UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLOFACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA DE BIOLOGIA ALUMNA: CURSO: CICLO: PROFESOR: Peña Novoa Juana Biotecnología General X-B Eloy López Medina TRUJILLO – PERÚ 2014 raíces y yemas(Stwar J. 2012). puntas de brotes. han de propagarse o regenerarse vegetativamente. flores. los medios de cultivo y las condiciones ambientales de incubación (Stwar J. vitaminas. Bancos de cultivos in vitro) Para el cultivo in vitro de células. tejidos u órganos hay una serie de factores que hay que tener en cuenta. La elección del explante apropiado constituye el primer paso. Para el establecimiento de cultivo in vitro de tejidos. vitaminas en algunos casos y fitohormonas.ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO IN VITRO DE HOJAS Saintpaulia ionantha Wendi “violeta africana” EN CONDICIONES DE ASEPSIA INTRODUCCIÓN Diversas plantas de interés agroalimentario. El medio inorgánico más empleado es la mezcla de sales diseñada por Murashige y Skoog (MS). una fuente de carbono en el caso de no poder realizar fotosíntesis. tanto agronómicos como forestales.1 mm hasta piezas de tallo de 5 cm o más. hojas. en un medio nutritivo sintético y bajo condiciones ambientales (iluminación y temperatura) controladas (Pérez . semillas. Estas técnicas se conocen genéricamente como cultivo in vitro (Villamizar. Este medio se puede completar con glucosa. la elección está determinada por el objetivo perseguido y la especie utilizada. El medio de cultivo debe tener los nutrientes necesarios para que las células vegetales puedan desarrollarse con normalidad: sales inorgánicas. La expresión “cultivo in vitro de plantas” se utiliza para denominar de forma genérica a un conjunto muy diverso de técnicas vienen siendo una eficaz herramienta en el estudio de numerosos aspectos de la biología de las plantas y en la resolución de importantes problemas prácticos. se deben analizar aspectos importantes tales como: el explante. auxinas y/o citoquininas para el cultivo de distintos tipos de tejidos y células.2005). se recurre al cultivo de material vegetal en condiciones asépticas. ornamental o manipuladas genéticamente. tallos. anteras.El tamaño del explante varía desde los 0.2005). Lo que tienen en común estas técnicas es que. 2012). la asepsia. embriones. Los explantes pueden ser meristemos. (Villamizar. . en algunos casos es preciso emplear técnicas de propagación vegetativa para erradicar infecciones por virus y para introducir variaciones genotípicas que aumenten la calidad de los productos. dentro de un recipiente más o menos hermético. Asimismo. al menos en algún momento de su desarrollo. previamente se adquirieron las plantas de “violeta africana” y se las conservo en el jardín botánico durante 2 semanas con la finalidad de disminuir cualquier problema de contaminación (hongos. Se procedió a recolectar hojas de la planta de violeta africana y se colocaron inmediatamente en un depósito con agua de caño. Los tejidos a cultivar in vitro . esta planta es originaria del este de África pero se encuentran ampliamente distribuidas por todo el mundo a través de las asociaciones de floricultores y aficionados. se conocen más de 20 especies y cientos de variedades. las que se propagan por germinación de semillas o en forma vegetativa por esquejes.). MATERIAL Y METODOS Medio de cultivo El medio de cultivo de Murashige y Skoog. bacterias. aunque actualmente se vienen desarrollando diversas técnicas de cultivo “in vitro” para obtener violetas africanas a gran escala. Se determinó el explanto y se extrajeron 6 cuadraditos de las hojas obtenidas de aproximadamente 1 cm2. para evitar la deshidratación.con hipoclorito de sodio y se limpiaron con alcohol . El objetivo de esta práctica fue obtener plántulas a partir del cultivo invitro de explantes deSaintpaulia ionantha “violeta africana”. En un frasco se colocó algodón y se agregó alcohol de 96° . todos aquellos frascos y materiales que se iban a utilizar. Las violetas son plantas muy apreciadas porque presentan gran diversidad morfológica y con una amplia gama de tonalidades de flores que van desde violeta púrpura a blancas. Esterilización del lugar de trabajo Se desinfectó la mesa de trabajo . el cual preparamos y dispensamos en cinco frasquitos de penicilina. evitar su contaminación.Saintpaulia ionantha Wendi “violeta africana” es una planta ornamental de gran interés dentro del comercio y la jardinería. como también . fue proporcionado por el profesor. Colecta del material biologico Para el desarrollo de la práctica. etc. .el cual sirvió para colocar las pinzas y bisturi a utilizar. seguidamente se transfirieron a un depósito para su esterilización. a partir de pequeñas porciones de peciolo y tejido foliar (Badillo J. En la actualidad. polvo. 2009). Por último. se logaron obtener 1 frasquito de penicilina con explante sin ningún tipo de contaminación. se enjuagaron con agua destilada unas 5 veces y se desinfestaron con hipoclorito de sodio al 1% por dos minutos. Iniciación del cultivo Con la ayuda del bisturí se transfirieron . ambos para la desinfección de los explantes. Para establecer cultivos asepticos es conveniente. cada uno de los explantes a un frasquito de penicilina con medio de cultivo. Se rotularon y colocaron en un ambiente adecuado para su desarrollo. cuidadosamente para no dañar el material. También se colocaron dos mecheros separados 20 cm uno del otro. DISCUSION La asocacion explante – medio y las condiciones fisicas en que normalmente se incuban los cultivos conforman un ambiente propicio para la proliferacio de microorganismos (bacterias. suficiente para matar virtualmente todas las formas de vida. Los explantes a las tres semanas aún no se han desarrollado a plántulas. durante 45 minutos. durante la manipulación de los explantes. cualquier contaminación.competir con l explante por el medio de cultivo o modifcarlo(Villamizar. disminuyendo de esta manera. inmediatamente se enjuagó con agua destilada por 5 veces nuevamente.En otro frasco se agregó alcohol al 70 % y en otro . Los otros 4 frasquitos con explante se contaminaron con algún tipo de hongos. se flameó la boca del frasquito y su tapa antes de abrirlo y cerrarlo. hipoclorito de sodio al 1%. hongos). se usaron mascarilla y gorro para el cabello. esterilizar los medio de cultivo mas comunmente en un autoclavea una presion de 1 atm . RESULTADOS Luego de 2 semanas. trabajar en ambientes adecuados . .2005). Desinfestación de los explantos En una placa Petri estéril se colocaron los explantes con alcohol etílico de 70° por 30 segundos. Para evitar cualquier contaminación. los cuales pueden destruir tales cultivos . como también las pinzas con las que se trabajaron. El buen desarrollo del explante también depende de muchos factores tales como: las condiciones asépticas. medio de cultivo.y al presentarse un alto porcentaje de contaminación. impidió que hongos y otros contaminantes en las plantas de violeta africana sobrevivan. etc. iluminación. teniendo en cuenta los componentes tales como el agua destilada que representa el 95% del medio nutriente. y realizar los cultivos con ciertas normas de asepsia. logrando un 80 % de explantes en medio de cultivo contaminados. Según Villamizar. la concentración de hipoclorito de sodio al 1%. y conocer que se cumplió con el protocolo de desinfección. . se utilizaron diferentes tiempos en los que se colocaron los explantes en alcohol al 70 % . En ambos casos. ya que los explantes no son completamente autótrofos. CONCLUSIONES El medio de cultivo resultó ser el adecuado para el crecimiento de los explantes.se siguio un protocolo de desinfestación similar . mientras que según López D et al quién logró obtener un 95% de plántulas sin ningún tipo de contaminación.como también las concentraciones en las que se encontraba el hipoclorito de sodio. En esta práctica . liberandolos de bacterias y hongos exógenos . (Villamizar. como la fuente de carbono la sacarosa. y no pueden cubrir sus necesidades con la fotosíntesis que puede realizar in vitro.desinfectar los explantes . por lo tanto se asume que no se realizó una adecuada manipulación de los instrumentos y explantes al momento de la práctica.2005). tamaño del explanto. [fecha de acceso] 29-10-13. PROGRAMA DE INGENIERÍA DE PRODUCCIÓN BIOTECNOLÓGICA. Á.mx/congresos%20smbb/acapulco09/TRABAJOS/AREA_II/OII-06. Published online. O. Colombia. Academia de Biotecnología. Departamento de Bioprocesos. Orbe C. W. Disponible en: http://www. Establecimiento del cultivo de tejidos vegetales in vitro. L. Bancos de cultivos in vitro. Published online.es/personal/wwdiafga/web_mex12/Libro/seis.pdf Pérez C. . y MROGINSKI..net/establecimiento-delcultivo-de-tejidos-vegetales-in-vitro.Cultivo de tejidos en la agricultura. Moreno K. Disponible en: http://www3. Cortés H. Stwar J.11(2). & K. (2012)..com. Vanegas P. (2009). 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Report "Establecimiento de Cultivo in Vitro de Hojas Saintpaulia Ionantha Wendi"