Versión Final Comité - Diciembre 2006NORMA CHILENA NCh3044/1-2006 ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004 Leche y productos lácteos - Determinación del contenido de nitritos y nitratos - Parte 1: Método usando reducción por cadmio y espectrometría Preámbulo El Instituto Nacional de Normalización, INN, es el organismo que tiene a su cargo el estudio y preparación de las normas técnicas a nivel nacional. Es miembro de la INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos organismos. Esta norma se estudió a través del Comité Técnico Ensayos en leche, para especificar un método de ensayo para la determinación del contenido de nitritos y nitratos en leche y productos lácteos, mediante reducción por cadmio y espectrometría. Esta norma es idéntica a la versión en inglés de la Norma Internacional ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004 (E) Milk and milk products - Determination of nitrate and nitrite contens - Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry. La Nota Explicativa incluida en un recuadro en cláusula 2 Referencias normativas y Anexo Bibliografía, es un cambio editorial que se incluye con el propósito de informar la correspondencia con norma chilena de las normas internacionales citadas en esta norma. La norma NCh3044/1 ha sido preparada por la División de Normas del Instituto Nacional de Normalización, y en su estudio el Comité estuvo constituido por las organizaciones y personas naturales siguientes: Instituto Nacional de Normalización, INN Nestlé Chile S.A. José Manuel Román M. Manuel González G. I NCh3044/1 En forma adicional a las organizaciones que participaron en Comité, el Instituto recibió respuesta durante el período de consulta pública de esta norma, de las entidades siguientes: Universidad de Santiago de Chile Vialat S.A. El Anexo A no forma parte de la norma, se inserta sólo a título informativo. II 3 Queso 8 8.4 Preparación de la porción de ensayo 10 III .1 Leche deshidratada y suero deshidratado 7 8.1 Preparación de la columna de cadmio cuprizado 8 9.2 Caseína y caseinatos 7 8.3 Regeneración de la columna 10 9.2 Comprobación de la capacidad de reducción de la columna 9 9.NCh3044/1 Contenido Página Preámbulo I 1 Alcance 1 2 Referencias normativas 2 3 Términos y definiciones 2 4 Principio 3 5 Reactivos 3 6 Aparatos 6 7 Muestreo 7 8 Preparación de la muestra de ensayo 7 8.4 Queso de suero 8 9 Procedimiento 8 9. 9 Preparación del gráfico de calibración 13 10 Cálculo y expresión de resultados 13 10.7 Ensayo en blanco 12 9.1 General 15 11.8 Determinación 12 9.2 Contenido de nitrato 14 11 Precisión 15 11.1 Contenido de nitrito 13 10.5 Extracción y desproteinización 11 9.2 Repetibilidad 15 12 Informe de ensayo 17 Anexo A (informativo) Bibliografía 19 Anexos Figuras Figura 1 Columna de reducción IV 18 .NCh3044/1 Contenido Página 9.6 Reducción de nitrato a nitrito 12 9. semi descremada y descremada. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prácticas de seguridad y salud. 1 . caseínas y caseinatos y queso de suero deshidratado. NOTA . El método se puede realizar utilizando equipo automático.Estos métodos se describen en ISO 14673-2/IDF 189-2 e ISO 14673-3/IDF 189-3. - quesos duros. El método es aplicable a: - leche deshidratada entera. 1 Alcance Esta parte de la norma especifica un método de ensayo para la determinación del contenido de nitratos y nitritos en leche y productos lácteos.Determinación del contenido de nitritos y nitratos . mediante reducción por cadmio y espectrometría.Diciembre 2006 NORMA CHILENA NCh3044/1-2006 ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004 Leche y productos lácteos . No es propósito de esta norma acercarse a todos los problemas de seguridad asociados con su uso. y previo al uso. operaciones y equipos peligrosos.Parte 1: Método usando reducción por cadmio y espectrometría Advertencia: El uso de esta norma puede implicar materiales. determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias. respectivamente. - queso de suero.Versión Final Comité . ambos reduciendo así la contaminación por cadmio en los lugares de trabajo del laboratorio y en las aguas de desecho. - queso procesado. semi duros y blandos. en particular mediante análisis de flujo segmentado (SFA) o análisis de inyección de flujo (FIA). perforated metal plate and electroformed sheet . 3. Para referencias fechadas. NOTA EXPLICATIVA NACIONAL La equivalencia de las normas internacionales señaladas anteriormente con norma chilena.Part 1: General requirements. 2 . ISO 565 ISO 648 ISO 835-1 ISO 1042 Test sieves .2 contenido de nitrito: fracción de masa de nitrito determinada por el procedimiento especificado en esta norma NOTA .NCh3044/1 2 Referencias normativas Los siguientes documentos referenciales son indispensables para la aplicación de este documento. Laboratory glassware .1 contenido de nitrato: fracción de masa de nitrato. (incluidas las enmiendas).One-mark volumetric flasks.Nominal sizes of openings. Para referencias no fechadas se aplica la última edición del citado documento. se aplica sólo la edición citada. Laboratory glassware .Metal wire cloth.El contenido de nitrato se expresa como masa en miligramos de iones nitrato (NO3−) por kilogramo de producto.Graduated pipettes .One-mark pipettes. determinada por el procedimiento especificado en esta norma NOTA .El contenido de nitrito se expresa como masa en miligramos de iones nitrito (NO2−) por kilogramo de producto. Laboratory glassware . y su grado de correspondencia es el siguiente: Norma internacional Norma nacional Grado de correspondencia ISO 565 No hay - ISO 648 No hay - ISO 835-1 No hay - ISO 1042 No hay - 3 Términos y definiciones Para los propósitos de este documento se aplican los términos y definiciones siguientes: 3. junto con 400 ml de solución de trabajo de ácido clorhídrico (ver 5.NCh3044/1 4 Principio Una porción de ensayo es dispersada en agua caliente. Preparar los gránulos de cadmio. 5 Reactivos Usar solamente reactivos de reconocido grado analítico. Transferir la capa de cadmio a un mezclador de laboratorio. y luego filtrada.1).2) y para regenerar la columna (ver 9.2 Gránulos de cadmio. El contenido de nitrito de la muestra y el contenido total de nitrito después de la reducción de los iones nitratos. si no están disponibles comercialmente. para comprobar la capacidad de reducción de la columna (ver 9.3). 5.1. tanto del filtrado no reducido. de 0. o agua de pureza equivalente. el cadmio utilizado debiera ser enviado como desecho químico a las autoridades pertinentes. Raspar la capa de cadmio de las varillas.A causa de su toxicidad. Para evitar la posible inclusión de pequeñas burbujas de gas en la columna de cadmio cuprizado (ver 9. Usar el agua así preparada para la preparación de la columna (ver 9.7) y mezclar durante unos pocos segundos para obtener gránulos del tamaño requerido.1.3 mm a 0. Retirar las varillas de zinc y dejar decantar el residuo de cadmio formado. ocacionalmente.naftil etilendiamina dihidrocloruro. Cubrir las varillas con una solución de sulfato de cadmio (ver 5. destilada o desionizada. como sigue: Colocar una cantidad apropiada de varillas de zinc en un vaso de precipitado. revolviendo ocasionalmente para eliminar burbujas. Lavar dos o tres veces el residuo de cadmio con agua. Retirar la mayoría del líquido e inmediatamente.3). salvo especificaciones en otro sentido. cuprizar los gránulos. PRECAUCION . Dejar agua suficiente para cubrir la capa de cadmio. se calcula por comparación de las absorbancias medidas. Devolver el contenido del mezclador al vaso de precipitado y dejarlo en reposo por varias horas. Los iones nitrato son reducidos a iones nitritos en una porción del filtrado. El contenido de nitrato se calcula a partir de la diferencia entre estos dos contenidos. con aquellas de un set de soluciones de calibración de nitrito de sodio. libre de iones nitrato y nitrito. por medio de cadmio cuprizado. se desarrolla un color rojo. con precipitación de grasas y proteínas. Por la adición de sulfanilamida y N-1. por un período de 24 h. Las mediciones espectrométricas se realizan a una longitud de onda de 538 nm. 5.1 Agua. como de la solución reducida.6) hervir suavemente el agua destilada o desionizada y enfriarla a temperatura ambiente. como se describe en 9.8 mm de diámetro. 3 . 4). 5. c (CuSO4 x 5H2O) = 20g/L. 5. 5. Disolver 33. c (ZnS04 x 7H2O) = 535 g/L. Disolver 20 g de sulfato de cobre (II) en agua. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. 4 .4).4 Solución de sulfato de cobre (II). (HCl). en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. Enfriar el contenido a temperatura ambiente. c (K4[Fe (Cn)6] x 3H2O) = 172 g/L.4).5) a aproximadamente 700 ml de agua. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar cuidadosamente. (ρ20=1. 5.5 Acido clorhídrico.2 g de hexacianoferrato de potasio trihidratado (II).10 Solución de disodio (Na2C10H14N2O8 x 2H2O) etilendiamina tetraacetato dihidratado (EDTA).NCh3044/1 5.7 Solución de trabajo de ácido clorhídrico. en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6.5 g de EDTA en aproximadamente 900 ml de agua. Disolver 40 g de solución de sulfato de cadmio en agua. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. 5. Agregar 50 ml de ácido clorhídrico diluido (ver 5. c (CdSO4 x 8H2O) = 40g/L.11 Solución I Cuidadosamente agregar 450 ml de ácido clorhídrico (ver 5. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.5) en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6.5 g de sulfato de zinc en agua. c (HCl) ≈ 2 mol/L Agregar cuidadosamente 160 ml de ácido clorhídrico (ver 5. en agua.6 Acido clorhídrico diluido.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.4).8 Solución de sulfato de zinc. c (HCl) ≈ 0.6) a un matraz volumétrico de 1 000 ml.9 Solución de potasio hexacianoferrato (II). Disolver 53. 5.4) agitando regularmente el contenido.19 g/ml) 5. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.1 mol/L. en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.3 Solución de sulfato de cadmio. en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6.4). Disolver 17. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. 5. 19) a un matraz volumétrico (ver 6. El contenido de nitrito en la solución de trabajo de nitrito de sodio es 1 µg/ml. 5. (KNO3) Secar unos pocos gramos de nitrato de potasio en un horno (ver 6.5). Filtrar la solución obtenida. si es necesario. 5. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.150 g de nitrito de sodio en agua.15 Solución de trabajo de nitrito de sodio Preparar la solución de trabajo de nitrito de sodio en el día de uso. en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6.16) entre 110°C y 120°C.17 Solución de trabajo de nitrato de potasio Preparar la solución de trabajo de nitrato de potasio en el día de uso. hasta que la diferencia entre dos pesadas sucesivas no exceda de 1 mg). 5.468 g de nitrato de potasio en agua en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. si es necesario.13 Solución III Disolver en agua 0.16 Solución stock de nitrato de potasio. La solución se puede almacenar en un refrigerador por más de una semana en una botella café bien tapada.4). 5.4) de 1 000 ml. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.16) entre 110°C y 120°C hasta masa constante (es decir. Enfriar a temperatura ambiente. 10 ml de la solución stock (ver 5.NCh3044/1 5.4). Disolver 0. 5.16) y 20 ml de la solución tampón (ver 5.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar El contenido de nitrato en la solución de trabajo de nitrato de potasio es 4. Transferir con una pipeta (ver 6. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. Disolver 1.50 µg/ml.1 g de N-1-naftiletilendiamina dihidroclórica (C10H7NHCH2CH2NH2 x 2HCl). (NaNO2) Secar unos pocos gramos de nitrito de sodio en un horno (ver 6. 5 ml de la solución stock de nitrato de potasio (ver 5. 0.5 g de sulfanilamida (NH2C6H4SO2NH2) en una mezcla de 75 ml de agua y 5 ml de ácido clorhídrico (ver 5. Filtrar la solución obtenida.5).15).14) y 20 ml de la solución tampón (ver 5.4).5) en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6. en un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6.14 Solución stock de nitrito de sodio. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.12 Solución II Disolver por calentamiento en un baño de agua (ver 6. Transferir con una pipeta (ver 6.19) a un matraz volumétrico de 1 000 ml (ver 6. 5 . hasta masa constante (es decir. hasta que la diferencia entre dos pesadas sucesivas no exceda de 1 mg).4). 19 g/ml)]. grado medio. 5 ml. entre 9. 6. 10 ml.19 se puede utilizar una cantidad equivalente de una solución de amoníaco más concentrada [por ejemplo. con lectura de 0. se puede utilizar buretas en lugar de pipetas.6 Cilindros de medición. 6.7 Diluir 50 ml de ácido clorhídrico (ver 5.10 ml. capaz de pesar con una exactitud de 1 mg. 100 ml. con vástago corto. con celdas de trayectoria óptica de 1 cm a 2 cm de longitud.1 Balanza analítica. si fuere necesario.7. de 5 ml.5 Pipetas. 6 Aparatos Limpiar cuidadosamente todo el material de vidrio y enjuagar con agua destilada para asegurarse que esté libre de iones nitritos y nitratos. 500 ml y 1 000 ml de capacidad. 6.4 Matraces volumétricos. que cumplan con los requisitos de ISO 1042. hecha de vidrio. un ejemplo de la cual se muestra en Figura 1.1 mg. provisto de tapa hermética.3) y mezclar. (NH3). clase B.18) y diluir a 1 000 ml con 215 ml de agua y mezclar. 6. 6.10 Espectrómetro. 500 ml y 1 000 ml de capacidad. Cuando sea apropiado. 6. Ajustar el pH. 6 ml. de 7 cm de diámetro.7 Embudos de vidrio. 6 .91 g/ml) Si no se dispone de una solución de amoníaco de la concentración antes mencionada. o ISO 835-1. 6. de diámetro aproximado de 15 cm. de 250 ml. 6.9 Columna de reducción.8 Papel filtro. de 100 ml.3 Matraces cónicos. (ρ20 =1. 25 ml. adecuado para medir absorbancia en una longitud de onda de 538 nm. 6. (ρ20 = 0. 500 ml. 12 ml. 20 ml y 25 ml.6 a 9.19 Solución tampón. Equipamiento usual de laboratorio y en particular el siguiente: 6.2 Contenedor de muestra. Agregar 135 ml de solución de amoníaco (ver 5. 103 ml de una solución de amoníaco de 35% (fracción de masa). pH 9. y 1 000 ml de capacidad nominal. 4 ml. 5. que cumplan con los requisitos de ISO 648 clase A.NCh3044/1 5. 8 ml.5) con 600 ml de agua en un matraz cónico (ver 6.18 Solución de amoníaco.6 y 9. capaces de entregar 2 ml. libre de iones nitrato y nitrito. en 5. 250 ml. o casi completamente. 7 Muestreo El muestreo no es parte del método especificado en esta norma. 6.2) con capacidad aproximada de dos veces el volumen de la muestra de ensayo.1 Leche deshidratada y suero deshidratado Transferir la muestra de ensayo a un contenedor de muestra (ver 6.2 Transferir 50 g de la muestra de ensayo al tamiz de ensayo (ver 6. capaz de hervir agua. 7 . No se debe usar molino de martillo.2) de capacidad adecuada. 6.12 Mezclador de laboratorio u homogeneizador. mediante agitación e inversión reiterada del contenedor.13).11 Dispositivo de molienda. apropiados para poner en suspensión porciones de ensayo de queso o queso de suero. con contenedores de vidrio de 250 ml o 400 ml de capacidad.1) a través del tamiz. 8.2. 6. Para evitar pérdidas de humedad. Si la porción de 50 g pasa directamente a través del tamiz. aberturas de tamaño nominal de 500 µm y un recipiente que cumpla con los requisitos de ISO 565.NCh3044/1 6. de tejido de malla metálica de 200 mm de diámetro. Almacenar la muestra de ensayo de tal modo que se prevenga deterioro o cambios en la composición.2. 8 Preparación de la muestra de ensayo 8. capaz de mantener la temperatura entre 110°C y 120°C. Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea realmente representativa y que no haya sido dañada o cambiada durante el transporte o almacenamiento. 6.2. 6.2 Caseína y caseinatos 8. 8. si es necesario. Un método de muestreo recomendado se indica en ISO 707. adecuado para moler la muestra de ensayo. pasar la totalidad de la muestra de ensayo mezclada (ver 8.15 Baño de agua.16 Horno. el dispositivo no debe producir calor indebido. hasta que se obtenga una muestra homogénea.1 Si es necesario. Cerrar el contenedor inmediatamente. Mezclar completamente la muestra de ensayo mediante agitación e inversión reiterada del contenedor. mezclar ésta cuidadosamente.13 Tamiz de ensayo.14 Agitador magnético. después de transferir toda la muestra a un contenedor (ver 6. 1. 9 Procedimiento 9.3. 8 .7) para cubrir el cadmio.2.1 Antes de los análisis. Limpiar el dispositivo después de la molienda de cada muestra.3).3. 8. Agregar suficiente solución de trabajo de ácido clorhídrico (ver 5.3 Queso 8.3 Tan pronto como sea posible después de la molienda. mezclarla cuidadosamente revolviendo y amasando intensamente.4 Queso de suero Preparar la muestra de ensayo como se especifica en 8. tomar todas las precauciones para asegurar adecuada conservación de la muestra de ensayo y para prevenir la acumulación de humedad en la superficie interior del contenedor.3 Si la muestra de ensayo no pasa completamente a través del tamiz. Durante esas operaciones. 8.2 Decantar la solución (ver 9.3. Lavar el cadmio en el matraz cónico con agua hasta que esté libre de iones cloruro (es decir.1.2.2) de 40 g a 60 g por cada columna a un matraz cónico de 250 ml (ver 6. 8.3.NCh3044/1 8.4 Después que la muestra de ensayo haya sido preparada. remover la corteza o capa superficial mohosa de la muestra de ensayo.1.2) y mezclar cuidadosamente en el contenedor cerrado.11) para conseguir tal condición. Inmediatamente transferir el total de la muestra de ensayo tamizada al contenedor de muestra (ver 6. usar el dispositivo de molienda (ver 6.2 Moler la muestra de ensayo mediante un dispositivo apropiado (ver 6. 8.4 No examinar queso molido que muestre crecimiento no deseado de mohos o que se empiece a deteriorar.1 Transferir una cantidad de gránulos de cadmio (ver 5. hasta que la reacción con nitrato de plata sea negativa). 8. la cual preferentemente se debiera hacer inmediatamente.1).1 Preparación de la columna de cadmio cuprizado 9.11). 9. moler una segunda vez y nuevamente mezclar cuidadosamente.2. proceder con la preparación de la porción de ensayo (ver 9. 8. Agitar por algunos minutos. Si la muestra de ensayo no puede ser molida. Si es inevitable una demora. Mezclar la masa molida rápidamente y si es posible. transferir la muestra de ensayo a un contenedor de muestra (ver 6.3.2) hermético para esperar la determinación. de modo de proporcionar una muestra de ensayo representativa del queso como es generalmente consumido. tomar precauciones para evitar cualquier cambio en el contenido de agua del producto.4) tan pronto como sea posible. Eluir el contenido del depósito a través de la columna a un flujo que no exceda de 6 ml/min. Diluir su contenido con agua hasta el aforo y mezclar bien. 60 ml y mezclar.1.3). 9.7 a 9.5 ml de solución cúprica por gramo de cadmio.2.19) y 20 ml de solución EDTA (ver 5. 9.9.1.19) al contenido del depósito. 9. Llenar la columna de vidrio con agua. El nivel del líquido no debe descender por debajo de la parte superior del cadmio cuprizado.3) y lavar el cadmio cuprizado inmediatamente con agua. 9. Recoger el eluyente en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6.NCh3044/1 9. Agitar durante 1 min.7 Acondicionar la columna recién preparada haciendo correr a través de ella.9) destinado a contener el cadmio cuprizado (ver Figura 1).4 Remover el matraz volumétrico de 100 ml (ver 9.5 Colocar 10 ml de eluyente (ver 9. lavar las paredes del depósito con aproximadamente 15 ml de agua.5 Ajustar un tapón de lana de vidrio al fondo de la columna de vidrio (ver 6.17).4). teniendo cuidado que el cadmio esté continuamente cubierto con agua.4) dentro de otro matraz volumétrico (ver 6.17) dentro del depósito en la parte superior de la columna.1. repetir el lavado con otros 15 ml de agua.1. Correr el contenido completo del depósito a través de la columna a la máxima velocidad de flujo. Diluir el eluyente con agua hasta. Evitar burbujas de aire atrapadas entre los gránulos de cadmio cuprizado. llenar completamente el depósito con agua.10). 20 ml de solución tampón (ver 5.4). como también al inicio y al término de una serie de determinaciones.4).1.2.2.2.3 Cuprizar los gránulos de cadmio agregando la solución de sulfato de cobre (II) (ver 5. Inmediatamente agregar 5 ml de solución tampón (ver 5. 9 . una mezcla de 750 ml de agua. aproximadamente. 9. 9. La altura del cadmio cuprizado debe ser de 15 cm a 20 cm. Recoger aproximadamente 100 ml de eluyente. Cuando el segundo lavado haya corrido dentro de la columna.6 Transferir el cadmio cuprizado a la columna de vidrio con una mínima exposición al aire. Terminar el lavado cuando el agua de lavado esté libre de cobre precipitado.2 Comprobación de la capacidad de reducción de la columna 9.2.1 Comprobar la capacidad de reducción de la columna al menos dos veces al día. Proceder como se especifica en 9. a una velocidad que no exceda 6 ml/min. 9. 225 ml de solución de trabajo de nitrato de potasio (ver 5.3 Cuando el depósito de la columna de reducción esté cercano a quedar vacío. Lavar la columna con 50 ml de agua.4 Decantar la solución (ver 9.1.2 Colocar 20 ml de solución de trabajo de nitrato de potasio (ver 5. de la cual se requiere aproximadamente 2.2. Después que el agua haya salido. 9. 9.2. si la comprobación (ver 9. 9. Transferir la porción de ensayo cuantitativamente a un matraz cónico de 500 ml (ver 6. Cubrir el matraz cónico con una lámina de aluminio o un vidrio reloj y colocarlo durante 15 min al baño de agua (ver 6.15) hirviendo. lavar la columna sucesivamente con agua.NCh3044/1 9. 9.3. repetir el procedimiento especificado en 9.1 del eluyente diluido (ver 9.4. o más frecuentemente.3.2.067 µg de NO2− por mililitro corresponde a 100% de capacidad reductora) a partir del contenido de nitrito obtenido en 10.3). Agregar progresivamente a la porción de ensayo. con una exactitud de 0. con agua.2.2) indica pérdida de eficiencia.2 Agregar aproximadamente 5 ml de solución EDTA (ver 5.1). Dispersar la porción de ensayo revolviendo con una varilla de vidrio o agitando el matraz cónico.10) y 2 ml de solución de trabajo de ácido clorhídrico (ver 5.6 Calcular el porcentaje de capacidad de reducción de la columna (0.9. aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8.3). Remover el matraz del baño de agua y esperar que la temperatura haya descendido entre 50°C y 60°C.7.3. 136 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C. regenerar la columna como se especifica en 9.4 Si la eficiencia de la columna aún no es satisfactoria.4 Preparación de la porción de ensayo 9. aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8. Dispersar la porción de ensayo revolviendo con una varilla de vidrio o agitando el matraz cónico. 9.3. 9.3.4.4).3 Regeneración de la columna 9. 10 . Correr esta solución así obtenida a través de la columna a una velocidad de flujo aproximada de 10 ml/min. 136 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C.2 Suero deshidratado Pesar.7) y otra vez. Transferir la porción de ensayo cuantitativamente a un matraz cónico de 500 ml (ver 6.1 Leche deshidratada Pesar. con solución de trabajo de ácido clorhídrico (ver 5. Agregar progresivamente a la porción de ensayo. con una exactitud de 1 mg. 9.7) a 100 ml de agua y mezclar.3 Cuando el depósito esté vacío. Si la capacidad de reducción es menor de 95%.1 Regenerar la columna al final de cada día de uso.1 mg.1). 9.1.5) y determinado del gráfico de calibración (ver 9. 4.12) hasta que la porción de ensayo esté bien dispersada. con una exactitud de 1 mg.3. 144 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C.3). 9.1 Agregar a la porción de ensayo (9. aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8.3 Caseínas Pesar.4.4. caseinas y caseinatos y queso de suero 9. Transferir la porción de ensayo cuantitativamente al contenedor de vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6. 9.12) hasta que la porción de ensayo esté bien suspendida.1 Leche deshidratada. Dispersar la porción de ensayo mediante agitación utilizando el agitador magnético (ver 6. aproximadamente 2 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8. aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8. pero no por más de 1 h.4. 12 ml de solución de sulfato de zinc (ver 5.8). 9. 9. Para obtener un filtrado claro dejar la mezcla en el matraz cónico por. recogiendo el filtrado en un matraz cónico de 250 ml (ver 6. Agregar progresivamente a la porción de ensayo. Mezclar en el mezclador u homogeneizador (ver 6.4 ó 9. agitar cuidadosamente después de cada adición y mezclar. suero deshidratado.3). respectivamente).1. 12 ml de solución de hexacianoferrato de potasio (II) (ver 5.19). con una exactitud de 1 mg.4.6 Queso de suero Pesar.12). Transferir la porción de ensayo cuantitativamente a un matraz cónico de 500 ml (ver 6. Transferir la porción de ensayo cuantitativamente al contenedor de vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6. 9. al menos 15 min. Agregar progresivamente a la porción de ensayo.4.5 Queso Pesar.4 Caseinatos Pesar. 9. 9. en el orden siguiente.2.12).1 mg. 134 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C.4). Agregar progresivamente a la porción de ensayo.6. Agregar progresivamente a la porción de ensayo.14). 11 .4. 136 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C y 10 ml de solución tampón (ver 5.NCh3044/1 9.5 Extracción y desproteinización 9. Luego pasar a través de un papel filtro (ver 6. Dispersar la porción de ensayo mediante agitación utilizando el agitador magnético (ver 6.19).9) y 40 ml de solución tampón (ver 5.2).3).5. 136 ml de agua precalentada entre 50°C y 55°C y 10 ml de solución tampón (ver 5.8).1. Transferir la porción de ensayo cuantitativamente a un matraz cónico de 500 ml (ver 6. con una exactitud de 1 mg.4.19).3). con una exactitud de 0.2).4. aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo preparada (ver 8. Mezclar en el mezclador u homogeneizador (ver 6.5.14). 5.5. 9.6.2). si es analizado un queso bien maduro). Eluir el contenido completo del depósito a través de la columna a la máxima velocidad de flujo.1 ó 9. 6 ml de solución de sulfato de zinc (ver 5. Pasar el contenido del depósito a través de la columna a una velocidad de flujo que no exceda de 6 ml/min. Para obtener un filtrado claro dejar la mezcla en el contenedor de vidrio por al menos 15 min.1) preparada.8. pero no por más de 1 h.6.9) y 40 ml de solución tampón (ver 5.8).El volumen total del filtrado debe ser de aproximadamente 200 ml. Recoger aproximadamente 100 ml de eluyente en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6. 12 .8). Para este propósito puede ser necesario utilizar un mayor volumen de cada reactivo de precipitación (ver 5.2 Cuando el depósito de la columna de reducción esté cercano a quedar vacío. pero reemplazando en 9. 9.2 y Nota). agitar cuidadosamente después de cada adición y mezclar.1 Colocar volúmenes iguales (por ejemplo 25 ml) del filtrado obtenido en 9.4). Mezclar revolviendo con una pequeña varilla de vidrio.2) dentro del depósito en la parte superior de la columna de reducción (ver 9.1.2 y del eluyente (ver 9.1 la porción de ensayo por un volumen igual de agua 9.7 Ensayo en blanco Llevar a cabo un ensayo en blanco en paralelo con la determinación.6 Reducción de nitrato a nitrito 9.4.9) (por ejemplo.5. ajustándose a la necesidad de mantener el volumen de filtrado en aproximadamente 200 ml. 9.8 Determinación 9. 9. llenar completamente el depósito con agua.1. Agregar 5 ml de solución tampón (ver 5.5) en el orden siguiente. Este volumen es asumido en los cálculos (ver 10. Luego pasar a través de un papel filtro (ver 6.2 Es esencial obtener un filtrado claro dentro del tiempo especificado.19) al contenido del depósito.NCh3044/1 9.3 Remover el matraz volumétrico de 100 ml. Después que el agua haya salido.6.4).6. Agregar agua a cada uno de los matraces para obtener un volumen de aproximadamente 60 ml y mezclar.8. lavar las paredes del depósito con aproximadamente 15 ml de agua.5. Reducir el volumen del agua precalentada.19). Recoger el eluyente en un matraz volumétrico de 100 ml (ver 6.8 y 5. repetir el lavado con otros 15 ml de agua. recogiendo el filtrado en un matraz cónico de 250 ml (ver 6.2 Queso Agregar a la porción de ensayo (ver 9.5.4). Cuando el segundo lavado haya corrido dentro de la columna.3) (ver 9.5. Diluir con agua su contenido hasta el aforo y mezclar bien. 9.1 Colocar 20 ml del filtrado (ver 9.5.1 ó 9.1 y 10.3) en matraces volumétricos de 100 ml separados (ver 6. NOTA . 6 ml de solución de hexacianoferrato de potasio (II) (ver 5. (ver 6. en miligramos de iones nitrito por kilogramo. utilizando la ecuación siguiente: ω N1 = 20 000 c1 mV en que: ω N 1 =contenido de nitrito de la muestra. 9.11) a la solución del matraz (ver 9.2 y 9. a una longitud de onda de 538 nm.8.8. en contraste con las concentraciones de nitrito.9. en microgramos por mililitro. en el plazo de 15 min. de 100 ml.9. medir la absorbancia de las soluciones de trabajo de nitrito de sodio.9.8.9.13) a la solución del matraz (ver 9.1 Colocar 0 ml (blanco). Mezclar las soluciones cuidadosamente y dejar el matraz durante 5 min a temperatura ambiente y protegido de la luz solar. 5 ml de solución II (ver 5. en contraste con la del blanco.2 Proceder como se especificó en 9. 4 ml.4). en el plazo de 15 min. 13 . Agregar agua a cada uno de los matraces para obtener volúmenes aproximados de 60 ml.12). 9. 9.9 Preparación del gráfico de calibración 9. calculadas de las cantidades agregadas de solución de trabajo de nitrito de sodio (ver 9. 12 ml y 20 ml de solución de trabajo de nitrito de sodio (ver 5.3. a una longitud de onda de 538 nm.1).3 Utilizando el espectrómetro (ver 6.2).9.4 Registrar las absorbancias obtenidas en 9.1 Cálculo del contenido de nitrito Calcular el contenido de nitrito de la muestra.1.9. ω N 1 .1) y seguidamente. 9. 10 Cálculo y expresión de resultados 10.5) utilizando el espectrómetro (ver 6.15) en matraces volumétricos separados. Diluir con agua el contenido del matraz hasta el aforo de 100 ml y mezclar.3 Agregar 2 ml de solución III (ver 5.4 Medir la absorbancia de la solución obtenida en 9.8.1 Contenido de nitrito 10.3.8.2 Agregar 6 ml de solución I (ver 5.10). 2 ml. 9.8.8.3 en contraste con la del test en blanco (ver 9.NCh3044/1 9. Mezclar nuevamente estas soluciones cuidadosamente y dejar el matraz por 5 min a temperatura ambiente y protegido de la luz solar. 6 ml.10). 9.8. 8 ml. NCh3044/1 c1 =valor numérico de la concentración leída desde el gráfico de calibración.2 Expresión de resultados Expresar los resultados con una cifra decimal 10. utilizando la ecuación siguiente: ⎡⎛ 100 000 c2 ⎞ ⎤ ⎟ − ω N1 ⎥ ⎟ ⎢⎣⎝ mV ⎥⎦ ⎠ ω N 2 = 1.2 Cálculo del contenido de nitrato.4).1). en microgramos de iones nitrito por mililitro.2. calcular el contenido de nitrato de la muestra ω N 2 utilizando la ecuación siguiente: ⎡⎛ 100 000 c2 ω N 2 = 1.8. en mililitros.2. 10. correspondiente a la absorbancia medida de la solución de ensayo (ver 9.1 Cálculo del contenido de nitrato Calcular el contenido de nitrato de la muestra. en miligramos de iones nitrato por kilogramo.35 ⎢⎜⎜ en que: ω N 2 = contenido de nitrato de la muestra.4) en gramos. en mililitros.8. V =volumen de la porción alícuota tomada del filtrado (ver 9.4). en microgramos de iones nitrito por mililitro.4) en gramos. m =masa de la porción de ensayo (ver 9. V = volumen de la porción alícuota tomada del eluyente (ver 9.9.35 ⎢⎜⎜ ⎣⎢⎝ 14 mV × ⎤ 100 ⎞ ⎟ − ω N1 ⎥ ⎟ r ⎠ ⎦⎥ . c2 = valor numérico de la concentración leída desde el gráfico de calibración. m = masa de la porción de ensayo (ver 9. considerando la capacidad de reducción de la columna Si se toma en cuenta la capacidad de reducción de la columna.2 Contenido de nitrato 10.1).1. 10. ω N 2 . correspondiendo a la absorbancia medida de la solución de ensayo (ver 9.8. obtenidos utilizando el mismo método sobre idéntico material. por el mismo operador. NOTA . por el mismo operador. en el mismo laboratorio.3 Expresión de resultados Expresar los resultados en números enteros. en el mismo laboratorio. . al término de una serie de determinaciones. 11. caseinatos y queso con un contenido de nitrato < 30 mg/kg 3 mg/kg.para leche deshidratada. 11 Precisión 11.2. dentro de un corto intervalo de tiempo será. suero deshidratado. caseinatos y queso con un contenido de nitrato ≥ 30 mg/kg 10% de la media aritmética de los resultados.Los valores para repetibilidad y reproducibilidad han sido adoptados de las antiguas normas internacionales para la determinación de contenido de nitrito y nitrato en productos lácteos.para leche deshidratada.2 Repetibilidad 11.NCh3044/1 en que: r = valor numérico de la capacidad de reducción de la columna. 11.1 General Los valores para los límites de repetibilidad y reproducibilidad se expresan para un nivel del 95% de probabilidad y no pueden ser aplicables a rangos de concentración y matrices diferentes de aquellas dadas. Estas normas internacionales fueron anuladas y reemplazadas por ISO 14673-1:2001. mayor que 1 mg/kg de producto. 15 . en no más del 5% de los casos. ISO 6739.2. empleando el mismo equipamiento. dentro de un corto intervalo de tiempo será. caseínas. caseínas. 10. mayor que: . suero deshidratado. en no más del 5% de los casos. ISO 6740 e ISO 8195.2. ISO 6736.1 Nitritos La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes. ISO 4099.2 Nitratos La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes. empleando el mismo equipamiento. obtenidos utilizando el mismo método sobre idéntico material. para leche deshidratada con un contenido de nitrato ≥ 30 mg/kg: 25% de la media aritmética de los resultados. . con diferentes operadores empleando diferente equipamiento será.para leche deshidratada con un contenido de nitrato < 30 mg/kg: 8 mg/kg. 11.para caseínas y caseinatos: 25% de la media aritmética de los resultados. .para suero deshidratado con un contenido de nitrato ≥ 30 mg/kg: 15% de la media aritmética de los resultados.para suero de < 30 mg/kg: queso con un contenido de nitrato 10 mg/kg.NCh3044/1 . . en no más del 5% de los casos. . .2. 16 . .para suero de ≥ 30 mg/kg: queso con un contenido de nitrato 15% de la media aritmética de los resultados. obtenidos utilizando el mismo método sobre idéntico material de ensayo.para suero deshidratado con un contenido de nitrato < 30 mg/kg: 5 mg/kg. .para queso con un contenido de nitrato < 30 mg/kg: 6 mg/kg.para queso con un contenido de nitrato ≥ 30 mg/kg: 25% de la media aritmética de los resultados.para queso < 30 mg/kg de suero con un contenido de nitrato 5 mg/kg. en diferentes laboratorios. .3 Reproducibilidad La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples. mayor que: . .para queso ≥ 30 mg/kg de suero con un contenido de nitrato 15% de la media aritmética de los resultados. 17 . - el método de muestreo usado. o considerados como opcionales. junto con detalles de todos los incidentes que puedan haber influenciado el (los) resultado(s).NCh3044/1 12 Informe de ensayo El informe de ensayo debe especificar: - toda información necesaria para la completa identificación de la muestra. si es conocido. con referencia a esta norma. - todos los detalles operativos no especificados en esta norma. o si se ha comprobado la repetibilidad. - el método de ensayo usado. los resultados citados obtenidos. - el (los) resultado(s) del ensayo obtenido(s). NCh3044/1 18 . NCh3044/1 Anexo A (Informativo) Bibliografía [1] ISO 707:1997 Milk and milk products .Guidance on sampling. NOTA EXPLICATIVA NACIONAL La equivalencia de la norma internacional señalada anteriormente con norma chilena. y su grado de correspondencia es el siguiente: Norma internacional ISO 707:1997 Norma nacional NCh1011/2 Grado de correspondencia Equivalente 19 .
Report "Determinacion Del Contenido Nitritos y Nitratos - Lacteos"