ELETROFORESE CAPILARAndreia Lucas Andressa Nogueira Fábio Miranda Maria das Graças Química Instrumental- Noturno FATEC Diadema HISTÓRIA DA ELETROFORESE 1930- Tese apresentada pelo químico sueco Arne Tiselius; 1967- 1º tentativa de realização de separação em tubos por Hjertén; 1981- Reconhecimento da técnica após a publicação no Journal of Analytical Chemistry, pelos químicos Jorgenson e Lukacs. O QUE É? Separação baseada na diferença de migração de compostos iônicos ou ionizáveis ,ao aplicar corrente elétrica TIPOS DE ELETROFORESE CAPILAR Eletroforese capilar de zona (CZE) Eletroforese capilar em gel (CGE) Focalização isoelétrica capilar (CIEF) Isotacoforese capilar (CITP) Cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) Cromatografia eletrocinética em microemulsão (MEEKC) Eletroforese capilar em meio não-aquoso (NACE) AONDE É EMPREGADA A ELETROFORESE CAPILAR? Amplificação de DNA; Estudos de genética e evolução de fungos fitopatogênicos; Estudos de resistência à doenças. COMPOSTOS ANALISADOS Hidrocarbonetos aromáticos; Vitaminas hidro e lipossolúveis; Aminoácidos dentre outros. VANTAGENS E DESVANTAGENS DA EC Vantagens: Versatilidade Baixo custo analítico Desvantagens: Não se aplica a todos os tipos de compostos Não é muito adequada para a análise de polímeros não iônicos de massa molar alta Detectores mais comuns utilizados em Eletroforese Capilar Modo de detecção UV-Vis Limite de detecção em mol/L–1 –5 –7 10 -10 –13 –16 –8 –10 –7 –10 –7 –9 Fluorescência (LIF) 10 -10 Espectrometria de Massas (MS) 10 -10 Amperométrico 10 -10 Condutométrico 10 -10 EQUIPAMENTO ELETROFORESE CAPILAR Fonte:http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S010040422005000400023&script=s ci_arttext ELETROFORESE HORIZONTAL Fonte:http://www.prolab.com.br/produtos/equipamentospara laboratorio/cuba-de-eletroforese APARELHO ELETROFORESE VERTICAL Fonte:http://www.bioagency.com.br/conteudoNot.asp?IDMenu=4&idRepCat=9 ELETROFORESE CAPILAR EM GEL (CGE) Técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um gel (matrizes poliméricas hidrofílicas, dissolvidas em um tampão apropriado) durante a aplicação de um diferencial de potencial. Os géis são estruturas delicadas, sujeitas a mudanças de morfologia pela ação da: Temperatura pH Força Iônica Concentração do meio ELETROFORESE CAPILAR EM GEL (CGE) Separação de Fragmentos de DNA Fonte:http:/www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/eletroforese.php/ ELETROFORESE CAPILAR EM GEL (CGE) Identificação de pessoas em testes de paternidade; Identificação de criminosos; Industria Farmacêutica (Vacinas, Reagentes de diagnóstico); Agropecuária (Animais e plantas transgênicos ELETROFORESE CAPILAR EM GEL (CGE) Vantagens: O formato do capilar, preenchido com gel possibilita a dissipação eficiente do calor gerado pelo efeito Joule. Geometria do capilar e das propriedades anti-convectivas do gel. Desvantagens: Aparecimento de bolhas (perda de condutividade). Retenção de fragmentos com alto peso molecular. Degradação do gel por hidrólise. ELETROFORESE CAPILAR EM GEL (CGE) Tipos de Eletroforese em Gel Gel de Agarose: Polissacarídeo que forma uma rede que prende moléculas durante a migração, dependendo da concentração da Agarose. Gel de Poliacrilamida: mistura de dois polímeros, possibilitando a criação de diferentes gradientes de separação ELETROFORESE ZONA, SOLUÇÃO SIMPLES PRINCÍPIO DA SEPARAÇÃO DA ZONA ESQUEMA DE SEPARAÇÃO ELETROFORESE CAPILAR DE ZONA A ordem de eluição pode ser revertido após adição de sais de alquilamónio. A "cabeça" polar de alquimonio é atraído para as paredes da coluna. Parte "cauda" apolar os sais formam uma barreira hidrofóbica, que se junta a uma nova camada de moléculas de sal Gerando uma alteração na carga da parede da coluna. O resultado final é que a parede do capilar tem um tipo de carga positiva final SEPARAÇÃO DE SOLUTOS NEUTROS (MEKS) NA PRESENÇA DE TENSOATIVO ANIÔNICO (ECM) ELETROFORESE CAPILAR NO PAPEL O papel é introduzido numa solução aquosa tamponada. A amostra é colocada num ponto da suporte. Um potencial DC (100-1000V) é geralmente aplicada durante a separação (usualmente medido correntes da ordem dos mA) . as espécies iónicas migrão para pontos específicos de suporte. Depois de um tempo apropriado para separar o suporte é removido e secado. Se necessário, o de papel é tratada com um agente corante a fim de observar os turnos bandas RESULTADO DE ANÁLISE REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS http://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-11Eletroforese-Capilar-Modo-de-Compatibilidade.pdf http://www.splabor.com.br/blog/equipamentos-paralaboratorio/cuba-de-eletroforese-caracteristicas/ http://www.bioagency.com.br/conteudoNot.asp?IDM enu=4&idRepCat=9 http://profiva.dominiotemporario.com/doc/Genetica1 4.pdf http://pt.slideshare.net/ChristopherSnchez1/electrof oresis-capilar- Obrigado Pela atenção!