UNIVERSIDAD SAN PEDROFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE ENFERMERÍA GUÍA DE PRÁCTICAS Y SEMINARIOS BIOQUÍMICA CLÍNICA III-CICLO ( CÓDIGO 09402) SEMESTRE ACADÉMICO: 2014–I AUTOR: Q.F. CISNEROS HILARIO CÉSAR BRAULIO CHIMBOTE-PERÚ 2014 INDICE GUIA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO…….………………..…….… 03 Práctica N° 1: Requerimiento energético y dieta balanceada……..…….. 04 Práctica N° 2: Identificación de Hidratos de carbono……………….....…. 06 Práctica N° 3: Identificación de Lípidos……………………..…………..….. 11 Práctica N° 4: Identificación de Proteínas…………………….………….… 17 Práctica N° 5: Hidratos de carbono en orina………………….................... 21 Práctica N° 6: Demostración de la actividad enzimática..………………… 24 Práctica N° 7: Determinación del punto isoeléctrico de las proteínas…… 37 GUÍA DESEMINARIOS………………………………………………….…… 30 INSTRUCCIONES GENERALES............................................................. 31 SEMINARIO N° 1: Enfermedades nutricionales………………………..….. 32 SEMINARIO N° 2: Bioquímica de la diabetes mellitus……………………. 32 SEMINARIO N° 3: Enfermedades del metabolismo de proteínas………. 32 SEMINARIO N° 4: Enfermedades relacionadas con el metabolismo hidromineral ……………………………………………….32 SEMINARIO N° 5: Enfermedades relacionadas con el metabolismo de vitaminas ………………………………………………… 32 SEMINARIO N° 6: Enfermedades relacionadas con el metabolismo de Hormonas……………………………………….…….. 32 Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 2 GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PRÁCTICA N° 01 Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 3 y entre ellos tenemos a los carbohidratos. debido a que estos varían respecto a la edad.. establecer medidas a tomar para revertir dicho estado. Determinar el índice de masa corporal de cada alumno y asociarlo a las complicaciones de salud que presentaría. lípidos y proteínas. vitaminas y minerales.MARCO TEÓRICO. se llama así aquella mezcla de alimentos que proporciona cantidades y cualidades apropiadas de: Carbohidratos. para mantener al organismo trabajando adecuadamente acorde con el tipo de actividad que realiza la persona.1.COMPETENCIAS. establecer medidas a tomar para revertir dicho estado.REQUERIMIENTO ENERGÉTICO Y DIETA BALANCEADA I. el sexo y modo de vida de las personas. La energía de un individuo depende de algunos factores como: Índice de metabolismo basal: es el estado energético necesario para mantener las funciones fisiológicas básicas bajo condiciones estándares. La ciencia de la nutrición estudia los requerimientos energéticos de una dieta necesaria para conservar la salud. El cuerpo de los mamíferos requiere de mucha energía para poder realizar múltiples actividades. Se sabe que todo requerimiento energético. El efecto termógeno: es la acción dinámica específica de alimento equivale aproximadamente de 5 a 10% del gasto total de energía y se atribuye al gasto energético adicional.. La temperatura ambiental. Todos los componentes de la alimentación requeridos para conservar la vida se conocen. MATERIALES Balanza Tallímetro Calculadora Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 4 .MATERIALES Y MÉTODO 3. Determinar el índice de masa corporal del grupo de práctica o toda el aula y asociarlo a las complicaciones de salud que presentaría. 2. 1. Existe una considerable discusión respecto a los requerimientos energéticos de cada componente de la dieta en particular. va acompañado de una dieta balanceada nutricionalmente. Los nutrientes aportan energía a los seres vivos. II. Determinar los requerimientos energéticos y dieta balanceada para lo cual es necesario: III. La actividad física: es la variable mayor que afecta al gasto de energía. Cuando está baja. lípidos y proteínas. el gasto energético es mayor debido a la acción que posee la grasa. 3. dado que es posible sustentar a seres humanos con dietas químicas definidas.. también son llamados combustibles. e inmediatamente hallar el índice de masa corporal. DISCUSIÓN VI. CONCLUSIÓN VII.3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 5 . Pesar y tallar a todos los alumnos correspondientes al curso de bioquímica Clínica. indicando la mayor y menor frecuencia. RESULTADOS. Sugerir medidas adecuadas que deberán tomar los evaluados para mejorar su calidad de vida.2. CÁLCULOS Y/O ESQUEMAS V. además de relacionándolo con las probables patologías asociadas. Tabla de referencia e implicaciones del índice de masa corporal IV. según la fórmula que se indica a continuación: IMC = Peso (Kg) / (Estatura m) 2 Clasificar los índices según la tabla que se indica a continuación y proceder a tabular sus resultados utilizando el sistema informático EXCEL. MÉTODO. pasa al hígado donde es rápidamente metabolizada a glucosa. Destacan: -Glucosa: Se encuentra en las frutas o en la miel. Sacarosa (glucosa + fructosa): Es el azúcar común. hidrógeno y oxígeno . Polisacáridos: La mayoría de los polisacáridos son el resultado de la unión de unidades de monosacáridos (principalmente glucosa). Después de ser absorbida en el intestino. -Fructosa: Se encuentra en la fruta y la miel. uno de los cuales es la glucosa. claro está. obtenido de la remolacha y del azúcar de caña. existen diferentes tipos de hidratos de carbono que se clasifican en función de la complejidad de su estructura química Monosacáridos: Son los carbohidratos de estructura más simple. se almacena en el hígado y en el músculo en forma de glucógeno.PRÁCTICA N° 02 IDENTIFICACIÓN DE HIDRATOS DE CARBONO I. Son compuestos orgánicos compuestos por carbono. Es el principal producto final del metabolismo de otros carbohidratos más complejos. del país. -Galactosa: No se encuentra libre en la naturaleza. la cultura y el nivel socioeconómico. En condiciones normales es la fuente exclusiva de energía del sistema nervioso. Algunos tienen más de 3. II. COMPETENCIAS: II. Representan el 40-80% del total de la energía ingerida. Disacáridos: Son la unión de dos monosacáridos.Su fórmula química es (CH2O)n.000 unidades. Aunque todos ellos comparten la misma estructura básica.1 Reconocer la presencia de hidratos de carbono en una muestra dada por sus propiedades físicas y químicas. Son menos solubles que los azúcares simples y su digestión es más compleja. Al conjunto de monosacáridos y disacáridos se les llaman azúcares. donde la n indica el número de veces que se repite la relación para formar una molécula de hidrato de carbono más o menos compleja. MARCO TEÓRICO: Los hidratos de carbono son la más importante fuente de energía en el mundo. dependiendo. -Maltosa (glucosa + glucosa): Raramente se encuentra libre en la naturaleza. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 6 . es producida por la hidrólisis de la lactosa o azúcar de la leche. Es el más dulce de los azúcares. -Lactosa (glucosa + galactosa): Es el azúcar de la leche. basta tan solo la presencia de una fibrilla de papel para que de positiva la reacción. al 2° agregue 2 ml de agua destilada más 3 gotas de lactosa y al 3° unos 2 ml de agua destilada más tres gotas de sacarosa. de tal manera que forme una capa de separación con los azucares. Emplee 2 tubos de ensayo de tal manera que en el 1° agregue 2 ml de glucosa. c) REACCION DE TAUBER: E n un tubo de ensayo 1 ml de glucosa Agregue 1 ml de una solución de bencidina acética al 4% calentar hasta ebullición y dejar en reposo para enfriar. pero. Luego que se ha formado un anillo entre las dos capas agitar cuidadosamente la mezcla y agregar agua aproximadamente 5 ml y dejar en reposo 2 minutos . b) REACCION DE MOLISCH: Esta reacción es de una sensibilidad extraordinaria.Anota los resultados de cada tubo. de manera que el ácido quede formando una capa con la mezcla anterior. Muestras de carbohidratos. dejar en reposo y anotar los colores. esta solución debe ser recientemente preparada) Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 7 . MATERIAL Y MÉTODO: 3. 3. 2 ml de (ácido sulfúrico) concentrado. (La solución de bencidina se separa mezclando 4 g de bencidina en 100 ml de ácido acético glacial.III. MATERIAL Tubos de ensayo Ácido sulfúrico. Baño maría. Solución yodo.1. Debe tenerse en cuenta que muchas otras sustancias también dan reacción positiva la reacción de Molisch. A cada tubo agregue 2 gotas de una solución de alfa-naftol alcohólica al 20% y sobre la mezcla de cada tubo añada 2 ml de ácido sulfúrico concentrado. Emplee 3 tubos de ensayo de manera que en 1° agregue 2ml de agua destilada más tres gotas de glucosa .2 PROCEDIMIENTOS: a) REACCION GENERAL DE LOS GLUCIDOS Y GLUCOSIDOS: En esta experiencia se apreciara solamente una reacción de coloración que experimentan los glúcidos y glucósidos frente al ácido sulfúrico en frio. al 2° agregue unos 2 ml de sacarosa A cada uno de los tubos agregue por las paredes de los mismos. no dan el color violeta que es característica en los carbohidratos. d) DETERMINACION DEL PODER REDUCTOR DE LOS AZUCARES: A: ALDOSA QUE PRESENTA FORMACION DEL ESPEJO DE PLATA Agregar en un tubo de ensayo 1 ml de una solución de aldosa(Glucosa) Agregar unas 5 gotas de Nitrato de plata amoniacal. 90-96 °C) B: REACCION DE FEHLING Emplee 4 tubos de ensayo . y 1ml de la solución de Fehling “B” ( Alcalina . se obtiene al disolver 173 g de Tartrato de sodio y potasio . mida 2 ml de una solución de almidón Agregue 2 gotas de una solución diluida de Lugol. cúprica. y llevarlos a baño maria por 3 a 5 minutos ( Hasta aprox. Anote los resultados de cada tubo e) DIFERENCIACIONDE POLISACARIDOS : REACCION CON YODO: En un tubo de ensayo . en l 2° 1 ml de sacarosa. Resultados: La reacción se torna azul violeta Diluir con agua destilada hasta el doble de su volumen Observaciones: La reacción se torna azul violeta. 50 g de OH en 500 ml de agua destilada) . Mediante ecuaciones químicas explique la reducción del reactivo de Fehling frente a los carbohidratos 2. se obtiene al disolver 35g de sulfato de cobre en 500 ml de agua destilada). después es llevado a baño maría por 3 minutos aprox. Completar y responder en forma precisa según corresponda: a) El almidón está formado por los compuestos b) La sacarosa está compuesta por c) El hombre no metaboliza la celulosa porque: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 8 . Colocar en baño maría unos 3 a 5 minutos . CUESTIONARIO: 1. en el 1° mida 1 ml de glucosa .( Hasta aprox. incolora. Al sacarlo la solución se tornó transparente y a medida que se iba enfriando iba regresando a su color inicial poco a poco (azul violeta) IV. en el 3° 1 ml de levulosa y en el 4° 1 ml de lactosa A cada uno de los tubos agregue 1 ml de solución de Fehling “A” (Azul . 96-98 ° C) . el glucógeno y la celulosa? l) ¿Por qué se considera al almidón como fuente de energía para el hombre? m) ¿Qué son las isomaltosa y la maltosa? n) Mencione y describa brevemente los monosacáridos simples de interés biológico o) Mencione y describa brevemente cuatro disacáridos de importancia biológica p) Mencione y describa brevemente cuatro polisacáridos de importancia Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 9 .d) ¿Cuál es la diferencia química entre la galactosa y fructuosa? e) ¿Cuáles son los azúcares pentanoaldosas? f) ¿Cuál es la diferencia entre la maltosa y la celobiosa g) La estructura química de la lactosa es: h) ¿Cuáles son los carbohidratos más importantes que consume el hombre? i) Los disacáridos están formados por: j) Los disacáridos más consumidos por el hombre son: k) ¿Cuál es la diferencia química entre el almidón. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 10 . CONCLUSIÓN VIII. compuestas principalmente por carbono e hidrógeno y en menor medida oxígeno. MARCO TEÓRICO Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas.V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS PRÁCTICA N° 03 IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS I. el alcohol. que tienen como característica principal el ser hidrofóbicas o insolubles en agua y sí en solventes orgánicos como la bencina. aunque también pueden contener fósforo. DISCUSIÓN VII. azufre y nitrógeno. RESULTADOS VI. la mayoría biomolecular. hidrógeno y oxígeno. Son los lípidos que además de contener en su molécula carbono. Clasificación bioquímica Los lípidos son un grupo muy heterogéneo que usualmente se clasifican en dos grupos. Acilglicéridos. Los Lípidos también funcionan para el desarrollo del cerebro. Lípidos que sólo contienen carbono. Fosfolípidos Fosfoglicéridos Fosfoesfingolípidos Glucolípidos Cerebrósidos Gangliósidos Lípidos insaponificables Terpenoides Esteroides Eicosanoides Lípidos saponificables Ácidos grasos Son las unidades básicas de los lípidos saponificables. Cuando son sólidos se les llama grasas y cuando son líquidos a temperatura ambiente se llaman aceites. entre ellas la de reserva energética (triglicéridos). ya que las grasas son sólo un tipo de lípidos procedentes de animales. y consisten en moléculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada con un número par de átomos de carbono (12-24) y un grupo carboxilo terminal. A los lípidos complejos también se les llama lípidos de membrana pues son las principales moléculas que forman las membranas celulares. fósforo. Son ésteres de ácidos grasos con glicerol. también contienen otros elementos como nitrógeno. el metabolismo y el crecimiento. Céridos (ceras). Los lípidos cumplen funciones diversas en los organismos vivientes.el benceno y el cloroformo. La Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 11 . a los lípidos se les llama incorrectamente grasas. azufre u otra biomolécula como un glúcido. Lípidos saponificables Simples. la estructural (fosfolípidos de las bicapas) y la reguladora (esteroides). hidrógeno y oxígeno. Complejos. atendiendo a que posean en su composición ácidos grasos (lípidos saponificables) o no lo posean (lípidos insaponificables). En el uso coloquial. por lo cual es responsable de su insolubilidad en agua. ácido elaídico. puesto que tiene tres grupos hidroxilo. Ya que el ácido graso está formado por un grupo carboxilo y una cadena hidrocarbonada. Por hidrólisis alcalina los ésteres formados anteriormente dan lugar a jabones (sal del ácido graso) Autooxidación. Acilglicéridos Los acilglicéridos o acilgliceroles son ésteres de ácidos grasos con glicerol (glicerina). dando como resultado aldehídos donde existían los dobles enlaces covalentes. ácido araquídico y ácido lignogérico. ácido linoleico. Éstas son fácilmente identificables. Esterificación. Según el número de ácidos grasos que se unan a la molécula de glicerina. Sin dobles enlaces entre átomos de carbono. Punto de fusión: Depende de la longitud de la cadena y de su número de insaturaciones. Se presentan ante nosotros como líquidos. Los ácidos grasos pueden formar ésteres con grupos alcohol de otras moléculas. existen tres tipos de acilgliceroles: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 12 . Saponificación. siendo los ácidos grasos insaturados los que requieren menor energía para fundirse. ácido palmitoleico. que deben ingerirse en la dieta.presencia de dobles enlaces en el ácido graso reduce el punto de fusión. Los denominados ácidos grasos esenciales no pueden ser sintetizados por el organismo humano y son el ácido linoleico. La mejor forma y la más sencilla para poder enriquecer nuestra dieta con estos alimentos. ácido esteárico. es decir. esta última es la que posee la característica hidrófoba. el ácido linolénico y el ácido araquidónico. Con uno o más dobles enlaces entre átomos de carbono. ácido palmítico. Los animales no son capaces de sintetizarlos. es aumentar su ingestión. por ejemplo. pero los necesitan para desarrollar ciertas funciones fisiológicas. Los ácidos grasos se dividen en saturados e insaturados. Este tipo de alimentos disminuyen el colesterol en sangre y también son llamados ácidos grasos esenciales. ácido mirístico. por ejemplo. como aquellos que llamamos aceites. Propiedades fisicoquímicas Carácter antipático. ácido margárico. formados mediante una reacción de condensación llamada esterificación. ácido oleico. Insaturados. ácido linolénico y ácido araquidónico y ácido nervónico. Los ácidos grasos insaturados pueden oxidarse espontáneamente. Saturados. aumentar su proporción respecto los alimentos que consumimos de forma habitual. por lo que deben aportarlos en la dieta. ya que estos dobles enlaces hacen que su punto de fusión sea menor que en el resto. ácido láurico. Los ácidos grasos insaturados se caracterizan por poseer dobles enlaces en su configuración molecular. Una molécula de glicerol puede reaccionar con hasta tres moléculas de ácidos grasos. que son la arquitectura básica de todas las membranas biológicas. serina (fosfatidilserina) y el inositol (fosfatidilinositol). el grupo fosfato posee un alcohol o un aminoalcohol. Diacilglicéridos. La molécula de glicerina se une a dos ácidos grasos. por tanto. Triacilglicéridos. Fosfoglicéridos Los fosfoglicéridos están compuestos por ácido fosfatídico. Sólo existe un ácido graso unido a la molécula de glicerina. Se clasifican en dos grupos. los dos ácidos grasos forman las dos "colas" hidrófobas. Los triglicéridos constituyen la principal reserva energética de los animales. Llamados comúnmente triglicéridos. según posean glicerol o esfingosina. III. en los que constituyen las grasas.1. al que se unen dos ácidos grasos (uno saturado y otro insaturado) y un grupo fosfato. los fosfoglicéridos son moléculas con un fuerte carácter anfipático que les permite formar bicapas. COMPETENCIAS Determinar las propiedades físicas y químicas de los lípidos y su importancia en los organismos vivos. Fosfolípidos Los fosfolípidos se caracterizan por poseer un grupo fosfato que les otorga una marcada polaridad. MATERIAL Y MÉTODO 1. son los más importantes y extendidos de los tres. en los vegetales constituyen los aceites. Monoglicéridos. y el conjunto posee una marcada polaridad y forma lo que se denomina la "cabeza" polar del fosfoglicérido. II. MATERIAL Éter Cerebro De Cerdo NAOH Baño María Molibdato De Amonio KOH Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 13 . una molécula compleja compuesta por glicerol. puesto que la glicerina está unida a tres ácidos grasos. El exceso de lípidos es almacenado en grandes depósitos en el tejido adiposo de los animales. la etanolamina (fosfatidiletanolamina o cefalina). Los principales alcoholes y aminos de los fosfoglicéridos que se encuentran en las membranas biológicas son la colina (para formar la fosfatidilcolina o lecitina). Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 14 . Los resultados obtenidos son: De un olor amarillo transparente se volvió a un color blanco transparente en esta muestra o procedimiento realizado. A la solución anterior agregarle 10 gotas de piridina y llevarlo a Baño María por 3 minutos. Al mismo tubo agregue gota a gota KOH al 20% hasta cambio de color de la solución. concentrado y calentar hasta ebullición. b) RECONOCIMIENTO DE LA COLINA Mida 1 ml de la solución “B” en un tubo de ensayo y añadir 3 ml de Lugol. c) RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL REACCIÓN DE SALKOUSKY Mida 2 ml de aceite cocinero en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml de H2SO4 concentrado por las paredes cuidando formando dos capas.2 MÉTODO Extracción de lípidos: Tener el extracto del cerebro de cerdo Agregar 10 ml de NaOH al 5% y hervirla por 5 minutos Enfriar la solución y agregar gota a gota H 2SO4 al 50% hasta reacción acida Filtrar la solución acida para separar los ácidos y recibir el filtrado en un vaso Separarlo en solución A y B a) RECONOCIMIENTO DEL ÁCIDO ORTOFOSFÓRICO Tomar 1 ml de la solución “A” y colocarlo en un tubo de ensayo y agregarle 5 gotas de HNO3. Lugol H2SO4 Anhídrido Acético 3. Agregue a la solución anterior 8 gotas de molibdato de amonio (NH4)2MoO4 siga calentando la solución y agitar constantemente con un agitador raspando las paredes del tubo Los resultados obtenidos son: La Aparición de un color amarillo patito. Los resultados obtenidos son: La formación de un color amarillo violasio que nos indica la presencia de colesterol en este segundo tubo. La formación de un color amarillo violasio que nos indica la presencia de colesterol en este primer tubo. ¿Cuáles son los lípidos que poseen el grupo colina. Completa o responder brevemente y en forma precisa según corresponda: a. La formación de un color amarillo violasio que nos indica la presencia de colesterol en este primer tubo de ensayo. esta identificando en la práctica? 3. En un tubo de ensayo medir 2 ml de aceite colesterol y agregarle 5 gotas de anhídrido acético y por las paredes del tubo agregarle al tubo 2 ml de H2SO4 concentrado de manera que se forme dos capas. Los resultados obtenidos son: La formación de un color amarillo violasio que nos indica la presencia de colesterol en este segundo tubo de ensayo. ¿Por qué se usa la piridina en el reconocimiento de la colina? 4. REACCIÓN DE LIBERMAN-BUCHARD En un tubo de ensayo medir 2 ml de aceite de oliva y agregarle 5 gotas de anhídrido acético y por las paredes del tubo agregarle al tubo 2 ml de H2SO4 concentrado de manera que se forme dos capas. Mida 2 ml de aceite colesterol en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml de H2SO4 concentrado por las paredes con cuidando formando dos capas. ¿Qué lípidos ha extraído en la maceración etérea? 2. La estructura química del jabón oleato de potasio es: d. La estructura química del monopalmitato de glicerilo es: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 15 . y que Ud. IV. Los ácidos grasos esenciales son: b. ¿Cuál es la función de las lipoproteínas en la sangre? c. CUESTIONARIO 1. todas las proteínas contienen diversas proporciones de estos 20 aminoácidos. DISCUSIÓN VII. CONCLUSIÓN VIII. RESULTADOS VI. que a su vez depende de la cadena lateral (grupo R). Esquematice los fosfolípidos presentes en una membrana celular. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 16 . un grupo amino. Por lo tanto. Los esfingolípidos están formados químicamente por: h. El ácido octadecanoico se conoce como: V. y un hidrógeno unido a un átomo de carbono central conocido como el carbono α. Estructura química del estearato de Sodio. Sólo 20 aminoácidos constituyen las unidades monoméricas a partir de las cuales se sintetizan las cadenas polipeptídicas. Son clasificados en base a su solubilidad en agua. i. MARCO TEÓRICO: Los aminoácidos son los monómeros de las proteínas. f. Recuerde que el medio externo y el citoplasma contienen un gran porcentaje de agua. Las insaturaciones del ácido linoleico son: k. Los lípidos presentes en las células y los tejidos se extraen con solventes porque: g.e. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS PRÁCTICA N° 04 IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS I. Cada aminoácido contiene un grupo carboxilo. Las insaturaciones del ácido linolénico son: j. MÉTODOS Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 17 .2. Cuando se dispersan en un solvente adecuado. No existe proceso biológico alguno que no dependa de la presencia y/o actividad de éstas moléculas. están constituidas por gran número de unidades estructurales que forman largas cadenas. por medición del N de la misma. O y N y casi todas poseen también S. según cual sea el aminoácido limitante. MATERIAL Tubos de ensayo Ácido fosfotungstico Ácido fosfomolibdico HNO3 NaOH Fenol Reactivo de Millón CuSO4 Ninnhidrina Solución alcohólica de timol Acetato de plomo HCl Ácido nítrico Muestras de aminoácidos y proteínas 3.1. El contenido de nitrógeno representa.Los aminoácidos esenciales no pueden ser sintetizados por el hombre. Son los compuestos orgánicos más abundantes. lo cual permite calcular la cantidad de proteína existente en una muestra. Si falta uno solo de ellos no será posible sintetizar ninguna de las proteínas en la que sea requerido dicho aminoácido. el 16 % de la masa total de la molécula. cantidad y especie de proteínas que determina el funcionamiento y la apariencia de la célula 2. en animales superiores representan alrededor del 50% del peso seco de los tejidos. Las proteínas contienen C. Cada tipo celular posee una distribución. COMPETENCIAS: Determinar las propiedades físicas y químicas de los aminoácidos y las proteínas por sus reacciones características. Las proteínas son moléculas poliméricas de enorme tamaño. 3. MATERIAL Y MÉTODO: 3. forman soluciones coloidales. Esto puede dar lugar a diferentes tipos de desnutrición. término medio. Dichos aminoácidos deben ser necesariamente suministrados con las proteínas de los alimentos. H. es una reacción de coloración general. ACCION DE LOS REACTIVOS ALCALOIDES: Emplee 3 tubos de ensayo y mida a cada uno de ellos 2 ml de una solución de proteína (albumina de huevo) Agregue 15 gotas de: Acido pícrico al 1º tubo. Mezclar bien A la mezcla anterior agregar una solución de CuSO4 al 1% gota a gota hasta la aparición de un color característico des esta reacción ( violeta. Enfriar la mezcla y agregar NaOH al 25% unas gotas Observe los resultados: III. acido fosfotungstico al 2º. Caracterización de tripéptidos en adelante En un tubo de ensayo mida 2ml de una solución de proteína y agregue 2 ml de NaOH al 10%. Empleando tres tubos de ensayo mida exactamente en cada uno de ellos 2ml de una solución de proteínas Al primer tubo agregue 15 gotas de HCl concentrado . REACCION XANTOPROTEICA (HELLER) Emplee un tubo de ensayo y mida 2 ml de una solución de proteína y sobre esta solución agregue 15 gotas de HNO 3 concentrado y lleve a baño maría por 3 minutos. Observe los resultados de la experiencia: II. REACCION DE MILLON: (HNO3 en Hg metálico) Esta reacción se debe a la presencia del grupo fenol presente en los restos de tirosina en la molecular proteica. rosado o purpura) Anote resultados: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 18 . es decir. al 2º 15 gotas de HNO3 Observe los resultados en los tubos: I. Anote los resultados de esta experiencia IV. y ácido fosfomolibdico al 3º tubo. La solución de fenol con el reactivo puede dar positiva aun sin calentarla. REACCION DE BIURET: Esta reacción la desarrolla cualquier tipo de proteína. las proteínas que carecen de ella no dan positiva la reacción Emplee 2 tubos de ensayo y mida en cada uno de ellos 2 ml de una solución de proteína en el 1º y una solución de fenol en el 2º A cada uno de los tubos agregue 10 gotas del reactivo de millón y llevar a baño maría por 3 minutos. es decir. Quisiera reconocer la presencia de cisteína o de la fenilalanina en la albumina de huevo ¿cómo haría? Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 19 . REACCION DE LOS TIOGRUPOS Esta reacción es positiva para aquellas proteínas que contienen en su estructura aminoácidos azufrados En un tubo de ensayo medir 2 ml de una solución de proteína agregar 2 ml de NaOH al 40% y 1 ml de acetato de plomo. Anotar resultados VII. ¿cuál es la semejanza y diferencia entre una estructura primaria y secundaria en una proteína? 3. para todos los compuestos que contengan por lo menos un grupo amino y carboxilo libres. Calentarlo suavemente hasta la ebullición. Anotar resultados: 4.V. VI. si Ud. REACCION DE KOLISCK FOULGER Esta reacción lo dan positivo las proteínas que contenga en su estructura un carbohidrato . ¿Por qué se produce la precipitación de las proteínas frente a los ácidos fuertes? 2. En un tubo de ensayo medir 2ml de una solución de proteína y agregar 10 gotas Llevar la mezcla anterior a baño maría por 5 minutos Anotar los resultados. REACCION DE NINHIDRINA Esta reacción es general para todo tipo de proteína. es decir. por las paredes del tubo agregar sobre la mezcla 2ml de H2SO4 concentrado de manera que se forme un anillo en las dos fases. exista en la proteína una función glucosídica En un tubo de ensayo mida 2 ml de una solución de proteína y agregar 10 gotas de una solución alcohólica de timol. CUESTIONARIO: 1. ¿Cuál es la importancia de la metionina y de la cisteína en el organismo? V.4. La importancia biológica de los aminoácidos. Los carbohidratos pueden ser diferentes en cuanto a su peso molecular. tiene pocos carbohidratos. los carbohidratos son el grupo mayoritario después del agua. y los que más tienen son los vegetales amiláceos que son los que tienen una gran cantidad de concentración de almidón. diga Ud. En este grupo de alimentos. Pueden suponer entre un 2-20% de la composición total de los vegetales. Enumere los aminoácidos esenciales y ¿por qué se denominan así? 8. la fructosa o la sacarosa. DISCUSIÓN VII. MARCOTEÓRICO Los carbohidratos están presentes fundamentalmente en los vegetales (frutas y hortalizas). RESULTADOS VI. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 20 . Explique la acción del calor sobre la albumina ¿A qué nivel de la proteína actúa el calor? 5. ¿Por qué es importante la histidina para el niño y cuál es su función química en el organismo humano? 6. El pepino. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS PRÁCTICA N° 05 HIDRATOS DE CARBONO EN ORINA I. La importancia que tienen es por el sabor dulce que confiere a los alimentos lo que les hace mucho más atractivos. 7. los hay simples y complejos. Los azúcares simples más importantes son la glucosa. CONCLUSIÓN VIII. por ejemplo. A) • • • • MUESTRA: Tiras reactivas. MATERIALES Y METODOS: III.1.8 mmol / L (0 . Valores normales de azúcar en la sangre Los valores normales son entre 70 y 110 mg/dL. antihipertensivos. COMPETENCIAS: Reconocer la presencia de hidratos de carbono en orina normal y orina patológica (Paciente Diabético). En los niños pequeños se aceptan valores de 40 a 100 mg/dL. oligosacáridos (2-20 monosacáridos unidos) y polisacáridos (más de 20 monosacáridos unidos). Los valores más bajos de 40-50 mg/dL se consideran bajos (hipoglucemia). B) • • • • • • • MATERIAL DE LABORATORIO: Mecheros Tubos de ensayo Gradillas Pinza de madera Vasos de precipitación Pipetas Frascos goteros C) REACTIVOS: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 21 . cardiaco. Glucosa AL 5% Orina Normal Orina Patológica (Paciente diabético).Otro azúcar importante pero este ya complejo es el almidón. La mayor parte de los azúcares que se obtienen en nuestra dieta provienen de los añadidos a los productos elaborados que tienen más que los naturales. Los carbohidratos se clasifican en: monosacáridos. Medicamentos (antidepresivos. El alcohol y analgésicos pueden disminuirla. Rango normal de glucosa en la orina: 0 . III. 5. Embarazo 4. Es la forma en la que el tejido vegetal reserva energía. anestesia general) 2. Los tratamientos con sueros en vena. La lactosa es el más importante de origen animal.0. Los valores mayores a 140 mg/dL se consideran (hiperglucemia). Pueden modificar los valores de glucemia y no ser por una diabetes ciertas situaciones: 1. Estrés por enfermedades agudas (infarto cerebral. El ser humano lo digiere y a veces lo almacena para energía. MATERIALES. II. hormonas femeninas.15 mg / dL). La sacarosa que se obtienen de la caña de azúcar o de la remolacha es la que más se utiliza. etc). ya que contienen dextrosa (azúcar) 3. Luego añadir III gotas de azul de metileno y agitar y calentar a ebullición durante un minuto. B) IDENTIFICACIÓN DE MONOSACÁRIDOS – REACCIÓN DEL AZUL DE METILENO: Colocar 1mL de orina en un tubo de ensayo. Nota: Si se reduce el cobre se forma un precipitado de CuSO 4 de color rojizo. que precipita.• • • • • • Azul de metileno Amoniaco al 30% Nitrato de plata amoniacal Ag(NH3)2NO3 NaOH 10% Lugol Reactivos de fehling A y fehling B 3. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojizo y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. (Fehling A (CuSO4) 1 mL -Fehling B (Tartrato/NaOH) 1 mL). Nota: Si el ensayo es positivo la plata metálica. Añadir III gotas de solución de Lugol. Mezclar bien y se calentar con agitación durante 2 minutos. D) DETERMINACIÓN DE POLISACÁRIDOS: Colocar en un tubo de ensayo 3 mL de muestra de orina. Añadir 1 mL de muestra de orina. se va depositando en la pared del tubo formando un espejo (espejo de plata). Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 22 . Agregar 1mL de NaOH al 5%. Nota: La reacción será positiva si la muestra después de calentarla pierde su color y luego regresa a una tonalidad azul. será negativa si después de calentarla retorna al color normal de la orina. PROCEDIMIENTOS: Confirmar mediante tiras reactivas la presencia de glucosa en las muestras de orina normal y orina patológica. C) PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA: Añadir en un tubo de ensayo 1mL de Nitrato de plata amoniacal Ag(NH3)2NO3 Luego agregar la muestra de orina 1mL. Agitar y calentar a ebullición durante un minuto.2. Sacar y dejar reposar. si el ensayo es negativo no se forma ningún precipitado(espejo de plata) en la pared del tubo. luego deberemos trabajar cada muestra. todas las reacciones químicas siguientes: A) DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES: Mezclar en un tubo de ensayo Fehling A y Fehling B. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS PRÁCTICA N° 06 DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA I. Observar y anotar los resultados. ¿Cuáles son los valores normales de glucosa en sangre? 3. Nota: Es positivo para polisacáridos dando lugar a la aparición de una coloración azul violáceo. IV. tipo II y la gestacional? 6. CUESTIONARIO: 1. ¿Cuáles son los valores normales de glucosa en orina? 2. ¿Cuáles son los síntomas que presenta un paciente con diabetes mellitus? IX. Establezca a diferencia entre la diabetes tipo I.. DISCUSIÓN XI. CONCLUSIÓN XII. esto permite que las reacciones químicas celulares se desarrollen a mayor velocidad. RESULTADOS X. mediante vías metabólicas bien definidas. las cuales son proteínas especializadas para la vida. sin cuales los seres vivos no podrían existir. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 23 . Las enzimas son catalizadores complejo de origen biológico que tienen grado de especificidad y eficiencia. ¿qué patologías están asociadas al incremento de glucosa en el Organismo? 4.MARCO TEÓRICO. es negativo si mantiene el color ligeramente más amarillento que la muestra de orina. Establezca la diferencia entre la diabetes mellitus y la insípida? 5. 1. Es aconsejable no someterlas a temperaturas que sobrepase lo corporal. concentración de enzimas. Posterior a un tiempo de incubación del complejo enzima-sustrato en condiciones específicas de pH y temperatura. III.. 2.1 M ATERIALES: Vaso de Precipitación Bagueta Gradilla. Los tratamientos comparativos violentos (ácidos fuertes. etc. la primera consideración debe ser siempre evitar la desnaturalización e inactivación.MATERIALES Y REACTIVOS: 3.) frecuentemente empleada en química orgánica. concentración de iones inorgánicos y concentración de coenzimas. Tubos de ensayo. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 24 . Determinar la afinidad y especificidad de la amilasa salival. concentración de sustrato. II.COMPETENCIAS. altas temperaturas. Estas condiciones varían para las diferentes enzimas. pero en general deben evitarse altas temperaturas. En el manejo de las enzimas. soluciones ácidas y alcalinas fuertes.Las sustancias son sustancias relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización bajo condiciones apropiadas. está en que el uso debe hacerlo en condiciones en las que ellas son estables. o determinado el producto formado. La actividad de las enzimas es evaluada controlando el sustrato no transformado (sustrato-residual).. El éxito en el manejo de las enzimas. son rápidamente fatales para las enzimas. Evaluar los factores que alteran la función enzimática. Agua destilada. Pinza para tubos. Mechero.1.2. Pipetas de 1mL. b) Coloque en un segundo tubo 2 mL de solución de lactosa y coloque III gotas de la solución de almidón. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 25 .2. EVALUACIÓN DE LOS PARÁMETROS QUE ALTERAL LA FUNCIÓN ENZIMÁTICA a) Coloque en 5 tubos de ensayo 2 mL almidón luego III gotas de solución de yodo.2. Alcohol. Frascos goteros. 3 mL y 5 mL. MÉTODO: 3. 3.2. Enzima: amilasa salival 10%. anote la coloración obtenida. 3. Solución de Almidón 5%. observe y anote la coloración formada. EVALUACIÓN DE LA REACCIÓN DEL YODO FRENTE AL ALMIDÓN a) Colocar en un primer tubo de ensayo 2mL de solución de almidón y coloque III gotas de la solución de almidón. Solución de yodo. Solución de lactosa 5%. Cronómetro. anote la coloración obtenida. d) Al tercer tubo se le agregará. c) Al segundo tubo se le agregará. 1 mL de amilasa salival que ha sido previamente calentada a temperaturas de 50°C y anote las observaciones al inicio y después de 5 minutos.b) El primer tubo servirá de control y sólo se le agregará 1 mL de amilasa salival. 1 mL de amilasa salival que ha sido previamente refrigerada. RESULTADOS: EVALUACIÓN DE LA REACCIÓN DEL YODO FRENTE AL ALMIDÓN °N tubo Tubo 1 Tubo 2 Almidón 5% 2 mL 2 mL sol yodo III gotas III gotas Coloración 0 min Coloración 5 min EVALUACIÓN DE LOS PARÁMETROS QUE ALTERAL LA FUNCIÓN ENZIMÁTICA °N tubo Tubo 1 Almidón 5% 2 mL sol yodo III gotas Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Amilasa 10% 1 mL Coloración 0 min Coloración 5 min Página 26 . e) Al cuarto tubo se le agregará. 1 mL de amilasa salival que ha sido previamente tratada con hidróxido de sodio al 5% y anote las observaciones al inicio y después de 5 minutos. f) Al quinto tubo se le agregará. anote las observaciones al inicio y después de 5 minutos. IV. anote las observaciones al inicio y después de 5 minutos. 1 mL de amilasa salival que ha sido previamente tratada con ácido clorhídrico al 5% y anote las observaciones al inicio y después de 5 minutos. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: PRÁCTICA N° 07 DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LAS PROTEÍNAS I. DISCUSIÓN: V. MARCO TEÓRICO Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 27 .Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL III gotas III gotas III gotas III gotas 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL V. CONCLUSIÓN: VI. con liberación de una molécula de agua. a 4 residuos de el dándose así una formación de un hélice. cuando la carga neta es cero (neutro) se conoce como punto isoeléctrico. III. no polares. Las estructuras terciaria y cuaternaria se refieren a la conformación tridimensional completa de un polipéptido. son característicos de cada proteína. puente de hidrógeno). MATERIAL DE LABORATORIO: • Mecheros • Tubos de ensayo • Gradillas • Pinza de madera • Vasos de precipitación • Pipetas • Frascos goteros REACTIVOS: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 28 .Las proteínas con compuestos orgánicos esenciales y constitutivos de todo ser vivo. se forma a través de los enlaces covalentes pepiticos. además de cumplir una función estructural presenta actividad biológica participando en diferentes actividades metabólicas celulares. pero también se forma la lámina beta que es la segunda estructura secundaria mediante plegamiento o siguiendo un patrón zig-zag. II. COMPETENCIAS: Determinar el punto isoeléctrico de la proteína de la leche (caseína) y comprender el significado y aplicación de la obtención del punto isoeléctrico de una proteína. la estructura secundaria se forma gracias a los puentes de hidrógeno formados entre el oxígeno del grupo carboxilo del enlace pepitico de un residuo de un aminoácido localizado. que es la más simple y la que es asimilable por las células en el proceso de la digestión. el orden y la secuencia como en número de aminoácidos que se repite. Es necesario recalcar que las proteínas tienen una organización estructural molecular: la estructura primaria. sin embargo todas las proteínas son una secuencia de 20 aminoácidos diferentes. Los residuos o grupos laterales de los aminoácidos van ha ser responsables de la carga neta de las proteínas.MATERIALES Y METODOS: MUESTRA: • Leche evaporada (caseína). Cada especie animal y vegetal posee miles de proteínas diferentes. propiedad que permite separar las proteínas de una mezcla. disulfuro. mediante el ensamble del dominio y sus relaciones con el espacio. que se enlazan por uniones pepiticas. denominados enzimas. estos se forman por diferentes enlaces (electrostáticos. DISCUSIÓN: VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 29 . CONCLUSIÓN: VII. luego de someter a baño maría u soluciones buffer.8 Buffer Acetato pH=10 Tubo I 5 mL Tubo I 5 mL 5 mL Mezclar y observar el grado de precipitación en cada tubo usando cruces (+) de acuerdo a la intensidad. d) Agregar IV gotas de fenolftaleína a cada tubo y alcalinizar con solución de NaOH 10%. b) Sustancias Tubo I leche 5 mL Buffer Acetato pH=2.0 5 mL Buffer Acetato pH=4. RESULTADOS: V.8 Buffer Acetato pH= 10 PROCEDIMIENTOS: a) Implementar el siguiente sistema.0 Buffer Acetato pH= 4. c) Valorar el pH de cada tubo.• • • • • • Fenolftaleína NaOH 10% Alcohol Buffer Acetato pH= 2. 5 mL ¿Cómo fue la evolución de la polaridad de la caseína durante el proceso o experimentación? IV. El seminario se basa en la asignación de temas de exposición para grupos formados por cuatro estudiante según rol previamente establecido Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 30 .GUÍA DE SEMINARIOS GUÍA DE SEMINARIOS INSTRUCCIONES GENERALES Los Seminarios de bioquímica Clínica son actividades dirigidas a la ampliación y reforzamiento de algunos temas considerados especialmente importantes en la práctica médica. SEMINARIO N° 2 Bioquímica de la diabetes mellitus. Es importante que todos los alumnos revisen los temas de seminario previamente. Por eso se recomienda que el alumno se prepare adecuadamente con material gráfico y esquemas con el fin de optimizar su exposición. el cual deberá ser revisado inmediatamente por Profesor. los alumnos del grupo responsable de un tema. deberán presentar Su información en formato digital (CD) e impreso. Power point. haciendo énfasis en los aspectos más importantes del tema. entre ellas las reseñadas en el Syllabus. Informe. SEMINARIO N° 1 Enfermedades Relacionadas con problemas nutricionales. permitiendo que en el tiempo restante el profesor y sus compañeros hagan preguntas y aportes aclaratorios. Recuerde que se tomará una prueba de entrada que evaluará el nivel de preparación que el alumno ha realizado por esta actividad lectiva. Cada exposición tendrá un tiempo de duración de 30 minutos. Realice la correspondiente búsqueda y ampliación del tema. Es fundamental que el estudiante muestre capacidad de síntesis y juicio crítico. Las sumillas que se presentan delinean los temas a ser expuestos por los estudiantes en cada seminario.por sorteo. La bibliografía que se presenta es referencial. al inicio de cada seminario se solicitará que el alumno entregue el Cuestionario desarrollado presentado en la Guía. Asimismo. Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 31 . En tal sentido. Con seguridad están disponibles otras referencias de muy buena calidad. SEMINARIO N° 5 Enfermedades relacionadas con el metabolismo de vitaminas SEMINARIO N° 6 Enfermedades relacionadas con el metabolismo de Hormonas Guía de Prácticas de Bioquímica Clínica Página 32 .SEMINARIO N° 3 Enfermedades relacionadas con el metabolismo de proteínas. SEMINARIO N° 4 Enfermedades relacionadas con el metabolismo hidromineral.