Guia de Practicas Cont Micr de Los Medic 2015 - II

3B-2GUÍA DE PRÁCTICAS Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS MEDICAMENTOS Autor (es): Mg. Ana María Chávez Fernández F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 INTRODUCCIÓN La posibilidad de acceder a medicamentos seguros, eficaces y de calidad es un derecho esencial de la población que siempre debe ser garantizado. El aseguramiento de la calidad implica un conjunto de metodologías y procedimientos que exceden el control del producto terminado, e involucran todos los aspectos que intervienen en el proceso de elaboración. Entre estos aspectos puede mencionarse la forma y el modo en que se recibe la materia prima en el establecimiento elaborador, los procesos de producción del medicamento, las características de los espacios donde se llevan adelante esos procesos, los modos en que se depositan y tratan los productos una vez terminados, y el funcionamiento del laboratorio de control de calidad de la planta, entre otros. Estos controles se fundamentan en orientaciones técnicas que se basan en el conocimiento exacto de la información contenida en las principales obras de referencia en general y las consideraciones microbiológicas que aplican a la industria farmacéutica en particular, en la preparación y el control de los medios de cultivo, las cepas de prueba, los equipos, los indicadores biológicos para esterilización y los desinfectantes empleados en la industria farmacéutica, en el aprendizaje de la metodología del análisis microbiológico del agua y la aplicación de los criterios e interpretación de resultados en la industria farmacéutica y de la evaluación microbiológica de cuartos limpios y ambientes controlados. Además de ello deben conocerse las pruebas previas a la evaluación microbiológica de un producto farmacéutico no estéril y estéril, las pruebas de aptitud de los métodos así como entender y aplicar los criterios de validación de los métodos de análisis microbiológico. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 I. PRÁCTICA Nº 1 REVISIÓN SISTEMÁTICA Y USO PRÁCTICO DE LAS OBRAS OFICIALES: FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMÉRICA (USP), FARMACOPEA BRITÁNICA (BP) Y FARMACOPEA EUROPEA (EP), EDICIONES VIGENTES 1.1 Marco teórico El conocimiento de las principales obras oficiales de referencia es un requisito indispensable para el químico farmacéutico, entender la organización de su contenido permite consolidar su conocimiento de la industria farmacéutica en relación a las pruebas microbiológicas que aplican a los procesos de elaboración de productos farmacéuticos (materia prima, excipientes, almacenamiento, empaques, productos en proceso, productos terminados). La preparación de monografías se realiza en consulta con un grupo internacional de expertos y usando como referencia las farmacopeas vigentes. Se hace hincapié en el uso de métodos que estén al alcance de laboratorios de control de calidad modestamente equipados en países de escasos recursos. La certificación de la calidad de los productos farmacéuticos documentada en las farmacopeas, se basa en el objeto de comercio internacional de proporcionar un instrumento normativo y un vehículo para el intercambio de información entre las autoridades competentes de los países importadores y exportadores. Las actividades de armonización concentradas inicialmente en las prácticas adecuadas de fabricación se han complementado con directrices sobre la inspección de los fabricantes, la validación de los procesos de fabricación y las prácticas adecuadas de elaboración de productos farmacéuticos y biológicos destinados a la investigación. A medida que la producción local de productos farmacéuticos y biológicos aumente y se propague a los nuevos países fabricantes, esas directrices tendrán una creciente pertinencia, puesto que servirán de respaldo a las normas reconocidas internacionalmente, que forman la base de la garantía de la calidad. Continúa la labor de seleccionar productos internacionales de referencia o de "comparación" para uso en estudios de equivalencia y de elaborar los Principios rectores para la autorización reglamentaria de productos farmacéuticos intercambiables procedentes de distintas fuentes (genéricos). De tener éxito, la armonización de los requisitos farmacéuticos redundará en cuantiosos ahorros del tiempo y de los costos que exige la elaboración e investigación de nuevos medicamentos. Al estar de acuerdo sobre la documentación y los expedientes básicos comunes relacionados con eficacia, inocuidad y calidad, se facilitarán los exámenes reglamentarios y el reconocimiento internacional de los medicamentos autorizados. La organización de las obras oficiales involucra pues, las advertencias o noticias generales, las monografías (generales o por forma farmacéutica y específicas o de formas farmacéuticas) y los capítulos generales que incluyen los métodos de análisis. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 Para que las normas y los patrones sean, primero, aplicables y, luego, debidamente cumplidos, todas las partes interesadas deben participar tan activamente como sea posible. 1.2 Competencias Relaciona los tipo de medicamentos y formas farmacéuticas, en función de los procesos de fabricación y los estándares que las obras oficiales exigen en cuanto criterios - microbiológicos. - Practica el uso de las farmacopeas, la organización de su contenido, la búsqueda de la información precisa en cuanto a estándares microbiológicos. - Valora la importancia del cumplimiento de los estándares de las normas de calidad microbiológicas. 1.3 - Materiales y equipos Texto de las principales obras oficiales (ediciones vigentes): o Farmacopea de los Estados Unidos de América (USP). o Farmacopea Británica (BP). o Farmacopea Europea (EP). 1.4 Procedimiento - Discusión del material bibliográfico revisado. - Elaboración y presentación de un mapa mental del contenido de las obras oficiales revisadas, estableciendo un orden de prelación en cuanto a la forma en que se presentan los estándares en general y los criterios microbiológicos en particular. - Presentación del reporte final con las conclusiones. Fig. 1.1. USP 32-NF 26 Fig. 1.2. BP 2009 Fig. 1.2. EP 6º Edición 1.5 Resultados F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 Estándar. Explique y dé ejemplos. - Ulises E. Cuarta Edición.). Farmacopea Internacional.–Formulario Nacional 27º Ed.NF 27). Disponible en: http://el50. - Farmacopea Británica 2008 (British Pharmacopoeia. F-CV3-3B-2 Rev. 2007. fourth edition). 1.1. Farmacopea Europea Sexta Edición (European Pharmacopoeia.6 Cuestionario - Defina lo siguiente: o o o o - Farmacopea. 2009. 2008.com/2007/08/14/mapas-mentales-una-forma-de-organizar-y-estimularlas-ideas/Autor/es. ¿Cuál es la diferencia entre Especificación y Criterio de aceptación?. Mapas mentales una forma de estimular las ideas. (USP 32. [acceso 26 de julio de 2009]. Junio 2007 .7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. Monografía. 2009. 2009). [Blog en internet]. Artículo farmacopeico. (International Pharmacopoeia. Agosto. 6º Ed. tales como las técnicas asépticas. el control de las cepas de prueba. el control de los medios de cultivo. considerando la variabilidad que caracteriza a los mismos (véase USP 32. CONTROL DE EQUIPOS. todos estos elementos necesarios para asegurar las buenas prácticas antes mencionadas (véase USP 32.2 Competencias Reconoce las técnicas que sustentan las buenas prácticas de un laboratorio microbiológico y aplicarlas. 2. el control de los equipos. <1117> y <1111>). Reactivos y Medios de cultivo: o 30 Tubos estériles de 18 x 150 mm (con tapa rosa) o 28 Placas Petri estériles descartables o 12 Placas Rodac estériles descartables o 7 Frascos x 250 mL o 1 Frasco x 1 L o 4 Probetas x 100 mL ó x 250 mL o 1 Probeta x 1 L o 4 Beaker de 100 mL o 20 Pipetas x 1 mL o 4 Pipetas x 2 mL o 2 Micropipeta de 10-100 uL o 30 Tips o 2 Litros de agua destilada o 8 Baguetas de vidrio o 1 Baño de agua a ebullición o 4 Trípodes o 4 Ollas o 4 Guantes quirúrgicos estériles o 4 Apósitos de algodón o Cepas de estudio: F-CV3-3B-2 Rev. Asume la optimización de las prácticas microbiológicas en la liberación de productos farmacéuticos.II. PRÁCTICA Nº 2 PREPARACIÓN Y CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO.1 Marco teórico Las buenas prácticas en un laboratorio de microbiología involucra actividades que se basan en varios principios. El control per se requiere reconocer la importancia del uso de indicadores biológicos para esterilización. el registro detallado así como la evaluación de los datos y la capacitación del personal. <1035>). CONTROL DE CEPAS DE PRUEBA. REGISTRO Y EVALUACIÓN DE INFORMACIÓN USO DE INDICADORES BIOLÓGICOS Y QUÍMICOS PARA ESTERILIZACIÓN EN LA INDUSTRIA FARMACÉUTICA 2. Aplica y experimenta las buenas prácticas microbiológicas ejecutando las operaciones per se. Junio 2007 . del uso de desinfectantes y además del uso de inhibidores de la actividad antimicrobiana. 2. La observancia de estos principios coadyuvará a la confiabilidad y reproducibilidad de los métodos microbiológicos.3 - Materiales y equipos Materiales. lote. número de lote asignado al medio preparado. 8 g por cada frasco con 200 mL de agua destilada (1)).1 Medios de Cultivo: Operaciones preliminares: .4 Procedimiento 2. nombre del medio de cultivo.Del personal y del área de trabajo: Proveerse de los elementos de protección necesarios para la práctica microbiológica. cantidad preparada. o Polisorbato (0. Preparación: F-CV3-3B-2 Rev. cultivo de 5 días en Agar Sabouraud en tubo inclinado ó Candida albicans. Fig. o 4 Frascos con alcohol al 70% o 1 Frasco con Solución de Hidróxido de Sodio 1N o 1 Frasco con Solución de Ácido Clorhídrico 1N o 1 Frasco con Polisorbato 80 (Tween 80) Equipos: o Estufa u horno o Autoclave o 1 Vortex o 1 Potenciómetro o 2 Termómetros o 4 Balanzas 2.4. Fig. cultivo de 24 horas en Agar Digerido de Caseína y Soja en tubo inclinado.75 g por cada 150 mL de agua destilada (2). Elementos de protección Limpiar y desinfectar la zona de trabajo.05 gramos en 100 mL de buffer) o Agar Digerido de Caseína y Soja (6 g por cada 150 mL de agua destilada (3). Reactivos: o Fosfato monobásico de potasio (0.- - ƒ Staphylococcus aureus. ƒ Aspergillus niger. 2.5 g por 100 mL de Agar Sabouraud Glucosado(1)). Junio 2007 . cultivo de 5 días en Agar Sabouraud en tubo inclinado. se procede al registro respectivo en el formato correspondiente. 2.1.2. 6.034 g en 800 mL de agua destilada con Hidróxido de Sodio o Ácido Clorhídrico 1N. pH. Algodón y alcohol Registro: Cada vez que se prepara un medio de cultivo. o Agar Sabouraud Glucosado (9. en el cual se anotan los siguientes datos: fecha. Incubar los medios preparados incluyendo los distribuidos en las placas petri a una temperatura de 30ºC – 35ºC por 48 horas. lote de preparación y fecha de preparación. de2.Transcurrido el periodo de incubación retirar los medios y almacenarlos en condiciones adecuadas hasta su uso.4.Escoger un recipiente limpio y de una capacidad que exceda aproximadamente en un 40%. si se trata de medios de cultivo que contienen agar. . .Los F-CV3-3B-2 Expiración mediosFig. luego agregar el medio de cultivo y completar con el resto del agua. .Pesar la cantidad de medio de cultivo deshidratado siguiendo las indicaciones dadas por el fabricante (etiqueta del frasco del medio respectivo). Uso de la balanza para pesar medios de cultivo AGAR PLATE COUNT AGAR PLATE COUNT Fig. corregir el pH mediante el uso de NAOH ó HCl diluidos. Si fuera necesario.Distribuir el medio de cultivo preparado en frascos. Esterilización . ya Rotulado de las placas Rev. el volumen del medio a preparar. si se trata de caldos nutritivos. 2.3. Junio 2007 . . disolver poco a poco con agua caliente hasta observar que el medio esté transparente.Para el caso de un medio de cultivo no deshidratado. .Colocar la cinta indicadora de esterilización a todos los envases en donde se distribuirán los medios preparados.Cerrar los envases que contienen el medio de cultivo disuelto.Disolver el medio. pesar los ingredientes Individualmente. Rotulado del material de vidrio . .Tomar el pH del medio con el potenciómetro o con cintas indicadoras de pH de rango adecuado. . .. tubos u otro material según el análisis a realizar.En el recipiente elegido depositar una parte del agua medida. .Medir en una probeta el volumen de agua purificada a usar. . 2. .Proceder a la esterilización en autoclave siguiendo las indicaciones de esterilización para cada medio. con suficiente agitación. Fig. . Control .5.Rotular los envases con el nombre del medio de cultivo.Distribuir los medios que contienen agar y así lo requieran en placas petri estériles y dejarlos solidificar.cultivo preparados y esterilizados. unirlos en un recipiente y luego proceder igual que el medio deshidratado. 4. tendrán la vigencia que reporta el fabricante. por ejemplo: en medios no reconstituidos. Fig.Los frascos de medios de cultivo. o en medios reconstituidos. . cambio de color. 2.2 Buffer Fosfato pH 7. siempre que hayan sido conservados en condiciones adecuadas. agrietamiento por desecación.Indicadores Químicos y Biológicos 2.sean conservados en los recipientes que fueron esterilizados o dispensados en otros envases en forma aséptica. Control de los medios de cultivo Fig.2: Solución Stock .Los medios de cultivo se emplearán dentro de fecha de vigencia. Junio 2007 . apelmasamiento del polvo.6. 2.También se pueden almacenar a temperatura ambiente protegidos de la luz por un período máximo de 15 días. .1.7. Estufa de esterilización Fig. salvo que presenten manifestación visible de su deterioro.6. en la refrigeradora a una temperatura de 2ºC – 8ºC.6. Uso de indicadores Fig. serán utilizados hasta un mes después de su preparación.2. luego del cual serán eliminados si no se utilizaron.2. cerrados. . 2.Disolver 34 g de fosfato potasio monobásico en 500mL de agua purificada en una fiola de 1000 mL F-CV3-3B-2 Rev. etc. cambio de color. 2. Disponible en: http://www.2 .–Formulario Nacional 27º Ed.25 mL de la solución stock a una fiola de 1000 mL .Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. Aseguramiento de calidad.Guardar en la refrigeradora de 2ºC – 8ºC Solución de uso .Ajustar el pH a 7.Homogenizar y esterilizar a 121ºC .2 ± 0. (USP 32. . luego añadir 1g de tween 80.. Medios de Cultivo y Reactivos. transferir 1. 2.Esterilizar. [acceso 26 de julio de 2009].7 Fuentes de información . [Internet].Cuesta A. agitar. 2.Para 1 Litro. Presentación del reporte final con las conclusiones. Noviembre.2 ± 0.pps F-CV3-3B-2 Rev. .NF 27). Junio 2007 .6 Cuestionario - Explique la diferencia entre un método trazable y otro que no lo es.Ajustar el pH a 7. agitar y llevar a volumen con agua purificada.org/es/inocuidad/codex/rla3014/pdf/presen3.2 .5 Resultados Registrar los resultados obtenidos.rlc.fao. Presente un formato de reporte que demuestre la trazabilidad en la preparación de los medios de cultivo del laboratorio de microbiología? Explique y dé ejemplos. 2.Añadir aproximadamente 500mL de agua purificada. 2006. . Rev.45 μm de diámetro con cuadrículas. o 4 Placas con Agar Cetrimide. o Agar Cetrimide. artículos farmacopeicos y reactivos analíticos.125 g para 150 mL para 6 placas con medio solidificado. estériles o 8 Pinzas estériles o 10 Placas petri con agar recuento de placa (plate count) o agar de recuento de placa de métodos estándar o TGYA.Aplica y experimenta la metodología existente para el análisis de agua en la industria farmacéutica.III. 3. Medios de Cultivo o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Métodos Estándar (TGYA): 4. productos intermedios. o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Métodos Estándar (TGYA) 2.2 g para 160 mL de medio. Para asegurar el cumplimiento de determinadas normas de calidad microbiogica y química mínimas. 7.Distingue los requerimientos de los tipos de agua en la industria farmacéutica.Reconoce la importancia y adquiere destreza en la realización de controles microbiológicos del agua.35 g por cada 100 mL de medio licuado. 3.4 Procedimiento - F-CV3-3B-2 Toma de muestra: o Desinfectar el grifo o punto de salida del agua. 8 g para 160 mL de medio. flameando con un mechero de alcohol. ingrediente y disolvente en el procesamiento. PRÁCTICA Nº 3 TOMA DE MUESTRA Y ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA CRITERIOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA FARMACÉUTICA 3.1 Marco teórico El agua se usa ampliamente como materia prima. Junio 2007 . el agua usada en la producción de fármacos o la que usa como fuente de alimentación para la preparación de distintos tipos de aguas purificadas debe cumplir los requisitos de las reglamentaciones básicas relativas al agua potable (véase USP 32.5 mL de Tiosulfato de Sodio al 3% o 4 Frascos x 500 mL con 300 mL de agua destilada estéril o 4 Mecheros Bunsen o 4 Mecheros de alcohol o 8 Pipetas bacteriológicas de vidrio estériles x 10 mL con algodón o 4 Equipos de filtración estériles (embudo y porta membrana) dos para agua potable y otro dos para agua purificada o 4 Bombas de vacío o 4 Kitasatos estériles x 1 L o 30 Membranas filtrantes de 0. o Agar Mac Conckey. o 4 Frascos con 100 mL de Agar Recuento de Placa (Plate Count) o Agar de Recuento de Placa de Métodos Estándar o TGYA licuado o 12 Pipetas estériles x 1 mL ó x 2 mL o 24 Placas Petri estériles o 4 Placas con Agar Mac Conckey. formulación y fabricación de productos farmacéuticos. . ingredientes farmacéuticos activos (API).2 Competencias .3 Materiales y equipos - - Materiales o 4 Frascos estériles x 500 mL con 0. 3. <1231>). –Formulario Nacional 27º Ed. à Método de Filtración por Membrana à Método de Vertido en Placa Fig. 3. (USP 32. se sumergirá el frasco sin tapa. permitiendo el ingreso del agua.7 - F-CV3-3B-2 Sustente el seguimiento microbiológico que aplica a los diferentes tipos de agua. 3.0 mL Este método se aplica para agua potable. si se trata de agua potable el frasco deberá contener 1 mL de tiosulfato de sodio por cada litro de agua muestreada (inactivando el cloro presente en el agua potable). Fig.2. No. Annex 3. o Si se trata de aguas de cisterna o pozos. Sistema de filtración: Filtración por Membrana 3. Thirty-ninth report. o Procesar la muestra dentro de las dos primeras horas después de haber sido recolectada y si no fuera posible se deberá mantener la muestra en refrigeración (2ºC a 8ºC durante máximo 12 horas). AC). Siembra por vertido en placa 3.6 Cuestionario . MC. o Utilizar un frasco estéril de boca ancha con tapa rosca para la toma de muestra. Fuentes de información Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. o Tiempo de incubación: 48 a 72 horas. WHO Good Manufacturing Practices: water for pharmaceutical use. World Health Organization. 2005. en el caso de agua potable o de cisterna.1. Recuento o Rotular el material a utilizar.5 Resultados Registrar los resultados obtenidos. o Medio de cultivo: Agar Recuento de Placa de Método Estándar o TGYA o Agar Plate Count o Condiciones de Incubación: 30ºC a 35ºC. Rev. MC.Defina: o Niveles de alerta o Niveles de acción. 3. AC) y en el caso de agua potable se filtran 10 mL también para cada medio (APC. o Volumen de muestra: ƒ Vertido en Placa: 1. o Cerrar herméticamente el frasco y etiquetar. 929. ƒ Filtración por Membrana: 100 mL y 10 mL Este método se aplica para agua destilada y agua potable. o La muestra debe tomarse con sumo cuidado evitando rozaduras y lo mas estéril como sea posible.NF 27). WHO Technical Report Series.- o Dejar correr 1 o 2 minutos el agua y proceder a la toma de muestra de 300 mL a 500 mL. en el caso de agua destilada se filtran volúmenes de 100 mL para cada medio a emplear (APC. Junio 2007 . 9 %. además de la necesidad de la necesidad del establecimiento y control de la calidad microbiológica de ambientes controlados (véase USP 32. Junio 2007 . o 4 Tubos con 5 mL de Cloruro de Sodio al 0. o 16 Placas Petri con Agar Digerido de Caseína y Soja*. Observa las especificaciones y requerimientos de los cuartos limpios y ambientes controlados en la industria farmacéutica.4 Procedimiento - Microorganismos Viables Transportados por el Aire: o Placas de Sedimentación.IV.1 Marco teórico Dado que los microorganismos se desarrollan en una amplia variedad de ambientes naturales. Agar Sabouraud Glucosado: 6. o 12 Placas Rodac con Agar Digerido de Caseína y Soja*.5 g por cada 100 mL de medio. formas farmacéuticas y en ciertos casos. Microorganismos Viables en Superficies: o Placas de contacto Rodac (Replicate Organism Direct Agar Contact). dispositivos médicos.3 Materiales y Equipos - Materiales: o 4 Láminas de papel manteca estériles de dimensión A4. o 4 Frascos de 100 mL Agar Sabouraud Glucosado. - Medios de Cultivo y Reactivos: o o o Agar Digerido de Caseína y Soja: 4 g por cada 100 mL de medio. _________________________ * Material preparado en la práctica Nº 2 F-CV3-3B-2 Rev. Aplica y experimenta la metodología para la toma de muestra de ambientes y superficies. <1116>). 4. más aún cuando en la industria farmacéutica se llevan a cabo procesamientos asépticos de fármacos a granel. 4. PRÁCTICA Nº 4 TOMA DE MUESTRA Y ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AMBIENTES Y SUPERFICIES CRITERIOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA FARMACÉUTICA 4.2 Competencias Reconoce la importancia y adquiere destreza en la realización de controles microbiológicos de los ambientes en la industria farmacéutica. Cloruro de Sodio: 0. es importante controlar su presencia. o Hisopado.45 g de Cloruro de Sodio en 50 mL de agua destilada 4. que en la parte central presenten un recuadro recortado de 10 x 10 cm o 4 Tubos de 30 x 20 mm conteniendo 10 hisopos estériles cada uno o 12 Tubos estériles de 18 x 150 mm o 20 Pipetas estériles x 1 ó 2 mL o 1 Vortex o 40 Placas Petri estériles descartables o 4 Probetas estériles x 100 mL o 4 Frascos de 100 mL de Agar Digerido de Caseína y Soja. e. 4.Usando la plantilla con la superficie delimitada haciendo uso de las láminas con el área de 10 x 10 cm. Control de superficies Seleccionar el método adecuado para los objetos asignados. . Hisopos Fig. . Solución de enjuague Fig. d.2. Realizar las observaciones al microscopio y reportar los resultados obtenidos: Para las bacterias realizar primero la coloración Gram. f. proceder a incubar: Las placas de Agar Digerido de Caseína de Soya a 30ºC a 35 oC. 4. Reportar las observaciones y anotar los resultados obtenidos. Placas Rodac - Control de ambientes o o o o o o o o o o - Seleccionar el área del laboratorio para realizar el control ambiental. b. o Placas RODAC: Aplicar la placa sobre la superficie a evaluar. c. F-CV3-3B-2 Rev. luego vertical.1.Fig. Colocar placas petri con Agar Digerido de Caseína de Soya (por duplicado cada punto a monitorear) por espacio de 20 minutos como mínimo. Terminada la operación introducir el hisopo en un tubo que contiene 5 mL de solución salina. por cinco días. Luego de la exposición. 4. . Para los hongos preparar láminas con hidróxido de potasio (KOH). Para las bacterias realizar primero la coloración Gram.3. Junio 2007 . ii.Hisopado directo. por dos días Las placas de Agar Sabouraud Glucosado a 20 ºC a 25 oC. Realizar el mismo procedimiento pero esta vez exponiendo placas petri con agar Sabouraud Glucosado. o Hisopado: a. Realizar las observaciones al microscopio y reportar los resultados obtenidos: i. Embeber el hisopo en solución salina e hisopar según el tipo de superficie a evaluar. Realizar las observaciones diarias de las placas para evidenciar el crecimiento microbiano y reportar los resultados obtenidos. Incubar de 30º a 35ºC por 48 a 72 horas.5 Resultados Registrar los resultados obtenidos. 4. rotular y agitar en un vortex por 1 minuto. Tomar 1 mL y trasladarlo a una placa estéril para adicionarle 15 mL de agar digerido de caseína y soja. haciéndolo primero en forma horizontal. en diagonal de derecha a izquierda y después de izquierda a derecha. Para los hongos preparar láminas con hidróxido de potasio (KOH). NF 27). (USP 32.–Formulario Nacional 27º Ed.6 Cuestionario 4. Junio 2007 . Rev.7 - F-CV3-3B-2 ¿ En qué se basan las diferentes normativas que clasifican los ambientes controlados? ¿ Qué clase de ambientes requieren un constante monitoreo ambiental ? Fuentes de información Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.4. Material y Equipos Materiales o 35 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7. Previo al análisis deberán realizarse la prueba de promoción de crecimiento y la prueba de aptitud del método de recuento.05% o 88 Placas Petri estériles o 5 Pipetas de 0.2 Competencias 5. <62>). 5. ésta última será definida según la naturaleza del producto y el límite de microorganismos requerido (véase USP 32: <61>.1 ó 1.V.2 (volumen total 350 mL). PRÁCTICA Nº 5 PRUEBAS DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO Y APTITUD DEL MÉTODO PREVIO AL ANÁLISIS DE UN PRODUCTO FARMACÉUTICO NO ESTÉRIL: LISTA DE CHEQUEO Y EJECUCIÓN 5. Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de promoción de crecimiento y de aptitud de los métodos de recuento microbiano.1 Marco teórico El examen microbiológico de productos farmacéuticos no estériles incluye en primera instancia las pruebas de recuento cuantitativo de bacterias mesófilas y hongos que pueden desarrollarse en condiciones aeróbicas. Si los productos a examinar poseen actividad antimicrobiana. Junio 2007 . o 15 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7. ésta deberá eliminarse o neutralizarse para lo cual los inactivadores deberán ser de probada eficacia además de ser inocuos para los probables microorganismos contaminantes.0 mL o Gradillas o 15 Espátulas de Drigalsky estériles o 24 Pipetas de 2.2 (volumen total 350 mL) más Polisorbato al 0.0 mL o 12 Placas con Agar Manitol Salado o 12 Placas con Agar Cetrimide o 12 Placas con Agar Sabouraud o 4 Frascos con 100 mL de Agar Digerido de Caseína y Soja o 4 Frascos con 100 mL de Agar Manitol Salado o 4 Frascos con 100 mL de Agar Cetrimide o 4 Frascos con 100 mL de Agar Sabouraud o 8 Tubos com 9 mL de Caldo Agar Digerido de Caseína y Soja o 4 Tubos com 9 mL de Caldo Sabouraud Medios de Cultivo y Reactivos: o Fosfato monobásico de potasio o Agar Manitol Salado o Agar Cetrimide o Agar Sabouraud o Agar Digerido de Caseína y Soja o Agar Manitol Salado o Agar Cetrimide o Agar Sabouraud Glucosado o Caldo Digerido de Caseína y Soja o Caldo Sabouraud Cepas de estudio: Rev.3 - - - F-CV3-3B-2 Reconoce la necesidad de ejecutar procedimientos previos a las pruebas microbiológicas de recuento en productos no estériles. Reportar los resultados obtenidos teniendo en consideración que el resultado no debe diferir en un factor mayor que 2 a partir del valor calculado en medios sólidos.1 mL de suspensión (inóculo de 100 ufc) en las placas que contienen los medios según sea el caso. para el medio (d). d. Junio 2007 . 4 Cultivos puros de Pseudomonas aeruginosa en Agar Casoy (agar inclinado). 4 Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado).): o o o o - Inocular los medios con no más de 100 ufc de los siguientes microorganismos.4 Procedimiento Para la prueba de promoción del crecimiento de los medios se emplearán los métodos de: Vertido en placa. Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) o ambiental. Agar Cetrimide. Fig. e.o o o 4 Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado). Incubar según se indicó anteriormente. de por lo menos 5 a 7 días. 5. . b. Realizar el recuento y reportar la media aritmética del número de ufc obtenido en cada medio. para los medios medios (a) y (b).Método de Extensión en Superficie: o o o o Esparcir un volumen de 0. Contrastarlo con el número de ufc del inóculo original.Inoculación Directa: F-CV3-3B-2 Rev. .Aspergillus niger (ATCC 16404) o ambiental. Agar Saboureaud Dextrosa. manteniendo la temperatura de a no más de 45ºC. Incubar de 30ºC a 35ºC por tres días para el caso de las bacterias y de 20ºC a 25ºC por 5 días para el caso de hongos. Extensión en superficie e Inoculación Directa utilizando: a. Siembra en Superficie .Staphylococcus aureus (ATCC 6538) o ambiental. de por lo menos 24 horas antes de la práctica.2. 5. Incubar según se indicó anteriormente. Inocular los medios con no más de 100 ufc de los siguientes microorganismos. Realizar el recuento y reportar la media aritmética del número de ufc obtenido en cada medio Contrastarlo con el número de ufc del inóculo original. . Agar manitol salado. Agregar 1 mL de la suspensión (inóculo de 100 ufc) y 15 a 20 mL de los medios sólidos adecuado según sea el caso. Caldo Digerido de Caseína y Soja. Agar Digerido de Caseína y Soja. - Promoción del Crecimiento de los Medios (Medio más inóculo) o o o o - Método de Vertido en Placa (véase figura 3. c.1. de por lo menos 24 horas antes de la práctica. 2008.o Agregar un inóculo de suspensión bacteriana correspondiente equivalente a 100 ufc. SAB o C.2.7 - F-CV3-3B-2 ¿ Cuál es la finalidad para la aplicación de los diferentes métodos de recuperación de microorganismos ? De no contar con suficiente material de vidrio para la ejecución de las pruebas de promoción de crecimiento ¿a qué microorganismos se restringiría esta prueba preliminar? Fuentes de información Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. Rev.SAB 20 – 25ºC 2–3d A. 5. SAB o PDA 20 – 25ºC 5–7d ADCS ≤ 100 ufc 30 – 35ºC ≤ 5d ADCS ≤ 100 ufc 30 – 35ºC ≤ 5d A.–Formulario Nacional 27º Ed.6 Cuestionario - 5. Tabla 5. (International Pharmacopoeia. SAB ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d A. al caldo específico. (USP 32.5 Preparación de Cepas Promoción de Crecimiento RTMA RTCHL S. aeruginosa ADCS o CDCS 30 – 35ºC 18 – 24 h ADCS o CDCS ≤ 100 ufc 30 – 35ºC ≤ 3d __ B.NF 27). albicans A. Farmacopea Internacional. Junio 2007 . fourth edition). aureus ADCS o CDCS 30 – 35ºC 18 – 24 h ADCS o CDCS ≤ 100 ufc 30 – 35ºC ≤ 3d __ P. Preparación de las Cepas para las Pruebas de de Promoción de Crecimiento y Aptitud del Método de Recuento e Presencia del Producto Microorganismos 5. Cuarta Edición. subtilis ADCS o CDCS 30 – 35ºC 18 – 24 h ADCS o CDCS ≤ 100 ufc 30 – 35ºC ≤ 3d __ C. niger A. SAB ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d Aptitud del Método de Recuento en Presencia del Producto RTMA RTCHL ADCS o CDCS (NMP) ≤ 100 ufc 30 – 25ºC ≤ 3d ADCS o CDCS (NMP) ≤ 100 ufc 30 – 25ºC ≤ 3d ADCS o CDCS (NMP) ≤ 100 ufc 30 – 25ºC ≤ 3d ADCS ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d ADCS ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d __ __ __ SAB ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d SAB ≤ 100 ufc 20 – 25ºC ≤ 5d Resultados Emisión de reporte final. <62>). o 4 Frascos con 90 mL de Caldo Mossel. 6. Junio 2007 .Medios de Cultivo y Reactivos o Buffer pH 7. con 100 mL de Buffer pH 7. o 12 Placas con Agar Manitol Salado o 4 Placas con Agar Cetrimide o 16 Placas con Agar Violeta Rojo Bilis. o Agar Manitol Salado o Agar Cetrimide o Agar Violeta Rojo Bilis F-CV3-3B-2 Cepas de estudio: Rev.Materiales o 24 Tubos x 9 mL de Buffer pH 7. con 90 mL de Buffer pH 7. o 1 Baño María a 22.VI.2 o 4 Frascos con 200 mL de Agar Digerido de Caseína y Soja o 4 Frascos con 200 mL de Agar Sabouraud Dextrosa. - Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de microorganismos específicos de una forma farmacéutica sólida oral.2 o 8 Frascos de 250 mL.5 ºC o 20 Pipetas de 5 mL. PRÁCTICA Nº 6 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE FORMAS SÓLIDAS ORALES: TABLETAS Y CÁPSULAS VALIDACIÓN DEL MÉTODO 61. o 4 Asas de siembra .2 o Caldo Mossel o Agar Digerido de Caseína y Soja o Agar Sabouraud Glucosado o Caldo Mossel o Agar Digerido de Caseína y Soja o Caldo Mac Conckey o Caldo Rappaport Vassiliadis. o 16 Frascos con 90 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja o 4 Frascos con 100 mL de Caldo Mac Conckey o 4 Frascos con 100 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis.3 Material y Equipos .1 Marco teórico El análisis microbiológico de estas formas farmacéuticas incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes. 6. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación(véase USP 32: <61>.2 o 12 Tubos con 9 mL de Caldo Mossel o 12 Frascos de 250 mL. o 32 Pipetas de 1 mL. ó 2mL o 12 Pipetas de 10 mL.2 Competencias - Reconoce la importancia de comprobar la aptitud de los métodos de análisis: recuento y pruebas de microorganismos específicos. Crecim + Indic. typhimurium S. cultivo en solución amortiguada de fosfato monobásico de potasio más 0.b.05 % de polisorbato 80. C.). de pH 7. Crecim + Indic.Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Inhibitorias e Indicadoras de los Medios Prueba Medio CRV Salmonella XLD Pseudomona aeruginosa CT Staphylococcus aureus Mn Clostridios Candida albicans F-CV3-3B-2 C. coli Tabla 6. aureus E. albicans Rev. Crecim + Indic. de crecimiento Inhibitoria Prom. puede añadirse un tensoactivo (1 g por L de polisorbato 80).Solución Amortiguada de Fosfato de pH 7. De crecimiento Inhibitoria Prom. albicans Prom. aureus E. Indicadora Prom.Negativas tolerantes a la Bilis Escherichi coli Prom. Productos no grasos insolubles en agua: Ídem al anterior. según sea el caso (véase tabla 6.a. de crecimiento Cl. Moss VRB C. aeruginosa E. aeruginosa S.0 . aureus S.1. Crecim + Indic. Pruebas de Verificación de Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios Analizar cada preparación de medio verificando las propiedades promoción de crecimiento de los medios en general. Procedimiento 6.a. coli Prom. Productos solubles en agua: Dilución 1 en 10 (o adicionales de ser necesario) del producto a examinar (ajustando el pH de 6 a 8. typhimurium E.Sab SAB Propiedad Cepa Prom.2 de 5 días que permita obtener inóculos de 100 ufc.4.1.4. Prom. Dilución de la muestra a evaluar 6. Propiedades de Promoción de Crecimiento. coli S. de crecimiento C. Fig. así como las propiedades inhibitorias específicas y las propiedades indicadoras de los medios selectivos y diferenciales. y b.Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio-Peptona de pH 7. aeruginosa E. Aspergillus niger.2 . o o 6. aureus E. Propiedades de Promoción de Crecimiento. C. de crecimiento Inhibitoria Prom.Caldo Digerido de Caseína y Soja b. Inhibitoria S. de crecimiento Inhibitoria Prom. cultivo de 24 horas en Agar Digerido de Caseína y Soja en solución amortiguada de fosfato monobásico de potasio de pH 7. Tabla 6. Inhibitorias e Indicadoras de los Medios Prueba Medio Propiedad Cepa Bacterias Gram.Mc MC E.1.1. 6. Crecim + Indic. en: . Junio 2007 .1.2 que permitan obtener inóculos de 100 ufc. de ser necesario). de crecimiento Cl. coli P.Criterios a aplicar según la solubilidad de las muestras: Proceder a preparar las muestras a analizar para cada una de las siguientes pruebas según los criterios que se describen: a. sporogenes Prom.4.2.Ref A. Coli / P. coli S. sporogenes Prom. Coli / P.Col C. Recuento en Placa: Trabajar por duplicado cada medio y usar el recuento medio del resultado. Aptitud del Método de Recuento a.6. ƒ Dejar solidificar. iv. ƒ Esparcir un volumen de 0.Agregar de 15 a 20 mL de los medios sólidos.Realizar el recuento y reportar.Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Saboureaud Dextrosa para determinar el recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras (RTCHL). ƒ Incubar. . y. .1 mL de la muestra preparada. Incorporando agentes neutralizantes generales o específicos en el diluyente. ii. Pruebas de Aptitud de los Métodos de Recuento y de Microorganismos Específicos: Para cada producto nuevo a analizar. un volumen de suspensión microbiana para obtener un inóculo de 100 ufc. ƒ Realizar el recuento y reportar la media aritmética del número de ufc obtenido en cada medio ƒ Contrastarlo con el número de ufc del inóculo original.c. Método de Extensión en Superficie: .1. B. Agar Sabouraud Dextrosa según sea el caso. Inoculación y dilución: Agregar a las muestras de productos preparadas y a un control (sin producto). ƒ Agar Saboureaud Dextrosa según sea el caso. Aptitud de los métodos para las pruebas de microorganismos específicos. ƒ Incubar según se indica en 5. Preparar las muestras e inocularlas. Mezclar e incubar a 20º . Filtración por membrana.Incubar.5. . requiere de la neutralización correspondiente. durante F-CV3-3B-2 Rev.2. Junio 2007 . . Recuperación de microorganismos en presencia de producto: Filtración por Membrana (véase figura 3. Aumentando el volumen del diluyente o medio de cultivo. Bacterias Gram –Negativas Tolerantes a la bilis (véase Fig.Transferir una cantidad que represente 1 g del producto al filtro de membrana con un volumen adecuado de diluyente. a cada placa. . 6. a. realizar una preparación de la muestra de 1 en 10. Agar Digerido de Caseína y Soja.Prueba de Ausencia: usar un volumen correspondiente a 1 g del producto e inocular Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias: incubar de 30º a 35ºC.2.): . Agar Digerido de Caseína y Soja. Realizar la prueba según se indica en el período más corto de incubación.1. agregar cada cepa de prueba en el medio indicado en una cantidad de no más de 100 ufc (medio más producto a analizar y más inóculo).Método de Vertido en Placa (véase figura 3. mantenidos a la temperatura de no más de 45ºC.25ºC por 2 horas (suficiente para resucitar bacterias). b. A. al momento de la mezcla. iii.Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Digerido de Caseína y Soja para determinar el recuento total de microorganismos aerobios (RTMA).Comparar el número de microorganismos recuperados a partir de la muestra preparada y diluida versus el número de microorganismos recuperados a partir de la muestra control. usando como diluyente Caldo Digerido de Caseína y Soja. pero no más de 5 horas. Una combinación de todos los anteriores.Si se inhibe el crecimiento en un factor mayor a 2 modificar el procedimiento según se indica a continuación: i. . Neutralización/Eliminación de la actividad Antimicrobiana: .): ƒ Agregar 1 mL de la muestra preparada y 15 a 20 mL de los medios sólidos. . cualquier actividad antimicrobiana. y.a). ƒ Realizar el recuento y reportar la media aritmética del número de ufc obtenido en cada medio ƒ Contrastarlo con el número de ufc del inóculo original. manteniendo la temperatura de ambos medios a no más de 45ºC. c. 01 g y 0.1 g ó mL 0.1 g. incubar a 30º . Bacterias Gram Negativas Tolerantes a a la Bilis Prueba Cuantitativa Rev. o mL 0. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias. . Tabla 6.1 g.001 g ó mL de la muestra a evaluar. Caldo Mossel (100mL) Caldo Mossel (10mL) 30 – 35ºC 24 – 48 h VRB VRB 30 – 35ºC 24 – 48 h 30 – 35ºC 24 – 48 h Prueba de Ausencia F-CV3-3B-2 Fig. Junio 2007 . Subcultivar en Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa.001 g ó mL (por g o mL del producto) + + + - + + - + - Más de 103 Menos de 103 y más de 102 Menos de 102 y más de 10 Menos de 10 CDCS (90mL) 10 g ó 10mL 20 – 25ºC 2–5h 10mL 0.2.35ºC durante 18-24 horas. o mL 0. 6. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias. indicar la menor cantidad de producto que produce resultado positivo y la mayor cantidad de producto que produce resultado negativo(véase Tabla 6.01 g ó mL 0.2. Interpretación de Resultados en la Prueba Cuantitativa de Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la Bilis Cantidad probable de Resultados para cada cantidad del producto bacterias 0.1 0.1 g.a. incubar de 30º a 35ºC durante 18-24 horas.Prueba Cuantitativa: inocular Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias con preparaciones que contengan 0.24-48 horas.a.).2. o mL. Transferir 0.44º C. Salmonella: Preparar las muestras e inocularlas. durante 24-48 horas. Incubar a una temperatura de 30º-35ºC por 18-72 horas.). 6. El crecimiento de colonias color rojo (con o sin centro negro) indica posible presencia de Salmonella. Subcultivar en una placa de Agar Xilosa Lisina Desoxicolato.b. coli.b.1 mL a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella. mezclar e incubar de 30º a 35ºC durante 18-24 horas.2. mezclar e incubar de 30º a 35ºC durante 18-24 horas.b. usar 1 g ó 1 mL para inocular Caldo Digerido de Caseína y Soja. Samonella sp. Escherichia coli: Preparar las muestras e inocularlas. El crecimiento de colonias indica posible presencia de E. c. e incubar a 30º . d. durante 18-24 horas. usando como diluyente Caldo Digerido de Caseína y Soja. 6.2. lo cual debe confirmarse con pruebas de identificación (véase Fig.).35º C. Subcultivar en una placa de Agar Mac conckey a 30º-35ºC por 18-72 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja e incubar a de 30º a 35ºC durante 18-24 horas. Pseudomonas aeruginosa: Preparar las muestras e inocularlas.1mL Caldo Rappaport – Vassiliadis (10mL) 30 – 35ºC 18 – 24 h XLD 30 – 35ºC 18 – 48 h Fig.2. 6. CDCS (90mL) 10g o 10mL 30 – 35ºC 18 – 24 h 0. lo cual debe confirmarse con pruebas de identificación. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja e incubar a de 30º a 35ºC durante 18-24 horas. Subcultivar en una placa de Agar Cetrimide. mezclar e incubar de 30º a 35ºC durante 18-24 horas. usando como diluyente Caldo Digerido de Caseína y Soja. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Mac Conckey e incubar a 42º .c-e. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 . usando como diluyente Caldo Digerido de Caseína y Soja. usar 1 g ó 1 mL para inocular Caldo Digerido de Caseína y Soja. Incubar a una temperatura de 30º-35ºC por 18-48 horas (véase Fig. usar no menos de 10 g ó 10 mL para inocular Caldo Digerido de Caseína y Soja. Escherichia coli. y B. e. Pseudomonas aeruginosa. 2008. usando como diluyente Caldo Digerido de Caseína y Soja. 6.5 Resultados Emisión de reporte final. aeruginosa. explique las operaciones preliminares y fundamente su respuesta.Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.c-e.c-e.48 h 30 – 35ºC 18 . o blanco rodeado de amarillo indica posible presencia de Staphylococcus aureus. pero sin inóculo. Clostridium sp. 6. lo cual debe confirmarse con pruebas de identificación (véase Fig.2. F-CV3-3B-2 Rev. . 6. 6. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en A.4. 6. Fig.El crecimiento de colonias indica posible presencia de Ps. (100mL) Caldo Ref.72 h M. Incubar a una temperatura de 30º-35ºC por 18-72 horas. Cuarta Edición. . 30 – 35ºC 24 – 48 h Candida albicans Anaerobiosis 30 – 35ºC 48 h Clostridium sp.72 h Staphylococcus aureus Caldo Ref.6 Cuestionario .De no contar con suficiente material de vidrio para la ejecución de todos las pruebas preliminares ¿Qué haría? ¿Obviaría alguna de ellas? ¿Procedería a la ejecución de todas consecutivamente? Si es así ¿En qué orden procedería ? Fundamente su respuesta. 30 – 35ºC 3-5d Mn.). Staphylococcus aureus: Preparar las muestras e inocularlas. A. fourth edition). 6.–Formulario Nacional 27º Ed. Subcultivar en una placa de Agar Cetrimide.y Candida albicans Dilución 1/10 Diluyente (90mL) 10mL 10mL 10mL CDCS (100mL) 80ºC 10 min 30 – 35ºC 18 . (100mL) Anaerobiosis 30 – 35ºC 48 h A. (International Pharmacopoeia. Escherichia coli Caldo SAB (100mL) 30 – 35ºC 18 .Farmacopea Internacional. (USP 32NF 27). mezclar e incubar de 30º a 35ºC durante 18-24 horas.24 h C. Junio 2007 .Col. Caldo MC (100mL) 42 – 44ºC 24 . 6. Staphylococcus.Col.c-e.Si se trata de realizar el examen microbiológico de un antibiótico. usar 1 g ó 1 mL para inocular Caldo Digerido de Caseína y Soja.C.2.72 h Pseudomonas aeruginosa 30 – 35ºC 18 .4. El crecimiento de colonias color amarillo. SAB.).2.T.7 Fuentes de información . Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja e incubar a de 30º a 35ºC durante 18-24 horas. lo cual debe confirmarse con pruebas de identificación (véase Fig. con 85 mL de Buffer. pH 7.2 Pipetas de 10 mL.Medios de Cultivo y Reactivos o o o o o o F-CV3-3B-2 Polisorbato estéril Buffer.3 Material y Equipos - Materiales o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o Frascos de 250 mL.1 mL Gradillas . - Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. con 5 g de Polisorbato estéril 8 Frascos de 250 mL. Junio 2007 . Placas con Agar Mac Conckey Placas con Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Placas con Agar Manitol Salado Placas con Agar Cetrimide 9 Placas don Agar Digerido de Caseína y Soja Frascos con 90 mL de Buffer pH 7. <62> y <1111>). 7.VII.2 Caldo Digerido de Caseína y Soja Agar Digerido de Caseína y Soja Agar Sabouraud Caldo Digerido de Caseína y Soja Rev. pH 7.2 Competencias - Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida. 12 Pipetas de 1 ó 2 ó 5 mL Pipetas de 0. 7. Frascos con 100 mL de Caldo Mac Conckey Tubos con 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis. 12 Membranas filtrantes estériles Frascos con 90 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja. PRÁCTICA Nº 7 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE FORMAS SÓLIDAS ORALES: TABLETAS Y CÁPSULAS VALIDACIÓN DEL MÉTODO 7.2 Kitasatos estériles de 1 L Equipos de filtración estériles Pinzas estériles Placas de Agar Digerido de Caseína y Soja Placas de Agar Sabouraud Dextrosa. semisólidas y líquidas. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>.1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes.2 27 Tubos con 9 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja 6 Tubos con 9 mL de Buffer. pH 7. Agar Mac Conckey Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Agar Manitol Salado Agar Cetrimide Agar Digerido de Caseína y Soja 7.5 Resultados Emisión de reporte final. Farmacopea Internacional. (International Pharmacopoeia.4. 7. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1.2. fourth edition). pero sin inóculo.7 Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida.6 Cuestionario - 7. F-CV3-3B-2 Rev.1. 7. (USP 32. Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.NF 27).4 Procedimiento 7. 2008.1.4. Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. Cuarta Edición.–Formulario Nacional 27º Ed.4. Junio 2007 . 7. semisólida y líquida. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.o o o o o o o Caldo Mac Conckey Caldo Rappaport Vassiliadis. semisólidas y líquidas. o Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado). o o o o o o o o o o o o o o o Medio de Cultivo Microorganismo Especie Incubación Cepa ATCC T° Tiempo S.1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes. <62> y <1111>).3 Material y Equipos 12 Tubos con 10 mL de Buffer.VIII. más Polisorbato Frascos con 150 mL de Agar Digerido de Caseína y Soja Frascos con 100 mL de Agar Sabouraud Dextrosa 21 Pipetas de 0. Junio 2007 . pH 7.2. 8. niger 10231 16404 20–25 °C 5 días Caldo Tioglicolato F-CV3-3B-2 Rev. subtillis 6538 6633 9027 30–35°C 3 días Caldo Casoy B.0 mL estériles Kitasatos estériles de 1 L Equipos de filtración estériles Pinzas estériles Membranas filtrantes estériles Balanzas Jeringas de 20 mL descartables estériles 18 Frascos con 100 mL de peptona pH 7.1 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Líquido Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado). Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. albicans A. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>.2 Competencias - Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida. aeruginosa 19404 30–35°C 3 días Caldo Casoy B. pH 7. subtillis C. 8.1 y 1 . de por lo menos 5 a 7 días. de por lo menos 24 horas antes de la práctica.2 Tubos con 10 mL de Buffer. aureus C. PRÁCTICA Nº 8 VALIDACIÓN DEL MÉTODO PRUEBAS DE APTITUD DEL MEDIO PREVIO AL ANÁLISIS DE UN PRODUCTO FARMACÉUTICO ESTÉRIL 8. sporogenes P. 1. 2008. 7. pero sin inóculo. Farmacopea Internacional. Junio 2007 . semisólida y líquida. World Health Organization. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1. WHO Technical Report Series.7 Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida.NF 27). 7.–Formulario Nacional 27º Ed. F-CV3-3B-2 Rev. Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. No.4. (USP 32. Annex 6.4. 7. 2002.4. (International Pharmacopoeia. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. Thirty-six report.6 Cuestionario - 7. fourth edition). Good manufacturing practices for sterile products.4 Procedimiento 7. Cuarta Edición.1.2.5 Resultados Emisión de reporte final. 902. Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.7. 9. F-CV3-3B-2 Rev. semisólidas y líquidas. pero sin inóculo. Junio 2007 . PRÁCTICA Nº 9 ANÁLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACÉUTICO ESTÉRIL Y VALIDACIÓN DEL MÉTODO (TRANSFERENCIA DIRECTA: DISPOSITIVO MÉDICO Y POLVO PARA RECONSTITUIR) 9.Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida.2.Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. .5 Resultados Emisión de reporte final. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>.2 Competencias . Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes. <62> y <1111>).4.4.4.1. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1.1. 9. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.IX.3 Material y Equipos o o o o o o o o o 4 Kitasatos estériles de 1 L 4 Equipos de filtración estériles 8 Pinzas estériles 6 Membranas filtrantes estériles 1 Bomba de vacío 8 Jeringas de 20 mL descartables estériles 12 Frascos con 100 mL de peptona pH 7. 9. 9.4 Procedimiento 9.1 8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Líquido 8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja 9. PRUEBA DE ESTERILIDAD: Método de Transferencia Directa Limpiar la superficie de las envolturas que contienen las muestras con alcohol al 70% y abrirlas cuidadosamente con tijeras estériles Transferir las muestras a un frasco que contenga 1000 mL de caldo thioglicolato y a otro frasco que contenga 1000 mL de caldo tripticase soya Con ayuda de pinzas estériles Llevar a incubar por 14 días: Caldo tioglicolato. Good manufacturing practices for sterile products. No. Junio 2007 . 902. (USP 32. WHO Technical Report Series.7 Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida. World Health Organization. 2002. Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. 2008. (International Pharmacopoeia.–Formulario Nacional 27º Ed. Farmacopea Internacional. fourth edition). Thirty-six report. Cuarta Edición. F-CV3-3B-2 Rev.NF 27). Annex 6.6 Cuestionario - 9. semisólida y líquida. a 20 a 25ºC Caldo tripticase soya a 30 a 35ºC Presencia de crecimiento: el producto no cumple con los requerimientos de la prueba Ausencia de crecimiento: el producto cumple c o n lo s requerimientos de la prueba 9. de por lo menos 24 horas antes de la práctica. Junio 2007 . Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1. F-CV3-3B-2 Rev.X.5 Resultados Emisión de reporte final.1.2. PRÁCTICA Nº 10 ANÁLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACÉUTICO ESTÉRIL Y VALIDACIÓN DEL MÉTODO (FILTRACIÓN POR MEMBRANA: SOLUCIÓN INYECTABLE).4 Procedimiento 10.3 Material y Equipos 3 Balanzas 8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Líquido 8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja 4 Frascos con 500 mL de Medio Tioglicolato Líquido 4 Frascos con 500 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja 4 Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado). <62> y <1111>).1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes. 109. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>.1. 10.4.Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. o o o o o o 10. pero sin inóculo.4. 10. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. o 4 Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado). semisólidas y líquidas. de por lo menos 5 a 7 días. .4. 10.2 Competencias . 10. Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida. Cuarta Edición. No. 10. 2008. F-CV3-3B-2 Rev. 2002.6 Cuestionario - Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida. Farmacopea Internacional.PRUEBA DE ESTERILIDAD: Método de Filtración por Membrana Limpiar la superficie de las ampollas con alcohol al 70% Transferir el contenido de las muestras a través la unidad de filtración estéril (con la membrana filtrante de δ:47 mm y poro: 0. 902. Good manufacturing practices for sterile products. 30 a 35ºC La otra mitad a 100 mL de caldo thioglicolato 10. (USP 32. semisólida y líquida. Tomar el contenido de las ampollas con una jeringa estéril Desmontar el equipo asépticamente y con pinzas estériles tomar la membrana cortarla y transferir: Enjuagar la membrana con agua peptonada Una mitad a 100 m L d e ca l d o tripticase soya. fourth edition). Thirty-six report.. Junio 2007 . (International Pharmacopoeia.–Formulario Nacional 27º Ed. incubar a 20 a 25ºC Incubar por 14 días a. Annex 6.. WHO Technical Report Series. World Health Organization.45 μ.NF 27).7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. 015 UE/ mL 0.XI.25 λ: 0. CÁLCULOS PARA HALLAR EL MVD: LISTA DE CHEQUEO DETERMINACIÓN DE LOS LÍMITES DE ENDOTOXINAS PARA ARTÍCULOS NO FARMACOPEICOS 11. se hacen diluciones en forma aséptica hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 λ. semisólidas y líquidas. Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirógena certificada.5 λ: 0. . <62> y <1111>). Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0.6 UE/ mL 2 λ: 0. Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados.0075 UE/ mL 11.25 λ. 0.03 UE/ mL 0. o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio.2 Competencias .5 λ. homogenizándola en un vortex por 30 minutos.1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes.5 lambda a 2 lambda).Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida. Para esto.Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. PRÁCTICA Nº 11 OPERACIONES PREPARATORIAS PARA LA PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS.06 UE/ mL λ: 0. λ.3 Material y Equipos 2 Baño María a 37ºC 4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm 4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm 4 Cronómetros 4 Termómetros 4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf) 4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf) 4 Agitadores Vortex 8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirógenos de 10 x 75 mm 4 Cajas de tips apirógenos de 5 a 100 uL 1 Caja de tiras indicadoras de pH 50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180ºC x 3 horas) envueltas en paquetes de 8 tubos con papel aluminio. 11. o o o o o o o o o o o o F-CV3-3B-2 Rev. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>. o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio. las cuales son equivalentes a: Spike*: 0. o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio. Junio 2007 . se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estándar de Endotoxinas con el reactivo de LAL. 0. Farmacopea Internacional. 11. Cuarta Edición.1.o 1 Frasco de control estándar de endotoxina o 8 Frascos del reactivo Lisado de Amebocitos de Limulus o 8 Frascos de agua LAL 11.4. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1.–Formulario Nacional 27º Ed.6 Cuestionario - Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida.7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. 2008. Junio 2007 . Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. fourth edition). 11. (USP 32.2. 11.1.4 Procedimiento 11. pero sin inóculo.4.4. (International Pharmacopoeia. 11.5 Resultados Emisión de reporte final. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. semisólida y líquida.NF 27). F-CV3-3B-2 Rev. Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados. semisólidas y líquidas. 12. las cuales son equivalentes a: Spike*: 0. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>.3 Material y Equipos 2 Baño María a 37ºC 4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm 4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm 4 Cronómetros 4 Termómetros 4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf) 4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf) 4 Agitadores Vortex 8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirógenos de 10 x 75 mm 4 Cajas de tips apirógenos de 5 a 100 uL 1 Caja de tiras indicadoras de pH 50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180ºC x 3 horas) envueltas en paquetes de 8 tubos con papel aluminio.1 Marco teórico Este ensayo aplica alas formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes.Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas.03 UE/ mL 0. <62> y <1111>). Junio 2007 . o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio.Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida.5 λ. se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estándar de Endotoxinas con el reactivo de LAL.2 Competencias . se hacen diluciones en forma aséptica hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 λ. o o o o o o o o o o o o F-CV3-3B-2 Rev. .0075 UE/ mL 12.25 λ: 0.5 lambda a 2 lambda). λ. Para esto. o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio. Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirógena certificada. Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0.5 λ: 0. 0. 0. homogenizándola en un vortex por 30 minutos.06 UE/ mL λ: 0. PRÁCTICA Nº 12 PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS Y PRESENTACIÓN DE UNA MATRIZ QUE INCLUYE TODAS LAS ACTIVIDADES INVOLUCRADAS 12. o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180ºC x 3 horas con papel aluminio.25 λ.XII.6 UE/ mL 2 λ: 0.015 UE/ mL 0. 12. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1.1.4. Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.2.4.o 1 Frasco de control estándar de endotoxina o 8 Frascos del reactivo Lisado de Amebocitos de Limulus o 8 Frascos de agua LAL 12. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.4 Procedimiento 12. F-CV3-3B-2 Rev.4.1. pero sin inóculo. Junio 2007 . (USP 32. Farmacopea Internacional. (International Pharmacopoeia. Cuarta Edición.–Formulario Nacional 27º Ed.NF 27). 2008. semisólida y líquida. 12. 12. Junio 2007 . fourth edition). F-CV3-3B-2 Rev.7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.12.6 Cuestionario - Elabore un alista de verificación sobre todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida.5 Resultados Emisión de reporte final. 13.Aplica y experimenta la metodología para las pruebas de recuento y de microorganismos específicos de una forma farmacéutica semisólida y líquida. 13. homogenizándola en un vortex por 30 minutos.2 Competencias .XIII. se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estándar de Endotoxinas con el reactivo de LAL.5 lambda a 2 lambda).4. . F-CV3-3B-2 Rev. 13. Prueba de Producto: Proceder de la misma forma que en 1. <62> y <1111>). Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirógena certificada. Para esto. pero sin inóculo. Pruebas de Verificación de las Propiedades de Promoción de Crecimiento e Inhibitorias de los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Específicos Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6.1 Marco teórico Este ensayo aplica a las formas farmacéuticas semisólidas y líquidas y también como en la práctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el número de microorganismos aeróbicos viables y el número de hongos filamentosos y levaduras presentes.3 Material y Equipos o o o o o o o o o o o o o o o 3 Frascos x 50 mL 3 Frascos x 100 mL 3 Frascos x 400 mL 3 Frascos x 1 L 2 Frasco Roux 30 Perlas de vidrio 60 Placas Petri 10 Pipetas x 1 mL 10 Pipetas x 2 mL 10 Pipetas x 5 mL 10 Pipetas x 10 mL 4 Sacabocado 4 Beaker x 10 mL 3 Alcohol al 70% x 200 mL 3 Gasa 13.1.2. semisólidas y líquidas.4 Procedimiento 13. ESTÁNDAR. Junio 2007 . Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0.1.4. PREPARACIÓN DE MATERIALES.4.Reconoce las diferencias en la metodología para el análisis microbiológico de formas farmacéuticas no estériles sólidas. INÓCULOS Y EJECUCIÓN DEL ANÁLISIS 13. PRÁCTICA Nº 13 PRUEBA DE POTENCIA ANTIBIÓTICA PARA UN ANTIMICROBIANO: OPERACIONES PRELIMINARES. así como determinar la ausencia de especies microbianas patógenas consideradas como indicadores de contaminación (véase USP 32: <61>. Junio 2007 .Proceder para las siguientes pruebas según se muestra en el texto correspondiente de la practica Nº 6. Cuarta Edición. 13.6 Cuestionario - Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen microbiológico para una forma farmacéutica no estéril sólida.–Formulario Nacional 27º Ed. fourth edition). F-CV3-3B-2 Rev. (International Pharmacopoeia. POTENCIA ANTIBIÓTICA: Método Cilindro-Placa de Cultivo 13.NF 27). semisólida y líquida. 2008. Farmacopea Internacional. 13.7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev.5 Resultados Emisión de reporte final. (USP 32. De acuerdo a algunas personas es virtualmente imposible validar completamente los procedimientos de ensayo para cada microorganismo que podría ser objetable. Es necesario definir en forma apropiada tanto las condiciones en las cuales el procedimiento va a ser usado como el propósito para el cual es intentado. La validación del método demuestra que cualquier sustancia inhibitoria presente en la muestra ha sido neutralizada/inactivada o diluida a niveles por debajo del nivel inhibidor. La capacidad de los medios para promover el crecimiento de los microorganismos puede afectarse por el proceso de preparación del medio. 14. distribución y uso. PRÁCTICA Nº 14 SEMINARIO DE INVESTIGACIÓN: PRESENTACIÓN DEL PROTOCOLO DE VALIDACIÓN DE UN MÉTODO MICROBIOLÓGICO 14. Escherichia coli. sin embargo.1 Marco teórico El monitoreo analítico de un producto farmacéutico. La edad de los medios de cultivo puede afectar sus propiedades de promoción del crecimiento y de selectividad. pero muchos son igualmente aplicables a procedimientos biológicos y microbiológicos.Asume la importancia de la validación de un método microbiológico presentando el estudio completo en el tiempo establecido. los métodos son validados generalmente para la recuperación de “microorganismos indicadores” específicos propuestos por las farmacopeas y los que generalmente se requiere estén ausentes del producto.2 Competencias . F-CV3-3B-2 Rev. por los procesos de esterilización y de almacenamiento. Por esta razón. Estos principios se aplican a todos los procedimientos descritos en un farmacopea o no descritos en una farmacopea usados por la empresa fabricante. Todos los lotes de medios de cultivo preparados deben ser sometidos a Control de Calidad para garantizar que los medios son adecuados para sus fines propuestos. El propósito principal de la validación analítica es garantizar que un procedimiento analítico seleccionado de resultados reproducibles y confiables que son adecuados para el propósito intentado. hongos. etc. . Junio 2007 .XIV.Diseña el protocolo de validación de un método microbiológico y realiza la parte experimental a nivel grupal como actividad colaborativa recopilando la data de todos los ensayos. en presencia y en ausencia del material a ser ensayado. la vida de estantería de los medios de cultivo debería ser validada y los medios no deben usarse más allá de su fecha de vencimiento. Involucra la inoculación de medios de cultivo con niveles bajos de microorganismos inhibidores específicos. incluyendo almacenamiento. o de ingredientes específicos dentro del producto. Estas pautas se aplican a los procedimientos usados para examinar atributos químicos y fisicoquímicos. Los métodos que el fabricante seleccione deben poder detectar confiablemente la presencia de microorganismos objetables tales con especies de Pseudomonas. Este monitoreo debería realizarse de acuerdo con las especificaciones validadas durante el desarrollo del producto. es necesario para garantizar su inocuidad y eficacia a través de todas las fases de su vida de estantería. fourth edition).7 Fuentes de información - Farmacopea de los Estados Unidos de América 32º Rev. Cuarta Edición. Mejía L. 2008. (International Pharmacopoeia. 14.–Formulario Nacional 27º Ed. Pontificia Universidad Javeriana. 14.3 Material de Revisión Bibliográfica Mejía L. Validación de la Técnica para la Cuantificación de Tilosina en un producto sólido. Farmacopea Internacional.4 Procedimiento Diseño de un protocolo de validación en base a la revisión del material bibliográfico propuesto además de cinco fuentes similares en contenido y nivel. (USP 32. 14. F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007 . Validación de la Técnica para la Cuantificación de Tilosina en un producto sólido.14. Tesis : Bogotá. 2008.NF 27). Tesis : Bogotá. 14. Pontificia Universidad Javeriana.5 Resultados Exposición del protocolo final. 2008.6 Cuestionario - Elaboración del glosario específico relacionado a validación de métodos analíticos y validación de métodos microbiológicos.