CROMATOGR AFÍAHaga clic para modificar el estilo de subtítulo del patrón PREPARATIVA PRESENTAN: García Rojas Faviola Jacobo Martínez Cristopher Joel Rivero Badillo 4/16/12 desde la preparación de la suspensión del adsorbente que se hace con menos agua que de ordinario. esto ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para una carga de mayor magnitud. ¿Que es? La cromatografía preparativa se diferencia de la técnica básica en muchos aspectos. 4/16/12 . Se secan al aire antes de activarlas en el horno.La cromatografía preparativa comprende un amplio campo de aplicaciones. desde el aislamiento de 1 µg de muestra para identificación espectroscópica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. Generalmente se utilizan partículas cuyo tamaño oscila entre 10 y 25 µm. lípidos. Preparativa. alcaloides. Se trata de una fase estacionaria inorgánica de características polares. azúcares. y a la que es necesario activar por calefacción previa a su uso. tales como aminoácidos. Esta fase estacionaria resulta adecuada para separar numerosas sustancias. esteroides. ADSORBENTE S INORGÁNICOS (fe) 4/16/12 . La gel de sílice es la sustancia más empleada C . ácidos grasos. aceites esenciales. así como también cationes y aniones inorgánicos. es la alúmina. siendo posible la separación de sustancias hidrofílicas neutras. la cual bloquea los centros activos. Dicha activación normalmente se lleva a cabo calentando a unos 125-150 °C durante un tiempo determinado.El mecanismo predominante con esta fase estacionaria es la adsorción. también muy utilizado. 4/16/12 . Para obtener resultados reproducibles y separaciones óptimas. es necesario proceder a su activación. Otro adsorbente polar. ácidas y básicas eligiendo convenientemente el eluyente. con objeto de controlar la cantidad de agua adsorbida. 4/16/12 . el material que constituye la fase estacionaria se dispone en forma de suspensión (en agua o en otro disolvente) y se extiende sobre una lámina de vidrio o de plástico. Es fundamental que la capa sea lo más uniforme posible.Para la preparación de las placas. para lo cual suelen utilizarse dispositivos como el representado en la figura 12. placa s fig.21. 12.21 Preparación de placas para cromatografía de preparación. que puede ser rígido o flexible. 4/16/12 .Las placas utilizadas en cromatografía preparativa son placas grandes. 20x40 cm y 20x100 cm. Empleando adsorbentes inorgánicos Así como cámaras separadoras para el revelado simultaneo de varias placas de estos tamaños. de mezcla utilizando unos 35 g. que permiten separar aproximadamente 1 g.5-1 mm o 1-2 mm. de aproximadamente 20x20 cm. El espesor óptimo oscila desde un mínimo de 0. de adsorbente. La siembra se realiza a lo largo de una línea recta (existen en el mercado diverso utensilios para evitar torcerse). Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografía. Si al terminar la primera siembra todavía queda muestra. dichas manchas se marcan. La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa. siembr a 4/16/12 . Se utiliza un adsorbente con indicador fluorescente para ver en la lámpara ultravioleta donde han quedado las manchas de los diferentes compuestos. se seca la primera siembra y se aplica la segunda. intentando que ésta quede sobre la anterior.La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o tubo capilar. para así conseguir que el frente sea lo más estrecho posible. y se mezcla con un disolvente (metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtra varias veces para separar el compuesto y la fase estacionaria. éstos se extraen de la fase estacionaria. con la ayuda de una espátula raspar para obtener el polvo este se recoge y se coloca sobre un papel de filtro u otro soporte. • • • 4/16/12 . Una vez separado se elimina el disolvente (destilación). con lo cual se obtiene el componente separado.• Una vez localizados los compuestos. Posteriormente se coloca cada componente en un Erlenmeyer. uno a uno. Aislamiento sencillo de las manchas del cromatograma. Zonas de sustancias nítidas y fácilmente comprobables. VENTAJ AS • Que sustancias sensibles pueden alterarse sobre la gran superficie de la capa desventa ja 4/16/12 . por medio de ensayos previos en capas mas finas.• • • • • Rapidez Escaso consumo de eluyente Fácil deducción de los eluyentes apropiados. La elución se controla continuamente por espectroscopía infrarroja (FTIR).CARACTERIZACION DEL GASOIL Estudio de caso Para esta caracterización se ha desarrollado un método de separación que se basa en la utilización de columnas de cromatografía líquida preparativa por las que se pasan diferentes disolventes que eluyen las correspondientes fracciones. 4/16/12 . Kieselgel 60 Merk).063-0.LAS CONDICIONES DE TRABAJO SON LAS SIGUIENTES: • 4.200 mm. En 43. 7230 mesh ASTM.28 gr de gasoil se sometieron a cromatografía preparativa en columna abierta (2 cm de diámetro por 30 cm de longitud). • • • 4/16/12 . Dicha columna se preactivó 12 horas a 110 °C antes de su uso.6 gr de gel de sílice (0. La columna se empaqueto con el primer disolvente usado en la elución (hexano). El flujo del disolvente empleado fue de 5 ml/min y el volumen muerto de la columna fue de 60 ml. 4/16/12 .Los disolventes empleados y sus volúmenes fueron los siguientes: FRACCIÓN Hexano Tolueno 1 Tolueno 2 Cloroformo Tetrahidrofurano VOLUMEN (ml) 500 20 400 360 300 El hecho de que aparezcan dos fracciones de tolueno se debe a que en la elución con tolueno aparecen dos bandas bien diferenciadas que se recogieron separadamente. • Tras la elución se elimino el disolvente de las fracciones en rotavapor. Estas se recogieron con CHCl3 en viales y se secaron con N2 a temperatura ambiente y posteriormente. • 4/16/12 . en estufa de vacío durante 1 hora a 30 °C. 4/16/12 .