B.PERICIAS DE ESPERMATOLOGÍA 1. CONCEPTO DE ESPERMATOLOGIA FORENSE Es la ciencia que se ocupa del estudio de la morfología y bioquímica del semen, en los casos relacionados a delitos contra las buenas costumbres, o de otros de carácter sexual (necrofilia, bestialismo, etc.). El semen al igual que la sangre se estudia tanto en el aspecto reconstructor como identificador. ESPERMA.- Se denomina esperma, semen o líquido seminal, al producto de la secreción del aparato genital masculino, que aparece en el hombre después de la madurez sexual, cuya función específica estriba en la fecundación. 2. VALOR CRIMINALÍSTICO Del minucioso estudio ordenado del semen o esperma, podrán obtenerse conclusiones importantes para la investigación del hecho. Surgirá así, si realmente hay semen en los efectos analizados, y si dicho humor es humano; se podrá determinar el grupo sanguíneo del sujeto al que pertenece puesto que el semen contiene la mayor parte de veces sustancias solubles que responden al sistema ABO a la vez, en base a los líquidos biológicos provenientes de la víctima, saber si hubo eyaculación interna, y con ello penetración; se podrá por la distribución de las manchas del semen y su mezcla con otros materiales biológicos, sangre, materia fecal, etc. deducir el grado de resistencia de la víctima o del sadismo del agresor; hasta será posible -en oportunidades- , saber si éste se hallaba drogado. El elemento fundamental en la identificación de esta secreción está en el hallazgo del espermatozoide, célula, cuyas características en el hombre son las siguientes: 1. Cabeza.- Es de forma ovoide vista de frente y piriforme de perfil; mide de 4-5 micras de longitud. 2. El segmento intercalar.- Es de forma cilíndrica, mide 5 micras de longitud. 3. Cola.- Tiene una longitud de 40-50 micras de Longitud. 3. MANCHAS SEMINALES a. CARACTERES MACROSCÓPICOS DEL ESPERMA Interesa para el personal que lleva a cabo la investigación conozca la característica: (1) Color y aspecto.- Al estado fresco se presenta como un líquido filante, blanco lechoso, ligeramente amarillento, que al disecarse se torna amarillo franco. Colocado en una placa tiene el aspecto heterogéneo, con pequeños grumos, opaco, haciéndose transparente, homogéneo al licuarse. (2) Olor.- sui géneris, que en la especie 0humana recuerda al castaño comestible o al desmanche. b. BÚSQUEDA DE MANCHAS (1) En la práctica lo frecuente es hallarlo al estado seco, en diversos materiales que con frecuencia se remiten al laboratorio pericial, en la investigación de los delitos sexuales, estos soportes son: Las prendas de vestir de la víctima, del acusado, o de ambos de los sospechosos de haber cometido el ultraje; hisopos o líquido del lavado vaginal de aquella, o exudados diversos de la misma (vaginal y rectal), en oportunidades por el contrario se requiere concurrir al lugar de los hechos, en busca de rastros en muebles, alfombras, pisos etc., y otros aparentes para llevar a efecto el acto sexual, toallas, pañuelos, papel higiénico, preservativo, otros. (2) Al mismo tiempo que se pone interés en las prendas de la víctima, se debe reparar en el cuerpo de ésta, verificando actos de violencia que casi siempre están presentes en los delitos contra el honor sexual y homicidio. Se debe buscar pelos arrancados, mugre en las uñas, que puedan corresponder al autor, también pelos de pubis sobre los orificios naturales (vulva, boca, ano) de la víctima. c. ASPECTOS DE LAS MANCHAS SEGÚN EL SOPORTE (1) Sobre la piel, formas débiles películas brillantes, de aspecto barnizado. (2) Sobre telas absorbentes (ropas de cama, ropa interior, pañuelos, tejidos de algodón en general, papel higiénico) el aspecto conocido de mapa geográfico, siendo irregulares de color grisáceo, bordes limpios "almidonado" al tejido. (3) Sobre telas no absorbentes (lanas, terciopelo, nylon), formando escamas o películas brillantes. d. RECOJO DE LAS MANCHAS (1) Si el soporte por su naturaleza no es posible trasladarlo al laboratorio, las mancha se macera con suero fisiológico o agua destilada, para impregnarlo en gasa o tela, ésta será secada completamente, para evitar la contaminación bacteriana (en caso de que la muestra sea remitida al laboratorio posterior a las 6 horas); en caso contrario podrá ser mandado el macerado en un frasco de vidrio con tapa hermética (en estado fresco). (2) Si está sobre la piel o superficie dura (lisa o rugosa) telas no absorbentes (lanas, terciopelo, nylon) formará películas brillantes, de aspecto barnizado, éstas se recogen mediante un raspado; y serán empacadas en bolsas plásticas o frascos adecuados; etiquetándolas y lacrando para evitar que sean alteradas en su contenido. (3) Si los soportes se encuentran impregnados y pueden ser recortados, se procederá a cortar los contornos de las manchas empacando y lacrando convenientemente. Foto Nº 189.- Truza femenina con manchas seminales indicada dentro de un circulo. 4. PROBLEMAS QUE PLANTEAN LAS MANCHAS DE ESPERMA EN CRIMINALÍSTICA a. Naturaleza espermática de la mancha. b. Especie animal a la que pertenece el esperma. c. Determinación del grupo sanguíneo por el Sistema ABO. d. Cantidad de esperma contenido en la mancha. e. Data de la mancha de esperma. f. Identidad genética del semen por ADN. 5. ANÁLISIS DE MANCHAS SEMINALES a. PRUEBAS DE ORIENTACIÓN Cuando se tienen que analizar muchos materiales o extensas superficies es útil la observación con luz ultravioleta; tal es el caso de denuncias de delitos sexuales en los que no se puede precisar exactamente el lugar donde se realizó el hecho, entonces debe revisarse alfombras, ropas de cama, pisos enteros, escaleras, etc. es cuando conviene el uso de una lámpara portátil de luz ultravioleta, provista de largos conductores eléctricos. Bajo la acción de radiaciones ultravioletas, las manchas de semen presentan una fluorescencia directa que si bien no es específica, pues existen otros materiales que producen similar efecto, constituye un recurso útil, para localizar manchas sospechosas. Luego del examen analítico se dirán si son o no de semen. La técnica signada debe ser utilizada para localizar posibles manchas seminales, pero no como una prueba de su presencia. La mezcla íntima de sangre y semen puede enmascarar el efecto fosforescente del segundo. Cuando en la sustancia problema existe orina, esta parece de color azul celeste. b. PRUEBAS DE CERTEZA (1) MÉTODOS MICROSCÓPICOS Observación de espermatozoides La maceración de la macha es el procedimiento más generalizado como para lo cual se cortan algunos pedazos de soporte introduciéndolos en un tubo con solución salina, se machaca con una vagueta, obteniendo así una suspensión con los espermatozoides; los que son separados por centrifugación; formando un pellet en el fondo del tubo. Se transfiere a una lámina porta objetos, se cubre con una lámina cubre objetos y examinar al microscopio. Se han detectado espermatozoides móviles en líquido de lavado vaginal hasta 24 horas después de la violación, e inmóviles 100 días después; el líquido será guardado en un tubo de ensayo sin agregado alguno. Esta información es útil en casos de violación seguida de homicidio; puesto que ilustra sobre la supervivencia del espermatozoide en el líquido vaginal de una mujer muerta. En rigor sorprende esta supervivencia dado el enorme desarrollo bacteriano, que lógicamente ha de producirse. Previa coloración Los preparados obtenidos sobre el portaobjetos, pueden ser coloreados adecuadamente, lo que permite luego un mejor estudio microscópico. La técnica elegida para la tinción es de May- Grünwald-Giemsa; se trata de una combinación de las propiedades tintóreas de Azur II eosina y azur II, que constituyen el Giemsa, con las de eosinato de azul de metileno que componen el May-Grünwald. Y luego de agregar el colorante en la forma indicada se agrega en igual cantidad agua destilada se mezcla mediante un suave movimiento de inclinación del portaobjetos. Luego se vuelca y sin lavar se cubre con el colorante de Giemsa durante 30 minutos. Luego se lava como se mencionará, con abundante agua corriente. En todos los casos conviene, luego de la preparación, sumergir el preparado en alcohol absoluto, para su deshidratación. Asimismo si la preparación no fuera suficientemente nítida, se aconseja sumergirla durante unos minutos en xilol. (2) MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS La cromatografía en papel y en capa fina es aplicable al estudio pericial de manchas de esperma que permite, en el caso frecuente de imposibilidad de visualizar satisfactoriamente espermatozoides, obtener datos experimentales que, o bien ratifiquen el resultado negativo de la investigación, o por el contrario obligan a continuar el estudio, mediante métodos supletorios de alto valor pericial. Todos los ensayos basados en las técnicas cromatográficas consisten en la ejecución de corrimientos sobre soportes y con líquidos resolutivos adecuados, en paralelo con testigo de esperma humano indubitable, o de sustancias puras componentes normales de semen. En tal sentido, la mayor parte de los métodos citados por la literatura especializada, usan como testigos a dos bases nitrogenadas que son: Colina y Espermina, y una enzima, la fosfatasa ácida, si bien es cierto que ninguna de tales sustancias son por sí misma indicaciones categórica de la presencia de esperma de la mancha analizada, puesto que ninguna de ellas es específica de tal humor, su ausencia permitirá confirmar el resultado negativo de la investigación. En cambio la presencia de ellas, en cantidades apreciables constituirá un factor de alta positividad. (3) MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS E. Villanueva y J.A. Gisbert-Calbuig, proponen método bidimensional sobre papel, combinación de electroforesis y cromatografía, lo que permite separar la espermina de los aminoácidos del semen y obtener una separación sumamente interesante de estos últimos, que puede considerarse de relevante valor para la identificación de dicho humor. (4) MÉTODOS ENZIMÁTICOS Como ya se mencionó el esperma contiene una elevada cantidad de fosfatasa ácida, no hallada hasta ahora en ningún otro material orgánico natural sea animal o vegetal. Este hecho hizo que Lundquist ya en 1945, viendo las cantidades colosales de fosfatasa con pH óptimo en la zona ácida, sugiriera el uso de esta apropiedad para la identificación de manchas de semen en Criminalística. Cabe considerar que, merced a los trabajos de Kutscher y Wolvergs, desde 1935 se conocía la riqueza del líquido seminal de tal enzima. Llámese fosfatasa ácida a cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgánico en medio ácido. En particular se denomina fosfatasa ácida prostática a la existente en el plasma seminal, que produce como se ha dicho la hidrólisis de la fosforil colina. Este ensayo es ideal en los casos en que deben de examinarse en objetos o ropas cuyo color y/o estructura no permite la visualización directa de las presuntas máculas de semen o cuando éstas se hallan muy contaminadas por suciedad u otras impurezas que enmascaran las características de textura, color, fluorescencia, etc. que se mencionaron anteriormente. c. DETERMINACIÓN DE LA ESPECIE A LA QUE PERTENECE EL ESPERMA Si bien es cierto no constituye un problema frecuente en la práctica diaria, en algunas oportunidades deben procesarse manchas de esperma no humano, generalmente de animales domésticos. Todas ellas arrojan reacción positiva en el ensayo cualitativo resultado sensiblemente mayores en caso de semen humano que en el de las muestras animales. A las técnicas de coloración arrojan diferencias respecto a la coloración que adquieren las distintas partes de los espermatozoides animales y humanos, ellos sumando a las diferencias morfológicas y dimensiones, permiten arribar a resultados satisfactorios diferenciales de los espermatozoides de cada especie, la confirmación se efectuará mediante el ensayo de precipitinas. El siguiente cuadro consigna las características de forma coloración adquirida mediante algunos métodos de tinción conocidos y las dimensiones de los espermatozoides de los mamíferos más comunes a los que se han añadido desde las del pollo, notablemente diferentes a las demás. Las dimensiones se expresan en micrones. d. DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO EN MANCHAS SEMINALES Un alto porcentaje de individuos -alrededor del 80%- presentan cierta concentración de sustancias específicas (antígenos) de los grupos del sistema ABH en otros líquidos biológicos, además de la sangre (sudor, lágrimas, orina, saliva, secreción vaginal y jugo gástrico) éstos son considerados secretores. Y los que no presentan antígenos del grupo ABO, son los no secretores. Así tales antígenos se hallan en: leucocitos, plaquetas, tejido muscular, mucosa del tracto digestivo, bazo, páncreas, riñón, glándulas suprarrenales, endotelio vascular, corazón, placenta, hígado, próstata, tiroides, hipófisis, piel, meconio. Los órganos no portadores son: testículo, cuerpo vítreo, cristalino, tejido óseo y cartilaginoso. El hecho citado es de gran importancia en la investigación pericial, en especial en los delitos sexuales, en los cuales la determinación del grupo sanguíneo del agresor en base al examen de las manchas de semen halladas en el lugar del hecho, ropas de la víctima, etc. y de otros humores, como la saliva, pueden servir para descartar la intervención de un sospechoso o para añadir un elemento de juicio más en contra del sujeto posible autor del hecho. Tal determinación es factible en el residuo salivar dejado en la marca de una mordedura, en la colilla de un cigarrillo, etc. e. INVESTIGACIÓN DE DROGAS EN MANCHAS SEMINALES. F.P. Smith y D.A. Pomposini, han desarrollado una serie de técnicas, mediante el sistema de radio-inmuno ensayo (RIA) las que permiten detectar fenobarbital y anfetminas en manchas de saliva, semen, sudor y hasta en pelos. El RIA se basa en la facilidad de detectar un compuesto radioactivo, presente en baja concentración y en la especificidad unívoca que caracteriza la reacción antígeno- anticuerpo. Tal hallazgo puede ser de gran importancia, indicaría en la investigación de un delito sexual. Los autores descartaron experimentalmente la reactividad endógena cruzada con la secreción vaginal. f. DATA DE LA MANCHA Se funda en que la lecitina de la mancha del esperma al descomponerse por la putrefacción origina colina. Por lo tanto cuanto más antigua es la mancha de esperma, más colina se encontrará, disminuyendo proporcionalmente la lecitina. g. CANTIDAD DE ESPERMA QUE TIENE LA MANCHA Se realiza mediante la determinación de calcio contenido en la mancha. Normalmente se encuentra en la proporción de 25 mg por 100 cc. de esperma. Esta sujeta a muchas variaciones individuales de orden cuantitativo. 6. EXAMEN ESPERMATOLÓGICO EN CENTROS ASISTENCIALES, MORGUES O ESCENA DEL DELITO Esencialmente es el mismo que en los casos examinados en el laboratorio, especialmente en los casos de cadáveres o heridos; pero en la escena del delito no debe omitirse la inspección en camas, confortables, divanes, alfombras y otros lugares donde pudo haberse llevado a cabo el acto sexual. También revisar toallas, pañuelos, papeles higiénicos y otros soportes que puedan haber servido para limpiar los órganos genitales después del acto sexual. Igualmente debe buscarse cuidadosamente en los lavatorios, bidés para detectar restos seminales. En lugares abiertos o a la intemperie, lo mismo que en el caso de la sangre, debe buscarse manchas espermáticas sobre las hierbas, tierra, arbustos, piedras, troncos caídos y hojas caídas. El estudio reconstructor de las manchas seminales sumando a otras comprobaciones después de la inspección, permiten deducir la verdad o falsedad en el caso de acusaciones, atentados al pudor y violaciones. Los pasos a seguir en este caso son: a. Solicitud telefónica u oficio por autoridades policiales, judiciales, etc. b. Concurrencia al lugar (Hospital, morgues, escena del delito, etc.) c. Indagaciones del hecho si es posible. d. Examen o inspección; si es en el lugar de los hechos deberá perennizarse las manchas sospechosas mediante fotografías o croquis. e. Formulación de la pericia. En el documento solicitante debe consignarse: a. La unidad solicitante: Unidades Policiales, Autoridades Judiciales, Del Ministerio Público, etc. b. Nombre y apellidos de la(s) persona(s) a examinar o ubicación del lugar a inspeccionar. c. Referencias sobre el caso que se investiga. Dentro de la espermatología, existe un examen especial llamado Espermatograma, que consiste en determinar cualitativa y cuantitati-vamente los espermatozoides en personas y está encaminado a probar las causas de esterilidad en los casos de acusaciones por paternidad y violación. Para llevar a cabo el espermatograma se realiza primero el examen físico, que se encarga de determinar el aspecto, color, volumen, viscosidad, pH del semen, motilidad y actividad del espermatozoide y luego el examen microscópico. Este estudio consiste en la observación de los espermatozoides en el microscopio mediante el recuento celular similar al que se efectúa con los elementos sanguíneos. La ausencia completa de espermatozoides se llama azoospermia y la disminución, oligozoospermia; la ausencia de motilidad se denomina adromozoospermia. El examen químico se realiza mediante la determinación de la fructosa, ácido ascórbico o fosfatasa ácida. La muestra para este examen deberá ser recogida después de cuatro (04) días de abstinencia sexual, en un frasco de boca ancha, limpio y seco, de preferencia esterilizado; las muestras en preservativos no son recomendables, ya que el polvo que existe sobre el caucho es espermicida. Esta muestra deberá ser tomada preferentemente en el Laboratorio Central-DINCRI, otro caso llevar la muestra lo más pronto posible (de preferencia en menos de dos horas), y mantener mientras tanto el frasco cerca del cuerpo, para que la temperatura sea lo más próximo a la normal. El perito o técnico deberá anotar en el reporte la hora de la recolección de la muestra o la hora de la llegada de la muestra al Laboratorio Central- DINCRI. Se evacuará el peritaje en el que se consignará las apreciaciones respectivas. 7. EQUIPO DE MATERIALES DE LABORATORIO a. EQUIPO - Microscopio Compuesto de Investigación. - Esteroscopio. - Lámpara de Wood-UV. - Baño María. - Espectrofotómetro. - Incubadora. b. MATERIALES Y REACTIVOS - Estuche de pinzas de uñas, tijeras y escalpelo. - Placas petri - Tubos de prueba - Láminas portaobjetos y cubreobjetos - Baguetas - Suero fisiológico. - Azul de metileno o cristal de violeta - Guantes - Fenoftaléina - Ácido acético.