Fluorometría

Fluorometría M. C. Luis Raul Chávez Garibay Facultad de QFB-UMSNH TEORÍA.En condiciones definidas, la energía absorbida por los átomos de una substancia puede ser emitida como energía radiante en forma de luz visible. A este fenómeno se le llama luminiscencia y puede ser: • Quimioluminiscencia, si se debe a energía química causada por ciertas reacciones. Por ejemplo, el oxalato de difenilo es un éster líquido que al oxidarse y reaccionar con una substancia apropiada ("colorante") produce luz. Las moléculas de la substancia colorante pasan del estado basal al excitado (*=estado excitado) y al regresar al estado basal emiten luz a una longitud de onda que depende de su estructura, ej. el tetraceno produce una luz amarillo-verdosa. Imagen modificada del original en Wikipedia. Figura 1. Oxidación del Cyalume (mr) Aplicación práctica cotidiana: barras de luz para excursionismo y adornos luminosos. Figura 2. Barra de luz Aplicaciones analíticas.- principalmente en Bioquímica, Genética y Biología Molecular, para detección de biomoléculas. • Fotoluminiscencia, cuando la emisión se debe a que se absorbió energía radiante. En algunas substancias, cuando se les aplica energía radiante en forma de luz ultravioleta sus electrones pasan del estado basal al estado excitado absorbiendo parte de ésta; al regresar al estado basal, liberan la energía sobrante en forma de fotones de longitud de onda mayor que la original. Esto ocasiona que el espectro de emisión de la substancia siempre esté desplazado a la derecha con respecto al de los rayos de excitación. • • Si la emisión de luz continúa algún tiempo después de que se deja de aplicar energía a este fenómeno se le llama fosforescencia. Si la emisión cesa inmediatamente, se llama fluorescencia. Imagen por Hannes Grobe (Hgrobe 06:16, 26 April 2006 (UTC)) redistribuida bajo los términos de licencia del autor. Fuente: Wikipedia. Figura 3. Minerales fluorescentes vistos con luz ultravioleta. Fuente: Wikipedia. Figura 4. Polvo fosforescente visto con luz visible, luz ultravioleta y en la obscuridad total. Fosforescencia. El interruptor de la pared sigue emitiendo luz al retirar la fuente de excitación, en éste caso un apuntador láser violeta. La emisión ocurre sólo en los puntos en que el láser tocó al interruptor. De todos los tipos de luminiscencia mencionados, la fluorescencia producida por la aplicación de energía radiante es la de uso más difundido con fines analíticos. Método visual.- Consiste en aplicar luz ultravioleta con una lámpara especial. Se usa para hacer visibles algunas substancias tras separarlas mediante cromatografía en capa fina. En muchos casos, la naturaleza de la substancia puede determinarse por el color de la luz emitida. Por ejemplo, algunos alcaloides presentan el fenómeno produciendo un color característico: cocaína (azul claro), codeína (amarillo claro), nicotina (violeta obscuro). Entre las substancias inorgánicas están algunas sales de uranio (amarillo verdoso). 1 Figura 5. Visualización de substancias fluorescentes en cromatografía en capa fina mediante luz ultravioleta. El método cualitativo más preciso es a partir del espectro de emisión de la substancia, ya que puede darse el caso de que el color aparente de la emisión sea el mismo. ¿Cual de las siguientes substancias produce una luz naranja si se usa como colorante en una reacción de quimioluminiscencia con oxalato de difenilo? Principio del formulario Tetraceno 5,12-Bis(feniletinil)-naftaceno 9,10-Difenilantraceno 9,10-Bis(feniletinil)antraceno Final del formulario Factores de los que depende la intensidad de la fluorescencia. La intensidad de la fluorescencia F está dada por: (1) Donde es el rendimiento cuántico (“eficiencia de la fluorescencia”, el número de fotones absorbidos que se convirtieron en fluorescencia) y los demás términos son los mismos de la ley de Bouguer-Lambert y Beer. siempre es menor de uno y depende del tipo de substancia, de la longitud de onda de la luz ultravioleta aplicada y de la temperatura: If = Intensidad de luz emitida, Ia = Intensidad de luz absorbida Si la concentración es alta, el producto abc se hace grande y 10-abc tiende a cero; en ese caso, la ecuación (1) nos queda:  Como e I0 son constantes, F se vuelve constante; es decir, al aumentar la concentración no cambiará la lectura. Por otra parte, si la concentración es baja (abc< 0.01) la ecuación (1) puede reordenarse así: 2 (3) Es decir, a bajas concentraciones la intensidad de la fluorescencia es directamente proporcional a la concentración. Esta ecuación sólo se aplica hasta algunas ppm de concentración, se requiere que se transmita al menos el 92% de la luz UV. A concentraciones altas, a medida que la concentración aumenta la intensidad de la fluorescencia disminuye (el producto abc aumenta). El motivo es el siguiente: en soluciones diluidas, la absorción es uniforme en toda la solución. Pero en soluciones concentradas la primera parte de la solución en el trayecto del flujo luminoso absorberá más, lo que disminuye I0 para las moléculas posteriores. En otras palabras, ninguna molécula recibirá la misma cantidad de luz y, como la intensidad de la fluorescencia depende de este factor, la emisión ya no será proporcional a la concentración (las moléculas en la entrada de la luz ultravioleta emitirán más luz visible que las de la salida). Figura 6. Distribución de la emisión de las moléculas a distintas concentraciones. Una curva de calibración que incluya soluciones muy concentradas queda así: 3 Figura 7. Fluorescencia vs. concentración. Algunos autores consideran que la región no lineal empieza cuando la absorbancia vale 0.05; despejando de A=abc, nos queda: Donde Cmax es la máxima concentración que podemos medir por fluorometría antes de que la curva de calibración deje de ser una linea recta. Como en fluorometría se mide la cantidad de luz emitida, los métodos son de 1000 a 10,000 veces más sensibles que la colorimetría, donde se mide la absorción. Su desventajas son que depende de la temperatura en muy alto grado y la intensidad de la emisión está en relación a la intensidad de la excitación (si varía la intensidad de la lámpara de luz ultravioleta varía la lectura). ¿Cual será la máxima concentración que podemos determinar mediante fluorometría para una substancia que tiene una absortividad de 5 cuando las unidades de concentración son mg/lt, si usaremos una celda de 1 cm? Principio del formulario 0.01 mg/lt 0.05 mg/lt 0.5 mg/lt 0.001 mg/lt Factores estructurales que intervienen en la fluorescencia de las moléculas orgánicas. Los enlaces .- Para presentar fluorescencia, una substancia debe tener enlaces conjugados con alto grado de estabilidad por resonancia (substancias aromáticas). Si la molécula sólo tiene enlaces σ, no presentará fluorescencia. La fluorescencia aumenta por: • La presencia de anillos bencénicos. En los compuestos aromáticos, la fluorescencia depende principalmente de los substituyentes, del número de anillos y del grado de condensación. Por ejemplo, el antraceno es más fluorescente que el naftaleno y este, a su vez, más que el benceno. 4 pero fusionados a un anillo de benceno si. Por ejemplo. pero no el fluoreno: La fluorescencia disminuye por: • Los sustituyentes con deficiencia de electrones en el anillo bencénico. furano. tiofeno y piridina) no presentan fluorescencia. Los compuestos heterocíclicos simples (pirrol. Compuesto Fluorescencia relativa Longitud de onda de la fluorescencia (nm) 270-310 270-320 310-405 Benceno n-propilbenceno Anilina 10 17 20 5 .• Los substituyentes donadores de electrones en el anillo aromático. Tabla 1: fluorescencia relativa del benceno y algunos bencenos sustituidos. el nitrobenceno no es fluorescente. • La rigidez estructural. En el siguiente ejemplo el difenilo tiene libertad de giro. 4a. La mayoría del equipo comercial usa una lámpara de arco de xenón a alta presión. McGraw-Hill. 6 . Elige cual de las siguientes substancias puede ser analizada por fluorometría: Principio del formulario D B A C Equipo de medición Fluorómetro (monocromador=filtros) o espectrofluorómetro (monocromador=rejilla de difracción) Función de las Partes. los fluorómetros de filtro usan una lámpara de vapor de mercurio a baja presión.Sirve para proporcionar la energía de excitación (luz ultravioleta). capítulo 9. Fuente de luz. Ed. edición. Lámpara de arco de xenón. Análisis Instrumental. Figura 9.. Puedes ver los espectros de emisión de ambas oprimiendo aquí.Ión anilinio Ácido benzoico Nitrobenceno 0 3 0 310-390 - Bibliografía para esta página: Skoog/Leary (1994). Celda. Se usan en algunos instrumentos que permiten hacer análisis de ADN. Los problemas que pueden causar los filtros en un fluorómetro es que las longitudes de onda más largas del filtro primario pueden pasar a través de los filtros secundarios de longitudes de onda más corta. Este tipo de instrumento usa un fotodiodo en vez de un fotomultiplicador en el fotómetro... si la longitud de onda de excitación es de 340 nm en adelante. En la actualidad se han desarrollado diodos emisores de luz que emiten en el UV (365395) nm y en el azul (465-485 nm).Puede ser de vidrio o plástico (metacrilato). Los fabricantes generalmente incluyen las características (espectro) de transmisión de los filtros en los manuales del equipo.Se le llama así a la combinación de detector. Fotómetro.Sirve para seleccionar la longitud de onda de excitación. En el fluorómetro (llamado también fluorímetro) los monocromadores son filtros y el dispositivo de lectura hasta fechas recientes era de punto nulo. Figura 10. Los instrumentos más avanzados usan rejillas de difracción en vez de filtros y reciben el nombre de espectrofluorómetro. (aquella a la que la substancia de interés presenta su máxima emisión). Como la luz emitida es prácticamente monocromática no es necesario el monocromador primario. Espectrofluorómetro Vas a medir la fluorescencia de una substancia que emite luz roja. actualmente son digitales.. Monocromador secundario.. ¿Cual de las siguientes sería una longitud de onda adecuada para el monocromador secundario? Interv alo de longit udes de onda (nm) 493571 465493 400465 617780 580617 7 . Monocromador primario. ARN y proteinas usando técnicas con marcadores fluorescentes especiales.Sirve para dejar pasar sólo la longitud de onda de la luz emitida por la substancia de interés (visible). debe ser de cuarzo. algunos instrumentos recientes de bajo costo usan un fotodiodo.Avances recientes. si es inferior. amplificador y dispositivo de lectura. sirve para medir la cantidad de luz emitida por la muestra y como detector se usa un tubo fotomultiplicador. ¿En que áreas se utiliza? Química Analítica. Al regresar al estado basal.. Esta emisión ocurre siempre en la región visible.las longitudes de onda en las que ocurre la emisión son características de cada substancia. ANÁLISIS CUALITATIVO. Fundamento del análisis cualitativo. Medicina y Bioquímica. de preferencia con carácter aromático. la cantidad de luz emitida es directamente proporcional al número de moléculas emisoras. ¿Que es? Un método de análisis basado en la medición de la intensidad de la luz visible emitida por la muestra al someterla a la luz ultravioleta..a bajas concentraciones. ocurrirán transiciones electrónicas en la muestra. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra... ¿Como funciona? Se aplica luz ultravioleta a la muestra. si la longitud de onda es la adecuada. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. Fundamento del análisis cuantitativo. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas. ANÁLISIS CUANTITATIVO.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. ¿Para que sirve? En general: • Análisis cuantitativo de moléculas orgánicas con anillos aromáticos o altamente insaturadas presentes en concentraciones muy bajas (trazas). el exceso de energía se emite en forma de fotones de longitud de onda mayor.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro.571580 Principio del formulario 690 nm 540 nm 400 nm Aplicaciones. especialmente en muestras biológicas o ambientales • Puede aplicarse en gran variedad de compuestos orgánicos e inorgánicos mediante reacciones que dan productos fluorescentes (“marcadores químicos”) Usos comunes: 8 . Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. • Detección del paso de substancias en algunos métodos de separación (cromatografía líquida de alta presión. F. Por omisión se muestra el espectro de absorción. mientras que los grupos que atraen electrones como Cl. • Es indispensable el uso de solventes de alta pureza y material de laboratorio extremadamente limpio. probablemente por oxidación de los enlaces \pi. El elemento se selecciona casi al final de la página. Cantidad: pueden ser extremadamente pequeñas. Puedes observar la emisión de los elementos en este sitio: simulador de espectros. Flame tests. • La presencia de substancias coloreadas puede interferir absorbiendo la luz emitida. puedes encontrarlo en Spectra of Gas Discharges.preferentemente aromáticos. • Se deben evitar los solventes que absorben la luz ultravioleta. • Análisis in situ en sistemas biológicos como células aisladas. puedes obtenerlas aquí: NIST Atomic Spectra Database Lines Form. etc. table de colores de flama y espectros de emisión de varios elementos. Los sólidos requieren un recipiente especial. Si la muestra presenta mucha turbidez puede ocasionar dificultades. junto con otras emisiones menos intensas a otras longitudes de onda. • El oxígeno disuelto disminuye la fluorescencia. se han desarrollado técnicas para nanolitros. Cuando un electrón recibe un cuanto de energía térmica pasa a un orbital más alto y más energético pero menos estable (estado excitado). se muestra con un espectro continuo de fondo con fines de referencia. ¿Cuales son sus limitaciones? • Depende en alto grado de la temperatura. La muestra generalmente es una solución acuosa que se mezcla en forma de aerosol con un gas combustible mediante un atomizador. Por ejemplo.) tienden a aumentar la fluorescencia. Contiene fotografías de las pruebas de coloración de flama para algunos elementos. diferenciación de células (citometría) • Secuencia de ADN • Estudios de fenómenos químicos ultra-rápidos ¿Cuales son los requisitos para la muestra? Estado: sólido. líquido o gaseoso. Colors of Elements in a Flame. el sodio emite principalmente a 589 nm (amarillo). a causa de la inestabilidad. Br. • Sólo sirve para soluciones diluidas Fotometría de flama. Estructura: Las substancias que son buenos candidatos para el análisis por ésta técnica son las que presentan enlaces \pi conjugados.• Determinación de constituyentes traza en muestras biológicas y ambientales. Si deseas ver el espectro con una escala de longitud de onda en la parte inferior. I. NO2 o COOH tienden a disminuirla o suprimirla. el electrón regresa rápidamente a su orbital anterior (estado basal) y emite la energía recibida en forma de fotones con una longitud de onda particular. con otros detalles que ayudan a identificarlos. Preparación: • Puede ser necesario convertir la substancia a un derivado fluorescente o añadir un marcador fluorescente. Los substituyentes que deslocalicen los electrones \pi (NH2. La energía para que los átomos emitan de luz se suministra mediante una flama (energía térmica). La intensidad de la emisión depende de los siguientes factores: 9 . OH. elige la opción del lado derecho y verás el espectro de emisión del elemento que escojas en la tabla periódica. electroforesis) • Pruebas inmunológicas para detectar constituyentes específicos en sistemas biológicos. • Las muestras turbias pueden requerir filtración para minimizar la dispersión (interfiere). tales como el tolueno. • Las mezclas complejas pueden requerir separación y purificación extensiva. OCH3. Si deseas conocer las longitudes de onda exactas y la intensidad de la emisión. La ecuación de Scheibe-Lomakin describe la intensidad de la emisión del elemento en una flama de temperatura constante: Donde I = intensidad de la emisión de la línea espectral.La temperatura de la flama debe ser constante. Ya que para análisis cuantitativo se requiere que la intensidad de la emisión dependa únicamente de la concentración. k = constante de proporcionalidad característica del elemento (depende de la temperatura de la flama y la longitud de onda de la emisión). 2. Como los electrones se pierden. De acuerdo a su emisión los elementos pueden ser emisores fuertes (Na. sólo alrededor del 1% de los átomos sufren esta transformación. Fuente: Wikipedia. excepto para los elementos que se ionizan fácilmente como Na. Flamas de mechero Bunsen a distintas combinaciones de gas/aire 3. no regresan al estado basal y no ocurre la emisión. imagen de dominio público. porque los electrones de valencia saltan a estados de energía cada vez más altos hasta que se desprenden del átomo por completo para formar un ion. del oxidante (aire u oxígeno) b) La cantidad de gas que se quema por segundo. Depende de su concentración en la muestra y de la cantidad de muestra que se envía a la flama por unidad de tiempo. El tipo de elemento.. La cantidad de átomos del elemento emisor presentes en la flama. Es el factor más importante. Los átomos neutros en forma de vapor son excitados por la energía térmica y se produce la emisión. La temperatura de la flama depende de: a) El tipo de combustible (el gas natural produce baja temperatura y el acetileno alta). La temperatura de la flama. Si se calientan demasiado estos elementos se ionizan en vez de excitarse. La temperatura más alta posible se obtiene usando cantidades estequiométricas de combustible y oxidante. Li.1.. K. Al llegar la solución a la flama se evapora el solvente y después las sales. Ca) o emisores débiles (los otros elementos metálicos). este último factor se controla regulando la presión. En la parte lineal de la curva de calibración n vale aproximademente 1. 2. cualquier exceso de uno de ellos diluye la flama y baja la temperatura. En una flama típica. Figura 1. ¿Cual flama de mechero Bunsen de las mostradas arriba tiene mayor temperatura? Principio del formulario 10 . los requisitos principales para la medición son: 1. c = concentración del elemento y n= constante que depende de la concentración. K o Li. A mayor temperatura mayor emisión.La velocidad de flujo de la muestra hacia la flama debe ser constante. las cuales se disocian por la acción de la temperatura y producen átomos neutros. puede haber una combinación de materia orgánica e inorgánica.La #3 La #1 La #4 La #2 1) Evaporación del solvente. 3) Atomización.En este paso también se puede generar humo. En este paso puede ocurrir la formación de compuestos refractarios (resistentes al calor) ¿La formación de compuestos refractarios interfiere con el análisis cuantitativo? No o si 11 . Es el paso de las substancias inorgánicas a átomos libres ("vapor atómico") y es un requisito para que ocurra la emisión. Generalmente es agua. Al finalizar quedan los solutos que venían en la muestra. 2) Incineración de la materia orgánica. en este paso se introduce vapor de agua a la flama. Característica principal: La flama debe tener temperatura constante.Función de los Componentes Quemador. Esto se logra manteniendo constante el flujo de los gases (combustible y oxidante) mediante mecanismos reguladores de presión. Combustible=H2. oxidante = O2 12 ..sirve para proporcionar la energía térmica para que se presente el fenómeno de emisión de fotones que se explicó anteriormente. de manera uniforme y finamente dividida en forma de aerosol. Algunos instrumentos (espectrofotómetro de emisión de flama) utilizan prismas o rejillas de difracción para tener la posibilidad de seleccionar una línea de emisión en particular. se usan filtros para dejar pasar únicamente esta y remover todas las demás. pueden taparlo con relativa facilidad. contenido en otro por el que pasa gas a alta presión. esto se debe a que se requiere mayor o menor calor para evaporar la mayor o menor cantidad de solución que llega a la flama. se encuentra en los flamómetros para muestras biológicas (“flamómetro clínico”). Tipos de Flamómetro. así como la suciedad.. Atomizador.. Limitaciones: • La inestabilidad causada por las diferencias de flujo de la atomización no se compensa. sobre todo en muestras biológicas. la mezcla sucede en el orificio de salida. Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. Esto produce lecturas erráticas o ninguna lectura. Está formado por un tubo capilar metálico por el que fluye la muestra.. Este flamómetro no permite hacer determinaciones de litio y el standard es específico para cada marca y modelo. alta transmisión de luz y la posibilidad de fabricarlos para cualquier longitud de onda. K y Ca. así como la dispersión. Monocromador. La presión se controla mediante válvulas y con la ayuda de un manómetro.Las flamas de baja temperatura son más grandes que las anteriores (ej. Este método cancela la inestabilidad causada por las irregularidades en el flujo del gas y dentro de ciertos límites las del flujo de la muestra. • 13 . Los filtros son casi siempre de interferencia.Se mide la emisión de un sólo elemento (el de interés). Limitaciones.Como los fotones liberados por el elemento de interés tienen una longitud de onda específica.este método presenta el inconveniente (mencionado en los quemadores y el atomizador) de que si por algún motivo se afecta la estabilidad del flujo del gas o de la muestra se afecta también la estabilidad de la lectura. Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad. Directo. Características principales: el flujo de muestra debe ser uniforme. Este tipo de quemador es el más difundido.Las sales provenientes del agua al evaporarse. Un flamómetro clínico sólo permite medir Na. esto limita las aplicaciones del equipo.. Problemas causados por el atomizador.. ya que al afectarse la emisión del elemento que se está determinando se afecta también la emisión del elemento de referencia.Sirve para enviar la muestra a una cámara donde se mezcla con el combustible. Estándar interno. por la propiedades que tienen: ancho de banda angosto. a los elementos emisores fuertes: sodio.: la de un mechero Bunsen)..Se mide la emisión del elemento de interés y se compara contra la de un elemento de referencia (litio). potasio. litio y calcio. están optimizados para leer cantidades de sodio y potasio a las concentraciones clínicamente normales y mostrar la lectura en mmol/lt. Esta se elimina ajustando el instrumento a lectura cero aplicando el solvente puro a la flama. cierro la llave del gas y despues oprimo el interruptor de encendido-apagado. o bien restando la lectura del solvente a la de la muestra. el error puede ser mayor que en un flamómetro clínico si se usa como sustituto. Son de 3 tipos: espectrales. por lo que éste método compensa solamente las variaciones pequeñas en el flujo del gas y la atomización de la muestra pero no las grandes. Los fabricantes de equipo suelen clasificarlos de acuerdo a la aplicación: Flamómetro clínico. Como la temperatura del interior de una flama es mayor que la del exterior. Puede usar flama de baja o alta temperatura. luego la retiro. Flamómetro industrial. usando diluciones 1:100 o 1:200 de suero sanguineo. cierro la llave del gas y por último oprimo el interruptor de encendido-apagado. pongo como muestra agua desionizada y dejo pasar unos segundos. Usan flama de baja temperatura. acetileno) en las que la diferencia entre el interior y el exterior de la flama es muy grande y originar desviaciones en la curva de calibración. pongo un poco de muestra y dejo pasar unos segundos. Otras interferencias espectrales son: Emisión de fondo. esto puede suceder en flamas de alta temperatura (ej. cierro la llave del gas y por último oprimo el interruptor de encendido-apagado. físicas y químicas. cierro la llave del gas y por último oprimo el interruptor de encendido-apagado. ya que están sometidos a la misma energía térmica.• La curva de emisión vs temperatura del litio no es idéntica a la del sodio o la del potasio.Si se aplica energía luminosa de la misma longitud de onda de la emisión a los átomos en la flama y esta proviene de una fuente de temperatura más alta. Por ejemplo. Interferencias Espectrales Suceden cuando una línea de emisión de otro elemento presente en la muestra está muy próxima a la del elemento que se está analizando. los átomos la absorben. luego la retiro. ¿Como lo apagarías? Principio del formulario pongo como muestra agua destilada y dejo pasar unos segundos. Acabas de terminar de usar un fotómetro de emisión de flama. Interferencias Químicas En la flama ocurren reacciones que pueden dar lugar a cambios de longitud de onda o de intensidad en el espectro de emisión.están diseñados para intervalos más amplios de concentración que los clínicamente normales. luego la retiro. El error puede aumentar fuera de ese intervalo de concentraciones. Ionización...Una flama de alta temperatura puede ionizar a los metales alcalinos y alcalino-térreos: 14 . la emisión del Ca (naranja) interfiere con la del Na (amarilla) a 590 nm.. su emisión puede interferir.Como los elementos del combustible y oxidante en la flama también emiten... Autoabsorción. por ejemplo usando el mismo solvente. El Na. por lo que cualquier cosa que baje la tensión superficial ayuda. el quelato del elemento ya no reacciona y si se usa un quelante adecuado (ej. La viscosidad afecta la velocidad del flujo y su efecto se elimina haciendo que la viscosidad de la muestra sea similar a la de las soluciones patrón. Los enlaces a la información están al fondo de esa página. porque forman un producto menos volátil lo cual disminuye la cantidad de átomos en estado gaseoso en la flama. En flamas de baja temperatura esta interferencia es insignificante. se obtiene la concentración total de sodio pero no es posible saber cuanto está como NaCl y cuanto como NaOH Espectroscopía de Absorción Atómica RESUMEN. la viscosidad y la tensión superficial son los factores más importantes. por ejemplo calcio en la leche. nítrico y fosfórico principalmente hacen borrosa la emisión de los metales. ¿Como funciona? La muestra se envía a una flama mediante un atomizador. K y Ca. Interferencias Físicas. Estas interferencias pueden eliminarse agregando agentes quelantes. comúnmente una concavidad hacia arriba al inicio. ¿Esto podría dar lugar a una posible interferencia? Para responder se requiere que consultes las longitudes de onda donde emiten ambos elementos. Si la concentración es menor de 0.. aluminatos y similares atenúan fuertemente la emisión del Ca y otros metales alcalino-térreos. Algunos solventes orgánicos la aumentan y por tanto interfieren. EDTA) se descompone rápidamente en la flama. si se tiene una mezcla de NaCl y NaOH. puedes hacerlo aquí: Spectra of gas discharges. ¿Cuales son sus aplicaciones? • Diagnóstico clínico. Por ejemplo. Los fosfatos. Presencia de aniones en la flama. K y Ca son importantes para el metabolismo.Los ácidos y sus sales producen disminución de la emisión en cantidades relativamente altas. ¿Que es? Un método de análisis cuantitativo basado en medir la absorción de luz de los elementos en estado gaseoso. los ácidos sulfúrico. por ejemplo soluciones salinas isotónicas. Las propiedades físicas de la solución alteran la velocidad del flujo y la eficacia de la atomización de la muestra y por lo tanto se altera el número de átomos emisores en la flama. para que haya exceso de electrones en la flama y el equilibrio se desplace a la izquierda. ¿Para que sirve? 15 . ¿Que es? Un método cuantitativo utilizado principalmente para la determinación de Na. • Análisis de alimentos. La presión de vapor. ¿Cuales son sus limitaciones? • Permite determinar la concentración total de los elementos a los que es sensible pero no da información sobre las moléculas de las que forman parte. • Análisis de medicamentos. La tensión superficial alta produce gotas más grandes y viceversa. se quema la materia orgánica y los átomos emiten luz por efecto de la energía térmica.1M prácticamente no hay interferencias. si es mayor.El espectro de emisión del átomo neutro es diferente del ionizado y se producirá una desviación en la curva de calibración. Al llegar a la flama se evapora el solvente. Vas a medir concentraciones bajas de sodio usando un filtro de 589 nm en una muestra que contiene cantidades elevadas de magnesio. Esta interferencia puede eliminarse agregando un segundo elemento ionizable. tejido. sólo concentraciones de elementos. determinar concentraciones de cloruros Espectroscopía de Absorción Atómica Fundamento. determinar la concentración de plomo en la sangre humana. la medición suele durar de 10 segundos (flama) a 2 minutos o un poco más (horno de grafito).. • ¿Como funciona? Los átomos de los elementos presentes en la muestra se llevan a estado gaseoso ("vapor atómico") descomponiéndola mediante una flama o un horno eléctrico de grafito. • • • Marca la afirmación correcta. este método no distingue entre las substancias que lo contienen.. ¿Que ventajas tiene? • Mide concentraciones en el orden de . ¿Cuales son sus limitaciones? • No da información sobre el tipo de substancia.. Destructiva Limitada a los metales y metaloides Se requiere una lámpara distinta para cada elemento. Existen lámparas multi-elementos (para 2 o 3) pero tienen un tiempo de vida más corto. uñas.001 partes por millón. ya que uno de ellos se agota antes que los demás. Muestras ambientales (agua. orina y otros fluidos corporales. Química forense y toxicología. etc. 16 . Una vez calibrado el instrumento. suelos) ¿Cuanto tiempo requiere el análisis? Depende principalmente del tiempo de preparación de la muestra. La absorbancia sigue la ley de Bouguer-Lambert y Beer. Es idéntico en principio a la espectrofotometría de absorción visible y ultravioleta. El equipo de medición requiere poco volumen de muestra (microlitros). pelo. Se hace pasar luz de la longitud de onda absorbida por el elemento a través del vapor atómico y se mide la absorbancia.. Higiene industrial y estudios ambientales. ¿Que muestras se utilizan? En química forense y toxicología: Muestras biológicas. médicas y clínicas como sangre. Principio del formulario . ¿En que áreas se usa? • • • Industria metalúrgica. farmacéutica y de alimentos.. Sólo es posible obtener la concentración total del elemento. La absorbancia depende de la cantidad de átomos en el trayecto del haz de luz y. Por absorción atómica podemos.. los átomos absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten. .Para el análisis cuantitativo para casi 70 elementos metálicos o de transición. en condiciones adecuadas. en los cuales los átomos experimentan pocas colisiones. una celda (la flama). El espectro continuo se obtiene si la luz es producida al calentar gases densos. Espectros de emisión y absorción. and Absorption Spectra. Figura 2. Astronomy 162.. Diferencias con. UT Astrophysics ¿El mejor método para medir concentraciones de sodio en muestras biológicas (ej. Espectrofotometría de emisión de flama. En los métodos de emisión de flama se mide la población en estado excitado. Sirve para analizar cualitativa y cuantitativamente iones y moléculas orgánicas e inorgánicas. sangre) es . Algunos elementos como el Zn requieren mucha energía de excitación y sus transiciones ocurren en el ultravioleta. para el sodio a 2000 grados.. La absorción atómica permite analizar todos esos elementos.3x10-15 a 2000 grados). sólidos o líquidos(1). llamados "emisores débiles". como es más sensible tendré resultados más precisos que con la emisión de flama. un monocromador y un detector. los resultados son bastante precisos y el equipo es más barato. El espectro discontinuo de emisión atómica es producido por gases a baja presión. y la cantidad de átomos en estado basal es prácticamente el 100% y poco afectada por la temperatura. además de disminuir la relación (7.. Consta de una fuente de energía luminosa (lámpara). La absorción atómica sólo permite obtener concentraciones de los elementos metálicos o de transición.. K. la relación (estado excitado)÷(estado basal) es 9. Es en estas condiciones cuando los átomos del gas absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten. Sirve para analizar principalmente Na.? Principio del formulario La emisión de flama.Figura 1. La cantidad de átomos en estado excitado depende de la temperatura. La espectrofotometría de absorción atómica. Espectrofotómetro de absorción atómica. lo que la hace más sensible. Emission. El espectro de absorción atómica se obtiene cuando la luz proveniente de una fuente de alta temperatura pasa por un gas que se encuentra a temperatura mucho menor. Referencias (1) Origin of Continuum. en la espectrofotometría de absorción atómica se mide la población en estado basal. 17 .9x10-6. Espectrofotometría de absorción visible y ultravioleta. Ca y Li porque las emisiones de los demás elementos metálicos en el tipo de flama más común son muy débiles para ser medidas. En una flama siempre habrá mayor cantidad de átomos en el estado basal que en el excitado. la absorbancia dependerá sólo de la concentración del elemento. Y es directamente proporcional a los tres. • La concentración del elemento en la muestra. de modo que produzca una señal intermitente en el detector. Diagrama a bloques. donde se vaporiza. Los elementos pasan a estado gaseoso. La emisión en la flama da una señal continua y se puede eliminar electrónicamente. Estos últimos pueden absorber la energía radiante proveniente de una lámpara especial (“lámpara de cátodo hueco”).La solución con la muestra es aspirada y se envía a una fuente de energía térmica (flama u horno eléctrico). que emite luz sólo a las longitudes de onda características del elemento. ¿Para que sirve la lámpara de cátodo hueco? Principio del formulario Para evitar las interferencias Para iluminar la muestra Emite luz monocromática a las longitudes de onda características del elemento Lámpara de cátodo hueco Como la linea de absorción es muy angosta (comúnmente 0. El número de átomos absorbentes en el trayecto del haz de luz depende de: • El espesor de la flama. la luz continua de la lámpara de cátodo hueco se convierte en intermitente por medio de un dispositivo óptico giratorio. de otra manera se absorberá sólo un pequeño porcentaje y no habrá cambio apreciable en la lectura: donde: %Abs=porcentaje de luz absorbido.005 nm) se requiere que la luz aplicada tenga igual o menor ancho de banda. ABl=Ancho de banda de la linea. • La velocidad de flujo de la muestra hacia la flama. manteniendo constante el espesor de la “celda” (la flama) y la velocidad de flujo de la muestra. 18 . porque ocurre a las mismas longitudes de onda que la absorción. ABm=ancho de banda del monocromador. Para distinguirlas. pero la mayoría queda en estado basal. La emisión interfiere. algunos son excitados por la temperatura y emiten. Figura 3. La fuente luminosa es una lámpara de cátodo hueco. se encuentra rellena de un gas inerte a baja presión (argón o neón). © 2009 Luis Raul Chávez Garibay Figura 5. sólo podría hacerse el análisis a partir de 330 nm.R. La longitud de onda que más se absorbe es generalmente la correspondiente a la transición electrónica del estado basal al estado excitado mas bajo. sólo se absorbería el 0. D. tiene mayor eficiencia para producir “vapor atómico” (porque las gotas son más pequeñas). Lámparas de cátodo hueco Su construcción es como sigue: D. porque muchas lineas de interés ocurren en el ultravioleta.Para un monocromador con ancho de banda de 1 nm. Entonces la luz que emite es específica para ese elemento y tiene un ancho de banda menor que la linea de absorción (por estar a menor temperatura y presión que la flama). © 2009 Luis Raul Chávez Garibay Figura 7. Las sensibilidades de ambos son similares. el de consumo total y el de flujo laminar. Aunque no toda la muestra llega al quemador. Este es el de uso más común. El de consumo total usa toda la muestra.5% de la luz. Además. pero ésta recorre un camino más corto y las gotas más grandes no se vaporizan en la flama o lo hacen parcialmente. Características. de modo que se absorbe toda. El metal vaporizado sufre transiciones electrónicas a causa de las colisiones con los iones del gas y al regresar al estado basal emite a sus longitudes de onda características. a causa de la alta energía que acarrean. El de consumo total recibe su nombre porque el 100% de la muestra llega a la flama. El cátodo es hueco y está hecho de o contiene el elemento que se desea analizar. porque muchas lineas de interés ocurren en el ultravioleta Serviría parcialmente. Los iones positivos son atraídos por el cátodo negativo y al chocar con él vaporizan parte del metal.R. El de flujo laminar sólo permite flamas de baja velocidad. Lámpara de cátodo hueco. y se llama la linea de resonancia. Sus ventajas consisten en que pueden aspirar muestras viscosas y “altas en sólidos” con mayor facilidad (por ejemplo. son afectados por más factores que los de flujo laminar. 19 . pero sus longitudes de onda generalmente están alejadas de las del elemento y no interfieren. ¿Que pasaría si la ventana de la lámpara de cátodo hueco fuera de vidrio? No serviría para nada. Se usa más en fotometría de flama y rara vez en absorción atómica. Quemadores Hay dos tipos. © 2009 Luis Raul Chávez Garibay Figura 6. suero y orina sin diluir). Ambas cosas dispersan la luz y se registrarán como absorbancia. dejando partículas sólidas. Se aplica alto voltaje entre los electrodos y éste hace que el gas se ioniza en el ánodo.R. también permite el uso de flamas de baja y alta velocidad de ignición. El ánodo es de tungsteno y tiene una ventana de cuarzo. El gas también emite. D. especialmente con muestras biológicas o ambientales (debido a la materia orgánica residual o la presencia de sales). Detalles prácticos. Cuando cambia la concentración de las substancias en la matriz cambia también la altura y la forma de la banda de absorción. Cd. Secado. la vaporización empieza cuando la temperatura en el horno aún está aumentando y la velocidad de vaporización será lenta. La temperatura debe ser lo bastante alta para que remueva los compuestos volátiles pero no tanto que elimine a la substancia que se va a analizar. Para evitar la oxidación del grafito se aplica un flujo de argón durante su operación. Este se calienta haciendo pasar una corriente eléctrica a través de él y el calentamiento se hace en varias etapas: 1. Tratamiento térmico (Pirolisis). Tl. En un atomizador electrotérmico el volumen de muestra típico es de 5-20 (o unos pocos de sólido) y la eficiencia se aproxima al 100%. se aplica alta temperatura (1200-2800oC. As.Figura 8. Atomización. de modo que no ocurrirá dispersión de la energía radiante de la lámpara de cátodo hueco. que también sirve para evitar la formación de óxidos refractarios y para limpieza. se aplica una temperatura de 105-130oC durante 10-20 segundos para evaporar el solvente y eliminar la humedad. La muestra se introduce al equipo mediante una micropipeta o un muestreador automático. Se usan como alternativa a la atomización de la muestra en una flama como medio de obtener vapor atómico. de modo que los límites de detección mejoran de 100 a 1000 veces comparados con los métodos de flama. se aplica alta temperatura (2000-2800oC. Alternativamente. 10-20 segundos) para que las cenizas de la muestra se conviertan rápidamente en vapor atómico. Bi. La absorbancia se mide haciendo pasar la luz de la lámpara de cátodo hueco a través del tubo. 2. este es un “modificador de matriz”.1%). Algunos hornos de grafito tienen una plataforma en su interior. estos se volatilizan a menos de 600oC mientras que el NaCl requiere 1400oC. donde una gota de muestra primero se seca y después se vaporiza. In. En el horno queda la parte inorgánica (cenizas) de la muestra como residuo sólido. la adición de NH4H2PO4 permite que soporte hasta 600oC. Sb. las substancias volátiles inorgánicas y la materia orgánica que produce humo se eliminan. Ag. Limpieza. El modificador de Pd/Mg afecta al Cu. esto hace más eficiente la evaporación. para provocar un pequeño retardo en el tiempo de vaporización de la muestra. se puede hacer menos volátil al elemento de interés con un “modificador de analito”. Sus desventajas son: • Las interacciones entre los elementos de la muestra son más pronunciadas • La absorción del fondo es mayor. Atomizadores electrotérmicos. 4. Por ejemplo. También se aplica a la muestra un “modificador de matriz”. que sirve para aumentar la diferencia de volatilidad entre las interferencias y la substancia deseada (en química analítica se le llama “matriz” al resto de las substancias que componen la muestra). Sn. que consiste en un tubo horizontal de grafito. que se difunde en el tubo del horno. Como se modificó la matriz. de muestra y tiene baja eficiencia (0. Su papel es proporcionar la energía térmica para volatilizar la muestra. Pb. se aplica una temperatura de 350-1200oC durante 10 a 20 segundos. Hg. 2-5 segundos) para eliminar los residuos de la muestra y dejar el tubo preparado para la siguiente. Quemador de flujo laminar Tipos de flama Las más ampliamente usadas son la de aire-acetileno y la de óxido nitroso-acetileno. 20 . Se y Te. El tipo más utilizado es el horno de grafito. ya que ésta requiere de varios ml. Por ejemplo. el acetato de amonio se agrega a las muestras que contienen NaCl (que es difícil de remover y causa interferencias muy severas) para formar acetato de sodio y cloruro de amonio. Ge. 3. la absorbancia será proporcional a la cantidad de substancia en el tubo. Ga. De otra manera. Si la velocidad de vaporización es rápida y la de difusión constante. Son un horno eléctrico en miniatura. el cadmio se volatiliza a 250oC. Au. El humo se elimina con una corriente de argón. La interferencia ocurre dentro de un intervalo de longitudes de onda y su absorbancia será prácticamente la misma a varios Angström de diferencia de la linea del elemento. Esto a su vez da lugar en disminuciones en la sensibilidad o la linealidad. con el fin de que el aumento sea constante. el aluminio. La calibración del equipo requiere mayor cuidado que con los instrumentos de flama. la linea se divide en tres: un componente central (p) y dos laterales (s). Por ejemplo. que además están polarizados (las ondas luminosas tienen un plano de vibración definido) en distinta dirección. Otro método más popular de corrección de fondo es a partir de la absorción en una banda ancha. puede efectuarse en la región del UV (donde muchos elementos absorben y el problema de la absorción de fondo es más serio) con una lámpara de hidrógeno o deuterio. Esto evita la reacción con el fosfato. La muestra puede contener una substancia. puede ocurrir la ionización en flamas de alta temperatura. Una situación más seria ocurre cuando la substancia reacciona con los gases de la flama. el fosfato reacciona preferentemente con cualquiera de ellos y se evita la reacción con el calcio. La absorción de la linea de resonancia se considera despreciable comparada con la absorción del fondo en el ancho de banda del monocromador. Si la muestra contiene cantidades apreciables de elementos alcalinos o algunos otros. las lineas espectrales se dividen en sus componentes magnéticos. Esta técnica requiere de dos mediciones separadas y se usa raramente. titanio. porque la sal puede no ser desolvatada por completo o sus moléculas no se disocian completamente en átomos. Por otra parte. La luz polarizada en un sentido será absorbida por el vapor atómico. se puede usar una lámpara de tungsteno. para corregir la absorción del fondo se resta (automáticamente) la absorbancia obtenida con esta lámpara de la obtenida con la de cátodo hueco. la presencia de otros elementos ionizados en la muestra agrega electrones a la flama y se produce un aumento en la absorción (o emisión) y una interferencia positiva. A esto se le llama absorción de fondo. en vez de medir la altura máxima. El efecto Zeeman consiste en que si se aplica un campo magnético intenso. Por último. porque el calcio debe estar en forma atómica para absorber. gotas del solvente sin evaporar o moléculas en la flama causan interferencia. Generalmente este tipo de interferencia puede eliminarse o reducirse químicamente. Interferencias espectrales. sobre todo a longitudes de onda menores de 300 nm cuando soluciones de alto contenido de sales son aspiradas. También puede eliminarse usando una flama de alta temperatura.En este caso la mejor precisión se obtiene en ocasiones integrando la señal para obtener su área. Este tipo de interferencia ocurre en flamometría y en absorción atómica. se agrega la misma cantidad del elemento que interfiere a la solución patrón. Como lo que se mide son los átomos sin ionizar las señales de absorción (también las de emisión) decrecen en intensidad. o grandes cantidades a la muestra y al standard. Por ejemplo. Formación de compuestos refractarios. entonces. Otro método sería agregar una concentración alta de EDTA para que se forme un quelato con el calcio. una del mismo elemento pero a una longitud de onda distinta a la de resonancia y que no sea absorbida por la muestra o una linea cercana de una segunda lámpara de cátodo hueco. La ionización se detecta porque la curva de calibración tendrá una desviación positiva (una curvatura hacia arriba al aumentar la concentración). La dispersión de luz por partículas sólidas. También depende de los gases que se usen como combustible. una concentración alta (aproximadamente 1%) de cloruro de estroncio o nitrato de lantano puede agregarse a la muestra. con una flama de aire-acetileno 21 . que forme un compuesto refractario (estable al calor) con el elemento que se analiza en la flama. Para corregirla. funciona mejor abajo de 360 nm y hasta 1 de absorbancia. El monocromador de la lámpara se coloca a la misma longitud de onda que la linea de resonancia. y en la flama el quelato se disocia liberando al calcio. Interferencias. La corrección del fondo se hace por substracción electrónica de las absorbancias de ambas señales. porque a bajas concentraciones se ioniza una fracción mayor de los átomos. cuyo ancho de banda típico es 0. Para el visible. está la corrección por efecto Zeeman. mientras que la polarizada en el otro no se absorbe. En el ejemplo anterior.005 nm. vanadio y molibdeno reaccionan con los O y OH presentes en la flama para dar óxidos e hidróxidos metálicos térmicamente estables los cuales sólo se pueden descomponer usando flamas de alta temperatura. y puede corregirse midiendo la absorbancia de una linea cercana a la del elemento que se analiza. La separación entre ellos depende de la intensidad del campo magnético. La linea usada para la corrección puede ser una del gas de relleno de la lámpara de cátodo hueco. Cuando el campo magnético se aplica perpendicular a la radiación. Interferencias por ionización. generalmente un anión. Esta es la base de los correctores de fondo comerciales. el fosfato reacciona con los iones de calcio para producir pirofosfato de calcio (Ca2P2O7). pero que no sea absorbida por éste. Esto causa una reducción en la absorbancia. 0044 unidades de absorbancia). Interferencias físicas.estos elementos no presentan absorción apreciable y resulta más útil una flama de acetileno-óxido nitroso. La exactitud de la determinación depende de la complejidad de la matriz. El límite de detección está definido como la concentración requerida para dar una señal igual al triple de la desviación standard de la señal del blanco. generalmente la flamometría da mejores resultados. Esta flama se usa en condiciones reductoras (rica en combustible) en las que se produce una región grande de color rojo. NH y otros altamente reductores. Por lo general. Una solución homogénea a una concentración 5-10 veces por encima del límite de detección dará una exactitud mejor del 1%. Es una medida de la pendiente de la curva de calibración. La variación en la señal del blanco se debe en gran parte al ruido de los circuitos electrónicos del instrumento. Los parámetros que afecten la velocidad a que llega la muestra al quemador o la eficiencia de la atomización se consideran interferencias físicas. es preferible diluir la muestra. la que se debe a la presencia de radicales CN. Entre ellas están las variaciones de viscosidad de la muestra debidas a la temperatura o el tipo de solvente. Puede extenderse mediante programas de computadora. Sensibilidad y límite de detección La sensibilidad nos indica la variación de la señal para una variación dada en la concentración y en espectroscopía de absorción atómica está definida como la concentración en picogramos requerida para dar una variación del 1% en la absorción (0. El intervalo lineal de la curva de calibración es típicamente de 2 ó 3 órdenes de magnitud por encima del límite de detección. pero no se recomienda. cerca o alrededor del límite de detección disminuye al 1-3%. Estas pueden corregirse mediante calibración frecuente.Final del formulario Final del formulario 22 . también se le llama “masa característica”. pero no dice nada de la relación señal/ruido (la amplitud de la señal dividida entre la amplitud del ruido). los cuales combinados con la alta temperatura y la falta de especies con oxígeno en la flama previenen la formación de óxidos refractarios o los descomponen. En el visible. la espectrofotometría de absorción atómica tiene un límite de detección mas bajo en la región del ultravioleta. contenido de sólidos o la temperatura de la flama. 23 . 24 . Es idéntico en principio a la espectrofotometría de absorción visible y ultravioleta. en condiciones adecuadas. La absorbancia depende de la cantidad de átomos en el trayecto del haz de luz y. los átomos absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten.Final del formulario 25 . K y Ca. Por ejemplo. contiene un protocolo de laboratorio y se muestra la curva de calibración. por ejemplo soluciones salinas isotónicas. Vas a medir concentraciones bajas de sodio usando un filtro de 589 nm en una muestra que contiene cantidades elevadas de magnesio. por lo que cualquier cosa que baje la tensión superficial ayuda. por ejemplo calcio en la leche.Las propiedades físicas de la solución alteran la velocidad del flujo y la eficacia de la atomización de la muestra y por lo tanto se altera el número de átomos emisores en la flama.Final del formulario 26 . El Na. La viscosidad afecta la velocidad del flujo y su efecto se elimina haciendo que la viscosidad de la muestra sea similar a la de las soluciones patrón. K y Ca son importantes para el metabolismo. ¿Como funciona? La muestra se envía a una flama mediante un atomizador. puedes hacerlo aquí: Spectra of gas discharges. ¿Cuales son sus limitaciones? • Permite determinar la concentración total de los elementos a los que es sensible pero no da información sobre las moléculas de las que forman parte. si se tiene una mezcla de NaCl y NaOH. La presión de vapor. la viscosidad y la tensión superficial son los factores más importantes. Al llegar a la flama se evapora el solvente.¿Que es? Un método cuantitativo utilizado principalmente para la determinación de Na.Enlaces externos: cuantificación de sodio por fotometría de flama. Los enlaces a la información están al fondo de esa página. ¿Esto podría dar lugar a una posible interferencia? Para responder se requiere que consultes las longitudes de onda donde emiten ambos elementos. por ejemplo usando el mismo solvente. • Análisis de alimentos. ¿Cuales son sus aplicaciones? • Diagnóstico clínico. La tensión superficial alta produce gotas más grandes y viceversa. Algunos solventes orgánicos la aumentan y por tanto interfieren. se quema la materia orgánica y los átomos emiten luz por efecto de la energía térmica. contiene un protocolo de laboratorio y se muestra la curva de calibración. • Análisis de medicamentos. se obtiene la concentración total de sodio pero no es posible saber cuanto está como NaCl y cuanto como NaOH Enlaces externos: cuantificación de sodio por fotometría de flama. 27 . 28 . 29 . 30 . 31 . se encuentra en los flamómetros para muestras biológicas (“flamómetro clínico”). litio y calcio.: la de un mechero Bunsen). Este tipo de quemador es el más difundido. potasio. K y Ca. 32 . Este tipo de quemador es el más difundido.: la de un mechero Bunsen). Un flamómetro clínico sólo permite medir Na. Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad. litio y calcio. sobre todo en muestras biológicas. sobre todo en muestras biológicas.Las flamas de baja temperatura son más grandes que las anteriores (ej. Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad. potasio. a los elementos emisores fuertes: sodio. Un flamómetro clínico sólo permite medir Na. Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. esto limita las aplicaciones del equipo. La presión se controla mediante válvulas y con la ayuda de un manómetro. La presión se controla mediante válvulas y con la ayuda de un manómetro. se encuentra en los flamómetros para muestras biológicas (“flamómetro clínico”). esto limita las aplicaciones del equipo. a los elementos emisores fuertes: sodio.La s flamas de baja temperatura son más grandes que las anteriores (ej. K y Ca. 33 . 34 . 35 . incluyendo muchos emisores débiles como Mg. acetileno o propano. Permite el análisis de 46 elementos. Si 36 . la de un soplete de oxiacetileno). Al.Hay 2 tipos de flama: flamas de alta temperatura y flamas de baja temperatura. Las flamas de alta temperatura son pequeñas y su temperatura es del orden de los 3000oC (ej. etc. Utilizan oxígeno mezclado con hidrógeno. 37 . Aplicaciones. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. ANÁLISIS CUANTITATIVO. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANÁLISIS CUALITATIVO. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. de preferencia con carácter aromático.Fin al del formulario En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”.. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas.. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. formados por una fibra óptica 38 .Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. ANÁLISIS CUALITATIVO.Aplicaciones. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. de preferencia con carácter aromático.. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. ANÁLISIS CUANTITATIVO.. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. ANÁLISIS CUALITATIVO. ANÁLISIS CUALITATIVO. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados..de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas.Aplicaciones. ANÁLISIS CUALITATIVO.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.. de preferencia con carácter aromático. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados.Aplicaciones.. ANÁLISIS CUALITATIVO. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. de preferencia con carácter aromático. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. de preferencia con carácter aromático.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados.. ANÁLISIS CUANTITATIVO. ANÁLISIS CUANTITATIVO. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. ANÁLISIS CUANTITATIVO. de preferencia con carácter aromático. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas.. 39 .. ANÁLISIS CUANTITATIVO.Aplicaciones. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.Aplicaciones.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. . se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.Final del formulario 40 .Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. ANÁLISIS CUANTITATIVO. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. ANÁLISIS CUALITATIVO. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANÁLISIS CUALITATIVO. ANÁLISIS CUANTITATIVO.. de preferencia con carácter aromático. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son.. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas. de preferencia con carácter aromático.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados.Aplicaciones. de preferencia con carácter aromático.Aplicaciones.Es posible sólo si se tiene un espectrofluorómetro. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”.En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”.Aplicaciones. ANÁLISIS CUANTITATIVO. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. ANÁLISIS CUANTITATIVO.. ANÁLISIS CUALITATIVO. ANÁLISIS CUALITATIVO.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. El método visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningún instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra.Sirve principalmente para substancias orgánicas que tengan dobles enlaces conjugados.Aplicaciones. se hace por comparación del espectro de emisión de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentración de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medición llamados “optodos”. de preferencia con carácter aromático.. formados por una fibra óptica de diámetro muy pequeño (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular. Una de sus aplicaciones es el análisis de vitaminas... 41 . 42 . 43 . 44 . Final del formulario 45 .