ESPECTROFOTÓMETRO DE LUZ VISIBLE. EQUIPO 4 • Carlo Manuel Cortés Chontal • Guillermo García Sosa • Guillermo Gomez Morales • Marlen López Velasquez • Alin Prado Mendez . como consecuencia de la intensidad del rayo de luz. siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. y se basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagnético.Fundamento teórico La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo. sea atenuada desde Po a P. la muestra es generalmente disuelta para formar una solución. una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida. cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro compuesto . el cual es una curva que muestra la cantidad de energía radiante absorbida. Absorbancia. es decir. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción. por la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético. a una determinada longitud de onda de la energía radiante. cuando este haz pasa a través de un medio homogéneo La relación matemática que da cuenta de esta ley se muestra a continuación: P / P0 = e -k’c . la disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio.Ley de Lambert y Beer Ley de Lambert Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo. La siguiente relación matemática da cuenta de esta ley: P / P0 = e –kb Ley de Beer La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente. principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm. . por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la región ultravioleta-visible del espectro.Espectrofotómetro El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto. y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia Esta espectrofotometría utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm. En este instrumento puede cambiar fácilmente de Absorbancia a Transmitancia. todo mediante su teclado de membrana. confiable y económico. introducir factores de concentración.Espectrofotómetro VELAB VE5600UV El Espectrofotómetro de Luz Visible. VELAB (VE-5000) es un instrumento sencillo. construir y guardar curvas estándar en la memoria. y no hay necesidad de navegar en menús interminables. . ideal para usarse en laboratorios educativos y de control de calidad. almacenar datos. Puerto de salida de Datos: USB.05%[email protected] nm. Detector: Fotodiodo de silicón.0A.2%T Rango de visualización fotométrica: 0-200%T.002A/h @ 500nm. Puerto de la impresora: Puerto paralelo. Lámparas: Lámpara de Halógeno de Deuterio y de Tungsteno.Especificaciones del equipo Intervalo de Longitud de onda: 190-1100 nm Ancho de Banda: 2 nm . . Repetibilidad de Longitud de onda: 0. Configuración de Longitud de onda: Auto Calibración de la Longitud de onda: Automática al encendido. Precisión de longitud de onda: ±0. Precisión fotométrica: ±0. Visualización: Pantalla LCD 128*64. Estabilidad: 0.3-3. 360nm.3 nm.3%T Repetibilidad fotométrica: 0. Luz Difusa: 0. -0. Colocarla muestra y presionar ENTER . Presionar ZERO para eliminar error. Quitar el blanco. 6. Colocar la cantidad. 5. Introducir la longitud de onda con el botón GO TO λ. 3. Colocar el blanco. 8. Encender el Equipo 2.OPERACIÓN DEL EQUIPO VELAB 1. 7. Presionar ENTER. 4. 2) Un monocromador para aislar la longitud de onda de interés y eliminar la radiación indeseada de segundo orden 3) Un compartimento de muestras para acomodar la solución de muestra 4) Detector para recibir la luz transmitida y convertirla en una señal eléctrica 5) Una pantalla de visualización digital para indicar la absorbancia o la transmitancia. El diagrama de bloques abajo ilustra la relación entre estas partes. Fuente luminos Monocromador Compartimento Detector Procesamiento y visualización .Partes del equipo El espectrofotómetro consiste de 5 partes: 1) Lámpara de Halógeno o Deuterio para proporcionar luz. . centrífugas). • No instalar el equipo en un lugar donde existan campos magnéticos o radiación electromagnética intensa. • Evitar que el equipo esté ubicado en un lugar donde reciba radiación solar directa. • Examinar que el entorno no esté afectado por condiciones de humedad excesiva.Factores para el buen funcionamiento • Instalación eléctrica adecuada para que el voltaje no varié. polvo o alta temperatura. • Verificar que en la proximidad del espectrofotómetro no se encuentren instalados equipos que pudieran transmitir vibraciones durante su operación (Ej. • Controlar que el área de instalación esté libre de la influencia de gases o sustancias corrosivas. 0. • Enjuagar las cubetas varias veces con agua destilada. Incluir la pantalla.Mantenimiento • Usar una jeringa para limpiar el portamuestras. • Limpiar el exterior del instrumento con una pieza de tela humedecida con agua destilada. • Utilizar papel especial para la limpieza de lentes o un trozo de tela limpia de textura suave. Secar el portamuestras con un hisopo de algodón tipo medicinal. 0. • Cambio de baterías . para limpiar la ventana de la fotocelda. • Cambio de bombillo o lámpara.1 M. libre de hilazas. • Lavar las cubetas utilizando una solución alcalina diluida como NaOH. los controles y el teclado.1 M y un ácido diluido tal como HCl. Absorber la mayor cantidad de líquido que pueda extraerse. Usar siempre cubetas limpias cuando se requiere tomar medidas de absorbancia. si se utilizan solventes orgánicos. Los diluyentes utilizados agua o solventes deberán estar libres de impurezas. Reactivos de baja calidad pueden causar contaminación incluso en concentraciones muy bajas. • Limpiar cuidadosamente las cubetas de vidrio después de utilizarlas. • Mantener cerrada la tapa del portamuestras durante el proceso de medición. • Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. • Evitar el uso de cubetas plásticas. para asegurar una lectura adecuada. cada vez que se realiza el análisis de un grupo de muestras.Medidas de seguridad • Efectuar la calibración del espectrofotómetro. Desechar aquellas que presenten rayones en la superficie pulida. para efectuar análisis por debajo de los 310 nm. . • Evitar reutilizar las cubetas desechables. • Utilizar únicamente cubetas de cuarzo. Papel secante 5 matraces volumétricos de 100 mL. . instrumento Celdas para el instrumento.01 mL.Diseño de protocolo de análisis MATERIAL Y EQUIPO . 1 pipeta de 1 mL graduada en 0. Perilla para pipetear. .Manual de operación del . 2 Vasos de precipitado de 100 mL.1 espectrofotómetro VIS o VIS-UV. Reactivos Sol. Agua destilada. De Colorante Rojo Comercial para alimentos. . a partir de 1000 ppm y que resulten de la siguientes concentraciones: 2.Parte experimental Se entregara una solución de 10010 ppm del colorante comercial rojo. Prepare las soluciones después de que se les haya otorgado el Vo. . Realizar los cálculos para preparar 5 soluciones de 100 mL de cada una. 8 y 10 ppm. a sus cálculos y al procedimiento que proponga. preparada a partir del frasco original. Bo. 4. 6. Etiquete las soluciones con los números correspondientes a las concentraciones de las soluciones a preparar. a intervalos de 20. desarrolle la lectura de A.. . b).Desarrolle el grafico y determine la longitud de onda máxima de absorción (λmax) de la muestra en el espectrofotómetro.Espectro de absorción a).25.Utilizando la sol. en un espectro VIS en el rango de 380 a 740 nm..30 o 35. De 10 ppm y como blanco agua destilada. y grafique los nuevos valores de Y obtenidos. 4. Desarrolle el grafico de A Vs c. Los cálculos se harán por vía tradicional y también utilizando Excel. Realice los cálculos del Coeficiente de Correlación. utilizando agua destilada como blanco.Curva de Calibración Habiendo determinado la λmax de las muestras fíjela en el espectrofotómetro y desarrolle las lecturas de las soluciones del colorante: 2. 8 y 10 ppm. 6. . NOTA. Realice el ajuste de los datos por el Método de mínimos cuadrados o Regresión Lineal. http://www... División de Ingeniería y Mantenimiento.Referencias Castellanos. Fondo Nacional Hospitalario. Mantenimiento de equipo médico. Dermetiz Barradas Dulce Ma.) Espectrofotómetro VE-5600UV [en línea] VelaQuin. Disponible en: https://www.. pág.php?cat=MTg = [Consultado 12 de marzo de 2016] Disponible en: .f. Guía de practicas de Química Analítica Instrumental (Análisis Instrumental). Módulo Laboratorio Clínico. 1989.cl/odontologia/2010/2/OD0903/1/material_docente/bajar?id_material=566977 VelaQuin (s.) Fundamentos de Microscopía. Colombia. Bogotá.com. 9. espectrofotómetro.mx/productos. submódulo 2.u-cursos. Sistema de capacitación técnica. J. [pdf] Facultad de Ciencias Físicas y Matemáticas.f. Instituto Tecnológico de Veracruz. 2012 Universidad de Chile (s.velaquin.