Guía de Laboratorio: Bioquímica Clínica 2012Prof.Q.F Gisella Barrientos Sepúlveda
[email protected] LABORATORIO Nº1 “INTRODUCCIÓN A LA BIOQUIMICA CLÍNICA” El análisis de una muestra biológica en un laboratorio clínico tiene como objetivo fundamental la valoración cualitativa o cuantitativa de uno o varios componentes de esta muestra, pudiendo ser ésta una muestra de sangre, orina, líquido cefalorraquídeo médula ósea, líquido articular, deposición, etc. Para ello se debe disponer de un conjunto de técnicas y procedimientos de laboratorio que nos permitan realizar la determinación, de manera de obtener un resultado confiable, que será útil como medida de control del estado de salud de un paciente o permita la descripción de un cuadro clínico concreto. El logro de un buen resultado dependerá no sólo de la técnica implementada en el laboratorio clínico, sino que parte con una adecuada toma de muestra, siendo ésta una etapa fundamental de la fase preanalítica. Durante el desarrollo de estos laboratorios nuestra muestra biológica a analizar será aquel líquido que circula por nuestro sistema arteriovenoso y capilar, es decir la sangre. Para ello comenzaremos por definir los conceptos básicos para una toma de muestra adecuada y en una segunda etapa estudiaremos algunas técnicas de laboratorio que permiten la valoración de algunos de sus componentes y la utilidad clínica de ellos. I.-Conceptos básicos de una correcta toma de muestra de sangre venosa. En primer lugar, debemos considerar que la toma de muestra se debe realizar mediante la aspiración de sangre desde una vena, generalmente del brazo, utilizando una jeringa. En algunas ocasiones se puede utilizar una punción de la yema del dedo (determinación de grupo sanguíneo) como también la aspiración de sangre arterial (determinación de gases arteriales).Por lo general la muestra debe ser tomada en condiciones de ayuno ( aprox. 12 horas ), principalmente para aquellas determinaciones de metabolitos dependientes ( Glucosa, Colesterol, Triglicéridos, etc.). La cantidad de sangre extraída varía dependiendo del número de exámenes a realizar y ésta será obtenida “con” o “sin” anticoagulante dependiendo si el metabolito a analizar se determina en suero, plasma o sangre total. Si se determinan parámetros bioquímicos, tales como Glucosa, Colesterol, Triglicéridos, etc., la muestra a utilizar será suero por lo tanto no se utilizará anticoagulante. Si se determinan parámetros hematológicos la muestra se obtendrá con anticoagulante y este variará de acuerdo al examen a realizar: a).- Hemograma: El anticoagulante será EDTA b).- VHS (velocidad de eritro-sedimentación): El anticoagulante será CITRATO c).- Pro-trombina, Fibrinógeno (pruebas de coagulación): El anticoagulante será CITRATO Existen algunas condiciones particulares en las cuales la muestra puede ser tomada a cualquier hora para la valoración de un determinado metabolito, por ejemplo: Se ha desarrollado un sistema internacional, que permite que la toma de muestra se realice con el anticoagulante adecuado, utilizando el color de la tapa del tubo como guía, es decir el color de la tapa a).-Exámenes de urgencia: Glicemia (sospecha de hipo o hiperglicemia, en paciente diabético) Enzimas Cardiacas: CK, CK-MB Bilirrubinemia: Bilirrubina directa y total b).-Exámenes de coagulación c).-Exámenes hormonales (hormonas dependientes de ciclo día noche) d).-Exámenes de Nivel plasmático de drogas ( Anti-convulsivantes principalmente ). del tubo indica que anticoagulante contiene y para que exámenes debe utilizarse: COLOR TAPA LILA NEGRO CELESTE ROJO ANTICOAGULANTE EDTA CITRATO CITRATO S/ANTICOAGULANTE EXAMENES HEMOGRAMA VHS PRUEBAS DE COAGULACIÓN PRUEBAS BIOQUIMICAS se realiza un proceso de tinción y su posterior observación al microscopio . . la importancia de conocer los exámenes clínicos más utilizados. el correcto manejo de las técnicas mas comunes utilizadas en la química clínica y la buena interpretación de los resultados obtenidos. etc. Uno de los análisis de sangre mas completos es el hemograma. Características de color. es decir la cantidad de glóbulos rojos. plaquetas y una parte líquida que corresponde al plasma. También forma parte del hemograma un análisis cualitativo de las células sanguíneas en el cual se analizan las características morfológicas de cada una de las tres series celulares a través de un frotis sanguíneo realizado de una muestra obtenida por punción venosa. que contiene las sustancias orgánicas e inorgánicas. de estos aproximadamente el 85% esta representado por proteínas. en el cual se determinan los niveles de hemoglobina sanguínea. de cuyo estudio y valoración se puede conocer el estado de salud de un paciente o confirmar un diagnóstico clínico. Resumiendo podemos decir que el hemograma consta de: Los valores de las constantes hematológicas nos permite la clasificación de los cuadros de anemias. hormonas. las Globulinas y el Fibrinógeno. Consta de un análisis cuantitativo. Primero definiremos los rangos de referencia para cada uno de los análisis mencionados Análisis cuntitativo: • • • Hematocrito (%) Hemoglobina (grs/100 ml) Recuento de elementos celulares: Recuento glóbulos rojos o Recuento glóbulos blancos o Recuento Plaquetas • Calculo de las constantes hematológicas: VCM y CHCM HEMATOCRITO ( % ) HEMOGLOBINA(gr/dl) RECUENTOS GLOBULOS BLANCOS ( *mm3) PLAQUETAS ( *mm3 ) VCM Análisis cualitativo: • • • ( hematocrito/ Nºg. que es depositada sobre un portaobjetos y luego de ser extendida sobre él. Otras son las Lipo y Glicoproteínas. Características de tamaño y distribución de las plaquetas. blancos y plaquetas.rojos)*10 5000 -7000 150000-350000 82 – 92 32 – 36 anteriormente: MUJER 37-47 12-16 HOMBRE 40-54 14-18 CHCM ( hemoglobina/hematocrito)*100 Formula diferencial de glóbulos blancos (Distribución en porcentaje de los diferentes tipos de glóbulos blancos). enzimas.respectivamente. entre suero y plasma. anticuerpos. Posee los mismos componentes del plasma excepto el Fibrinógeno o Factor de coagulación que se extrae. En resumen podemos decir que la sangre esta constituida por una parte corpusculada (elementos celulares) que corresponden a los glóbulos rojos y blancos. Introducción a la Hematología. Plasma: Liquido amarillo pálido que representa el 50–55 % de la sangre total . los recuentos absolutos de los elementos celulares.contiene el 91-93% de agua y un 7-9% de materiales sólidos . el cual traduce la normalidad anátomo-fisiológica de los centros hematopoyéticos y el equilibrio entre la producción y destrucción de los elementos figurados de la sangre. II . VCM y CHCM. siendo las mas importantes la Albúmina.Es importante definir la diferencia entonces. forma y tamaño de los glóbulos rojos. como también el hematocrito (porcentaje de glóbulos rojos en un volumen de 100ml de sangre) y se calculan las constantes hematológicas. Por lo anterior entonces. Suero : Parte líquida de la sangre que se obtiene después de la coagulación. Volumen corpuscular medio y Concentración hemoglobina corpuscular media . como proteínas. S. ¿Qué significa el termino VHS? Notas: . ¿Qué significa el termino “Desviación a la izquierda”? 4. De acuerdo a la VCM ¿cómo se clasifican las anemias? 5. sin lobulaciones que pueden adoptar la forma de : U. ¿Como se denomina la patologia en la cual. % Eosinófilos Basófilos Neutrofilos: Baciliformes Segmentados Linfocitos Monocitos 1-3 0–1 0–4 60-70 20. siendo esta una patología primaria ó secundaria de acuerdo a su origen. Si el nº es mayor de 50000 entonces nos encontramos con una hiper-leucocitosis. N. ¿Puede existir una hipercromia? 3. es el aumento en el nº de baciliformes por sobre el 4%. el glóbulo rojo está saturado de hemoglobina. por lo que el valor máximo de la CHCM es de 36. y destacan por ser células con núcleo en forma de bastón de bordes paralelos o ligeramente estrechados. De acuerdo a los valores de la VCM las anemias se pueden clasificar en: Si el nº de leucocitos (glóbulos blancos) es superior a 8000 hablamos de una leucocitosis y si este es menor de 5000 hablamos de una leucopenia. Cuestionario 1.M. Como también la distribución porcentual de los distintos tipos de células de la serie blanca que normalmente encontramos en la sangre. W. En relación a la serie blanca es importante conocer el recuento total de glóbulos blancos. La distribución normal de los leucocitos es la siguiente: Normocítica VCM: 82-92 Microcítica VCM: < 82 Macrocítica VCM: > 92 De acuerdo a los valores de la CHCM las anemias pueden clasificarse en: Normocrómica CHCM: 32-36 Hipocrómica CHCM: < 32 No existe la hipercromía puesto que en la normocromía.En relación a la serie roja el hemograma nos permite la diferenciación de las anemias. existe una dismución en el numero de plaquetas? 2.30 4–6 El cuadro denominado “Desviación a la izquierda” . V.0. . y aporta datos clínicos que permiten formular o confirmar un diagnóstico médico. Selle con plasticina el extremo inferior del capilar manteniéndolo cerrado en el borde superior con el dedo índice.. y luego lea en la tabla de lectura .) • Embarazo • Hemorragias • Hipertirodismo • Hemolísis (destrucción de glóbulos rojos)... Tambien es un control para las anemias. Luego llene el capilar con la muestra de sangre inclinando el capilar hacia abajo colocado en el borde del tubo.. Un indice alto o bajo de hematocrito dependerá de diferentes circunstancia.LABORATORIO Nº2 Análisis hematológicos cuantitativos: 1.-MATERIALES : 1.Hemoglobina 3. Esta incluido en el hemograma además del recuento de reticulocitos que es otro examen que se utilizada para ver si responde la medula a la producción de hematíes ante una anemia por sangramiento.-Preparación de frotis sanguíneo El hemograma es un examen que analiza las variaciones cuantitativas y morfológicas de los elementos celulares de la sangre. etc... Dicho examen se utiliza para control generalmente de la patología crónica llamada anemia. eritrocitos o hematíes constituyen la serie roja y su análisis cuantitativo permite la observación de los cuadros denominados anemias.Plasticina para sellar 3.Micro-centrífuga II. este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila. Centrifugue por 2min. Valores normales de hematocrito: Recién nacido 44 a 56 % Entre los 3 y 5 años 36 a 43 % De los 5 a los 15 años 37 a 45 % Hombre adulto 40 a 54 % Mujer adulta 37 a 47 % Los resultados anormales de hematocrito nos indican: Un índice bajo de Hematocrito puede deberse a: • Anemia • Fallos en la médula ósea (Radiaciones. Como condiciones. fibrosis.Capilares de micro-hematocrito 2. o del momento que este pasando el paciente. por una transfusión • Leucemia • Problemas de alimentación • Artritis reumatoide Un índice alto de Hematocrito puede deberse a: • Cardiopatías • Deshidratación • Eclampsia (en el embarazo) • Enfermedades pulmonares crónicas • Exceso de formación de hematíes (Eritrocitosis) • Policitemia vera I. toxinas. tumores.METODOLOGIA: Utilizando los guantes de trabajo proceda a homogeneizar el tubo de muestra.. MICROCENTRÍFUGA Notas: .fijando para ello los dos extremos del capilar en cada uno de los extremos de la misma. Actividad 1 : Determinación de Hematocrito El hematocrito mide el porcentaje de eritrocitos en un volumen de 100ml de sangre. Los glóbulos rojos.-Tabla de lectura EQUIPO: 1.Hematocrito 2. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.-PROTOCOLO Llenar ambos tubos con reactivo de Hemoglobina En el Tubo Nº1 es el blanco..Pipeta de 5 ml 4.5 gr/dl 12 a 14 gr/dl 11.Micropipeta de 20/200 ul 5..Fotómetro Clínico II. lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire. La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono.Reactivo de ciano-hemoglobina 2.5 a 15 gr/dl 13 a 16 gr/dl 11..5 a 14.-REACTIVOS: 1. Este análisis mide la cantidad de hemoglobina en gr/dl que existe en un volumen determinado de sangre. Como condiciones. este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila..Gradilla con 3 tubos 3.5 a 19.. que es el producto de desecho del proceso de producción de energía. Valores normales de hemoglobina: Recién nacido Entre los 3 y 5 años De los 5 a los 15 años Hombre adulto Mujer adulta 13. Los resultados anormales de hemoglobina nos indican: • • • • • • • • Anemias primarias Cáncer Embarazo Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes Hemorragias Linfomas Problemas de alimentación Notas: Fotómetro 1º 2º . es decir 5ml de reactivo solamente En el Tubo Nº2 es la muestra.Puntas desechables para micropipeta INSTRUMENTOS DE LECTURA: 1. es decir 5ml de reactivo + 20 uL de muestra Dejar ambos tubos a Tº ambiente por 5 minutos Luego leer en el fotómetro clínico a λ=546 nm. El manejo del equipo se explicará en el trabajo práctico.Actividad 2: Cuantificación de Hemoglobina La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre.5 gr/dl I.. 3.Limpiar el dedo índice con un algodón ligeramente mojado con alcohol y hacer una punción con lanceta a fin de obtener una gota de sangre sin presionar el dedo sino dejando que escurra cada gota. 3. 4.Dejar secar al aire . Agregar solución Maygrunwald con una pipeta .. 5. 1. ¿En qué condiciones se toma la muestra para el examen de hemoglobina? Un índice bajo de hematocrito puede deberse a diferentes patologías.0 ml de agua destilada y esperar 1 min. dejarlo por 4 min. 2. 6. soplando con la pipeta Para homogeneizar. Transcurrido este tiempo descartar la solución que cubre el frotis .Dejar secar en posición vertical al aire. Lavar con agua destilada agregándola suavemente sobre el borde del frotis.Colocar la segunda gota sobre un portaobjeto limpio y seco.. 7. Agregar 1.5 ml ).. Se pueden distinguir las siguientes formas: • • • • • • • Glóbulos rojos depranocíticos Glóbulos rojos en forma de lagrima Glóbulos rojos normales Glóbulos rojos con eliptocitosis Glóbulos rojos con esferocitosis Glóbulos rojos depranocíticos múltiples Glóbulos rojos falciformes y cuerpos de Pappenheimer MATERIALES. 5. 2. este examen no requiere ayuno y el tubo a tomar la muestra es el de tapa lila. cubriendo completamente el frotis (aproximadamente 1... 4. pasando sólo una vez.: • Portaobjeto limpio y seco • Cubreobjeto • Lanceta ó aguja pequeña • Algodón y alcohol TECNICA : Extensión de la muestra sobre el portaobjetos. Tinción Notas: Cuestionario 1.Actividad 3 – Realización de un frotis sanguíneo ( extensión y tinción ) Es un examen de sangre que brinda información acerca del número y forma de las células sanguíneas. Colocar el frotis sobre una cámara de tinción en posición horizontal. no soplar ni aplicar calor para no deformar las células. Enumere al menos 3 ¿Qué nos refleja el frotis sanguíneo? Defina Hemograma ¿Cuáles son los valores de Hemoglobina en Mujer adulta y hombre adulto? . Frotis Tinción de la muestra (técnica Maygrunwald-Giemsa). . Como condiciones. Agregar Solución Giemsa diluída ( 6 gotas por 3 ml de agua destilada ) y dejar por 15 min. 4. MATERIALES: • Solución Maygrunwald • Solución Giemsa • Cronómetro • Agua destilada • Pipetas Secar TECNICA: 1. en uno de sus extremos.Con un cubreobjeto ú otro portaobjeto haga la extensión de la gota llevándola hacia el otro extremo . 3. 2. ) Enfermedades del hígado o riñón Exposición a radiaciones Presencia de sustancias citotóxicas Un numero aumentado de leucocitos (leucocitosis) nos indican: • • • • • Daño de tejidos en quemaduras Enfermedades infecciosas Enfermedades inflamatorias (por autoinmunidad-reumáticas ó por alergia) Estrés Leucemia . fibrosis..-Observación de frotis sanguíneo ( realizar formula leucocitaria ) 2.) Enfermedades autoinmunes (Lupus. intoxicación. habiendo colocado previamente el cubre cámara en ella. esto se denomina como desviación "a la izquierda".. con lente de 40x Ud.5 a 10 mil/mm3 4... inflamatorias. Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones o cuerpos extraños.-Microscopio METODOLOGIA • Homogenice la muestra y utilizando la pipeta de recuento con boquilla. • Glóbulos blancos ó leucocitos y sus diferentes formas celulares : o Segmentados o Linfocitos o Monocitos. pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. etc. y otros procesos. podrá observar en el microscopio los distintos elementos celulares sanguíneos. Se llaman glóbulos blancos ya que éste color es el de su aspecto al microscopio.Reactivo lizante HayemB 2. Este término sugiere infecciones bacterianas agudas. El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de células madres de la médula ósea.5 a 12 mil/mm3 4. • Plaquetas.Determinación de grupo sanguíneo y factor Rh de una muestra hematológica. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.. • Retire la boquilla de la pipeta y homogenice la muestra por 10 min. Luego cargue la cámara de recuento.0 con la muestra. color y tamaño de las células sanguíneas. eosinófilos y los basófilos) y los mononucleares (los linfocitos y los monocitos). Además el porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecerá una mayor información para precisar un diagnóstico. Hay diferentes grupos de glóbulos blancos: los llamados polimorfonucleares (neutrófilos. cáncer y leucemias.5 a 10 mil/mm3 MATERIALES: 1..-Recuento de glóbulos blancos ( leucocitos) 3.. identificando : • Glóbulos rojos ó eritrocitos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Calcule el recuento de glóbulos blancos de la muestra. • Coloque la cámara bajo el microscopio y utilizando el lente objetivo 10X. La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas. Un numero disminuido de leucocitos (leucopenia) nos indican: • • • • • Fallo de la médula ósea (por tumores.Pipetas de recuento de Glóbulos blancos con boquilla 3. etc. y un aumento del porcentaje de los glóbulos blancos polimorfonucleares. Con el frotis realizado en el laboratorio anterior ud.. • Luego introduzca la pipeta en el reactivo HayemB y complete volumen hasta la marca superior.LABORATORIO Nº3 1. deberá identificar los distintos elementos celulares y con una gota de aceite sobre el mismo . cuente las células presentes en las cuatro esquinas de la grilla presente en la cámara.Cámara de recuento de Glóbulos blancos c/ cubrecámara EQUIPO: 1. llene la pipeta hasta la marca de 1. Actividad 2 : Observación de frotis sanguíneo. Actividad 1 : Recuento de leucocitos ó glóbulos blancos. Valores normales de leucocitos: Recién nacido Entre los 3 y 5 años De los 5 a los 15 años Hombre adulto Mujer adulta 10 a 26 mil/mm3 10 a 14 mil/mm3 5. deberá observar con lente de 100x las características de forma . Empleando una película delgada de aceite de inmersión sobre el frotis ya seco . Cuando en la medición de leucocitos se ven células jóvenes aparecen los neutrófilos en forma de núcleo en forma de bastón (cayados). • Elimine las tres primeras gotas de la pipeta y utilice la siguiente para llenar la cámara. o Eosinófilos o Baciliformes . quiere decir que el rojo no posee el antígeno correspondiente al anticuerpo usado. B. Una coagulación positiva indica que el glóbulo rojo posee el antígeno para el anticuerpo utilizado. Técnica que permite diferenciar los glóbulos rojos de los individuos entre sí y se basa en la interacción entre las glucoproteínas que forman parte de la membrana externa de esta célula y el reactivo. INTERPRETACION: 1.Enumere al menos tres patologías que nos indican una leucopenia Notas: [**El grupo 0. ¿De cuales otros tipos puede recibir? 4. GRUPO SANGUINEO A (II) B ( III ) AB ( I ) O ( IV ) ANTÍGENO ( glucoproteina ) A B AyB Ninguno ANTICUERPO (circulante en plasma) Anti B Anti A Ninguno Anti A y B De la misma forma podemos clasificarlos en Rh positivo ó Rh negativo dependiendo si está presente o no la proteína del Rh.Si un individuo es de sangre A+.¿Cuáles son los valores de referencia de leucocitos en mujeres adultas? 5.. actualmente no se considera como tal ya que otros factores pueden influir en esta compatibilidad.que se consideraba donante universal. Aplique al lado de cada una de las gotas de sangre. de la misma manera. es decir que para ser Rh negativo debemos ser homocigoto (recesivo). La coagulación se observa como la aparición de aglutinados sobre el portaobjetos..¿Qué tipo de suero se utiliza para el Rh? 2. una gota de suero (Anti A. D ) respectivamente y con una varilla u otro portaobjetos homogenice y observe la coagulación resultante en cada una. un antisuero anti proteínas de la membrana del glóbulo rojo..SI SI SI SI SI SI COAGULACION Suero anti A Suero antiB + + + + - Suero anti AB + + + - ABSI AB+ SI SI AB ( I ) A ( II ) B ( III ) O ( IV ) SI Cuestionario 1.. 2. estar sólo una de ellas ó ambas y de esta manera nos permiten clasificarlos en cuatro grandes grupos: MATERIALES : ¥ Suero anti A ¥ Suero anti B ¥ Suero anti AB ¥ Suero anti D ( Rh ) ¥ Portaobjetos ¥ Lancetas/ algodón / alcohol TECNICA: Después de limpiar el pulpejo del dedo con algodón previamente humedecido con alcohol. Si por el contrario no hay coagulación .¿Qué podemos observar en el frotis? 3.] . que se agrega para la realización del test. Estas glucoproteinas pueden ser de tipo “ A” ó “B” y pueden estar presentes o no . con una lanceta o aguja realice una punción de su dedo y coloque 2 gotas de sangre una a cada extremo de un portaobjeto y otras 2 gotas sobre otro portaobjeto. GRUPO SANGUINEO UTILIZACIÓN EN LAS TRANSFUSIONES DE SANGRE Puede recibir sangre de Tipo de sangre O-** O+ BB+ AA+ AB SI SI SI SI SI SI ABSI SI SI A+ AB+ BO+ OSI SI SI SI SI SI SI SI Cuestionario 1. ésta tiene como propiedad ser de carácter dominante.Actividad 3: Determinación del grupo sanguíneo. AB. Este análisis se realiza para estudiar la posible presencia de una diabetes mellitus.0ml de reactivo Incubar por 10 min. Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucógeno. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva. en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia. aminoácidos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja. anestesia general) 2. Medicamentos(antidepresivos.0ml de reactivo 4º Muestra: 10ul de muestra + 1.. a 37º C y luego leer en el fotómetro clínico.0 ml de reactivo 3º Control : 10ul de control + 1.LABORATORIO Nº4 Metabolismo de glúcidos: Glicemia. etc. medicamentos) Puede aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en: • Dietas excesivas • Enfermedades hepáticas • Enfermedad de Addison • Exceso de insulina en diabéticos • Hipopitituarismo • Hipotiroidismo • Insulinoma Metodología: Se utilizará el método GOD-PAP.Determinación de la glicemia y glucosuria. un test enzimático colorimétrico que se basa en el poder reductor de la glucosa y cuyo producto de reacción se puede medir a una longitud de onda dentro del espectro visible ( 546 nm) y por lo tanto la intensidad del color será proporcional a la cantidad de glucosa de la muestra. Los tratamientos con sueros en vena. ya que contienen dextrosa (azúcar) 3. Embarazo 4. en condiciones normales por el ayuno. El alcohol y analgésicos pueden disminuirla. 70-110 1º 2º 3º 4º Resultados: 1º: 2º: 3º: 4º: Notas: . El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro.) 5. se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Pueden modificar los valores de glucemia y no ser por una diabetes ciertas situaciones: 1.0 ml de reactivo 2º: Estandar ( 100mg/dl): 10 ul de estandar + 1. lo que se consume desaparece de la sangre. y ácidos grasos. antihipertensivos. Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglucemia) en: • Diabetes mellitus • Enfermedades renales • Feocromocitoma • Hipertiroidismo • Glucagonoma • Pancreatitis aguda • Síndrome de Cushing • Tumores de páncreas • Otras situaciones antes explicadas (estrés. Ref. Como es una enfermedad muy compleja y con grandes repercusiones de salud es un análisis muy discriminativo y útil que se realiza de forma bastante rutinaria.. Estrés por enfermedades agudas (infarto cerebral. GOD Glucosa + O2+ H2O ------. embarazo. Glucosuria. sueros. Para realizar este análisis se precisa estar en ayunas al menos las 6 horas previas.N-(4-antipiribenzoquinona ) POD Protocolo de trabajo Tubo : Nº 1º: Blanco : 1. Hemoglobina glicosilada.Acido Glucónico +H2O2 H2O2 + 4-aminoantipirina + ac.. cardiaco. El examen de glicemia mide la concentración de azucar en la sangre.: La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno de la respiración. 4 Hidroxibenzoico-----. R. Actividad 1. hormonas femeninas. para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). 0 % Pacientes diabéticos mal controlados : Mayor de 8. Dado que la concentración de glicohemoglobina en el eritrocito refleja el nivel promedio de glucosa en la sangre de las 4 a 6 semanas anteriores y es estable por el tiempo de vida de estas células.5 – 7. del nivel de la resina..Enumere al menos 3 patologías que pueden haber cuando se detecta una hiperglicemia HbA1 = Abs.¿Cómo se llama el método para la determinación de glicemia? 2.Separación(HbA1) : Pipetear 100 ul del hemolizado obtenido anteriormente al tubo que contiene la resina. ( Hbtotal ) Mezclar por 5 min. HbA1 muestra * F ( 7.5 % . cuanto más alto sea el nivel de HbA1c. Empujar el émbolo hasta el fondo. Colocar el émbolo de goma hasta aproximadamente 1 cm. Resultados: Notas: Protocolo de trabajo : a...Hemoglobina Glicosilada : La formación de la glicohemoglobina ocurre irreversible y progresivamente en los eritrocitos a través de los 120 días de vida normal de estas células sanguíneas. En general.Mientras mas alto el nivel de hemoglobina glicosilada ¿Qué patologías se pueden desarrollar? 3. mayor será el riesgo de desarrollar problemas como: * Enfermedad ocular * Cardiopatía * Enfermedad renal * Daño neurológico * Accidente cerebrovascular Su determinación se basa en un método fácil y rápido de separación de la hemoglobina no glicosilada por una resina de intercambio iónico.95 % ) Abs. Verter el sobrenadante en una cubeta de lectura y leer su absorvanciaa 405 nm..Referencia : Pacientes normales y diabéticos estables : 4.Actividad 2.¿La hemoglobina glicosilada es parámetro de control para que tipos de pacientes? 5.Calculo del % de Hemoglobina glicosilada( HbA1 % ) : Cuestionario 1...Hemólisis : En una copa de muestra agregar : 500 ul de lisante 100 ul sangre (obtenida c/ EDTA) Mezclar por 5 min. c. b. d.Hemoglobina total: Pipetear 20 ul del hemolizado en un tubo que contiene 5 ml de agua destilada.. Uno tiene más hemoglobina glicosilada si ha tenido niveles altos de glucosa en la sangre. la medición de la glicohemoglobina proporciona una prueba de gran utilidad clínica para la evaluación y control de los pacientes diabéticos.¿Cuál es el valor de regencia para la glicemia? 4.. a Tº ambiente .. total de la muestra R.. Mezclar por 5 min. Leer su absorvancia a 405 nm . Determinación de Colesterol total y HDL Colesterol. Resultados: . Fenitoína. Necesita las mismas condiciones que el colesterol para la toma de muestra. Hasta 200 mg/dl Colesterol Total R. Corticosteroides.0ml de reactivo.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4º Muestra: 1. Triglicéridos Actividad 1. a diversas partes del cuerpo.donde el Colesterol y sus ésteres son liberados desde las lipoproteínas por la acción de detergentes y luego estos son hidrolizados por la Enzima Colesterol esterasa y una posterior oxidación enzimatica del Colesterol por la enzima Colesterol oxidasa . Vitamina D. a tºambiente y luego centrifugar por 15 min. El colesterol es una sustancia suave y serosa que se encuentra en todas partes del cuerpo. El cuerpo necesita un poco de colesterol para funcionar adecuadamente.. 35 – 55 mg/dl Colesterol HDL A lo que se refiere al colesterol HDL. los triglicéridos y otras grasas.produciendo una quinona coloreada que se puede medir dentro del espectro visible y por lo tanto se puede cuantificar la intensidad del color generado a 546 nm. ACO. Colesterol LDL. Para obtener resultados precisos. forma el H2O2 que sigue la misma vía de reacción que en la determinación de glicemia . a 37ºC y luego leer en el fotómetro clínico Para el HDL: EL HDL –colesterol debe obtenerse por precipitación de acuerdo al siguiente protocolo: Muestra (suero) Reactivo precipitante 200ul 500ul Los niveles bajos de colesterol puede ser causados por: • • • • • • Hipertiroidismo Enfermedad hepática Malabsorción (absorción inadecuada de nutrientes desde el tracto intestinal) Desnutrición Anemia perniciosa Sepsis Dejar por 10min. Leer en fotometro R Ref. pero debe evitar otras bebidas como café. a 4000rpm Luego pipetiar 10ul del sobrenadante y agregar a 1. La principal función del HDL es ayudar a absorber el exceso de colesterol de las paredes de los vasos sanguíneos y llevarlo al hígado. Ellas transportan el colesterol. éste es una lipoproteína de alta densidad. Diuréticos tiazídicos. una forma de colesterol "bueno".0ml de reactivo 2º Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3º Control: 1. Colesterol HDL. Los niveles altos de colesterol total pueden ser causados por: • • • • • • Cirrosis biliar Hiperlipidemias familiares Dieta alta en grasa Hipotiroidismo Síndrome nefrótico Diabetes no controlada Metodología: Se utilizará el método enzimático colorimétrico CHOD-PAP .Ref.0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 10 min. Fármacos bloqueadores betaadrenérgicos. Sulfonamidas. Las lipoproteínas están hechas de grasa y proteína. La persona puede tomar agua. Los medicamentos que pueden incrementar las mediciones de colesterol total abarcan: Esteroides anabólicos. El médico le puede solicitar a la persona que deje de tomar medicamentos que puedan afectar el examen.LABORATORIO Nº5 Metabolismo de lípidos : Colesterol total. Epinefrina. té o gaseosa. no se debe comer ni beber nada durante 9 a 12 horas antes del examen. pero demasiado colesterol puede obstruir las arterias y llevar a cardiopatía. llamadas lípidos. Tubos: 1º Blanco: 1. donde es descompuesto y eliminado del cuerpo a través de la bilis. 2.Nombre al menos tres patologías que se pueden producir por los niveles altos de colesterol Resultados: .Si un paciente obtiene los siguientes resultados: Colesterol total 250mg/dl. Cuando se realizan esfuerzos sin suficiente aporte se movilizan entre las comidas.¿Cuáles son los valores de referencia del colesterol total. linoleico. Las grasas del cuerpo humano son las grasas neutras. de acuerdo con la energía que necesite el organismo. los lípidos conjugados. Hiperlipoproteinemia familiar. Colesterol HDL 25mg/dl y Triglicéridos 200 mg/dl. y los esteroles..Defina Triglicéridos 2. La unión de tres ácidos grasos de estos mediante una esterificación produce el triglicérido. se utilizará una técnica enzimática colorimétrica utilizando la formación de H2O2 que se utilizará para la producción de una quinona coloreada que se puede medir fotometricamente a 546 nm y la intensidad del color será directamente proporcional a la concentración de triglicéridos en la muestra . Menor de 155 mg/dl R Ref.(triglicéridos + HDL-colesterol) 5 R .0ml de reactivo 2º Estandar: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4º Muestra: 1.. Para realizar este análisis se precisa estar en ayunas al menos las 6 horas previas. Los triglicéridos son una forma de almacenar energía en forma de depósitos en los músculos y en tejido adiposo.. hormonas femeninas). Cuestionario 1. Una vez unidos se almacenan en el tejido adiposo (grasa) del cuerpo.Ref . Síndrome nefrótico. 3.LDL Colesterol: Para ello se utiliza la siguiente formula: Calculo de LDL Colesterol= Colesterol total . Por ello el análisis de los triglicéridos es una parte de una evaluación de factores de riesgo coronario. Si esta ingesta . y palmítico. Los resultados pueden estar alterados por el embarazo. de acuerdo a la siguiente reacción: GK Glicerol + ATP -------. Los triglicéridos disminuidos pueden reflejar: • • • • Desnutrición Dieta pobre en grasas Hipertiroidismo Síndrome de malabsorción.¿Qué tipo de método enzimático se utilizó para la medición del colesterol total? 3.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3º Control: 1. Los ácidos grasos penetran por la dieta y se mantienen en la sangre hasta su depósito. Las grasas neutras están formadas por ácidos grasos. Se utilizan para producir energía. ¿Cuál es su colesterol LDL? 5.absorción . Hipotiroidismo..0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 10 min. Diabetes mal controlada.. Ingesta pobre de proteínas en la dieta y alta en carbohidratos. Metodología: Al igual que las determinaciones anteriores . A 37ºC y luego leer en fotómetro clínico. esteárico.L-glicerol-3-fosfato + ADP GPO L-glicerol-3-Fosfato + O2 ------. araquidónico.Determinación de triglicéridos: Los triglicéridos forman parte de las grasa del cuerpo humano. Hasta 150 mg/dl Los triglicéridos aumentados pueden reflejar: • • • • • • • Cirrosis hepática. Pancreatitis.. y por la toma de medicamentos (colestiramina. para su posterior utilización. Tubos: 1º Blanco: 1. siendo un almacén de grasas rápidamente utilizables.depósito se ve alterada aparecen en la sangre en exceso y favorecen el depósito de placas en las venas y arterias..Dihidroxiacetonafosfato + H2O2 POD H2O2 + 2-Clorofenol + 4 Aminoantipirina ----4-Benzoquinona-fenazona + H2O + HCl Los triglicéridos son hidrolizados enzimaticamente a glicerol y acidos grasos libres por la acción de una lipasa específica. colesterol HDL y colesterol LDL? 4. 0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4º Muestra: 1. enfermedad de Whipple). en este caso es porque las globulinas se sintetizan en el retículo endotelial y la albúmina en el hígado. son así proteínas los enzimas. hará que se pierda albúmina por la orina . alfa-2. las inmunoglobulinas.). la hemoglobina. de tal manera de conocer . la que se detectará tempranamente midiendo la microalbuminuria en orina de 24 horas. progesterona.. Quemaduras. Enfermedades por deficiencit de inmunoglobulinas. Se componen de aminoácidos.Proteínas totales. basada en la formación de un complejo de color violeta .8. La albúmina es la proteína de más concentración en la sangre.. manteniendo un equilibrio. Malnutrición. síndrome nefrótico).Es sintetizada en el hígado . entre las proteínas y el ión cobre . para saber cuál es el desequilibrio existente. y tiene también la función de mantener la presión sanguínea ya que favorece la presión osmótica coloidal para mantener líquidos en el torrente sanguíneo y que no pasen a los tejidos. el LDL (transportadora de colesterol). etc . enfermedades del riñón o del hígado. y esto es principalmente importante en pacientes portadores de diabetes que desarrollan la denominada nefropatía diabética. Enfermedades infecciosas crónicas. a 37 ºC y luego leer en fotómetro clínico. alfa-2. algunas hormonas. el colágeno. y medicamentos).7 g/dl Adultos y niños desde 3años: 6. 2. Enfermedades intestinales con malabsorción (Enfermedad de Crohn.2 – 9.0ml de reactivo 2º Estandar: 1.7 – 8. etc.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3º Control: 1. beta y gamma globulinas. Para este examen el paciente no requiere de ayuno. Sus valores también disminuirán en estados de malnutrición. Las globulinas se pueden dividir en alfa-1. Una mala función renal . en una solución alcalina. progesterona. Una reacción sencilla y ampliamente utilizada para la determinación de proteínas. el fibrinógeno. denominada BIURET.1 g/dl Metodología: La determinación de proteínas en suero se realizará por una técnica fotocolorimétrica .LABORATORIO Nº6 Metabolismo de proteínas: 1. Enteropatías con pérdida de proteínas. En las enfermedades del hígado puede encontrarse lo mismo (albúmina baja con proteínas totales normales). Puede aparecer alta la concentración de proteínas en suero en: • • • • Enfermedades inflamatorias crónicas.0ml de reactivo + 10ul de muestra Incubar por 15 min. por lo tanto un daño de las células hepáticas bajará los niveles séricos. estado nutricional tras intervenciones de cirugía. no solo la albúmina sino también las globulinas y el índice albúmina /globulina. Por ejemplo ocurre así en las enfermedades reumáticas o colagenosis.4 . beta y gamma globulinas. además de contribuir a la mantención de la presión arterial a través de la presión osmótica coloidal . Si el valor de las proteínas totales está alterado se debe realizar un estudio pormenorizado de cada grupo. Por ello es importante que se realice la determinación de ambos parámetros en conjunto y no de manera aislada . Resultados: Rango referencia : Niños menores de 3 años : 5. La albúmina transporta muchas moléculas pequeñas (bilirrubina. etc. Actividad 1: Determinación de proteínas en suero La determinación de proteínas totales se realiza para evaluar la posible presencia de enfermedades nutricionales. cirrosis. . Puede aparecer baja la concentración de proteínas en suero en: • • • • • • • • • • Agammaglobulinemia. 3. La albúmina representa aproximadamente el 60% de las proteínas circulantes y son importantes transportadores de otras moléculas tales como : bilirrubina. Ascitis. Las proteínas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos la Albúmina y las globulinas. o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes proteínas. los que pueden tener diversas causas dependiendo de la edad del paciente y otras causas a investigar por el médico tratante. Enfermedades del hígado(hepatitis.Albúmina. medicamentos. Mieloma múltiple. Acido úrico Las proteínas son un constituyente muy importante de las células y los tejidos del cuerpo humano. Hemorragias. Enfermedades renales (glomerulonefritis. debido a que la albúmina es más pequeña y al aumentar la capilaridad puede perderse del espacio sanguíneo a los tejidos y no hacerlo así las globulinas.7 g/dl Recién nacidos : 5. Tubos: 1º Blanco: 1. albúmina y alfa-1. Hay diferentes tipos de proteínas con diferentes funciones. Enfermedad de Waldenstrom. En algunos casos la albúmina está baja y el resto de proteínas está normal. Si el riñón funciona mal se perderá albúmina por la orina . etc.etc . y leer en fotómetro clínico a 620 nm. El paciente necesita al menos 6 horas de ayuno para el examen. o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes proteínas. andrógenos.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3º Control: 1. el alopurinol. como ocurre en algunos tipos de cancer . Pueden modificar los valores de ácido úrico y no ser por una gota ciertas situaciones: • Estrés en general puede elevar los niveles de ácido úrico. enfermedad de Whipple) Quemaduras Malnutrición Metodología: R. síndrome nefrótico) Enfermedades del hígado (hepatitis. Sus niveles plasmáticos entonces pueden elevarse por un aumento en la destrucción celular . si las células hepáticas están dañadas la albúmina en el suero disminuirá. los corticoides.. frutos secos) • Eclampsia en el embarazo • Exceso de ejercicio • Fallo renal • Gota • Hipoparatiroidismo • Lesiones graves en los tejidos (quemaduras. las hormonas femeninas. Para este examen no se requiere ayuno. embutidos. apareciendo baja la concentración de la misma en el suero. El hígado es la principal fuente de síntesis de albúmina.Referencia : 3.5 – 5.. traumatismos) • Leucemia • Litiasis renal Puede aparecer el ácido úrico disminuido (hipouricemia) en: • Policitemia vera • Dietas baja en purinas (proteínas) • Quimioterapia del cáncer • Síndrome de Fanconi • Enfermedad de Wilson .0ml de reactivo 2º Estandar: 1. • Pueden disminuir los valores de ácido úrico..0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4º Muestra: 1.Actividad 2: Examen de albúmina La determinación de albúmina se realiza para evaluar la posible presencia de enfermedades del riñón o del hígado. • La utilización de contrastes radiológicos también • Ciertos productos y medicamentos pueden aumentar el ácido úrico. el cual en presencia de albúmina cambia de color amarillo limón a verde .. la cafeína. proveniente del consumo elevado de carnes rojas y/o mariscos.0ml de reactivo + 10ul de muestra Dejar a temperatura ambiente por 10 min . mariscos. las teofilinas. Puede aparecer el ácido úrico elevado en sangre (hiperuricemia) en: • Acidosis metabólica • Alcoholismo • Diabetes mellitus • Dieta rica en purinas (carnes rojas. La realización del examen de albuminémia se basa en el cambio de coloración del indicador verde de bromocresol a pH ácido . Hay medicamentos que pueden alterar la determinación de la albúmina en el suero. en una falla de tipo renal . cirrosis. Actividad 3: Medición de acido úrico El acido úrico es el resultado del metabolismo de las purinas ( restos de DNA y RNA) y se excreta principalmente por el riñón . el alcohol.) Enfermedades intestinales con malabsorción (Enfermedad de Crohn.0 g/dl. Puede aparecer baja la albúmina en suero en: • • • • • • Ascitis Enfermedades renales (glomerulonefritis. pero la causa mas común es la denominada artritis gotosa ó “ gota “.La intensidad del color entonces formado es proporcional a la concentración de albúmina en la muestra. vísceras de animales. hormona del crecimiento y la insulina. y puede aparecer más elevada si se están tomando esteroides anabolizantes. En estados carenciales por dietas exageradas o por malnutrición también se puede encontrar baja la albúmina en el suero. Tubos: 1º Blanco: 1. la aspirina. 0ml de reactivo 2º Estándar: 1.Metodología: Su determinación en el laboratorio se basa en un test enzimático-colorimétrico . de acuerdo a la siguiente reacción: uricasa Acido úrico + 2H20 ---------------.-¿Cómo se llama la técnica por la cual se determinan las proteínas totales en suero? 2.0ml de reactivo + 20ul de muestra Dejar a temperatura ambiente por 10 min .0 mg/dl Mujeres : 2.0ml de reactivo + 20ul de solucion control 4º Muestra: 1.4 – 7.Alantoina +CO2 + H2O2 peroxidasa 2H2O2 +Acido3.4 – 5.7 mg/dl Tubos: 1º Blanco: 1.¿Qué medicamentos pueden alterar la concentración de albúmina? R..Referencia : : Hombres: 3.N-(4 antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinina Metodología: Cuestionario 1.0ml de reactivo + 20ul de solucion estandar 3º Control: 1.5 dicloro-2-hidroxibenzeno sulfónico+ 4 aminofenazona ------------------. Notas: .-El examen de albúmina ¿necesita ayuno el paciente? 4.-Nombre al menos 3 patologías las cuales tienen relación con la elevación de acido úrico en sangre 3. y leer en fotómetro clínico a 620 nm. Clearance de creatinina.. 1440 En el laboratorio utilizaremos la técnica de Jaffé sin desproteinización para medir los niveles plasmáticos y urinarios de creatinina. por lo que su tasa de excreción es igual a su tasa de filtración: Tasa excreción= tasa filtración = TFG * concentración plasmática En condiciones de equilibrio . Esta es una técnica enzimática de punto final que utiliza la formación de un compuesto de color amarillo anaranjado entre la creatinina y el ácido pícrico en un medio alcalino.Referencia : Creatininemia : F : 0. siendo un método altamente específico sin reacciones secundarias que causen interferencias. y ello varía poco y los niveles suelen ser muy estables. tumores) • Pielonefritis • Problemas cardiacos Puede aparecer la creatinemia disminuida en: • Distrofia muscular avanzada • Miastenia gravis La creatinuria: La creatinina es eliminada por completo del cuerpo por medio de los riñones. EL aclaramiento ó clearance renal de una sustancia es el volumen del plasma que es completamente depurado de esa sustancia por los riñones en la unidad de tiempo. La creatinemia es la concentración de creatinina en sangre. calculando el clearance con la siguiente fórmula: Cl. es útil para medir función renal.30 mg/dl Creatininuria : 0. Las tasas a las que distintos metabolitos son depurados del plasma constituyen un método útil para determinar cuantitativamente la eficacia con que los riñones excretan diversas sustancias.Creatininemia.50 grs/ 24 hrs. Se puede utilizar una muestra de orina aleatoria o una muestra de orina de 24 horas. Clearance creatinina : 95 – 160 ml/min. Realización del clearance de creatinina La creatinemia: La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina. La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular.10 mg/dl M : 0. Es un parámetro que nos indica función renal. que es un componente de los músculos. 2.70 – 1.90 – 1. De esta manera el clearance de creatinina es utilizado para evaluar la función renal y para ello debemos medir la concentración de creatinina plasmática y la concentración de creatinina en una muestra de orina recolectada por el paciente durante 24 hrs. . La creatinina puede ser transformada en ATP que una fuente de alta energía para las células. 3. pero pueden deberse a cualquiera de las siguientes afecciones: • Glomerulonefritis • Dieta rica en carne • Insuficiencia renal • Distrofia muscular (etapa tardía) • Miastenia grave • Azotemia prerrenal • Pielonefritis • Flujo sanguíneo renal reducido (como en shock o insuficiencia cardíaca congestiva) • Rabdomiólisis • Obstrucción de las vías urinarias Clearence de Creatinina: El clearence de creatinina. Fosfemia Actividad 1.LABORATORIO Nº7 Función renal 1.60 – 1. En el caso de la creatinina. R. Para ello el paciente necesita un ayuno de al menos 6 hrs. Los resultados anormales de la creatinina en orina y de la depuración de creatinina a menudo son inespecíficos. entonces la tasa normal de excreción de creatinina se mantiene a expensas de una elevación de la concentración plasmática de creatinina . por ser un producto de desecho metabólico no se reabsorbe. Para ello se necesitan los valores de creatinemia y creatinuria. midiendo el volumen de orina recolectado en ese tiempo. 4. creatinina =concentración creatinina orina( mg/dl) Concentración creatinina sangre (mg/dl) * volumen orina 24 hrs.Creatininuria. la tasa de excreción se iguala a la tasa de producción de creatinina aunque la TFG disminuya. utilizando una muestra de suero y orina (diluida 1/100) respectivamente. Puede aparecer la creatinemia elevada en sangre en: • Acromegalia • Deshidratación • Distrofia muscular • Eclampsia • Glomerulonefritis • Nefropatía diabética • Obstrucciones renales (piedras. Actividad 2: Fosfemia El fósforo es un mineral esencial para la formación de los huesos .Metodología: Tubos: 1º Blanco: 200ul de reactivo nº1 + 800ul de reactivo nº2 2º Estándar: 200ul de reactivo nº1 + 800ul de reactivo nº2 + 50ul solución estándar 3º Control: 200ul de reactivo nº1 + 800ul de reactivo nº2 + 50ul solución control 4º Muestra: 200ul de reactivo nº1 + 800ul de reactivo nº2 + 50ul de muestra Resultados: Llevar a baño a 37ºC y agregar a cada tubo 50 ul de: estándar. ingesta de alcohol. ya sea esta suero u orina. Los niveles por encima de lo normal pueden indicar: • Metástasis ósea • Hipocalciemia • Hipoparatiroidismo • Aumento de la ingesta de fosfato en la dieta o por vía IV • Enfermedad hepática • Insuficiencia renal • Sarcoidosis Los niveles por debajo de lo normal pueden indicar: • Cetoacidosis diabética • Hipercalciemia • Hiperinsulinismo • Hiperparatiroidismo • Muy poca ingesta de fosfato o vitamina D en la dieta. no sólo para estos tejidos . Por lo anteriormente señalado la determinación de fósforo en el suero no es por sí sólo un buen indicador de alguna patología en particular sino que debe estar integrado en un conjunto de exámenes de laboratorio. control ó muestra (suero u orina diluida 1/100) según corresponda y medir individualmente en el fotómetro. Los altos niveles de este mineral en el suero están aso-ciados a daño renal. finalizado este realizará el mismo proceso con la muestra. es decir una vez que agregue el volumen de estándar al tubo debe medir su cinética en el fotómetro. Su control depende de la hormona PTH y de los mecanismos de filtración y reabsorción renal. una vez que éste le ha entregado el resultado correspondiente . De esta forma obtendrá los valores de creatininemia y creatininuria necesarios para calcular el Clearance de creatinina. ocasionando raquitismo (niñez) u osteomalacia (adultez) Lo siguiente puede afectar los niveles de fósforo: • Antiácidos • Enemas que contengan fosfato de sodio • Suplementos de vitamina D en exceso • Administración de glucosa a través de una vena (intravenosa) • Laxantes que contengan fosfato de sodio • Meticilina . con el fin de entregar un diagnóstico clínico. Su valoración en suero es importante como indicador de tratamiento y evolución de cualquiera de las patologías anteriormente mencionadas. sino que cada célula de nuestro organismo necesita de este mineral para su funcionamiento por su rol en el equilibrio Acido-Base . sin embargo se requiere . Los bajos niveles de fósforo en suero están asociados principalmente a un hiper-paratiroidismo primario o exceso de vitamina D. aproximadamente el 85 % del fósforo del cuerpo humano se encuentra en los huesos y dientes . metástasis ósea ó por la dieta. agregará entonces el volumen de control al tubo que corresponde y medirá su cinética . .Sulfúrico+ Fosfato Complejo Fosfomollibdato Tubos: 1º Blanco: 1. 4. a Tº ambiente y medir en el fotómetro clínico a 340 nm Cuestionario 1. en el caso del fósforo ¿qué patologías nos indican? (Mencione 5) R.0ml de reactivo + 10ul de solucion estandar 3º Control: 1.0ml de reactivo + 10ul de solucion control 4º Muestra: 1.5 ..¿En que tipos de pacientes es de gran utilidad realizarle el clearence de creatinina? 3.0ml de reactivo + 10ul de muestra Mezclar e incubar por 10 min.7 .Los niveles por debajo de lo normal.Mencione los valores de referencia de creatinemia.Referencia : Niños ( Menor de 15 años) : 4.¿Qué es la creatinina? 2. creatinuria y clearence. ¿el método a utilizar es directo o indirecto? 5. se basa en la reacción de éste con el Molibdato de amonio en medio ácido.. Molibdato de Amonio +Ac.4.Método : Un método directo para la determinación de fosfato inorgánico.Para la fosfemia.0ml de reactivo 2º Estándar: 1.5.5 mg/dl Adultos : 2.. con un máximo de absorvancia a 340 nm..5 mg/dl Resultados: Notas: . formando un complejo de color amarillo. Si encontramos un valor elevado de GGTP con niveles de Fosfatasa Alcalina normales se deberá principalmente a cambios enzimáticos inducidos por el abuso de alcohol y/o medicamentos y no por un daño en la célula hepática.. un daño agudo o crónico en este órgano deberá ser evaluado en el tiempo a fin de conocer cuál será su efecto en las múltiples funciones que este desarrolla..0mg/dl) dado que la bilirrubina proviene del grupo“HEME” sus niveles plasmáticos se elevan cuando hay una enfermedad hepática ó una destrucción mayor de lo normal de los glóbulos rojos. para corroborar la anomalía de naturaleza hepática. Para ello se ha diseñado un conjunto de exámenes denominado Pruebas hepáticas..Albuminemia.-Bilirrubina total y directa 1. ambas son enzimas marcadoras de la destrucción celular .Transaminasas oxálica(TGO). estas se dividen en: a. Bilirrubina directa.. Por ello. la primera de ella es una proteína pricipalmente de transporte... como también la síntesis de proteínas entre otras. Cuando el daño hepático es severo (Hepatitis viral aguda) los valores de estas enzimas pueden estar. por lo tanto ambas determinaciones bioquímicas se encontraran bajo los niveles de referencia cuando nos encontremos en un daño hepático agudo ó crónico.Pruebas específicas: De los marcadores de enfermedad hepática ASAT y ALAT . entre las centenas hasta miles U/L. Los niveles de bilirrubina en sangre son considerados como una prueba hepática real del funcionamiento de este órgano al evaluar la capacidad de éste para recoger.. por lo que son utilizadas principalmente para evaluar el avance de una hepatitis aguda ó crónica y evaluar el tratamiento con corticoides. 3. Sin embargo en una cirrosis hepática alcanzan elevaciones leves ó moderadas de sus valores (2 ó 3 veces su valor normal hasta 300 U/L ).Fosfatasa Alcalina 4. En relación a la Fosfatasa alcalina y GGTP estas son enzimas que se alteran cuando se interrumpe el drenaje de la bilis.Transaminasas pirúvica (TGP) El hígado es el órgano metabólico mas importante.LABORATORIO Nº8 Función hepática : 1.ALAT ( GPT) Alanino aminotransferasa 3. es decir cuando hay daño de la célula hepática estas enzimas salen hacia la circulación sanguínea . siendo que sus valores de referencia son de 10 a 35 U/L aproximadamente dependiendo del sexo del paciente.Bilirrubina total. ya que ASAT puede alterarse también cuando hay daño en el corazón ó músculo. debe realizarse la determinación enzimática de ambas.. producir y segregar la bilis a la secreción biliar.ASAT( GOT) Aspartato aminotransferasa 2. ya sea por un tumor o bien por una enfermedad hepática causada por alcohol o drogas. La bilirrubina es el principal pigmento de la bilis en el hombre y su elevación produce la denominada ictericia (bili >3.. 2. en el se desarrollan las rutas metabólicas más importantes como lo son la glicólisis y gluconeogénesis.Marcadores de la función hepática: 1.. Notas: . mientras que la segunda juega un rol importante en la coagulación sanguínea. Como la fosfatasa alcalina no es sólo hepática (hueso.Marcadores de enfermedad: hepática ó via biliar c.intestino.Serología viral 2. En cuanto a la Albumina y la protrombina. placenta). 4.siendo ALAT de mayor especificidad.-GGTP Gama glutamil transpeptidasa 5.Protrombinemia( Tiempo de protrombina) 1. 2.Test autoinmunes b. ambas son proteínas sintetizadas en el hígado. β-oxidación de ácidos grasos y la síntesis de los mismos. donde se bloquean los conductos pequeños dentro del hígado. Leer en fotómetro clínico. A) Determinación de bilirrubina total: Reactivos ( R1): Dimetilsulfóxido. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4º Muestra: 1.20 mg/ Tubos: 1º Blanco: 1. En el suero existen dos formas de bilirrubina: a.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4º Muestra: 1. blanco * f ( 19.-Bilirrubina libre (bilirrubina indirecta) que requiere la solubilización con DMSO (Dimetilsulfóxido) . blanco * f ( 14.5ml de reactivo 1 2º Estándar: 1.5 mg/dl Tubos: 1º Blanco: 1.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de solución estándar 3º Control: 1. colelitiasis) Tumores de vías biliares Síndrome de Dubin-Jhonson Síndrome de Rotor La bilirrubina es convertida en azobilirrubina por el ácido sulfanílico diazotado .5ml de reactivo 1 2º Estándar: 1.5 – 1.Actividad 1: Determinación de Bilirrubina Para este examen el paciente necesita a lo menos 4 hrs de ayuno.-Bilirrubina-glucoromida (bilirrubina directa)que reacciona directamente en solución acuosa.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de solución estándar 3º Control: 1. muestra – Abs. Calculo de la concentración : Abs. Cálculo de la concentración : Abs.Referencia : 0.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 5 min. muestra . DMSO Acido sulfanílico Acido clorhídrico ( R2) : Nitrito de Sódio R.Abs.1 ) Resultados: B) Determinación de Bilirrubina directa: Reactivos (R1) : Acido sulfanílico Acido clorhídrico (R2) : Nitito de Sodio R.5ml de reactivo 1 + 50ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Mezclar e incubar a temperatura ambiente y exactamente a los 5 min. esta azolirrubina es coloreada y por lo tanto se puede medir espectrofotometricamente a 546 nm. de agregado R2 leer en fotómetro clínico.0) Notas: .Referencia :0. Los niveles aumentados de bilirrubina total e indirecta ó no conjugada pueden indicar: • • • • • • • Anemia hemolítica Eritroblastosis fetal Enfermedad de Gilbert Ictericia fisiológica del recién nacido Otras anemias Problemas en las transfusiones de sangre Resolución de un gran hematoma Los niveles aumentados de bilirrubina directa ó conjugada pueden indicar: • • • • • • Cirrosis Hepatitis Obstrucción de vía biliar (colangitis.01 – 0. b. por un período de 3 min. Es por tanto una técnica enzimática en la cual se mide la disminución de la absorvancia de NADH a 340nm a intervalos de tiempos regulares (cada 1 min durante 3 min). .A1) El promedio de las diferencias de absorvancias a 340 nm se multiplica por un factor dependiente de la temperatura de medición : F ( 952) a 25ºC.Referencia : Hombre : 5 – 17 U/L Mujer 5 – 15 U/L Resultados: Los niveles disminuidos de TGO pueden indicar: • • • • Beri-Beri Cetoacidosis diabética Embarazo Enfermedades renales Notas: La reacción por la cual se lleva la obtención de la concentración de ASAT es la siguiente: TGO 2 – oxoglutarato + L-Aspartato MDH Oxalacetato + NADH + H+ Malato + NAD+ Glutamato + Oxalacetato La desaparición de NADH es medido espectrofotometricamente a 340 nm y directamente proporcional a la actividad de ASAT ( TGO) presente en la muestra. R. . Los niveles aumentados de TGO pueden indicar: • • • • • • • • • • • • • • • • Alcoholismo Anemia hemolítica Colestasis (obstrucción de vía biliar) Cirrosis Distrofias musculares Enfermedades muculares Hepatitis Infecciones víricas (mononucleosis..Actividad 2: Determinación de Transaminasas TGO y TGP A) Determinación de ASAT ( TGO ) : Para este examen el paciente necesita a lo menos 4 hrs de ayuno.) Infarto de miocardio Intervenciones de cirugía cardiaca Isquemia hepática Medicamentos tóxicos del hígado Necrosis hepática Pancreatitis aguda Traumatismos musculares Tumor hepático Tubos: 1º Blanco: 800ul de reactivo 1 2º Estándar: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de solución estándar 3º Control: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4º Muestra: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Una vez agregada la muestra se activa el cronómetro y se lee la absorvancia cada 1 min. Calculo de la actividad enzimática ( U/L) Promedio de: ( A3 – A2) ( A2.. 2. Enfermedad de Wilson Hepatitis Infecciones víricas (mononucleosis. TGP. Los rangos de referencia dependen de la temperatura a la cual se mida la actividad enzimática.Nombre los rangos de referencia de TGO.. Los niveles aumentados de TGP pueden indicar: • • • • • • • • • • • • • • • • • Alcoholismo Anemia hemolítica Cáncer de hígado Cirrosis Distrofia muscular Enfermedades renales agudas Enfermedades musculares primarias..-Nombre al menos 5 patologias correspondiente al aumento en la concentración de TGO 5.) Infarto de miocardio Intervenciones de cirugía cardiaca Isquemia hepática Medicamentos tóxicos del hígado Necrosis hepática Pancreatitis aguda Traumatismos musculares R.Oxoglutarato + L-Alanina ------------. .Glutamato + Piruvato LDH Piruvato + NADH + H+ -------------.. Bilirrubina total y directa. Metodologia: Tubos: 1º Blanco: 800ul de reactivo 1 2º Estándar: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de solución estándar 3º Control: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul solucion control 4º Muestra: 800ul de reactivo 1 + 200ul de reactivo 2 + 100ul de muestra Una vez agregada la muestra se enciende el cronómetro y se mide la absorvancia cada 1 min.El cálculo de la actividad se realiza de la misma forma que TGO.Resultados: A) Determinación de ALAT ( TGP): Para este examen el paciente no necesita ayuno previo.Nombre los marcadores de enfermedad hepatica o biliar.Es por tanto una técnica enzimática que mide la disminución de Absorvancia a intervalos regulares de tiempo.Referencia : Hombre : 5 – 23 U/L Mujer : 5 – 19 U/L Notas: La reacción por la cual se lleva la obtención de la concentración de ALAT es la siguiente: TGP 2. .-¿En que condiciones se alteran la fosfatasa alcalina y GGTP? 3.. durante 3 min. y se obtiene el promedio de las diferencias de Absorvancia ( A3-A2) y ( A2-A1). Cuestionario 1.Lactato + NAD+ La desaparición de NADH es medida espectrofotometricamente a 340 nm y es directamente proporcional a la actividad de TGP en la muestra.¿Qué es la ictericia? 4..