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr. Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr. Agua destilada ------ 100 mL. Formol al 40% ------ 1 mL. Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2% Citrato Trisódico al 3.8% Oxalato de Sodio al 1.34% Heparina al 0,75% EDTA 1.4 Procedimiento A. Toma de muestra. SANGRE VENOSA: 1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa apoyado sobre una almohadilla. 2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la precaución de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada más de 2' provoca una hemoconcentración con acumulaciones subproductos metabólicos. Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del codo (VENA MEDIANA CEFALICA) 3. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al alcohol yodado. 4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente sobre la vena penetrando en ella. 5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la aguja permanece aun en la vena. 6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol flexionando el codo. 7. Para efectuar los frotises se tomará una gota de sangre tomada directamente de la aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y secos. En niños que no son muy palpables las venas se tomará la sangre de la vena yugular. SANGRE CAPILAR: Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se requieren pequeñas cantidades de sangre. Debe utilizarse una lanceta En la yema del dedo. En los niños en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado y la sangre fluya espontáneamente. Obtener los siguientes componentes: 1. SANGRE TOTAL Y PLASMA En une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar Colocar en un tubo de ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 2. SUERO En un tubo de ensayo colocar 5 mL. de sangre Centrifugar 10 minutos a 1500 rpm. 3. SANGRE DESFIBRINADA En un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL. de sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita sobre estos cuerpos en forma de filamentos elásticos y blancos. El líquido que queda se denomina sangre desfibrinada y está constituida por suero y glóbulos que se puede confirmar por centrifugación. La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada. RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES: a. EN MUESTRA FRESCA b. EN MUESTRA COLOREADA 1. Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto se coloca un cubreobjeto y observar. Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos unidos formando pilas por el fenómeno de la tensión superficial, estos discos se observan de color rosado. Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos. Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeños. Tamaño: eritrocitos: 7.2 u leucocitos: 5 a 20 u plaquetas: 2a4u 2. Otro portaobjeto: 1 gota en uno de los extremos y con otro portaobjeto haciendo un ángulo de 45 grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente. Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas cubriendo el frotis. Mezclar soplando por 30 segundos. Se adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando. Dejar en reposo por 10 minutos. Lavar con agua de caño escurrir la lámina en forma vertical. Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el condensador y observa con objetivo de inmersión. Se observa: Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central Leucocitos: Mononucleares: Monocito 16 a 22 u Linfocito 7 a 10 u Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinófilos, Basófilos: 9 a 12 u 1.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. 1.6 Cuestionario 1. ¿Qué diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa y sangre arterial? 2. 3. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y como actua en la sangre evitando la coagulación de la misma? 4. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma? 5. ¿Cómo se observan los elementos formes en sangre fresca y sangre coloreada? Dibuje utilizando colores. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 ¿Cómo se obtiene la sangre desfibrinada? Manual de Hematologia. Robbins S.1. Barcelona: Toray Masson S. 2001. 3a ed. 6a ed. Collins T. 1985. Manual de patología estructural y funcional. 7a ed. Maxwell M. 3. Cotran R. 1999.A. 6a ed. Junio 2007 . Buenos Aires: Interamericana. Hematología clínica. 2. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.7 Fuentes de información 1. Lévy JP. Buenos Aires: El ateneo. Bernard J. F-CV3-3B-2 Rev. 4. Guerci A. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana. Kumar V. 1999. Wintrobe M. . 7. 6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta de la pipeta con gasa o algodón. Junio 2007 . Si la sangre pasa la marca de 0. 2.. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con papel especial o con gasa.5 g.. F-CV3-3B-2 Rev.. Bicloruro de Mercurio. Mientras se aspira el líquido de dilución.. 2.1 Marco teórico La hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la sangre. Cloruro de Sodio . Desechar las primeras gotas y sin perdida de tiempo tocar con una gota pequeña el borde de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la cámara y el portaobjeto.. 3. se hace girar la pipeta entre el pulgar y el índice de la mano derecha..1..4 Procedimiento 1. Estas pruebas se realizan habitualmente como parte del hemograma completo.2 Competencias 1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes correspondientes de los elementos formes. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS..2: HEMATIMETRIA. 200 ml. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 1...3 Materiales y equipos Materiales Camara de Neubauer Pipeta de Thoma para glóbulos rojos Reactivos LIQUIDO DE DILUCIÓN: Las más conocidas son las de HAYEM. 12.. 5.... 4.DOSAJE DE HEMOGLOBINA... 2.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.II.. El concepto de anemia descansa sobre la determinación de estos componentes. A. La hemoglobina es una proteína que se encuentra en el interior de estos elementos y su función fundamental es la de transportar el O2 y el CO2.. Agua destilada csp . 2.. PRÁCTICA No... 2. Aspirar sangre hasta 0. GOWER y MARCANO SOLUCIÓN DE GOWER: Sulfato de Sodio .. 1 g. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.5 gr. 2. 0.. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.. Explique la fórmula utilizada en el recuento de glóbulos rojos.000 por mm3. Cálculos: Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se aplica la siguiente fórmula: (Cálculo razonado) N x 10 x 200 x 400 ------------------------.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. ¿Cuál es la composición química de los líquidos de dilución utilizados en hematimetría? 3. 80: para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado acabo el recuento. Para evitar toda confusión al contar los glóbulos.6 Cuestionario 1. El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA. ello induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.8. Explique mediante un esquema el reticulo de Thoma 4. 400: número total de cuadraditos. 9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas de aire. ¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetria? 2. 10. nunca se tocara el cubreobjeto con la lente.000 de hematíes por mm3 de sangre. Iluminar bien. La policitemia carece de importancia y en patología es infrecuente.= Hematíes por mm3 de sangre. No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5 cuadrados. Interpretación: La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da también en leucemia y después de hemorragias. los que tocan los lados derecho e inferior no se toman en cuenta. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Para referir a 1mm3 de sangre diluida. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento. Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7!000. 12. 2. O también: los glóbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros Cifras normales: En estado de salud existe aproximadamente 5’000. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.000 y va descendiendo gradualmente para llegar al del adulto hacia los 15 años. 11. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 . El número es un poca menor en las mujeres 4’500. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos. 80 De donde: N: número total de hematíes en 80 cuadraditos. Comprobar si hay uniforme distribución de hematíes. 200: dilución de la pipeta para referir al 1 m3 de sangre sin diluir. se incluyen los hematíes que tocan las líneas divisorias izquierda y superior como i estuviera dentro de los cuadrados. 2. manteniendo el condensador bajo y el diafragma parcialmente cerrado. 10: altura de la cámara. 3. Contiene preservantes.2. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana.A. Hematología clínica. 2. Wintrobe M.1 Marco teórico La Hemoglobina es una molécula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la Globina. 3a ed. Junio 2007 . Guerci A. B. Es un reactivo tóxico. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.4 Procedimiento F-CV3-3B-2 Rev.3 Materiales y equipos Materiales Pipeta de Sahli Tubos de ensayos Equipos Espectrofotometro Reactivos a. 1985. 1999.7 Fuentes de información 1. o Cianuro de Potasio 50 mg. 2. 2.2 Competencias 1. Buenos Aires: El ateneo. Maxwell M. 4. 6a ed. o Guardar en frasco oscuro. Cotran R. Lévy JP. o Agua destilada csp 1000ml. o Ferricianuro de potasio 200 mg. 2. 2. Todas las moléculas de Hb se encuentran en el interior de los glóbulos rojos y su función fundamental es la de transportar el O2 y el CO2. 1999. Barcelona: Toray Masson S. La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el diagnóstico de una anemia. 6a ed. Collins T. Manual de patología estructural y funcional. b. Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la hemoglobina. Buenos Aires: Interamericana. Robbins S. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina. REACTIVO DE DRABKIN: o Bicarbonato de Sodio 1 gr. Manual de Hematologia. Bernard J. 7a ed. 2001. Kumar V. DOSAJE DE HEMOGLOBINA 2. SOLUCIÓN STANDARD: o Solución de cianometahemoglobina titulada según las recomendaciones del Comité Internacional para Estandarizar de Hematología. la solución de es de color amarillo pálido. VALORES NORMALES: Nacimiento 3 meses Adulto 14 .0 2 4. 6. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina F-CV3-3B-2 Rev.METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA: 1. Deben estar bien secos.5 Blanco 0. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos.6 Cuestionario 1. Adicionar al tubo Problema con la Pipeta de Sahlí 20µl de sangre (capilar o venosa) 4.0 4 1.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Leer al espectrofotómetro con filtro verde ó 540 nm. 5. DRABKIN (mL) (mL) 1 6.0 4.5 .0 CONCENTRACIÓN (gr %) 20 15 10 5 0 El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotómetro. Junio 2007 . 2.5 3. 2. Rotular dos tubos con Problema y banco. 7. 3. Agregar a cada uno de ellos 5ml de reactivo de Drabkin. La lectura obtenida llevar a la curva de calibración o multiplicar por el factor para hallar la concentración de hemoglobina.5 g/100 mL sexo femenino 12-16 g/100 mL sexo masculino 14-18 g/100 mL INTERPRETACIÓN: AUMENTO: hipercromemia: niños recién nacidos.5 3 3.5 6. DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias 2.14. CALCULOS: FACTOR= 15 / Absorbancia del Standard Hb (g/100ml) = Absorbancia de la muestra x FACTOR FACTOR DE CALIBRACION: Se sigue el siguiente cuadro: TUBO# STANDARD SOL. Aplicando la fórmula de concentración sobre lectura para cada tubo y sacando el promedio tenemos el factor % en vista de que el standard viene en g %.24 g/100 mL 10. que en este caso es factor por 100. Realizar la lectura del tubo Problema ajustando el instrumento a 0 de densidad óptica o el tubo Blanco. personas que viven en altura.0 1.0 0. SE realizan 4 divisiones y luego se obtiene el factor promedio. procesos hematopoyéticos. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina? 3.. ¿Cómo se puede hallar el valor del hematocrito a partir de la determinación de la hemoglobina? 2. 1985. Krupp M. Aiquel F. F-CV3-3B-2 Rev.A. 2. Junio 2007 . Gradwhol. Buenos Aires: Médica Panamericana.7 Fuentes de información 1. Laboratorio. Guerci A. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 4. 7ª ed. 1997.2. 3. 1986. Manual de análisis clínicos. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. Buenos Aires: Panamericana. 8ª ed. México DF: Manual Moderno S. Buenos Aires: Librería El Ateneo. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. 3ª ed. 1986. En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por anemia.11 mm Mujeres 1 . Utiliza con precisión el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la eritrosedimentación. plaquetas y el índice ictérico. B.2 Competencias 1. METODO DE WINTROBE Y LANDSBERG La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma: Recoger 5 mL. Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar UNA HORA para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.4 Procedimiento A. Esta sencilla prueba es utilizada como índice de la presencia activa de enfermedades diversas 3. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR SEDIMENTACIÓN GLOBULAR.3 Materiales y equipos Materiales Tubo de Wintrobe Reactivos Anticoagulante de Wintrobe 3. 3: VELOCIDAD DE HEMATOCRITO. METODO DE CUTLER Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos. 3.1 Marco teórico Prueba de laboratorio inespecífico importante para evaluar el curso de una enfermedad. de capacidad.III. es inespecífico porque no sirve para el diagnóstico etiológico de una enfermedad. Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída. MICROHEMATOCRITO A. 5mm de diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que representan milímetros. 3. Procedimiento: F-CV3-3B-2 Rev. VALORES NORMALES: Hombre: 1 . Junio 2007 . PRÁCTICA No. de sangre con anticoagulante.15 mm Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30 minutos para comprobar el volumen globular. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentación utilizando la escala adecuada. 2. apendicitis) la velocidad no esta alterada.. En el curso del embarazo la VSG se acelera. Valores normales: Las cifras normales a la hora de lectura son de: 2 . salvo raras excepciones evolucionan con VSG aumenta principalmente cuando coinciden los períodos de fiebre y anemia. Junio 2007 . El carácter de la curva en estado patológico se interpreta según su forma: Si la línea es diagonal. Está aumentada en los estados patológicos mas dispares. INTERPRETACION CLINICA: Prescindiendo del embarazo. índice de sedimentación en mm y el carácter de la gráfica. Mezclar llenar el tubo de Cutler. En las inflamaciones locales agudas (por ej. Por último los focos sépticos muy aislados del torrente sanguíneo (caries dentarias. En el nuevo tubo modificado de Cutler. Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o recaídas de mucho cuidado. Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave. por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las serosas (Infarto al miocardio. En la mujer normal la menstruación produce variaciones muy ligeras de la velocidad. sinusitis. se deposita 0.¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de sedimentación? 2. La VSG aumenta sobre todo. indica proceso leve o en quietud. amigdalitis crípticas) apenas aumentan la VSG. La VSG está más o menos aumentada en todos los tipos de anemias.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.8 g % y completar a 1 mL con sangre venosa.Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexión con el árbol vascular. pero si la aceleran cuando hay lísis de los tejidos derivados de la proliferación neoplásica.10 mm para mujeres 2 8 mm para hombres.5 ml de anticoagulante citrato de sodio 3. la determinación de la VSG.) Todas las infecciones generales de cierta intensidad. sin ser esto específico de ninguno en particular.. 3.¿Qué diferencias existen en la utilización de los diversos métodos para determinar la F-CV3-3B-2 Rev. Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentación. tapar con un tapón de goma y mantener en posición vertical. cada 5 minutos para construir la gráfica. sobre todo en las fases iniciales. de solución de citrato de sodio al 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O".1 mL. apartándose ligeramente de la curva normal. Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma: Con una jeringa de 2 mL. debido a una hemodilución de la sangre circulante. aspirar 0. Estas cifras deben estar en líneas casi horizontal cuando se gráfica a intervalos de 5 minutos. Colocar en posición vertical y hacer la lectura a la hora. focos pulmonares.6 Cuestionario 1. 3. la cantidad insuficiente de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda. tiempo en minutos. etc. Se debe indicar el método. ¿Cuál es la importancia clínica de la velocidad de sedimentación? 4. Barcelona: Toray Masson S.Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito. Junio 2007 .4 Procedimiento A. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana. Kumar V. 1985.. 3. Cálculos: Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se multiplica por 10.eritrosedimentación? 3. Buenos Aires: Interamericana. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en mujeres? 3. 7a ed.Wintrobe M. Buenos Aires: El ateneo. 2. Maxwell M. 3. SANGRE VENOSA: La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10. B. 6a ed. Valores normales: Mujeres: 42 mL% Hombres: 45 mL% F-CV3-3B-2 Rev. 2001. Collins T. HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO 3.7 Fuentes de información 1. Hematología clínica. Manual de Hematologia. 3.A. Centrifuga a 3.000 rpm durante 30 minutos. 3a ed. 1999. 4. Robbins S. 4. Toma de muestra. 2.2 Competencias 1.Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.3 Materiales y equipos Materiales Tubo de Wintrobe Equipos Centrifuga para capilares Reactivos Anticoagulante de Wintrobe 3. 1999. Cotran R. Lévy JP.. Bernard J.1 Marco teórico El hematocrito es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en el diagnóstico de las anemias corroborando los otros parámetros como el recuento de glóbulos rojos y la hemoglobina. Manual de patología estructural y funcional. Guerci A.. 6a ed. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. MATERIALES Y REACTIVOS Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina). Barcelona: Toray Masson S. Junio 2007 . Cotran R. 6a ed. Manual de patología estructural y funcional.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Wintrobe M. Explique las fórmulas correspondientes? 3. Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables perdida de agua como en la deshidratación. Guerci A. F-CV3-3B-2 Rev. ¿Cómo se hallan las constantes corpusculares. 2. Collins T.A. Buenos Aires: Interamericana. Hematología clínica. 1999. Maxwell M. Cuando no se dispone de centrifugadora de microhematocrito se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm.7 Fuentes de información 1. PROCEDIMIENTO: 1. Se emplea el método DE GUEST-WICHSEBAUN: se llena con sangre capilar. 1985. 2001. Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar. ¿Qué diferencias existen entre la eritrosedimentación y el hematocrito? 3. 4. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana. 6a ed.Interpretación Están disminuidas en las anemias. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. ¿Qué diferencias en los valores se pueden dar entre el microhematocrito y el hematocrito de Wintrobe? 2. Centrifugar y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo. 3. Kumar V. Buenos Aires: El ateneo. en los casos de hemodilución tales como la hidremia fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo. SANGRE CAPILAR: MICROHEMATOCRITO: En pediatría se esta difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre obtenida por punción digital. Manual de Hematologia. 3a ed. 7a ed. 1999. Bernard J. Lévy JP. 3. 2.6 Cuestionario 1. quemaduras y schock. Robbins S. Luego se aplica la siguiente formula: a .x 100 = ml% b a= longitud de la columna roja en ml b= longitud total de sangre que llena el tubo capilar 100= para referirse al Hc en ml% 3. . .2 Competencias 1. Junio 2007 . 4..3 Material y equipos Materiales Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos Reactivos Líquido de Turck: Violeta de genciana Ácido Acético glacial Agua destilada csp. 2.100 mL.1 mL.1 Marco teórico La leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los leucocitos. Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre. 4. Diversas son las causas o patologías que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glóbulos blancos e influenciar en el diagnostico clínico. PRACTICA No. Llevar a la platina del microscopio. Cargar la cámara cuenta glóbulos. esperar 5 minutos para que se depositen los leucocitos sobre el retículo. F-CV3-3B-2 Rev. Aplica formulas para el recuento de glóbulos blancos.IV. Completar con diluyente hasta 11. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos. 4. que corresponde al número de elementos celulares por unidad de volumen presente en una muestra de sangre después de provocar la lisis de los hematíes. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos. 2. 3. 3. haciendo 9 girar la pipeta. comprobar con débil aumento la uniforme distribución celular y verificar el recuento. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción de los hematíes y perfecta tinción de los núcleos leucocitarios. pero se omiten las que se hallan sobre la línea de izquierda..5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la pipeta de Thoma. 4: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS 4. 4. .. . 3 mL.. Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de arriba. Aspirar sangre hasta 0.4 Procedimiento 1. 5. Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos cuadrados situados en las esquinas de retículo. 000 a 9. Buenos Aires: El ateneo. 3a ed. clorosis. virales: rubéola. Indique que otros líquidos de dilución se emplean para el recuento de leucocitos y su composición química. 1999. Bernard J. 4. parotiditis. Buenos Aires: Interamericana. hepatitis. mala nutrición. durante el parto. Guerci A. Manual de Hematologia. El aumento de denomina LEUCOCITOSIS: Existe una leucocitosis fisiológica con neutrofilia entre 12. 3.000 y 14.A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.000 en el recién nacido. Hematología clínica. 4.5 Valores normales: 6. De orden patológico: la leucocitosis se debe a la quimiotaxis y al estimulo de los órganos hematopoyéticos (la quimiotaxis es la propiedad que tiene ciertos agentes de atraer o repeler células vivas) Una inflamación tiene poder quimiotáctico de atraer muchos leucocitos. malta. Lévy JP. sarampión. anemia perniciosa. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana. Interpretación: La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o granulocitopenia idiopática. 1999.Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8 células. Barcelona: Toray Masson S. 6a ed. 3. etc. 2001. Cotran R. 1985. 7a ed. Maxwell M. 6a ed. durante el embarazo en el 9º mes. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos? 2.000 por mm3 de sangre. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 .5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. fiebre tifoidea.6 Cuestionario 1. lo mismo ocurre con las bacterias y alguno tóxico se que atraen leucocitos a la circulación general. Robbins S.dilución cuando se aspira sangre hasta 0. ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos? 4. Manual de patología estructural y funcional. 4.7 Fuentes de información 1. Collins T. Kumar V. Cálculos: La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se añade 2 ceros (o se multiplica por 50) También: N x 10 x 20 = Leucocitos por mm3 de sangre N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4 10 = par referir al mm3 20 =. Wintrobe M. durante la digestión. 2. neutrófilos. 5. El hemograma incluye la cuantificación de los elementos formes que contiene la sangre por unidad de volumen. 5.1 Marco teórico Es el método analítico más frecuentemente solicitado en la práctica médica diaria. recuento porcentual de los leucocitos(habitualmente compuestos sólo por linfocitos. Agitar enérgicamente. 5. después de cumplida la semana. Su facilidad de realización y rápida modificación en muy diversas circunstancias fisiológicas y patológicas hacen también de él un método analítico de práctica casi obligada. La formula leucocitaria indica la presencia relativa de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre periférica y se expresa en porcentajes sobre el total. pero que curan con alguna alteración valorable del mismo. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en sangre coloreada. PRÁCTICA No. entre los que tenemos el de Giemsa.V. Conservar en frasco oscuro agitando un minuto diario durante una semana. 3. y granulocitos. monocitos. 2. sino también de las que no lo son. Pesar 0. Finalmente filtrar cada vez que ha de usarse. Leishman. HEMOGRAMA DE SCHILLING 5. no solo para el diagnóstico. Wright y Hastings. 5: FÓRMULA LEUCOCITARIA. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de leucocitos. añadir 6 ml. para los trabajos de rutina da excelentes resultados. Junio 2007 .2 Competencia 1.4g.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Reactivos Colorantes: En general los colorantes hematológicos que más se utilizan son los derivados de Rowanowsky. valoración y seguimiento de las diversas patologías hematológicas. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma. de glicerina. Colorante de Wright: Es una combinación especial a base de azul de metileno y eosina que. Dura seis meses. de colorante Wright en polvo.4 Procedimiento ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS: F-CV3-3B-2 Rev. además informa sobre valores o índices relacionados con el contenido hemoglobínico de los glóbulos rojos y el tamaño de éstos y el de las plaquetas. eosinófilos y basófilos). tamaño y color. agregar 194 mL de alcohol metílico libre de acetona. que consiste en tomar 4 puntos marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte central y contar 25 o 50 elementos en cada uno de los 4 puntos. F-CV3-3B-2 Rev. se recomienda el método aconsejado por Schilling. vacuolas o degeneración del citoplasma. anotando por separado cada variedad celular. El hemograma normal según Schilling es el siguiente: Tipo de leucocitos Neutrófilos Mielocito Metamielocito Núcleo en cayado Núcleo segmentado Porcentajes 0 0-1 3-5 55-65 2-4 0-1 20-30 4-8 Eosinófilos Basófilos Linfocitos Monocitos INTERPRETACION: Se habla de desviación hacia la izquierda del hemograma cuando aumentan las formas no segmentadas o inmaduras de los neutrófilos. posición. siguiendo el método serpenteando los cuatro campos. Observación reglada en 4 campos b. presencia o ausencia de zona perinuclear clara y características de los gránulos: número. o sea el porcentaje de cada tipo de leucocitos. Procediendo en estar forma. Debe anotarse el tamaño celular. es de recorrer el preparado en la forma que aconseja SCHILLING. presencia o ausencia de nucleolos. Como los granulocitos generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el centro. cuando aumentan las células maduras o adultas. en un frotis bien coloreado. Junio 2007 . color. membrana nuclear. las formas juveniles o metamielocitos y las formas en banda o cayado. La condición indispensable para justipreciar el porcentaje de cada tipo de leucocitos más bien en la mitad de la extensión la técnica más recomendable para obviar el inconveniente anotado. color. color. la llamada FORMULA RELATIVA. tamaño y distribución. La HEMOGRAMA DE SCHILLING Schilling clasifica a los neutrófilos en dos grupo fundamentales: neutrófilos no lobulados e incompletamente lobulados neutrófilos completamente lobuladados (2 ó más lóbulos) En el primer grupo incluye: los mielocitos. estructura de la cromatina. en el núcleo: forma. y para ello se procede a contar un número determinado de leucocitos (100-200 ó más). Observación reglada en dos campos En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se hallen uniformemente distribuidos en el extendido sanguíneo.Métodos para el examen del extendido sanguíneo en el recuento diferencial: a. y se dice que hay desviación hacia la derecha. FORMULA LEUCOCITARIA La formula leucocitaria permite conocer la cantidad de cada tipo de célula. en el citoplasma: cantidad relativa(cociente núcleo citoplasma). granulación tóxica. Madrid: Elsevier-Masson.F. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2007. 4. Turgeon ML. neutrofilia. Vives JLL. Barcelona: Masson. El Manual Merck. 6. Junio 2007 . 5. Aguilar JLL. basofilia. Muñoz J.7 Fuente de información: 1. 5. Hematología clínica. Manual de análisis clínicos. 3. 2005. eosinofilia y basofilia? 3. ¿Cual es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth? 5. ¿En que patologías se presentan linfocitosis.11a ed. Merck Sharp Dohme. 1999. linfocitosis. 2a ed.Así mismo se determinaran los posibles aumentos de los demás leucocitos denominándose eosinofilia. 2006.6 Cuestionario: 1. 6a ed. Madrid: Elsevier. Teoría y procedimientos. Esquematice a través de dibujos los diferentes tipos de leucocitos. Aiquel F. Gónzales De Buitrago JM. F-CV3-3B-2 Rev. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. 2005. Buenos Aires: Médica panamericana.: Manual moderno. 2.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. 2006. 2. 3a ed. Madrid: Masson. monocitosis. monocitosis. 5. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. México D. de Fonio M de Clef M.2 Competencias 1. Reactivo de Rees-Ecker: Citrato de sodio 3. La actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapón hemostático primario en los mecanismos de la coagulación (Hemostasia).. 4. Colorante de Wright 3. La visualización de una extensión de sangre permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su cuantificación para determinar si existe una disminución (Trombocitopenia) ó un aumento (Trombocitosis). de Demeshek METODOS DIRECTOS: F-CV3-3B-2 Rev. Formaldehído al 40% 0. 6.2 mL. Azul brillante de cresil 0. RECUENTO DE RETICULOCITOS Y RECUENTO DE EOSINÓFILOS A. RECUENTO DE PLAQUETAS 6.3 Materiales y equipos Materiales Pipeta de Thoma para glóbulos rojos Camara de Neubauer Laminas portaobjetos Reactivos 1. Los métodos para el recuento se pueden clasificar en: METODOS INDIRECTOS: Se basa en determinar la relación entre plaquetas y eritrocitos M. Junio 2007 . 6: RECUENTO DE PLAQUETAS.Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas 2.PRÁCTICA No..1 Marco teórico El recuento de plaquetas es el número de esos elementos (Trombocitos) por milímetro cúbico de sangre.VI.05 gr.Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas 6.8 gr. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14% 2. CALCULOS Para los cálculos se multiplica el número de plaquetas. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal manera que salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5 aproximadamente. M. Junio 2007 .000 ----------------. contadas en el frotis. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos 2. Se las ve muy refringentes. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la extensión. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que sedimente las plaquetas. plateada. 1. veces de color lila. Rees . 50 x 4'800.5 Las plaquetas se presentan redondeadas. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la aglutinación de las plaquetas. 4. Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz.Ecker M. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de 101. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para hematíes (25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno) CALCULOS: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3. alargadas. 2. F-CV3-3B-2 Rev. Wright 6. 5. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y verificar el frotis como si tratara de sangre sola. 3. 4. en forma de cono o poliédricas e irregulares.Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cámara hemocitométrica. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000 hematíes. Sobre la yema del dedo limpio. teñir con Whright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de dedicado a la formula leucocitaria. 1000 METODO DE REES-ECKER: Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no confundir impurezas con los trombocitos. Hematimetria: 4'8000. por el número de hematíes por mmc. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos. N : numero de plaquetas en el mm central de retículo 10 : para referir al 1 mm3 200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.000 plaquetas por mm3.0000 por mm. ovales.= 240. 3.c. seco y desinfectado colóquese una gota grande de solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome contacto con el aire.4 Procedimiento METODO DE FONIO: 1. Buenos Aires: Médica panamericana. 2. 3. anemia hemolítica.11a ed. Estados alérgicos. fiebre reumática. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 2006. Merck Sharp Dohme. Explique el fundamento del método de fonio y mencione los valores normales. 2005.F.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Madrid: Elsevier-Masson. Madrid: Masson.6 Cuestionario: 1. leucemia mieloide crónica.000 a 400.: Manual moderno. 2005. TROMBOPENIAS: Por debajo de 30. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. Barcelona: Masson. 5. atrofia de la medula ósea. F-CV3-3B-2 Rev. 1999. 6a ed. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. 6. Teoría y procedimientos. Aiquel F. traumatismo. 3. esplenomegalia. 6.000 plaquetas por mm3 de sangre INTERPRETACION: Las variaciones fisiológicas se presentación la ingestión de alimentos. 2a ed. Madrid: Elsevier. 3a ed. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker 6. Vives JLL. Gónzales De Buitrago JM. México D.7 Fuentes de información: 1.CIFRAS NORMALES: 50. leucemia linfática. 2007. anemia aplástica. Aguilar JLL. 2006. policitemia genuina. púrpura trombopénica esencial. Hematología clínica.000 dan manifestaciones hemorrágicas. actividad muscular. Manual de análisis clínicos. 6. después de las intervenciones quirúrgicas. 4. Muñoz J. TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significación clínica) hemorragias copiosas. intoxicaciones crónicas. Junio 2007 . infecciones crónicas. El Manual Merck. etc. 2. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas. anemia poshemorrágica. menstruación. Turgeon ML. Fisiológica cps.. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos 2. Alcohol absoluto..3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Reactivos Según el método humedo en tubo: Azul brillante de cresil Citrato de Sodio Formol al 40% Soluc. 6.25 gr. 100 mL 6... Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante. Junio 2007 .. F-CV3-3B-2 Rev. 6.... se observa en las anemias hemorrágicas y hemolíticas. Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30 minutos. 25 mL. 0.. Ej.4 Procedimiento METODO HUMEDO EN TUBO: En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo. Dividir por 10 para obtener el porcentaje. 0.B.2 Competencias 1. reconocibles en las extensiones de sangre por tinción especial.. 0.1 gr..05 mL. 20/10 = 2% METODO DE WOLFER Procedimiento: 1. RECUENTOS DE RETICULOCITOS 6. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes. 0.5 gr. Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado. Cálculos: Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de reticulos. se seca al aire y se práctica el recuento. Según El método de Wolfer: Azul cresil brillante. Secar al aire..1 Marco teórico Son hematíes jóvenes inmaduros pero de tamaño superior (macrocitos).. Se observa con objetivos de inmersión. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright 6. 1986.6 Cuestionario 1. 1985.5 -2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil. Buenos Aires: Panamericana. 1986. 7ª ed. 5. Mencione y explique los métodos para el recuento de reticulocitosis. Krupp M. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. Laboratorio. Aiquel F. Mientras mas tenues son las capas de la solución alcohólica y de las sangres mejor será la lectura. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio.A.5% Niños: 5-10% Interpretación: Aumento: Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 3.2. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de azul claro con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja. Anemias hemolíticas constitucionales Anemias que evoluciona con regeneración por tratamiento específico de vit. Cuando la sangre se regenera rápidamente después de una hemorragia (aumenta hasta constituir el 50% de hematíes) Disminución Anemia aplástica (falta absoluta) anemias que evolucionan con insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula ósea (anemia perniciosa muy avanzada) 6. 3. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos? 2. Dejar en reposo 10 minutos. 6. Gradwhol. Acido fólico en anemia megaloblásticas del sprue Hierro. Guerci A. Buenos Aires: Librería El Ateneo. 8ª ed. B 12 en la anemia perniciosa. 2.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. 3ª ed. F-CV3-3B-2 Rev. México DF: Manual Moderno S. Buenos Aires: Médica Panamericana. 4. Valores Normales Adultos: 0. anemia microcítica e hipocrómica ferroprivas. ¿Cuáles son los cálculos para el recuento de reticulocitos? 3. 1997. Manual de análisis clínicos. Junio 2007 .. Anemia hemolítica hereditaria (10-20%). 6.7 Fuentes de información: 1. cuyo alcohol se ha evaporado. 000 por mm3. Acetona -------------------------. EOSINOPENIA: F-CV3-3B-2 Rev.4 Procedimiento METODO DE DUNGER: Seguir la misma técnica que para el recuento de Leucocitos con dilución 1/20 (marca 0.10 mL.5) y los cálculos son iguales. Junio 2007 . Agua destilada csp. ----------------------.3 Materiales y equipos Materiales Cámara de Neubauer Pipeta de Thoma para glóbulos blancos Reactivos REACTIVO DE DUNGER Solución acuosa de Eosina al 2% ------------. La eosina tiñe de amarillo brillante los gránulos eosinófilos y la acetona disminuye la tendencia de los eosinófilos a romperse. La solución de Dunger lisa los hematíes y leucocitos pero los eosinófilos son más resistentes. El líquido puede conservarse durante dos semanas en la nevera. 6.100 mL.2 Competencias 1. 2.15 mL. Desarrolla el método de Dunger para el recuento de eosinófilos. Debe conservarse bien tapado y a baja temperatura. RECUENTO DE EOSINOFILOS 6. asma bronquial. 6. urticarias se llegan a contar hasta 3000 eosinófilos raramente puede encontrarse cifras mayores de 10. Efectúa los cálculos correspondientes para el recuento de eosinófilos 6. CIFRAS NORMALES: Hasta 500 eosinófilos EOSINOFILIA: En infestaciones parasitarias y afecciones alérgicas.1 Marco teórico Serie celular que pasa por las mismas etapas que la serie neutrófila polimorfonuclear. El recuento es de importancia clínica para determinar las eosinofilias características en enfermedades alérgicas y parasitarias.C. Madrid: Elsevier-Masson. El Manual Merck. 2006. Teoría y procedimientos. ¿Cuál es la interpretación clínica de los eosinófilos? 3. Aguilar JLL. atraen los eosinófilos por quimiotactismo. 3a ed. 3. 6a ed.7 Fuentes de información: 1. F-CV3-3B-2 Rev. Barcelona: Masson. Merck Sharp Dohme. Turgeon ML. 6.F.6 Cuestionario 1. Manual de análisis clínicos. Se supone que los complejos Ag-Ac o la histamina que están implicados en estas reacciones.5 Resultados: Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 2. 2a ed. 6. ciertosesteroides de la corteza suprarrenal y la adrenalina. Vives JLL.Provocada por la hormona adrenocorticotrofica (ACTH).: Manual moderno. 4. Madrid: Masson. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. Madrid: Elsevier. 2007. 6. Explique el fundamento del recuento de eosinófilos? 2. La misión exacta de los eosinófilos en la reacción inmunológica alérgica no está determinada. 2006. ¿En que casos se solicita un recuento de eosinófilos por parte del profesional médico? 6. Hematología clínica. 5. Junio 2007 . Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Muñoz J.11a ed. 2005. Aiquel F. México D. 1999. 2005. Gónzales De Buitrago JM. Buenos Aires: Médica panamericana. llevada acabo. 3.2 Competencias 1. gota levantar c/ 30". 3. tiempo de sangría y de protrombina. 7: TIEMPO DE COAGULACIÓN. 4. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias. Sin embargo.8' 1. o no de un riesgo hemorrágico.1 Marco teórico Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho hemostático. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre 2. resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemostática in vivo de un individuo mediante la realización de pruebas en el laboratorio. Hasta formar la FIBRINA. el tiempo de coagulación sanguínea. Dejar en reposo 3'. 7. TIEMPO DE COAGULACIÓN: A. Junio 2007 . Atendiendo a los puntos fundamentales de la fisiología de la coagulación de la sangre.4 Procedimiento 1. cuantificación del fibrinógeno y de las plaquetas. METODO DE BURKER: 2' . se deduce que la valoración rutinaria de la hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de Quick. TIEMPO DE SANGRIA. 7. 2. además bajo condiciones artificiales. TIEMPO DE PROTROMBINA. la existencia. Anotar dicho tiempo. DOSAJE DE FIBRINÓGENO 7. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación. la realización y valoración de unas cuantas técnicas puede ser suficientes muchas veces para presuponer. F-CV3-3B-2 Rev.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Cronometro Tubos capilares Tira de papeles secantes Tubos pequeños Tubo cónico graduado Equipos Espectrofotometro Reactivos Anticoagulante de Wintrobe Reactivo de Tromboplastina 7.PRÁCTICA No. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA. Con el estilete a la 1ra. con un alto margen de seguridad. se recomienda reportar la lectura del 2do tubo. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de 2 manchas ni más de 6.NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar la gota y la formación de fibrina B.5 ml de solución de oxalato de sodio 0. Para el otro tubo hacer la misma operación. porque la agitación y manipulación aceleran la coagulación. 3. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0. soplando el contenido. 3.5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre. 4. NOTA: El lapso transcurrido entre la aparición de la 1ra.1 M y adicionar 4. 5. 3 tubos capilares (8 en. Se recomienda hacer 2 determinaciones. Sangre venosa (3.E. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme un filamento de FIBRINA. Anotar el tiempo. VALOR PROTOMBINICO O INDICE PROTROMBINICO Se obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de Protombina encontrado y multiplicado por 100. Valores normales: 10 segundos a 12 segundos 4. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe rozar la piel. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37oC por 2'. ángulo de 45° hasta que la sangre coagulada no se desplace. gota y la toma de la última es el tiempo de sangría. 2. 2. Rev. V. 3. C. mezclar y separar el plasma mediante centrifugación. 4.5 mL de sangre venosa recién obtenida.10' 1. medir 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro de calcio 0. de largo) 2.02 M. 4. el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. METODO DE LEE Y WHITE: 5' . METODO DE SABRAZE: 3' . Toma el tiempo. TIEMPO DE PROTOMBINA METODO ORTHO-BRAIN 1. Anotar el tiempo cuando la sangre entra en la jeringa. La indica uno de los tubos c/ minuto.3' 1. simultáneamente poner en marcha el cronómetro. Observar la formación de una masa de coagulo que es el final de la reacción de protombina.N. Junio 2007 F-CV3-3B-2 .1 mL de plasma oxalatada y agregar rápidamente al tubo que contiene el reactivo de tromboplastina.8' 1. Se deja en reposo 3'. el contenido debe mezclarse por movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37oC. = T. x 100 T. 2. Anotar el tiempo. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm. Con una pipeta terminal de un mL graduada en décimos.P. 3. TIEMPO DE SANGRIA O DE HEMORRAGIA METODO DE DUKE: 1' .P.P. 3. 2. Obtener sangre capilar detectar la 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares. . . Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada. 1.5 g. dejar escurrir el suero dentro del tubo por 1 ó 2 minutos. obteniéndose una masa sólida con todo los componentes sanguíneos y la exudación de suero. En un tubo de centrífuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién extraída. multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido.0 g. Cálculos: El tiempo de retracción del coagulo se expresa en función del volumen del suero obtenido.BARDAWILL Y DAVID Fundamento: Por este método se determina dosando proteínas totales séricas en el plasma y el suero. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba. 4. 6. METODO DE MAC FARLAND. .1 mL.6 . . de diámetro en un extremo. . 2. .7). . 5. . . DOSAJE DE FIBRINOGENO Constituye el 5% de las proteínas plasmáticas. Ejemplo: Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y después de coagular ha dejado 3 ml de suero. . adopte el corcho en la boca del tubo. Un litro de plasma contiene 4 g de fibrinógeno. El fibrinógeno se origina en el hígado y en todo el sistema reticuloendotelial Se relaciona estrechamente con todo el proceso de la coagulación de la sangre.4. Reactivo de Gornall: (Biuret) Sulfato de cobre con 5H2O . Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la sangre. 1. . 3. el corcho debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botón.2 cm. la diferencia de ambas proteínas totales corresponde a la cantidad de fibrinógeno. en la trombocitopenia. Junio 2007 . 12 cm. 6. . Precipita por el calor de 52 a 56 oC y por solución de cloruro de sodio al 0.67% Interpretación Clínica: Está aumentada en las anemias por disminución del volumen celular. TIEMPO DE RETRACCION DEL COAGULO La retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre total. Permanezca el tubo dentro del agua a 37oC por una hora después de la formación del coagulo. . un alambre de 1 mm de espesor. la retracción porcentual será: 3 x 100 = 60% 5 Valores normales: De 44 . METODO DE GORNALL . .85% a semisaturación. El método utiliza un tubo de centrífuga graduada en divisiones de 0. F-CV3-3B-2 Rev. . . . Es una proteína soluble en el plasma sanguíneo muy lábil debido a su punto isoelèctrico (pH 6. de longitud con un ensanchamiento en forma de botón de 1. un corcho que se adapta a la boca del tubo. . . . eritremia y en enfermos con defectos en la coagulación. 1. Tartrato de sodio y potasio . . Llevar el tubo a un baño de agua a 37oC y observar de tiempo la coagulación de la sangre. dicha actividad es función retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina. . 5. . En un vial con anticoagulante obtener 5mL de sangre venosa. % Valores normales: 200 . luego los resultados obtenidos se restan obteniéndose mg.85% La intensidad del enturbamiento es proporcional a la concentración de fibrinógeno. tumores malignos. Cada unidad de enturbamiento equivale a 29.6ml de plasma y agregar 6ml de ClNa al 0. intoxicaciones por fósforo y cloroformo. Proteínas totales en el plasma: 130 x 0.Disolver en 500 mL de agua destilada.85% 1.85% PROCEDIMIENTO: En tres tubos de prueba limpios y secos membretar y colocar: S P B Suero Problema 0. fiebre tifoidea.1 mL Plasma Problema 0. lesiones difusas de las células hepáticas.060).5mg% de Fibrinógeno.9 mL 2 mL. nefritis. En 2 tubos P y B depositar 0. 2. enfriar y completar a 1000 mL con agua destilada. ambos se multiplican por el factor de proteínas (0. el tubo B se deja a temperatura ambiente y sirve para llevar a “O” de D. F-CV3-3B-2 Rev.1 mL Cloruro de Sodio al 0. fiebre reumática. Reactivo de Gornall 8 mL 8 mL 8 mL.50 g = 0. agregar 300 mL de hidróxido de sodio al 10%.85% 4.O.9 mL 1. 7. % METODO DE STIRLAND: FUNDAMENTO: Se basa en la propiedad del fibrinógeno de coagular a 56 oC mientras que las demas proteínas plasmáticas solo coagulan por encima de los 60 oC El fibrinógeno se precipita con solución de Cloruro de Sodio al 0. Anemia intensa. INTERPRETACIÓN: Cifras altas: Hiperhinosis: Neumonía. 8. Solución del Cloruro de sodio al 0. El tubo P se pone en Baño Marìa a 56 °C por 15 minutos 6. Lectura: Se lee el enturbamiento al espectrofotometro a 660 nm.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. hepatitis tóxica. TBC pulmonar. Mezclar por inversión y dejar en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente.060 = 7. Dicha lectura se lleva a la curva de enturbamiento del Timol. 2. % de fibrinógeno. Disminución: Fibrinopenia: desnutrición.30 g O sea: 300 mg. 7. Junio 2007 . contra el blanco del reactivo. Transferir a un tubo y centrifugar por 5 minutos a 3000rpm 3. Mezclar ambos tubos. 5. Por ejemplo si las lecturas para proteína totales en el plasma es de 130 y para el suero de 125. PROCEDIMIENTO: 1. Cálculos. septicemia. 9.060 = 7. Embarazo normal. artritis reumatoidea. Leer a 540 nm. Retirar el tubo del baño y enfriar a temperatura ambiente.400 mg.80 g Proteínas totales en el suero: 125 x 0. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría? 3. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación? 2. Manual moderno. Buenos Aires: Médica panamericana. Junio 2007 . Madrid: Masson. 2006. Aiquel F. 2. Aguilar JLL. Turgeon ML. 1999. 2007. Madrid: Elsevier-Masson. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo? 4. Hematología clínica. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 3. 2005. Barcelona: Masson. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 5. Gónzales De Buitrago JM. 2006. 6a ed.F. Merck Sharp Dohme.7 Fuentes de información: 1. 2a ed. Manual de análisis clínicos.6 Cuestionario 1. Vives JLL.7.: Edit. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. ¿Cuál es el fundamento del dosaje de fibrinógeno? 7. 3a ed. El Manual Merck. F-CV3-3B-2 Rev. Muñoz J. 6. 2005. Teoría y procedimientos. México D. Madrid: Elsevier. 4.11a ed. VIII. 8. VARIANTE DU y PRUEBA DE COOMBS. A.2 Competencias: 1. 8: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO.Diferencia el Rh positivo del negativo 3. F-CV3-3B-2 Rev.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO 2.3 Materiales y equipos Materiales Laminas de porcelana Tubos de ensayo Reactivos Anticoagulante de Wintrobe 8.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. del anti-Rho (D). PRÁCTICA No. 8. del suero tipificado anti-A y 1 gt. Si hay aglutinación es Rh positivo. FACTOR Rh . Agregar 1 gt.En un porcentaje se coloca 1 gota de sangre mas 1 gto. Mezclar y observar. Si no hay aglutinación el grupo será CERO. mezclar y observar. 8. basándose en la presencia o ausencia de las propiedades químicas en la superficie de los hematíes que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran número de grupos sanguíneos bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas específicas. del suero tipificado anti-B. Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB. 8. Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO A Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B. 2. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR RH.4 Procedimiento Método Indirecto de Beth Vincent: 1. Junio 2007 .1 Marco teórico: El polimorfismo mas significativos de los eritrocitos depende de las características inmunológicas.. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante agitación moderada y examinar si existe aglutinación o no.2 Competencias 1. Como entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reacción de los eritrocitos Du varia con el suero utilizado. 2. Junio 2007 . 4. acercando a la boca del tubo un papel de filtro para absorber el líquido.4 Procedimiento 1. Agitar bien el tubo para homogenizar. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos de solución salina hasta cerca del borde del tubo. 7. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.000rpm por 5 minutos) 5. Si hay aglutinación: Du es Rh positivo Si no hay aglutinación: Du es Rh negativo C. 3.B. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du 8. (centrifugación a 2. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. En un tubo pequeño depositar: 1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%. 3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Reactivos Suero antihumano de Coombs 8. VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D 8.1 Marco teórico El término Du se refiere a la expresión débil del antígeno D normal es decir. Decantar completamente después del último lavado.1 Marco teórico F-CV3-3B-2 Rev. 6. la menor concentración del antígeno D por glóbulo rojo esta es una característica heredada. PRUEBA DE COOMBS 8. 2. 8. 8. No hay aglutinación NEGATIVO.Se basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse revistiendo los eritrocitos o bien estar en suspensión en el plasma.M. Solución salina fisiológica 3. 9. pero no cuando los anticuerpos están en suspensión. 8. Suspensión globular al 2% 2. un suero antigamaglobulina humana de conejo (suero de Coombs) aglutinan directamente los eritrocitos cuando están revestidos. Junio 2007 . Mezclar. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto. 6. Prepara suspensión globular al 2% en solución salina fisiológica de la sangre del grupo O Rh positivo. Como corresponden a la fracción gammaglobulínica de las proteínas séricas. Examinar el Tubo: Si hay aglutinación POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre está determinado por la calidad de glóbulos empleados).3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Equipos Centrifuga Reactivos 1. La aglutinación solo se produce al tratar los glóbulos recubiertos con suero de Coombs. 8. Mezclar. Diferencia las pruebas de Coombs directa e indirecta 2. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA: F-CV3-3B-2 Rev. 2. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. Repetir por 3 veces dicho lavado.. De esta diferencia surgen dos tipos de pruebas de Coombs: la directa y la indirecta. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. 1. Llenar con solución salina fisiológica. 5.4 Procedimiento A. a 37 oC por 60 minutos. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA: Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a los glóbulos suspendidos en solución Salina fisiológica. Suero antihumano de Coombs 8. Decantar el sobrenadante. 4. Incubar en B.2 Competencias 1. 7. Absorber con papel filtro. B. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las células. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solución preparada + 2 gotas del suero de la madre 3. Emplea las técnicas adecuadas para determinar los anticuerpos incompletos. Repetir el lavado dos veces.transfusión va seguida de una negativización a los pocos días. en ciertas anemias hemolíticas auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles. En los niños no tratados de eritoblastosis fetal. Se estudia la sensibilización de los eritrocitos de la sangre umbilical. por ejemplo en la eritroblastosis hemolítica del recién nacido. y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. 1. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinación. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 . mientras que en las exanguineo .Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glóbulos del paciente in vivo. Globular + 1 gota del suero antiglobulínico 6. 5. 3. retirando cada vez todo el líquido remanente. Decantar el líquido sobrenadante. 2. La aglutinación en el tubo contenido los hematíes problemas y su ausencia en el tubo testigo evidencia su sensibilización. la reacción positiva persiste durante varias semanas. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces. Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemolítica del recién nacido). Luego se prepara una suspensión de hematíes al 2% en SSF. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solución fisiológica. 4. 1999. Los antígenos febriles se utilizan para efectuar diagnósticos rápidos de las fiebres tificas. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du? 3. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. Junio 2007 . Se utilizan en la prueba rápida de aglutinación en lámina mediante la reacción antígeno-anticuerpo con el objeto de detectar la presencia en suero de anticuerpos que los pacientes producen durante las enfermedades mencionadas. 2005. 6. 2005. Madrid: Elsevier-Masson. Buenos Aires: Médica panamericana. 4. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 8. Vives JLL. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones. Madrid: Elsevier. Aiquel F. Aguilar JLL. se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la madre mediante la prueba indirecta. 2007. 3. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Directa.F. México D.2 Competencias 1.: Manual moderno.1 Marco teórico Las pruebas inmunológicas son muy útiles para el diagnóstico de muchas patologías a través de los métodos cualitativos y cuantitativos.6 Cuestionario 1. 2. Explique el fundamento bioquímico de la prueba de Coombs Indirecta. Manual de análisis clínicos. Teoría y procedimientos. También se emplea para el diagnóstico de algunos tipos de anemias hemolíticas. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.11a ed. ¿Cuál es la importancia clínica de los sistemas ABO y Rh-Hr? 2. F-CV3-3B-2 Rev. AGLUTINACIONES 9. Muñoz J. 8.7 Fuentes de información 1. SIFILIS A. PARATIFOIDEA. 2006.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Barcelona: Masson. 2006. Merck Sharp Dohme. 8. 9. 2a ed. Hematología clínica. 3a ed. Madrid: Masson. Turgeon ML. MALTA. paratificas y brucellosis. 6a ed. El Manual Merck.Como profilaxis de la enfermedad. 5. PRACTICA No 9: PRUEBAS SEROLÓGICAS: DETERMINACIÓN DE FIEBRE TIFOIDEA. 4. 2. 1/80. Prueba presuntiva: Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en cada cuadrado. Prueba de titulación: Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de suero: 0. 2.11a ed. 6a ed. Madrid: Masson. 3. 2006. El Manual Merck. Agregar a cada suero una gota del antígeno. 1/160 y 1/320. Gónzales De Buitrago JM.F. Reactivos Antígenos febriles o Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas: tifico o. Manual de análisis clínicos. 2005. Merck Sharp Dohme. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 9. Aiquel F. 1999. paratífico b y brucella abortus.7 Fuente de información 1. 9. 9. Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a tres minutos.04. F-CV3-3B-2 Rev.4 Procedimiento Las determinaciones comprenden dos etapas: 1. el treponema pallidum . A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.6 Cuestionario 1.08. 1/40. 5. Aguilar JLL. Buenos Aires: Médica panamericana. 3a ed. 4. paratífico a. Madrid: Elsevier. ¿Cuál es la interpretación clínica de los valores TO y TH elevados? 9. 0. Los títulos serán: 1/20.01 y 0. dentro de las no treponémicas: VDRL y RPR. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas. Madrid: Elsevier-Masson. 2a ed. Junio 2007 . DIAGNÓSTICO DE SIFLIS 9.1 Marco teórico La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causado por una bacteria espiritada. tifico h.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.2.005 mL de suero respectivamente. Hematología clínica.02.: Manual moderno. Mezclar. 2005. Vives JLL. 0. Luego hacer la lectura. Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2007. 2006. Teoría y procedimientos. Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta aglutinación. México D. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. B. 0. Para el diagnóstico se emplean pruebas serológicas treponémicas y no treponémicas. Barcelona: Masson. 6. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las aglutinaciones? 2. Turgeon ML.3 Materiales y equipos Materiales Lamina de vidrio a. Muñoz J. 9. 05ml al anillo cinco y asi sucesivamente hasta el anillo seis. LECTURA E INFORME 1.05ml al anillo cuatro. Reactivo débil (RD) grumos pequeños 3. .grumoso grandes y medianos 2. Numerar los anillos de la lámina 2. Mezclar la solución salina y el suero del anillo dos y transferir de este anillo. 0. 7. Solución salina al 0.4 Procedimiento A. Mezclar el contenido del anillo cuatro y transferir 0. 6. Cargar 0. Colocar la lámina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. De obtener reactivo sobre el título 1/8 continuar con las diluciones. o rotarlo manualmente.05ml de suero problema en el anillo 1 y 2 2. 2. Mezclar el contenido del anillo tres y transferir 0. A partir del tercer anillo cargar las muestras problemas. MÉTODO DE VDRL VDRL CUALITATIVO EN SUERO 1. VDRL CUANTITATIVA EN SUERO Colocar 0. 4. 6.3 Materiales y equipos Materiales Laminas portaobjetos Equipos Rotador eléctrico Microscópio Baño María Reactivos 1.9% 3. Colocar la lámina serológica con las muestras en un rotador a 1800 rpm por 4 min.Reactivo. 9. LECTURA E INFORME 1. Junio 2007 . Determina los anticuerpos del treponema pallidum a través de los métodos serológicos no treponémicas.(R) 2.05ml de los surcos control reactivo y no reactivo al primer y segundo anillo respectivamente 3. Examinar al microscopio con objetivo de 10x y ocular de 10 x 8.017ml de solución antigénica preparada sobre el suero contenido en cada uno de los anillos de la lámina.9. 3. . Reactivo (R).017 ml de la solución antigénica sobre el contenido de cada anillo de la lámina serológica.2 Competencias 1.05ml de solución salina al 0. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas. Del anillo 1 al 6. Añadir con una micropipeta 0. Terminada la rotación examinar la lámina inmediatamente usando un microscopio con objetivo de 10x. 4.Reactivo debil (RD) F-CV3-3B-2 Rev.05ml al anillo tres. Añadir con la micro pipeta 0. Sueros controles 9. Añadir 0. 5. No reactivo (NR) sin grumos. 5.9% del anillo dos al anillo seis de la lámina serológica 1. Solución antigénica de VDRL 2. Estos anticuerpos que también se les conoce con el nombre de crioaglutininas se hallan presentes en títulos muy bajos en las personas sanas. Vives JLL. 2005.de igual manera que para VDRL . 6a ed. 2005.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.6 Cuestionario 1. 9.: Manual moderno. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del círculo sin salir del margen. 10. 9. por 8 min a 100 RPM.11a ed. 1999. Gónzales De Buitrago JM. Aguilar JLL. 4. Determina el proceso para la determinación de crioaglutininas F-CV3-3B-2 Rev. . MÉTODO DE RPR Es una prueba serológica plasmática de floculación macroscópica RPR CUALITATIVO EN PLASMA 1. La aglutinación es de carácter reversible. 5. 2a ed. ANTIESTREPTOLISINA (ASO) A. Agregar 0. 2006. 3. Buenos Aires: Médica panamericana. Aiquel F. 2006. 2007.. El Manual Merck. México D. . Madrid: Elsevier-Masson. Manual de análisis clínicos. Hematología clínica. 3. DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS 10. Este es un buen procedimiento para detectar una aglutinación auténtica al frío.F. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeños debe realizarse la prueba cuantitativa.1 Marco teórico Las crioaglutininas son anticuerpos que en el suero son capaces de causar la aglutinación de sus propios eritrocitos (autoaglutininas).2 Competencias 1.R.017ml del antígeno con micropipeta o una gota con el gotero del kit sobre la muestra a evaluar. 2. 5. ¿En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR? 2. PRACTICA No 10: DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS. 2. Reactivo. o pequeños pero definidos 8. Merck Sharp Dohme. PRUEBA A. Madrid: Masson. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 3a ed. Barcelona: Masson.LECTURA E INFORME 7. asi como las de otras personas (isoaglutininas). Muñoz J. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. Junio 2007 . Colocar 0. Teoría y procedimientos. 4. 6.3.No reactivo (NR) B. Madrid: Elsevier. 7 Fuentes de información 1. o hacerlo manualmente. Turgeon ML. a una temperatura comprendida entre o y 5 oc.¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo? 9. es decir que desaparece a 37 oc y reaparece a baja temperatura. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lámpara de luz.-(R) Grumos grandes medianos. 6. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador del kit no olvidar colocar los sueros control. PRUEBA DE PCR. X. ¼ . 1/16. 1/80. Separar el plasma en un tubo de ensayo.5ml que se desechan. En 8 tubos de ensayo colocar en el primer tubo o.5mL de anticoagulante y el resto de sangre colocar en otro tubo sin anticoagulante. 1/320 y 1/640. 5.000rpm durante 5 minutos. 1/160. en el falciformismo.5mL luego se agrega 0. 4. Extraer 10 mL de sangre: colocar 4. 3.85% 10.8% Centrifugar a 2.5mL en un tubo que contiene 0. 8. Hacer las lecturas. TITULACION: 6. 1/20. algunas hepatitis se pueden encontrar títulos elevados. 1/10. MÉTODO DE TRÖNBERG: Obtener 6 mL de sangre.8mL de SSF y a los demás 0. Del tubo con anticoagulante tomar una cantidad determinada y lavar los eritrocitos por 3 veces con SSF. mezclar con 1. 3. mezclar y pasar al segundo tubo y así sucesivamente hasta el sexto tubo del cual se desecha 0.5% (0. Examinar todos los tubos balanceándolos o girando ligeramente para apreciar la intensidad de aglutinación en caso de ser positiva se considera al de mayor dilución y son negativas cuando no existe aglutinación.5% a cada uno de los tubos.4 Procedimiento MÉTODO DE AIQUEL 1. 1/40. Colocar los tubos en la heladera a 4º hasta el día siguiente. ANTIESTREPTOLISINAS O F-CV3-3B-2 Rev. 1/32 y 1/64. Las diluciones serán: 8. Con el paquete de glóbulos rojos preparar una suspensión de hematíes al 0. 2.05ml de glóbulos rojos y completar a 10mL de SSF) TITULACIÓN: En 6 tubos de ensayo colocar en cada uno 0. 6. 7.2.5mL de la suspensión de hematíes. Centrifugar el tubo que contiene el coagulo.5mL al 2do tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo de donde se extraen 0. 9. 5. 4. 2. El tubo octavo sirve de testigo. a fin de separar el suero. 9. Junio 2007 . Se agregan a todos los tubos 0. 10. 1/8.3mL de SSF Al primer tubo colocar 0. Interpreta los resultados encontrados en la prueba de crioaglutininas 10.3mL de la suspensión de hematíes al 0. así mismo en la anemia hemolítica adquirida y congénita. 7.3mL del plasma. SIGNIFICANCIA CLÍNICA Se asocia con el síndrome clínico de la neumonía atípica primaria causado por el Micoplasma pneumoniae. 10.2 mL de suero se mezcla y se pasa 0. Después de eliminar el líquido del último lavado preparar una suspensión al 2% en SSF. A los dos tubos llevar a la temperatura de 37 oC los dos hasta que la sangre del segundo tubo coagule.8% Solución de cloruro de sodio al 0. Adicionar 0.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Reactivos: Oxalato de Potasio al 2% Solución de citrato de sodio al 3. 1. en la tripanosomiasis. Colocar en una gradilla y llevar a refrigeración (2-5 oC por 24 horas).5mL de citrato de sodio al 3. B.3mL Las diluciones serán: ½. 2 Competencias Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina.4 Procedimiento 1. 2. Suero del paciente no hemolisada ni contaminada debe ser inactivada a 56 oCx 30min ó 60 oC x 10min. luego añadir 0.20mL del suero diluido 1/20 se mezcla bien y de el se toma 0. erisipela etc. Antígeno de estreptolisina “O” 4. sin embargo un título superior a 500 u solo se registran en fiebre reumática. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.20mL y pasar al siguiente tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo eliminando finalmente 0. lo tanto una prueba específica de fiebre reumática. Se agita para homogenizar y se incuba nuevamente a baño de agua a 37 oC por 45min.40 g. Junio 2007 . se disuelve c. fosfato disódico anhidro 1. La presente determinación es útil para el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática y sirve para la comprobación serológica de las antitoxinas de defensa contra las toxinas bacterianas. cuyo título se expresa en unidades de todd.10 mL de antígeno y se incuban en baño maría a 37 oC durante 15 minutos.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Pipetas automáticas Reactivos 1.10 ml de las suspensión de eritrocitos al 5% en buffer de ASTO. Interpreta los resultados cuantitativos para un asto positivo. 3. fosfato monopotásico 3. 3. 1/160. siendo la cifra normal 102 u Todd/mL. 4. 1/80. INTERPRETACIÓN. pero apoya su diagnóstico cuando la historia y los signos clínicos la sugieren. 1/320. Buffer de ASTO. De esa manera obtenemos las siguientes diluciones 1/40.10. Con un límite máximo de 250u . entre los anticuerpos antiestreptococicos destaca por su interés clínico la antiestreptolisina o. Pero tienen especial interés en los procesos estreptocócicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomérulo nefritis aguda. 10.20mL del tubo siete el octavo sirve de control. escarlatina.. es útil para el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática . la glomérulo nefritis aguda y otras infecciones por estreptococo beta hemolítico.17g . 1/1280. Suspensión de eritrocitos humanos lavados dos veces con solución fisiológica y una con solución buffer de ASTO.p 1000cc con agua destilada conservar en heladera. es decir para la F-CV3-3B-2 Rev.81g. lo cual concede su diagnóstico a esta prueba. Un título alto de antiestreptolisina o significa infección estreptocócica sobrepasada o actual y concretamente debido a estreptococos beta – hemolíticos del grupo serológico a (excepcionalmente de los grupos c y d de la clasificación de lancefield) amigdalitis.. 1/640. 10.s. Se hace una dilución del suero 1/20 2. 10. 1/2560.1 Marco teórico La antiestreptolisina “o” prueba que a menudo se designa el nombre de asto . No es por. En el primer tubo colocar 0.20mL de buffer de ASTO. se suspende al 5% en este buffer.A los ocho tubos se coloca 0. sepsis puerperal. En ocho tubos numerados del 1 al 8 colocar 0. VALORES NORMALES. cloruro de sodio 7. Por este método los valores normales van de 1/40 a 1/60 unidades Todd. . bacterias .5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.F. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la prueba de antiestreptolisina. Diagnóstico clínico por el laboratorio. México D. más indirecta. proteínas. 2. pigmentos biliares. Etc. Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina 3. 9a ed. etc.6 Cuestionario 1. Davidson I.3 Materiales y equipos Materiales Tubos de ensayo Equipos Microscopio Centrifuga Urodensimetro Reactivos Tiras reactivas para determinaciones bioquímicas en orina F-CV3-3B-2 Rev.: McGraw – Hill Interamericana. PRACTICA Nº 11: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO. 2007. 4. permite la valoración directa del propio aparato urinario. Bernard J. 2002. 2001.cristales. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. Barcelona: Elsevier España SL. además la facilidad de su recogida. 3. C y G. color. Barcelona: JIMS.7 Fuentes de información 1.) Y microscópicas del sedimento urinario (leucocitos. 5. pH.l. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Platt W. bioquímicas (glucosa. 4a ed. 8a ed.A. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO? 2. Madrid: Marbán libros s.el examen de orina completa significa que se realizara varias pruebas física (densidad. Pagana T. 10. Henry J.). Deska K. 7a ed. hematíes. ¿En que se diferencian las pruebas de PCR y LATEX? 10. Talaska F. etc.comprobación de una infección existente o pasada por estreptococos beta hemolítico de los grupos serológicos humanos A. Barcelona: Salvat Editores S. A estas ventajas hay que añadir. que habitualmente no representa ninguna molestia valorable para el paciente . 3. Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina 2. Junio 2007 .) 11. Manual de pruebas diagnósticas. por otra. resulta ser un reflejo de determinadas situaciones bioquímicas de la sangre. Atlas de hematología en color. 2008. Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina 11. nitritos. cilindros. 10. 1992. QUÍMICO y MICROSCÓPICO 11.1 Marco teórico La utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado..2 Competencias 1. Se prefiere las primeras muestras de la mañana. Luego las distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca ancha y perfectamente limpio incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día siguiente. Para reunir esta muestra. Se coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento. es decir que compensa el metabolismo de un almuerzo o de una cena. Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no organizados.m.11. EXAMEN QUIMICO: Determinación de: acidez total proteínas cloruros glucosa fosfatos cuerpos cetónicos urea pigmentos biliares urobilinógeno hemoglobina Hoy en día existe en el mercado la utilización de papeles o tiras reactivas para el análisis de orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes químicos de la orina. Para el examen microscópico del sedimento. Sedimento organizado: Células epiteliales Escamosas o pavimentosas Células redondas o poliédricas Células de transición Cilindros Cilindroides Leucocitos y Piocitos F-CV3-3B-2 Rev. el paciente iniciará la recolección a las 8 a. Junio 2007 .4 Procedimiento Según la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se instruirá al paciente acerca de como procederá para la recolección de muestra de orina. se utiliza preferentemente una muestra de reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente. que suelen ser las más concentradas. En todo examen de orina se tomará en cuenta: 1. es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los casos en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los exámenes en un muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas. teniendo en cuenta: Par los exámenes de rutina. de orina a 1500rpm durante 5 minutos. vaciando la vejiga y desechando esa primera micción. Sedimento no organizado: En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado clínico salvo si se trata de cristales de oxalato. El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para impedir la descomposición prematura de la orina. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO: El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. uratos o de cistina. organizados y cuerpos extraños. EXAMEN FISICO: Cantidad Color Olor Espuma Reacción Densidad 2. transcurrido dicho tiempo se vuelca el líquido sobrenadante y se suspende el sedimento en el liquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrífuga. 3. ¿En que procesos patológicos se presenta Thevenon positivo? 4. 4. Aiquel f. Manual de análisis clínicos. 2006. 2005. Madrid: Masson.F. 5.: Manual moderno. 2a ed. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 6a ed. Muñoz J. ¿Cuales son las condiciones para una buena toma de muestra de orina? 2. 11.7 Fuentes de información 1.6 Cuestionario 1. 3a ed. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.Eritrocitos 11. Madrid: Elsevier. Teoría y procedimientos.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. ¿En que casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina? 3. 3. Gónzales De Buitrago JM. Madrid: Elsevier-Masson. 2. 2007. Vives JLL. 2006. 6. 2005. Merck Sharp Dohme. México D. Aguilar JLL. El Manual Merck. Buenos aires: médica panamericana. Junio 2007 . Barcelona: Masson. 11. F-CV3-3B-2 Rev. Técnicas y métodos de laboratorio clínico.11a ed. 1999. ¿Cual es la importancia clínica de encontrar piocitos en una muestra de orina?. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina? 5. Turgeon ML. Hematología clínica. Colorante Gram Cristal violeta alcalino: Sol. Sol. 12 : UROCULTIVO: COLORACIÓN GRAM.4 Procedimiento RECOLECCION DE MUESTRAS: 1. A: cristal violeta 1g. 5.5g agua destilada csp 100 mL. Agua destilada csp. Ioduro de potasio 2g. Medios de cultivo: Agar Mac Conkey ó EMB Agar Azida Sangre Agar Chapman 3. 12. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos. Agua destilada csp 100mL. 2. Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo. A: fucsina básica 0. ANTIBIOGRAMA. 2. 7. 100 mL. 2. B: fenol 5ml.3 Material y equipos Materiales Tubos de ensayo Asa de Kole Placas Petri Reactivos 1. 95ml. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.3g alcohol de 95º. Sol. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos 3. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 200mL.2 Competencias 1. De yodo 1g.PRÁCTICA No. Sol. Interpreta los hallazgos de laboratorio 12. órganos o secreciones adyacentes. Sol. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente) 4. Junio 2007 . Acetona 3 vol. 6. Decolorante: eter 1 vol. Colorante de contraste: safranina 0. F-CV3-3B-2 Rev. Sol. De azul de metileno 12. Alcohólica de ácido clorhídrico Sol. 1 Marco teórico El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un tratamiento adecuado y oportuno 12. 8. Agua destilada csp. Mezclar las soluciones a y b Sol. 10ml. químico. Junio 2007 . 3. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae Sensible a la bacitracina:Stp tipo A. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo solicitada. 12. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado. (puede demorar 36 a 48 horas). Utilizar dispositivos de recolección. Observar a las 24 horas. microscopio. bacilos y en la coloración estos últimos aparecen teñidos. puede ser Stp. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina 1. 6. Si hay mas de 100 colonias: No existe infección.SIM-INDOL.Coloración gram del sedimento: . F-CV3-3B-2 Rev.CS.Si el sedimento se observará además de leucocitos.3. Siembra en agar MH o TSA por diseminación general. .Examen de orina completo: físico. No. sedimento. Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo) • Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las colonias son amarillas son Stf aureus) • Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe hemólisis. 5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de antibióticos. .Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB Agar Azida Sangre Agar Chapman . Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre. (usar discos antibióticos para gram negativos) Crecimiento en Agar Azida Sangre Coloracion gram positivo Observar si hay hemolisis. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias 2. UREA. Crecimiento en agar Mac Conkey: Coloración gram negativo Siembra en diferenciales: LIA. recipientes para las muestras y medios de cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos. Tercer día: 1.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir ANTIBIOTICOS: A: SENSIBLE B: MEDIANAMENTE SENSIBLE C: RESISTENTES 2. UROCULTIVO: Primer Día: Recolección de la muestra. entonces se práctica una coloración de ZiehlNeelsen (bacilos ácido-resistente) Segundo día: Lectura del recuento microbiano. Sembrar por diseminación en Agar MH o TSA y usar discos de antibióticos para gram positivos. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la técnica.TSI. 4. Diferenciales para Stp: Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminación y colocar discos de Optoquima y Bacitracina. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las técnicas de examen directo y concentración 2. 2001. Manual de pruebas diagnósticas. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de microorganismos gram negativos? 2. Bernard J. método de concentración de faust.: McGraw –Hill Interamericana. La aplicación y conservación de esta solución. METODO DE FAUST 13. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. Barcelona: Salvat Editores S. 2. Pagana T. Barcelona: Elsevier España SL..6 Cuestionario 1. ¿Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo. se aconseja conservarlos mediante diversas formas: Conservación por el frío. Líquido de Deschiens: Glicerina 100 mL. ¿qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo? 12. 9a ed. México D. 2008.12. 8a ed. varía según las consistencia de las heces. así por ej: Las heces duras emplean agua formolada al 5%. Deska K. 4a ed. Las heces pastosas emplean agua formolada al 10% Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes. b. 2002. 3. así podemos mencionar: Solución fijadora y conservadora por el agua formolada. 7a ed..A..2 Competencias 1. 3. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento 13.1 Marco teórico En la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los parásitos intestinales en las heces. 1992.3 Materiales y equipos CONSERVADORES Cuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados inmediatamente. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo? 4. Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios. método de sedimentación de teleman.7 Fuentes de información 1. ¿qué importancia tiene el antibiograma? 5. 13: ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO. Junio 2007 . Talaska F. Diagnóstico clínico por el laboratorio. Madrid: Marbán libros s. willis. utilizando técnicas del laboratorio más usadas como las del método directo. La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volúmenes de agua formolada por 1 volumen de muestra de heces. Platt W. emplean agua formolada al 20%. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatología. 13. diagnóstico. Barcelona: Editorial JIMS. El laboratorio en el diagnóstico clínico. 4. tratamiento y prevención de la parasitosis intestinal. 2007. F-CV3-3B-2 Rev.F. jarabe fenolado. Atlas de hematología en color. PRACTICA No.l. Davidson I. etc. Henry J. 5. Sol de PVa (Alcohol Polivinilico) REACTIVO DE FAUST: Sulfato de Zinc al 33% (D>1. Examen por el Método de Concentración. Tenias. en cambio las líquidas nos permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser conservadas. RECOLECCION DE LAS MUESTRAS El paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de vidrio de boca ancha limpia y seca.180) REACTIVO DEL JARABE FONOLADO: Reactivo: Azúcar granulada 400 g Agua destilada 300 mL Fenol 1g Disolver el azúcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de jarabe y añadir 1g de fenol como conservador. las larvas o formas adultas de los parásitos pueden encontrarse ocultos en medio de la masa fecal. ya será de papel o de cartón.5 mL 250 mL 6g Existe otros conservadores tales como: Sol. en esta caso se filtrarán la muestra a través de un tamiz y se hará la observación.Formaldehído al 40% Agua destilada c. Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste. 2. Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra fresca. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de Sapreso y Lawles.5 mL 12. de Ringer o sol. por ej. empleando sol. EXAMEN MACROSCOPICO: Este examen consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa la consistencia de las heces. de lugol parasitológico y sol fisiológica de cloruro de sodio. Solución de De la Plaza: Formaldehído al 40% Glicerina Sol. mucus. METODO DIRECTO F-CV3-3B-2 Rev. Trichuris trichiura. 13. 2. no debe utilizar recipientes porosos. sangre y formas adultas de parásitos tales como: Enterobius vemincularis. Por el método de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis. En todo examen de heces para la búsqueda de parásitos deben considerarse el siguiente orden: 1. Junio 2007 . Ancylostoma duocenales. empleando un método de rutina. Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos especiales. de Ringer > ClNa ClK 75 g Cl2Ca 100 mg HCO3Na 100 mg Agua destilada csp 1000 mL 100 mL 800 mL 12. rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al laboratorio cerrándole herméticamente. Cuando las heces son blancas o líquidas. Examen por el método directo de heces frescas.4 Procedimiento El estudio debe identificarse en las heces: Las formas vegetativas Huevos Larvas Quiste de los parásitos. Ascaris Lumbricoides. EXAMEN MICROSCOPICO: En este examen parasitológico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos: 1. etc. fisiológica Sol. 5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como tiempo mínimo. ¿En que consiste la tecnica de Graham ? A. METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotación) 1.Permite encontrar mayoría de los parásitos. 6. de lugol. la sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm durante 1 o 2 minutos. En dos láminas portaobjetos limpios y secos. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia. 13. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos.6 Cuestionario 1. Junio 2007 . mezclar homogéneamente. retirar de la centrifugadora y decantar el liquido sobrenadante. Fases de separación residuos mas voluminosos b. 2. METODO DE CONCENTRACION: Tiene por objeto reunir en un pequeño volumen a los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces. Por este método se observan larvas y huevos de los helmintos. quiste de protozoarios con núcleos teñido de amarillo. 5. Fase de concentración y enriquecimiento de los elementos parasitarios: Método de Ritchie Método de Carles-Barthelemy METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION: METODO DE FAUST: 1. Después de la centrifugación se decanta el líquido sobrenadante. En un recipiente adecuado. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la operación por 3 veces hasta que el agua del sobrenadante permanezca límpida. 7. 3. clasificándose en dos grupos: I. de. larvas y huevos de helmintos. mezclar bien. Adicionar mas jarabe fenolado hasta el borde del vial 4. fisiológica y con la ayuda de un mondadientes colocar una porción de muestra a ambas láminas preparadas. colocar en uno de ellos dos gotas de sol. F-CV3-3B-2 Rev. Los métodos de concentración son muy numerosos. Método de sedimentación de Teleman METODOS DIFASICOS: Comprende dos etapas: a. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la suspensión. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se encuentra flotando los quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto limpio y seco agregar una pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el examen al microscopio. METODOS FISICOS: Por sedimentación y por flotación. 5. las vacuolas de color pardo. 13. se prepara una suspensión de materia fecal mezclado una parte de heces con 10 partes de agua tibia. 4. en la otra lámina 2 gotas de sol. 2. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta unos 2 g de heces. cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento. y añadir 3 a 4 ml. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se recoge 10 ml en un tubo de centrifuga. Método de Faust Método del Jarabe Fenolado Método de Willis B. 3. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el examen microscópico. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre 2. 5. 4a ed. Mantener en refrigeración.l. 2007. Reactivo enzimático 2. 2. Gradillas Tubos de ensayo Pipetas volumétricas Pipetas automáticas Baguetas Centrifuga Espectrofotómetro Reactivos 1. Davidson I. México D. Barcelona: Salvat Editores S. Deska K. Henry J. de glucosa deben interpretarse de acuerdo con la hora. 7a ed. 8a ed. La concentración de glucosa en los líquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de insulina (acción hipoglucemiante y la alza mediante el glucagón.2. Manual de pruebas diagnósticas. 2. catecolaminas y hormona de crecimiento). Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones solicitados en análisis clínicos 14. Diagnóstico clínico por el laboratorio. ¿Cuales son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente que se sospecha parasitosis? 3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis? 4. 3. 4. 9a ed. 2001.las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la dosis de insulina que debe administrarse. Bernard J. 5.1 Marco teórico La determinación de glucosa sérica es útil para el diagnostico de numerosas enfermedades metabólicas (diabetes mellitus). Standard de glucosa: una solución de glucosa 100mg/dl que contiene preservantes y estabilizadores. El laboratorio en el diagnóstico clínico. 4.A. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 14.3 Materiales y equipos Materiales 1. GLUCOSA POST PRANDIAL. día en la que se tomo la muestra. 2002. 14. XIV. Platt W.4 Procedimiento METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO: F-CV3-3B-2 Rev. 14. ¿En que consiste el método del jarabe fenolado? 13. 14: DOSAJE DE GLUCOSA. Madrid: Marbán libros s. PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA. Junio 2007 . Pagana T.F. Talaska F. 6. cortisol. 2008. Barcelona: Elsevier España SL.: McGraw –Hill Interamericana.7 Fuentes de información 1.. Barcelona: JIMS. Los niveles séricos. 7.2 Competencias 1. Atlas de hematología en color. 1992.. 3. PRACTICA No. F-CV3-3B-2 Rev. Davidson I. 3.Preparar 3 tubos y agregar en ellos: BLANCO (mL) Standard Suero Reactivo constituido 1. Buenos Aires: El ateneo.0 STANDARD MUESTRA (mL) (mL) 0. 14. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. Incubar por 5 minutos a 37oC Leer absorbancia a 505nm contra el blanco. 5. 2.01 1 . Bernard J. Guerci A. 2001. Junio 2007 . 2008.x A muestra problema A standard A= valor de absorbancia obtenido. ¿Por qué es importante la utilización del método enzimático para determinar glucosa en sangre ? 14. Pagana T. Patología humana. Madrid: Elsevier. 4a ed.. Cálculos: Glucosa (mg/dL) = 100 --------------------. 2004. Kumar V. El color es estable por 1 hora.5 Resultados Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica. 8a ed.A. Madrid: Elsevier-Masson. 6. ¿En que consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa? 2. 1997. VALORES: Suero o plasma: 65 – 115 mg/dL 14. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 9a ed. 2006. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. Barcelona: Elsevier España SL.7 Fuentes de información 1. ¿En que consiste la prueba de la hemoglobina glicosilada? 3. Barcelona: JIMS. 3a ed. Widmann F.6 Cuestionario 1. Barcelona: Salvat Editores S.0 0. Vives JLL. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 1985.0 Mezclar suavemente. Cotran R. 3a ed. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio.01 . Robbins S. Deska K. 7a ed. Aguilar JLL. 4.