DETERMIANCIÓN DE ETANOL18 de abril de 2012 DETERMINACIÓN DE ETANOL POR MICRODIFUSIÓN POR ESPECTROFOTOMETRIA SEGÚN FELDSTEIN Y KLENDSHOJ 1. Introducción Dentro de los tóxicos volátiles, los alcoholes Etanol y Metanol son sustancias de Importancia toxicológica dada su acción farmacológica depresora del sistema nervioso central (SNC) y el abuso creciente del consumo de bebidas alcohólicas. Esto último, presenta importancia médico - social debido a que los individuos alcoholizados pueden ser causa de trastornos y accidentes, de los cuales son imputables. Las vías de penetración posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorción a través de la piel. En el caso del etanol, la intoxicación más frecuente ocurre cuando el individuo ingiere cantidades excesivas de esta sustancia por el consumo de bebidas alcohólicas fermentadas y/o destiladas. Los tipos de muestras generalmente usados para estas determinaciones son: sangre (alcoholemia), orina, otros fluidos biológicos, vísceras, alimentos, etc. Las muestras de sangre se obtienen por punción venosa, teniendo la precaución de no utilizar alcohol como antiséptico local ni otras soluciones constituidas por sustancias reductoras que puedan interferir en la determinación posterior. Se recomienda usar solución jabonosa o solución acuosa de cloruro mercúrico 0.05%. La conservación de las muestras de sangre requiere el empleo de recipientes de plástico con cierre hermético (no usar tapones de goma) conteniendo fluoruro de sodio (anticoagulante y preservador) o bien oxalato y citrato (anticoagulante) y su almacenamiento refrigerado a T = 4ºC. El fluoruro de sodio impide el desarrollo de microorganismos que pueden consumir o generar etanol. Los tapones de goma contienen vulcanizantes que son sustancias reductoras capaces de dar falsos positivos en los métodos químicos. El cierre hermético es necesario dado el carácter volátil del etanol y además, es importante que no exista cámara de aire en el recipiente de UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. 1 (Giannuzzi.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 recolección de las muestras dado que el oxígeno presente podría oxidar al etanol y también para minimizar pérdidas por volatilización. Marco teórico El alcohol es la principal droga de consumo por parte de la sociedad. En el organismo.01N. vía urinaria. En este caso. de color rojo anaranjado. a cromo (III) . que se desarrolla exclusivamente en el hígado. habitual. mediante un mecanismo de difusión pasiva. muestra y agente liberador (CO3K2) y. alcanzando su mayor concentración alrededor de los30 minutos en la circulación sistémica (Epetto 2002). Durante la absorción y la distribución se va produciendo también la biotransformación para luego producirse la biotransformación como tal y finalmente la eliminación. En ayunas. (Epetto. El alcohol.2006 ) UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. en el compartimiento externo. Dos tercios de todos los abusos de substancias están relacionadas con el alcohol. las cualesposeen. (Campos. en el interno. oxida el etanol a acetaldehído y es reducido.para luego poder ser medida la absorbancia en un espectrofotómetro UV.7% de los estudiantes universitarios son consumidores habituales de alcohol etílico. orina y aliento. En intoxicación aguda se pueden presentar alteraciones en el sistema gastrointestinal. la absorción se retarda. la respiratoria. 2005)Existen varios métodos para determinar la concentración de alcohol en un individuo como pruebas en sangre. el alcohol sufre un proceso de oxidación. el utilizado en nuestra practica fue la determinación de alcohol en sangre por el método de microdifusión que se realiza en cámaras de Conway. pasa por el hígado. Con el estómago lleno. y la absorción a través de la piel. 2.(Giannuzzi . transformándose el etanol en acetaldehído y posteriormente en acetato por medio de la cadena enzimática. abusiva o adictiva. (uría2004)El consumo de etanol también se ha asociado con la presentación de varias alteraciones sociales como incremento en los índices de violencia intrafamiliar. por la saliva y por la leche en época de lactancia. 2002) Las vías de penetración posibles de los alcoholes son la digestiva. la absorción es más rápida en duodeno y yeyuno. pasando al torrente sanguíneo. El etanol es un alcohol de gran importancia toxicológica dada su acción farmacológica depresora del sistema nervioso central. violencia general. Los metabolitos se excretan por vía pulmonar. 2 . endocrino y en el equilibrio ácido básico. De acuerdo con el informe mundial sobre el consumo de drogas de la ONU del 2009. una vez en el torrente sanguíneo.600 millones de personas lo consumen ya sea en forma ocasional. es absorbido a partir de los 30 a 60 minutos y hasta 180 minutos. se produce la captación y oxidación del etanol hacia ácido acético. actos delictivos y accidentes de tránsito. que cuando se consume en forma continuada y frecuente produce efectos adversos agudos y crónicos en la salud humana. En Ecuador. donde el dicromato. a su vez. el agente atrapante Cr2O7K2 + H2SO4 0.de color verde . 2006) El alcohol etílico es la sustancia psicoactiva de mayor consumo en el mundo. se estima que en el mundo cerca de 2. forzándose la remoción completa del primer compuesto al cabo de un tiempo y temperatura previamente determinados. se estima que el 80. Parte 3. 3. Reactivos • • • • • Carbonato de potasio 10% Bicromato de potasio 0.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 3.1. 3 .3. Materiales • • • • • Frasco con la muestra problema Pipetas Tubos de ensayos Cámara de Conway Campana extracto de gases Mecanismo de reacción O H3C OH H3C O O Cr O OH + HO Cr O OH + H2O UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág.2. Objetivos: • Identificación y cuantificación de alcohol en nuestra muestra problema de sangre.1% Ácido sulfúrico 50% Base oleosa hidrosoluble Agua destilada 3. 4 . a los 30 minutos de ocurrido esto se extrae 2ml de sangre via endovenosa la cual es llevada a un vial.DETERMIANCIÓN DE ETANOL Etanol acido crómico 18 de abril de 2012 cromato acido de etilo (Éster) H3C O O Cr O OH O + H2 H3C O Cr O OH H3C O + H2CrO3 + H2O H2O Acetaldehído inestable Luego: H2CrO 3 + H2CrO 4 HCrO 3 + H2O OH H3C + HCrO 3 CH 2CHO + Cr 6+ acetaldehído estable Ecuación química balanceada K2CrO7 Mezcla sulfocromica H2SO4 [ H2Cr2O7 ] inestable H2O 2H2CrO4 acido crómico TOMA DE MUESTRA Se necesito a una persona de sexo femenino a la cual se le hizo beber una vaso de vino . UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. .-En el compartimento interno se añade 2ml de solución sulfocromica 3..tomar de esta nueva solución una alícuota de 0..-se completa el borde de la base 4.Tapar la cámara 6. 2.1 ml y llevarlo a una fiola de 10ml y completar hasta el enrase 9.. 5 .DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Técnica operatoria 1. UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág.Agregar 1 ml de carbonato de potasio 5.-llevar a la estufa a 50° por 20 minutos 7.-Leer en el espectrofotómetro a 450 nm .-En la parte del compartimento externo de la cámara de conway se coloca 1 ml de sangre .retirar de la parte central una alícuota y completar con agua destilada hasta 2 ml 8. 300 Blanco 0.150 3 15 0.050 MP = 0.075 2 10 0.225 4 20 0. 6 .048 UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Estándares 1 [Etan ol mg/l] Abs 5 0. 015X X = 0.2 mL de SSC X = 2.050 -0.1 L X = 2.1 mL de sangre X --------------------------------.002 = 0.66 mg OH --------------------------------.133 mg 0.66 mg OH 2. 7 .133 ---------.DETERMIANCIÓN DE ETANOL Por regresión lineal Y = BX + A Donde B = 0.66 g de OH/L de sangre UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág.015 y A = 0 [ OH ] = [ 0.002 18 de abril de 2012 0.0.048 ] [ OH ] = 0.1 mL de SSC X ---------. Así mismo . Creemos que todos estos factores pueden ser los agentes causales de que en UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. su historial de consumo de alcohol y grado de desarrollo de tolerancia para el consumo de alcohol .es importante saber que estos valores van a depender de la edad del sujeto.5g/L .27%. Discusión La tasa de alcoholemia permitida en sangre es por debajo de 0. esto quiere decir que la muestra de nuestro paciente se encuentra con los niveles ligeramente elevados de alcohol etílico. Durante años los estudios efectuados han demostrado que existe una relación directa entre la concentración de alcohol en la sangre y algunos factores que pueden alterar o dar falsos positivos.la concentración de alcohol en sangre debe estar entre 0.5g/L. 8 . si tomamos este valor como referencia.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 4.5-1 . que para poder diagnosticar a una persona con intoxicación leve . por ejemplo Petkovié (2005 ) nos dice .también otros factores como las bajas temperaturas pueden favorecer la toxicidad del alcohol .Campos(2005 ) manifiesta que la concentración de alcohol varía dependiendo del metabolismo de cada persona y la cantidad de fluido que se encuentre en su organismo .es así que una persona que se encuentre ligeramente deshidratada la concentración de alcohol en su sangre será mucho más elevada .es así que podría generar falsos positivos. al sobrepasar esta escala con 0. 5. etanol y monóxido de carbono en sangre. con lo que el gas se difundirá desde el anillo exterior a la cámara interior sin que para ello sea preciso aplicar temperaturas elevadas. La cámara de conway sirve también para la microdifusion de otras muestras como orina que contengan un gas de tensión de vapor relativamente alta. (2. La concentración de alcohol en sangre es 2. Concéntricamente tiene soldado un pequeño compartimiento circular de manera que queda un espacio pequeño interior y otro exterior.66 g/L 6. y en el espacio interior un liquido que sea capaz de absorber este gas. Cuestionario 1. ¿Indicar las dimensiones de la cámara de conway cell tanto en material de vidrio. (1) La cámara de conway cell sirve para la microdifusion de la sangre y se utiliza en la determinación por microdifusion del metanol.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 los resultados obtenidos con la muestra de la sangre resultaran positivos. En la cámara exterior de pone un liquido que contiene un gas de tensión de vapor relativamente alta.3). UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. además debemos tomar en cuenta que la muestra no fue tomada en el momento exacto de consumo de alcohol. porcelana y plástico y para que sirva? (1)La cámara de conway es un aparato en forma de capsula de petri con tapa esmerilada. 9 . Conclusión • • La concentración de alcohol en sangre se puede cuantificar por espectrofotometría. Centro de profundidad diámetro es 4x 35 mm Cámara de conway de material UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. Cámara profundidad diámetro es 10 x 60 mm. 10 .DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Las dimensiones de una cámara de conway son: Foso profundidad de 4 mm. 11 .pe/books? id=rTYx8_3gynUC&pg=PA42&lpg=PA42&dq=camara+de+conway&so urce=bl&ots=0hlJh8ogq&sig=00gAgPPdj5_JN1zsQFEoY8hIZyI&hl=es&sa=X&ei=Yt6NT4 UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág.google.DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Cámara de conway de material Cámara de conway de material Bibliografía 1. Métodos quilométricos y otros métodos volumétricos de análisis clínicos. Pagina web: http://books.com. DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 6EHsvOgAfM0-mVDg&ved=0CGIQ6AEwDA#v=onepage&q=camara %20de%20conway&f=false Visitado: 17/04/12 2.edu.pdf Visitado: 17/04/12 UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. Visitado: 17/04/12 3.ar/ toxicologia/ guiastp/guia_tp1/monoxido carbono. Impacto de la contaminación atmosférica en la salud.bo/sw_files/mflkapozbyl. Página Web: http: //www.biol.u nlp. 12 . Determinación de monóxido de carbono por microdifusion por espectofotometria según Gettler y Freimuth.html.swisscontact. Página Web: http://www.