GLICÓSIDO..

1UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÍMICA CURSO DE FITOQUÍMICA GLICÓSIDOS DEFINICION: Son compuestos que al ser hidrolizados dan origen a una porción que es azúcar y otra que no lo es (aglicona o genina). ESTRUCTURA: El enlace glicosídico se forma por la deshidratación del azúcar y de la aglicona. Un grupo hidroxilo de la aglicona se condensa con el hidroxilo del hemiacetal del azúcar, formándose así un acetal interno. Si el grupo OR de la aglicona se encuentra en el mismo sentido estérico que el grupo CH2OH del carbono 5, la configuración se designa beta; si está en sentido estérico opuesto, se designa alfa. Ejemplo: CH3 Alfa-metil glucósido En la naturaleza se encuentran solo las formas beta. CARACTERISTICAS DE LOS GLICOSIDOS: - Son en general muy ligeramente solubles en agua, y un poco más solubles en etanol, metanol, o mezclas de ellos en agua. - En las plantas, los glicósidos a menudo están acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos, las cuales se localizan en el mismo tejido, aunque en células diferentes. - Los glicósidos son ópticamente activos, por lo que sus rotaciones específicas contribuyen a su caracterización física. FUNCION FISIOLOGICA: Se cree que los glicósidos intervienen en los fenómenos de óxidoreducción, así como en el crecimiento y fecundación de las plantas. Se cree además que los glicósidos flavonoides protegen de la luz y rayos 2 ultravioleta. mediante hidrólisis enzimática durante la maduración de los frutos. azul o negro que producen cuando se les agrega una solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico. 1. GLICOSIDOS FENOLICOS: Son en general compuestos relativamente polares. Glicósidos fenólicos 2. Orchidaceae). los glicósidos se clasifican así: 1. pudiendo ser detectados por el intenso color verde.2 Glucovainillina: Se encuentra presente en especies del género Vanilla (Fam. y que debido a sus propiedades fungicidas también protegen a la corteza de los árboles contra el ataque de parásitos.1. la cual. Se extrae de varias especies de los géneros Salix y Populus (Fam. Saponinas: esteroidales y triterpénicas 4. con actividad semejante a la del ácido salicílico. púrpura. Debido a su naturaleza aromática muestran intensa absorción en la región ultravioleta del espectro. CLASIFICACION: En base a la estructura molecular de las agliconas. con cierta solubilidad en agua. lo cual permite identificarlos y cuantificarlos.1 Salicina: Al ser hidrolizada produce saligenina y glucosa. Salicaceae). genera vainillina . Glicósidos cardiotónicos 1.1. La salicina tiene propiedades antirreumáticas.1 DERIVADOS DEL ACIDO BENZOICO Y SALICILICO: 1. Salicina 1. Glicósidos cianogénicos 3. principalmente en las familias Umbeliferaceae y Rutaceae. pero son más abundantes en los frutos. esteroides y terpenoides. La vainillina es bastante aromática. Dicho compuesto fue aislado por primera vez en 1820 por Vogel de la Coumarona odorata (“árbol de la tonka”). ligninas. por lo que se usa como agente sazonante y aromatizante en las industrias farmacéuticas y de alimentos. las aflatoxinas como hepatotóxicos y carcinogénicos. Cumarina: (Configuración C6C3 ) El nombre cumarina fue asignado originalmente a la estructura anotada arriba: benzo-alfa-pirona.3 y glucosa. Las cumarinas han cobrado gran interés en años recientes debido al amplio rango de actividad biológica que han mostrado. Pueden encontrarse en todas las partes de la planta. Ejemplo: el dicumarol como anticoagulante y antibacterial.2 CUMARINAS: Son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas. CHO CHO Glucosa-O OCH3 HOOCH3 Vainillina Glucovainillina 1.3 QUINONAS: . Hasta hoy se conocen aproximadamente 800 cumarinas. los progresos hechos en este campo fueron escasos hasta hace aproximadamente treinta y cinco años. de las cuales sólo 35 carecen de oxígeno en posición 7. Las cumarinas están biogenéticamente relacionadas con los flavonoides. A pesar de haberse conocido desde esa época. algunas se usan como saborizantes y en perfumería. la novobiocina como antibiótico. 1. azul o violeta. Antraquinona: 1. Se encuentran ampliamente distribuidos en las .4 Son dicetonas insaturadas. rojo o marrón (castaño). un glicósido antraquinónico. Hasta hoy se conocen aproximadamente 900 flavonoides naturales.4 FLAVONOIDES Se les llama también antoxantinas. El colorante presente en la cochinilla (insecto nativo de Centro América) es el ácido carmínico. Se encuentran principalmente en las familias de las Leguminosas. aislados también de hongos. de color amarillo o blanco. Ramnaceas. que por reducción se convierten en polifenoles. Pueden ser de color amarillo. 1.3. Los derivados antraquinónicos se encuentran en las plantas con acción purgante. pero si forman sales de hidroquinonas toman color verde. ejemplo: la muscarufina.3. presente en Amanita muscaria.1 Benzoquinonas: Las benzoquinonas se han encontrado con frecuencia en los hongos. como por ejemplo en la frángula. Algunas tienen propiedades antibióticas. líquenes. Son pigmentos de plantas superiores. hojas de sen y la cáscara sagrada. Ericaceas y Liliaceas. Son pigmentos vegetales. Rubiaceas. los que fácilmente las regeneran por oxidación. Poligonaceas. ruibargo. Benzoquinona 1.2 Antraquinonas: Son las quinonas más extensamente distribuidas en las plantas. animales marinos y ciertos insectos. que poseen un esqueleto carbonado de 15 átomos (C6C3C6). 1 Flavonas y Flavonoles: Las flavonas son abundantes en familias herbáceas. Es frecuente encontrar diferentes azúcares enlazados a una misma aglicona. hongos o bacterias. EJEMPLOS DE FLAVONOIDES: 1. FUNCION FISIOLOGICA EN LAS PLANTAS: Los flavonoides son estructuras ricas en grupos hidroxilo. coleréticos (que estimulan la secreción biliar). Fam. mientras que los flavonoles abundan en las angiospermas leñosas. No se encuentran en algas. La rotenona se usa como insecticida. como estrogénicos. ya sea en forma libre o como glicósidos. con lo cual ayudan a la polinización. . diuréticos. . como espasmolíticos. Los glicósidos de dihidrochalconas como edulcorantes.Los flavonoides se utilizan como colorantes de lanas. lo que hace aún mayor el número de glicósidos conocidos. dilatadores de las coronarias (Crataegus y Arnica).4. tales como las Compuestas. por lo que se unen fácilmente a las proteínas. También hay flavonoides amargos. y en diferentes posiciones. Umbelliferaceae. USOS: . convirtiéndose en potentes inhibidores de algunos sistemas enzimáticos. Ejemplo de flavonas: apigenina (género Apium). Dan color amarillo a flores y frutos. Núcleo básico de un flavonoide: FLAVONA Tiene dos anillos aromáticos (A y B). que en caso de existir se denomina C. antimicrobianos y fungicidas. que pueden proporcionar la manera de repeler los gusanos que se alimentan de las hojas. lo que atrae a mariposas y abejas. las polihidroxiflavonas se usan para conservar grasa o jugos de frutas (son antioxidantes). unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo.En medicina: contra la fragilidad capilar (ejemplo la rutina).5 plantas. antihepatotóxicos. A un valor de pH mayor (cerca o mayor de 7) aparece un color azul verdoso. A pH bajo. presentes en el género Quercus. Se ha observado que las . peonidina. familia Fagaceae. Son pigmentos rojos y azules. que son amarillas o blancas. Ejemplo: la betanina es el principal pigmento de la remolacha. Ejemplo de las más comunes en la naturaleza: pelargonidina. a diferencia de las antoxantinas. con la formación de una pseudobase. relacionados con las antocianinas. debido al posible rompimiento de uno de sus anillos aromáticos. cianidina. Los flavonoles son las 3-hidroxi-flavonas. quenferol y miricetina. Antiguamente se les consideraba como flavonoides. que quiere decir azul. Leucoantocianinas o Proantocianidinas: se llaman así las sustancias capaces de convertirse en antocianidinas mediante calentamiento con un ácido mineral. Su estructura química es SIMILAR a la de los flavonoides: Antocianidinas: se llama así a las agliconas presentes en las antocianinas. de manera irreversible. Al incrementarse el pH el color desaparece.6 Ejemplo de flavonoides: quercetina. familia Chenopodiaceae. delfinidina. pero luego se encontró que contienen nitrógeno y su estructura básica es distinta.2 Antocianinas: El nombre antocianina proviene del griego anthos. las antocianinas en solución se presentan de color rojo.5 BETACIANINAS: Son pigmentos rojos aislados de la remolacha.4. y kyanos. 1. Beta vulgaris. que significa flor. A pH muy alto se rompe la estructura de la antocianina. Apigenina: flavona 1. y no se encuentran de manera conjunta en las mismas familias vegetales. presente en la familia Rosaceae.o di-sacárido. en las semillas de albaricoque (Prunus malus). ciruelas. La porción azucarada puede ser mono. Si es un disacárido.7 betacianinas y las antocianinas se excluyen mutuamente. La linamarina es una toxina extraída de la yuca común: Manihot utilissima y Manihot esculenta (Fam. Euphorbiaceae). y otras especies del género Prunus: duraznos. GLICOSIDOS CIANOGENICOS: Muchas plantas contienen glicósidos que al hidrolizarse generan ácido cianhídrico. 2. Amigdalina Muchos de estos glicósidos son derivados del nitrilo del ácido mandélico. variedad Amara). incluyendo las semillas de las almendras amargas (Prunus amigdalus. ya que poseen un grupo nitrilo unido a la aglicona. Ejemplo: la amigdalina. enzimas como la emulsina pueden hidrolizarlo así: amigdalasa Amigdalina + agua mandelonitrilo + 2 glucosas Prunasa Benzaldehído + HCN (gas) . cerezas. de aceites crudos vegetales. Luego se encontró que las sapogeninas esteroidales podían constituir una fácil más fácil. las saponinas pueden ser: esteroidales y triterpenoides. Causan hemólisis a bajas concentraciones. SAPONINAS: Son poderosos agentes tensioactivos que forman espuma al ser agitados con agua.Sarmentogenina. mientras que las saponinas ácidas proceden de los triterpenoides: Acetato C RNúcleo D esteroidal A B Mevalonato O E C D A O B .Sarsapogenina y smilagenina. Ambos tipos de saponinas son solubles en agua y etanol e insolubles en éter. Esta sustancia fue aislada originalmente de la corteza adrenal y luego sintetizada a partir de los ácidos biliares del ganado.8 3. Se ha encontrado que los esteroides aislados de plantas más importantes en la producción de cortisona son: . .Diosgenina y botogenina. En base a la estructura química de la aglicona. . Son tóxicas para los peces. por lo que muchas veces se prefiere hidrolizar el extracto crudo de la planta y aislar la sapogenina libre del azúcar. Durante muchos años se ha brindado especial importancia al estudio de plantas que contienen saponinas con el objeto de descubrir precursores de la cortisona. hormonas sexuales y anticonceptivos. . del género Dioscorea. del género Smilax. Mediante hidrólisis enzimática de las saponinas se obtienen sus agliconas: las sapogeninas. Biosíntesis de Saponinas: Las llamadas saponinas neutras derivan de los esteroides. Las saponinas no son fáciles de aislar.Sitosterol. del género Strophantus. También puede sintetizarse a partir de las saponinas esteroidales: vitamina D. por lo que algunas plantas que las contienen se utilizan para pescar. Liliaceae y Escrofularaceae. Se caracterizan porque presentan grupos hidroxilo en el carbono 3 y 14. debido a su abundancia en este tipo de plantas. Entre las plantas que contienen saponinas triterpenoides se encuentran: la corteza de Quillaja saponaria (árbol de 18 m. Purpurea). Tienen un anillo lactónico no saturado en el carbono 17. e incluye la condensación de subunidades de acetato. Ejemplo: . Perú y Bolivia). sarsapogenina (raíz de sarsaparrilla). y los bufanólidos o bufadienólidos. que origina esteroides en una dirección. de altura. procedente de Chile.9 Escualeno Núcleo triterpenoide pentacíclico El proceso principal de biosíntesis que da lugar a las sapogeninas es similar. Estos últimos se han llamado así debido a que están contenidos en el veneno del sapo común (género Bufus). y triterpenoides pentacíclicos en la otra. raíz de regaliz. que incluyen anillos lactónicos de 5 miembros y un esqueleto de 23 átomos de carbono. aunque también se hallan en especies vegetales. con anillo lactónico de 6 miembros y un esqueleto de 24 átomos de carbono. semillas de soya y el ginseng. el cual puede ser pentagonal o hexagonal. GLICOSIDOS CARDIOTONICOS: Se han aislado de las angiospermas principalmente. que permiten la formación del hidrocarburo triterpenoide escualeno. Las saponinas triterpenoides se encuentran ampliamente distribuidas y constituyen la mayoría de las encontradas en la naturaleza. Entre las fuentes ricas de saponinas esteroidales se encuentran especies de las familias Dioscoreaceae. gitogina (D. Ejemplo: digitonina (Digitalis purpurea y Digitalis lanata). 4. dando así origen a dos tipos de agliconas cardiotónicas: cardenólidos. grasas. ANALISIS Y CARACTERIZACION DE GLICOSIDOS: Siendo los glicósidos sustancias con núcleo estructural muy diverso. etc. d. Realizando la extracción inicial a temperatura muy baja. c. Tratando el material vegetal con ácido a pH 1 ó 2.10 Cardenólido Bufadienólido EXTRACCION. Con esto quedan los heterósidos cristalizados. lo cual se logra mediante: a. o hirviéndolo en alcohol por 15 min. Luego el residuo se macera con alcohol diluido durante varias horas. EXTRACCION GENERAL: El material vegetal se extrae con alcohol en caliente. Para evitar esto deben inactivarse previamente a la extracción. Tratamiento de la planta con vapor de agua. tratando el material vegetal con éter de petróleo o cloroformo. b. por lo que los métodos de separación y purificación son también distintos. sus solubilidades varían. y el filtrado (glicósidos más exceso de plomo) se trata con una corriente de ácido sulfhídrico. Poniendo el material fresco o seco en agua caliente. y luego se enfría. el cual es removido por filtración. El macerado se trata con solución de acetato de plomo. Posteriormente puede hidrolizarse para determinar la naturaleza del azúcar y de la aglicona. . en frío. para precipitar las impurezas. ceras. que precipita el plomo como sulfuro. Sin embargo. por lo general el solvente a emplear para la extracción inicial es etanol o metanol con agua. dejando los glicósidos en solución. Luego se filtra. Los cristales de glicósidos se obtienen mediante evaporación del filtrado. EXTRACCION DE GLICOSIDOS FENOLICOS: Se puede primero separar las materias resinosas. INACTIVACION DE ENZIMAS: Los glicósidos se encuentran muchas veces acompañados de enzimas capaces de hidrolizarlos. acetona y alcohol. la clorofila y los carotenoides. La hidrólisis alcalina se realiza con hidróxido de sodio 2 M a temperatura ambiente. pueden identificarse mediante cromatografía en capa fina. Estos últimos aíslan los glicósidos. debido a la acción de las fenolasas. Posteriormente se continúa extrayendo con acetato de etilo. Estos permiten eliminar los lípidos. con un solvente no miscible. ya que fluorescen bajo luz ultravioleta. que luego es evaporado. y luego rociando hidróxido de amonio diluido. Los fenoles pueden detectarse con solución acuosa o alcohólica de cloruro férrico al 1% más 1% de ferricianuro de potasio. Esto se evita aislándolos de los tejidos con alcohol caliente. Se debe observar manchas azules. CUANTIFICACION GENERAL DE GLICOSIDOS: Para valorar los glicósidos se aprovecha la capacidad que tienen los ácidos de liberar los azúcares reductores. ANALISIS DE GLICOSIDOS FENOLICOS: . y en ella se pueden caracterizar los azúcares reductores. empleando sucesivamente varios solventes de diferente polaridad. Posteriormente el extracto alcohólico de la planta se somete a hidrólisis ácida o alcalina. en baño de María hirviendo. como por ejemplo el éter o cloroformo. Para detectar ácidos fenólicos puede utilizarse cromatografía en capa fina.DETECCION: Los fenoles rara vez se encuentran en forma libre en las plantas.6-dicloroquinonacloroimida al 2% en cloroformo). Luego se enfría y filtra. La hidrólisis ácida se hace con ácido clorhídrico 2 M durante media hora. Se usa ácido sulfúrico al 2-5% o ácido clorhídrico 1 ó 2 N durante algunas horas. Dicha fluorescencia se intensifica por la acción de vapores amoniacales. La mayoría de compuestos fenólicos. A veces la aglicona precipita y se recoge con un solvente más denso que el agua. sobre todo los flavonoides. durante 4 hr. Es por ello que generalmente se aíslan mediante hidrólisis. así: éter de petróleo. con reactivo de Gibbs como revelador (2. los cuales se someten a recristalización con algún solvente apropiado. Los glicósidos fenólicos son muy sensibles a la oxidación enzimática. La fracción acuosa ácida se neutraliza con carbonato de bario. en caliente. cloroformo y éter dietílico. También es útil como revelador el reactivo de “productos . Otras veces se obtiene mediante extracción de la solución acuosa resultante de la hidrólisis.11 La extracción inicial de los glicósidos fenólicos también puede hacerse de manera más eficiente mediante soxhlet. sales. PURIFICACION DE EXTRACTOS FENOLICOS: Al prepararse un extracto vegetal que contenga glicósidos fenólicos. ácido fosfomolíbdico y ácido fosfórico). Este reactivo colorea de azul o gris los fenoles con núcleo catecólico (tiene 2 grupos OH en posición “orto”) o hidroquinonas al exponer la placa a vapores amoniacales. Para evitar esto puede purificarse calentando varias veces con pequeñas cantidades de agua.El solvente más usado para elución en cromatografía es el etanol al 70%. con lo que el n-propanol se separa. Esto se logra usando metanol conteniendo ácido clorhídrico al 0. Sin embargo. CUANTIFICACION DE FENOLES TOTALES: El permanganato de potasio oxida los fenoles en frío. Luego se observa la fluorescencia bajo luz U. Otro método de purificación consiste en emplear resinas de intercambio catiónico. pero con dobles enlaces. Un reactivo que brinda información más específica sobre el tipo de fenoles presentes es el de Folin (tungstato de sodio. Las fracciones acuosas se combinan y agitan con n-propanol. característica que se aprovecha para valorar los fenoles totales. tales como el ácido cinámico. . quedando en la parte superior. La mezcla se satura con cloruro de sodio. y NO los “meta-difenoles”. Sin embargo.V. CROMATOGRAFIA Y ESPECTROFOTOMETRIA: . Para las antocianinas se requiere pH ácido. Este problema se resuelve con el reactivo de Folin-Denis. por lo que debe especificarse las condiciones estándar bajo las cuales se trabajó. otras sustancias NO FENOLICAS. obteniéndose . ya que solo se oxidan los difenoles “orto”y “para”.. Además. la cual contiene la mayoría de glicósidos fenólicos.12 naturales”: difenil-boril-oxietilamina al 1% en metanol. y luego polietilenglicol 4000 al 5% en etanol. la absorción de los fenoles naturales se ve afectada por muchos factores. tales como el tipo de solvente y el pH. pueden hallarse también presentes azúcares. que permite reducir estos ácidos y a la vez oxidar todos los fenoles.La absorción en el ultravioleta se emplea bastante en la determinación de fenoles totales (a 270nm). ácidos. como por ejemplo la amberlita IRC-50 y Dower IXII. agua.. Pueden detectarse bandas de color amarillo.1% ó ácido acético al 15%. azul o verde. sí pueden reaccionar. etc. se ha reportado que éste no es un buen método. que podrían interferir en la cromatografía. e insolubles en éter. CARACTERIZACION: . Extracción y aislamiento de flavonoides: Mat. María) Filtrado Solución homogénea PbOAC 0. Extracto alcohólico Filtrar Residuo Concentrar (B. filtrar. Son solubles en álcali. Para efectuar la cuantificación se toma una alícuota que contenga la sustancia fenólica. se hace reaccionar con el reactivo de Folin más una solución de carbonato de sodio. Vegetal + etanol Macerar en frío/72 hr. reposar/24hr Precipitado Solución amarilla Rotavapor Fase acuosa Etanol Acetato de etilo. y luego de agitar se mide la absorbancia a 730-760 nm. cloroformo y benceno.Los flavonoides son generalmente solubles en agua y alcohol. debido a los óxidos de tungsteno y molibdeno. dando . concentrar Cromatografiar en columna abierta con gel de sílice.1 M.13 color azul. Las flavonas se colorean de naranja.Se utiliza con frecuencia cromatografía en capa fina. Ejemplo: si los pétalos blancos de una flor se exponen a vapores de amoníaco y se tornan amarillos. A partir de ellas derivan otras clases. . medio ácido se .En algunos casos pueden hacerse pruebas directamente sobre el material vegetal. Se cuenta con información que permite deducir la posible estructura del flavonoide. La detección de los flavonoides en ambos tipos de cromatografía puede hacerse usando lámpara de luz ultravioleta. sílica gel y poliamida. Si viran de amarillo a rojo. mientras que las chalconas. TECNICAS CROMATOGRAFICAS: . Las isoflavonas y chalconas no se colorean. empleando como adsorbentes celulosa. . rojo obscuro o violeta. indica la presencia de flavonas y flavonoles. rosadas. los flavonoides dan colores característicos. Las chalconas son el primer tipo de flavonoides que se forman a lo largo de su biosíntesis. púrpuras y otras. En decoloran y precipitan.14 soluciones amarillas que se oscurecen al aire. o pueden formar precipitados. observándose manchas fluorescentes azules. hay presencia de chalconas y auronas. en base al color observado antes y después de añadir amoníaco.Prueba de Marini-Bettolo: con solución de cloruro de antimonio en tetracloruro de carbono. que pueden cambiar tanto de color como de intensidad luego de su exposición a vapores de amoníaco o al reactivo de “Productos Naturales”. los flavonoles de rojo cerezo y las flavanonas de rojo violáceo. pero puede también emplearse cromatografía en papel. También puede usarse gel de Sephadex. anaranjadas. Se emplean los mismos adsorbentes que en la cromatografía en capa fina. .La cromatografía en columna se emplea comúnmente para purificaciones preliminares y para separar grandes cantidades de flavonoides a partir de extractos vegetales. .La reacción más usual para detectar flavonoides es la de Shinoda: al extracto alcohólico se le añade un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Ejemplo: las flavonas dan precipitado amarillo o anaranjado. el anillo aromático (entre 1600 a 1500). Por el contrario. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: El método más usual para analizar la estructura de un flavonoide es la observación en ultravioleta y visible. el complejo formado con grupos hidroxil-cetona es estable. . Estos se hacen reaccionar con el flavonoide. El complejo formado con grupos ohidroxilos es lábil en presencia de ácido.Resonancia magnética nuclear: los espectros de RMN de flavonoides han cobrado mayor importancia en años recientes para determinación de estructuras. Esto se hace tanto para identificar el tipo de flavonoide. y la de los grupos o-hidroxi-cetona (entre 3500 a 3200 nm) pueden ser útiles. La identificación del flavonoide y su modelo de oxigenación se facilita empleando “reactivos de desplazamiento”. como para establecer el modelo de oxigenación. debido a que los espectros ultravioleta brindan mayor información.Infrarrojo: se usa muy poco en el análisis de flavonoides.15 .El acetato de sodio ioniza únicamente el grupo hidroxilo más ácido del flavonoide. por lo que desaparece al añadir ácido clorhídrico. Es común en este caso también el uso de “reactivos de desplazamiento”. la absorción del grupo carbonilo (entre 1680 y 1640 nm). La variación de estos rangos depende del modelo de oxigenación y del grado de sustitución de los hidroxilos. El espectro típico consta de dos máximos de absorción en los rangos de 240 a 285 nm y 300 a 550 nm. Conlleva la ventaja de que es una técnica muy sensible y precisa. y provocan desplazamiento característico de los picos de absorción. . Sin embargo. . Los espectros de absorción de los flavonoides se determinan comúnmente en solución metanólica. que permite obtener resultados cuali-cuantitativos en unos pocos minutos. lo cual proporciona información adicional sobre la estructura. lo cual se aprovecha para detectar un grupo OH en posición 7.El cloruro de aluminio forma complejos con grupos orto-hidroxilos y con grupos hidroxilcetona vecinos. .La cromatografía líquida de alta resolución es muy utilizada para realizar separaciones a pequeña escala. Ejemplo: . dando coloraciones que van desde el anaranjado al rojo o violeta. Al hacerse cromatografía en capa fina se diferencian por su Rf. etc. Las betacianinas tienen Rf muy bajos (0-0. mientras que las antocianinas no. a pH ácido (2-4): las betacianinas migran al ánodo. DIFERENCIACION DE BETACIANINAS Y ANTOCIANINAS: . junto con clorofila y carotenos. . 238 para flavonoles. y pueden ser extraídas con alcohol amílico. Para el análisis de resultados se toma en cuenta los pesos moleculares de los distintos núcleos básicos de los flavonoides.Haciendo electroforesis en papel. anaranjados o rojos. Ejemplo: 222 para flavonas. . bajo la forma de picratos.Calentando con ácido clorhídrico 2 M por 5 minutos.4). isoflavonas y auronas. poco solubles en agua y solubles en solventes orgánicos. Las benzoquinonas y naftoquinonas actúan como oxidantes.1). .Añadiendo hidróxido de sodio 2 M. a 100 grados centígrados.El espectro visible en metanol-ácido clorhídrico presenta un rango máximo de 505-535 nm para las antocianinas.16 . Las antocianinas cambian a azul verdoso y luego se decoloran. 224 para flavanonas y chalconas. QUINONAS: Son sólidos cristalinos amarillos.Mediante cromatografía. Pueden separarse mediante precipitación. usando como fase móvil butanol-ácido acético-agua. lo cual se aprovecha para su . mientras que las antocianinas tienen Rf moderados (0. Es por ello que pueden extraerse con éter de petróleo.Espectrometría de masas: posee la ventaja de que requiere muy poca cantidad de muestra. y las antocianinas al cátodo. gota a gota. y 532-554 nm para las betacianinas. Las betacianinas se decoloran.1-0. Generalmente el grupo carbonilo de las quinonas no reacciona con los reactivos usuales de la función cetona. También pueden precipitarse como cloruros mediante ebullición con ácido clorhídrico al 20%. Las quinonas se solubilizan en álcalis. las betacianinas viran a amarillo. ANTOCIANINAS: Son solubles en agua e insolubles en los solventes orgánicos. . así como de los carotenos y clorofila mediante cromatografía en capa fina o en papel. Con la espectrometría de masas puede reconocerse a las quinonas por la facilidad con que pierden las dos moléculas de carbonilo. hojas de tabaco y estramonio contienen 7-hidroxi. pueden ser detectadas en la región visible. belladona. CUMARINAS: La cumarina y sus glicósidos derivan de la benzo-alfa-pirona. violetas. y se agita con una solución acuosa alcalina (hidróxido de amonio al 10% (reacción de Bornträger). La cumarina se ha encontrado en unas 150 especies. por encima de los 430 nm. sin embargo. pero puede ser de color anaranjado. . cloroformo o éter). Para ello se macera el material vegetal con un solvente orgánico inmiscible con el agua (ejemplo: benceno. además la raíz de avena. Como reveladores se puede emplear hidróxido de potasio al 10% en metanol (se ven manchas rojas. rojo o violeta si hay alta concentración).17 análisis espectrofotométrico. en la región visible. púrpuras o verdes). las semillas de este árbol de Guyana y Brasil se usan en perfumería) contiene 1 a 3% de cumarina. Así puede diferenciarse a las antraquinonas de otras quinonas. El “haba tonka”(Coumarona odorata. con solventes de diferentes polaridades. 6-metoxi-cumarina (escopoletina). Las distintas especies de canela contienen cumarina no sustituida (C. el análisis bajo la luz ultravioleta es más sensible. Puesto que las quinonas son coloreadas. Las quinonas pueden separarse entre sí. ceylanicum es la que tiene menos). También puede usarse HPLC para aislar quinonas. En el infrarrojo pueden detectarse las bandas características fuertes de los grupos carbonilo. y la otra. ya que las primeras presentan 4 ó 5 bandas de absorción en el ultravioleta. Su olor es el característico del heno fresco. Por lo menos tres de ellas caen entre 215 y 300 nm. de Jalapa. La ruda contiene 10 derivados cumarínicos. pertenecientes a más de 30 familias. Un resultado positivo está indicado por una coloración rosada en la fase alcalina (si hay poca cantidad de antraquinonas. se filtra. EXTRACCION: La extracción de las cumarinas puede realizarse sobre el material vegetal fresco o seco. Las cumarinas muestran intensa fluorescencia. empleando como adsorbentes la sílica gel o la alúmina “neutra o ácida”. Los componentes se detectan bajo luz U. tales como etanol. Se prefiere NO USAR alúmina BASICA. pero antes es necesario añadir hidróxido de potasio. También se usa bastante la cromatografía en capa fina. Para detectar grupos fenólicos se emplea solución acuosa de cloruro férrico al 1%. pero ninguno de ellos es específico.V.Fluorescencia púrpura: característica de 7-alcoxicumarina. Puede utilizarse solventes diversos. Puesto que pueden encontrarse a veces formando glicósidos. etc. es . acetona. . para lo cual la mezcla sílica gel y celulosa incrementa la sensibilidad y resolución. y pueden extraerse con éter de petróleo.Amarillo-verdoso: cumarina no sustituída.7-dioxigenadas.Fluorescencia celeste: 7-hidroxi-cumarina y 5. éter sulfúrico o de petróleo. La extracción se hace con soxhlet. las furano-cumarinas son por lo general solubles en lípidos. La intensificación de la fluorescencia por tratamiento del cromatograma con vapores de amoníaco es indicio de grupos fenólicos en la cumarina. En base al color que muestren.18 dependiendo de las estructuras de las cumarinas. el extracto obtenido se concentra. Esta es la propiedad física más usual para reconocer una cumarina. Se pueden recristalizar con una mezcla de etanol-éter y luego se purifican mediante cromatografía. SEPARACION CROMATOGRAFICA Y DETECCION: Se utiliza ampliamente la cromatografía en columna. La detección de las cumarinas puede hacerse también con otros reveladores. ya que degrada las cumarinas. de 365 nm antes y después de asperjar con hidróxido de potasio al 5 ó 10% en etanol. obteniéndose así cristales al dejar en reposo. A diferencia de las hidroxicumarinas. . con lo que los grupos hidroxilo dan color azul o verdoso. puede asignarse tentativamente ciertas características a las cumarinas: .Fluorescencia amarillo opaca u ocre: furanocumarina. La adición de reactivo de Benedict a las cumarinas o flavonoides con grupos hidroxilo reactivos hace que la fluorescencia desaparezca total o parcialmente. . o en refrigeración. . ESPECTROMETRIA DE MASAS: Las cumarinas producen un fuerte ion molecular a un valor de m/e de 146 (76%).r. que producen cambios espectrales.HPLC: Resulta ventajoso porque las separaciones son más rápidas y efectivas. Ejemplo: se hace reaccionar a las cumarinas con hidróxido de sodio.V. y un pico base a m/e de 118 (100%) (28 unidades menos por la pérdida de monóxido de carbono del anillo de pirona. ESPECTRO i. Bandas de absorción U. . sobre todo hidroxilos. RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: También se emplean reactivos de desplazamiento. La intensidad de la fluorescencia aumenta al adicionar hidróxido de potasio al 10%. Esto toma entre 1 a 2 horas.5% etanol o éter-benceno (1:1).19 necesario antes hidrolizarlos con ácido. violetas o cafés. cloroformo + 1. Para obtener información respecto a la orientación de determinados grupos funcionales.: Puede encontrarse bandas características de la pirona en la región comprendida entre 1715 y 1745 cm a la -1. verdes. usando como fase móvil cloroformo. acetato de sodio. Se detectan bajo luz UV como manchas azules. características de las cumarinas: 274 y 311 nm. Comúnmente pueden separarse mediante cromatografía en capa fina en sílica gel. amarillas. puede utilizarse “reactivos de desplazamiento”. y 2) determinar su ubicación en el núcleo de la cumarina. así como para fraccionar algunas cumarinas de cítricos. Los grupos hidroxilo y carbonilo también muestran bandas características. TECNICAS ESPECTROMETRICAS: Para dilucidar la estructura química de una cumarina nueva se debe 1) identificar primero los diferentes grupos sustituyentes. Se ha utilizado por ejemplo para separar una mezcla de furano-cumarinas del perejil. ácido bórico o cloruro de aluminio. que corresponden a los anillos de benceno y pirona respectivamente.